CN113082210A - 一种肿瘤化疗药物组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种肿瘤化疗药物组合物，具体公开了西地那非作为抗肿瘤药物增敏剂在制备肿瘤化疗药物中的用途。本发明发现使用西地那非作为增敏剂，通过载体将西地那非与奥沙利铂、伊立替康或卡培他滨等抗肿瘤药物组合，制备成抗肿瘤组合物，可用于有效杀伤结直肠癌等肿瘤细胞或耐药性肿瘤细胞。本发明首次在细胞水平验证了西地那非对抗肿瘤药物的增敏作用，证实了其作为增敏剂在结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌等癌症中的治疗增效作用，为有效治疗肿瘤提供新的途径和手段。

Description

一种肿瘤化疗药物组合物
技术领域
本发明涉及医药领域，涉及一种肿瘤化疗药物组合，具体涉及西地那非作为抗肿瘤药物增敏剂在制备肿瘤化疗药物中的用途。
背景技术
结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌等肿瘤严重威胁人类生命健康，其发病率和死亡率高，诊治结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌是世界范围内的重大公共健康难题。目前，结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌、前列腺癌等肿瘤的主要治疗手段包括手术、化疗和放射治疗等。对于早期发现的患者而言，手术切除被认为是较好的治疗手段；但是当肿瘤进展到晚期时，单纯使用手术治疗已无法根治肿瘤，需要进行系统性化疗或通过化疗辅助手术治疗的方式对患者治疗。但是，对于相关技术中常规使用的化疗药物来说，绝大多数化疗药物均具有一定的毒性和副作用，如骨髓抑制、降低白细胞数量、抑制血小板、腹泻、恶心、呕吐等，对人体存在一定的危害性。因此，设法增强传统化疗药物的抗癌活性并降低其不良反应具有重要的临床意义。
此外，虽然肿瘤治疗的研究在不断进行，但仅有不到一半的肿瘤对化疗敏感，超过50％的肿瘤会对化疗药物迅速产生耐药性，即肿瘤多药耐药(multidrug resistance，MDR)。MDR是指肿瘤细胞不仅对一种抗肿瘤药物产生耐药，且对其他结构不同、作用机制各异的抗肿瘤药物也会产生交叉耐药现象。因此，寻找低毒有效的逆转耐药同样也对于临床肿瘤治疗意义重大。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。本发明人发现西地那非的一种新应用，即西地那非作为抗肿瘤化疗药物耐药增敏剂在制备肿瘤化疗药物中的应用，提供西地那非与现有化疗药物进行联合应用治疗癌症的技术方案。同时提供了一种由西地那非联合化疗药物的药物组合物。
本发明的第一个方面，提供一种药物组合物，该药物组合物包括肿瘤化疗药物、西地那非或其盐。
5型磷酸二酯酶(phosphodiesterase 5，PDE-5)抑制剂西地那非(Sidenafil)是治疗勃起功能障碍(ED)的处方药。相关技术中，西地那非被发现具有一定的抗肿瘤活性，但对于西地那非是否具有逆转肿瘤多药耐药(multidrug resistance，MDR)的性质及其关机制研究尚无报道。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述肿瘤化疗药物包括铂剂、氟尿嘧啶、伊立替康和卡培他滨中的至少一种。
在本发明的一些优选实施方式中，所述肿瘤化疗药物为铂剂、氟尿嘧啶、伊立替康和卡培他滨中的至少一种。
在本发明的一些更优选实施方式中，所述铂剂包括顺铂、卡铂、奈达铂、环铂,、奥沙利铂、洛铂中的至少一种。
铂剂包括一代顺铂，二代卡铂、奈达铂、环铂，三代奥沙利铂、洛铂，其抗癌机理是以DNA为靶作用部位，铂原子与DNA形成交叉联结，拮抗其复制和转录。其中，第一代铂剂：顺铂是多种实体瘤的一线用药，可用于晚期卵巢癌、骨肉瘤、神经母细胞瘤，对头颈部、宫颈、食管及泌尿系肿瘤等有效，但存在严重肾毒性和消化道毒性。第二代铂剂：卡铂主要用于小细胞肺癌、卵巢癌、睾丸肿瘤、头颈部鳞癌等，也可用于非小细胞肺癌、膀胱癌、子宫颈癌、胸膜间皮瘤、黑色素瘤、子宫内膜癌等，但其对于骨髓抑制和血小板减少严重；奈达铂主要用于食管癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌，其同样存在骨髓抑制和血小板减少严重的问题，同时还会降低白细胞数量；环铂主要用于泌尿生殖系统恶性肿瘤如睾丸癌、卵巢癌、头颈部癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌等的治疗，同样具有骨髓抑制的副作用。第三代铂剂：奥沙利铂主要用于结直肠癌晚期一、二线治疗和术后辅助治疗，也应用于卵巢癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、非小细胞肺癌、黑色素瘤、淋巴瘤的治疗，但奥沙利铂具有一定的神经毒性和消化道反应，从而限制了其临床应用；洛铂主要用于治疗乳腺癌、小细胞肺癌、慢性粒细胞白血病，其对于骨髓抑制明显，同时对于血小板的降低也最为强烈。
伊立替康(Irinotecan)为半合成水溶性喜树碱类衍生物，也是一种治疗结直肠癌的一线用药。伊立替康主要与拓扑异构酶Ⅰ及DNA形成的复合物能引起DNA单链断裂，阻止DNA复制及抑制RNA合成，为细胞周期S期特异性起到抗癌效果。但是伊立替康也具有延迟性腹泻和中性粒细胞减少等不良反应。
卡培他滨(Capecitabine)口服后经肠黏膜迅速吸收，在肝脏被羧基酯酶转化为无活性的中间体5'-脱氧-5'氟胞苷，然后经肝脏和肿瘤组织的胞苷脱氨酶的作用转化为5'-脱氧-5'氟尿苷，最后在肿瘤组织内经胸苷磷酸化酶催化为氟尿嘧啶(5-FU)而起作用。卡培他滨主要用于晚期乳腺癌、大肠癌等的治疗。但卡培他滨会产生较严重的腹泻、恶心、呕吐、胃炎等不良反应。
在本发明的一些优选实施方式中，所述肿瘤包括结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌和前列腺癌。
当然，本领域技术人员可以根据实际使用的肿瘤化疗药物的适用证合理选择对应的肿瘤。
在本发明的一些更优选实施方式中，所述肿瘤为结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌或前列腺癌中的至少一种。
在本发明的一些优选实施方式中，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体或辅料。
在本发明的一些更优选实施方式中，所述药学上可接受的载体或辅料包括稀释剂、吸收剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂或透皮吸收促进剂中的一种或多种。
当然，本领域技术人员可以根据实际使用需求，合理添加其他载体或辅料以提高药物组合物的效能。
根据本发明的第一个方面，在本发明的一些实施方式中，所述盐是枸橼酸西地那非。
本发明的第二个方面，提供一种药物，该药物中含有本发明第一个方面所述的药物组合物。
根据本发明的第二个方面，在本发明的一些实施方式中，所述药物的剂型包括口服制剂、注射制剂和透皮制剂。
当然，本领域技术人员可以根据实际使用需求，选择不同的制备方法以得到其他的剂型。
本发明的第三个方面，提供西地那非或其盐作为抗肿瘤药物增敏剂在制备治疗肿瘤的药物组合物中的用途。
发明人发现，在实际使用中，800nM的西地那非对一些具有代表性的耐药性肿瘤细胞株，如SGC7901/DDP、MCF-7/DDP、HepG2/DDP、PC-3/DDP、HCT-116/L-OHP、HT-29/CPT-11和SW620/CAP的细胞增殖只有较轻抑制作用。但是将西地那非与化疗药物联合使用后，可明显提高化疗药物对上述耐药细胞株的抑制作用，联合给药可降低由于高剂量下化疗药物导致的不良反应。此外，发明人还发现，西地那非相关增敏机制包括下调耐药细胞株中P-gp、MDR1、MRP1，即减弱P-gp将化疗药物外泵至细胞外，增强肿瘤对化疗药物的敏感性，并要促进耐药细胞株的凋亡。因此，在以化疗治疗为主的临床应用中，西地那非可以作为一种增敏剂用于提高化疗药物的治疗效果。
根据本发明的第三个方面，在本发明的一些实施方式中，所述盐为枸橼酸西地那非。
根据本发明的第三个方面，在本发明的一些实施方式中，所述抗肿瘤药物包括铂剂、氟尿嘧啶、伊立替康和卡培他滨中的至少一种。
在本发明的一些优选实施方式中，所述抗肿瘤药物为铂剂、氟尿嘧啶、伊立替康和卡培他滨中的至少一种。
在本发明的一些更优选实施方式中，所述铂剂包括顺铂、卡铂、奈达铂、环铂,、奥沙利铂、洛铂中的至少一种。
在本发明的一些优选实施方式中，所述肿瘤包括结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌和前列腺癌。
当然，本领域技术人员可以根据实际使用的肿瘤化疗药物的适用证合理选择对应的肿瘤。
在本发明的一些更优选实施方式中，所述肿瘤为结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌或前列腺癌中的至少一种。
本发明的第四个方面，提供西地那非或其盐联合肿瘤化疗药物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
本发明首次提出了通过药学上可接受的载体将西地那非与铂剂、伊立替康、卡培他滨等化疗药物组合的技术方案，该方案可有效的杀伤肿瘤细胞，为提高化疗药物在有效治疗肿瘤方面提供新的途径和手段。
根据本发明的第四个方面，在本发明的一些实施方式中，所述抗肿瘤药物包括铂剂、氟尿嘧啶、伊立替康和卡培他滨中的至少一种。
在本发明的一些优选实施方式中，所述抗肿瘤药物为铂剂、氟尿嘧啶、伊立替康和卡培他滨中的至少一种。
在本发明的一些更优选实施方式中，所述铂剂包括顺铂、卡铂、奈达铂、环铂,、奥沙利铂、洛铂中的至少一种。
在本发明的一些优选实施方式中，所述肿瘤包括结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌和前列腺癌。
当然，本领域技术人员可以根据实际使用的肿瘤化疗药物的适用证合理选择对应的肿瘤。
在本发明的一些更优选实施方式中，所述肿瘤为结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌或前列腺癌中的至少一种。
根据本发明的第四个方面，在本发明的一些实施方式中，所述西地那非或其盐的给药剂量为0.5～20mg/天。
在本发明的一些优选实施方式中，所述西地那非或其盐的给药方式包括注射给药，所述注射给药包括但不限于静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射或皮下注射等途径。
本发明的有益效果是：
1.本发明首次在细胞水平上验证了西地那非作为抗肿瘤药物增敏剂，配合铂剂、伊立替康、卡培他滨等化疗药物使用后，可增强铂剂、伊立替康、卡培他滨等化疗药物对耐药细胞株的杀伤作用。
2.本发明揭示了西地那非相关的增敏机制，发现西地那非能够通过下调耐药细胞株中P-gp、MDR1、MRP1，即减弱P-gp将化疗药物外泵至细胞外，增强肿瘤对化疗药物的敏感性，并要促进耐药细胞株的凋亡，从而有效的提高化疗药物的治疗效果。
3.本发明首次提出了通过药学上可接受的载体将西地那非与铂剂、伊立替康、卡培他滨等化疗药物组合的技术方案，该方案可有效的杀伤肿瘤细胞，并有效地避免高剂量上述化疗药物给药导致的不良反应，为提高化疗药物在有效治疗肿瘤方面提供新的途径和手段。
附图说明
图1为本发明实施例中西地那非对结直肠癌HCT-116细胞及DLD-1细胞抑制作用的检测结果；
图2为本发明实施例中西地那非显著增强奥沙利铂和伊立替康对人结肠癌细胞(HCT-116)在体内的杀伤作用结果图；其中，A为裸鼠肿瘤实物图，B为裸鼠肿瘤生长曲线图；图2中，A组为对照组、B组为奥沙利铂单用组、C组为伊立替康单用组、D组为奥沙利铂和西地那非合用组、E组为伊立替康和西地那非合用组；
图3为本发明实施例中西地那非显著增强奥沙利铂对人结肠癌奥沙利铂耐药细胞(HCT-116/L-OHP)在体内的杀伤作用结果图；其中，A为裸鼠肿瘤实物图，B为裸鼠肿瘤生长曲线图；图2中，A组为对照组、B组为奥沙利铂单用组、C组为奥沙利铂和西地那非合用组。
具体实施方式
为了使本发明的发明目的、技术方案及其技术效果更加清晰，以下结合具体实施方式，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本发明，并非为了限定本发明。
所使用的实验材料和试剂，若无特别说明，均为常规可从商业途径所获得的耗材和试剂。
实验材料
下述实施例中使用的细胞株包括：结直肠癌HCT-116细胞及DLD-1细胞、人耐药顺铂胃癌细胞(SGC7901/DDP)、人乳腺癌顺铂耐药细胞株(MCF-7/DDP)，人肝癌耐药细胞株(HepG2/DDP)、人前列腺癌顺铂耐药细胞株(PC-3/DDP)、人结肠癌奥沙利铂耐药细胞(HCT-116/L-OHP)、人结直肠癌伊立替康耐药细胞(HT-29/CPT-11)、人结肠癌卡培他滨耐药细胞(SW620/CAP)。
下述实施例中使用的主要药品及试剂为：西地那非(SIGMA)，胎牛血清(GIBCO)，RPMI-1640培养液(GIBCO)，0.25％胰酶(GIBCO)，MTT(SIGMA)，DMSO(上海国药)。
下述实施例中涉及的主要仪器为：WATER JACKET二氧化碳培养箱(日本ASTEC公司)；BSC-1600IIA2生物安全柜(苏净集团苏州安泰空气技术有限公司)；XDS-1B倒置显微镜(重庆光电仪器有限公司)；AcculAB ALC-210.3电子天平(德国艾科勒公司)；Synergy2多功能酶标仪(美国BioTek仪器有限公司)。
西地那非对非耐药性细胞株的体外抑制作用检测实验
本实施例以非耐药性细胞株结直肠癌HCT-116细胞及DLD-1细胞为对象，检测西地那非对非耐药性细胞株的体外抑制作用。
具体实验方法如下：
取HCT-116、DLD-1细胞，分别接种于100mm培养皿中，培养72h，去除培养液。然后以0.25％胰酶消化，收集细胞，细胞计数，配制10000个/mL浓度的单细胞悬液，分别每孔接种0.2mL单细胞悬液至96孔板，每孔总细胞数为2000个。培养24h后，加入西地那非(终浓度分别为25、50、100、200、400、800、1600nM)处理72h，去上清后加入0.2mL DMSO，用酶标仪在570nm处测定各孔吸光度值(OD)。根据OD值计算细胞存活率。
Figure BDA0002968007820000061
结果如图1所示，800nM的西地那非处理72h后，HCT-116、DLD-1细胞的存活率均大于85％。这说明西地那非的浓度低于800nM时，处理72h对非耐药性细胞株HCT-116、DLD-1没有明显的抑制作用。
西地那非对不同耐药细胞株的体外抑制作用检测实验
本实施例采用MTT法检测西地那非对不同耐药细胞株的体外抑制作用，具体实验方法如下：
取SGC7901/DDP、MCF-7/DDP、HepG2/DDP、PC-3/DDP、HCT-116/L-OHP、HT-29/CPT-11和SW620/CAP细胞株，分别接种于100mm培养皿中，培养72h，去除培养液。使用0.25％胰酶消化，收集细胞，进行细胞计数，配制10000个/mL浓度的单细胞悬液。将制备得到的单细胞悬液以0.2mL/孔接种至96孔板中，每孔细胞数为2000个。培养24h后，加入不同浓度的西地那非(终浓度分别为25、50、100、200、400、800、1600nM)处理72h，对照组加入等体积的RPIM1640培养液，另设空白组(不含细胞的RPIM 1640培养液)，37℃培养(培养时间根据细胞株的种类决定)，培养完成后，加20μL MTT溶液(终浓度0.5mg/mL)，继续培养4h。弃去上清，每孔加入150μL DMSO，用酶标仪在570nm处测定各孔吸光度值(OD)。
根据OD值计算细胞存活率。
Figure BDA0002968007820000071
结果如表1所示。
表1不同浓度西地那非对耐药细胞株存活率的影响(％，n＝5)
Figure BDA0002968007820000072
从表1中可知，在加入800nM西地那非处理72h后，SGC7901/DDP、MCF-7/DDP、HepG2/DDP、PC-3/DDP、HCT-116/L-OHP、HT-29/CPT-11和SW620/CAP的存活率均大于85％。这说明西地那非的浓度低于800nM时，处理72h后，对上述耐药细胞株没有明显的抑制作用。因此，下述实施例均选择800nM西地那非作为增敏剂的最高浓度，分别与顺铂、奥沙利铂、伊立替康等化疗药物联合使用，检测西地那非的增敏作用，以避免西地那非自身的抗肿瘤效果带来的干扰。
西地那非增强化疗药物对非耐药细胞株的抑制作用检测实验
取DLD-1细胞株，分别接种于100mm培养皿中，培养72h，去除培养液。使用0.25％胰酶消化，收集细胞，进行细胞计数，配制10000个/mL浓度的单细胞悬液。将制备得到的单细胞悬液以0.2mL/孔接种至96孔板中，每孔细胞数为2000个。培养24h后，加入不同的药物，具体加入情况为：
(1)单独加入10、20、50、100、200、400、1000、2000、4000nM奥沙利铂；
(2)单独加入5、10、20、50、100、200、400、1000、2000nM伊立替康；
(3)10、20、50、100、200、400、1000、2000、4000nM奥沙利铂+800nM西地那非；
(4)5、10、20、50、100、200、400、1000、2000nM伊立替康+800nM西地那非。
同时设空白组(不含细胞的RPIM 1640培养液)和对照组(等体积的RPIM 1640培养液)，37℃培养(培养时间根据细胞株的种类决定)，培养完成后，加20μL MTT溶液(终浓度0.5mg/mL)，继续培养4h。弃去上清，每孔加入150μL DMSO，用酶标仪在570nm处测定各孔吸光度值(OD)。计算半数细胞抑制浓度(IC50)。
结果如表2所示。
表2不同药物处理对非耐药细胞株IC50的影响(nM，n＝15)
Figure BDA0002968007820000081
结果表明，单独使用800nM的西地那非对结直肠癌DLD-1细胞株的细胞增殖仅有微弱的抑制作用。将800nM的西地那非与奥沙利铂和伊立替康联合用药后，奥沙利铂和伊立替康对DLD-1细胞的IC50明显低于单独使用奥沙利铂和伊立替康对DLD-1细胞的IC50。上述结果说明800nM的西地那非与奥沙利铂和伊立替康联合用药会显著降低奥沙利铂和伊立替康的IC50浓度，增强这两种化疗药物对DLD-1细胞的杀伤作用。
西地那非增强化疗药物对耐药细胞株的抑制作用检测实验
取SGC7901/DDP、MCF-7/DDP、HepG2/DDP、PC-3/DDP、HCT-116/L-OHP、HT-29/CPT-11和SW620/CAP细胞株，分别接种于100mm培养皿中，培养72h，去除培养液。使用0.25％胰酶消化，收集细胞，进行细胞计数，配制10000个/mL浓度的单细胞悬液。将制备得到的单细胞悬液以0.2mL/孔接种至96孔板中，每孔细胞数为2000个。培养24h后，根据细胞株类别加入不同的药物，具体加入情况为：
(1)SGC7901/DDP、MCF-7/DDP、HepG2/DDP、PC-3/DDP：加入不同浓度的顺铂(终浓度分别为20、50、100、200、400、1000、2000、4000、8000nM)以及不同浓度的西地那非(终浓度分别为50、200、800nM)；
(2)HCT-116/L-OHP：加入不同浓度的奥沙利铂(终浓度分别为10、20、50、100、200、400、1000、2000、4000nM)以及不同浓度的西地那非(终浓度分别为50、200、800nM)；
(3)HT-29/CPT-11：加入不同浓度的伊立替康(终浓度分别为5、10、20、50、100、200、400、1000、2000nM)以及不同浓度的西地那非(终浓度分别为50、200、800nM)；
(4)SW620/CAP：加入不同浓度的卡培他滨(终浓度分别为20、50、100、200、400、1000、2000、4000、8000nM)以及不同浓度的西地那非(终浓度分别为50、200、800nM)。
同时设空白组(不含细胞的RPIM 1640培养液)和对照组(等体积的RPIM 1640培养液)，37℃培养(培养时间根据细胞株的种类决定)，培养完成后，加20μL MTT溶液(终浓度0.5mg/mL)，继续培养4h。弃去上清，每孔加入150μL DMSO，用酶标仪在570nm处测定各孔吸光度值(OD)。计算半数细胞抑制浓度(IC50)。
结果如表3所示。
表3不同药物处理对耐药细胞株IC50的影响(nM，n＝15)
Figure BDA0002968007820000091
Figure BDA0002968007820000101
从表3中可以看出，单独使用800nM的西地那非对SGC7901/DDP、MCF-7/DDP、HepG2/DDP、PC-3/DDP、HCT-116/L-OHP、HT-29/CPT-11和SW620/CAP的细胞增殖仅有微弱的抑制作用。将800nM的西地那非与顺铂、奥沙利铂、伊立替康、卡培他滨联合用药后，对相应耐药细胞株的IC50明显低于单独使用化疗药物的IC50，即800nM西地那非联合化疗药物可以显著降低后者的IC50浓度，增强化疗药物对上述耐药细胞株的杀伤作用。
西地那非增敏机制的探究实验
本实施例以HT-29/CPT-11细胞株为例，以说明西地那非的增敏机制，但需要说明的是，本实施例中所述的增敏机制并不仅限于HT-29/CPT-11细胞株。
本实施例通过检测经过西地那非处理过的HT-29/CPT-11细胞株(处理方法同上述实施例)中的P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)以及细胞凋亡来得到西地那非的增敏机制。
具体实验步骤包括：
(1)P-糖蛋白(P-gp)的检测：
采用Western blot法检测P-糖蛋白(P-gp)含量，具体步骤为：将HT-29/CPT-11接种于6孔板，分为4组(空白组、不同浓度西地那非组(西地那非终浓度分别为50、200、800nM))，孵育24h后，PBS洗涤，加入含PMSF、磷酸酶抑制剂的细胞裂解液充分裂解，提取总蛋白。蛋白定量后，采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离目的蛋白，湿法转膜、封闭，常规方法孵育一抗(小鼠抗人抗体P-gp(Abcam)，4℃过夜，加入二抗(辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG(EARTHOX)，孵育l h，显影、定影后冲洗X光胶片，晾干、扫描，采用Image J 1.44p图像处理软件分析目标条带及相应内参条带(以GAPDH为内参)光密度的比值。
(2)多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)的检测：
采用Western blot法检测多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)，具体步骤同P-糖蛋白(P-gp)的检测，一抗分别为小鼠抗人抗体MDR1和小鼠抗人抗体MRP1。
(3)细胞凋亡情况检测：
将HT-29/CPT-11接种于96孔板，分为5组(空白组、伊立替康组(终浓度10μM)、西地那非+伊立替康组(伊立替康终浓度10μM，西地那非终浓度分别为50、200、800nM))，孵育24h，收集细胞，PBS洗涤2次，收集约5×105个细胞，加入500μL的Binding Buffer悬浮，加入5μLAnnexin V-FITC混合均匀，最后加入5μL Propidium Iodide，轻轻震荡混匀重悬细胞，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，重复6次，计算平均凋亡率。
结果如表4和表5所示。
表4西地那非对HT-29/CPT-11中P-gp、MDR1、MRP1表达的影响(n＝6)
组别 P-gp/GAPDH MDR1/GAPDH MRP1/GAPDH
空白组 0.95±0.19 0.79±0.09 0.66±0.11
50nM西地那非 0.70±0.15 0.71±0.11 0.58±0.14
200nM西地那非 0.59±0.16 0.63±0.10 0.50±0.06
800nM西地那非 0.33±0.10 0.52±0.08 0.45±0.07
注：各组与空白组相比，*P<0.05。
MDR相关分子机制极其复杂，包括增加药物外排、细胞内药物累积再分布、药物解毒作用增加或者改变药物靶分子、增强DNA损伤修复、抑制药物诱导的凋亡等。P-gp是ABC转运体超家族成员，可将其作用底物从胞内泵出胞外，进而减弱药物效应，P-gp高度活化是肿瘤细胞多药耐药的主要诱因；此外，耐药基因如MDR1、MRP1的激活和表达增加也被证明与肿瘤的耐药性有关。通过表3的结果可知，与空白组相比，50、200、800nM西地那非可明显降低P-gp表达，200、800nM西地那非可明显降低HT-29/CPT-11中MDR1、MRP1的表达，差异均有统计学意义(P<0.05)。表明西地那非能够明显下调HT-29/CPT-11细胞中P-gp、MDR1、MRP1，即减弱P-gp将化疗药物外泵至细胞外，增强肿瘤对化疗药物的敏感性。
表5不同组别平均凋亡率比较(％，n＝6)
组别 凋亡率
空白组 0.66±0.09*
伊立替康组 23.35±3.24
50nM西地那非+伊立替康组 25.47±4.12
200nM西地那非+伊立替康组 30.58±6.49*
800nM西地那非+伊立替康组 37.43±5.34*
注：与伊立替康组相比，*P<0.05
如表5所示，与伊立替康组相比，加用200、800nM西地那非均可明显增加HT-29/CPT-11凋亡率，差异均有统计学意义(P<0.05)，表明西地那非具有增强伊立替康诱导HT-29/CPT-11凋亡的作用。
综上所述，可以发现，西地那非可以通过降低P-糖蛋白、多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白1的表达以及诱导细胞凋亡双通道实现耐药细胞株对药物的增敏机。
西地那非增强奥沙利铂、伊立替康对非耐药性细胞株HCT-116的体内杀伤作用
本实施例以接种结直肠癌细胞株HCT-116的4-5周龄无胸腺裸鼠作为动物模型，验证西地那非增强奥沙利铂和伊立替康在体内的杀伤效果。
具体实验步骤为：
取HCT-116接种于100mm培养皿，培养72h，去除培养液；0.25％胰酶消化，用PBS收集细胞，并调节浓度至1×107/ml。将收集的细胞注入无胸腺裸鼠双侧腋下。注入后1天，将实验裸鼠随机分为5组，采用不同的治疗方案：
(1)空白对照组；
(2)单独使用奥沙利铂，10mg/kg，尾静脉注射；
(3)单独使用伊立替康，20mg/kg，尾静脉注射；
(4)西地那非(10mg/kg)与奥沙利铂(10mg/kg)联合，尾静脉注射；
(5)西地那非(10mg/kg)与伊立替康(20mg/kg)联合，尾静脉注射。
每3天重复一次注射，共6个周期。每3天测量肿瘤直径(宽度和长度)和小鼠体重，直到动物被处死。动物处死后，切除肿瘤组织并称重。
结果如图2所示，体内实验中，10mg/kg西地那非对于非耐药的肿瘤细胞HCT-116异植瘤无明显抑制生长作用，10mg/kg奥沙利铂单独作用对结肠癌HCT-116细胞的抑制率为50.7％，而奥沙利铂和西地那非联合用药的抑制率是86.9％。20mg/kg伊立替康单独作用对结肠癌HCT-116细胞的抑制率为47.2％，而伊立替康和西地那非联合用药的抑制率是87.4％。数据证明西地那非与奥沙利铂或伊立替康联合用药，可以显著增强奥沙利铂或伊立替康对HCT-116细胞在体内的杀伤作用。
西地那非增强奥沙利铂对耐药性细胞株HCT-116/L-OHP的体内杀伤作用
本实施例以接种人结肠癌奥沙利铂耐药细胞(HCT-116/L-OHP)的4-5周龄无胸腺裸鼠作为动物模型，验证西地那非增强奥沙利铂在体内的杀伤效果。
具体实验步骤为：
取HCT-116/L-OHP接种于100mm培养皿，培养72h，去除培养液；0.25％胰酶消化，用PBS收集细胞，并调节浓度至1×107/ml。将收集的细胞注入无胸腺裸鼠双侧腋下。注入后1天，将实验裸鼠随机分为3组，采用不同的治疗方案：
(1)空白对照组；
(2)单独使用奥沙利铂，10mg/kg，尾静脉注射；
(3)西地那非(10mg/kg)与奥沙利铂(10mg/kg)联合，尾静脉注射。
每3天重复一次注射，共6个周期。每3天测量肿瘤直径(宽度和长度)和小鼠体重，直到动物被处死。动物处死后，切除肿瘤组织并称重。
结果如图3所示，体内实验中，10mg/kg西地那非对于多药耐药肿瘤细胞HCT-116异植瘤无明显抑制生长作用，10mg/kg奥沙利铂单独作用对结肠癌HCT-116/L-OHP细胞的抑制率为50.7％，而奥沙利铂和西地那非联合用药的抑制率是86.9％。数据证明西地那非与奥沙利铂联合用药，可以显著增强奥沙利铂对HCT-116/L-OHP细胞在体内的杀伤作用。
综上所述，通过体内外研究表明，西地那非可显著逆转多种肿瘤耐药细胞株的ADR，显著降低顺铂、奥沙利铂、伊立替康、卡培他滨等化疗药物对耐药肿瘤细胞株的IC50，其机制可能与西地那非下调耐药基因、增强肿瘤耐药细胞的致凋亡等作用有关。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括肿瘤化疗药物、西地那非或其盐。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述肿瘤化疗药物选自铂剂、氟尿嘧啶、伊立替康和卡培他滨中的至少一种；所述肿瘤化疗药物优选为铂剂、氟尿嘧啶、伊立替康和卡培他滨中的至少一种；所述铂剂选自顺铂、卡铂、奈达铂、环铂,、奥沙利铂、洛铂中的至少一种。
3.根据权利要求1或2所述的药物组合物，其特征在于，所述肿瘤选自结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌和前列腺癌中的至少一种。
4.根据权利要求1～3任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的辅料；所述药学上可接受的辅料优选包括稀释剂、吸收剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂或透皮吸收促进剂中的一种或多种。
5.根据权利要求1～4任一项所述的药物组合物，所述药物组合物的剂型为口服制剂、注射制剂或透皮制剂。
6.西地那非或其盐作为抗肿瘤药物增敏剂在制备治疗肿瘤的药物组合物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述西地那非的盐为枸橼酸西地那非。
8.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述抗肿瘤药物选自铂剂、氟尿嘧啶、伊立替康和卡培他滨中的至少一种；所述抗肿瘤药物优选为铂剂、氟尿嘧啶、伊立替康和卡培他滨中的至少一种；所述铂剂选自顺铂、卡铂、奈达铂、环铂,、奥沙利铂、洛铂中的至少一种。
9.权利要求1-5任一项所述的药物组合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于，所述西地那非或其盐的给药剂量为0.5～20mg/天。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022188491A1 (zh) * 2021-03-09 2022-09-15 广州白云山医药集团股份有限公司白云山制药总厂 一种肿瘤化疗药物组合物

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101342175A (zh) * 2007-07-13 2009-01-14 王钢胜 西地那非在制备抗肿瘤药物中的应用
US20110250129A1 (en) * 2008-11-12 2011-10-13 The Johns Hopkins University Bioluminescence imaging-based screening assay and inhibitors of abcg2
US20120252816A1 (en) * 2011-03-28 2012-10-04 Chen Zhe-Sheng Use of phosphodiesterase inhibitors for treating multidrug resistance
CN106389437A (zh) * 2016-10-09 2017-02-15 广州市东来生物科技有限公司 低剂量西地那非作为抗肿瘤药物的应用
CN112423765A (zh) * 2018-04-25 2021-02-26 儿童医学中心公司 Abcb5配体和底物

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1850852A4 (en) * 2005-02-22 2009-11-18 Cedars Sinai Medical Center USE OF SILDENAFIL, VARDENAFIL AND OTHER 5-PHOSPHODIESTERASE INHIBITORS TO INCREASE THE PERMEABILITY OF THE ABNORMAL BLOOD-BRAIN DISEASE
CN113082210B (zh) * 2021-03-09 2023-04-18 广州白云山医药集团股份有限公司白云山制药总厂 一种肿瘤化疗药物组合物

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101342175A (zh) * 2007-07-13 2009-01-14 王钢胜 西地那非在制备抗肿瘤药物中的应用
US20110250129A1 (en) * 2008-11-12 2011-10-13 The Johns Hopkins University Bioluminescence imaging-based screening assay and inhibitors of abcg2
US20120252816A1 (en) * 2011-03-28 2012-10-04 Chen Zhe-Sheng Use of phosphodiesterase inhibitors for treating multidrug resistance
CN106389437A (zh) * 2016-10-09 2017-02-15 广州市东来生物科技有限公司 低剂量西地那非作为抗肿瘤药物的应用
CN112423765A (zh) * 2018-04-25 2021-02-26 儿童医学中心公司 Abcb5配体和底物

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FARIBA HASSANVAND等: "Sildenafil enhances cisplatin‑induced apoptosis in human breast adenocarcinoma cells" *
朱灿阳: "西地那非的研究进展", 《海南医学》 *
许茜等: "药物转运体介导的肿瘤细胞多药耐药研究进展", 《中华临床医师杂志(电子版)》 *
陈俊江等: "西地那非和伐地那非逆转MRP7介导的紫杉醇耐药", 《广东药学院学报》 *
黄海波等: "两种新型西地那非同系物对MCF-7/ADR细胞对阿霉素耐药的影响", 《肿瘤药学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022188491A1 (zh) * 2021-03-09 2022-09-15 广州白云山医药集团股份有限公司白云山制药总厂 一种肿瘤化疗药物组合物

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