CN113109494B - 一种油酸山梨坦的薄层色谱分析方法 - Google Patents

一种油酸山梨坦的薄层色谱分析方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种油酸山梨坦薄层色谱分析方法，本发明方法通过对现有方法进行优化，以乙腈:乙酸乙酯:异丙醇:水为展开剂，实现了一失水山梨醇异构体的初步分离，同时证明了药典方法拖尾是司盘反应过程中生成一失水山梨醇异构体所致。

Description

一种油酸山梨坦的薄层色谱分析方法
技术领域
本发明属于药用辅料的分析检测领域，涉及一种油酸山梨坦薄层色谱分析方法，具体来说是一种油酸山梨坦薄层鉴别分析方法。
背景技术
司盘类产品是以山梨醇和脂肪酸为原料，以碱为催化剂，在酯化过程中同时进行失水反应。在山梨醇失水反应中，主要含有以下5个产品：未失水的山梨醇、1,4-失水山梨醇、1,5-失水山梨醇、2,5-失水山梨醇、异山梨醇，各组分比例因反应条件不同有一定差异。如根据Kobayashi, Hirokazu; Yokoyama, Haruka; Feng, Bo; Fukuoka, Atsushi –[Green Chemistry, 2015, vol. 17, #5, p.2732-2735]报道，山梨醇在反应过程中发生如图1所示的反应。
如图1所示，在山梨醇失水反应中，主要含有以下5个产品：未失水的山梨醇、1,4-失水山梨醇、1,5-失水山梨醇、2,5-失水山梨醇、异山梨醇，各组分比例因反应条件不同有一定差异。
中国药典（2020版）的鉴别如下：
取样品约2g,置250ml烧瓶中，加乙醇100m和氢氧化钾3.5g,混匀。加热回流2小时，加水约100ml,趁热转移至250ml烧杯中，置水浴上蒸发并不断加入水，继续蒸发，直至无乙醇气味，最后加热水100ml,趁热缓缓滴加硫酸溶液（1-2)至石蕊试纸显中性，记录所消耗的体积，继续滴加硫酸溶液（1-2)(约为上述消耗体积的10%),静置使下层液体澄清。转移上述溶液至500ml分液漏斗中，用正己烷提取3次，每次100ml,弃去正己烷层，取水层溶液用10%氢氧化钾溶液调节pH值至7.0,水浴蒸发至干，残渣（如有必要，将残渣研碎）加无水乙醇150ml，用玻棒搅拌，置水浴中煮沸3分钟，将上述溶液置铺有硅藻土的漏斗中，滤过，溶液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另分别取异山梨醇33mg、1,4-去水山梨醇25mg与山梨醇25mg，加甲醇lml溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法（通则0502)试验，吸取上述两种溶液各2微升,分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-冰醋酸(50:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷硫酸溶液（1-2)至恰好湿润，立即于200℃加热至斑点清晰，冷却，立即检视，供试品溶液所显斑点的位置与颜色应与对照品溶液斑点相同。
中国药典薄层分析方法仅对山梨醇、一失水山梨醇和异山梨醇实现了有效分离，而一失水山梨醇3个异构体分离度不够，造成拖尾的现象，而标准品为1,4-失水山梨醇，含量为98%，无拖尾现象。
发明内容
而本鉴别项就是鉴别山梨醇失水后组成的方法，按照中国药典薄层分析方法，对司盘类产品进行薄层分析，结果仅对山梨醇、一失水山梨醇和异山梨醇实现了有效分离，而一失水山梨醇3个异构体分离度不够，造成拖尾的现象，而标准品为1,4-失水山梨醇，含量为98%，无拖尾现象。针对以上问题，本发明对药典薄层鉴别方法进行了优化，可以实现一失水山梨醇异构体的初步分离，证明药典方法拖尾是司盘反应过程中生成一失水山梨醇异构体所致。
具体来说，本发明采用了以下技术方案：
一种油酸山梨坦薄层色谱分析方法，所述方法包括以下步骤：
（1）取司盘80，2g，放入250ml三口烧瓶中，加乙醇100ml和氢氧化钾3.5g，升温，回流2小时；
（2）加入100ml水，置旋转蒸发仪上，水浴蒸发抽真空，继续蒸发，直至无乙醇气味；
（3）然后加热水100ml，趁热缓缓滴加50%硫酸溶液至pH显中性，继续滴加50%硫酸溶液约2-3滴，静置，下层液体澄清，pH值为3-4；
（4）转移上述溶液至500ml分液漏斗中，用正己烷提取3次，每次100ml，弃去正己烷层，取水层溶液用10%氢氧化钾溶液调节pH值至7.0，加入到单口瓶中，置旋转蒸发仪上，水浴蒸发抽真空至干；
（5）加无水乙醇150ml，用玻棒搅拌，置水浴中煮沸3分钟，充分溶解，将上述溶液置铺有硅藻土的漏斗中，过滤，45℃减压蒸馏，溶液蒸干；
（6）加甲醇 2ml溶解，作为供试品溶液，另分别取异山梨醇33mg、1,4-失水山梨醇25mg与山梨酵25mg，加甲醇lml溶解，作为对照品溶液，毛细管吸取上述两种溶液各2微升，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙腈:乙酸乙酯:异丙醇:水为展开剂，展开，取出，晾干，喷50%硫酸溶液至恰好湿润，置于200℃烘箱加热至斑点清晰，拍照。
在以上方法中，所述50%硫酸溶液的配置方法为一份98%硫酸加一份水制成。
优选地，所述展开剂的比例为按质量计乙腈:乙酸乙酯:异丙醇:水=60:15:15:10。
有益效果：按照中国药典薄层分析方法，对司盘类产品进行薄层分析，结果仅对山梨醇、一失水山梨醇和异山梨醇实现了有效分离，而一失水山梨醇3个异构体分离度不够，造成拖尾的现象，而标准品为1,4-失水山梨醇，含量为98%，无拖尾现象。针对以上问题，本发明对药典薄层鉴别方法进行了优化，可以实现一失水山梨醇异构体的初步分离，证明药典方法拖尾是司盘反应过程中生成一失水山梨醇异构体所致。
附图说明
图1为如文献所示山梨醇失水反应生成产物的结构图；
图2为根据中国药典薄层分析方法，仅对山梨醇、一失水山梨醇和异山梨醇实现了有效分离，而一失水山梨醇3个异构体分离度不够，造成拖尾的现象；
图3为通过改变展开剂种类及配比，选择乙腈:乙酸乙酯:异丙醇:水=60:15:15:10为展开剂，可以实现一失水山梨醇异构体的初步分离，异山梨醇Rf值约0.75,一失水的Rf值分别约为0.55、0.3、0.19,山梨醇Rf值0.05。证明药典方法拖尾是司盘反应过程中生成一失水山梨醇异构体所致。
实施方式
为了更好地说明本发明，我们列举了下列实施例，但本发明并不仅限于下述实施例。
实施例1，对照实施例
（1）取司盘80，2g，放入250ml三口烧瓶中，加乙醇100ml和氢氧化钾3.5g，升温，回流2小时。
（2）加入100ml水，置旋转蒸发仪上，水浴蒸发抽真空，继续蒸发，直至无乙醇气味。
（3）然后加热水100ml，趁热缓缓滴加 50%硫酸溶液（一份硫酸加一份水)至pH显中性，继续滴加50%硫酸溶液约2-3滴，静置，下层液体澄清，pH值为约3-4。
（4）转移上述溶液至500ml分液漏斗中，用正己烷提取3次，每次100ml，弃去正己烷层，取水层溶液用10%氢氧化钾溶液调节pH值至7.0，加入到单口瓶中，置旋转蒸发仪上，水浴蒸发抽真空至干。
（5）加无水乙醇 150ml，用玻棒搅拌，置水浴中煮沸3分钟，充分溶解，将上述溶液置铺有硅藻土的漏斗中，过滤，45℃减压蒸馏，溶液蒸干。
（6）加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另分别取异山梨醇33mg、1,4一失水山梨醇25mg与山梨酵25mg，加甲醇lml溶解，作为对照品溶液。毛细管吸取上述两种溶液各2微升，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮：冰醋酸=50:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷50%硫酸溶液至恰好湿润，置于200℃烘箱加热至斑点清晰，拍照。见图2。实施例2
（1）取司盘80，2g，放入250ml三口烧瓶中，加乙醇100ml和氢氧化钾3.5g，升温。回流2小时。
（2）加入100ml水，置旋转蒸发仪上，水浴蒸发抽真空，继续蒸发，直至无乙醇气味。
（3）最后加热水100ml，趁热缓缓滴加 50%硫酸溶液（一份硫酸加一份水)至pH显中性，继续滴加50%硫酸溶液约2-3滴，静置，下层液体澄清，pH值为约3-4。
（4）转移上述溶液至500ml分液漏斗中，用正己烷提取3次，每次100ml，弃去正己烷层，取水层溶液用10%氢氧化钾溶液调节pH值至7.0，加入到单口瓶中，置旋转蒸发仪上，水浴蒸发抽真空至干。
（5）加无水乙醇 150ml，用玻棒搅拌，置水浴中煮沸3分钟，充分溶解，将上述溶液置铺有硅藻土的漏斗中，过滤，45℃减压蒸馏，溶液蒸干。
（6）加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另分别取异山梨醇33mg、1,4一失水山梨醇25mg与山梨酵25mg，加甲醇lml溶解，作为对照品溶液。毛细管吸取上述两种溶液各2微升，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙腈:乙酸乙酯:异丙醇:水=60:15:15:10为展开剂，展开，取出，晾干，喷50%硫酸溶液至恰好湿润，置于200℃烘箱加热至斑点清晰，拍照。见图3。
下面根据附图来对结果进行分析。
参见图2和图3，分别为采用药典方法和本发明优化方法获得层析结果的照片。其中在图2和图3中，两个图中的左侧为对照品，自下至上依次为山梨醇、一失水山梨醇和二失水山梨醇，右侧为分别采用药典方法和本发明方法获得层析图样。
从图2可以看出，按照中国药典薄层分析方法，对司盘类产品进行薄层分析，结果仅对山梨醇、一失水山梨醇和异山梨醇实现了有效分离，而一失水山梨醇3个异构体分离度不够，造成拖尾的现象，而标准品为1,4-失水山梨醇，含量为98%，无拖尾现象。图3是对药典薄层鉴别方法进行优化后获得的照片，可以发现通过本发明的方法，实现了一失水山梨醇异构体的初步分离，证明药典方法拖尾是司盘反应过程中生成一失水山梨醇异构体所致。
以上所述内容仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，依据本发明技术方案所作等效变换，均属于本发明的保护范围。
上面结合附图和具体实施例对本发明的实施方式作了详细的说明，但是本发明不限于上述实施方式，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下做出各种变化。

Claims (2)

1.一种油酸山梨坦薄层色谱分析方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）取司盘80，2g，放入250ml三口烧瓶中，加乙醇100ml和氢氧化钾3.5g，升温，回流2小时；
（2）加入100ml水，置旋转蒸发仪上，水浴蒸发抽真空，继续蒸发，直至无乙醇气味；
（3）然后加热水100ml，趁热缓缓滴加50%硫酸溶液至pH显中性，继续滴加50%硫酸溶液2-3滴，静置，下层液体澄清，pH值为3-4；
（4）转移上述溶液至500ml分液漏斗中，用正己烷提取3次，每次100ml，弃去正己烷层，取水层溶液用10%氢氧化钾溶液调节pH值至7.0，加入到单口瓶中，置旋转蒸发仪上，水浴蒸发抽真空至干；
（5）加无水乙醇150ml，用玻棒搅拌，置水浴中煮沸3分钟，充分溶解，将上述溶液置铺有硅藻土的漏斗中，过滤，45℃减压蒸馏，溶液蒸干；
（6）加甲醇 2ml溶解，作为供试品溶液，另分别取异山梨醇33mg、1,4-失水山梨醇25mg与山梨酵25mg，加甲醇lml溶解，作为对照品溶液，毛细管吸取上述两种溶液各2微升，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙腈:乙酸乙酯:异丙醇:水为展开剂，所述展开剂的比例为按质量计乙腈:乙酸乙酯:异丙醇:水=60:15:15:10，展开，取出，晾干，喷50%硫酸溶液至恰好湿润，置于200℃烘箱加热至斑点清晰，拍照。
2.如权利要求1所述的油酸山梨坦薄层色谱分析方法，其特征在于，所述50%硫酸溶液的配置方法为一份98%硫酸加一份水制成。
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