CN113079984A - 水稻两系光温敏雄性核不育系原种生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种水稻两系光温敏雄性核不育系原种生产方法。通过该方法可提供一定数量的原种及原种的核心单株稻桩,保证原种生产的高纯度和可持续性繁殖。该原种生产通过低温筛选、多次花粉镜检并套袋自交考察、不同生态区表型鉴定、配合力测定、分子检测等方法相结合,达到农艺特征特性表型一致、不育起点温度合格和配合力正常的原种生产要求。通过早割茬留低茬,培育再生大穗和冷水灌溉获得较多的核心单株种子,并加代扩繁而获得较多的原种;通过海南和本地两个不同生态区,结合核心株系的筛选,初选、复选和决选核心单株,并割茬保存决选核心单株稻桩,保证原种繁殖高纯度的同时,也具有可持续性。
Description
技术领域
本发明涉及水稻繁育技术领域,尤其涉及一种水稻两系光温敏雄性核不育系原种生产方法。
背景技术
两系法育种,具有配组自由,一系两用等特点,能够较易配制出高产、高抗和优质等优良性状于一身的杂交组合,因而得到了大面积的推广利用。两系法育种是基于水稻光温敏核不育材料作为母本配制杂交水稻组合而利用水稻杂种优势,水稻光温敏核不育系具有育性转换的特性,在长日高温条件下雄性不育生产杂交种,短日低温条件下雄性可育繁殖自身。
目前两系杂交水稻制种存在一定风险,这种风险一方面主要来源于有些选育的水稻两系不育系育性起点偏高,另一方面是所用的制种母本即水稻光温敏核雄性不育系种子纯度降低。水稻生产上,往往因为水稻光温敏核雄性不育系原种数量较少,照成不育系多代繁殖后的种子在生产上应用,因此杂株、变异株和育性漂变造成的不育系起点温度偏高单株数量越来越多,使水稻光温敏核雄性不育系种子纯度降低,严重影响杂交水稻的制种安全。如将水稻两系光温敏核雄性不育系原种繁殖的第三代种子直接用于大田杂交制种的母本,减少繁殖代数,可一定程度上保证制种安全性。
水稻两系光温敏雄性核不育系原种指由其核心种子繁殖的不育系第二代种子,不育系核心种子是指经人工控制光温条件处理后筛选出的不育起点温度符合该不育系标准的标准单株自交结实的种子。不育系原种用于不育系大田用种的繁殖,因而保证不育系原种的生产数量至关重要。不育系原种生产方面涉及到标准单株、核心单株和核心株系选择技术和短日低温环境条件等,因而不育系原种生产具有一定难度。建立水稻光温敏核雄性不育系原种高效繁殖生产技术体系,对提高杂交水稻制种的安全性具有重要意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种水稻两系光温敏雄性核不育系原种生产方法。
为了解决上述技术问题,本发明采用的技术方案是,水稻两系光温敏雄性核不育系原种生产方法,包括以下步骤:
(1)第一年夏秋于本地,根据品种特性及地方气候特点选择水稻品种适时播种,且播期安排要保证该水稻品种前期抽穗割茬后,后期的光温条件能够满足该水稻品种再次安全抽穗并且自交结实;
(2)培育壮苗,严格按照规定的株行距进行移栽,种植群体适量;
(3)观察品种纯度,挑选多个标准单株,并编号;
(4)将选择的标准单株带土移入盆钵中,移钵时标准单株部分茎穗发育处于5~6期,移钵后立即进行长日低温处理;
(5)长日低温处理结束后,将有单穗正处于穗分化6期末的标准单株留下并标记该单穗,淘汰不符的标准单株;
(6)待标记单穗始穗后开始镜检标准单株花粉育性,每标准单株连续镜检3次,并套袋使镜检单穗自交;
(7)根据花粉镜检和套袋自交结实结果,淘汰育性变化株,保留育性符合要求的标准单株即为核心单株H0a;
(8)核心单株H0a及早割茬且保留为第一次稻桩,将第一次稻桩从盆钵移栽到大田使其再生,穗发育期用低于24℃的冷水灌溉,自然环境结实;核心单株H0a种子成熟后,收获核心单株H0a的种子为核心单株种子H1a,其编号与核心单株H0a编号相同,并割茬保留成为核心单株H0a的第二次稻桩;
(9)当年冬至第二年春于海南,将收获的核心单株种子H1a于11月中下旬在当地播种,种成核心株系,且选择表型特征相同的核心株系为海南初选核心株系;海南初选核心株系与其恢复系杂交,待杂交种成熟后收获杂交种子F1,以用于配合力测定;海南初选核心株系种子成熟后即收获初选核心株系的种子H2a;
(10)当年冬至第二年春于海南,将核心单株H0a的第二次稻桩移至海南当地大田再生培养,根据初选核心株系筛选结果,保留在海南经表型鉴定合格的初选核心单株H0a为初选核心单株H0b,并收获初选核心单株H0b的种子H1b;将收获种子后的初选核心单株H0b割茬,保留成为初选核心单株H0b的稻桩;
(11)第二年夏秋于本地,将海南收获的初选核心单株H0b的种子H1b正常播种并种成本地初选核心株系;用于配合力测定的杂交种子F1和初选核心株系的种子H2a在本地正季正常播种,种成表型鉴定圃;材料生长过程中,以表型特征及杂交种子F1配合力高低为筛选条件,选择表型特征相同且配合力正常的本地初选核心株系为复选核心株系;
(12)第二年夏秋于本地,将海南带回的初选核心单株H0b的稻桩在本地种植培育,选择与复选核心株系相同编号的初选核心单株H0b为复选核心单株H0c;分子检测复选核心单株H0c的基因一致性,并进一步对其长日低温处理,检测其不育起点温度,保留分子检测相同且不育起点温度合格的复选核心单株H0c为决选核心单株H0d;
(13)第二年夏秋于本地,对初选核心株系的种子H2a进行表型筛选和分子检测,并根据决选核心单株H0d的结果,淘汰不合格的种子,将合格种子混合保存,即为不育系原种;同时,决选核心单株H0d割茬且保留为核心单株H0d的稻桩,备用原种的可持续繁殖。
作为优选,在步骤(4)和(12)中,长日低温处理系利用人工气候室或自动控温冷水池设置合适的光温环境进行处理。
作为优选,在步骤(10)中,用于配合力测定的恢复系一般选择与不育系配组优势较强的恢复系。
作为优选,第一年本地和第二年本地均为中国的江淮地区。
作为优选,在步骤(14)中,决选核心单株稻桩再次用于繁殖时,或所有单株混合繁殖,或每份单株单独繁殖。
作为优选,表型特征为水稻生长期各种农艺特征特性,包括抽穗期、株高、株叶形态、颖花数、稃尖和柱头颜色等。
作为优选,分子检测系采用48对SSR标记进行检测。
本发明的原理为:
水稻光温敏核不育系对光温敏感,具有育性转换的特性,即在长日高温条件下雄性不育生产杂交种,短日低温条件下雄性可育繁殖自身,另外,在长日低温条件下,不育性会发生改变而自交结实,降低杂交种纯度。
水稻光温敏核不育系育性转换敏感期,据研究,籼型光温敏核不育水稻的育性转换敏感期一般在幼穗发育的Ⅳ-Ⅵ期,最敏感期为Ⅵ期,粳型光温敏核不育水稻的育性转换敏感期一般在Ⅲ-Ⅵ期,最敏感期为Ⅳ-Ⅵ期,有的籼型品种育性敏感期甚至提前到穗发育Ⅲ期。育性敏感期比较复杂,如何达到准确检测水稻光温敏核不育系不育稳定性是必须考虑的。
另外,水稻穗发育进程有一定相对稳定的形态和时间指标可依循,一般从穗发育至抽穗扬花约30天左右,幼穗分化5期即花粉母细胞形成期,俗称颖壳分,此时水稻株叶外观形态上表现为倒1叶与倒2叶的叶耳相差-8cm左右,第6期即花粉母细胞减数分裂期,此时水稻株叶外观形态上表现为倒1叶与倒2叶的叶耳对齐或相差±1cm左右,即俗称叶枕平时期,这两个时期都不需要剥蘖,直接从水稻的外观上可观察到,水稻穗分化发育进程具体的形态和时间指标见表1。
表1水稻穗分化发育进程判断方法
原种生产的核心重点是种子纯度,种子纯度检验的方法目前被广范运用的主要有田间种植鉴定和SSR分子标记鉴定。其中,田间鉴定是目前运用最广、最有效、最准确的检验方法。田间鉴定主要通过海南或正季种植,在抽穗前及齐穗后多次进行观察记载,比较各单株间的植物学特征,通过品种的农艺特征特性鉴别。不同品种或品系间存在大量的DNA序列差异,其中微卫星序列广泛分布在每条染色体上,SSR分子标记鉴定种子纯度正是利用这种DNA序列的差异达到检测的目的。此外,SSR标记具有成本低、数量丰富、结果稳定、试验周期短等特点,因而SSR分子标记检测技术被广泛应用于种子的纯度鉴定。此外,在作物杂种优势利用研究中,杂种优势的大小往往取决于亲本的配合力。不育系的配合力高低直接影响组合选配的效果。
本发明基于以上原理,创造了一套生产不育系原种的方法。本发明通过多种方法相结合筛选不育系核心单株和鉴别原种种子,以达到高纯度高效可持续生产不育系原种的目的。本发明要求长日低温处理的标准单株主茎穗发育处于5~6期,且在低温处理结束后,每单株连续镜检3次并套袋,如此扩大了检测的穗发育范围,尽可能保证准确检测光温敏核不育水稻育性(表1)。本发明要求分子检测是在本地正季,复选株系确定后开展复选核心单株和原种种子的SSR分子标记鉴定,进一步从分子水平保证决选核心单株和原种种子的纯度。
安徽合肥地处我国的江淮地区,根据该地近31年的气候数据显示,8月下旬以后气温条件会降低,日长也能满足小于13小时的短日照要求。为了尽可能满足水稻光温敏核不育系短日低温繁殖条件,水稻光温敏核不育系繁殖生产穗发育育性敏感期时间应安排8月底左右,相应的始穗期在9月上中旬。始穗时间早于8月20日,则可能高温不利于自交结实,始穗时间迟于9月15日,则可能低温照成生理不育而不结实。因此,本发明要求早割茬,最好8月15日前割茬,同时割茬移栽时采用施足底肥和分蘖肥,延长其营养生长期,增加分蘖,培育大穗,并结合冷水灌溉的方法创造低温条件使其自交结实。
本发明的有益效果是:
(1)种子纯度高。主要通过以下措施确保种子纯度。首先,严格栽插,尽可能规避环境对表型特征的影响,提高了标准单株和核心株系表型筛选的准确性;其次,对核心单株在前期和后期进行2次长日低温筛选,且每份核心单株通过连续3次的花粉镜检,结合套袋自交结实考察,扩大了低温对穗发育不同育性敏感期时期的考察,使育性合格的核心单株的筛选更加准确,从而保证了种子纯度;另外,通过海南和本地两个不同生态区,进行核心株系表型鉴定,同时,进行核心株系配合力测定,淘汰配合力低的核心株系;此外,分子检测决选核心单株和原种的种子,进一步保证了种子纯度。
(2)种子数量较多。通过核心单株早割茬,留低茬,大田培养稻茬,施足底肥和分蘖肥,培育再生大穗,结合冷水灌溉法获得较多不育系核心单株种子。较多的不育系核心单株种子在海南加代繁殖,获得较多的不育系原种。
(3)原种繁殖具有可持续性。在获得一定量的原种种子的同时,对核心单株不断割茬再生,与原种一道进行初选、复选和决选,保证了原种纯度的同时,也保证了原种核心单株的种性,决选核心单株割茬并保存稻桩,可用于原种以后的持续高效繁殖。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
图1是本发明实施例的育种路线示意图。
具体实施方式
一种水稻两系光温敏雄性核不育系原种生产方法,图1是该方法的育种路线图,具体包括以下步骤:
(1)将待处理水稻光温敏核不育系1892S、PA64S,于合肥地区(以下称为本地)4月25日、5月6日播种。
(2)材料种子均匀稀播于秧田,秧龄5~6叶时移栽于大田,每期种植200株,株行距19.8cm*19.8cm。
(3)7月7日,根据株型,挑选主茎穗发育在5期左右的标准单株90株,编号并带土移入盆钵中生长。
(4)挑选的标准单株当日即放于冷水池中开始处理,长日(日长大于14小时)23.5℃冷水处理6天,保持穗发育生长点始终在水面以下,7月13日处理结束。
(5)冷水低温处理结束后,有单穗正处于穗分化6期末的标准单株留下并标记该单穗。标记单穗始穗后开始镜检花粉育性,用1%的碘-碘化钾溶液染色镜检,每标准单株连续镜检3次,并套袋使镜检单穗自交;
(6)淘汰发育不正常的单株,淘汰可染花粉较多和自交结实的育性变化株,分别保留标准单株40株和45株,即核心单株H0a。
(7)8月14日,核心单株H0a割茬且保留为第一次稻桩,留茬高度约5cm~10cm。将核心单株H0a的第一次稻桩移栽到已提前7天施足底肥的大田生长,按每亩复合肥50公斤施用。移栽7天后,按每亩10公斤,施尿素作为分蘖肥,同时冷水灌溉。
(8)种子成熟后,收获核心单株H0a的种子H1a,每单株收获100粒种子以上,其编号与核心单株H0a编号相同,并割茬保留成为核心单株H0a的第二次稻桩。
(9)将核心单株H0a的种子H1a在当年冬季海南种植成核心株系,选择表型特征相同的核心株系为海南初选核心株系,经配合力测定及加代扩繁,海南初选核心株系种子成熟后,收获初选核心株系的种子H2a。
(10)当年冬海南,核心单株H0a的第二次稻桩大田再生培养,种子成熟后,根据海南初选核心株系的筛选结果,保留在海南经表型鉴定合格的初选核心单株H0a为初选核心单株H0b,并收获初选核心单株H0b的种子H1b,未选中的核心单株淘汰;收获种子后,再次割茬选中的初选核心单株H0b,保留其稻桩为初选核心单株H0b的稻桩。
(11)第二年夏秋本地,将种子H1b和用于配合力测定的杂交种子F1在本地正季正常播种,种成本地初选核心株系,选择表型相同且配合力正常的本地初选核心株系为复选核心株系。
(12)第二年夏秋,在本地种植培育海南带回的初选核心单株H0b稻桩,选择与复选核心株系相同编号的初选核心单株H0b为复选核心单株H0c,分子检测复选核心单株H0c的基因一致性,并进一步对其长日低温处理,检测其不育起点温度,保留分子检测相同且不育起点温度合格的复选核心单株H0c为决选核心单株H0d。
(13)第二年夏秋于本地,对初选核心株系的种子H2a进行表型筛选和分子检测,并根据决选核心单株H0d的结果,淘汰不合格的种子,将合格种子混合保存,即为不育系原种;同时,决选核心单株H0d割茬且保留为核心单株H0d的稻桩,备用原种的可持续繁殖。
通过上述方法获得光温敏核不育水稻1892S、PA64S的不育系原种各为5公斤左右,原种稻桩为30株和25株。
本实施例具有以下技术特点:
1、种子纯度高。田间表型鉴定为主,室内分子鉴定为辅。通过严格栽插和隔离,尽可能规避环境对材料表型鉴定的影响;前后设置2次低温处理筛选核心单株的起点温度;通过核心株系配合力测定,淘汰配合力低的核心株系;海南和合肥两个不同生态区田间进一步筛选和决选核心株系;分子检测核心单株和原种种子纯度。
2、核心单株筛选条件严格。23.5℃冷水处理6天,花粉镜检和套袋自交结实结果相结合,花粉镜检和套袋自交延续时间长,使单株穗发育3期~6期经过低温处理的结果几乎都能检测到。
4、保证核心单株种子H1种子数。生产材料早播种早处理早割茬,留低茬,并将稻茬移栽于大田培养,移栽时施足底肥和分蘖肥,培育再生大穗,结合冷水灌溉法获得不育系核心种子H1a计100粒以上。
5、不育系原种数量较多。较多的不育系核心种子海南繁殖,获得较多的不育系原种。保留决选核心单株的稻桩,可不断生产核心单株种子,因此可根据需要不断生产不育系原种。
以上所述的本发明实施方式,并不构成对本发明保护范围的限定。任何在本发明的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的权利要求保护范围之内。
Claims (7)
1.水稻两系光温敏雄性核不育系原种生产方法,包括以下步骤:
(1)第一年夏秋于本地,根据品种特性及地方气候特点选择水稻品种适时播种,且播期安排要保证该水稻品种前期抽穗割茬后,后期的光温条件能够满足该水稻品种再次安全抽穗并且自交结实;
(2)培育壮苗,严格按照规定的株行距进行移栽,种植群体适量;
(3)观察品种纯度,挑选多个标准单株,并编号;
(4)将选择的标准单株带土移入盆钵中,移钵时标准单株部分茎穗发育处于5~6期,移钵后立即进行长日低温处理;
(5)长日低温处理结束后,将有单穗正处于穗分化6期末的标准单株留下并标记该单穗,淘汰不符的标准单株;
(6)待标记单穗始穗后开始镜检标准单株花粉育性,每标准单株连续镜检3次,并套袋使镜检单穗自交;
(7)根据花粉镜检和套袋自交结实结果,淘汰育性变化株,保留育性符合要求的标准单株即为核心单株H0a;
(8)核心单株H0a及早割茬且保留为第一次稻桩,将第一次稻桩从盆钵移栽到大田使其再生,穗发育期用低于24℃的冷水灌溉,自然环境结实;核心单株H0a种子成熟后,收获核心单株H0a的种子为核心单株种子H1a,其编号与核心单株H0a编号相同,并割茬保留成为核心单株H0a的第二次稻桩;
(9)当年冬至第二年春于海南,将收获的核心单株种子H1a于11月中下旬在当地播种,种成核心株系,且选择表型特征相同的核心株系为海南初选核心株系;海南初选核心株系与其恢复系杂交,待杂交种成熟后收获杂交种子F1,以用于配合力测定;海南初选核心株系种子成熟后即收获初选核心株系的种子H2a;
(10)当年冬至第二年春于海南,将核心单株H0a的第二次稻桩移至海南当地大田再生培养,根据初选核心株系筛选结果,保留在海南经表型鉴定合格的初选核心单株H0a为初选核心单株H0b,并收获初选核心单株H0b的种子H1b;将收获种子后的初选核心单株H0b割茬,保留成为初选核心单株H0b的稻桩;
(11)第二年夏秋于本地,将海南收获的初选核心单株H0b的种子H1b正常播种并种成本地初选核心株系;用于配合力测定的杂交种子F1和初选核心株系的种子H2a在本地正季正常播种,种成表型鉴定圃;材料生长过程中,以表型特征及杂交种子F1配合力高低为筛选条件,选择表型特征相同且配合力正常的本地初选核心株系为复选核心株系;
(12)第二年夏秋于本地,将海南带回的初选核心单株H0b的稻桩在本地种植培育,选择与复选核心株系相同编号的初选核心单株H0b为复选核心单株H0c;分子检测复选核心单株H0c的基因一致性,并进一步对其长日低温处理,检测其不育起点温度,保留分子检测相同且不育起点温度合格的复选核心单株H0c为决选核心单株H0d;
(13)第二年夏秋于本地,对初选核心株系的种子H2a进行表型筛选和分子检测,并根据决选核心单株H0d的结果,淘汰不合格的种子,将合格种子混合保存,即为不育系原种;同时,决选核心单株H0d割茬且保留为核心单株H0d的稻桩,备用原种的可持续繁殖。
2.根据权利要求1所述的生产方法,其特征在于,在步骤(4)和(12)中,长日低温处理系利用人工气候室或自动控温冷水池设置合适的光温环境进行处理。
3.根据权利要求1所述的生产方法,其特征在于,在步骤(10)中,用于配合力测定的恢复系一般选择与不育系相配组优势较强的恢复系。
4.根据权利要求1所述的生产方法,其特征在于,所述第一年本地和第二年本地均为中国的江淮地区。
5.根据权利要求1所述的生产方法,其特征在于,在步骤(14)中,决选核心单株稻桩再次用于繁殖时,或所有单株混合繁殖,或每份单株单独繁殖。
6.根据权利要求1所述的生产方法,其特征在于,所述表型特征为水稻生长期各种农艺特征特性,包括抽穗期、株高、株叶形态、颖花数、稃尖和柱头颜色等。
7.根据权利要求1所述的生产方法,其特征在于,所述分子检测系采用48对SSR标记进行检测。
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