CN113045646A - 抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体 - Google Patents

Abstract

本发明涉及抗新型冠状病毒SARS‑CoV‑2的抗体。本发明提供抗新型冠状病毒SARS‑CoV‑2抗体或其抗原结合片段，所述抗体包含SEQ ID NO:1‑3所示的氨基酸序列或其变体的重链CDRs，SEQ ID NO:4‑6所示的氨基酸序列或其变体的轻链CDRs。本发明提供所述抗体的用途以及制备所述抗体的方法。

Description

抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及抗新型冠状病毒抗体、其用途以及制备方法。具体而言，本发明涉及新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体，其用于检测或诊断新冠肺炎 的用途，以及制备所述抗体的方法。

背景技术

新型冠状病毒命名为“SARS-CoV-2”，其引起的肺炎，命名为COVID-19，该病毒 传染性强，潜伏周期长，为了进一步控制疫情的扩散，一种能够快速对大面积人群进 行筛查，同时能够在开放环境下或者现场应用的针对新型冠状病毒的诊断产品非常急 需。

目前主要使用的检测手段为核酸检测和抗原检测的方法。随着疫情的持续核酸试剂检测环境要求高和抗原检测试剂准确性低的限制逐渐凸显出来，而免疫抗体检测试 剂(胶体金、荧光快诊、Elisa、化学发光等试剂)因其准确率高、操作简单、环境要 求低、检测效率高的特点，成为诊断技术下一步开发的重点。但抗体检测试剂的开发 是基于已开发出新冠检测用抗体的基础上进行的，没有核心原料就无法开发抗体免疫 试剂。

目前针对SARS-CoV-2免疫类的产品已陆续上市，其中绝大部分产品是在胶体金免疫层析法的基础上开发检测人体血液中新型冠状病毒的IgG和IgM，由于病毒感染 后需要4～10天后IgM才能达到高峰期，1～2个月IgG到达高峰期，胶体金方法的最 大的局限性就是灵敏度低，对于病毒感染初期，无病症或轻症患者的漏检率非常高， 因此不利于SARS-CoV-2早期感染病例的筛查。

在检测方法上，针对诸如新型冠状病毒之类的上呼吸道感染，2016年，美国儿科学会及CDC已经把抗原检测列为最推荐的病毒性感染的首选方法，是考虑到抗原检测 的普适性、成本低廉、操作简单、便携和快速。在SARS-CoV-2感染早期体内快速免疫 反应产生IgM，证明体内病毒正在快速大量复制，但IgM到达高峰维持时间短并且很 快就消失，这时体内开始产生相应的IgG，但已经到了感染的中后期或者感染的恢复期， 因此，SARS-CoV-2检测应采用抗原和抗体联合检测，对病毒感染的全过程进行监测和 排查，目的是为了提高患者筛查的检出率和准确性。

由于SARS-CoV-2为新发病毒，市场上针对该病毒的特异性抗体很少，市场在 售产品基本为SARS或其他相关冠状病毒抗体如Meridian，biorbyt公司产品。现有的 针对SARS-CoV-2的抗体灵敏度、特异性上都还不够理想，可选择性的不多，因此市 面上对于高活性、高亲和力的特异性SARS-CoV-2单克隆抗体具有强烈的需求。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明提供抗新型冠状病毒SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段。本发明还提供所述抗体的制备方法、包含所述抗体的抗体偶联物、融合蛋白和试剂盒/诊断剂，以及 所述抗体用于诊断新型冠状病毒感染的用途。

在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含下述氨基酸序列或与其具有至少80％序列同一性(例如至少81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％， 89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或更高序列同一 性)的互补决定区：

重链CDR1，其包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列F-L-T-I-T-F-Y-Y-M-N，或 由其组成；重链CDR2，其包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列 G-F-N-P-I-V-G-G-T-S-Y-P-Q-K-F，或由其组成；重链CDR3，其包含SEQ ID NO:3所 示的氨基酸序列T-K-G-A-E-R-Y，或由其组成；

并且所述抗体或其抗原结合片段还包含：

轻链CDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列 T-Q-S-Q-Y-S-N-G-K-I-Y-L-N，或由其组成；轻链CDR2，其包含SEQ ID NO:5所示的 氨基酸序列V-Q-F-S-K-I-V-P，或由其组成；和轻链CDR3，其包含SEQ ID NO:6所 示的序列L-Q-N-T-Y-Q-P-Y-T，或由其组成。

在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含：

(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：

SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，或

与SEQ ID NO:7所示的序列具有至少80％，85％，90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或

与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、 7、8、9或10个)氨基酸突变(优选保守突变，优选置换，插入或缺失)的氨基酸序 列，和

(II)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：

SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，或

与SEQ ID NO:9所示的序列具有至少80％，85％，90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或

与SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、 7、8、9或10个)氨基酸突变(优选保守突变，优选置换，插入或缺失)的氨基酸序 列。

在一些实施方案中，本发明所述抗体以10^-8M或更小的KD结合COVID-19蛋白。

在一些实施方案中，本发明所述抗体以小于大约100nM，例如小于大约10nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM 或更小的EC50结合SARS-CoV-2蛋白。

在一些实施方案中，本发明所述抗体的抗原结合片段可以包括Fab，Fab'，F(ab')₂， Fd，Fv，互补决定区(CDR)片段，单链抗体(例如，scFv)，双价抗体或结构域抗体。

在一些实施方案中，本发明提供分离的多核苷酸，其编码本发明的抗体或其抗原结合片段或分离的多肽。

在一些实施方案中，本发明提供载体，其包含本文描述的分离的多核苷酸。

在一些实施方案中，本发明提供宿主细胞，其包含本文描述的分离的多核苷酸或载体。

在一些实施方案中，本发明提供制备本文描述的抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括培养本文描述的宿主细胞。

在一些实施方案中，本发明提供抗体偶联物，其包含本文描述的抗体或其抗原结合片段以及与其偶联的偶联部分，优选地，所述偶联部分包括选自纯化标签(如His 标签)，可检测的标记，例如胶体金、放射性标记、发光物质、有色物质、酶，例如荧 光标记，发色团标记，电子致密标记，例如放射性同位素，荧光团，罗丹明及其衍生 物，荧光素酶，荧光素，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶， 溶菌酶，糖类氧化酶，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物 素/抗生物素蛋白，自旋标记。

在一些实施方案中，本发明提供试剂盒或诊断试剂，其包括本文描述的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物或融合蛋白，其中：

1)优选地，所述试剂盒还包含另一种结合SARS-CoV-2的冠状病毒抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白；

2)优选地，所述试剂盒还包括另外一种或多种抗体，其特异性识别本文描述的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白；和/或特异性识别结合除SARS-CoV-2 以外的其他冠状病毒的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白，任选地， 所述另外一种或多种抗体还包括可检测的标记，例如胶体金、放射性标记、发光物质、 有色物质、酶，例如荧光标记，发色团标记，电子致密标记，例如放射性同位素，荧 光团，罗丹明及其衍生物，荧光素酶，荧光素，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半 乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡 萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记；

3)任选地，所述试剂盒为快速诊断(POCT)试剂盒，例如应用薄膜免疫层析的试 剂盒，例如采用胶体金法的薄膜免疫层析的试剂盒，例如包含固相支持物如膜支持物， 将结合新型冠状病毒的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白以及任选的 对照抗体固定到所述固相支持物；

4)任选地，所述试剂盒为酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒。

在一些实施方案中，本发明提供本文描述的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白在制备试剂盒或诊断剂中的用途，所述试剂盒用于1)检测SARS-CoV-2在 样品中的存在或其水平，2)诊断新型冠状病毒感染，和/或3)鉴别诊断新型冠状病毒 感染与其他冠状病毒感染。

在一些实施方案中，所述样品的来源没有特别限制，例如可以包括组织、细胞或流体样品，例如体液的样品，例如鼻咽样品、尿液、唾液、粪便、血液样品。为了避 免传统杂交瘤技术的不足之处，本发明提供一种抗新型冠状病毒SARS-CoV-2单克隆 抗体的表达载体，提供了一种抗新型冠状病毒SARS-CoV-2单克隆抗体序列，用于通 过重组技术表达抗新型冠状病毒SARS-CoV-2单克隆抗体，用于新冠肺炎的诊断。

在一些实施方案中，本发明包括以下一个或多个方面：

1)抗原免疫

2)杂交瘤细胞株制备；

3)抗SARS-CoV-2单克隆抗体基因的克隆；

4)抗SARS-CoV-2单克隆抗体表达载体的构建；

5)针对步骤4)的表达载体，采用表达系统如真核表达系统如CHO真核表达系 统获得Anti-SARS-CoV-2单克隆抗体；

6)针对步骤5)，对Anti-SARS-CoV-2单克隆抗体进行活性鉴定及亲和力分析。

7)基于本专利单克隆抗体的诊断试剂盒制备

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明，所描述的各个具体实施方式不是限制性的，并且可以相互组合。

术语“氨基酸”表示天然存在或非天然存在的羧基α-氨基酸。术语“氨基酸”用在本申请中可以包括天然存在的氨基酸和非天然存在的氨基酸。天然存在的氨基酸包括丙 氨酸(三字母密码:Ala，单字母密码:A)，精氨酸(Arg，R)，天冬酰胺(Asn，N)，天冬 氨酸(Asp，D)，半胱氨酸(Cys，C)，谷氨酰胺(Gln，Q)，谷氨酸(Glu，E)，甘氨酸 (Gly，G)，组氨酸(His，H)，异亮氨酸(Ile，I)，亮氨酸(Leu，L)，赖氨酸(Lys，K)， 甲硫氨酸(Met，M)，苯丙氨酸(Phe，F)，脯氨酸(Pro，P)，丝氨酸(Ser，S)，苏氨酸 (Thr，T)，色氨酸(Trp，W)，酪氨酸(Tyr，Y)，和缬氨酸(Val，V)。非天然存在的氨 基酸包括但不限于α-氨基己二酸，氨基丁酸，瓜氨酸，高瓜氨酸，高亮氨酸，高精氨 酸，羟基脯氨酸，正亮氨酸，吡啶基丙氨酸，肌氨酸等等。

在本文中，肽、多肽、蛋白质不作严格区分，在一些情形中可以相互替代使用， 一般指通过肽键连接的氨基酸组成的聚合物，不管是天然产生的还是合成的。多肽也 可以包含非氨基酸成分，如碳水化合物基团、金属离子或羧酸酯。非氨基酸成分可以 是由表达所述多肽的细胞所加入的，并且可以随细胞类型而不同。多肽在本文中关于 其氨基酸骨架结构或编码其的核酸而限定。如碳水化合物基团的添加通常没有规定， 但是，是可以存在的。所有的多肽序列按照通常接受的惯例书写，其中α-N-端氨基酸 残基在左侧，且α-C-端氨基酸残基在右侧。当用于本文时，术语“N-端”是指多肽中氨 基酸的游离的α-氨基基团，术语“C-端”是指多肽中氨基酸的游离的α-羧酸端。在N- 端以某基团结束的多肽是指在N-端氨基酸残基的α-氨基氮上携带基团的多肽。在N- 端以某基团结束的氨基酸是指在α-氨基氮上携带基团的氨基酸。

在一些实施方案中，本发明包括含有编码抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体或其片段的核酸序列。在本文中，核酸序列包含其保守置换的变体(例如简并密码子的 置换)和互补序列。术语“核酸”和“多核苷酸”是同义的，包含基因、cDNA分子、mRNA 分子以及它们的片段例如寡核苷酸。

在一些实施方案中，本发明包括含有编码抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体或其片段的核酸序列的表达载体，其中的核酸序列与至少一种调节序列可操作连接。“可 操作连接”指的是编码序列以允许编码序列的表达的方式与调节序列连接。调节序列选 择用来在合适的宿主细胞中指导目的蛋白质的表达，包含启动子、增强子和其它的表 达调控元件。

在本文中，载体包括含有本发明的核酸或其片段的、能够携带遗传信息并且可以将遗传信息递送到细胞中的分子或试剂。典型的载体包括质粒、病毒、噬菌体、黏粒 和微型染色体。载体可以是克隆载体(即用于将遗传信息转移到细胞中的载体，可以繁 殖所述细胞并且可以选择存在或不存在所述遗传信息的所述细胞)或表达载体(即包含 必要的遗传元件从而允许所述载体的遗传信息在细胞中表达的载体)。因此，克隆载体 可以包含选择标记，以及与所述克隆载体所指定的细胞类型相匹配的复制起点，而表 达载体则包含对于影响指定靶细胞中的表达必要的调节元件。

在一些实施方案中，本发明提供了抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体、抗原结 合片段、变体和功能衍生物的制备方法。在一些实施方案中，通过重组技术表达抗新 型冠状病毒SARS-CoV-2单克隆抗体。在一些实施方案中，用编码抗新型冠状病毒 SARS-CoV-2抗体的核酸载体转染宿主细胞，在合适的条件下培养该宿主细胞使其表 达抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体。宿主细胞也可以用一个或多个表达载体转染， 该表达载体可以单独或结合地包含编码至少一部分抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗 体的DNA。在一些实施方案中，当重组制备本发明的抗体时，所述表达产物可以输出 到培养基中或携带在所述转化细胞的表面。利用常规的纯化蛋白质和肽的技术可从培 养基或细胞裂解物中分离抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体，所述技术包括硫酸铵 沉淀，层析(如离子交换，凝胶过滤，亲合层析等)和/或电泳。在一些实施方案中， 用于制备抗体的免疫原可以含有完整的新型冠状病毒SARS-CoV-2，或其片段或衍生 物。优选的免疫原含有全部或部分的新型冠状病毒SARS-CoV-2。

在一些实施方案中，本文描述的抗体如抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体可以用于检测一种或多种靶分子如SARS-CoV-2在生物样品中的存在。术语“检测”用于本 文中时，包括定量或定性检测。在一些实施方案中，生物样品包含细胞或组织。

在一些实施方案中，提供用于诊断或检测方法，所述方法包括将生物样品与本文描述的抗体如抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体在允许所述抗体与靶标结合的条件 下接触，并检测在所述抗体与靶标之间是否形成复合物。在一些实施方案中，该方法 可以是体外或体内方法。本发明还涉及对可能感染新型冠状病毒的受试者进行新冠肺 炎诊断的方法，其包含将来自所述受试者的生物学样品与本发明的抗体相接触，所述 接触在能够使得所述抗体与可能存在于所述生物学样品中靶标形成抗原/抗体复合物 的条件下进行，并检测可能形成的抗原/抗体复合物。在该方法中，可通过ELISA分析 进行体外诊断。在一些实施方案中，本发明的方法还可以包括将所述生物学样品与诊 断其他新型冠状病毒的一种或多种抗体相接触。

在一些实施方案中，提供标记的抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体。在一些实 施方案中，标记包括但不限于荧光标记，发色团标记，电子致密标记，化学发光标记， 和放射性标记，以及间接标记如酶或配体，例如，通过酶促反应或分子相互作用来间 接检测。在一些实施方案中，示例性标记包括但不限于放射性同位素，荧光团，罗丹 明及其衍生物，荧光素酶，荧光素，辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷 酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，例如，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡 萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记，噬菌体标记等等。

在一些实施方案中，本发明的抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体或其片段可用作SARS-CoV-2抗体检测的免疫测定和相应试剂盒中。在一些实施方案中，本发明的 免疫测定包括ELISA，间接免疫荧光测定IFA，还包括放射免疫测定RIA以及其它非 酶联抗体结合试验或方法。

在一些实施方案中，例如在ELISA双抗体夹心实验方案中，可以将SARS-CoV-2 抗体包被微量反应板，捕获样品中的SARS-CoV-2抗原，然后用标记的抗体与结合在 反应板上的抗原再次结合，经显色后读取结果。在一些实施方案中，本发明的 SARS-CoV-2抗体可以用于包被微量反应板或用作标记的第二抗体。在一些实施方案 中，抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体或其片段固定到一个表面上，例如固相支持 物上，例如塑料、膜如硝酸纤维素膜、玻璃或金属支持物。在一些实施方案中，所述 固相支持物可以制成条形或者卡片状。在一些实施方案中，来自受试者的样品与所述 固相支持物接触，然后接触带有可检测标记如罗丹明标记的抗体指示剂显色。在一些 实施方案中，可以采用封闭剂如牛血清白蛋白、奶粉溶液、明胶、PVP、Superblock 封闭非特异性位点，因此減少非特异性结合造成的背景。在一些实施方案中，可以采 用稀释剂，如应用BSA和磷酸缓冲盐液(PBS)/吐温稀释抗血清，有助于减少非特异 性背景。

在一些实施方案中，本文涉及用于确定SARS-CoV-2抗原存在或定量的方法。在 一些实施方案中，所述方法包括将可能包含SARS-CoV-2抗原的生物样品与本发明的 抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体接触，并且定量或定性确定所述至少一种抗新型 冠状病毒SARS-CoV-2的抗体与所述样品中的抗原之间的结合。所述方法可以采用任 何形式，并且可以例如非竞争性或竞争性的ELISA、RIA或磁性免疫测定、凝集测定 和基于表面等离子共振的测定如Biacore测定。

在本文中，生物样品可以指处于健康和/或病理状态的生物组织、细胞或流体如体液的样品。在一些实施方案中，所述生物样品来自怀疑感染新冠肺炎的受试者。在一 些实施方案中，所述生物样品可以是体液样品，如鼻咽样品、尿液、唾液、粪便、血 液等样品。

在一些实施方案中，本文提供测试或诊断装置或相关试剂盒，其可以包括：

(i)能够结合SARS-CoV-2抗原的抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体；和

(II)当所述抗原结合所述抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体时指示的指示剂。

在一些实施方案中，试剂盒还可以包括除本发明的抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体外针对新型冠状病毒其他抗原的抗体，例如用于鉴别不同新型冠状病毒感染。

在一些实施方案中，所述试剂盒可以包括测试条或测试卡，来自于所述受试者的所述液体样品放置到所述测试条上，或者ELISA测定板，所述ELISA测定板具有其 中可放置来自于单个受试者的液体样品的孔。在一些实施方案中，所述试剂盒可以包 括配置用于流式细胞仪、生物分析仪、生物传感器中的测试装置。

在一些实施方案中，所述试剂盒为快速诊断(POCT)试剂盒，例如应用薄膜免疫层析的试剂盒，例如采用胶体金法的薄膜免疫层析的试剂盒，例如包含固相支持物如膜 支持物，将结合新型冠状病毒的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白以 及任选的对照抗体固定到所述固相支持物。在一些实施方案中，所述试剂盒如快速诊 断(POCT)试剂盒可以包括测试条或测试卡，所述测试条或测试卡可以包括样品垫、与 所述样品垫邻接的含有新型冠状病毒抗体(可以包括一种或多种抗体，如本文描述的 抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体和针对新型冠状病毒其他抗原的抗体，所述抗体 可以具有可检测标记如胶体金)的标记垫、与标记垫邻接的膜如纤维素膜和邻接的吸 水垫。在一些实施方案中，所述膜上可以设置相互分离的检测线和质控线，所述检测 线含有与标记抗体结合不同表位的新型冠状病毒特异性抗体，所述质控线可以含有能 与所述标记抗体特异性结合的抗体。在一些实施方案中，测试条或测试卡可以包括支 持物、样品垫、标记垫、膜如硝酸纤维素膜、吸收垫、一条或多条检测线、及质控线， 所述样品垫、所述标记垫、所述硝酸纤维素膜及所述吸收垫从所述支持物的一端向另 一端依次设置，所述样品垫与所述标记垫部分重叠，所述标记垫与所述硝酸纤维素膜 部分重叠，所述硝酸纤维素膜与所述吸收垫部分重叠，所述一条或多条检测线和所述 质控线分别间隔设在所述硝酸纤维素膜上，所述标记垫上可以包被有可检测标记如胶 体金标记的新型冠状病毒抗体，所述一条或多条检测线可以含有与标记抗体结合不同 表位的新型冠状病毒特异性抗体，所述质控线可以含有能与所述标记抗体特异性结合 的抗体。

在一些实施方案中，本发明提供一种试剂盒，其包含可用于诊断新型冠状病毒感染的材料。在一些实施方案中，该试剂盒包括容器和在容器上或与容器一起的标签或 包装说明书。在一些实施方案中，适合的容器包括，例如，瓶子、小瓶、注射器等。 所述容器可以由各种材料如玻璃或塑料制成。容器装有组合物，所述组合物是单独地 或与可有效用于诊断新型冠状病毒感染的另一种组合物结合。组合物中至少一种活性 试剂是本文的抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体。此外，所述试剂盒可以包含：(a) 其中包含组合物的第一容器，其中所述组合物包含本文的抗新型冠状病毒SARS-CoV-2 的抗体；和(b)其中包含组合物的第二容器，其中所述组合物包含第二抗体和/或其它相 关试剂。在一些实施方案中，试剂盒中可以包括除本发明的抗新型冠状病毒 SARS-CoV-2的抗体外针对新冠肺炎其他抗原的抗体，例如用于鉴别不同新型冠状病 毒感染。本发明的试剂盒还可以包括包装说明书，所述包装说明书指明所述组合物可 以用于诊断所述疾病或感染。所述试剂盒还可以包括第二或第三容器，所述第二或第 三容器包含缓冲剂，如注射用水，磷酸盐缓冲盐水，葡萄糖溶液，还可以包括其他材 料，如其他缓冲剂、稀释剂、滤器、针头和注射器。

在一些实施方案中，本文提供包括所述抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体的试剂盒，如微量滴定板(其上可以包被有所述抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体)。在 一些实施方案中，微量滴定板可以包含滴定孔如聚苯乙烯微量滴定孔，这些加样孔包 被抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体、或新型冠状病毒感染的完整细跑、或其细胞 裂解物。

在一些实施方案中，本文提供用于确定例如感染新型冠状病毒的受试者的试剂盒， 所述试剂盒包含至少一种本发明的抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体，相关的缓冲剂，用于使液体样品与所述抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体反应所需的试剂，以 及用于确定抗体和所述抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体之间存在阳性或阴性结合 反应的试剂。这种试剂盒可以包括用于分离和/或储存液体样品的容器，用于使所述抗 新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体与样品接触的容器和试剂，以及用于确定抗新型冠 状病毒SARS-CoV-2的抗体与样品中的成分之间的结合存在的试剂。为了确定抗体的 存在，所述试剂盒可以例如利用带有第二标记的抗体或抗原(双抗原夹心法)，其中所 述标记可以是任何合适的标记，如荧光或放射性标记、酶标记或结合标记，如用于结 合链霉亲和素的生物素标记。在试剂盒中，抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体可以 与固体支持物结合，或者所述试剂盒至少可以包括适于结合所述抗新型冠状病毒 SARS-CoV-2的抗体的固体支持物。

在一些实施方案中，试剂盒包括一种容器，其中包括定量的第二抗体，如偶联碱性磷酸酶的第二抗体，以及第二个容器，其中包括一定量的缓冲液。在其它实施方案 中，试剂盒可进一步包括第三个容器，它包括适当的底物，如用于碱性磷酸酶的PNPP， 或用于过氧化物酶的底物。第四个容器可以包括一种适当的“终止”缓冲剂。

实施例

1.抗原免疫

将重组新型冠状病毒SARS-COV-2抗原(NCBI参考ID：43740568)与弗氏完全佐 剂(外观：琥珀色细胞悬浮液；组份：Paraffin Oil 85％，Mannide Monooleate 15％，Mycobacterium smegmatis 1mg/mL)混合，得到油状乳液。将该乳液以0.15mL的剂量皮 下注射BALB/c小鼠，第一次免疫14天后腹腔增强免疫(等量抗原与弗氏不完全佐剂 混合)，增强免疫到四针后，采尾血进行效价检测，效价达到融合要求。

融合前3天，用相同剂量抗原腹腔注射追加免疫，免疫方法同上。

2.杂交瘤细胞株的制备

(1)饲养细胞的制备

以BALB/c鼠腹腔巨噬细胞作饲养细胞。在融合前1天，BALB/c鼠拉颈处死，75％ 酒精全身浸泡，超净台内，无菌操作下用剪刀剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用注射器腹 腔注入RPMI 1640基础培养液5mL，反复冲洗，回收冲洗液，1000rpm，离心5分钟， 留沉淀，用RPMI1640筛选培养液(含HAT的RPMI 1640完全培养液中)重悬，调整细 胞浓度1×10⁵个/mL，加入96孔板，150μL/孔，37℃，5％CO2培养过夜。

(2)免疫脾细胞的制备

小鼠末次免疫后三天，在无菌条件下取出脾脏，置于平皿中，RPMI 1640基础培 养液冲洗一次，放于小烧杯的尼龙网上磨碎过滤，制成细胞悬液。离心，弃上清，RPMI 1640基础培养液重悬，如此重复三次，得到免疫脾细胞，计数。

(3)骨髓瘤细胞的制备

小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0经8-氮鸟嘌呤筛选后，培养至对数生长期，取两大瓶制成细胞悬液，离心，弃上清，用RPMI 1640基础培养液重悬，如些重复三次，得到骨髓 瘤细胞，计数。

(4)细胞融合及HAT选择杂交瘤

将骨髓瘤细胞与免疫脾细胞按1:10比例混合，在50mL塑胶离心管内用RPMI 1640基础培养液洗1次，1200rpm，离心10分钟。弃上清，将细胞混匀，缓慢加入 1mL50％的PEG1500融合，融合1分钟后加入15mL的RPMI 1640基础培养液终止细 胞融合。1000rpm，离心5-10分钟。弃上清，用50mL的RPMI 1640筛选培养液轻轻 重悬，平分于10块96孔板，50μL/孔，37℃，5％CO2培养。培养至第六天，换HAT 培养液(含HAT的RPMI 1640完全培养液)两次。

(5)杂交瘤细胞筛选

用0.05M pH9.6碳酸缓冲溶液稀释新型冠状病毒SARS-CoV-2使其终浓度为 1μg/mL。每孔0.1mL，加入96孔聚苯乙烯板，37℃、2小时或4℃过夜。次日，用含 10％小牛血清或1％脱脂奶粉的0.02M pH7.2PBS，0.15mL/孔，37℃封闭2小时，用于 检测。融合后第七天，取细胞上清0.1mL于上述96孔检测板中，37℃30分钟，水洗 六次后加入2000倍稀释的辣根过氧化酶标记的羊抗鼠IgG，37℃30分钟同上洗后，每 孔加入100μL含0.1％(M/V)邻苯二胺，0.1％(V/V)双氧水，pH5.0柠檬酸磷酸缓冲液，37℃15分钟，加入稀硫酸溶液，每孔50μL，测450nm吸收值。RPMI 1640完全培养 液作为阴性对照，以测定值与对照值的比≧2.0为阳性细胞孔。

分泌抗体阳性细胞孔以1个细胞/孔在96孔培养板上用有限稀释法克隆，筛选阳性孔依上法连续克隆三次，扩大培养后，用含10％DMSO的培养液冻存，细胞密度为 10⁶个/mL。共获得五株稳定的新冠抗体杂交瘤细胞株，分别命名为1B2、8C4、5C3、 7B3、11B4。

3.单克隆抗体的制备

选6～8周健壮的BALB/c小鼠，每只小鼠腹腔注射0.5mL的降植烷；10天后腹 腔注射1×10⁶个杂交瘤细胞。接种细胞7-10天后可产生腹水，密切观察动物的健康状 况与腹水征象，待腹水尽可能多，而小鼠频于死亡之前，处死小鼠，用滴管将腹水吸 入试管中，一般一只小鼠可获5～10mL腹水。收集腹水，离心取上清，放于-20℃冰 箱保存。取腹水上清，用3倍体积的PBS稀释后滤纸过滤。将所得的滤液在1mL/min 的流速下加到一个已用PBS平衡的蛋白G亲和层析柱。然后用PBS以1mL/min的流 速洗涤未被蛋白G吸附的物质直至在OD280nm下的吸收值达到基线为止。再用0.1M 的甘氨酸洗脱液(pH2.5)洗脱并回收该抗体。所回收的溶液用0.1M Tris(pH8.8)中和， 通过超滤将抗体浓度调节到一个合适的浓度，-20℃分装冻存。

4.效价测定

以间接ELISA法检测上述五株杂交瘤细胞和分泌的腹水抗体的效价。

SARS-CoV-2细胞株编号	杂交瘤细胞培养上清效价	腹水抗体效价
			1B2	2.16×10<sup>2</sup>	5.12×10<sup>4</sup>
8C4	5.18×10<sup>3</sup>	5.87×10<sup>5</sup>
			5C3	3.14×10<sup>2</sup>	4.43×10<sup>4</sup>
7B3	1.22×10<sup>2</sup>	3.35×10<sup>4</sup>
			11B4	1.58×10<sup>2</sup>	2.25×10<sup>4</sup>

具体实验步骤如下：

(1)包被：将新型冠状病毒SARS-CoV-2稀释至1μg/mL，100μL/孔加至酶标板，37℃2小时或者4℃过夜；

(2)用洗板机洗板5次，每次每孔注洗液350μL，停留20秒；最后拍干；

(3)用洗涤液洗去包被液，用封闭液封闭，每孔150μL，37℃放置1.5-2小时；

(4)洗板机洗板5次，每次每孔注洗液350μL，停留20秒；最后拍干；

(5)加样品：分别将稀释成不同梯度的细胞培养上清和腹水加入用SARS-CoV-2抗原 包被好的酶标板，100μL/孔，37℃反应1小时(同时做阴性对照孔和阳性对照孔)；

(6)洗板机洗板5次，每次每孔注洗液350μL，停留20秒；最后拍干；

(7)加辣根过氧化酶标记的羊抗鼠IgG酶标二抗(用封闭液稀释6000倍)，100μL/孔， 37℃反应1小时；

(8)洗板机洗板5次，每次每孔注洗液350μL，停留20秒；最后拍干；

(9)加显色液TMB：即用即配，100μL/孔，37℃避光反应30分钟；

(10)终止反应：于各反应孔中加入2M的硫酸，50μL/孔；

(11)酶标仪读数：450nm，630nm波长测定。

最终测定并筛选出效价最高的一株8C4，该杂交瘤细胞培养上清与新型冠状SARS-CoV-2抗原的反应效价为5.18×10³，腹水抗体与SARS-CoV-2抗原反应效价为 5.87×10⁵。

5、抗体可变区基因克隆及测序

从以上分泌SARS-CoV-2单克隆抗体的杂交瘤细胞株8C4中提取中RNA，用SMARTER^TM RACE cDNA Amplification Kit试剂盒及试剂盒中的SMARTER II AOligonucleotide和5'-CDS引物进行第一链cDNA合成，获得的第一链cDNA产物作为 PCR扩增模板。Light Chain基因以Universal Primer A Mix(UPM)、Nested Universal Primer A(NUP)和mIgG CKR引物进行扩增，Heavy Chain基因以Universal Primer A Mix(UPM)、Nested Universal Primer A(NUP)和mIgG CHR引物进行扩增。其中Light Chain的引物对扩增出0.8KB左右的目的条带，Heavy Chain的引物对扩增出1.4KB左 右的目的条带。用琼脂糖凝胶电泳纯化回收，产物用rTaq DNA聚合酶进行加A反应 后插入到pMD-18T载体中，转化到DH5α感受态细胞中，长出菌落后分别取Heavy Chain及Light Chain基因克隆各4个克隆送Invitrogen公司进行测序。

经分析，以上杂交瘤细胞株8C4得到的抗体，具有序列如SEQ ID NO:10以及8 所示的轻链和重链。

经分析，重链的互补决定区：

VH1：F-L-T-I-T-F-Y-Y-M-N；

VH2：G-F-N-P-I-V-G-G-T-S-Y-P-Q-K-F；

VH3：T-K-G-A-E-R-Y。

轻链的互补决定区：

VL1：T-Q-S-Q-Y-S-N-G-K-I-Y-L-N；

VL2：V-Q-F-S-K-I-V-P；

VL3：L-Q-N-T-Y-Q-P-Y-T。

6、制备重组抗体进行亲和力分析、活性鉴定

亲和力分析

以活性鉴定相同方式酶免间接法做数据，包被做四个梯度1ug/ml、0.5ug/ml、0.25ug/ml、0.125ug/ml；抗体从1000ng/ml开始2倍梯度稀释至0.97656ng/ml上样。得 出不用包被浓度下不同抗体浓度对应的OD值。在同一包被浓度下，以抗体浓度为横 坐标，OD值为纵坐标，对数作图，根据拟合方程计算出50％最大OD值时的抗体浓 度；带入公式：K＝(n-1)/(2*(n*Ab`-Ab))计算出亲和力常数的倒数，其中Ab和 Ab`分别表示对应包被浓度(Ag、Ag`)下50％最大OD值时的抗体浓度，n＝Ag/Ag`； 每两个包被浓度可以组合计算出一个K值，最后可得六个K值，取其平均数值，再求 其倒数则为亲和力常数KD。

纯化后的Anti-SARS-CoV-2单抗8C4亲和力分析数据，与另外四株杂交瘤细胞株1B2,5C3,7B3,11B4分泌的抗体的亲和力对照，亲和力明显更优。

活性鉴定

用50mM碳酸盐缓冲液包被液稀释新冠抗原(NCBI参考ID：43740568)到1ug/ml 进行微孔板包被，每孔100μL，4℃过夜；次日，洗涤液用PBST清洗2次，拍干；加 入封闭液(20％BSA+80％PBS)，每孔120μL，37℃，1h，拍干；加入稀释后的Anti- SARS-CoV-2单克隆抗体8C4，从1000ng/ml始进行5倍比稀释，上样，100μL/孔，37℃， 30min(部分上清1h)；用PBST洗涤液清洗5次，拍干；加入羊抗鼠IgG，每孔100μL， 37℃，30min；用PBST洗涤液清洗5次，拍干；加入过氧化脲(50μL/孔)，加入四 甲基联苯胺(50μL/孔)，10min；加入稀盐酸终止反应，50μL/孔；酶标仪上450nm(参 考630nm)处读OD值。

纯化后的Anti-SARS-CoV-2 8C4单抗活性鉴定

样品浓度ng/ml	1000	200	40	8	1.6	0.32	0
								Anti-SARS-CoV-2	2.136	1.871	0.502	0.152	0.113	0.068	0.057

7、新冠病毒诊断试剂盒制备

SARS-COV-2试剂盒成分包括：抗SARS-COV-2鼠单抗8C4包被板，SARS-COV-2 抗原标准品，生物素标记的SARS-COV-2抗原工作液，辣根过氧化物酶标记的亲和素 工作液，显色底物液A，显色底物液B，反应终止液，25*PBST洗液。

取抗SARS-COV-2鼠单抗包被板放置室温平衡0.5-1h，根据需要在不同的酶标板孔分别加入待检样本或者标准品各25μL，再各孔加入50μL生物素标记的SARS-COV-2 抗原工作液，于37℃恒温培养箱反应30分钟。

将反应板取出，用1*PBST洗液洗板5次，拍干。每孔分别加入50μL辣根过氧化 物酶标记的亲和素工作液，于37℃恒温培养箱反应30分钟。将反应板取出，用1*PBST 洗液洗板5次，拍干。每孔分别加入50μL显色底物液A+50μL显色底物液B，于37℃ 恒温培养箱反应8-12分钟。每孔分别加入反应终止液50μL，用450nm～630nm双波 长读值。

我们自主开发的抗SARS-COV-2抗体原料，用于ELISA酶免检测试剂盒，在我们 调试的系统下，检测模式为抗SARS-COV-2鼠单抗包被酶标板，第一步加样本、标准 品或者质控品，试剂盒检测线性范围0-22ng/ml，检测灵敏度0.05ng/ml，特异性达 99.4％，重复性好，原料稳定性优。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的 任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 广东菲鹏生物有限公司

东莞市人民医院

<120> 抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Phe Leu Thr Ile Thr Phe Tyr Tyr Met Asn

1 5 10

<210> 2

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 2

Gly Phe Asn Pro Ile Val Gly Gly Thr Ser Tyr Pro Gln Lys Phe

1 5 10 15

<210> 3

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 3

Thr Lys Gly Ala Glu Arg Tyr

1 5

<210> 4

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 4

Thr Gln Ser Gln Tyr Ser Asn Gly Lys Ile Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 5

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 5

Val Gln Phe Ser Lys Ile Val Pro

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 6

Leu Gln Asn Thr Tyr Gln Pro Tyr Thr

1 5

<210> 7

<211> 99

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 7

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Phe Leu Thr Ile

1 5 10 15

Thr Phe Tyr Tyr Met Asn Lys Phe Arg Asp Lys Gly Phe Asn Pro Ile

20 25 30

Val Gly Gly Thr Ser Tyr Pro Gln Lys Phe Pro Gly Ala Ser Val Lys

35 40 45

Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Thr Leu Thr Asp Tyr Thr Lys Gly

50 55 60

Ala Glu Arg Tyr Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Gly

65 70 75 80

Leu Glu Trp Ile Gly Asp Leu Asn Pro Ile Asn Gly Gly Thr Ala Tyr

85 90 95

Gln Gln Lys

<210> 8

<211> 434

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 8

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Val Val Phe Leu Thr Ile

1 5 10 15

Thr Phe Tyr Tyr Met Asn Lys Phe Arg Asp Lys Gly Phe Asn Pro Ile

20 25 30

Val Gly Gly Thr Ser Tyr Pro Gln Lys Phe Pro Gly Ala Ser Val Lys

35 40 45

Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ser Thr Leu Thr Asp Tyr Thr Lys Gly

50 55 60

Ala Glu Arg Tyr Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Gly

65 70 75 80

Leu Glu Trp Ile Gly Asp Leu Asn Pro Ile Asn Gly Gly Thr Ala Tyr

85 90 95

Gln Gln Lys Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro

100 105 110

Gly Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val

115 120 125

Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Ser Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser

130 135 140

Leu Ser Ser Ser Val His Thr Phe Pro Ala Leu Leu Gln Ser Gly Leu

145 150 155 160

Tyr Thr Met Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser

165 170 175

Gln Thr Val Thr Cys Ser Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Thr Val

180 185 190

Asp Lys Lys Leu Glu Pro Ser Gly Pro Ile Ser Thr Ile Asn Pro Cys

195 200 205

Pro Pro Cys Lys Glu Cys His Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly

210 215 220

Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Asn Ile Lys Asp Val Leu Met

225 230 235 240

Ile Ser Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu

245 250 255

Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val

260 265 270

His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Ile

275 280 285

Arg Val Val Ser Thr Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly

290 295 300

Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ser Pro Ile

305 310 315 320

Glu Arg Thr Ile Ser Lys Ile Lys Gly Leu Val Arg Ala Pro Gln Val

325 330 335

Tyr Ile Leu Pro Pro Pro Ala Glu Gln Leu Ser Arg Lys Asp Val Ser

340 345 350

Leu Thr Cys Leu Val Val Gly Phe Asn Pro Gly Asp Ile Ser Val Glu

355 360 365

Trp Thr Ser Asn Gly His Thr Glu Glu Asn Tyr Lys Asp Thr Ala Pro

370 375 380

Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Ile Tyr Ser Lys Leu Asn Met

385 390 395 400

Lys Thr Ser Lys Trp Glu Lys Thr Asp Ser Phe Ser Cys Asn Val Arg

405 410 415

His Glu Gly Leu Lys Asn Tyr Tyr Leu Lys Lys Thr Ile Ser Arg Ser

420 425 430

Pro Gly

<210> 9

<211> 103

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 9

Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Thr Gln Ser Gln Tyr Ser Asn

1 5 10 15

Gly Lys Ile Tyr Leu Asn Ser Leu Ser Val Thr Ile Gly Val Gln Phe

20 25 30

Ser Lys Ile Val Pro Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln

35 40 45

Ser Ile Ile Tyr Ser Asn Gly Lys Ile Leu Gln Asn Thr Tyr Gln Pro

50 55 60

Tyr Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Lys

65 70 75 80

Arg Leu Met Tyr Gln Leu Ser Lys Leu Asp Pro Gly Ile Pro Asp Arg

85 90 95

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu

100

<210> 10

<211> 210

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 10

Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Thr Gln Ser Gln Tyr Ser Asn

1 5 10 15

Gly Lys Ile Tyr Leu Asn Ser Leu Ser Val Thr Ile Gly Val Gln Phe

20 25 30

Ser Lys Ile Val Pro Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln

35 40 45

Ser Ile Ile Tyr Ser Asn Gly Lys Ile Leu Gln Asn Thr Tyr Gln Pro

50 55 60

Tyr Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Lys

65 70 75 80

Arg Leu Met Tyr Gln Leu Ser Lys Leu Asp Pro Gly Ile Pro Asp Arg

85 90 95

Phe Ser Gly Ser Gly Ser Glu Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser

100 105 110

Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val

115 120 125

Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp

130 135 140

Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr

145 150 155 160

Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr

165 170 175

Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala

180 185 190

Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn

195 200 205

Glu Cys

210

Claims (10)

1.一种抗新型冠状病毒SARS-CoV-2抗体或其抗原结合片段，其包含下述氨基酸序列或与其具有至少90％序列同一性的互补决定区：

重链CDR1，其包含SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列F-L-T-I-T-F-Y-Y-M-N，或由其组成；重链CDR2，其包含SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列G-F-N-P-I-V-G-G-T-S-Y-P-Q-K-F，或由其组成；重链CDR3，其包含SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列T-K-G-A-E-R-Y，或由其组成；

并且还包含：轻链CDR1，其包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列T-Q-S-Q-Y-S-N-G-K-I-Y-L-N，或由其组成；轻链CDR2，其包含SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列V-Q-F-S-K-I-V-P，或由其组成；和轻链CDR3，其包含SEQ ID NO:6所示的序列L-Q-N-T-Y-Q-P-Y-T，或由其组成。

2.权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其包含：

(i)重链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：

SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列，或

与SEQ ID NO:7所示的序列具有至少80％，85％，90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或

与SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸突变(优选保守突变，优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列，和

(II)轻链可变区，其包含下述序列或由下述序列组成：

SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列，或

与SEQ ID NO:9所示的序列具有至少80％，85％，90％，优选至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％序列同一性的序列，或

与SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列相比具有一个或多个(优选1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)氨基酸突变(优选保守突变，优选置换，插入或缺失)的氨基酸序列。

3.权利要求1-2任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体以10^-8M或更小的KD结合SARS-CoV-2蛋白。

4.分离的多核苷酸，其编码权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段。

5.载体，其包含权利要求4所述的分离的多核苷酸。

6.宿主细胞，其包含权利要求5所述的分离的多核苷酸或权利要求6所述的载体。

7.抗体偶联物，其包含权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段以及与其偶联的偶联部分，优选地，所述偶联部分包括选自纯化标签(如His标签)，可检测的标记，例如胶体金、放射性标记、发光物质、有色物质、酶，例如荧光标记，发色团标记，电子致密标记，例如放射性同位素，荧光团，罗丹明及其衍生物，荧光素酶，荧光素，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记。

8.试剂盒或诊断剂，其包括权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求7所述的抗体偶联物，其中：

1)优选地，所述试剂盒或诊断试剂还包含另一种结合SARS-CoV-2的冠状病毒的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白；

2)优选地，所述试剂盒或诊断剂还包括另外一种或多种抗体，其特异性识别权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求7所述的抗体偶联物；和/或特异性识别结合除SARS-CoV-2以外的冠状病毒的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白，任选地，所述另外一种或多种抗体还包括可检测的标记，例如胶体金、放射性标记、发光物质、有色物质、酶，例如荧光标记，发色团标记，电子致密标记，例如放射性同位素，荧光团，罗丹明及其衍生物，荧光素酶，荧光素，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记，

3)任选地，所述试剂盒为快速诊断(POCT)试剂盒，例如应用薄膜免疫层析的试剂盒，例如采用胶体金法的薄膜免疫层析的试剂盒，例如包含固相支持物如膜支持物，将结合新型冠状病毒的抗体或其抗原结合片段，抗体偶联物，或融合蛋白以及任选的对照抗体固定到所述固相支持物；

4)任选地，所述试剂盒为酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒，间接免疫荧光测定(IFA)试剂盒，放射免疫测定(RIA)试剂盒。

9.权利要求1-3任一项所述的抗体或其抗原结合片段或权利要求7所述的抗体偶联物在制备诊断剂或试剂盒中的用途，所述诊断剂或试剂盒用于1)检测SARS-CoV-2在样品中的存在或其水平，2)诊断新型冠状病毒感染，和/或3)鉴别诊断SARS-CoV-2新型冠状病毒感染与其他冠状病毒感染。

10.权利要求9所述的用途，其中所述样品包括组织、细胞或流体样品，例如体液的样品，例如鼻咽样品、尿液、唾液、血液、粪便样品。