CN113004413A - 猪IgG3的单克隆抗体、该单克隆抗体特异性识别的抗原表位肽及其应用 - Google Patents

猪IgG3的单克隆抗体、该单克隆抗体特异性识别的抗原表位肽及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及猪IgG3的单克隆抗体、该单克隆抗体特异性识别的抗原表位肽及其应用。所述单克隆抗体包括抗体重链和抗体轻链，所述抗体重链的CDR1‑3的氨基酸序列依次为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3；所述抗体轻链的CDR1‑3的氨基酸序列依次为SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6。本发明提供的猪IgG3的单克隆抗体可以特异性识别猪血清中的IgG3，特异性强，灵敏度高，Western检测仅IgG3有条带，ELISA检测仅与IgG3有明显反应，而与其他亚型的反应与转染空载体的293T细胞相当。

Description

猪IgG3的单克隆抗体、该单克隆抗体特异性识别的抗原表位 肽及其应用
技术领域
本发明涉及生物医药抗体领域，尤其涉及猪IgG3的单克隆抗体、该单克隆抗体特异性识别的抗原表位肽及其应用。
背景技术
免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)是有颌类脊椎动物适应性免疫系统的标志分子，不仅在B细胞的发育过程中起重要作用，也是动物体液免疫应答中的关键效应分子。哺乳动物免疫球蛋白分为五类：IgM，IgD，IgG，IgE和IgA，这五种类型的CH分别由Cμ，Cδ，Cγ，Cε和Cα基因编码。在人体中，IgG是体液中含量最高的免疫球蛋白，约占血清总免疫球蛋白的75％-80％，因此是机体抗感染的“主力军”。同时IgG还可以穿过胎盘屏障，在新生儿抗感染中也起着重要作用。此外某些自身抗体以及引起Ⅲ型超敏反应的抗体也属于IgG。
同一类免疫球蛋白，由于重链恒定区结构的不同可进一步分为不同的亚型。IgG亚型的分化普遍存在于哺乳动物中，而且不同物种IgG亚型的种类和数目也不相同。例如牛的IgH基因座位中存在三个IgG亚型基因，马的IgH基因座包含七个IgG亚型基因，人的IgH基因座中则包含四个C基因，分别编码IgG1，IgG2，IgG3和IgG4四种亚型。人体内四种IgG亚型在表达水平和结构方面存在较大的差别，这种差异使得它们行使不同的免疫功能。IgG1是血清中含量最高的IgG亚型，占比60％，而IgG3和IgG4表达量最低，只占4％。因此IgG1的缺乏会导致血清中IgG整体水平的降低，引起复发性感染。在结构上，可变区基因片段V、D、J之间发生的随机重组以及抗原刺激后B细胞发生的体细胞超突变使得不同IgG亚型的可变区具有不同的特征，主要表现在V、D、J基因片段的使用偏好性、互补决定区(CDR)的长度和氨基酸组成等方面。这些区别使不同IgG亚型可以识别不同性质的抗原。例如，IgG2主要识别细菌多糖类抗原，而IgG4则主要针对变应原产生免疫应答，介导超敏反应。除此之外，寄生虫感染也会促进IgG4表达水平的增高。
目前对猪IgG功能的研究主要集中在其对病原微生物的免疫应答水平方面。研究表明，在感染蓝耳病病毒(PRRSV)14-21天后，猪血清中特异性的IgM浓度达到顶峰，然后迅速下降。抗PRRSV的IgG浓度则在感染21-28天后达到顶峰，并且在整个感染期维持不变。同时也有研究发现猪血清和唾液中的IgG在猪瘟病毒(CSFV)介导的抗体应答中起重要作用。这说明IgG在猪病的免疫应答中发挥着重要作用。但是对于不同类型的猪病，具体是哪种亚型的IgG主要参与应答还不清楚，这就给针对性的提高猪群免疫力带来困扰。
发明内容
本发明的目的是提供一种猪IgG3的单克隆抗体、该单克隆抗体特异性识别的抗原表位肽及其应用，该单克隆抗体特异性较强，可以特异性识别猪IgG3型免疫球蛋白。
第一方面，本发明提供一种猪IgG3的单克隆抗体，所述单克隆抗体包括抗体重链和抗体轻链，
所述抗体重链的CDR包括由SEQ ID NO.1氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO.2氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO.3氨基酸序列组成的CDR3，编码重链CDR1-3的核苷酸序列依次为如SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.16所示的核苷酸序列；编码轻链CDR1-3的核苷酸序列依次为如SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.19所示的核苷酸序列。
所述抗体轻链的CDR包括由SEQ ID NO.4氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ ID NO.5氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO.6氨基酸序列组成的CDR3。
上述单克隆抗体的重链为IgG2b型，轻链为Igκ型。
目前，无法确定何种IgG亚型在猪疾病发生过程中发挥作用的原因有两点：一是猪的IgG亚型还未被完全确定；二是没有一个特异性针对猪某种IgG亚型的单克隆抗体。通过比较各种猪的IgG亚型，本发明发现猪IgG3型免疫球蛋白是所有猪品种均具有的IgG亚型，且有研究显示猪的IgG3能与FcRn受体结合，所以本发明针对猪IgG3型免疫球蛋白制备了相应的单克隆抗体。
进一步地，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
本发明进一步提供编码上述抗体重链和抗体轻链的核酸，包括用于编码所述抗体重链的核苷酸序列SEQ ID NO.12，和用于编码所述抗体轻链的核苷酸序列SEQ ID NO.13。
本发明进一步地提供含有上述核酸的生物材料，所述生物材料为试剂盒、表达载体和真核或原核宿主细胞中的一种或多种。
本发明进一步提供上述单克隆抗体在检测猪血清中IgG3方面的应用。
本发明进一步提供上述单克隆抗体在制备检测猪IgG3的药物或试剂盒中的应用。
第二方面，本发明提供一种猪IgG3的抗原表位肽，所述抗原表位肽可以和上述单克隆抗体特异性结合。
进一步地，所述抗原表位肽包括氨基酸序列为SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12和SEQID NO.13中的一种或多种的多肽。
进一步地，所述抗原表位肽的氨基酸序列为SEQ ID NO.13。
本发明提供一种猪IgG3的单克隆抗体、该单克隆抗体特异性识别的抗原表位肽及其应用，具有如下有益效果：
本发明提供的单克隆抗体特异性较高，可以特异性识别猪IgG3免疫球蛋白，特异性强，Western检测仅IgG3有条带，ELISA检测仅与IgG3有明显反应，而与其他猪免疫球蛋白亚型IgG1、IgG3、IgG5-1、IgG5-2、IgG6-1和IgG6-2的反应与转染空载体的293T细胞相当。本发明提供的特异性结合猪IgG3的单克隆抗体特异性强，灵敏度高，可以用于猪IgG3在猪相关疾病中作用的研究。
附图说明
图1为本发明实施例1提供的长白猪IgG1、IgG3、IgG5-1、IgG5-2、IgG6-1和IgG6-2核苷酸序列比对图；
图2为本发明实施例2提供的长白猪IgG1、IgG3、IgG5-1、IgG5-2和IgG6-1的真核表达示意图；
图3为本发明实施例2提供的抗猪IgG3单克隆抗体筛选结果示意图；
图4为本发明实施例3提供的4A4单克隆抗体的重链与轻链亚型检测图；
图5为本发明实施例4提供的利用Western Blot检测4A4抗体在非还原条件下对猪血清的检测结果图；
图6为本发明实施例5提供的利用ELISA检测4A4抗体在非还原条件下对猪血清的检测结果图。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
下述实施例中如无特殊说明所用方法均为常规方法，所用试剂均可从商业途径获得。
实施例1
本实施例提供一种猪IgG3的单克隆抗体杂交瘤细胞的制备方法，具体如下：
1.1抗原的制备
通过猪各IgG亚型蛋白序列比对(图1为比对情况)，获得猪IgG3特异的氨基酸位点，合成三组猪IgG3多肽‘WNSGALSRVVHTFP’，‘DVSQEEAEVQFSWY’和‘VQLYTAQTRPMEEQ’，并分别以其作为免疫原，上述多肽也均偶联了VLP以及传统KLH系统的免疫原性增强因子。
1.2免疫小鼠
每组抗原将用来免疫3只Balb/c小鼠(8-12周龄)，并监测其血清效价以决定最优的免疫次数。优化了的佐剂和免疫方法能产生针对大多数抗原多肽的高亲和力的抗体(IgG亚型)。初次免疫后会经过3到4次的加强免疫，加强免疫后将取小鼠血清检测滴度(IgG3的多肽和重组蛋白作为抗原包被)。滴度合格的小鼠将冲击一次并用于融合，不合格的小鼠将继续一到两次加强，至滴度最高后融合。
1.3血清检测和筛选
免疫小鼠眼眶取血，并用ELISA检测血清滴度(猪IgG3的多肽和重组蛋白作为抗原包被)。血清效价需大于8K，否则继续加强免疫，结果如表1所示，所有免疫的小鼠血清效价均大于8K。
表1免疫小鼠血清效价检测表
小鼠号 1K 4K 16K 64K 256K 1024K 4096K 空白孔
33147-1hz-1M1 4.000 3.467 3.060 2.467 2.064 0.379 0.105 0.047
33147-1hz-1M2 3.744 2.906 2.853 2.681 1.340 0.357 0.144 0.053
33147-1hz-1M3 4.000 3.840 3.462 2.974 1.598 0.521 0.150 0.070
33147-1hz-2M1 3.727 3.685 3.448 3.347 2.264 0.928 0.296 0.043
33147-1hz-2M2 3.877 3.877 3.643 3.360 2.133 0.808 0.259 0.037
33147-1hz-2M3 4.000 4.000 4.000 3.822 3.045 1.864 0.790 0.041
33147-1hz-3M1 3.726 3.404 2.550 1.177 0.364 0.119 0.062 0.038
33147-1hz-3M2 3.867 3.297 2.129 0.808 0.248 0.087 0.046 0.037
33147-1hz-3M3 2.762 2.532 2.085 1.100 0.329 0.120 0.064 0.042
1.4融合及筛选
取全脾和1/2的淋巴结，与骨髓瘤SP2/0细胞系融合。工艺为优化过的PEG融合。融合细胞铺到4块384孔板上(每孔细胞102到104个)，进行培养。收集所有孔的上清，用ELISA对多肽检测原进行筛选，镜检有细胞的阳性孔转到96孔板继续培养。生长几天后，收集所有孔的上清用ELISA检测与可溶片段检测原的反应。阳性孔进一步检测不同稀释度的可溶片段检测原结合，以进行亲和力排序。每个多肽免疫原亲和力最高的20个亲代克隆进入亚克隆。
1.5亚克隆及筛选
通过有限稀释法和ELISA筛选进行亚克隆，得到单克隆杂交瘤细胞。细胞铺96孔板，并培养至覆盖约1/6的底部。ELISA检测每个孔上清针对可溶片段检测原和相应多肽检测原的反应，取OD值高且细胞状态良好的两个孔进入下轮亚克隆。重复上述步骤直到孔中细胞株阳性率100％。此时我们得到单克隆细胞株。经过最后一轮亚克隆后，所有阳性细胞立即扩大培养，一部分冻存供以后使用，另一部分进行上清或腹水制备。
1.6抗体上清制备和纯化
最终获得24株单克隆细胞株，针对抗原‘WNSGALSRVVHTFP’，‘DVSQEEAEVQFSWY’和‘VQLYTAQTRPMEEQ’的分别有8株、7株和9株。后将这些单克隆细胞株通过腹部注射到F1小鼠用于抗体生产。产生的腹水用Protein A/G纯化，并用于后续检测。
实施例2
本实施例提供一种猪IgG3特异性单克隆抗体筛选方法，包括如下步骤：
2.1扩增长白猪各IgG亚型
由于猪的IgG亚型可能不会同时高表达，本发明采用先利用Taq酶从长白猪基因组中扩增IgG亚型的各个外显子，再通过融合PCR的方式扩增完整的IgG亚型。通过融合PCR的方式我们获得了长白猪的5种IgG亚型(IgG1,IgG3,IgG5-1,IgG5-2,IgG6-1)，虽然还有IgG6-2未被成功扩增，但其他5种亚型已经具备了IgG3特异氨基酸位点之外的所有其他亚型该位置的氨基酸位点。各亚型的V区及轻链扩增自一猪抗PRRSV-GP5的单克隆抗体。
2.2长白猪各IgG亚型真核表达载体构建
将扩增得到的PCR产物胶回收后，重链经NotⅠ和XhoⅠ酶切，轻链经SalⅠ和BamHⅠ酶切后连接至对应双酶切的真核表达载体pBUDCE4.1中。
2.3HEK293T细胞表达猪各IgG亚型
采用脂质体转染的方式在HEK293T细胞中共表达猪的5种IgG亚型重链和轻链表达载体。转染48h后收集细胞，利用RIPA裂解液进行裂解，再利用抗猪总IgG抗体检测这5种亚型是否表达，结果如图2所示，5种亚型均成功表达，可用于单克隆抗体的筛选。
2.4猪IgG3特异性单克隆抗体筛选
将5种亚型的细胞裂解液，在变性还原的条件下进行SDS-PAGE，完成后转印到PVDF膜上，5％脱脂奶粉封闭1h；分别利用实施例1得到的24株单克隆细胞株分泌的24种单克隆抗体小样作为一抗孵育1h，洗膜3次，每次10min；接着用HRP标记的抗小鼠IgG的二抗进行孵育1h，洗膜3次，每次10min，显影结果如图3所示，结果显示4A4号单克隆抗体特异性的针对猪IgG3，4A4单克隆抗体特异性识别VQLYT AQTRPMEEQ抗原。
实施例3
本实施例检测实施例2筛选出的单克隆抗体4A4的重链和轻链可变区的序列，具体方法如下：
3.1 4A4重链和轻链类型的确定
取100ng 4A4单克隆抗体包被至ELISA板，分别利用小鼠HRP标记的抗IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3,IgM,IgA重链抗体及抗小鼠Igκ,Igλ轻链抗体检测，结果如图4所示，4A4单克隆抗体重链为IgG2b型，轻链为Igκ型。
3.2 4A4杂交瘤RNA提取
收集一个六孔板中杂交瘤细胞，利用TriZol进行裂解，裂解完成后按照RNA
提取试剂盒说明书进行RNA的纯化。
3.3 5’RACE扩增4A4单克隆抗体可变区序列
根据小鼠IgG2b和Igκ恒定区序列设计反转录引物，一轮及二轮扩增引物。
按照Invitrogen 5’RACE试剂盒说明书进行反转录，一轮扩增，二轮扩增获得4A4重链与轻链恒定区，胶回收目的条带，连接至pMD-19T载体，转化，涂板，挑取单克隆进行PCR鉴定，选择阳性克隆进行测序，测序结果显示成功获得4A4重链与轻链的可变区序列，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。
实施例4
本实施例分别利用Western Blot检测非还原条件下猪血清中IgG3的表达，具体方法如下：
6.1利用Western Blot检测非还原条件下猪血清中IgG3的表达
取一头成年猪血清，稀释20倍后，与HEK293T细胞表达的猪IgG各亚型蛋白质同时进行非还原SDS-PAGE；完成后转印到PVDF膜上，5％脱脂奶粉封闭1h；利用4A4单克隆抗体作为一抗孵育1h，洗膜；利用HRP标记的抗小鼠IgG抗体作为二抗孵育1h，洗膜后进行检测，结果如图5所示，该单克隆抗体特异性较高，仅和猪IgG3特异性结合，显示该抗体可用于猪血清中IgG3抗体的表达检测。
6.2利用ELISA检测猪血清中IgG3的表达
取一头成年猪血清，稀释100倍后包被到ELISA板上，同时将HEK293T细胞表达的猪IgG各亚型蛋白质也包被到ELISA板上。包被完成后，利用2％脱脂奶粉进行封闭，封闭完成后利用4A4抗体作为一抗孵育1h；利用0.1％PBST洗板3次；HRP标记抗小鼠IgG抗体作为二抗孵育1h；利用0.1％PBST洗板3次；利用TMB进行显色，显色完成后利用0.18M H2SO4终止反应，利用酶标仪检测OD450的吸光值，结果如图6所示，该单克隆抗体灵敏度高，检测IgG3的OD450吸光值大于0.4,而与其他IgG亚型的反应则与转染空载的293T细胞的吸光值相当，不到0.2；特异性较高，可以和猪IgG3特异性结合，显示该抗体可用于ELISA检测猪血清中的IgG3表达情况，但由于293T细胞表达的猪IgG3与猪血清中IgG3修饰不同，导致分子量存在一定的差异。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 中国农业大学
<120> 猪IgG3的单克隆抗体、该单克隆抗体特异性识别的抗原表位肽及其应用
<130> KHP191116427.2
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atgggatgga cctggatctt tattttaatc ctgtcagtaa ctacaggtgt ccactcagag 60
gtccagctgc agcagtctgg acctgagctg gagaagcctg gcgcttcagt gaagatatcc 120
tgcagggctt ccggttactc attcactggc tacaacatga actgggtgaa acagaccaat 180
ggaaagagcc ttgagtggat tagaaatatt gatccttaca acggtggtac tatctacaac 240
cagaaattcg agggcaaggc cacattgact gtagacaaat cctccagtac agcctacatg 300
cagctcaaga gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt actgtgcaag aggggagatt 360
cggaggttcg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 414
<210> 10
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
atggattcac aggcccaggt tcttatattg ctgctgctat gggtatctgg tacctgtggg 60
gacattgtga tgtcacagtc tccatcctcc ctggctgtgt cagcaggaga gaaggtcact 120
atgagctgca aatccagtca gagtctgctc aacagtagaa cccgaaagaa ctacttggct 180
tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactactga tctacttggc atccactagg 240
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 300
atcaccagtg tgcaggctga agacctggca gtttattact gcaagcaatc ttatactctt 360
tacactttcg gaggggggac caagctggaa ataaaacgg 399
<210> 11
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Ser Arg Val Val His Thr Phe Pro
1 5 10
<210> 12
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Asp Val Ser Gln Glu Glu Ala Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr
1 5 10
<210> 13
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Val Gln Leu Tyr Thr Ala Gln Thr Arg Pro Met Glu Glu Gln
1 5 10
<210> 14
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
ggttactcat tcactggcta caac 24
<210> 15
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
attgatcctt acaacggtgg tact 24
<210> 16
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
gcaagagggg agattcggag gttcgctatg gactac 36
<210> 17
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
cagagtctgc tcaacagtag aacccgaaag aactac 36
<210> 18
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
ttggcatcc 9
<210> 19
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
aagcaatctt atactcttta cact 24

Claims (10)

1.一种猪IgG3的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体包括抗体重链和抗体轻链，
所述抗体重链的可变区的CDR包括由SEQ ID NO.1氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ IDNO.2氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO.3氨基酸序列组成的CDR3；
所述抗体轻链的可变区的CDR包括由SEQ ID NO.4氨基酸序列组成的CDR1、由SEQ IDNO.5氨基酸序列组成的CDR2和由SEQ ID NO.6氨基酸序列组成的CDR3。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体的重链为IgG2b型，轻链为Igκ型；
所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
3.一种猪IgG3的抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽可以和权利要求1或2所述的单克隆抗体特异性结合。
4.根据权利要求3所述的抗原表位肽，其特征在于，所述抗原表位肽包括氨基酸序列为SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.12和SEQ ID NO.13中的一种或多种多肽。
5.根据权利要求4所述的抗原表位肽，其特征在于所述抗原表位肽的氨基酸序列为SEQID NO.13。
6.一种核酸，其特征在于，所述核酸可以编码权利要求1或2所述抗体轻链，和/或，权利要求1或2所述抗体重链。
7.根据权利要求6所述的核酸，其特征在于，包括用于编码所述抗体重链的可变区的核苷酸序列SEQ ID NO.9，和/或，
用于编码所述抗体轻链的可变区的核苷酸序列SEQ ID NO.10。
8.含有权利要求6或7所述核酸的生物材料，所述生物材料为试剂盒、表达载体和真核或原核宿主细胞中的一种或多种。
9.权利要求1或2所述单克隆抗体在检测猪血清中IgG3方面的应用。
10.权利要求1或2所述单克隆抗体在制备检测猪IgG3的药物或试剂盒中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114805589A (zh) * 2022-06-14 2022-07-29 郑州伊美诺生物技术有限公司 可同时识别牛、山羊、绵羊抗体的单克隆抗体

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05130888A (ja) * 1991-10-07 1993-05-28 Hagiwara Yoshihide モノクローナル抗体
CN101339192A (zh) * 2008-08-28 2009-01-07 河南省农业科学院 一步检测猪病毒性腹泻疾病病原的试纸条
CN103940994A (zh) * 2013-03-15 2014-07-23 河南省农业科学院 猪水疱病、猪水疱性疹及猪水疱性口炎三联检测试纸条
CN103941003A (zh) * 2013-03-15 2014-07-23 河南省农业科学院 猪李氏杆菌、猪坏死杆菌及猪土拉杆菌三联检测试纸条

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH05130888A (ja) * 1991-10-07 1993-05-28 Hagiwara Yoshihide モノクローナル抗体
CN101339192A (zh) * 2008-08-28 2009-01-07 河南省农业科学院 一步检测猪病毒性腹泻疾病病原的试纸条
CN103940994A (zh) * 2013-03-15 2014-07-23 河南省农业科学院 猪水疱病、猪水疱性疹及猪水疱性口炎三联检测试纸条
CN103941003A (zh) * 2013-03-15 2014-07-23 河南省农业科学院 猪李氏杆菌、猪坏死杆菌及猪土拉杆菌三联检测试纸条

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HC KLUIN-NELEMANS等: "Hairy cell leukemia preferentially expresses the IgG3-subclass", 《BLOOD》 *
胡茂志等: "猪肺炎霉形体单克隆抗体的制备与鉴定", 《中国兽医科技》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114805589A (zh) * 2022-06-14 2022-07-29 郑州伊美诺生物技术有限公司 可同时识别牛、山羊、绵羊抗体的单克隆抗体
CN114805589B (zh) * 2022-06-14 2024-03-26 郑州伊美诺生物技术有限公司 可同时识别牛、山羊、绵羊抗体的单克隆抗体

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