CN112999256A - 一种抑制炎症和/或抑制病毒通路的中药组合物及其制备方法和药剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及中药技术领域，特别涉及一种抑制炎症和/或抑制病毒通路的中药组合物及其制备方法和药剂。该中药组合物由鹅不食草挥发油和乳香精油组成，鹅不食草挥发油与乳香精油的体积比为(2～8)：(1～4)。相较于常规鼻炎的治疗方法，本发明制备的鹅不食草涂剂可以通过涂剂隔离过敏原、鹅不食草挥发油、乳香精油进行抗过敏治疗，进而有效的缓解鼻炎症状，鹅不食草挥发油、乳香精油具有显著的协同效应，且无不良反应发生。

Description

一种抑制炎症和/或抑制病毒通路的中药组合物及其制备方 法和药剂

技术领域

本发明涉及中药技术领域，特别涉及一种抑制炎症和/或抑制病毒通路的中药组合物及其制备方法和药剂。

背景技术

鼻炎即鼻腔炎性疾病，是病毒、细菌、变应原、各种理化因子以及某些全身性疾病引起的鼻腔粘膜的炎性改变，急性发作时为急性鼻炎，反复发作后使鼻腔粘膜及其下层组织发生非特异性炎症时为慢性鼻炎。过敏性鼻炎是鼻炎中最常见的类型。我国鼻炎患者众多，但治愈效果大多不理想，且容易复发，使患者备受其扰。

过敏性鼻炎治疗一般包括避免接触变应原、药物治疗、免疫疗法等疗法，虽有一定疗效，但有一定的不良反应，且远期疗效不理想。如一线用药抗组胺类药物在神经系统和消化系统等方面表现出不良反应，如嗜睡、头昏、腹痛、口干等。外用药多以喷剂、滴鼻剂为主，喷剂和滴鼻剂的溶剂多采用乙醇等刺激性物质，而过敏性鼻炎患者可能存在鼻腔粘膜的损伤，所以使用后可能对鼻腔造成二次损伤。这些不良反应限制了这些药物在临床上的使用。

中医是我国文化的瑰宝，治疗鼻炎有众多宝贵的经验。中医认为鼻炎病机复杂，多为本虚标实，虚实夹杂之证。多是肺脾肾不足感受风寒之邪，或风寒之邪郁久化热所致。因此在临床治疗时应在祛风宣肺散寒的同时，注意与固护脾肾之法同用。鹅不食草味辛，性温，归肺经。具有发散风寒，通鼻窍，止咳，解毒等功效。乳香，味辛、苦，性温，归心、肝、脾经。具有活血止痛，消肿生肌功效。目前，还未见将鹅不食草挥发油与乳香精油两种活性成分联用用于制备鼻炎涂剂的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种抑制炎症和/或抑制病毒通路的中药组合物及其制备方法和药剂。本发明将鹅不食草挥发油与乳香精油两种活性成分联用，辅以对皮肤温和的乳木果油和乳木果脂作为基质同时起到隔绝过敏原及致病原的作用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种中药组合物，该中药组合物由鹅不食草挥发油和乳香精油组成，鹅不食草挥发油与乳香精油的体积比为(2～8)：(1～4)。

中医也认为鹅不食草具有散寒止痛、祛风、抗病毒、通窍止咳等功效。本发明通过对鹅不食草挥发油进行转录组测序及分析，发现鹅不食草不同提取方式获得的提取物对于炎症和病毒通路逆转效果不同，有的提取成分如通过水蒸气蒸馏法提取的鹅不食草精油不具备逆转作用，而通过乙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷或提取超临界二氧化碳萃取方法获得的提取物均具有逆转炎症和病毒通路效果，其中鹅不食草挥发油的逆转效果最优。因此优选超临界二氧化碳萃取方法获得的鹅不食草挥发油作为鼻炎涂剂成分。同时对鹅不食草挥发油的细胞毒性进行表征，发现在100μg/mL浓度及其以下，细胞的增殖活性均高于80％以上。

乳香精油被视为世界上最珍贵的精油之一，具有多重效用，包括抗肿瘤、抗衰老、抗炎、化痰、激发免疫力、镇静、舒缓呼吸等作用。有研究表明乳香精油富含α-蒎烯，而α-蒎烯能够强烈地抑制过敏性鼻炎的症状。此外乳香精油具有打开鼻腔，缓解过敏性鼻炎引起的鼻塞、流涕等不适症状。

本发明涉及一种中药鼻腔涂剂制备方法及其应用，将鹅不食草与乳香两药联用进行鼻炎涂剂制备，辅以对皮肤温和的乳木果油和乳木果脂作为基质同时起到隔绝过敏原及致病原的作用。采用转录组测序技术对鹅不食草挥发油通路研究。发现其可以显著抑制炎症和病毒信号通路，可以作为潜在的缓解鼻炎的药物。通过不同配比制备的鼻炎涂剂，经志愿者测试鼻炎症状缓解率达到80％以上，并且无不良反应产生。

作为优选，鹅不食草挥发油与乳香精油的体积比为(3～6)：(1～2)。

优选地，鹅不食草挥发油与乳香精油的体积比为(4～5)：(1～2)。

在本发明提供的具体实施例中，鹅不食草挥发油与乳香精油的体积比为3：2、2：1、5：1或6：1。但鹅不食草挥发油与乳香精油的体积比并非限定于此。

本发明还提供了该中药组合物在制备抑制炎症和/或抑制病毒通路的药剂中的应用。

在本发明提供的具体实施例中，抑制炎症为缓解鼻炎，抑制病毒通路为抗病毒。

本发明还提供了该中药组合物的制备方法，采用超临界二氧化碳萃取方法获得鹅不食草挥发油，将鹅不食草挥发油与乳香精油混合。

本发明还提供了一种中药药剂，由上述中药组合物和药学上可接受的辅料组成。

作为优选，中药药剂的剂型为片剂、丸剂、膏剂、涂剂、液体、胶囊或颗粒剂。但剂型并非限定于此。

作为优选，中药药剂的剂型为涂剂，涂剂包括如下原料：

鹅不食草挥发油200～800μL，

乳香精油100～400μL，

乳木果油10～20g，

乳木果脂2～6g。

优选地，涂剂包括如下原料：

鹅不食草挥发油300～600μL，

乳香精油100～200μL，

乳木果油10～15g，

乳木果脂3～5g。

更优选地，涂剂包括如下原料：

鹅不食草挥发油400～500μL，

乳香精油100～200μL，

乳木果油10～15g，

乳木果脂3～5g。

本发明提供了一种抑制炎症和/或抑制病毒通路的中药组合物及其制备方法和药剂。该中药组合物由鹅不食草挥发油和乳香精油组成，鹅不食草挥发油与乳香精油的体积比为(2～8)：(1～4)。本发明具有的技术效果：

(1)相较于常规鼻炎的治疗方法，本发明制备的鹅不食草涂剂可以通过涂剂隔离过敏原、鹅不食草挥发油、乳香精油进行抗过敏治疗，进而有效的缓解鼻炎症状，鹅不食草挥发油、乳香精油具有显著的协同效应，且无不良反应发生。

(2)通过比较不同方式提取的鹅不食草对于炎症通路作用效果可以看出，通过超临界二氧化碳萃取的鹅不食草挥发油成分抗炎效果最为显著。

(3)本发明中的鹅不食草挥发油在基因表达水平分析上，发现其具有明显的降低病毒相关信号通路表达的作用，相较于常规非特异性的抗病毒药物来说，潜在的抗病毒更为确切。

(4)相较于现有技术，本发明采用对皮肤温和、多用于化妆品基质材料的乳木果油和乳木果脂作为涂剂的基质材料，可以保证涂剂的温和作用，同时在鼻腔内形成一层油膜，可以起到隔绝过敏原及致病原的作用。

附图说明

图1.药物差异基因聚类分析；

图2.鹅不食草挥发油处理细胞KEGG富集通路分析；

图3.鹅不食草挥发油HPLC表征结果；

图4.鹅不食草的细胞毒性结果。

具体实施方式

本发明公开了一种抑制炎症和/或抑制病毒通路的中药组合物及其制备方法和药剂，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明中所用原料或辅料均可从商业途径得到。

下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1、THP-1炎症模型加药的转录组测序及分析：

(1)药物工作液：400、100、25μg/mL的鹅不食草提取物：554S_C(超声醇提)、554_JY(精油，水蒸气蒸馏法提取)、554_HF(挥发油，超临界二氧化碳萃取)；100、25μg/mL的鹅不食草提取物：554C(索式醇提)、554Y_C(乙酸乙酯)、554E_C(二氯甲烷)；100、10μM的鹅不食草主要成分短叶老鹤草素；100、25、10μM的阳性药物盐酸羟甲唑啉、色甘酸钠、盐酸伪麻黄碱、异丙托溴铵、依巴斯汀、地塞米松、曲尼司特及单体短叶老鹤草素；25、10μM的阳性药物孟鲁司特钠、地氯雷他定和糠酸莫美他松。

(2)将THP-1细胞以15000细胞/孔的细胞密度铺板，加入100ng/mL PMA培养24小时。

(3)向孔中同时加入1μg/mL LPS和药物工作液，同时设置正常细胞的对照孔，继续培养24h。

(4)药筛细胞的裂解，反转录及扩增建库参照相关试剂盒的使用说明进行。样品进行上机测序，采用IlluminaHiSeq X10，每个样本测1M reads，对下机数据进行分析。

(5)转录组富集聚类分析

对不同浓度及多种提取方式的鹅不食草提取物、不同浓度的阳性药物转录组富集结果进行对比，从图1可以看出400μg/mL的鹅不食草挥发油、鹅不食草超声醇提物，100μM和10μM的的短叶老鹳草素、100μM的依巴斯汀、100μg/mL的鹅不食草乙酸乙酯、挥发油、索式醇提及二氯甲烷提取物的表达模式与正常细胞模型较为相似，即这些药物可以较好的逆转炎症通路，使细胞状态接近于正常细胞状态，其中400μg/mL的鹅不食草挥发油与正常细胞的表达模型最为接近，其抑制炎症信号通路效果最为显著。而通过水蒸气蒸馏法提取的不同浓度的鹅不食草精油均不具有逆转炎症通路效果。可以看出是鹅不食草某些提取物才具有逆转炎症效果，因此优选逆转效果最优的通过超临界二氧化碳萃取的鹅不食草挥发油作为鼻炎涂剂的组成之一。

实施例2、加药模型的通路富集分析

对加药模型数据进行KEGG(Kyoto Encyclopedia ofGenes and Genomes，KEGG)通路富集分析，从通路富集的结果(图2)可以看到，加入鹅不食草挥发油处理的细胞富集通路中IL-17信号通路、趋化因子信号通路等炎性免疫通路均出现下调表达，同时也可看出甲型流感、EB病毒、巨细胞病毒、病毒蛋白与细胞因子及细胞因子受体的相互作用等病毒感染通路也出现下调表达。说明鹅不食草挥发油对于炎症相关通路和病毒感染均具有抑制作用。

实施例3、鹅不食草挥发油的表征

鹅不食草挥发油的成分进行高效液相色谱法(High Performance LiquidChromatography，HPLC)表征：采用Agilent 1260液相系统，VWD检测器。色谱条件：色谱柱，Waters，Symmetry 300TM C18，(5μm，4.6×250mm)；柱温：40℃；流速：1mL/min；检测波长：220nm；流动相：甲醇(B)-0.4％磷酸水溶液(A)。

洗脱程序如下：

表1 HPLC洗脱程序

时间(min)	A(％)	B(％)	流量(mL/min)
				0.00	65.0	35.0	1.000
55.00	15.0	85.0	1.000
				55.01	10.0	90.0	1.000
60.00	5.0	95.0	1.000

表征结果：由最终建立的图谱可明显看到15个峰(图3)，在后续生物学的过程中部分峰起到药效物质基础的作用。

实施例4、THP-1细胞毒性实验

1)中药浓缩液的配制：

取50mg鹅不食草挥发油，加入1mL二甲亚砜(Dimethylsulfoxide，DMSO)，配制成50mg/mL的浓缩液。

2)中药实验工作液的配制：

依据实验要求，用培养基将浓缩液稀释为25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL的工作液。

3)细胞铺板：

从培养箱中取THP-1细胞的培养瓶，各加1mL胰酶至培养瓶，轻晃使整个细胞面都被胰酶覆盖到，放入培养箱消化至细胞部分漂浮，加2mL完全培养基终止消化，使用巴氏吸管吹打培养基，使细胞脱落，离心，弃上清，加2mL培养基将细胞轻轻吹打混匀，细胞计数板计数。按照15000细胞/孔进行细胞铺板。置于培养箱中培养24h。

4)细胞加药：

从培养箱拿出细胞培养板，缓慢弃掉培养基。设置实验孔和对照孔，实验孔中加入不同浓度梯度的中药实验工作液100μL。以DMSO为对照孔，培养箱中培养24h。

5)细胞毒性检测

从培养箱拿出细胞培养板，缓慢弃掉培养基。加入已配制的含有CCK-8试剂(CellCounting Kit-8，简称CCK-8)完全培养基110μL。在培养箱孵育3h后用酶标仪测量(波长450nm)。实验结果如图4所示，在鹅不食草挥发油100μg/mL浓度及其以下，细胞的增殖活性均高于80％以上。

实施例5、鹅不食草涂剂的应用

(1)根据转录组分析和细胞毒性结果，将鹅不食草挥发油、乳香精油、乳木果油和乳木果脂按照一定配比(表2)组成鹅不食草涂剂：鹅不食草挥发油300-600μL；乳香精油100-200μL；乳木果油10-15g；乳木果脂3-5g。

表2鼻炎涂剂配比

药物名称	配方1	配方2	配方3	配方4	配方5	配方6	配方7
								鹅不食草挥发油	300	400	500	600	500	-	-
乳香精油	200	200	100	100	-	200	-
								乳木果油	15	10	15	10	15	15	15
乳木果脂	3	5	3	5	3	3	3

(2)制备过程：

乳木果油和乳木果脂置于烧杯混匀后置于55度水浴锅中，搅拌至完全融化；向烧杯中加入鹅不食草挥发油，搅拌混匀；将烧杯从水浴锅中取出，加入乳香精油，搅拌混匀；分装，置于4度冰箱一小时后取出，即得涂剂配方1-4；同时还制作了配方5：仅含有鹅不食草挥发油、乳木果油、乳木果脂；配方6：仅含有乳香精油、乳木果油、乳木果脂；配方7：仅含有乳木果油和乳木果脂基质对照；同时还配制了配方8：鹅不食草精油(精油，水蒸气蒸馏法提取)500μL、乳香精油100μL、乳木果油15g、乳木果脂3g。

(3)将配制的涂剂，招募一批具有过敏性鼻炎症状的志愿者随机分组进行试用，每日使用2次，每次用量约50mg，连续使用7天，依据其使用前后的感受填写问卷，问卷内容包含是否有不良反应、过敏性鼻炎症状(鼻塞、流清涕、鼻痒、喷嚏)是否缓解等。不同分组志愿者使用对应配方涂剂后均无不良反应；过敏性鼻炎症状缓解率(鼻炎症状缓解人数占总人数的比例)结果如表3所示，配方1-4缓解过敏性鼻炎症状效果显著，较仅含基质或仅含基质与鹅不食草挥发油或仅含基质与乳香精油的配方症状缓解率要高。同时比较配方3与配方8，可以看出使用超临界二氧化碳提取的鹅不食草挥发油症状缓解率效果优于使用水蒸气蒸馏法提取的鹅不食草精油配制的涂剂。

表3鼻炎涂剂试用结果

涂剂	测试人数	缓解率
			配方1	10	80％
配方2	10	90％
			配方3	10	90％
配方4	10	80％
			配方5	10	50％
配方6	10	20％
			配方7	10	10％
配方8	10	20％

(4)使用本发明后其中较为典型的3位病例进一步说明本发明的疗效：

实例一：马某，37岁，过敏性鼻炎史6年，主要症状为鼻塞流清涕。使用配方2涂抹7天后，间歇性或交互性鼻塞有效缓解，仅偶尔意识到有点鼻塞；流清涕每日擤鼻次数显著减少，由一天10次以上减少为一天3次以下。

实例二：张某，45岁，5年过敏性鼻炎史，鼻痒流涕，吃抗过敏性的药物5年鼻炎症状未缓解。经过本发明的配方3涂抹7天后，蚁行感，难以忍受的鼻炎感觉消失；流涕次数也明显减少，由一天10次以上减少为一天3次以下。

实例三：杨某，32岁，3年鼻炎史，稍遇冷空气或有点疲倦极易打喷嚏和流鼻涕，睡眠也受到极大影响。使用配方4涂抹7天后，打喷嚏症状明显减轻，未使用前一次连续喷嚏个数一般3－5个，使用后偶尔一两个；流鼻涕次数也减少很多，一晚上偶有一次或几乎没有，睡眠得到很大改善。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种中药组合物，其特征在于，由鹅不食草挥发油和乳香精油组成，所述鹅不食草挥发油与所述乳香精油的体积比为(2～8)：(1～4)。

2.根据权利要求1所述中药组合物，其特征在于，所述鹅不食草挥发油与所述乳香精油的体积比为(3～6)：(1～2)。

3.根据权利要求1所述中药组合物，其特征在于，所述鹅不食草挥发油与所述乳香精油的体积比为(4～5)：(1～2)。

4.权利要求1至3中任一项所述中药组合物在制备抑制炎症和/或抑制病毒通路的药剂中的应用。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述抑制炎症为缓解鼻炎，所述抑制病毒通路为抗病毒。

6.权利要求1至3中任一项所述中药组合物的制备方法，其特征在于，采用超临界二氧化碳萃取方法获得鹅不食草挥发油，将鹅不食草挥发油与乳香精油混合。

7.一种中药药剂，其特征在于，由权利要求1至3中任一项所述中药组合物和药学上可接受的辅料组成。

8.根据权利要求7所述的中药药剂，其特征在于，所述中药药剂的剂型为片剂、丸剂、膏剂、涂剂、液体、胶囊或颗粒剂。

9.根据权利要求8所述的中药药剂，其特征在于，所述中药药剂的剂型为涂剂，所述涂剂包括如下原料：

鹅不食草挥发油200～800μL，

乳香精油100～400μL，

乳木果油10～20g，

乳木果脂2～6g。

10.根据权利要求9所述的中药药剂，其特征在于，所述涂剂包括如下原料：

鹅不食草挥发油300～600μL，

乳香精油100～200μL，

乳木果油10～15g，

乳木果脂3～5g。

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