CN113005129B - HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性、抗病性和防治葡萄霜霉病中的应用及方法 - Google Patents

HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性、抗病性和防治葡萄霜霉病中的应用及方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性、抗病性和防治葡萄霜霉病中的应用及方法，属于微生物蛋白农药制剂技术领域。本发明提供了HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性中的应用。本发明所述基因可显著诱导植物发生超敏反应，能够提高植物的抗病性，提高抗氧化酶SOD和POD活性，降低MDA含量，对葡萄霜霉病有很好的防治效果。

Description

HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性、抗病性和防治葡萄霜霉 病中的应用及方法
技术领域
本发明涉及微生物蛋白农药制剂技术领域，具体涉及HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性、抗病性和防治葡萄霜霉病中的应用及方法。
背景技术
霜霉病是葡萄的第一大病害，发病率几乎100％，且发病速度快，主要利用化学防治。大量化学农药的使用不仅影响果品安全，而且导致生态环境污染。生产上急需安全高效、环境友好型新型农药。
发明内容
本发明的目的在于提供HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性、抗病性和防治葡萄霜霉病中的应用及方法。本发明所述基因可显著诱导植物发生超敏反应，能够提高植物的抗病性，提高抗氧化酶SOD和POD活性，降低MDA 含量，对葡萄霜霉病有很好的防治效果。
本发明提供了HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性中的应用，所述 HrpZ_K基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了HrpZ_K基因在提升植物抗病性中的应用，所述HrpZ_K 基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了HrpZ_K基因在提高抗氧化酶SOD和POD活性和降低 MDA含量中的应用，所述HrpZ_K基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了HrpZ_K基因在防治葡萄霜霉病中的应用，所述HrpZ_K 基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了HrpZ_K超敏蛋白的表达载体，所述表达载体上含核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的HrpZ_K基因，所述表达载体的骨架载体包括 pET32a。
本发明还提供了含上述技术方案所述表达载体的宿主菌，所述宿主菌包括E.coliBL21。
本发明还提供了一种基于上述技术方案所述宿主菌的HrpZ_K超敏蛋白的表达方法，包括以下步骤：
培养至菌液的OD600为0.4～0.6时，加入IPTG诱导剂至终浓度为0.5 mmol/L，28℃诱导培养6h，收集菌体，破碎，得到HrpZ_K超敏蛋白。
本发明还提供了一种葡萄霜霉病防治剂，所述防治剂包括HrpZ_K超敏蛋白和药学上可接受的辅料，编码所述HrpZ_K超敏蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
优选的是，所述辅料包括二甲基亚砜。
本发明还提供了一种基于上述技术方案所述防治剂的葡萄霜霉病的防治方法，包括以下步骤：
将葡萄霜霉病防治剂稀释后对葡萄叶面进行喷施，6月上旬开始，露地栽培的葡萄每8～12d喷施一次，喷施8次以上；避雨栽培的葡萄每13～17d 喷施一次，喷施4次以上。
本发明提供了HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性中的应用。本发明所述HrpZ_K基因能够编码超敏蛋白，可显著诱导植物发生超敏反应，并强于 HrpZ蛋白，能够提高植物的抗病性，提高抗氧化酶SOD和POD活性，降低MDA含量，对葡萄霜霉病有很好的防治效果。试验结果表明，本发明所述基因的表达，能够降低葡萄霜霉病的叶片发病率，也可显著提高抗氧化酶 SOD和POD的活性，降低MDA含量，提高树体抗病性。此外，本发明蛋白表达条件，即诱导温度、诱导时间和诱导剂浓度的设定，能够高效诱导超敏蛋白表达。本发明对葡萄霜霉病的防治方法能够实现霜霉病的高效防治，且效果优于海博士超敏蛋白。
附图说明
图1为本发明提供的HrpZ_K原核表达产物蛋白质电泳图；
图2为本发明提供的不同稀释倍数的HrpZ_K超敏蛋白诱发超敏反应对比图；
图3为本发明提供的HrpZ_K超敏蛋白防治‘赤霞珠’霜霉病效果图；
图4为本发明提供的HrpZ_K超敏蛋白防治‘泽香’霜霉病效果图；
图5为本发明提供的不同诱导时间和温度对HrpZ_K超敏蛋白诱导的影响图；
图6为本发明提供的不同诱导剂浓度对HrpZ_K超敏蛋白诱导的影响图；
图7为本发明提供的HrpZ_K蛋白不同区段超敏反应效果比较图。
具体实施方式
本发明提供了HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性中的应用，所述 HrpZ_K基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示： ctgaccaagcaggatggcgggacaagcttctccgaagacgatatgccgatgctgaacaagatcgcgcagttcatg gatgacaatcccgcacagtttcccaagccggactcgggctcctgggtgaacgaactcaaggaagacaacttccttg atggcgacgaaacggctgcgttccgttcggcactcgacatcattggccagcaactgggtaatcagcagagtgacgc tggcagtctggcagggacgggtggaggtctgggcactccgagcagtttttccaacaactcgtccgtgatgggtgatc cgctgatcgacgccaataccggtcccggtgacagcggcaatacccgtggtgaagcggggcaactgatcggcgag cttatcgaccgtggcctgcaatcggtattggccggtggtggactgggcacacccgtaaacaccccgcagaccggta cgtcggcgaatggcggacagtccgctcaggatcttgatcagttgctgggcggcttgctgctcaagggcctggaggc aacgctcaaggatgccgggcaaacaggcaccgacgtgcagtcgagcgctgcgcaaatcgccaccttgctggtca gtacgctgctgcaaggcacccgcaatcaggctgcagcctga。本发明所述HrpZ_K基因截取自 HrpZ基因，编码HrpZ蛋白的C端的214个氨基酸。超敏蛋白HrpZ基因序列来自于丁香假单胞菌丁香致病变种(Pseudomonas syringae pv.syringae)，在NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)数据库基因序列检索号为KX572118。在本发明中，所述HrpZ_K基因编码的HrpZ_K蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：
LTKQDGGTSFSEDDMPMLNKIAQFMDDNPAQFPKPDSGSWVNELKEDNF LDGDETAAFRSALDIIGQQLGNQQSDAGSLAGTGGGLGTPSSFSNNSSVM GDPLIDANTGPGDSGNTRGEAGQLIGELIDRGLQSVLAGGGLGTPVNTPQ TGTSANGGQSAQDLDQLLGGLLLKGLEATLKDAGQTGTDVQSSAAQIAT LLVSTLLQGTRNQAAA。本发明所述HrpZ_K蛋白的超敏反应强于HrpZ蛋白。本发明所述HrpZ_K基因在原核系统表达效率高，能够实现超敏蛋白的高含量表达。
本发明还提供了HrpZ_K基因在提升植物抗病性中的应用，所述HrpZ_K 基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了HrpZ_K基因在提高抗氧化酶SOD和POD活性和降低 MDA含量中的应用，所述HrpZ_K基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了HrpZ_K基因在防治葡萄霜霉病中的应用，所述HrpZ_K 基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了HrpZ_K超敏蛋白的表达载体，所述表达载体上含核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的HrpZ_K基因，所述表达载体的骨架载体包括 pET32a。本发明对所述表达载体的构建方法没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规表达载体构建方法即可。
本发明还提供了含上述技术方案所述表达载体的宿主菌，所述宿主菌包括E.coliBL21。本发明对所述宿主菌的构建方法没有特殊限定，采用本领域技术人员熟知的常规表达载体构建入宿主菌的方法即可。
本发明还提供了一种基于上述技术方案所述宿主菌的HrpZ_K超敏蛋白的表达方法，包括以下步骤：
培养至菌液的OD600为0.4～0.6时，加入IPTG诱导剂至终浓度为0.5 mmol/L，28℃诱导培养6h，收集菌体，破碎，得到HrpZ_K超敏蛋白。
本发明优选使用LB培养基对宿主菌进行培养，本发明所述培养的条件优选为37℃、210r/min。本发明收集菌体后，优选进行离心，弃上清。本发明优选将菌体与细胞裂解液混合，本发明所述细胞裂解液优选为PBS。在超声破碎前，本发明优选加入苯甲基磺酰氟(PMSF)，苯甲基磺酰氟的终浓度优选为1mM，在本发明中，苯甲基磺酰氟作为蛋白酶抑制剂可提高超敏蛋白的稳定性。超声波破碎，破碎后离心，取上清，得到富含HrpZ_K超敏蛋白的制备液，所述制备液优选在-40℃保存，或者使用冷冻干燥机冷冻干燥后-20℃保存。本发明所述超声破碎的条件优选为每次破碎6s，间隔9s，共破碎20min。本发明破碎后离心的条件优选为1000r/min低温离心10min。本发明得到制备液后，优选直接用含有10mmol/L DMSO水溶液稀释。
本发明所述表达方法中，诱导温度、浓度和时间的控制，能够实现蛋白的高效表达，得到蛋白含量高的HrpZ_K蛋白，具体的，利用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白含量最高能够达到1.567μg/mL，(BCA蛋白浓度测定试剂盒购买于南京诺唯赞生物科技股份有限公司)。
本发明还提供了一种葡萄霜霉病防治剂，所述防治剂包括HrpZ_K超敏蛋白和药学上可接受的辅料，编码所述HrpZ_K超敏蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述HrpZ_K超敏蛋白对葡萄霜霉病防治效果好，病情指数能够大幅度下降。本发明所述防治剂的剂型优选包括喷雾剂，当所述剂型为喷雾剂时，蛋白的溶剂优选为10mmol/L DMSO水溶液。即在本发明中，所述辅料优选包括二甲基亚砜(DMSO)，化学式为C2H6SO，增强超敏蛋白的液面吸附和吸收效果。在本发明中，所述防治剂在使用时，蛋白的浓度优选为10.85～15.67ng/mL。
本发明还提供了一种基于上述技术方案所述防治剂的葡萄霜霉病的防治方法，包括以下步骤：
将葡萄霜霉病防治剂稀释后对葡萄叶面进行喷施，6月上旬开始，露地栽培的葡萄每8～12d喷施一次，喷施8次以上；避雨栽培的葡萄每13～17d 喷施一次，喷施4次以上。在本发明中，露地栽培的葡萄更优选每10d喷施一次；避雨栽培的葡萄更优选每15d喷施一次。霜霉病主要通过雨水传播，避雨栽培可有效降低霜霉病发病率，本发明通过喷施条件的具体设定，能够实现葡萄霜霉病的高效防治。
本发明所述防治剂的使用浓度优选为使用DMSO水溶液进行稀释，更优选为10mmol/L DMSO水溶液，稀释的倍数优选为100倍。稀释前蛋白浓度优选为1.085～1.567μg/mL。稀释100倍后蛋白浓度优选为10.85～15.67 ng/mL。本发明更优选每10d喷施一次。
下面结合具体实施例对本发明所述的HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性、抗病性和防治葡萄霜霉病中的应用及方法做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。
实施例1
合成两端含酶切位点EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ的HrpZ_K序列，通过双酶切将基因片段连接到原核表达载体pET32a上，构建pET32a-HrpZ_K，转化 Trans1-T1克隆感受态细胞(购于中国北京全式金生物技术有限公司)，筛选阳性克隆，提取含有pET32a-HrpZ_K的质粒DNA，转化E.coli BL21(DE3)，筛选阳性菌株。在LB培养基(含100μg/L氨苄霉素)扩繁阳性菌株，挑取单菌落接种到20mL含氨苄霉素(100μg/L)的LB液体培养基中，以37℃、 210r/min的条件培养12小时，取培养的菌液1mL接种到50mL含氨苄霉素(浓度为100μg/L)的LB中，以37℃、210r/min的条件活化菌液至OD600＝ 0.4～0.6时，加入100mmol/L的诱导剂IPTG至终浓度为0.5mmol/L，以28℃、 200r/min的条件诱导培养6h。然后收集菌体，6000r/min低温离心5min，弃上清，加入10mL细胞裂解液(PBS)重悬菌体，并按1:100的比例(苯甲基磺酰氟和细胞裂解液的体积比)加入100μL的100mmol/L的苯甲基磺酰氟(PMSF)，然后进行超声波破碎(每次破碎6s，间隔9s，共破碎20min)， 1000r/min低温离心10min，取上清，即为富含HrpZ_K超敏蛋白的制备液， -40℃保存。
通过上述条件原核诱导超敏蛋白HrpZ_K，取制备液进行蛋白质电泳，表明主产物富集在40～50KDa之间，HrpZ_K在E.coli BL21(DE3)的过量表达(图1为HrpZ_K原核表达产物蛋白质电泳图)，符合HrpZ_K超敏蛋白的预测大小(43.40KDa)；诱导液总蛋白浓度为1.567μg/mL(利用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定)。为了鉴定诱导液蛋白主产物是否为HrpZ_K，进行了超敏反应评价；结果表明，与对照细胞裂解液(PBS)和空载体pET32a诱导产物相比，HrpZ_K诱导产物100倍稀释液可以显著诱导烟草叶片发生超敏反应，相比1000倍稀释液效果较100倍较差(图2，图2为不同稀释倍数的HrpZ_K超敏蛋白诱发超敏反应对比图)，表明蛋白主产物为HrpZ_K。
实施例2
HrpZ_K超敏蛋白提高葡萄(避雨栽培)霜霉病应用
测试葡萄品种：赤霞珠；HrpZ_K超敏蛋白使用浓度：HrpZ K超敏蛋白制备液用10mmol/L DMSO水溶液稀释100倍；施用方式：叶面喷施；施用时间：6月初开始每15d左右施用一次，建议施用4次及以上。
测定葡萄病情指数及其他病害相关生理指标，结果见表1。
实施例3
HrpZ_K超敏蛋白提高葡萄(常规露地栽培)霜霉病应用
测试葡萄品种：泽香；HrpZ_K超敏蛋白使用浓度：HrpZ K超敏蛋白制备液用10mmol/L DMSO水溶液稀释100倍；施用方式：叶面喷施；施用时间：6月初开始每10d左右施用一次，建议施用8次及以上。
测定葡萄病情指数及其他病害相关生理指标，结果见表1。
对比例1
除不施用超敏蛋白(即对比例1喷施10mmol/L DMSO水溶液)外，其他与实施例2相同。
对比例2
除不施用超敏蛋白(即对比例2喷施10mmol/L DMSO水溶液)外，其他与实施例3相同。
表1超敏蛋白HrpZ_K对葡萄霜霉病发生的影响
Figure GDA0003774104010000071
与对比例1相比，实施例2叶片发病率下降75.9％(表1)，发病程度轻 (图3，图3为HrpZ_K超敏蛋白防治赤霞珠霜霉病效果图)，病情指数下降 77.8％(表1)。此外，实施例2极显著提高了抗氧化酶SOD和POD的活性，降低了MDA含量，也表明了超敏蛋白处理提高了树体抗病性。
与对比例2相比，实施例3叶片发病率下降29％(表1)，发病程度轻 (图4，图4为HrpZ_K超敏蛋白防治‘泽香’霜霉病效果图)，病情指数下降60％(表1)。此外，超敏蛋白处理极显著提高了抗氧化酶SOD和POD 的活性，降低了MDA含量，也表明了超敏蛋白处理提高了树体抗病性。
对比例3
超敏蛋白制备体系参数比较
(1)诱导时间、温度比较：固定诱导剂IPTG浓度0.5mmol/L，诱导温度设置28℃和37℃，诱导时间设置3h、6h、9h。结果表明，与28℃相比，在不同诱导时间37℃诱导效果均明显较差；在28℃下，诱导6h超敏蛋白表达含量最高，其次是9h，3h效果较差(图5，图5为不同诱导时间和温度对 HrpZ_K超敏蛋白诱导的影响)。
(2)IPTG浓度比较：固定诱导温度28℃，诱导时间6h，IPTG浓度设置0.2、0.5、1.0、1.2mmol/L四个水平，结果表明0.5mmol/L IPTG诱导效果最好，其次是0.2和1.0mmol/L，1.2mmol/L效果较差(图6，图6为不同诱导剂浓度对HrpZ_K超敏蛋白诱导的影响)。
对比例4
HrpZ蛋白不同区段超敏效果比较
将HrpZ蛋白分为三段，即Hrp全长蛋白序列341个氨基酸 (MQSLSLNSSSLQTPAMALVLVRPEAETTGSTSSKALQEVVVKLAEELM RNGQLDDSSPLGKLLAKSMAADGKAGGGIEDVIAALDKLIHEKLGDNFG ASADSASGTGQQDLMTQVLNGLAKSMLDDLLTKQDGGTSFSEDDMPML NKIAQFMDDNPAQFPKPDSGSWVNELKEDNFLDGDETAAFRSALDIIGQQ LGNQQSDAGSLAGTGGGLGTPSSFSNNSSVMGDPLIDANTGPGDSGNTRGEAGQLIGELIDRGLQSVLAGGGLGTPVNTPQTGTSANGGQSAQDLDQL LGGLLLKGLEATLKDAGQTGTDVQSSAAQIATLLVSTLLQGTRNQAAA， SEQ ID NO.3)、N端127个氨基酸 (MQSLSLNSSSLQTPAMALVLVRPEAETTGSTSSKALQEVVVKLAEELM RNGQLDDSSPLGKLLAKSMAADGKAGGGIEDVIAALDKLIHEKLGDNFGASADSASGTGQQDLMTQVLNGLAKSMLDDL，SEQ ID NO.4)和C端214 个氨基酸 (LTKQDGGTSFSEDDMPMLNKIAQFMDDNPAQFPKPDSGSWVNELKED NFLDGDETAAFRSALDIIGQQLGNQQSDAGSLAGTGGGLGTPSSFSNNSS VMGDPLIDANTGPGDSGNTRGEAGQLIGELIDRGLQSVLAGGGLGTPVN TPQTGTSANGGQSAQDLDQLLGGLLLKGLEATLKDAGQTGTDVQSSAAQ IATLLVSTLLQGTRNQAAA，HrpZ_K，SEQ ID NO.2)，分别原核表达，注射烟草叶片。结果表明N端127个氨基酸超敏反应较弱，HrpZ_K超敏反应最强(图7为HrpZ_K蛋白不同区段超敏反应效果比较图)。
对比例5
HrpZ超敏蛋白不同处理浓度比较
以露天栽培的葡萄品种‘泽香’为试材，从6月1日开始每隔10d叶面喷施超敏蛋白HrpZ_K，设置100倍、500倍和1000倍三个稀释浓度，以空载体诱导物100倍稀释液为对照，施用8次后，于8月24调查田间葡萄叶片霜霉病发病情况并测定POD、SOD和MDA含量。结果表明，与对照相比，三种稀释液均能提高葡萄霜霉病抗性，且随着稀释倍数增加效果下降，以100倍稀释浓度最好。
与海博士超敏蛋白100倍稀释液相比，HrpZ_K100倍稀释液处理病情指数下降31.8％。
表2 HrpZ超敏蛋白不同处理浓度比较
Figure GDA0003774104010000091
对比例6
施用次数效果评价
以露天栽培的葡萄品种‘泽香’为试材，超敏蛋白HrpZ_K施用浓度为100倍稀释液，每隔10d施用1次，施用次数分别为8次(6月1日开始施用)、5次(7月1日开始施用)、3次(7月20日开始施用)，于8月24调查田间葡萄叶片霜霉病发病情况并。结果表明，与对照相比，施用3次效果不明显，施用5次病情指数下降32％，施用8次病情指数下降60％。
表3超敏蛋白施用次数对葡萄霜霉病发生的影响
调查叶片数量 发病叶数量 发病叶片比例 病情指数
对照 200 124 62％ 7.5
施用8次 200 66 33％ 3.0
施用5次 200 96 48％ 5.1
施用3次 200 117 58.5％ 7.0
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 山东农业大学
<120> HrpZ_K基因在调控植物超敏反应性、抗病性和防治葡萄霜霉病中的应用及方法
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 645
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ctgaccaagc aggatggcgg gacaagcttc tccgaagacg atatgccgat gctgaacaag 60
atcgcgcagt tcatggatga caatcccgca cagtttccca agccggactc gggctcctgg 120
gtgaacgaac tcaaggaaga caacttcctt gatggcgacg aaacggctgc gttccgttcg 180
gcactcgaca tcattggcca gcaactgggt aatcagcaga gtgacgctgg cagtctggca 240
gggacgggtg gaggtctggg cactccgagc agtttttcca acaactcgtc cgtgatgggt 300
gatccgctga tcgacgccaa taccggtccc ggtgacagcg gcaatacccg tggtgaagcg 360
gggcaactga tcggcgagct tatcgaccgt ggcctgcaat cggtattggc cggtggtgga 420
ctgggcacac ccgtaaacac cccgcagacc ggtacgtcgg cgaatggcgg acagtccgct 480
caggatcttg atcagttgct gggcggcttg ctgctcaagg gcctggaggc aacgctcaag 540
gatgccgggc aaacaggcac cgacgtgcag tcgagcgctg cgcaaatcgc caccttgctg 600
gtcagtacgc tgctgcaagg cacccgcaat caggctgcag cctga 645
<210> 2
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Leu Thr Lys Gln Asp Gly Gly Thr Ser Phe Ser Glu Asp Asp Met Pro
1 5 10 15
Met Leu Asn Lys Ile Ala Gln Phe Met Asp Asp Asn Pro Ala Gln Phe
20 25 30
Pro Lys Pro Asp Ser Gly Ser Trp Val Asn Glu Leu Lys Glu Asp Asn
35 40 45
Phe Leu Asp Gly Asp Glu Thr Ala Ala Phe Arg Ser Ala Leu Asp Ile
50 55 60
Ile Gly Gln Gln Leu Gly Asn Gln Gln Ser Asp Ala Gly Ser Leu Ala
65 70 75 80
Gly Thr Gly Gly Gly Leu Gly Thr Pro Ser Ser Phe Ser Asn Asn Ser
85 90 95
Ser Val Met Gly Asp Pro Leu Ile Asp Ala Asn Thr Gly Pro Gly Asp
100 105 110
Ser Gly Asn Thr Arg Gly Glu Ala Gly Gln Leu Ile Gly Glu Leu Ile
115 120 125
Asp Arg Gly Leu Gln Ser Val Leu Ala Gly Gly Gly Leu Gly Thr Pro
130 135 140
Val Asn Thr Pro Gln Thr Gly Thr Ser Ala Asn Gly Gly Gln Ser Ala
145 150 155 160
Gln Asp Leu Asp Gln Leu Leu Gly Gly Leu Leu Leu Lys Gly Leu Glu
165 170 175
Ala Thr Leu Lys Asp Ala Gly Gln Thr Gly Thr Asp Val Gln Ser Ser
180 185 190
Ala Ala Gln Ile Ala Thr Leu Leu Val Ser Thr Leu Leu Gln Gly Thr
195 200 205
Arg Asn Gln Ala Ala Ala
210
<210> 3
<211> 341
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Met Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Ser Ser Leu Gln Thr Pro Ala Met
1 5 10 15
Ala Leu Val Leu Val Arg Pro Glu Ala Glu Thr Thr Gly Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Lys Ala Leu Gln Glu Val Val Val Lys Leu Ala Glu Glu Leu Met
35 40 45
Arg Asn Gly Gln Leu Asp Asp Ser Ser Pro Leu Gly Lys Leu Leu Ala
50 55 60
Lys Ser Met Ala Ala Asp Gly Lys Ala Gly Gly Gly Ile Glu Asp Val
65 70 75 80
Ile Ala Ala Leu Asp Lys Leu Ile His Glu Lys Leu Gly Asp Asn Phe
85 90 95
Gly Ala Ser Ala Asp Ser Ala Ser Gly Thr Gly Gln Gln Asp Leu Met
100 105 110
Thr Gln Val Leu Asn Gly Leu Ala Lys Ser Met Leu Asp Asp Leu Leu
115 120 125
Thr Lys Gln Asp Gly Gly Thr Ser Phe Ser Glu Asp Asp Met Pro Met
130 135 140
Leu Asn Lys Ile Ala Gln Phe Met Asp Asp Asn Pro Ala Gln Phe Pro
145 150 155 160
Lys Pro Asp Ser Gly Ser Trp Val Asn Glu Leu Lys Glu Asp Asn Phe
165 170 175
Leu Asp Gly Asp Glu Thr Ala Ala Phe Arg Ser Ala Leu Asp Ile Ile
180 185 190
Gly Gln Gln Leu Gly Asn Gln Gln Ser Asp Ala Gly Ser Leu Ala Gly
195 200 205
Thr Gly Gly Gly Leu Gly Thr Pro Ser Ser Phe Ser Asn Asn Ser Ser
210 215 220
Val Met Gly Asp Pro Leu Ile Asp Ala Asn Thr Gly Pro Gly Asp Ser
225 230 235 240
Gly Asn Thr Arg Gly Glu Ala Gly Gln Leu Ile Gly Glu Leu Ile Asp
245 250 255
Arg Gly Leu Gln Ser Val Leu Ala Gly Gly Gly Leu Gly Thr Pro Val
260 265 270
Asn Thr Pro Gln Thr Gly Thr Ser Ala Asn Gly Gly Gln Ser Ala Gln
275 280 285
Asp Leu Asp Gln Leu Leu Gly Gly Leu Leu Leu Lys Gly Leu Glu Ala
290 295 300
Thr Leu Lys Asp Ala Gly Gln Thr Gly Thr Asp Val Gln Ser Ser Ala
305 310 315 320
Ala Gln Ile Ala Thr Leu Leu Val Ser Thr Leu Leu Gln Gly Thr Arg
325 330 335
Asn Gln Ala Ala Ala
340
<210> 4
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Met Gln Ser Leu Ser Leu Asn Ser Ser Ser Leu Gln Thr Pro Ala Met
1 5 10 15
Ala Leu Val Leu Val Arg Pro Glu Ala Glu Thr Thr Gly Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Lys Ala Leu Gln Glu Val Val Val Lys Leu Ala Glu Glu Leu Met
35 40 45
Arg Asn Gly Gln Leu Asp Asp Ser Ser Pro Leu Gly Lys Leu Leu Ala
50 55 60
Lys Ser Met Ala Ala Asp Gly Lys Ala Gly Gly Gly Ile Glu Asp Val
65 70 75 80
Ile Ala Ala Leu Asp Lys Leu Ile His Glu Lys Leu Gly Asp Asn Phe
85 90 95
Gly Ala Ser Ala Asp Ser Ala Ser Gly Thr Gly Gln Gln Asp Leu Met
100 105 110
Thr Gln Val Leu Asn Gly Leu Ala Lys Ser Met Leu Asp Asp Leu
115 120 125

Claims (3)

1.HrpZ_K基因在提高葡萄霜霉病叶片抗氧化酶SOD和POD活性和降低MDA含量中的应用，所述HrpZ_K基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.HrpZ_K基因在防治葡萄霜霉病中的应用，所述HrpZ_K基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
3.一种基于葡萄霜霉病防治剂的葡萄霜霉病的防治方法，包括以下步骤：
将葡萄霜霉病防治剂稀释后对葡萄叶面进行喷施，6月上旬开始，露地栽培的葡萄每8～12d喷施一次，喷施8次以上；避雨栽培的葡萄每13～17d喷施一次，喷施4次以上；
所述防治剂包括HrpZ_K超敏蛋白和药学上可接受的辅料，编码所述HrpZ_K超敏蛋白的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述辅料包括二甲基亚砜。
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