CN113024677A - 一种低分子量香菇多糖的制备方法 - Google Patents

一种低分子量香菇多糖的制备方法 Download PDF

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王煜
黄素和
罗红青
卞晖
贺侃
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    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
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Abstract

本发明公开了一种低分子量香菇多糖的制备方法，由以下步骤组成：（1）取干香菇子实体，破碎，清洗干净；（2）加干香菇质量10~15倍的0.01~0.05mol/L的NaOH溶液，30~40℃浸泡0.5h，80~95℃提取5~8h，重复两次，过滤，合并滤液得香菇提取液；（3）向香菇提取液中加入盐酸，调节pH6~7，浓缩；降温至30~40℃，过滤，得香菇浓缩滤液；（4）继续浓缩，加入乙醇，醇沉，静置24~48h，得醇沉液；（5）将醇沉液离心，收集沉淀物，得香菇多糖粗制品；（6）将香菇多糖粗制品中加入水加热溶解，过滤，待滤液温度降至25~35℃，加入乙醇至醇体积浓度45%~50%，搅拌，静置19~20h，离心收集溶液；（7）将溶液浓缩，加入乙醇，使醇体积浓度65%~70%，静置24~48h；（8）将醇沉溶液离心，收集沉淀物，干燥，即得。

Description

一种低分子量香菇多糖的制备方法
技术领域
本发明属于功能成分提取领域，具体涉及一种低分子量香菇多糖的制备方法。
背景技术
香菇(Lentinus edodes)，又名香蕈、香信、冬菇，为世界第二大食用菌。早在1313年，我国香菇栽培已很普遍。香菇含有丰富的蛋白质和多种维生素，还含有腺嘌呤、胆碱，可预防肝硬化并降低胆固醇；含酪氨酸氧化酶，可降低血脂；含香菇多糖，可以通过增强人体免疫能力而辅助抗癌；含干扰素诱发剂双链核糖核酸，可以抗病毒；含大量的钾盐，是高档碱性食品；含5’-鸟苷酸、香菇精、月桂醇等，使香菇独具特香。因此，香菇被誉为“菇中之王”，是食药用菌中的重要品种。
香菇多糖是从人工培养的伞菌科真菌香菇子实体中提取分离的一种多糖，以β(1→3)-D-葡聚糖为主链并带有(1→6)分支侧链的葡聚糖；具有广泛的药理学活性，如免疫调节作用、抗肿瘤、抗衰老、对化学物质所致的肝损伤的保护作用。
肿瘤免疫疗法自二十世纪60年代出现，其作用方式主要是通过刺激机体的免疫系统，如淋巴系统等，使机体的免疫功能得到恢复和提高。香菇作为一种β葡聚糖，通过激活巨噬细胞，清除癌细胞和病原体，并产生自然杀伤细胞和细胞因子，保护正常细胞免受侵害。
有关研究表明，香菇多糖的生理活性与高级构型相关，分子大小是具备生物活性的必要条件。分子量过大，不利于多糖跨膜进入生物体内发挥生物活性。因此，研究探索低分子量的香菇多糖制备方法具有很高的实用价值。但是目前，关于低分子量香菇多糖制备方法的公开技术比较少，例如：专利申请CN201710649744.X公开了一种制备低分子量香菇多糖的方法，其公开的制备方法步骤包括：(1)制香菇粉；(2)制粗品提取液；(3)粗品提取液浓缩，有机溶剂萃取，得香菇多糖提取液；(4)提取液加入乙醇，醇沉。(5)醇沉物干燥，得低分子量香菇多糖。经该方法虽可制得低分子量香菇多糖，但对目标分子量范围的香菇多糖选择性较差，分子量分布较宽。
发明内容
针对现有问题的不足，本发明的目的是提供一种分子量香菇多糖的制备方法，其中，所述低分子量指20000～100000。本发明根据香菇多糖在不同温度和溶剂中的溶解差异，分离低分子量香菇多糖。
本发明解决其技术问题采用的技术方案是：
一种低分子量香菇多糖的制备方法，由以下步骤组成：
(1)取干香菇子实体，破碎，用水清洗干净；
(2)加入干香菇质量10～15倍的0.01～0.05mol/L的氢氧化钠溶液，30～40℃浸泡0.5h，80～95℃提取5～8h，重复多次，过滤，合并滤液得香菇提取液；
(3)向步骤(2)所得香菇提取液中加入盐酸，调节pH6～7，浓缩；浓缩液温度降至30～40℃，过滤，得香菇浓缩滤液；
(4)将步骤(3)所得香菇浓缩滤液进一步浓缩，加入乙醇，醇沉，静置24～48h，得醇沉液；
(5)将步骤(4)所得醇沉液离心，收集沉淀物，得香菇多糖粗制品；
(6)将步骤(5)所得香菇多糖粗制品中加入其质量多倍的纯化水加热溶解，过滤，待滤液温度降至25～35℃，加入乙醇至醇体积浓度45％～50％，搅拌20min，静置19～20h，离心，收集溶液；加入纯化水将香菇多糖粗制品加热溶解，过滤，去除掉其中的不溶的大分子多糖，再使用乙醇进行进行醇沉；
(7)将步骤(6)所得溶液浓缩至原重量的一半，加入乙醇，使醇体积浓度65％～70％，静置24～48h；步骤(6)和步骤(7)通过不同浓度的乙醇分阶提取，得到目标分子量的香菇多糖；
(8)将步骤(7)所得醇沉溶液离心，收集沉淀物，干燥，得低分子量香菇多糖。
作为本申请的优选技术方案，所述步骤(1)中，破碎为将干香菇子实体用不安装筛网的破碎机打碎。破碎后有利于香菇多糖的提取，但破碎过细不利于分离，带来较大生产成本。
作为本申请的优选技术方案，所述步骤(1)中，清洗时间以10min为宜。
作为本申请的优选技术方案，所述步骤(3)中，浓缩至干香菇质量3～4倍；有利于杂质的去除。
作为本申请的优选技术方案，所述步骤(4)中，浓缩为干香菇质量2～3倍。降低溶液体积，利于减少乙醇用量，提高醇沉效果。
作为本申请的优选技术方案，所述步骤(4)中，乙醇加入量为步骤(3)浓缩滤液质量1～1.2倍。有利于控制目标成分的析出沉淀；加量过多会造成乙醇浪费。
作为本申请的优选技术方案，所述步骤(6)中，所述静置温度为35～45℃，优选40±2℃，利用不同分子量香菇多糖溶解差异进行分离。
作为本申请的优选技术方案，所述步骤(6)中，将步骤(5)所得香菇多糖粗制品中加入其质量多倍的纯化水加热溶解，多倍以25倍为宜。
申请中涉及的离心、过滤、搅拌等步骤，由本领域技术人员根据实际情况进行调整。
其中，离心后的乙醇溶液经回收后可以重复利用。
有益效果
本发明提供的一种低分子量香菇多糖的制备方法，与现有技术相比，具有如下有益效果：(1)本发明根据香菇多糖在不同温度和溶剂中的溶解差异，分离低分子量香菇多糖；(2)香菇子实体经过粉碎处理，溶剂浸提，杂质分离、醇沉、干燥，制备出低分子量香菇多糖；(3)该方法不使用大量有机溶剂，环境友好，适用于制备口服制剂香菇多糖原料；(4)本发明提供的工艺新颖，操作简便，适用于工业化生产，能制备出分子量20000-100000的香菇多糖，利于香菇多糖的溶解并发挥其生物活性。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步详细说明。所用试剂或者仪器设备未注明生产厂商的，均视为可以通过市场购买的常规产品。
实施例一：
一种低分子量香菇多糖的制备方法，经过以下步骤制得：
(1)取干香菇子实体500g，破碎，得香菇碎粒486g,粒径0.5～1.1cm；取破碎后的香菇400g，用流动的饮用水清洗10min；
(2)加入4800g浓度为0.02mol/L的氢氧化钠溶液，40℃浸泡0.5h，90℃提取6h，重复两次，过滤，合并滤液得香菇提取液；
(3)取步骤(2)所得香菇提取液7300g，加入盐酸，调节pH至6.4，浓缩至1380g；浓缩液温度降至39℃，过滤，得香菇浓缩滤液；
(4)向步骤(3)香菇浓缩滤液进一步浓缩至960g，加入1010g 95％体积浓度乙醇，醇沉，静置24h，得醇沉液；
(5)将步骤(4)所得醇沉液离心，收集沉淀物，得香菇多糖粗制品37g；
(6)向步骤(5)香菇多糖粗制品37g加入925g纯化水加热溶解，过滤，滤液温度降至29℃时，加入乙醇至醇体积浓度49％，搅拌20min，40±2℃下静置19h，离心，收集溶液；
(7)将步骤(6)所得溶液浓缩至910g，加入95％乙醇，使醇体积浓度67％，静置48h；
(8)将步骤(7)所得醇沉溶液离心，收集沉淀物，干燥，得低分子量香菇多糖。
经检测，该香菇多糖分子量为55000。
实施例二：
一种低分子量香菇多糖的制备方法，经过以下步骤制得：
(1)取干香菇子实体300g，破碎，得香菇碎粒274g，粒径0.5～1.1cm；取破碎后的香菇250g，用流动的饮用水清洗10min；
(2)加入3750g浓度为0.05mol/L的氢氧化钠溶液，30℃浸泡0.5h，80℃提取8h，重复两次，过滤，合并滤液得香菇提取液；
(3)向步骤(2)所得香菇提取液6100g，加入盐酸，调节pH至6.7，浓缩至900g。浓缩液温度降至32℃，过滤，得香菇浓缩滤液；
(4)向步骤(3)所得香菇浓缩滤液进一步浓缩至700g，加入800g乙醇，醇沉，静置36h，得醇沉液；
(5)将步骤(4)所得醇沉液离心，收集沉淀物，得香菇多糖粗制品41g；
(6)将步骤(5)所得香菇多糖粗制品41g加入1025g纯化水加热溶解，过滤，滤液温度降至28℃时，加入乙醇至醇体积浓度45％，搅拌20min，40±2℃下静置19.h，离心，收集溶液；
(7)将步骤(6)所得溶液浓缩至930g，加入乙醇，使醇体积浓度69％，静置48h；
(8)将步骤(7)所得醇沉溶液离心，收集沉淀物，干燥，得低分子量香菇多糖。
经检测，该香菇多糖分子量为93000。
实施例三：
一种低分子量香菇多糖的制备方法，经过以下步骤制得：
(1)取干香菇子实体450g，破碎，得香菇碎粒436g，粒径0.5～1.1cm；取破碎后的香菇400g，用流动的饮用水清洗10min；
(2)加入4000g浓度为0.02mol/L的氢氧化钠溶液，40℃浸泡0.5h，95℃提取8h，重复两次，过滤，合并滤液得香菇提取液；
(3)将步骤(2)所得香菇提取液5900g，加入盐酸，调节pH至6.4，浓缩至1500g；浓缩液温度降至37℃，过滤，得香菇浓缩滤液；
(4)向步骤(3)所得香菇浓缩滤液进一步浓缩至1030g，加入1200g乙醇，醇沉，静置48h，得醇沉液；
(5)将步骤(4)所得醇沉液离心，收集沉淀物，得香菇多糖粗制品46g；
(6)将步骤(5)所得香菇多糖粗制品46g加入1150g纯化水加热溶解，过滤，滤液温度降至28℃时，加入乙醇至醇浓度47％，搅拌20min，40±2℃下静置20h，离心，收集溶液；
(7)将步骤(6)所得溶液浓缩至1040g，加入95％乙醇，使醇体积浓度69％，静置48h；
(8)将步骤(7)所得醇沉溶液离心，收集沉淀物，干燥，得低分子量香菇多糖。
经检测，该香菇多糖分子量为57000。
实施例四：
一种低分子量香菇多糖的制备方法，经过以下步骤制得：
(1)取干香菇子实体450g，破碎，得香菇碎粒427g,粒径0.5～1.1cm；取破碎后的香菇400g，用流动的饮用水清洗10min；
(2)加入4000g浓度为0.01mol/L的氢氧化钠溶液，40℃浸泡0.5h，80℃提取8h，重复两次，过滤，合并滤液得香菇提取液；
(3)将步骤(2)所得香菇提取液6010g，加入盐酸，调节pH至6.1，浓缩至1300g；浓缩液温度降至37℃，过滤，得香菇浓缩滤液；
(4)将步骤(3)所得香菇浓缩滤液进一步浓缩至970g，加入1000g乙醇，醇沉，静置24h，得醇沉液；
(5)将步骤(4)所得醇沉液离心，收集沉淀物，得香菇多糖粗制品32g；
(6)将步骤(5)所得香菇多糖粗制品32g加入800g纯化水加热溶解，过滤，滤液温度降至26℃时，加入乙醇至醇浓度50％，搅拌20min，40±2℃下静置20h，离心，收集溶液；
(7)将步骤(6)所得溶液浓缩至760g，加入乙醇，使醇浓度63％，静置48h；
(8)将步骤(7)所得醇沉溶液离心，收集沉淀物，干燥，得低分子量香菇多糖。
经检测，该香菇多糖分子量为39000。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求为保护范围。

Claims (6)

1.一种低分子量香菇多糖的制备方法，其特征在于，由以下步骤组成：
（1）取干香菇子实体，破碎，用水清洗干净；
（2）加入干香菇质量10~15倍的0.01~0.05 mol/L的氢氧化钠溶液，30~40 ℃浸泡0.5h，80~95 ℃提取5~8 h，重复多次，过滤，合并滤液得香菇提取液；
（3）向步骤（2）所得香菇提取液中加入盐酸，调节pH6~7，浓缩；浓缩液温度降至30~40℃，过滤，得香菇浓缩滤液；
（4）将步骤（3）所得香菇浓缩滤液进一步浓缩，加入乙醇，醇沉，静置24~48h，得醇沉液；
（5）将步骤（4）所得醇沉液离心，收集沉淀物，得香菇多糖粗制品；
（6）将步骤（5）所得香菇多糖粗制品中加入其质量多倍的纯化水加热溶解，过滤，待滤液温度降至25~35 ℃，加入乙醇至醇体积浓度45%~50%，搅拌20 min，静置19~20 h，离心，收集溶液；
（7）将步骤（6）所得溶液浓缩至原重量的一半，加入乙醇，使醇体积浓度65%~70%，静置24~48 h；
（8）将步骤（7）所得醇沉溶液离心，收集沉淀物，干燥，得低分子量香菇多糖。
2.根据权利要求1所述的低分子量香菇多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中，破碎为将干香菇子实体用不安装筛网的破碎机打碎。
3.根据权利要求1所述的低分子量香菇多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，浓缩至干香菇质量3~4倍。
4.根据权利要求1所述的低分子量香菇多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，浓缩为干香菇质量2~3倍。
5.根据权利要求1所述的低分子量香菇多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中，乙醇加入量为步骤（3）浓缩滤液质量1~1.2倍。
6. 根据权利要求1所述的低分子量香菇多糖的制备方法，其特征在于，所述步骤（6）中，所述静置温度为35~45 ℃。
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