CN113092211A - 一种冷冻制片技术检测橡胶草植物根组织乳管的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种冷冻制片技术检测橡胶草植物根组织乳管的方法，包括选取待测橡胶草完整的植物组织放入固定液中；对所述固定液进行真空抽气，抽气时间控制1‑3min；在4℃放置6‑8h；取出所述固定液中的所述植物组织浸洗三次，每次30min；所述植物组织通过蔗糖溶液逐级脱水；将脱水后的所述植物组织吸附多余水分后用Biosharp包埋剂包埋，在‑20℃放置30‑45min，将所述根组织采用冷冻切片机切片后加10％甘油封片，10min甘油凝固封片得到玻片标本后，得到橡胶草根组织中乳管分布情况。本发明能快速检测橡胶草根内乳管分布和数量情况，此方法大大缩减了检测周期，能直观反应橡胶草乳管生长状况。
Description
技术领域
本发明属于植物组织鉴定技术领域，尤其涉及一种冷冻制片技术检测橡胶草植物根组织乳管的方法。
背景技术
橡胶草其中甲羟戊酸(MVA)途径中用于调节天然橡胶生物合成，橡胶草是二倍体(2n＝16)，具有相对简单的基因组，长度为1.29Gb，其中包含46,731个预测的蛋白质编码基因，橡胶草根含有高分子量橡胶分子，其特性与巴西橡胶树的橡胶胶乳相当，可以作为一种替代橡胶作物，橡胶草根的橡胶含量高，占其总干重的3％至28％，它们也是菊粉的新来源(线性β-(2-1)-连锁果聚糖)，是食品工业和生物乙醇生产的重要材料。因此可以用作发明小麦基因功能的理想模型植物。橡胶草根组织中含有大量乳管细胞能够合成天然橡胶胶乳，而橡胶草含胶量与乳管数量成正比，因此，橡胶草根组织乳管细胞检测可以初步判断橡胶草的乳管发育、含胶量和最佳收获期等重要指标。但是，现有技术中缺少对检测橡胶草植物根组织乳管的制片方法，因此需要一种冷冻制片技术检测橡胶草植物根组织乳管的方法。
发明内容
本发明提供一种排除蒲公英与橡胶草杂种干扰，冷冻制片技术检测橡胶草植物根组织乳管的方法。
本发明包括以下步骤：
A选取待测橡胶草完整的植物组织放入固定液中；
B对所述固定液进行真空抽气，抽气时间控制1-3min；在4℃放置6-8h；
C取出所述固定液中的所述植物组织浸洗三次，每次30min；
D所述植物组织通过蔗糖溶液逐级脱水；
E将脱水后的所述植物组织吸附多余水分后用Biosharp包埋剂包埋，在-20℃放置30-45min，
F将所述根组织采用冷冻切片机切片后加10％甘油封片，10min甘油凝固封片得到玻片标本后，得到橡胶草根组织中乳管分布情况。
进一步地，所述固定液包括4％多聚甲醛+0.5％戊二醛
+0.1molPBS((100mL)1mol磷酸二氢钠(31.6mL)。
进一步地，所述逐级脱水的方法包括0.1molPBS,pH＝7.2)2％1h→6％1h→8％1h→10％1h→12％1h→15％1h，
进一步地，所述浸洗液为0.1molPBS
进一步地，在步骤E中可去除完全脱水的根组织。
本发明的有益效果为：
本发明能快速检测橡胶草根内乳管分布和数量情况，此方法大大缩减了检测周期，能直观反应橡胶草乳管生长状况。
附图说明
图1本发明的流程示意图；
图2是在不同品种的橡胶草乳管细胞冷凍制片的高倍放大图。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
如图1所示，在本实施例子中包括以下步骤：
本发明包括以下步骤：
A选取待测橡胶草完整的植物组织放入固定液中；
B对所述固定液进行真空抽气，抽气时间控制1-3min；在4℃放置6-8h；
C取出所述固定液中的所述植物组织浸洗三次，每次30min；
D所述植物组织通过蔗糖溶液逐级脱水；
E将脱水后的所述植物组织吸附多余水分后用Biosharp包埋剂包埋，在-20℃放置30-45min，
F将所述根组织采用冷冻切片机切片后加10％甘油封片，10min甘油凝固封片得到玻片标本后，得到橡胶草根组织中乳管分布情况。配置固定液：4％多聚甲醛+0.5％戊二醛+0.1molPBS((100mL)1mol磷酸二氢钠(31.6mL)；(2)1mol磷酸氢二钠(68.4mL))；
橡胶草根组织材料收取，放入固定液中；真空抽气，根据根组织的大小，以及软硬程度，抽气时间控制1-3min；随后放置4℃固定过夜(6-8h)；固定好后，用0.1molPBS浸洗三次，每次30min；通过蔗糖溶液(0.1molPBS,pH＝7.2)2％1h→6％1h→8％1h→10％1h→12％1h→15％1h，逐级脱水；
去除完全脱水的根组织，滤纸吸干后，用Biosharp包埋剂包埋，在-20℃放置30-45min，随后在冷冻切片机舱内操作；
冷冻切片机设置切片厚度，切好后，放置在载玻片上，再用盖玻片盖好，周边气泡，滴加10％甘油封片，10min甘油凝固封片，标记好样品信息，放置在制片盒内暂存；电子显微下观察橡胶草根组织中乳管分布及数量。
如图2所示，冷冻制片结果显示，乳管细胞在不同品种的橡胶草此冷冻制片中的分布清晰，能正确定位乳管在根中的具体位置，与传统的石蜡切片检测相比，此方法步骤简单直观，检测用时更短，只需24h即可观察到较明显的结果。
橡胶草冷冻制片技术可以较为迅速的检测跟组织内乳管细胞，并且此方法能应用于商业化种植时橡胶含量测定前提指标，为橡胶草最适收获期提供一定的理论参考价值。本发明可以通过植物冷冻切片，能够快速检测橡胶草根内的乳管分布情况，既适于从不同品种和不同发育时期的橡胶草植物材料的乳管检测，还可用于野外采集野生橡胶草植物获得较高产量品种筛选。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种冷冻制片技术检测橡胶草植物根组织乳管的方法，其特征在于，包括以下步骤：
A选取待测橡胶草完整的植物组织放入固定液中；
B对所述固定液进行真空抽气，抽气时间控制1-3min；在4℃放置6-8h；
C取出所述固定液中的所述植物组织浸洗三次，每次30min；
D所述植物组织通过蔗糖溶液逐级脱水；
E将脱水后的所述植物组织吸附多余水分后用Biosharp包埋剂包埋，在-20℃放置30-45min；
F将所述根组织采用冷冻切片机切片后加10％甘油封片，10min甘油凝固封片得到玻片标本后，得到橡胶草根组织中乳管分布情况。
2.根据权利要求1所述一种冷冻制片技术检测橡胶草植物根组织乳管的方法，其特征在于，所述固定液包括4％多聚甲醛+0.5％戊二醛+0.1molPBS((100mL)1mol磷酸二氢钠(31.6mL)。
3.根据权利要求1所述一种冷冻制片技术检测橡胶草植物根组织乳管的方法，其特征在于，所述逐级脱水的方法包括在pH＝7.2条件下采用0.1molPBS 2％1h→6％1h→8％1h→10％1h→12％1h→15％1h。
4.根据权利要求1所述一种冷冻制片技术检测橡胶草植物根组织乳管的方法，其特征在于，所述浸洗液为0.1molPBS。
5.根据权利要求1所述一种冷冻制片技术检测橡胶草植物根组织乳管的方法，在步骤E中可去除完全脱水的根组织。
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| JP2009109217A (ja) * | 2007-10-26 | 2009-05-21 | Bridgestone Corp | ラテックス産出植物の乳管細胞を検出する方法 |
| CN105973673A (zh) * | 2016-06-30 | 2016-09-28 | 中国林业科学研究院热带林业研究所 | 一种桉树组织的石蜡切片方法 |
| CN106501035A (zh) * | 2016-10-17 | 2017-03-15 | 中国热带农业科学院橡胶研究所 | 一种快速显示橡胶树树皮乳管的组织化学方法 |
-
2021
- 2021-04-08 CN CN202110378736.2A patent/CN113092211B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009109217A (ja) * | 2007-10-26 | 2009-05-21 | Bridgestone Corp | ラテックス産出植物の乳管細胞を検出する方法 |
| CN105973673A (zh) * | 2016-06-30 | 2016-09-28 | 中国林业科学研究院热带林业研究所 | 一种桉树组织的石蜡切片方法 |
| CN106501035A (zh) * | 2016-10-17 | 2017-03-15 | 中国热带农业科学院橡胶研究所 | 一种快速显示橡胶树树皮乳管的组织化学方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 薛社普: "《医学细胞生物学》", 中国协和医科大学出版社 * |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113092211B (zh) | 2023-12-12 |
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