CN113106125A - 一种Ac129-131缺失的杆状病毒载体 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基因缺失型杆状病毒载体。该载体缺失杆状病毒非必需基因Ac129、Ac130和Ac131，使外源蛋白表达水平显著提高。病毒的增殖速度有所降低，但最终滴度与对照没有显著差异。表达产量的提高能降低企业的生产成本，缺失大段基因能使载体容量增加。该杆状病毒表达载体可用于生物制品工业领域，特别是亚单位疫苗工业领域。

Description

一种Ac129-131缺失的杆状病毒载体
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，尤其涉及一种基因缺失的杆状病毒载体。
背景技术
杆状病毒是特异感染节肢动物的双链DNA病毒，苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（Autographa californica nucleopolyhedrovirus, AcMNPV）是杆状病毒的模式种。自从1983年Smith GE等首次用杆状病毒在昆虫细胞中表达人β-干扰素基因以来（Mol CellBiol. 1983; 3:2156-65.），由于具有低成本、高产量，而且具备各种翻译后修饰系统等优点，杆状病毒表达载体系统在科研和生产中被广泛应用。
但相较于工业上普遍使用的原核表达系统（大肠杆菌、枯草芽孢杆菌）和酵母表达系统，杆状病毒表达载体系统的产量还不尽人意。为此人们采取了多种策略提高该表达系统的产量，这些策略包括：
1、改造启动子及周边元件。比如通过串联p6.9和p10启动子可以将GFP产量提高4.4倍（PLoS ONE. 2014; 9(5): e96562.）；在polh启动子下游重复一次Burst sequence可以使GUS酶活提高1.5倍（Biotechnol Bioeng. 2010; 107:909-16.）。
2、构建抗凋亡载体或细胞系。用RNA干扰载体在昆虫细胞Sf9中表达Sf-caspase-1的dsRNA，可以成功沉默细胞中的Sf-caspase-1，使外源蛋白的产量显著提高（BiotechnolAppl Biochem. 2007; 48: 11-19.）。张潇月等将靶向Sf-caspase-1的双链小RNA编码序列直接克隆到杆状病毒基因组上，使表达的荧光素酶活性提高10倍（BMC Biotechnol. 2018;18:24.）。
3、敲除非必需基因。比如敲除几丁质酶和组织蛋白酶（ChiA/V-Cath）有助于提高分泌蛋白的表达（J Virol Methods. 2004; 122:113-118.）；在此基础上再敲除三个连续的非必需基因p26、p10、p74，可以使EGFP的产量增加2.6倍（Cell Biol Toxicol. 2010;26:57-68.）。
敲除非必需基因提高外源基因产量的机制是多样的。敲除组织蛋白酶（V-Cath）基因可以降低蛋白质的降解；敲除p10可以释放感染晚期的细胞内转录资源。
此外，敲除非必需基因也可以减小杆状病毒基因组的大小，有利于容纳更大的外源DNA片段。野生型杆状病毒最多能插入大约40kb的外源DNA片段，如果用一个重组病毒表达多个蛋白，或用杆状病毒载体装载另一个病毒载体（如腺病毒载体），40kb的空间经常捉襟见肘。如果能通过大段敲除基因，释放更多的空间，将极大扩展杆状病毒表达载体的应用范围。
发明人通过检索文献，发现杆状病毒基因组中存在大量非必需基因，并且一些非必需基因彼此相邻成簇存在，这些基因簇包括Ac129至Ac131的三个连续非必需基因。
Ac129编码一个含有198个氨基酸分子量大小为22.1 kDa的蛋白质（P24核衣壳蛋白）。研究显示在AcMNPV中利用转座因子可以破坏该基因，说明该基因是非必需基因（J GenVirol. 1989;70:1815–1828; J Virol. 1990;64:1844–1850.）。在BmNPV中，该基因的同源基因Bm106的插入/缺失突变不会致死，但是会延长病毒杀死昆虫的时间（RIKEN Review.1999;22:39–41.）。
Ac130编码一个含有106个氨基酸分子量大小为12.1 kDa的蛋白质（GP16），该基因可能与细胞质中的核壳囊膜有关，但与ODV或BV的产生无关（Virology. 1993;192:386–390.）。BmNPV中的同源基因为非必需基因（Virus Res. 2012;165:197–206.）。
Ac131编码一个含有322个氨基酸分子量大小为36.4 kDa的多角体囊膜蛋白（PEP），该基因的同源基因存在于所有的α，β和γ型杆状病毒基因组中（J Virol. 2012;86:12069–79; Sci Rep. 2017;7:46187.）。当该基因被敲除时，多角体缺乏完整的结构从而呈现出粗糙的表面结构（J Gen Virol. 1994;75:1115–1123.）。
总的说来，Ac129、Ac130和Ac131都是杆状病毒的非必需基因或疑似非必需基因，至少在昆虫细胞系中复制时，这三个基因并不表现出重要的功能。同时缺失或失活这些基因对外源基因表达量的影响以及病毒的增殖还未曾被关注过。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基因缺失型杆状病毒载体，旨在解决背景技术提及的表达量低及外源DNA片段容量低的问题。
本发明通过在杆状病毒载体上同时缺失或失活Ac129、Ac130和Ac131，获得了一个外源蛋白产量提高的杆状病毒载体。
本发明是这样实现的，用同源重组或基因编辑等技术，从杆状病毒载体上敲除Ac129-131片段，即获得Ac129、Ac130和Ac131缺失的杆状病毒载体。
或在合成杆状病毒载体时，不包含Ac129、Ac130和Ac131基因，即获得Ac129、Ac130和Ac131缺失的杆状病毒载体。
或对Ac129、Ac130和Ac131基因的启动子区和/或编码区和/或3’非编码区进行碱基缺失、插入、替换，使基因丧失原有活性，即获得Ac129、Ac130和Ac131失活的杆状病毒载体。
本发明另一目的在于在于提供一种重组杆状病毒，用所述Ac129、Ac130和Ac131缺失或失活杆状病毒载体与带有外源序列的DNA片段重组，即获得所述重组杆状病毒。
本发明另一目的在于提供一种重组蛋白，用所述缺失型杆状病毒载体构建重组病毒，然后感染昆虫宿主细胞并表达为重组蛋白，即获得所述重组蛋白。
经测定，用所述缺失型杆状病毒载体构建的重组杆状病毒，其增殖速度虽然有所降低，但最终滴度与野生型无显著差异。缺失型杆状病毒的外源重组蛋白表达量显著高于对照载体。
本发明缺失Ac129、Ac130和Ac131基因后，使病毒基因组减少了约1.8kb，蛋白表达水平显著提高。说明本发明确实能提供一个具有优良生产性状和高产特性的杆状病毒载体。
本发明另一目的在于提供了所述基因敲除型杆状病毒载体在生物制品工业上的应用。
附图说明
图1 本发明提供的杆状病毒载体的基因敲除策略示意图；
图2 本发明提供的BacmidΔAc129-131杆状病毒载体的一次生长曲线；
图3 使用本发明提供的BacmidΔAc129-131杆状病毒载体表达的绿色荧光蛋白GFP，病毒感染后4天的细胞经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，考马斯亮蓝染色的结果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。
1、Ac129-131基因的敲除。
敲除策略详见附图1。用带有Ac129-131区段上下游54bp同源臂的引物，以prpsL-AMP质粒（西北农林科技大学学报-自然科学版，2015年12月，第43卷181-190页）为模板，用PCR技术扩增带有Ac129-131同源臂的rpsL-AMP表达盒。此步骤所用的引物序列如下：
Ac129U: tttttatcttaattgataagattatttttatctggctgttataaaaacgggatcgatggcctggtgatgg
Ac131D: cgttgatgtttgtgacgcttgacgctaaattggtcaaaatagagttggtgttgtttaccaatgcttaatc。
将获得的PCR产物（大小约1.5kb）电转化到含有Bacmid Bac10:KO1629的大肠杆菌HS996中（Nucleic Acids Research, 2003, Vol. 31, No. 2 e6），通过阿拉伯糖诱导pSC101-BAD-gbaA质粒表达RedET重组酶，在大肠杆菌中实现同源重组，经氨苄青霉素抗性筛选，获得阳性克隆（方法参见GENE BRIDGES公司Counter-Selection BAC ModificationKit 说明书）。PCR鉴定并测序鉴定后，即获得Ac129-131片段被rpsL-AMP替换的Bacmid，命名为Bacmid-Ac129-131::rpsL-AMP。
为了移除筛选标记rpsL-AMP表达盒，需要再进行一次反向筛选。
用如下引物在PCR仪中扩增出一段108bp的反筛替换序列：
Ac129f: tttttatcttaattgataagattatttttatctggctgttataaaaacgggatcacaacaccaactctattttg
Ac131r: cgttgatgtttgtgacgcttgacgctaaattggtcaaaatagagttggtgttgt。
将获得的反筛替换序列扩增产物电转化到含有Bacmid-Ac129-131::rpsL-AMP的大肠杆菌HS996中，通过阿拉伯糖诱导pSC101-BAD-gbaA质粒表达RedET重组酶，在大肠杆菌中实现同源重组，经链霉素抗性筛选，选取背景菌苔上的抗性菌落，获得阳性克隆（方法参见GENE BRIDGES公司Counter-Selection BAC Modification Kit 说明书）。经PCR鉴定并测序鉴定后，即获得Ac129-131片段敲除的Bacmid，命名为BacmidΔAc129-131。此即为Ac129、Ac130和Ac131敲除的杆状病毒表达载体。
扩大培养含有BacmidΔAc129-131的大肠杆菌HS996，然后用“杆状病毒穿梭载体bacmid小量抽提试剂盒”（碧云天公司产品）提取BacmidΔAc129-131，然后用Bsu36I限制性内切酶酶切线性化。线性化后的BacmidΔAc129-131用苯酚-氯仿抽提，除去蛋白后，溶解于无菌水中待用。
2、构建重组病毒。
线性化的野生型Bacmid（Bac10:KO1629）以及Ac129-131基因敲除的Bacmid与pTriEx-GFP质粒（GFP基因片段克隆在pTriEx1.1 NcoI/XhoI位点之间）共转染Sf9昆虫细胞，转染后5天收集P0代重组病毒。用适量P0代病毒感染Sf9细胞，转染后4天收集P1代病毒。
3、病毒增殖曲线。
用对照重组病毒和Ac129-131敲除型重组病毒，以0.1 MOI感染Sf9细胞，之后每24小时取一次样，直至感染后144小时。用定量PCR法测定病毒滴度，绘制病毒一次生长曲线（附图2）。与野生型病毒相比，Ac129-131敲除病毒的增殖过程受到了一定程度的影响，但最终滴度与野生型无显著差异。
4、表达重组蛋白。
用重组病毒以3 MOI感染Sf9细胞和High Five细胞，感染后第四天收集细胞。细胞裂解后进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、考马斯亮蓝染色检测（附图3）。与野生型病毒载体相比，无论是Sf9细胞还是High Five细胞，外源重组蛋白GFP的表达量都有极其显著的提高。由于敲除型病毒考染信号太强，无法用密度扫描确切评估产量，目测在Sf9细胞和HighFive细胞中GFP的表达量都提高了数倍。
GFP既能产生可观察的荧光信号，又没有细胞毒性，因此成为蛋白表达领域常用的报告蛋白。此实施例中GFP表达量的提高，说明Ac129-131敲除重组病毒具有良好的重组蛋白表达特性。利用这种高产特性，可以高效率表达任何一种蛋白制品和亚单位疫苗。
从上述实施例可以看出，敲除Ac129-131不影响病毒增殖的最终滴度，但能极大提高外源蛋白的产量。不仅如此，敲除Ac129-131还能使病毒基因组减小1.8kb，增加了病毒载体的容量。与现有技术相比，具有突出的实质性特点和显著的进步。
以上所述用同源重组的方法获得Ac129、Ac130和Ac131缺失的杆状病毒载体，以及用绿色荧光蛋白GFP作为报告重组蛋白，仅为本发明的实施例而已，并不用以限制本发明。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种杆状病毒载体，其特征在于，杆状病毒载体中Ac129、Ac130和Ac131基因缺失或失活。
2.一种重组杆状病毒，其特征在于，用权利要求1所述的杆状病毒载体与DNA片段重组，即获得所述重组杆状病毒。
3.一种重组蛋白，其特征在于，用权利要求1所述的杆状病毒载体构建重组病毒，然后感染细胞并表达为重组蛋白，即获得所述重组蛋白。
4.权利要求1所述的杆状病毒载体在生物制品工业上的应用。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110387385A (zh) * 2019-07-18 2019-10-29 西北农林科技大学 一种新型杆状病毒表达载体
WO2020058118A1 (en) * 2018-09-17 2020-03-26 Universität Für Bodenkultur Wien Dual vector system for improved production of proteins in animal cells
CN111378687A (zh) * 2018-12-27 2020-07-07 陕西杆粒生物科技有限公司 一种高产杆状病毒表达载体
WO2020264139A1 (en) * 2019-06-26 2020-12-30 Virovek, Inc. Baculovirus expression system

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2020058118A1 (en) * 2018-09-17 2020-03-26 Universität Für Bodenkultur Wien Dual vector system for improved production of proteins in animal cells
CN111378687A (zh) * 2018-12-27 2020-07-07 陕西杆粒生物科技有限公司 一种高产杆状病毒表达载体
WO2020264139A1 (en) * 2019-06-26 2020-12-30 Virovek, Inc. Baculovirus expression system
CN110387385A (zh) * 2019-07-18 2019-10-29 西北农林科技大学 一种新型杆状病毒表达载体

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YANG M等: "Functional characterization of Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus gp16 (ac130)", 《VIROLOGY》, vol. 464, pages 341 - 352 *
杨明: "苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒ac130（gp16）和ac132的功能研究", 《中国优秀博士学位论文全文数据库农业科技辑》, vol. 4, no. 2016, pages 046 - 244 *

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