CN113116988A - 抗猪应激性疾病的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种药物组合物，其包含至少一种缬草提取物、至少一种啤酒花提取物和至少一种胡椒提取物，该药物组合物按适当比例通过煎煮或浓缩制成，可抵抗各种应激反应，特别畜禽受各种刺激因素引起的应激反应。

Description

抗猪应激性疾病的药物组合物

技术领域

本发明涉及畜禽用药物技术领域，具体涉及畜禽用一种药物组合物的制备方法及应用。

发明背景

畜禽应激反应是指畜禽在受到各种强烈刺激(如运输过程的抓捕、驱赶、装运、惊吓等) 而产生的极度兴奋和狂躁不安等应激反应，时常发生在猪、鸡和鸭等畜禽的运输过程中，严重时可导致畜禽死亡，给畜禽养殖业带来重大损失。目前抗应激措施是给予药物如肌注氯丙嗪等镇静类药物可使应激状态猪保持正常状态，但国家农业部已明文禁止在所有食品动物中使用安眠酮、氯丙嗪等催眠和镇静类药物。

缬草为败酱科缬草属类植物，其包含有宽裂缬草、宽叶缬草、中国缬草、黑水缬草、窄裂缬草或蜘蛛香等变种。研究显示，缬草具有镇静安神的作用，其中枢神经系统效应可能是通过与大脑GABA、褪黑激素和/或腺苷系统的相互作用而产生的。缬草的镇静安神功效已大量用于人和动物的健康，如中国专利公开了一种方便于猪混饲的蜘蛛香散剂(肖丹等，2008 年：蜘蛛香在制备治疗异食癖的兽药中的用途，授权公告号：CN 101164554B)，作为催眠、镇静类违禁药物的替代品，有确切的治疗猪异食癖的作用。缬草与另一植物啤酒花的组合是一种传统药物组合物，对人的助睡眠作用效果显著。一项临床试验显示，缬草与啤酒花的组合在减少睡眠潜伏期方面明显优于安慰剂，但同时使用的单一缬草提取物与安慰剂比较没有明显优势(U Koetter,et al.2007；ARandomized,Double Blind,Placebo-Controlled,Prospective Clinical Study to Demonstrate Clinical Efficacy of aFixed Valerian Hops Extract Combination in Patients Suffering FromNon-OrganicSleep Disorder.Phytother Res,21,847-851)。该临床试验结果证实了缬草与啤酒花的组合在应用于助睡眠作用的合理性和科学性，这种组合物是缬草与啤酒花的甲醇提取物组合，已在欧洲作为助睡眠保健药物使用多年。缬草与啤酒花的组合也广泛使用在传统中药处方中，如利用缬草、啤酒花与香蜂草的组合(张耀春，2009；一种镇静解痉的药物组合物，中国专利申请号：200910085571.9)，以及含有缬草与啤酒花的其它中药复方制剂(彭锡玲，2015：一种精神疾病患者用的护理型中药组合，申请号：201510791496.3；刘桂莲，2017：一种神经内科治疗失眠的中药，申请号：201710315566.7；杨文婷，2017年：一种治疗失眠的中药巴布剂配方及其制备方，申请号：201710173890.X)，这些大小复方制剂多用于镇静解痉和改善人的睡眠障碍等。

虽然缬草与啤酒花的组合可有效助睡眠，但由于它们吸收进入血液循环的速度较慢，因而功效作用不能快速发挥。本发明的目的正是克服缬草与啤酒花组合作为口服制剂吸收较慢，或口服生物利用度低的缺陷，提供了一种可以促进缬草与啤酒花的功效成分快速吸收入血的植物或成分，三者组合提高了药物组合物的口服生物利用度。

发明内容

胡椒属于胡椒科藤本植物，其成熟的果实因呈现黑红色，又称为黑胡椒。黑胡椒经加工脱皮后为白胡椒，二者均有食药两用之功效。研究发现，胡椒中的有效成分胡椒碱可改变小肠刷状缘膜动力学和渗透特性，增加小肠吸收的表面积，从而促进小肠对多种物质包括药物和微量元素等的吸收(Usha et al.Enhanced Intestinal Uptake of Iron,Zincand Calciumin Rats Fed Pungent Spice Principles--Piperine,Capsaicin andGinger(Zingiber Officinale).J Trace Elem Med Biol.2013；27,184-190)；(Khajuria et al.Piperine Modulates Permeability Characteristics of Intestine byInducing Alterations in Membrane Dynamics:Influence on Brush Border MembraneFluidity,Ultrastructure and Enzyme Kinetics.Phytomedicine ACTIONS.2002；9,224-31)；(Khajuria et al.Permeability Characteristics of Piperine on OralAbsorption--An Active Alkaloid from Peppers and a BioavailabilityEnhancer.Indian J Exp Biol.ACTIONS.1998；36,46-50)。这些研究提示并拓展了胡椒的药理学作用，为本发明筛选最适胡椒用量对促进缬草或蜘蛛香与啤酒花的小肠吸收提供了思路；此外，胡椒中的胡椒碱也被证实具有抗惊厥作用，其机制与GABA能神经系统有关。因此，本发明通过在固定蜘蛛香与啤酒花的使用量条件下，添加不同量的胡椒，以此筛选本发明的组合及其配方，具体实施的技术方案如下：

(1)固定缬草与啤酒花的组合量，添加不同量的胡椒，其中缬草选自缬草素含量较高的蜘蛛香，胡椒选自干燥的黑胡椒；

(2)在含不同量胡椒的各组合物中加水浸泡1小时；

(3)浸泡1小时的各组合物按常规中药煎煮3次，每次30分钟；

(4)合并收集各组合物的3次煎液，高温下浓缩10倍待用；

以2倍量的煎液按预先计算量灌胃大鼠，并于30分钟后采集各时间点的大鼠血液，分离萃取缬草素类指标成分，采用高效液相色谱法(HPLC)分析定量。

以下将通过实施例来进一步阐述本发明。

实施例1

将待煎煮的药材分为4组，每组药材中蜘蛛香和啤酒花的组合量为固定量，其包含60g 蜘蛛香和13g啤酒花；除对照组无黑胡椒添加外，各组分别添加黑胡椒或黑胡椒碎粒0.05g、 0.1g和0.5g(以下简称为本发明1、2、3)，加水至药罐内，浸泡1小时后煎煮3次，每次30分钟。合并煎液并浓缩10倍待用。

实施例2

Caco-2细胞模型是一种公认的体外模拟人的小肠上皮细胞模型,药物在Caco-2细胞的渗透性与药物在人体小肠粘膜上层细胞吸收具有良好的相关性，常用于研究受试药物在人的肠细胞中的吸收和转运等。为了研究不同剂量的胡椒对提高本发明的吸收和生物利用度的功效，将Caco-2细胞以2×10⁵/mL细胞密度接种至transwell-6孔板小室内培养21天。培养期间用跨膜电阻仪检测电阻值，当实验孔电阻值大约为700Ω.cm²时，加入含本发明的培养体系2.6mL 于上层小室，下层小室加入HBSS溶液2mL，将培养板置37℃恒温摇床振荡培养(50r.min^-1)。于10、30、60分钟分别从下层取样。

样品经处理后应用RP-HPLC检测样品中的缬草素浓度，以此比较和评价不同剂量的胡椒对提高本发明的吸收和生物利用度的功效。结果(见表1)显示，与无胡椒的对照细胞比较，三种剂量的胡椒均能增加缬草素在Caco-2细胞中的累计转运量，其中以加入0.1(本发明2) 和0.5g(本发明3)量的胡椒效果最好，表明胡椒对本发明的肠吸收具有显著的促进作用，或胡椒可以提高本发明的生物利用度。

表1本发明主要活性成分缬草素在Caco-2细胞中的累计转运量(n＝3)

与缬草/啤酒花组合组比较，*p<0.05；**p<0.01

实施例3本发明对小鼠戊巴比妥钠催眠作用的影响

实验一：取小鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，分别为对照组、本发明高(mL)、中(mL)、低剂量组(mL)，各组小鼠均灌胃给药，30分钟后注射戊巴比妥钠30mg.kg^-1，于注射15分钟后开始记录小鼠翻正反射消失达1分钟以上的鼠数为入睡鼠数，计算小鼠睡眠发生率。结果(见表2)显示，本发明高剂量组与对照组比较，小鼠入睡率显著提高(p<0.05)，表明本发明能有效延长小鼠的睡眠时间。

实验二：取小鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，分别为对照组、本发明高(mL)、中(mL)、低剂量组(mL)，各组小鼠均灌胃给药，30分钟后注射戊巴比妥钠50mg.kg^-1，将动物置于平坦表面，以动物翻正反射消失的时间作为入睡时间，从翻正反射消失至恢复时间为睡眠持续时间。结果(见表3)显示，本发明高剂量组与对照组比较，本发明能有效延长小鼠的睡眠时间。

表2本发明对小鼠戊巴比妥钠阈下催眠作用的影响

组别	剂量(g.kg<sup>-1</sup>)	鼠数(n)	睡眠数(n)	入睡率(％)
					生理盐水对照	-	12	0	0
本发明(低)	3.7	12	2	16.66**
					本发明(中)	7.4	12	6	50**
本发明(高)	14.8	12	9	75**

与生理盐水对照组比较，**p<0.01

表3本发明对小鼠戊巴比妥钠催眠时间的影响

组别	剂量(g.kg<sup>-1</sup>)	鼠数(n)	睡眠持续时间(min)
				生理盐水对照	-	12	10±5.38
本发明(低)	3.7	12	21.29±4.32*
				本发明(中)	7.4	12	47.33±5.44**
本发明(高)	14.8	12	62.53±8.25**

与生理盐水对照组比较，*p<0.05,**p<0.01。

Claims (8)

1.一种抗应激性反应的药物组合物，其包含至少一种缬草提取物、至少一种啤酒花提取物和至少一种胡椒提取物。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述缬草选自宽裂缬草、宽叶缬草、中国缬草、黑水缬草、窄裂缬草或蜘蛛香的根茎部分。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述啤酒花选自干燥的啤酒花球果部分。

4.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述胡椒为干燥的黑胡椒。

5.如权利要求1-4的药物组合物的制备方法，其特征在于，将上述药材按比例混匀后加水浸泡1小时，其中缬草60g，啤酒花13g，黑胡椒的添加量为0.01-0.5g。

6.如权利要求1-5的药物组合物的制备方法，其特征在于，将上述浸泡药材煎煮3次，每次30分钟；煎液浓缩至10倍高浓度。

7.如权利要求1-6的药物组合物在用于抗畜禽应激反应的用途。

8.如权利要求7的用途，其中所述畜禽应激反应包括但不限于屠宰应激、运输应激、热应激、断奶应激等。