CN112999154B - 一种可发生柔性形变的白蛋白水包油乳液及其制备方法和应用 - Google Patents

一种可发生柔性形变的白蛋白水包油乳液及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种可发生柔性形变的白蛋白水包油乳液及其制备方法和应用。所述白蛋白水包油乳液包括油相、水相和白蛋白；所述白蛋白分散在所述水相中和/或吸附在油水界面。本发明所述的乳液是一种白蛋白稳定的、可以发生柔性形变的水包油乳液，其具备仿生的柔性，可以通过变形穿过组织间隙，从而实现更强的组织渗透效果。将白蛋白与水包油乳液结合制备具有变形性可增强组织渗透性的水包油乳液，应用于药物佐剂或载体等领域，能够提升淋巴结递送和组织渗透效率，提高疫苗或药物的有效性。

Description

一种可发生柔性形变的白蛋白水包油乳液及其制备方法和 应用
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种白蛋白水包油乳液及其制备方法和应用，尤其涉及一种可以发生柔性形变、增强组织渗透性、适用于人或其他动物体内的白蛋白水包油乳液及其制备方法和应用。
背景技术
一些药物或者疫苗无法达到预期的效果，很大程度是由于药物、疫苗等生物活性物质无法有效地渗透到病灶或组织。合理化设计的疫苗或药物载体，在高效组装生物活性物质的同时，也具有较好的组织渗透效率；例如，疫苗载体携带抗原可促进淋巴结靶向递送、药物装载抗癌药物(紫杉醇等)实现瘤内富集、粘膜递送载体以强化药物的跨粘膜效果实现高效递送等。
载体的递送效率与其本身的理化性质有关，如尺寸、电荷、或表面性质，如亲疏水性、表面配体密度等。以载体尺寸为例，直径小于10nm的载体，进入机体后会经过血管内皮细胞间隙进入血管随血液循环或者被清除；直径为20～100nm的载体，注射后会穿过淋巴管内皮细胞间隙进入淋巴管富集至淋巴结；直径大于200nm的载体在注射部位募集抗原递呈细胞(APC)经过细胞途径迁移至淋巴结。但目前尚且缺乏能够直接富集至淋巴结，同时又能够在注射部位形成抗原储库募集抗原递呈细胞迁移至淋巴结。此外，在研究的过程中，研究人员大多忽略了载体的柔性对于组织渗透效果的影响。
非表面活性剂稳定的乳液普遍采用不具有生物相容性的固体颗粒或油相制备，因此其在生物医药领域的应用受到限制。例如，CN101445580A公开了一种乳液聚合制备聚乙烯/二氧化硅壳核结构复合材料的方法，利用二氧化硅纳米粒作为固体颗粒，但其中含有乙酸乙酯以及甲苯所溶解的催化剂，最后加入乙烯，得到聚乙烯/二氧化硅乳液。该体系中的二氧化硅和甲苯在临床上应用都受到限制，该乳液无法直接在生物医药领域应用。
白蛋白是含有585个氨基酸残基的单一多肽链，具备氨基羧基巯基等功能基团，可在其表面进行多种修饰。基于白蛋白的载体已经在临床中得到了广泛的应用，由于其具备良好的生物安全性，目前白蛋白主要用于制备纳米颗粒。白蛋白纳米颗粒一般用于血液病患者等的出血治疗，或者在颗粒内部或者表面装载紫杉醇用于癌症治疗。例如CN107456573A公开了一种血液病患者和癌症患者的出血治疗的方法，其中，提供了一种纤维蛋白原包覆的白蛋白球，能够治疗有出血倾向的患者的出血症状；CN111166723A公开了一种人血清白蛋白-人参皂苷-紫杉醇纳米颗粒及其制备和应用，利用白蛋白颗粒作为药物递送载体，用于抗肿瘤治疗。
此外，CN109247425A公开了一种具有双壳结构的卵白蛋白乳液的制备方法，利用卵清白蛋白(OVA)和菊粉与油相置于高速剪切仪下剪切后高压微射流均质多次，得到卵白蛋白乳液。乳液中引入了柠檬酸亚锡二钠和富马酸亚铁中的铁离子，提高了乳液稳定性，兼具保健效果。但是，该发明中所述卵白蛋白乳液并不适用于作为药物载体进行使用。
因此，提供一种根据疫苗或药物制剂的需求来进行设计、优化以增强药物或者疫苗的组织渗透性的药物递送系统对本领域而言具有重要意义。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种可发生柔性形变的白蛋白水包油乳液及其制备方法和应用。所述白蛋白水包油乳液生物安全性高，对人体的毒副作用小；且所述乳液由于其粗糙的表面和油性内核，具备显著的柔性形变能力，能够在间质压的作用下变形穿过细胞或组织间隙，提升淋巴结递送和组织渗透效率。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供一种可发生柔性形变的白蛋白水包油乳液，所述白蛋白水包油乳液包括油相、水相和白蛋白；所述白蛋白分散在所述水相中和/或吸附在油水界面。
本发明提出一种白蛋白稳定的、可以发生柔性形变变形的水包油乳液，其具备仿生的柔性，可以通过变形穿过组织间隙，从而实现更强的组织渗透效果；所述水包油乳液具备油核，可以在组织液的冲击下在细胞缝隙中发生形变，进而实现组织渗透；所述白蛋白水包油乳液可作为强化淋巴结富集、肿瘤渗透以及粘膜递送的新剂型，是一种新型的疫苗及药物递送或缓控释载体。
所述白蛋白水包油乳液中，具有较小粒径的白蛋白在油水界面排布间隙较小，能够在界面处达到更加密集的排布，形成白蛋白单层或多层结构，从而为制备稳定的白蛋白水包油乳液提供了基础；同时，白蛋白的加入，不仅可以提高制剂的生物相容性和安全性，并且能够更加有效地延长疫苗制剂的半衰期；同时，白蛋白含有氨基羧基等功能基团，可以对其进行表面修饰或覆层，发挥不同的免疫增强机制，以及对抗原进行包埋、吸附或偶联，作为抗原的运送载体，利用其抗原控制释放的能力来调节免疫应答，还可以应用于多种免疫接种方式。
本发明中，白蛋白水包油乳液的主要免疫增强机制包括：
(1)白蛋白对抗原进行吸附或包埋，则该水包油乳液可起到延缓抗原释放速度，保护抗原不被水解，延长抗原在体内滞留时间，有利于高亲和力抗体的产生；
(2)白蛋白对抗原进行吸附或包埋，可增加抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬；
(3)合成的具有双亲性的抗原可以嵌插在乳液油水界面，提升抗原的装载率；
(4)所述水包油乳液抗原能够横向流动，从而动态激活免疫响应；
(5)所述水包油乳液含有柔性界面，与细胞接触的过程中能够增大接触面积从而增强与细胞的相互作用；
(6)白蛋白乳液具备的变形性可以直接高效地富集至淋巴结，促进与淋巴结中的免疫细胞直接相互作用，引起特定免疫细胞的增殖激活；
(7)白蛋白水包油乳液还可在注射部位引起轻微的炎症反应，募集炎症细胞，刺激炎症因子的分泌，激活免疫反应；
(8)白蛋白表面修饰正电荷，吸附或包埋抗原后，可实现抗原的溶酶体逃逸，增强细胞免疫应答。
作为本发明优选的技术方案，所述白蛋白水包油乳液的杨氏模量为10～60MPa，例如10MPa、20MPa、30MPa、40MPa、50MPa或60MPa等，优选为25～50MPa。
本发明中所述的水包油乳液具有柔性形变的能力，杨氏模量是表征在弹性限度内物质材料抗拉或抗压的物理量，是沿纵向的弹性模量，在物体的弹性限度内，应力与应变的比值为材料的杨氏模量，它是表征材料性质的一个物理量，杨氏模量越小越容易发生形变。
优选地，所述白蛋白水包油乳液的油水两相体积比为1:(1～100)，例如可以是1:1、1:5、1:10、1:15、1:20、1:25、1:30、1:35、1:40、1:45、1:50、1:55、1:60、1:65、1:70、1:75、1:80、1:85、1:90、1:95或1:100等，优选为1:(2～50)。
本发明中，所述油水两相体积比较为重要，若是不在此范围内，可能会导致所得水包油乳液的形变能力较差，进而影响白蛋白水包油乳液的负载、渗透等功能。
优选地，所述白蛋白水包油乳液中乳滴的平均粒径为50nm～100μm，例如100nm、300nm、600nm、1μm、30μm、50μm、80μm、100μm，所述白蛋白水包油乳液中乳滴的平均粒径的选择，与其所作用的组织相匹配，优选为100nm～10μm。
优选地，所述白蛋白的分子量为65～69kDa，例如可以是65kDa、65.5kDa、66kDa、66.5kDa、67kDa、67.5kDa、68kDa、68.5kDa或69kDa等。
优选地，所述白蛋白粒径分布系数PDI值低于1.0，白蛋白溶液的PDI值通过动态光散射得出。
优选地，所述白蛋白在水相中的质量浓度为0.1～20wt％，例如为0.1wt％、0.5wt％、5wt％、6wt％、7wt％、10wt％、15wt％或20wt％，优选为0.5～10wt％，进一步优选为1～8wt％，所述白蛋白在水相中的质量浓度为白蛋白的质量除以白蛋白和水相质量和的比值。
作为本发明优选的技术方案，所述白蛋白包括天然血清蛋白和/或人工合成血清蛋白，进一步优选为人血清白蛋白、牛血清白蛋白或鼠血清白蛋白中的任意一种。本发明中所述白蛋白可通过购买商品化试剂获得，将白蛋白保存在水溶液或缓冲溶液中以备后续使用。
优选地，所述白蛋白表面经过修饰，所述修饰包括亲水修饰、疏水修饰、覆层或接枝改性中的任意一种或至少两种的组合。
本发明中所述水包油乳液中的白蛋白可稳定分散于油水两相界面，起到稳定乳液的作用。针对不同的油水体系，可选择在白蛋白表面进行不同程度的亲疏水性修饰以稳定乳液，也可对白蛋白表面可以进行覆层或接枝改性等，以获得适宜的电荷性质或者亲疏水性。
优选地，所述白蛋白携带功能基团，所述功能基团如氨基、羧基、巯基等能够在表面或内部吸附、偶联或包埋靶向配体、荧光标记物、同位素标记物、环境响应物质、细胞因子、抗体和免疫调节剂等物质。利用其作为抗原的输送系统时，可提高抗原的稳定性，促进抗原提呈细胞对抗原的摄取，增强免疫应答。
作为本发明优选的技术方案，所述油相为任何对机体无毒且可以在机体内代谢的油脂类物质，包括角鲨烯、橄榄油、大豆油、维生素E(生育酚)、油酸乙酯、油酸、乳酸乙酯、二甲基硅油、月桂酸异丙酯或癸酸甘油三酯中的任意一种或者至少两种的组合，进一步优选为角鲨烯、橄榄油或二甲基硅油中的任意一种或者至少两种的组合，更优选为角鲨烯。
角鲨烯(Squalene)是一种三萜类化合物，分子结构为三十碳五十氢的异戊二烯，CAS：111-02-4，分子质量：410.72，可来源于动物、植物提取或化学合成。角鲨烯是一种可代谢的油，因为它是胆固醇的生物合成的中间产物，是一种所有高等生物，包括在人类身上(皮脂中可以找到)自然分泌的油脂。含有角鲨烯的乳液(含表面活性剂)在动物实验和临床实验上表现出优异的免疫增强作用。
优选地，所述水相包括纯化水、注射用水、磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液中的任意一种或者至少两种的组合。
优选地，所述磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液的pH值为5.0～8.1，例如5.0、5.2、5.6、5.8、6.2、6.6、7、7.4、7.8或8.1，优选为6.0～8.0。
本发明中，所述白蛋白水包油乳液的水相可以是PBS缓冲液，油相可以是角鲨烯；此外，白蛋白水包油乳液的组分还可以是如表1所示的各物质：
表1
Figure GDA0003568993550000071
作为本发明优选的技术方案，所述白蛋白水包油乳液还包括无机盐、多糖、嵌段共聚物或脂质体分子中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、氢氧化铝、碳酸钙任意一种或者至少两种的组合。
优选地，所述多糖包括蔗糖、D-海藻糖、甘露糖、淀粉或明胶中任意一种或者至少两种的组合。
优选地，所述嵌段共聚物或脂质体分子包括双十二烷基二甲基溴化铵、十二烷基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十六烷基溴化吡啶、阳离子聚丙烯酰胺、聚合氯化铝、十八烷基胺聚氧乙烯醚双季铵盐、DSPE-PEG-脂质体、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱、1,2-二棕榈酰基-sn-丙三基-3-和磷酸乙氨醇、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基铵-氯盐或1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸甘油中任意一种或者至少两种的混合物。
作为本发明优选的技术方案，所述白蛋白水包油乳液还包括药用添加剂。
优选地，所述药用添加剂包括稀释剂、稳定剂或防腐剂中的任意一种或者至少两种的组合。
优选地，所述油相中的药用添加剂包括疏水性药物，优选为紫杉醇、全反式维甲酸、阿那曲唑或阿霉素中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述水相中的药用添加剂包括亲水性药物，优选为来曲唑、白介素或干扰素中的任意一种或至少两种的组合。
作为本发明优选的技术方案，所述白蛋白水包油乳液还包括免疫活性物质。
本发明中，所述水包油乳液可添加免疫活性物质进而作为一种免疫药物佐剂实验；例如，联合免疫检查点抑制剂(如anti-PD1)，结合其柔性形变能力，增强肿瘤渗透，提升免疫效果。
优选地，所述免疫活性物质组装或分散在所述白蛋白水包油乳液的水相和/或油水界面。
优选地，所述免疫活性物质包括单磷酰脂质A、CpG或溶菌酶中的任意一种或者至少两种的组合。
优选地，所述免疫活性物质包括单磷酰脂质A、模式识别受体(例如Toll样受体、RIG-1和NOD样受体(NLR)的刺激剂)，含CpG基序的寡核苷酸或双链RNA，细胞因子、趋化因子或溶菌酶中任意一种或者至少两种的组合。
其中，细胞因子包括但不限于：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、干扰素(如干扰素-α(IFN-α)、干扰素-β(IFN-β)、干扰素-γ(IFN-γ等)、白细胞介素(如白细胞介素-1α(IL-1α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-7(IL-7)、白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-15(IL-15)、白细胞介素-18(IL-18))、胎儿肝酪氨酸激酶3配体(FIt3L)或肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等。
第二方面，本发明提供一种如第一方面所述的白蛋白水包油乳液的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
制备分散有白蛋白的水相悬浮液，再将所述水相悬浮液与油相混合，乳化，得到所述白蛋白水包油乳液。
本发明中所述水包油乳液可采用多种方法制备。例如：先将白蛋白分散在水相中，然后将油相和水相混合进行制备得到，其分散方式可以选择振荡、搅拌、超声(Ultrasonicdispersion)等多种方式，以实现水相中的良好分散。
优选地，所述乳化的方法包括超声乳化。
本发明中所述水包油乳液中的白蛋白、油相、水相可以分别独立包装，在应用前根据前述制备方法临时混合，也可以根据前述制备方法事先混合其中的两种或三种。
本发明中，所述水包油乳液的灭菌方式优选采用过滤除菌的方式。
第三方面，本发明还提供一种疫苗，所述疫苗包括载体和抗原，所述载体为如第一方面所述的白蛋白水包油乳液，所述抗原组装或分散在所述白蛋白水包油乳液的水相和/或油水界面。
本发明中所述的水包油乳液，所述水相或者油水界面共组装或者含有单价或多价抗原，可作为一种新型疫苗载体。所述含有抗原的水包油乳液可以通过柔性变形能力，提升组织渗透效率，强化淋巴结富集、肿瘤渗透以及粘膜递送。
优选地，所述抗原包括单价抗原和/或多价抗原。
优选地，所述抗原包括肿瘤抗原、细菌抗原、真菌抗原、病毒抗原或寄生虫抗原中的任意一种或者至少两种的组合，例如幽门螺旋杆菌抗原等，所选肿瘤抗原可来自人类抗原或者非人类抗原。
优选地，所述抗原包括化学合成的抗原、鸡胚培养的抗原、细胞培养的抗原、来自携带者体液的抗原、器官或组织中纯化分离所得的抗原或重组基因表达的抗原，优选为合成肽抗原。
优选地，所述抗原的N端或C端偶联荧光标记物或修饰脂质链。
优选地，所述脂质链包括疏水性的单链、多接枝的碳链或嵌段共聚物中的任意一种或者至少两种的组合，例如棕榈酸修饰合成肽抗原利于抗原嵌插在乳液油水界面。
优选地，所述疫苗包括重组亚单位疫苗、减毒疫苗、灭活疫苗、裂解疫苗、多糖结合疫苗或核酸疫苗中的任意一种或者至少两种的组合。
优选地，所述疫苗的免疫接种方式包括静脉注射、脊椎腔注射、肌内注射、皮下注射、皮内注射、经呼吸道喷入或吸入、腹腔注射、经鼻给药、经眼给药、经口给药、直肠给药、阴道给药、局部给药或透皮给药中的任意一种或者至少两种的组合。
当水包油乳液中含有抗原时，所述水包油乳液可以和抗原独立包装，在免疫接种前临时混合或在较短的时间间隔内(通常为1小时以内，包含1小时)接种到同一部位，也可预先根据前述制备方法先混合后包装，在免疫接种时可以直接应用。
第四方面，本发明还提供一种如第一方面所述的白蛋白水包油乳液作为药物缓释系统、药物递送系统或药物载体在制备疫苗或药物中的应用。
本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明中使用白蛋白制备水包油乳液，所得乳液具有如下优势：生物安全性高，对人体的毒副作用小；制备方法简单快速，成本低，易于大规模生产；白蛋白粒径小，能够在油水界面达到更密集的排布，从而制备更稳定的乳液；白蛋白由于在血浆中含量丰富，能够显著延长乳液的半衰期；乳液由于其粗糙的表面和油性内核，具备显著的柔性形变能力，能够在间质压的作用下变形穿过细胞或组织间隙，提升淋巴结递送和组织渗透效率。本发明首次将白蛋白与油乳制剂(水包油乳液)结合制备具有变形性可增强组织渗透性的水包油乳液，应用于疫苗佐剂的开发领域，对于提高疫苗或药物的有效性而言具有重要的意义。
(2)本发明中白蛋白水包油乳液还可用于药物递送或缓控释载体，将脂溶性的药物、荧光标记物或其他生物活性物质分散在油相中，通过在白蛋白表面或内部偶联、或修饰靶向物质(如叶酸、甘露糖等)，用于药物、荧光标记物或其他生物活性物质的靶向递送。因此，本发明中公开的可变形的白蛋白水包油乳液既可作为疫苗的免疫佐剂，又可作为药物或其他生物活性物质的递送或缓控释载体。
附图说明
图1为实施例1中使用的白蛋白的粒径分布图。
图2为实施例1中制备的白蛋白水包油乳液的粒径分布图。
图3为实施例1中制备的白蛋白水包油乳液在离心前后的对比图；其中，I图为离心前，II图为离心后。
图4为实施例1中制备的白蛋白水包油乳液的光镜图(标尺2μm)。
图5为对比例1中制备的白蛋白颗粒的扫描电镜图。
图6为实施例1中制备的白蛋白水包油乳液在变形前后的形态示意图；其中，I图为变形前，II图为变形后。
图7为实施例1中制备的白蛋白水包油乳液的杨氏模量频率分布图。
图8(a)为实施例3中共聚焦显微镜下白蛋白水包油乳液在不同荧光强度下的相对频率检测结果图；其中，I图为6小时的相对频率检测结果图，II图为18小时的相对频率检测结果图。
图8(b)为实施例3中共聚焦显微镜下白蛋白颗粒在不同荧光强度下的相对频率检测结果图；其中，其中，I图为6小时的相对频率检测结果图，II图为18小时的相对频率检测结果图。
图9为实施例6中紫杉醇浓度随时间变化的曲线图。
图10为实施例7中不同实验组下小鼠生存率随时间变化的曲线图。
具体实施方式
下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但下述的实例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。
以下实施例中，所用试剂和耗材如下表2所示，所用仪器如下表3所示；若无特殊说明，其他未提及的试剂及耗材均购自本领域常规试剂厂商。
表2
Figure GDA0003568993550000131
Figure GDA0003568993550000141
表3
Figure GDA0003568993550000142
Figure GDA0003568993550000151
以下实施例中，所用实验方法及检测方法如下：
(1)乳滴的粒径与电位分布测定
乳滴的粒径与电位分布通过动态光散射采用Zeta电位及粒度分析仪进行测定，具体测定步骤为：将1～12mg白蛋白，加入1～5mL PBS中，超声5min使其均匀分散，或将制备好的乳液稀释50～100倍，取稀释后的乳液1～2mL加入到样品池中，放入Zeta电位仪及粒度仪(Nano Zeta Sizer，Malvern)中进行测定。
(2)乳滴的形貌、均一性和稳定性测定
乳滴的形貌观察采用光学显微镜：吸取少量水包油乳液，滴于载玻片上，置于光学显微镜下观察；
均一性由粒径分布系数PDI值表示，其值越小表明乳滴粒径越均一；
乳液的稳定性采用离心法检测：取5～10mL水包油乳液，加入15～50mL离心管中，在2000g离心力作用下离心10min后，观察分层情况。
(3)乳滴上吸附抗原或药物的吸附率的测定
取出吸附抗原或药物后的乳液，离心取下清(根据乳液的大小和密度选择合适的离心条件)，测量下清中抗原或药物浓度，从而间接计算出吸附到乳液表面的抗原或药物的量；
抗原或药物含量采用BCA或micro-BCA试剂盒或其他适宜的检测方法测定；抗原或药物吸附率按以下公式计算：
吸附率＝(吸附前抗原或药物浓度—吸附后下清中抗原或药物浓度)/吸附前抗原或药物浓度×100％
(4)动物实验测定
实验所采用的C57BL/6小鼠由维通利华公司提供。所涉及的免疫步骤基本如下：
a、先将小鼠随机分组，每组采用6只以上的小鼠进行实验，根据实施例的具体说明对小鼠进行分组和免疫接种。取小鼠注射部位(尽量取注射部位与淋巴结中间部分)，进行冷冻切片处理，免疫荧光组化，观察荧光抗原在肌肉组织中分布情况。通过切片判断乳液进入淋巴管的方式，确定乳液本身具有的变形性。
b、先将小鼠随机分组，每组采用6只以上的小鼠进行实验，根据实施例的具体说明对小鼠进行分组和免疫接种。取小鼠淋巴结，利用小动物体外成像系统分析淋巴结肿荧光抗原强度；同时对淋巴结进行冷冻切片处理，免疫荧光组化，观察荧光抗原在淋巴结中纵深分布情况，验证乳液变形与细胞途径双通道对于淋巴结富集的优势。
c、先将小鼠随机分组，每组采用6只以上的小鼠进行实验，根据实施例的具体说明对小鼠进行分组和免疫接种。28天后取小鼠脾细胞进行培养，用酶联斑点(Elispot)检测小鼠脾细胞的IL-4和IFN-γ细胞因子的分泌情况。
d、先将小鼠随机分组，每组采用6只以上的小鼠进行实验，根据实施例的具体说明对小鼠进行分组和免疫接种。28天后对小鼠进行眼眶取血，离心，10,000g，10min，用酶联免疫吸附(ELISA)检测小鼠血清中的抗体的分泌情况。
e、先将小鼠随机分组，每组采用6只以上的小鼠进行实验，根据实施例的具体说明对小鼠进行分组、肿瘤和免疫接种。间隔一天测量肿瘤体积，统计治疗肿瘤效果。
实施例1
本实施例基于白蛋白制备水包油乳液，具体制备方法如下：
(1)白蛋白粒径分布测量：
采用电子天平准确称取8mg的白蛋白(分子量约为67千道尔顿)，溶于1mL的PBS中，通过动态光散射测定白蛋白的平均粒径为7.4nm；
其中，白蛋白的粒径分布图如图1所示。
(2)白蛋白水包油乳液制备：
准确称取7.2mg白蛋白，加入到900μL PBS中，超声1min使其分散均匀，得到分散有白蛋白的水相悬浮液，所得水相悬浮液的pH值为7.4；
用移液枪吸取100μL角鲨烯加入到上述水相悬浮液中，采用超声(100W，2min，超4秒停4秒)乳化的方法，制备水包油乳液。
其中，白蛋白水包油乳液的粒径分布图如图2所示，乳液在离心前后的照片如图3所示，乳液的光镜图如图4所示；所得乳滴分散性良好，球形规整，乳滴的平均粒径为350nm，PDI为0.295，所制备水包油乳液的外观与未离心乳液无差异，上层无油相析出。
对比例1
本对比例中提供了一种白蛋白颗粒及其制备方法，使用其作为对比例与实施例1中制备的白蛋白水包油乳液进行比较。
具体制备方法如下：
使用pH值为9.8的10mM NaCl水溶液作为缓冲液制备20mg/mL白蛋白溶液；
2mL白蛋白溶液与2mL无水乙醇混合，磁力搅拌10分钟，然后以2mL/min的速度滴加4mL无水乙醇(总乙醇:白蛋白＝3:1体积比)；
加入160μL的8％戊二醛水溶液，交联并固化24小时；
将获得的样品以2,000g离心20分钟，再将上清液以20,000g离心20min，并将获得的样品洗涤两次以获得固体白蛋白颗粒；
本对比例中通过所述的缓冲液种类、pH和制备条件得到了与白蛋白乳液粒径相近的白蛋白颗粒；所得白蛋白颗粒的扫描电镜图如图5所示。
实施例2
本实施例用于检测白蛋白水包油乳液的杨氏模量。具体方法如下：
用疏水笔在带正电荷的载玻片上画一个圈，将实施例1中制备好的乳液滴载玻片所画的圈中，2min后，用去离子水冲洗多余的乳液后，滴一滴去离子水在乳液表面；
将载玻片放置在样品台上，调节至合适位置，在液体环境中，原子力显微镜选择接触模式，找到样本后，选择合适的区域测量压痕力曲线。
根据Sneddon模型计算得出其杨氏模量。
白蛋白水包油乳液在变形前后的形态如图6所示；白蛋白水包油乳液的杨氏模量频率分布图如图7所示，白蛋白水包油乳液的杨氏模量在25～50MPa左右。
实施例3
本实施例用于表征可变形的白蛋白水包油乳液的组织渗透性能。具体方法如下：
将小鼠随机分组，每组采用6只小鼠进行实验，用Cy5标记抗原。
以实施例1所述方法制备白蛋白水包油乳液，以对比例1所述方法制备白蛋白颗粒，分别与抗原复配后进行肌肉注射。
于6小时、18小时取小鼠注射部位(尽量取注射部位与淋巴结中间部分)，进行冷冻切片处理，随后做免疫荧光组化，标记细胞骨架与淋巴管内皮细胞骨架，观察荧光抗原在肌肉组织和淋巴管内分布情况。
通过共聚焦显微镜观察切片，判断乳液进入淋巴管的方式。
根据实验结果可知，白蛋白颗粒具备刚性，且粒径较大，无法扩散进入淋巴管，在注射后，需要募集注射部位的抗原递呈细胞递呈抗原以进入淋巴管，所需时间较；
而白蛋白乳液具备柔性特征，即使在较大粒径条件下，也可以在间质流的作用下，通过自身的变形性穿过淋巴管内皮细胞间隙，该途径时间较短；此外，由于其较大的粒径，也能在注射部位形成抗原储库，募集注射部位的抗原递呈细胞迁移至淋巴结，该途径用时较长。
白蛋白水包油乳液采用双途径进入淋巴管，从切片中抗原的荧光强度可以看出，白蛋白乳液组如图8(a)所示，在6小时(I图)和18小时(II图)内切片荧光强度都较高；
而白蛋白颗粒组如图8(b)所示，在6小时(I图)内切片荧光强度较低，仅在18小时(II图)的时间内切片荧光强度较高；
因此，本实施例中进一步确定了白蛋白水包油乳液本身具有的变形性，且所述变形性能够提高其组织渗透性能。
实施例4
本实施例用于表征白蛋白水包油乳液的淋巴结递送效果。具体方法如下：
将小鼠随机分组，每组采用6只小鼠进行实验，将带有相同抗原和白蛋白浓度的白蛋白颗粒和白蛋白水包油乳液分别肌肉注射；
取小鼠淋巴结，利用小动物成像系统成像并进行冷冻切片处理，免疫荧光组化，其中抗原带有Cy5标记，同时标记细胞核，观察荧光抗原在淋巴结内分布情况。
通过共聚焦显微镜观察切片判断乳液进入淋巴结纵深分布情况。
在注射24小时后，小动物荧光成像数据如表4所示。
表4
样品 淋巴结抗原荧光强度
采用实施例1所述方法制备的白蛋白水包油乳液 1672012000
采用对比例1所述方法制备的白蛋白颗粒 520101321
根据成像数据可以看出，由于可变性，白蛋白水包油乳液比白蛋白颗粒具备更强的淋巴结富集效果。
实施例5
本实施例用于比较实施例1提供的白蛋白水包油乳液、MF59佐剂与不完全弗氏佐剂的佐剂作用。
分别将等体积等抗原浓度的白蛋白乳液水包油、MF59佐剂与不完全弗氏佐剂对C57BL/6小鼠进行肌肉注射免疫接种；
分别取不同组小鼠不同时间段的肌肉与淋巴结，冷冻切片处理，观察荧光强度；同时将淋巴结研磨处理，流式表征细胞因子。
所得结果如表5所示：
表5
佐剂种类 IL-4(％) IFN-γ(％)
白蛋白水包油乳液 2.53 4.19
MF59 1.88 2.29
不完全弗氏佐剂 2.32 3.14
结果表明，本发明的白蛋白水包油乳液可以显著提高机体对癌症疫苗的体液免疫应答水平及细胞免疫水平。
白蛋白水包油乳液在体液免疫方面的增强效果略高于不完全弗氏佐剂与MF59佐剂，三者均高于不加佐剂的疫苗；在细胞免疫方面，水包油乳液组优于MF59及不完全弗氏佐剂组，这主要是由于白蛋白水包油乳液中的颗粒可促进抗原被抗原提呈细胞内吞，同时其变形性也促进了乳液直接向淋巴结的富集从而直接作用于淋巴结内的淋巴细胞，并激活淋巴细胞刺激其分化并分泌细胞因子，同时与CD8 T细胞相互作用，引起T细胞的增殖与活化，增强细胞免疫效应。
实施例6
本实施例中将白蛋白水包油乳液作为药物释放载体。
按照实施例1制备白蛋白水包油乳液，区别在于，油相中额外加入质量浓度为0.5wt％的紫杉醇，不同时间段高速离心后检测下清液中药物浓度，计算可得出紫杉醇的缓控释放曲线；
如图9所示，证明白蛋白乳液可以作为药物的缓控释放载体。
实施例7
本实施例中白蛋白水包油乳液作为药物递送载体。
实验组1：按照实施例1制备白蛋白水包油乳液，区别仅在于，油相中额外加入质量浓度为0.5wt％的紫杉醇；
实验组2：按照实施例1制备白蛋白水包油乳液，区别仅在于，油相中额外加入质量浓度为0.5wt％的阿霉素；
实验组3：按照实施例1制备白蛋白水包油乳液，区别仅在于，水相中加入质量浓度为0.5wt％的白介素；
加入药物的乳液组对小鼠进行免疫接种，用于抗肿瘤治疗，同时与单独使用药物的小鼠进行比较：
接种后抗肿瘤结果如图10所示，图中单纯药物组从左至右分别表示白介素、阿霉素和紫杉醇，实验组即白蛋白乳液与药物混合组，从左至右也分别表示白介素、阿霉素和紫杉醇；
因此，由图可知，本实施例中，白蛋白乳液和药物相互配合，能够明显延长小鼠的存活时间；白蛋白水包油乳液可以增加药物的半衰期，增强药物作用，减少药物的总使用量。
实施例8
本实施例中将白蛋白水包油乳液用于粘膜免疫。
按照实施例1制备白蛋白水包油乳液，免疫滴鼻小鼠，所得IgA抗体滴度如表6所示：
表6
实验组别 IgA抗体滴度
单纯抗原 22
白蛋白颗粒 23
白蛋白乳液 28
由于白蛋白水包油乳液的变形性，促进鼻黏膜组渗透性，可以增加粘膜渗透效率，强化粘膜免疫响应，增加抗体滴度。
综上所述，本发明中提供了一种白蛋白水包油乳液，所述乳液具有变形性，可发生柔性形变，能够增强其组织渗透性，利用所述乳液制备的疫苗或者药物能够更好的渗透到目标组织中；此外，所述白蛋白水包油乳液还可用于药物递送或缓控释载体，达到药物运输和缓释的效果。
申请人声明，以上所述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，所属技术领域的技术人员应该明了，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (43)

1.一种可发生柔性形变穿过组织间隙的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白水包油乳液包括油相、水相和白蛋白；
所述白蛋白分散在所述水相中和/或吸附在油水界面；
所述白蛋白水包油乳液的杨氏模量为10～60MPa；
所述白蛋白的分子量为65～69kDa；
所述白蛋白在水相中的质量浓度为0.1～20wt％。
2.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白水包油乳液的杨氏模量为25～50MPa。
3.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白水包油乳液的油水两相体积比为1:(1～100)。
4.根据权利要求3所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白水包油乳液的油水两相体积比为1:(2～50)。
5.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白水包油乳液中乳滴的平均粒径为50nm～100μm。
6.根据权利要求5所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白水包油乳液中乳滴的平均粒径为100nm～10μm。
7.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白粒径分布系数PDI值低于1.0。
8.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白在水相中的质量浓度为0.5～10wt％。
9.根据权利要求8所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白在水相中的质量浓度为1～8wt％。
10.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白包括天然血清蛋白和/或人工合成血清蛋白。
11.根据权利要求10所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白为人血清白蛋白、牛血清白蛋白或鼠血清白蛋白中的任意一种。
12.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白表面经过修饰，所述修饰包括亲水修饰、疏水修饰、覆层或接枝改性中的任意一种或至少两种的组合。
13.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白携带功能基团。
14.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述油相包括角鲨烯、橄榄油、大豆油、维生素E、油酸乙酯、油酸、乳酸乙酯、二甲基硅油、月桂酸异丙酯或癸酸甘油三酯中的任意一种或者至少两种的组合。
15.根据权利要求14所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述油相为角鲨烯、橄榄油或二甲基硅油中的任意一种或者至少两种的组合。
16.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述水相包括纯化水、注射用水、磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液中的任意一种或者至少两种的组合。
17.根据权利要求16所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液的pH值为5.0～8.1。
18.根据权利要求17所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液或柠檬酸缓冲液的pH值为6.0～8.0。
19.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白水包油乳液还包括无机盐、多糖、嵌段共聚物或脂质体分子中的任意一种或至少两种的组合。
20.根据权利要求19所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、氢氧化铝、碳酸钙任意一种或者至少两种的组合。
21.根据权利要求19所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述多糖包括蔗糖、D-海藻糖、甘露糖、淀粉或明胶中任意一种或者至少两种的组合。
22.根据权利要求19所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述嵌段共聚物或脂质体分子包括双十二烷基二甲基溴化铵、十二烷基氯化铵、十六烷基三甲基溴化铵、十六烷基溴化吡啶、阳离子聚丙烯酰胺、聚合氯化铝、十八烷基胺聚氧乙烯醚双季铵盐、DSPE-PEG-脂质体、1,2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酰胆碱、1,2-二棕榈酰基-sn-丙三基-3-和磷酸乙氨醇、(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基铵-氯盐或1,2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸甘油中任意一种或者至少两种的混合物。
23.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白水包油乳液还包括药用添加剂。
24.根据权利要求23所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述药用添加剂包括稀释剂、稳定剂或防腐剂中的任意一种或者至少两种的组合。
25.根据权利要求23所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述油相中的药用添加剂包括疏水性药物。
26.根据权利要求25所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述油相中的药用添加剂为紫杉醇、全反式维甲酸、阿那曲唑或阿霉素中的任意一种或至少两种的组合。
27.根据权利要求23所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述油相中的药用添加剂，所述水相中的药用添加剂包括亲水性药物。
28.根据权利要求27所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述油相中的药用添加剂，所述水相中的药用添加剂为来曲唑、白介素或干扰素中的任意一种或至少两种的组合。
29.根据权利要求1所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述白蛋白水包油乳液还包括免疫活性物质。
30.根据权利要求29所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述免疫活性物质组装或分散在所述白蛋白水包油乳液的水相和/或油水界面。
31.根据权利要求29所述的白蛋白水包油乳液，其特征在于，所述免疫活性物质包括单磷酰脂质A、CpG或溶菌酶中的任意一种或者至少两种的组合。
32.一种如权利要求1～31任一项所述的白蛋白水包油乳液的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
制备分散有白蛋白的水相悬浮液，再将所述水相悬浮液与油相混合，乳化，得到所述白蛋白水包油乳液。
33.根据权利要求32所述的制备方法，其特征在于，所述乳化的方法包括超声乳化。
34.一种疫苗，其特征在于，所述疫苗包括载体和抗原，所述载体为如权利要求1～31任一项所述的白蛋白水包油乳液，所述抗原组装或分散在所述白蛋白水包油乳液的水相和/或油水界面。
35.根据权利要求34所述的疫苗，其特征在于，所述抗原包括单价抗原和/或多价抗原。
36.根据权利要求34所述的疫苗，其特征在于，所述抗原包括肿瘤抗原、细菌抗原、真菌抗原、病毒抗原或寄生虫抗原中的任意一种或者至少两种的组合。
37.根据权利要求34所述的疫苗，其特征在于，所述抗原包括化学合成的抗原、鸡胚培养的抗原、细胞培养的抗原、来自携带者体液的抗原、器官或组织中纯化分离所得的抗原或重组基因表达的抗原。
38.根据权利要求37所述的疫苗，其特征在于，所述抗原为合成肽抗原。
39.根据权利要求34所述的疫苗，其特征在于，所述抗原的N端或C端偶联荧光标记物或修饰脂质链。
40.根据权利要求39所述的疫苗，其特征在于，所述脂质链包括疏水性的单链、多接枝的碳链或嵌段共聚物中的任意一种或者至少两种的组合。
41.根据权利要求34所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗包括重组亚单位疫苗、减毒疫苗、灭活疫苗、裂解疫苗、多糖结合疫苗或核酸疫苗中的任意一种或者至少两种的组合。
42.根据权利要求34所述的疫苗，其特征在于，所述疫苗的免疫接种方式包括静脉注射、脊椎腔注射、肌内注射、皮下注射、皮内注射、经呼吸道喷入或吸入、腹腔注射、经鼻给药、经眼给药、经口给药、直肠给药、阴道给药、局部给药或透皮给药中的任意一种或者至少两种的组合。
43.如权利要求1～31任一项所述的白蛋白水包油乳液作为药物缓释系统、药物递送系统或药物载体在制备疫苗或药物中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013224282A (ja) * 2012-04-23 2013-10-31 Nipro Corp 細胞膜透過性を有する製剤、細胞膜透過性組成物及び薬物輸送方法
CN108096188A (zh) * 2017-12-19 2018-06-01 复旦大学 负载疏水药物和营养物的水包油复合纳米乳液及其制备方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104013955B (zh) * 2014-06-18 2016-02-24 中国科学院过程工程研究所 一种不含表面活性剂的水包油乳液及其用途
CN106580880A (zh) * 2016-12-22 2017-04-26 深圳海王医药科技研究院有限公司 一种稳定的卡巴他赛微粒可再分散体系
CN109601644A (zh) * 2018-12-04 2019-04-12 武汉轻工大学 一种利用卵白蛋白包埋陈皮油制备o/w型均匀乳液的方法及o/w型均匀乳液

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013224282A (ja) * 2012-04-23 2013-10-31 Nipro Corp 細胞膜透過性を有する製剤、細胞膜透過性組成物及び薬物輸送方法
CN108096188A (zh) * 2017-12-19 2018-06-01 复旦大学 负载疏水药物和营养物的水包油复合纳米乳液及其制备方法

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