CN113092627A - 一种化妆品中大麻素成分的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种化妆品中大麻素成分的检测方法，包括以下步骤：A)将样品与提取溶剂混合，超声提取，得到提取液；B)将所述提取液离心、过滤，得到目标检测液；C)将所述目标检测液采用超高效液相色谱‑三重四级杆质谱法进行分析检测。本发明检测方法实现了化妆品中7种大麻素成分(大麻酚、大麻二酚、大麻萜酚、大麻萜酚酸、(‑)‑11‑去甲‑9‑羧基‑Δ9‑四氢大麻酚、(‑)‑反式‑Δ9‑四氢大麻酚和大麻色烯)的高通量检测，分析时间短，定性、定量检测结果稳定可靠。

Description

一种化妆品中大麻素成分的检测方法
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，尤其是涉及一种化妆品中大麻素成分的检测方法。
背景技术
大麻(Cannabis sativa L.)，又名汉麻、叶麻和线麻等，是桑科大麻属一年生雌雄异株的草本植物。大麻的种植和使用至少已有5 000年的历史，具有镇静、镇痛、抗菌和抗炎症等生物活性。近年来，大麻提取物研究发展迅速，市场上含有大麻提取物的化妆品越来越多。在化妆品领域，大麻叶提取物(CANNABIS SATIVA LEAF EXTRACT)、大麻仁果(CANNABISSATIVA FRUIT)以及大麻籽油(CANNABIS SATIVA SEED OIL)已列为《已使用化妆品原料名称目录(2015版)》中可以使用的化妆品原料。基于目前的研究报道，大麻叶提取物和大麻籽油具有良好的抗衰老、抗氧化、保湿、美白、抗紫外线、抗菌、创伤愈合和抗炎等作用，在化妆品中具有广阔的应用前景。此外，大麻提取物可能在皮肤瘙痒、痤疮、银屑病、皮炎、大疱性表皮松解症、色素减退性皮肤病和黑素瘤等皮肤病的治疗中具有潜在的应用价值，各大化妆品品牌陆续推出了含有大麻提取物的产品，深受广大消费者的喜爱。
根据大麻所含四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol,THC)比例，通常可分为工业大麻和毒品大麻两类。工业大麻中THC的含量最高不超0.3％，而毒品大麻中THC含量高于这一比例。目前人们从大麻中分离出的大麻素成分(cannabinoids,CBs)已经超过100种，主要包括：大麻二酚(cannabidiol,CBD)、THC及大麻酚(cannabinol,CBN)等。在一般情况下，大麻植株中CBD、THC含量相对较高，研究也较为深入。随着技术的进步、需求的增加，越来越多的研究关注于CBD、THC以外的其他植物大麻素，如CBG、CBC等，研究包括其对皮肤生理功能的影响和改善肌肤问题的能力以及在护肤品中的潜在应用。
目前测定大麻素成分含量的分析方法有气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)、液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)等方法，主要集中在法医或公安物证鉴定领域。国内外鲜有机构开展化妆品中大麻素成分的分析研究。我国《化妆品安全技术规范(2015版)》尚未涵盖其分析检测方法，有关单位和部门也未出台相关国家标准、行业标准、团体标准等方法标准。因此，为有效开展大麻提取物化妆品质量控制和安全评估，准确识别化妆品中所包含大麻素成分、初步判断大麻原料种类，有必要建立化妆品中大麻素成分含量的测定方法。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种化妆品中大麻素成分的检测方法。该检测方法实现了化妆品中7种大麻素成分的检测，具有分析时间短，定性、定量检测结果稳定可靠等特点。
本发明提供了一种化妆品中大麻素成分的检测方法，包括以下步骤：
A)将样品与提取溶剂混合，超声提取，得到提取液；
B)将所述提取液离心、过滤，得到目标检测液；
C)将所述目标检测液采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法进行分析检测。
优选的，所述大麻素成分包括：大麻酚、大麻二酚、大麻萜酚、大麻萜酚酸、(-)-11-去甲-9-羧基-Δ9-四氢大麻酚、(-)-反式-Δ9-四氢大麻酚和大麻色烯；
所述化妆品为水剂类、面膜类或膏霜类中的一种或几种。
优选的，所述步骤A)提取溶剂为乙腈；所述样品与提取溶剂的质量比为1：(5～50)。
优选的，所述超声提取的温度为20～30℃，超声提取的功率为500～700W，超声提取的时间为10～30min。
优选的，所述步骤B)离心温度为0～8℃，转速为5000～10000rpm，离心时间为5～20min；
所述过滤为通过微孔有机滤膜过滤；所述微孔有机滤膜为0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜。
优选的，所述超高效液相色谱-三重四级杆质谱法的色谱条件为：
色谱柱：Agilent Poroshell120SB-C18柱，长度100mm，内径2.1mm，粒径2.7μm；
流动相：乙腈和乙酸铵水溶液；
柱温：35～45℃；流速：0.2～0.4mL/min；进样量2～10μL。
优选的，所述超高效液相色谱-三重四级杆质谱法的色谱条件为：
流动相：乙腈和5mM乙酸铵水溶液；
柱温：40℃；流速：0.3mL/min；进样量：5μL。
优选的，所述流动相的梯度洗脱程序为：
Figure BDA0003015933910000031
优选的，所述超高效液相色谱-三重四级杆质谱法的质谱条件为：离子化方式为电喷雾离子源负离子模式，多反应监测模式信号采集，雾化气流量2.5～3.5L/min，干燥气流量8～12L/min，加热气流量8～12L/min，接口温度250～350℃，接口电压3.0～5.0kV。
本发明提供了一种化妆品风险评估方法，采用上述技术方案任意一项所述的检测方法。
与现有技术相比，本发明提供了一种化妆品中大麻素成分的检测方法，包括以下步骤：A)将样品与提取溶剂混合，超声提取，得到提取液；B)将所述提取液离心、过滤，得到目标检测液；C)将所述目标检测液采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法进行分析检测。本发明检测方法实现了化妆品中7种大麻素成分(大麻酚、大麻二酚、大麻萜酚、大麻萜酚酸、(-)-11-去甲-9-羧基-Δ9-四氢大麻酚、(-)-反式-Δ9-四氢大麻酚和大麻色烯)的高通量检测，分析时间短，定性、定量检测结果稳定可靠。
附图说明
图1A大麻酚、大麻二酚、大麻萜酚、大麻萜酚酸、(-)-11-去甲-9-羧基-Δ9-四氢大麻酚、(-)-反式-Δ9-四氢大麻酚、大麻色烯的总离子流图；
图1B真实化妆品中检测出的大麻素成分总离子流图；
图2A大麻酚的MRM定量离子色谱图；
图2B大麻二酚的MRM定量离子色谱图；
图2C大麻萜酚的MRM定量离子色谱图；
图2D大麻萜酚酸的MRM定量离子色谱图；
图2E(-)-11-去甲-9-羧基-Δ9-四氢大麻酚的MRM定量离子色谱图；
图2F(-)-反式-Δ9-四氢大麻酚的MRM定量离子色谱图；
图2G大麻色烯的MRM定量离子色谱图；
图3采用甲醇作为提取溶剂时，不同净化装置条件下测定7种大麻素成分的回收情况；其中，LM:LUMTECH MPFC-QuEChERS(高脂类)超滤型净化柱；SS:SHIMSEN QuEChERS dSPEcolumn；WS:Waters QuEChERS SPE column；AS:Agilent Captiva EMR-Lipid Cartridge；WP:Waters Prime HLB column；PF:聚四氟乙烯滤膜；
图4采用乙腈作为提取溶剂时，不同净化装置条件下测定7种大麻素成分的回收情况；其中，LM:LUMTECH MPFC-QuEChERS(高脂类)超滤型净化柱；SS:SHIMSEN QuEChERS dSPEcolumn；WS:Waters QuEChERS SPE column；AS:Agilent Captiva EMR-Lipid Cartridge；WP:Waters Prime HLB column；PF:聚四氟乙烯滤膜；
图5A以甲醇作为提取溶剂时，采用Agilent Captiva EMR-Lipid Cartridge净化样品，水剂类化妆品中7种大麻素成分的回收情况，其中，L：低浓度；M：中浓度；H:高浓度；
图5B以甲醇作为提取溶剂时，采用Agilent Captiva EMR-Lipid Cartridge净化样品，面膜类化妆品中7种大麻素成分的回收情况，其中，L：低浓度；M：中浓度；H:高浓度；
图5C以甲醇作为提取溶剂时，采用Agilent Captiva EMR-Lipid Cartridge净化样品，膏霜类化妆品中7种大麻素成分的回收情况，其中，L：低浓度；M：中浓度；H:高浓度；
图6A采用Agilent Poroshell 120SB-C18色谱柱对7种大麻素成分进行分离时的MRM图；
图6B采用SHIMADZU
Figure BDA0003015933910000041
AQ-C18色谱柱对7种大麻素成分进行分离时的MRM图；
图6C采用曹逹CAPCELL CORE ADME色谱柱对7种大麻素成分进行分离时的MRM图；
图7A采用负离子模式扫描时7种大麻素成分的SIM图；
图7B采用正离子模式扫描时7种大麻素成分的SIM图；
图8A采用乙腈-5mM乙酸铵水溶液作为流动相时7种大麻素成分的MRM图；
图8B采用甲醇-5mM乙酸铵水溶液作为流动相时7种大麻素成分的MRM图。
具体实施方式
本发明提供了一种化妆品中大麻素成分的检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都属于本发明保护的范围。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供了一种化妆品中大麻素成分的检测方法，包括以下步骤：
A)将样品与提取溶剂混合，超声提取，得到提取液；
B)将所述提取液离心、过滤，得到目标检测液；
C)将所述目标检测液采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法进行分析检测。
本发明所述大麻素成分包括：大麻酚、大麻二酚、大麻萜酚、大麻萜酚酸、(-)-11-去甲-9-羧基-Δ9-四氢大麻酚、(-)-反式-Δ9-四氢大麻酚和大麻色烯。
本发明所述化妆品为水剂类、面膜类或膏霜类中的一种或几种。
本发明是以真实化妆品样品为基础，考虑到不同化妆品基质之间差异较大，为能够覆盖市售声称含大麻叶提取物等相关化妆品基质类型，本发明选用3种不含大麻成分的面膜、膏霜和水剂作为化妆品空白基质。本发明考虑到化妆品基质的复杂性，分别采用甲醇和乙腈等不同提取溶液对样品中待测大麻素成分进行提取，以期考察不同提取溶液的提取效果，实验结果发现，采用乙腈作为提取溶剂时，7种大麻素成分在低中高3个添加水平条件下针对3种不同化妆品基质的回收率均能满足需求。
此外，本发明考虑到化妆品基质效应可能在应用超高效液相色谱-三重四级杆质谱检测过程中产生的影响，从而对样品中待测物测定结果产生干扰，因此选取了不同净化手段对样品进行前处理，以期考察不同类型净化手段的净化效果并选取适宜的样品前处理方法。本发明人创造性的发现，采用乙腈作为提取溶剂时，在低温环境下，由于乙腈具有较好的沉淀蛋白质和脂肪的效果，样品提取液经过离心、过滤后即可上机检测，从而减少了固相萃取净化步骤。本发明前处理过程简单、快捷，简单进行样品前处理后即可上机检测，避免了将化妆品样品提取液通过装置净化后使用液相色谱-串联质谱仪器测定的繁琐步骤，弥补了化妆品中大麻素成分检测技术的空白。
MPFC为multiplug filtration clean-up的简称，译为“多次滤过型净化柱”；
EMR-Lipid为Enhanced Matrix Removal-Lipid的简称，译为“增强脂质基质去除”；
DL为Desolvation Line的简称，译为“脱溶剂管”；
MRM为multiple reaction monitoring的简称，译为“多反应监测”；
SIM为single ion monitoring的简称，译为“单离子检测扫描”。
本发明提供的一种化妆品中大麻素成分的检测方法首先将样品与提取溶剂混合，超声提取，得到提取液。
本发明对于所述混合方式不进行限定，本领域技术人员熟知的即可，优选为涡旋混匀器。优选旋涡混匀30～60s。
本发明所述提取溶剂优选为乙腈；所述样品与提取溶剂的质量比优选为1：(5～50)；更优选为1：(10～40)；最优选为1：(10～30)。
本发明所述超声提取的温度优选为20～30℃，超声提取的功率优选为500～700W，更优选为550～750W，超声提取的时间优选为10～30min；更优选为10～25min；最优选为10～20min。
将所述提取液离心、过滤，得到目标检测液。
本发明所述离心温度优选为0～8℃，更优选为2～6℃，转速优选为5000～10000rpm；更优选为6000～9000rpm；所述离心时间优选为5～20min；更优选为10～15min。
离心后，通过微孔有机滤膜过滤；得到待测液；所述微孔有机滤膜为0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜。
将所述目标检测液采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法进行分析检测。
本发明所述超高效液相色谱-三重四级杆质谱法的色谱条件为：
色谱柱：Agilent Poroshell120SB-C18柱，长度100mm，内径2.1mm，粒径2.7μm。本发明柱温优选为35～45℃；更优选的，柱温40℃。
流动相：乙腈和乙酸铵水溶液；优选为乙腈和5mM乙酸铵水溶液；
按照本发明，所述流动相的梯度洗脱程序为：
Figure BDA0003015933910000071
流动相流速：0.2～0.4mL/min；优选的，流速为0.3mL/min；所述进样量优选2～10μL；更优选为5μL。
本发明所述超高效液相色谱-三重四级杆质谱法的质谱条件为：离子化方式为电喷雾离子源负离子模式，多反应监测模式信号采集，雾化气流量2.5～3.5L/min，干燥气流量8～12L/min，加热气流量8～12L/min，接口温度250～350℃，接口电压3.0～5.0kV。
本发明其中一个优选方案中，质谱条件：离子源：电喷雾离子源负离子模式(ESI-)；检测模式：多反应监测(MRM)模式，雾化气流量3L/min，加热气流量10L/min，接口温度300℃，DL温度250℃，干燥气流量10L/min，接口电压4.0kV。
本发明提供了一种化妆品风险评估方法，采用上述技术方案任意一项所述的检测方法。
本发明检测方法还可以应用于化妆品风险评估、筛查监测、原料溯源等领域。
本发明的有益效果为：
(1)本发明充分考虑了化妆品基质多样复杂等特点，通过优化及对比不同的前处理条件，首次对化妆品中7种大麻素成分采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法进行高通量检测，操作步骤少、分析时间短，灵敏度高，选择性强，定性、定量检测结果稳定可靠，可用于化妆品中大麻素成分的风险评估和筛查监测，具有较广的应用前景。弥补了该项目方法标准的空白，可以满足化妆品中大麻素成分定性及定量分析需要，为化妆品质量安全监管提供科学依据和技术支持。
(2)本发明的检测方法对于化妆品的前处理过程简单、快捷，操作步骤少，可用于化妆品中大麻素成分的风险评估和筛查监测，具有工作效率高、工作量减少、对检验者操作技术水平要求较低等特点。
(3)本发明的检测方法对于准确识别化妆品中不同种类的大麻物质成分、初步判定化妆品原料大麻植物种类、产地溯源等具有重要意义。由于四氢大麻酚不仅属于《中华人民共和国精神药品品种目录(2013年版)》第一类管制物质，也属于《化妆品安全技术规范》(2015年版)中规定的禁用物质，准确定性、定量分析含有或添加四氢大麻酚的化妆品样品有利于加强此类产品的监管和质量控制。此外，由于我国目前对工业大麻种植、原料使用、原料中成分含量、产品种类、产品加工生产等阶段均有严格的监管制度和法规管控，通过本发明所述的检测方法所获得的化妆品中大麻酚、大麻二酚、大麻萜酚、大麻萜酚酸、(-)-11-去甲-9-羧基-Δ9-四氢大麻酚、(-)-反式-Δ9-四氢大麻酚、大麻色烯含量或其相互比值，可溯源至原料生产地及原料种类，与化妆品生产企业所声称的原料来源地及种类相对比，或与化妆品生产企业备案、注册材料中声称的成分表中大麻植物原料添加使用量相对比，从而初步判定化妆品生产企业所使用原料的真实性、合法性。
本发明公开了一种化妆品中大麻酚、大麻二酚、大麻萜酚、大麻萜酚酸、(-)-11-去甲-9-羧基-Δ9-四氢大麻酚、(-)-反式-Δ9-四氢大麻酚和大麻色烯等7种大麻素成分的检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进样品制备方法、选择等效的色谱柱、适当调节仪器设备参数实现。特别需要指出的是，所有类似的改动、等效替换和调节对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较多实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明所述化妆品中7种大麻素成分检测方法所用试剂和仪器均可由市场购得。所使用仪器如下：
LCMS-8060型超高效液相色谱-三重四级杆质谱仪(日本Shimadzu公司)；AL 204型分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)；KQ-3200DE型超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司)；Vortex Genie 2涡旋混匀器(美国Scientific Industries公司)；GTR21-1B医用离心机(北京新时代北利医疗器械有限公司)；Advance RO+Pro VF超纯水纯化系统(德国Sartorius公司)。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种化妆品中大麻素成分的检测方法进行详细描述。
实施例1
一、样品提取
准确称取化妆品样品1g(精确至0.001g)置于10mL具塞比色管中，加入乙腈至10mL，在涡旋混匀器上高速振荡30s，使样品与提取溶剂充分混匀。密塞，超声提取10min，静置至室温。
二、样品制备
样品提取液在温度为4℃，转速为8000rpm，时间为10min条件下离心分离，经0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜过滤，取续滤液作为待测溶液。
三、样品检测
采用LCMS-8060超高效液相色谱-三重四级杆质谱仪(日本岛津公司)对净化后的样品进行超高效液相色谱-三重四级杆质谱分析。
色谱条件：
色谱柱：Agilent Poroshell120SB-C18柱(2.1mm×100mm，2.7μm)，流动相：A：5mM乙酸铵水溶液，B：乙腈，梯度洗脱；流速为0.3mL/min，进样量为5μL，柱温：40℃。流动相及梯度洗脱程序见表1。
表1
Figure BDA0003015933910000091
质谱条件：离子源：电喷雾离子源负离子模式(ESI-)；检测模式：多反应监测(MRM)模式，雾化气流量3L/min，加热气流量10L/min，接口温度300℃，DL温度250℃，干燥气流量10L/min，接口电压4.0kV。7种大麻素成分的CAS号、名称、分子式、分子量和结构式见表2。7种大麻素成分的总离子流图见图1A，质谱参数及母离子、子离子见表3。
本发明采用5mM乙酸铵溶液-乙腈溶液作为流动相，负离子模式下7种大麻素成分的响应均较好，检测灵敏度可以满足方法需要，因此选用负离子模式下分析。对目标化合物一级质谱全扫描，得到目标物的[M-H]-母离子，随后进行二级扫描，优化电压选择响应最强的2个子离子，并在多反应监测模式(MRM)下优化出子离子响应最优时的碰撞能量，得到最优的质谱条件。图1B为采用本发明方法对市售化妆品中大麻素成分进行检测的总离子流图。
表2
Figure BDA0003015933910000101
Figure BDA0003015933910000111
表3
Figure BDA0003015933910000112
*定量离子
实施例2
采用实施例1中样品的提取方法和检测方法，考虑化妆品基质复杂且不同化妆品基质差异较大，在使用液质联用仪检测时会产生基质效应，对样品中待测物测定结果产生潜在影响，本发明选用3种不含大麻成分物质的面膜、膏霜和水剂作为化妆品空白基质，并通过设置3个浓度加样回收方法考察样品中待测物质的分析测定效果。每种空白基质样品称取18份，分别添加低、中、高浓度的7种大麻素成分标准溶液，每个浓度平行6份，在相同条件下进行超高效液相色谱-三重四级杆质谱分析，计算加标回收率及相对标准偏差，3种空白基质的加标回收率分别见表4。
表4
Figure BDA0003015933910000121
结果表明：直接使用0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜过滤样品提取液7种大麻素成分在3个添加浓度下的回收率均满足试验要求，可以作为首选方法。
实施例3
采用实施例1中的方法对宣称添加大麻叶提取物的化妆品进行分析检测，根据所测定化妆品中THC的测定浓度，并结合化妆品产品标签标识或备案材料中所宣称的大麻叶提取物添加量初步判定宣称添加大麻叶提取物的化妆品所使用的是否为工业大麻原料，从而对化妆品质量安全进行评估。
当C≤3×106×m×P/(V×D)时，折算出的化妆品原料大麻叶提取物中四氢大麻酚含量不高于3g/kg，初步判定所使用的大麻叶提取物的源于符合规定的工业大麻原料。
其中：
C—THC的测定浓度/(μg/L)；
V—稀释体积/mL；
D—稀释倍数；
m—称样量/g；
P—化妆品产品宣称的大麻叶提取物添加量(以质量百分数计)；
当C>3×106×m×P/(V×D)时，折算出的化妆品原料大麻叶提取物中四氢大麻酚含量高于3g/kg，需考虑所使用大麻叶提取物的合规性问题。
对比例1
由于化妆品基质复杂，本对比例选取了不同提取溶剂对化妆品中7种大麻素成分的提取效果进行考察，由于提取溶剂的种类直接影响净化或过滤效果，因此采用不同净化手段对样品进行前处理，以期与提取溶剂相结合考察不同类型净化手段的净化效果从而选取适宜的样品前处理方法。选用膏霜类化妆品作为空白基质，平行称取6份，置于10mL具塞比色管中，加入7种大麻素成分的标准溶液，其中CBN、CBD和CBGA添加浓度为100μg/kg；CBG、THC、CBC和THC-COOH添加浓度为1000μg/kg每种大麻素成分的浓度见表5，分别使用乙腈和甲醇作为提取溶剂，加至10mL，每种提取溶液平行3份，在涡旋混匀器上高速振荡30s使样品与提取溶剂充分混匀，超声提取10min，静置至室温。样品提取液在温度为4℃，转速为8000rpm，时间为10min条件下离心分离，取续滤液分别采用LUMTECH MPFC-QuEChERS(高脂类)超滤型净化柱、SHIMSEN QuEChERS dSPE column、Waters QuEChERS SPE column、Agilent CaptivaEMR-Lipid Cartridge、Waters Prime HLB column净化后通过经0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜过滤的方式处理样品提取液或直接使用0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜过滤样品提取液，按照实施例1中样品检测方法测定7种大麻素成分，计算回收率及相对标准偏差，结果见图3和图4。
通过图3可以看出，当采用甲醇作为提取溶剂时，样品提取液经LUMTECH MPFC-QuEChERS(高脂类)超滤型净化柱、SHIMSEN QuEChERS dSPE column、Waters QuEChERS SPEcolumn、Waters Prime HLB column净化后经微孔滤膜过滤的方式或直接使用微孔滤膜过滤的方式，至少有一种大麻素成分的回收率偏低，无法满足要求。Agilent Captiva EMR-Lipid固相萃取柱主要基于脂类物质的长脂肪链与EMR脂类吸附剂之间的体积排阻和疏水相互作用的结合去除样品中脂质基质，能够保证7种大麻素成分的回收率满足要求。因此，在采用甲醇作为提取溶剂时，可以采用Agilent CaptivaEMR-Lipid固相萃取柱净化并过滤对样品进行处理。
通过图4可以看出，当采用乙腈作为提取溶剂时，样品提取液经LUMTECH MPFC-QuEChERS(高脂类)超滤型净化柱、SHIMSEN QuEChERS dSPE column、Waters QuEChERS SPEcolumn、Agilent Captiva EMR-Lipid Cartridge、Waters Prime HLB column净化后经微孔滤膜过滤的方式，至少有一种大麻素成分的回收率偏低，无法满足要求。直接使用微孔滤膜过滤的方式能够保证7种大麻素成分的回收率满足要求。因此，在采用乙腈作为提取溶剂时，可以采用0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜过滤样品提取液对样品进行处理。
综上所述，在初步选择提取溶剂时，甲醇和乙腈均可以作为备选的提取溶剂，对化妆品中的大麻酚、大麻二酚、大麻萜酚、大麻萜酚酸、(-)-11-去甲-9-羧基-Δ9-四氢大麻酚、(-)-反式-Δ9-四氢大麻酚、大麻色烯等7种物质进行提取。
对比例2
考虑化妆品不同化妆品基质差异较大，在使用液质联用仪检测时会产生基质效应，对样品中待测物测定结果产生潜在影响，本对比例选用3种不含大麻成分物质的面膜、膏霜和水剂作为化妆品空白基质，并通过设置3个浓度加样回收方法考察样品中待测物质的分析测定效果。每种空白基质样品称取18份，置于10mL具塞比色管中，分别添加低、中、高浓度的7种大麻素成分标准溶液，添加浓度与表4相同，每个浓度平行6份，并加甲醇至10mL，在涡旋混匀器上高速振荡30s使样品与提取溶剂充分混匀，超声提取10min，静置至室温。样品提取液在温度为4℃，转速为8000rpm，时间为10min条件下离心分离，取续滤液分别采用Agilent Captiva EMR-Lipid Cartridge净化后经0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜过滤的方式处理样品提取液，采用实施例1中的样品检测方法，3种空白基质的加标回收率及相对标准偏差见图5。
结果表明：与对比例1中所表明的结果相比，Agilent Captiva EMR-LipidCartridge用于膏霜类化妆品净化时，对于低、中、高3个加标浓度回收率均符合要求，但用于水剂类和面膜类化妆品时，加标回收率均不符合要求。可能的原因：(1)对比例1中的加标浓度高于对比例2中所设置的加标浓度，化妆品基质干扰影响在大麻素成分含量较低时更为显著；(2)不同大麻素成分由于其化合物极性不同以及结构上的差异，分别表现出不同的正基质效应或负基质效应，导致回收率结果过高或过低；(3)水剂类和面膜类化妆品基质与膏霜类化妆品基质差异较大，适用于膏霜类化妆品的提取溶剂和样品处理方式，并不适用于水剂类和面膜类化妆品。
综上所述，与甲醇相比，乙腈作为提取溶剂更能兼容不同化妆品基质，当使用乙腈作为提取溶剂时，在低、中、高3个添加浓度下的回收率均满足试验要求。此外，采用0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜直接过滤样品提取液进行样品制备的方式，简化了样品处理的工作步骤，缩短了工作时间，提高了工作效率，因此，使用乙腈作为提取溶剂，可以作为化妆品中的大麻酚、大麻二酚、大麻萜酚、大麻萜酚酸、(-)-11-去甲-9-羧基-Δ9-四氢大麻酚、(-)-反式-Δ9-四氢大麻酚、大麻色烯等7种物质提取的首选方法。
对比例3
通常来说，对于采用液相色谱-质谱法进行的多组分分析检测，由于质谱具有优异的选择性等特点，多组分的有效分离并不是定量分析的必要条件，但在本发明中，因为CBD、THC和CBC互为同分异构体，具有相同的前体离子，并且具有相同质核比的离子碎片，在分析过程中，源于不同组分的相同质荷比离子间的相互干扰，不仅影响3个组分的定性分析，也对定量分析产生干扰。
表5
Figure BDA0003015933910000151
本发明通过采用3种不同厂家或规格的色谱柱，即(i)：Agilent Poroshell120SB-C18柱，长度100mm，内径2.1mm，粒径2.7μm；(ii)SHIMADZU
Figure BDA0003015933910000152
AQ-C18色谱柱，长度100mm，内径2.1mm，粒径1.9μm；(iii)曹逹CAPCELL CORE ADME色谱柱，长度100mm，内径2.1mm，粒径2.7μm，对7种大麻素成分的分离效果进行考察，不同色谱柱的分离效果见图6。结果表明：当采用Agilent Poroshell 120SB-C18柱对7种大麻素组分进行分离时，各组分的峰形较好，没有明显的拖尾或前伸，CBD、THC和CBC能有效分离，从而实现准确定性定量分析。各组分的保留时间见表5。
对比例4
本发明涉及7种大麻素成分，由于不同化合物结构中所包含的官能团不同，质谱正/负离子扫描模式的选择对化合物响应值具有显著影响，而扫描模式的选择与流动相的种类、极性和pH等相关。在7种大麻素成分中，CBGA和THC-COOH均为含有羧基的化合物，更倾向于失去质子形成带负电荷的母离子，本发明分别考察了甲酸水溶液-乙腈系统以及乙酸铵水溶液-乙腈系统作为流动相时大麻素成分的响应值，见图7。由图7可以看出，在负离子扫描模式下CBGA和THC-COOH的响应优于其在正离子扫描模式下的响应。在正离子扫描模式下，该2种化合物质子化效率较低、质谱响应低，难以实现较好的定量分析效果，还可能因灵敏度较低而产生假阴性结果。
为保证7种大麻素成分都能有较好的质谱响应，实现对所有组分的同时检测，避免假阴性的产生，本发明采用负离子扫描模式，以5mM乙酸铵水溶液-乙腈溶液作为流动相，该条件下7种大麻素成分的响应均较好，检测灵敏度可以满足方法需要。
对比例5
本发明分别考察了乙腈和甲醇作为流动相中有机相部分时7种大麻素成分的分离效果，见图8。由图8可以看出，当选择甲醇为流动相中的有机相部分时，CBGA有肩峰产生，不利于准确定量；当选择乙腈为流动相中的有机相部分时，CBGA无肩峰产生，可以实现准确定量。因此，本发明选择乙腈作为流动相中的有机相部分。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种化妆品中大麻素成分的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
A)将样品与提取溶剂混合，超声提取，得到提取液；
B)将所述提取液离心、过滤，得到目标检测液；
C)将所述目标检测液采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱法进行分析检测。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述大麻素成分包括：大麻酚、大麻二酚、大麻萜酚、大麻萜酚酸、(-)-11-去甲-9-羧基-Δ9-四氢大麻酚、(-)-反式-Δ9-四氢大麻酚和大麻色烯；
所述化妆品为水剂类、面膜类或膏霜类中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤A)提取溶剂为乙腈；所述样品与提取溶剂的质量比为1：(5～50)。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述超声提取的温度为20～30℃，超声提取的功率为500～700W，超声提取的时间为10～30min。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤B)离心温度为0～8℃，转速为5000～10000rpm，离心时间为5～20min；
所述过滤为通过微孔有机滤膜过滤；所述微孔有机滤膜为0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-三重四级杆质谱法的色谱条件为：
色谱柱：Agilent Poroshell 120SB-C18柱，长度100mm，内径2.1mm，粒径2.7μm；
流动相：乙腈和乙酸铵水溶液；
柱温：35～45℃；流速：0.2～0.4mL/min；进样量2～10μL。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-三重四级杆质谱法的色谱条件为：
流动相：乙腈和5mM乙酸铵水溶液；
柱温：40℃；流速：0.3mL/min；进样量：5μL。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相的梯度洗脱程序为：
Figure FDA0003015933900000021
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述超高效液相色谱-三重四级杆质谱法的质谱条件为：离子化方式为电喷雾离子源负离子模式，多反应监测模式信号采集，雾化气流量2.5～3.5L/min，干燥气流量8～12L/min，加热气流量8～12L/min，接口温度250～350℃，接口电压3.0～5.0kV。
10.一种化妆品风险评估方法，其特征在于，采用权利要求1～9任意一项所述的检测方法。
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