SU1213415A1

SU1213415A1 - Способ определени флавоноидов

Info

Publication number: SU1213415A1
Application number: SU823466302A
Authority: SU
Inventors: Валентина Александровна Пешкова; Алла Александровна Шамырина; Вера Михайловна Мирович
Original assignee: Иркутский Государственный Медицинский Институт
Priority date: 1982-07-08
Filing date: 1982-07-08
Publication date: 1986-02-23

Description

112

Изобретение относитс к анализу - лекарственного растительного сырь и может быть использовано дл оценки доброкачественности сырь .

Целью изобретени вл етс повышение точности и сокращение времени анализа.

Прим ер. Точную навеску 0,5007 г (А) травы змееголовника поникшего, проход щей через сито с размером отверстий 2 мм, помещают в-колбу емкостью 100 мл, заливают 50 мл (V,g) 75%-ного этанола,предварительно взвешивак т и экстрагируют на вод ной бане (t 85 С ) в течение 2 ч в колбе с обратным холодильником . Затем колбу охлаждают до комнатной температуры, довод т до первоначального веса 75%-ным этанолом и отфильтровывают через фильтр.

Извлечение в объеме 25 мл (.,« )

т г

перенос т в вьтарительную чашку и удал ют спирт нагреванием на вод ной бане. Оставшеес водное извлечение количественно перенос т в делительную воронку на 50 мл. Хлорофилл со стенок вьшарительной чашки смьшают 10 мл хлороформа, добавл его порци ми по 3-4 мл, хлороформ присоедин ют к водному извлечению в делительной воронке.

Содержимое делительной воронки аккуратно перемешивают встр хиванием и оставл ют в покое до полного расслоени водного и хлороформного слоев.

. Затем хлороформное извлечение отдел ют и водный слой сливают в ту же выпарительную чашку. Делительную воронку дважды споласкивают дистиллированной водой порци ми по 2 мл и присоедин ют к содержимому в выпарительной чашке.

К очищенному таким образом водному извлечению прибавл ют 0,1 г ферментного препарата Пектаваморин Г 1Ох и гидролиз провод т в течение 72 ч в термостате при 38°С.

Полноту ферментолиза контролируют методом двухмерной бумажной хро- матографии в системах бутанол - ук- . сусна кислота - вода (4:1:2) и 15%-на уксусна кислота, просматрива хроматограммы в УФ-свете.

По окончании ,ферментопиза гидро- дизат обрабатьтают 95%-ным этанолом подогретым до 50 С, добавл его порци ми по 2-3 мл. Спиртовый раст152

вор агликонов фильтруют в мерную колбу на 25 мл. Полноту растворени агликонов контролируют капельной пробой на фильтровальной бумаге,

отработанной 1%-ным спиртовым раствором хлористого алюмини . Объем довод т до метки (Vflifn ) , тщательно обрабатыва чашку и фильтр этанолом. Полученный раствор агликонов в объеме 0,2 мл () нанос т на лист хро- матографической бумаги марки на линию старта сплошной полосой и провод т противоточное хроматографи- рование, дп чего хроматографируют

в одном направлении в 12%-ной уксусной кислоте, обеспечива развитие хроматограммы на всю длину хрома- тографического листа. После просушивани хроматограммы просматриванием в УФ-свете определ ют расположение флавоноидов и фёнолкарбоно- вых кислот. Затем зону А, соответ.- ствующую расположению фенолкарбоно- вых кислот, срезают. Оставшуюс

часть хроматограммы развивают в противоположном направлении в системе 60%-ной уксусной кислоты. После высушивани хроматограммы детекцию агликонов провод т просматриванием в

УФ-свете.

Зоны хроматограммы, соответствующие определ емьм агликонам, разрезают и высушивают в термостате при 40-50 С до исчезновени запаха уксусной кислоты. Подготовленные

таким образом кусочки хроматограмм помещают в пробирку со шлифомf за- .: ливают 4 мл (V ) абсолютного, этанола и оставл ют до достижени равновесной концентрации (2 ч - дл апигенина и 4 ч - дл лютеолина.

Параллельно аналогичным способом ; получают элюаты стандартных агликонов лютеолина и апигенина, обеспечива концентрацию их в элюате по 10 мкг/мл.

Оптическую плотность элюатов измер ют на спектрофотометре Сф-16 в области аналитической дпины волны (338 нм - дл апигенина и 350 им дп лютеолина) при толщине поглощающего сло 1 см.

В качестве раствора сравнени используют элюат холостой пробы, обработанной 1налогичным образом.

Сравнительные данные известного и предлагаемого способов представлены в таблице.

Лотеолин10,606,26

Апигенин13,724,76

fuKmt образом, точность опре-определени ниже.Крометого,врем анаделени по предлагаемому способу,лиза по известному спдсобу составл ет

вышеJтак как относительна ошибка104,8 ч,по предлагаемому - 87,4 ч.

Claims

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛАВОНОИДОВ путем экстракции растительного сырья этанолом, ферментолиза, растворения агликонов в этаноле с последующей хроматографией на бумаге, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокращения времени анализа, экстракцию проводят 70-80%-ным этанолом в течение 1,5-2 ч на кипящей водяной бане, затем агликоны разделяют ме~ . тодом противоточной хроматографии с последовательной сменой систем 10-15%и 55-65%-ной уксусной кислоты.

J , .,1213415

1 12