CN105816885A - 一种药物白蛋白纳米粒的制备及其应用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物制剂领域,提供一种药物白蛋白纳米粒、制备方法及其在肿瘤靶向治疗中的应用。该纳米粒为亲和素和白蛋白两种蛋白包载难溶性抗肿瘤药物的纳米粒子。亲和素和白蛋白之间存在静电相互作用,而且纳米粒中的亲和素可以和生物素结合。亲和素可以将包载药物的该纳米粒靶向至生物素富集部位。在给予该纳米粒前,使用生物素化抗体预先靶向肿瘤部位,可以改善该纳米粒制剂在肿瘤部位的分布。将生物素化抗体和该纳米粒制剂联合用药可以起到比单克隆抗体和不含亲和素的白蛋白纳米粒联合用药更好的抗肿瘤效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种亲和素、白蛋白和疏水性抗肿瘤药物组成的药物白蛋白纳米粒、其制备方法以及在肿瘤靶向治疗中的应用,属于药物制剂及肿瘤治疗领域。
背景技术
肿瘤是威胁人类健康的严重疾病。传统抗肿瘤药物(如紫杉醇、多西紫杉醇和阿霉素等)具有较强的毒副作用。为增强药物的有效性和降低毒副作用,肿瘤的靶向治疗应运而生。
单克隆抗体的抗肿瘤治疗至今已有18年的历史,现在临床上成功运用于白血病和肿瘤的治疗。单克隆抗体可以直接作用于肿瘤细胞受体,阻断信号通路,抑制肿瘤生长;也可以介导患者自身免疫系统对肿瘤杀伤;也可以作用于肿瘤新生血管和基质细胞,切断肿瘤营养供给,破坏肿瘤微环境来抑制肿瘤。选择肿瘤细胞高表达而正常细胞低表达的受体或者肿瘤生长所需生长因子作为单克隆抗体的靶标,可以在引起低毒副作用的同时抑制肿瘤生长。
白蛋白在血浆中大量存在,其等电点为4.5-5.0,在生理条件下带负电荷。人血清白蛋白是人体血浆中含量最丰富的蛋白,在体内与长链脂肪酸、胆红素和多种药物均有结合。同时,由于白蛋白水溶性高、稳定性好和生物相容性高等特点,白蛋白被视为疏水性药物的理想载体,可以与紫色醇、多西紫杉醇、卡巴他赛、多西他赛、姜黄素、替尼泊苷、10-羟基喜树碱和6-巯基嘌呤等药物制备成纳米粒。紫杉醇白蛋白纳米粒是已上市的抗肿瘤制剂。依靠肿瘤组织具有的增强的渗透和滞留效应,并且通过激活gp60受体,紫杉醇白蛋白纳米粒可以提高肿瘤对紫衫醇的摄取。同时由于不含有毒的溶剂,紫杉醇白蛋白纳米粒具有比更小的毒性。相比于等紫杉醇传统制剂,紫杉醇白蛋白纳米粒具有更好的抗肿瘤效果。(DesaiNetal.Abraxane(ABI-007)vstaxotere:apreclinicalcomparisonoftoxicityandefficacy[J].CancerResearch,2005,65:336-337.)
由于肿瘤的异质性、多药耐药性和易复发的特性,临床上对于肿瘤的治疗常采取联合用药的方式。单克隆抗体在与其他化疗药物联合使用时,患者可以获得更高的治疗响应率和更长的生存期。但已有临床研究发现,当单克隆抗体与紫杉醇白蛋白纳米粒联合用药时,其效果与单克隆抗体与联合用药没有显著差异(RugoHSetal.RandomizedphaseIIItrialofpaclitaxelonceperweekcomparedwithnanoparticlealbumin-boundnab-paclitaxelonceperweekorixabepilonewithbevacizumabasfirst-linechemotherapyforlocallyrecurrentormetastaticbreastcancer:CALGB40502/NCCTGN063H(Alliance)[J].JournalofClinicalOncology,2015,33(21):2361-2369.)。
生物素为天然的水溶性小分子化合物,又称维生素K。亲和素为禽类或两栖类动物卵中存在的一种蛋白。生物素和亲和素两者之间的相互作用为已知的最强的非共价结合,在生物技术中有广泛应用。在单克隆抗体与白蛋白纳米粒之间引入生物素-亲和素系统,借助生物素与亲和素极强的亲和力,可以增强单克隆抗体和白蛋白纳米粒之间的相互作用,介导白蛋白纳米粒的主动靶向性,起到提高单克隆抗体与白蛋白纳米粒的联合给药效果。
本发明拟构建一种药物白蛋白纳米粒载药系统。该药物白蛋白纳米粒含有亲和素。亲和素由于其表面的糖基化修饰,等电点约10.0-10.5,在生理条件下其表面带正电荷。由于白蛋白在中性条件下带负电荷,亲和素可与白蛋白依靠静电作用结合在一起。因此,在亲和素和白蛋白构成的纳米粒中,亲和素和白蛋白紧密结合。本发明提供的药物白蛋白纳米粒,可以将药物靶向递送至生物素富集的肿瘤部位。因此,本发明提供的药物白蛋白纳米粒与生物素化抗体或多肽配合使用时,可以实现肿瘤靶向治疗,进而实现更好的肿瘤治疗效果。同时,由于亲和素本身具有的肿瘤靶向性,本发明提供的药物白蛋白纳米粒也具有一定肿瘤靶向性。
发明内容
本发明提供一种药物白蛋白纳米粒的制备方法及其与生物素化抗体或生物素化多肽配合使用的应用方法。本发明提供的药物白蛋白纳米粒含有亲和素、白蛋白和疏水性药物。所制备的药物白蛋白纳米粒粒径分布均匀。该纳米粒可与生物素化抗体结合。当该药物白蛋白纳米粒与生物素化抗体或生物素化多肽配合使用时,生物素化抗体或生物素化多肽可以介导该药物白蛋白纳米粒的主动靶向。当采用该药物白蛋白纳米粒与生物素化抗体联合用药时,可以获得比白蛋白纳米粒与抗体联合用药更好的效果。
本发明采用的技术方案如下:
本发明提供一种药物白蛋白纳米粒,该药物白蛋白纳米粒组成包括亲和素、白蛋白和疏水性抗肿瘤药物。
本发明提供的药物白蛋白纳米粒中亲和素和白蛋白的重量比为1:5-1:100,疏水性抗肿瘤药物和白蛋白的重量比为1:2-1:100。
优选地,所述亲和素和白蛋白的重量比为1:10-1:50,疏水性抗肿瘤药物和白蛋白的重量比为1:5-1:20。
本发明提供的药物白蛋白纳米粒,所述白蛋白是人血清白蛋白、重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白和卵清蛋白中的任意一种或几种的混合物。
优选地,所述白蛋白是人血清白蛋白。
本发明提供的药物白蛋白纳米粒,所述药物为疏水性抗肿瘤药物包括紫杉醇、多西紫杉醇、卡巴他赛、10-羟基喜树碱、姜黄素中的一种或者两种以上的混合物,优选为紫衫醇。
本发明提供一种药物白蛋白纳米粒的制备方法,包括以下步骤:
a.将处方量的白蛋白和亲和素在水中混合溶解;
b.将处方量的疏水性药物溶解在有机溶剂中;
c.将步骤a的水溶液与步骤b的有机溶液混合均匀,获得白色乳液;
d.将白色乳液高压均质,或随后探头超声,使粒径在50nm-1000nm;
e.将获得的药物白蛋白纳米粒溶液减压去除有机溶。
作为优选,上述制备方法还包括将步骤e所得药物白蛋白纳米粒的溶液进行脱水处理的步骤;优选地,所述脱水处理为冷冻干燥、喷雾干燥或减压蒸馏。
优选地,步骤a中,所述白蛋白在水中浓度为0.5%-5%(W/V),优选为1%-3%(W/V),所述亲和素在水中浓度为0.025%-0.5%(W/V),优选为0.05%-0.3%(W/V)。
优选地,步骤b中药物与步骤a中总蛋白的比例为5%-15%(W/W)。
优选地,步骤b中有机溶剂与步骤a中水的比例为1:20-1:50。
优选地,步骤b中有机溶剂由疏水性有机溶剂和亲水性有机溶剂混合而成。所述疏水性有机溶剂可以为氯仿、二氯甲烷或两种的混合溶剂;所述水溶性有机溶剂可以为乙醇、甲醇、丙二醇或其中两种或三种的混合溶剂。有机溶剂与步骤a中水溶液比例为1:20-1:50。
优选地,步骤c中所述混合方法可以采用涡旋或超声。
优选地,步骤d中所述高压均质,压力范围为10000-20000psi,循环次数为5-20次。
优选地,步骤d中所述探头超声,条件为功率40W-80W,工作2s-3s,间歇2s-3s。
在一个具体方案中,本发明的药物白蛋白纳米粒的制备方法如下:
a.将白蛋白和亲和素在水中混合,形成白蛋白浓度为0.95%(W/V),亲和素浓度为0.05(W/V)的水溶液;
b.将药物溶解在有机溶剂(氯仿:乙醇=11:1-7:3)中,药物用量为步骤a中总蛋白重量的10%,有机溶剂与步骤a中水溶液比例为1:20-1:30;
c.将步骤a的水溶液与步骤b的有机溶液混合,超声使其混合均匀,获得白色乳液;
d.将白色乳液在10000-20000psi压力下高压均质,循环10-20次。随后,探头超声10-15min,探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s,使粒径在50nm-200nm;
e.将获得的药物白蛋白纳米粒溶液在35℃-45℃旋转蒸发15-40min,去除有机溶剂。
本发明提供药物白蛋白纳米粒单独使用或联合靶向肿瘤的生物素化抗体或生物素化多肽在靶向治疗癌症的应用。
本发明所提供的药物白蛋白纳米粒,可由靶向肿瘤的生物素化抗体或生物素化多肽介导靶向肿瘤。
本发明能够实现靶向肿瘤的生物素化抗体与药物白蛋白纳米粒联合用于抗肿瘤治疗,获得比抗体与药物白蛋白纳米粒联合治疗更好的抗肿瘤效果。
优选地,所述靶向肿瘤的生物素化抗体是靶向肿瘤细胞、肿瘤血管或者肿瘤相关细胞的生物素化多克隆抗体或单克隆抗体。
优选地,所述靶向肿瘤的生物素化抗体是靶向肿瘤的抗体与生物素直接化学连接或者通过连接臂化学连接而得到;其中,靶向肿瘤的抗体包括但不限于,阿巴伏单抗(Abagovomab)、阿德木单抗(Adecatumumab)、Alemtuzumab、Altumomab、阿麦妥昔单抗(Amatuximab)、Anatumomab、阿西莫单抗(Arcitumomab)、巴韦妥昔单抗(Bavituximab)、Bectumomab、Bevacizumab、Bivatuzumab、兰妥莫单抗(Blinatumomab)、布妥昔单抗(Brentuximab)、坎妥珠单抗(Cantuzumab)、Cantuzumab、Capromab、卡妥索单抗(Catumaxomab)、西妥昔单抗(Cetuximab)、西他妥珠单抗(Citatuzumab)、Cixutumumab、克立瓦妥珠单抗(Clivatuzumab)、可那妥木单抗(Conatumumab)、达西妥珠单抗(Dacetuzumab)、达洛妥珠单抗(Dalotuzumab)、达拉妥木单抗(Daratumumab)、Derlotuximab、Detumomab、Dinutuximab、卓齐妥单抗(Drozitumab)、度利戈妥单抗(Duligotumab)、杜斯吉妥单抗(Dusigitumab)、依美昔单抗(Ecromeximab)、Edrecolomab、依洛妥珠单抗(Elotuzumab)、Emibetuzumab、Enfortumab、Enoblituzumab、恩西妥昔西单抗(Ensituximab)、厄马索单抗(Ertumaxomab)、埃达珠单抗(Etaracizumab)、法勒珠单抗(Farletuzumab)、芬克拉妥珠单抗(Ficlatuzumab)、芬妥木单抗(Figitumumab)、弗拉伏妥单抗(Flanvotumab)、弗妥昔单抗(Futuximab)、甘尼妥单抗(Ganitumab)、Gemtuzumab、吉瑞妥昔单抗(Girentuximab)、格列姆巴妥木单抗(Glembatumumab)、Ibritumomab、Igovomab、英加妥珠单抗(Imgatuzumab)、Indatuximab、伊诺妥珠单抗(Inotuzumab)、Intetumumab、伊拉妥木单抗(Iratumumab)、Isatuximab、拉贝妥珠单抗(Labetuzumab)、来沙妥木单抗(Lexatumumab)、Lifastuzumab、Lintuzumab、Lorvotuzumab、鲁卡妥木单抗(Lucatumumab)、马帕妥木单抗(Mapatumumab)、Margetuximab、Matuzumab、米拉珠单抗(Milatuzumab)、Minretumomab、Mitumomab、莫西妥莫单抗(Moxetumomab)、他那可单抗(Nacolomab)、他那莫单抗(Naptumomab)、纳那妥单抗(Narnatumab)、奈昔妥木单抗(Necitumumab)、尼妥珠单抗(Nimotuzumab)、Nofetumomab、Obinutuzumab、奥卡拉妥珠单抗(Ocaratuzumab)、奥法妥木单抗(Ofatumumab)、奥拉妥单抗(Olaratumab)、奥纳妥珠单抗(Onartuzumab)、Ontuxizumab、奥珠单抗(Oportuzumabmonatox)、奥戈伏单抗(Oregovomab)、Otlertuzumab、帕尼单抗(Panitumumab)、巴萨妥珠单抗(Parsatuzumab)、帕曲妥单抗(Patritumab)、培妥莫单抗(Pemtumomab)、培妥珠单抗(Pertuzumab)、皮那妥珠单抗(Pinatuzumab)、平妥莫单抗(Pintumomab)、泊拉妥珠单抗(Polatuzumab)、普立妥木单抗(Pritumumab)、雷妥莫单抗(Racotumomab)、雷得妥单抗(Radretumab)、利妥木单抗(Rilotumumab)、利妥昔单抗(Rituximab)、罗妥木单抗(Robatumumab)、Satumomab、司里班妥单抗(Seribantumab)、Sibrotuzumab、西妥珠单抗(Simtuzumab)、Sofituzumab、索利托单抗(Solitomab)、他卡妥珠单抗(Tacatuzumab)、他莫单抗(Taplitumomab)、替妥莫单抗(Tenatumomab)、替妥木单抗(Teprotumumab)、替加珠单抗(Tigatuzumab)、Tositumomab、Tovetumab、曲妥珠单抗(Trastuzumab)、妥可妥珠单抗(Tucotuzumab)、优利妥昔单抗(Ublituximab)、Vantictumab、维妥珠单抗(Veltuzumab)、伏司妥珠单抗(Vorsetuzumab)、Votumumab、扎鲁妥木单抗(Zalutumumab)。
优选地,所述靶向肿瘤的生物素化多肽是靶向肿瘤细胞、肿瘤血管或者肿瘤相关细胞的生物素化多肽。
优选地,所述靶向肿瘤的生物素化多肽是靶向肿瘤的多肽与生物素直接化学连接或者通过连接臂化学连接而得到;其中,靶向肿瘤的多肽包括但不限于,奥曲肽(Octreotide)、血管活性肠肽(VIP)、西仑吉肽(cilengitide)。
在本发明提供的靶向肿瘤的生物素化抗体或生物素化多肽介导或联合药物白蛋白纳米粒靶向治疗癌症的方法中,所述药物白蛋白纳米粒与生物素化抗体或生物素化多肽可以同时或依次使用。
在一些实施方式中,所述治疗癌症的方法包括以下步骤:
a.向受试者施用生物素化抗体或生物素化多肽;
b.在特定的时间间隔后,向受试者施用本发明所提供的药物白蛋白纳米粒。
该特定的时间间隔为生物素化抗体或生物素化多肽靶向肿瘤并与肿瘤相关受体结合提供了时间。
特定时间间隔可以为1天至2天、1天至7天、1天至14天或1天至21天。
本发明与现有技术相比,所提供的药物白蛋白纳米粒具有如下优点:
1、本发明制备方法简单,仅在已有白蛋白纳米粒的制备基础上根据需要加入探头超声步骤。
2、本发明含有亲和素。由于亲和素具有一定的肿瘤靶向性,因此本发明具有肿瘤靶向性。
3、预先使用生物素化抗体或生物素化多肽靶向肿瘤部位,可以介导本发明在肿瘤部位的主动靶向,增加其在肿瘤部位的富集。
4、本发明与生物素化抗体联合用药可以获得比传统白蛋白纳米粒与单克隆抗体联合用药更好的治疗效果。
5、本发明未将抗体或多肽等靶向分子直接连接在白蛋白纳米粒表面。可根据临床实际需求,配合所需要的生物素化抗体或多肽使用,满足个性化的治疗方案。相比于化学连接靶向分子在白蛋白纳米粒表面的制剂来说更加便捷,在临床使用上简单选择或更换生物素化抗体就可以实现有效的靶向给药。
附图说明:
以下结合附图来详细说明本发明的实施方案,
图1为实例1(1)中紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒的透射电镜图。
图2为实例1(1)中紫杉醇亲和素白蛋白纳米的动态光散射粒径分布图。
图3为实例1(2)中紫杉醇亲和素白蛋白纳米的动态光散射粒径分布图。
图4为实例2中采用共聚焦显微镜考察生物素化西妥昔单抗改善紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒与A549细胞相互作用的结果。相比于单独孵育紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒,采用生物素化单抗与A549细胞预孵育后,再加入紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒可以增加该纳米粒在细胞表面的粘附。
图5为实例3中生物素化西妥昔单抗改善紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒在荷瘤小鼠体内分布的活体成像结果。预先注射生物素化单抗,使得包载有DiR的紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒在肿瘤部位的蓄积增多。说明紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒有靶向生物素化单抗标记的肿瘤的能力。
图6为实例4中生物素化西妥昔单抗预靶向后,紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒抑制肿瘤生长曲线图。(*P<0.05vs.生理盐水组,**P<0.01vs.生理盐水组,#P<0.05vs.白蛋白纳米粒组。)
图7为实例5中生物素化西妥昔单抗和紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒联合用药,荷A549肿瘤裸鼠的肿瘤生长曲线图。(**P<0.01vs.生理盐水组,#P<0.05vs.西妥昔单抗+白蛋白纳米粒组,^P<0.05vs.西妥昔单抗+亲和素白蛋白纳米粒组。)
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明和解释本发明,但不作为本发明的限制。
实例1、药物白蛋白纳米的制备
(1)紫杉醇的亲和素白蛋白纳米粒制备
将亲和素和人血清白蛋白溶解在水中形成混合水溶液,其中白蛋白浓度为1%(W/V),白蛋白与亲和素的重量比为20:1。将占总蛋白重量10%(W/W)的紫杉醇溶解在占3.5%(V/V)的有机溶剂(氯仿:乙醇=9:2)中。探头超声1-3min,制备初乳。探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。将混合溶液在10000-20000psi压力下均质,循环5-10次。随后,探头超声5-10min,探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。40℃旋转蒸发15-40min,去除有机溶剂后,用0.22μm的滤膜过滤亲和素白蛋白纳米粒。-20℃至-80℃冷冻,并在20℃至35℃之间加热冻干24-48h,得到紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒的冻干粉末。
所得紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒溶解后的透射电镜图如图1所示,动态光散射粒径分布图如图2所示。
(2)紫杉醇的亲和素白蛋白纳米粒制备
将亲和素和人血清白蛋白溶解在水中形成混合水溶液,其中白蛋白浓度为1%(W/V),白蛋白与亲和素的重量比为10:1。将占总蛋白重量20%(W/W)的紫杉醇溶解在占3.5%(V/V)的有机溶剂(氯仿:乙醇=9:2)中。探头超声1-3min,制备初乳。探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。将混合溶液在10000-20000psi压力下均质,循环10-20次。随后,探头超声10-15min,探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。40℃旋转蒸发15-40min,去除有机溶剂后,用0.22μm的滤膜过滤亲和素白蛋白纳米粒。-20℃至-80℃冷冻,并在20℃至35℃之间加热冻干24-48h,得到紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒的冻干粉末。
所得紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒溶解后的动态光散射粒径分布图如图3所示。
(3)多西紫杉醇的亲和素白蛋白纳米粒制备
将亲和素和人血清白蛋白溶解在去离子水中形成混合水溶液,其中白蛋白浓度为1%(W/V),白蛋白与亲和素的重量比为20:1。将占总蛋白重量10%(W/W)的多西紫杉醇溶解在占3.5%(V/V)的有机溶剂(氯仿:乙醇=11:1)中。探头超声1-3min,制备初乳。探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。将混合溶液在10000-20000psi压力下均质,循环10-20次。随后,探头超声10-15min,探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。40℃旋转蒸发15-40min,去除有机溶剂后,用0.22μm的滤膜过滤亲和素白蛋白纳米粒。-20℃至-80℃冷冻,并在20℃至35℃之间加热冻干24-48h,得到多西紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒的冻干粉末。
(4)卡巴他赛的亲和素白蛋白纳米粒制备
将亲和素和人血清白蛋白溶解在去离子水中形成混合水溶液,其中白蛋白浓度为1%(W/V),白蛋白与亲和素的重量比为20:1。将占总蛋白重量10%(W/W)的卡巴他赛溶解在占3.5%(V/V)的有机溶剂(氯仿:乙醇=9:1)中。探头超声1-3min,制备初乳。探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。将混合溶液在10000-20000psi压力下均质,循环10-20次。随后,探头超声10-15min,探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。40℃旋转蒸发15-40min,去除有机溶剂后,用0.22μm的滤膜过滤亲和素白蛋白纳米粒。-20℃至-80℃冷冻,并在20℃至35℃之间加热冻干24-48h,得到卡巴他赛亲和素白蛋白纳米粒的冻干粉末。
(5)羟基喜树碱的亲和素白蛋白纳米粒制备
将亲和素和人血清白蛋白溶解在去离子水中形成混合水溶液,其中白蛋白浓度为1%(W/V),白蛋白与亲和素的重量比为20:1。将占总蛋白重量10%(W/W)的羟基喜树碱溶解在占3.5%(V/V)的有机溶剂(氯仿:乙醇=7:3)中。探头超声1-3min,制备初乳。探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。将混合溶液在10000-20000psi压力下均质,循环10-20次。随后,探头超声10-15min,探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。40℃旋转蒸发15-40min,去除有机溶剂后,用0.22μm的滤膜过滤亲和素白蛋白纳米粒。-20℃至-80℃冷冻,并在20℃至35℃之间加热冻干24-48h,得到羟基喜树碱的亲和素白蛋白纳米粒的冻干粉末。
(6)姜黄素的亲和素白蛋白纳米粒制备
将亲和素和人血清白蛋白溶解在去离子水中形成混合水溶液,其中白蛋白浓度为1%(W/V),白蛋白与亲和素的重量比为20:1。将占总蛋白重量10%(W/W)的姜黄素溶解在占3.5%(V/V)的有机溶剂(氯仿:乙醇=9:2)中。探头超声1-3min,制备初乳。探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。将混合溶液在10000-20000psi压力下均质,循环10-20次。随后,探头超声10-15min,探头超声条件为功率40W,工作2s,间歇2s。40℃旋转蒸发15-40min,去除有机溶剂后,用0.22μm的滤膜过滤亲和素白蛋白纳米粒。-20℃至-80℃冷冻,并在20℃至35℃之间加热冻干24-48h,得到姜黄素的亲和素白蛋白纳米粒的冻干粉末。实例2、生物素化西妥昔单抗体外改善紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒与A549细胞相互作用的评价
用罗丹明N-羟基琥珀酰亚胺酯在中性条件下标记人血清白蛋白。用罗丹明标记的人血清白蛋白按上述方法制备紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒。将A549细胞接种于共聚焦小皿中,孵育24h,待细胞贴壁,弃掉原培养液。预靶向抗体组,预先加入生物素化西妥昔单抗(2μg/ml)孵育1h,弃掉,用PBS清洗两次。将紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒用无血清培养液稀释至罗丹明浓度为1μg/ml,分别加入有生物素化单抗预靶向的共聚焦小皿和未预靶向的共聚焦小皿中。半小时后,采用激光共聚焦显微镜观察有无生物素化单抗预靶向A549细胞时紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒与A549细胞的相互作用情况。结果如图4所示,在用生物素化西妥昔单抗预靶向A549细胞(右图)后,相比于未提取给予生物素化西妥昔单抗(左图),更多的罗丹明标记的纳米粒在A549细胞表面结合。说明生物素化单抗预靶向后,可以增加紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒在肿瘤细胞上的富集。
实例3、生物素化单抗改善紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒在肿瘤部位分布的评价
根据本发明所提供的药物白蛋白纳米粒的制备方法,制备含紫杉醇、亲和素和白蛋白的紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒。同时,根据本发明所提供的药物白蛋白纳米粒的制备方法,制备不含亲和素的紫杉醇白蛋白纳米粒。
在裸鼠腋下注射A549肿瘤细胞,建立荷A549肿瘤裸鼠模型,待肿瘤体积达到500mm3时,随机分为两组,分别为未预靶向组和生物素化单抗预靶向组。未预靶向组中,向荷瘤小鼠尾静脉注射含DiR(2ug/ml)的紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒0.2ml。预靶向组中,在给药前24h,向荷瘤小鼠尾静脉注射0.2ml的生物素化西妥昔单抗(50ug/ml),之后尾静脉注射含DiR(2ug/ml)的紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒0.2ml。两组在给药后1h和24h均用活体成像仪观测纳米粒的在荷A549小鼠的体内分布,如图5所示。与未预靶向组相比,24h后预靶向组中荧光信号在肿瘤组织中的蓄积更多。说明先采用生物素化西妥昔单抗预靶向肿瘤组织,可以改善紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒在A549肿瘤部位的分布。
实例4、生物素化单抗预靶向与紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒体内药效学评价
根据本发明所提供的药物白蛋白纳米粒的制备方法,制备含紫杉醇、亲和素和白蛋白的紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒。同时,根据本发明所提供的药物白蛋白纳米粒的制备方法,制备不含亲和素的紫杉醇白蛋白纳米粒。
建立荷A549肿瘤裸鼠模型,接种后,待肿瘤体积达到30-50mm3,随机分为5组进行给药,每组6只,分别为:
生理盐水组:在0、3、7、10天,每只按10ml/kg尾静脉给予生理盐水。
白蛋白纳米粒组:在0、3、7、10天尾静脉给予紫杉醇白蛋白纳米粒(紫杉醇1mg/ml),给药剂量为10mg/kg。
亲和素白蛋白纳米粒组:在0、3、7、10天尾静脉给予紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒(紫杉醇1mg/ml),给药剂量为10mg/kg。
生物素化西妥昔单抗预靶向组:在给予紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒前24h尾静脉给予生物化西妥昔单抗10ug/只,在0、3、7、10天尾静脉给予紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒(紫杉醇1mg/ml),给药剂量为10mg/kg。
肿瘤生长抑制:自天开始给药后,每隔一天用游标卡尺测量并记录各组荷瘤小鼠的肿瘤长径l和短径r,按公式V=l×r2/2,计算肿瘤体积V,按公式Vr=V/V0,计算相对肿瘤体积Vr,绘制,肿瘤相对体积对时间的变化图。
实验结束时肿瘤体积大小结果如下:
生理盐水组>白蛋白纳米粒组>亲和素白蛋白纳米粒组>生物素化西妥昔单抗预靶向组
如图6所示,结果表明,使用生物素化单抗预靶向肿瘤,可以提高紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒的肿瘤抑制效果,其抑制效果与使用紫杉醇白蛋白纳米粒相比具有显著性差异。单独使用紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒的抑制肿瘤效果强于单独使用紫杉醇白蛋白纳米粒,但弱于使用生物素化西妥昔单抗预靶向组。
实例5、生物素化单抗与亲和紫杉醇素白蛋白纳米粒体内联合用药的药效学评价
根据本发明所提供的药物白蛋白纳米粒的制备方法,制备含紫杉醇、亲和素和白蛋白的紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒。同时,根据本发明所提供的药物白蛋白纳米粒的制备方法,制备不含亲和素的紫杉醇白蛋白纳米粒。
建立荷A549肿瘤裸鼠模型,接种后,待肿瘤体积达到50mm3左右,随机分为6组进行给药,每组6只,分别为:
生理盐水组:在0、3、7、10天,每只按10ml/kg尾静脉给予生理盐水。
西妥昔单抗+白蛋白纳米粒组:在给予紫杉醇白蛋白纳米粒前24h尾静脉给予西妥昔单抗(1mg/ml)0.2ml,在0、3、7、10天尾静脉给予紫杉醇白蛋白纳米粒(紫杉醇1mg/ml),给药剂量为7mg/kg。
西妥昔单抗+亲和素白蛋白纳米粒组:在给予紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒前24h尾静脉给予西妥昔单抗(1mg/ml)0.2ml,在0、3、7、10天尾静脉给予紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒(紫杉醇1mg/ml),给药剂量为7mg/kg。
生物素化西妥昔单抗+亲和素白蛋白纳米粒组:在在给予紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒前24h尾静脉给予生物素化西妥昔单抗(1mg/ml)0.2ml,在0、3、7、10天尾静脉给予紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒(紫杉醇1mg/ml),给药剂量为7mg/kg。
自天开始给药后,每隔一天用游标卡尺测量并记录各组荷瘤小鼠的肿瘤长径l和短径r,按公式V=l×r2/2,计算肿瘤体积V,按公式Vr=V/V0,计算相对肿瘤体积Vr,绘制,肿瘤相对体积-时间的变化图。如图7所示,结果显示,生物素化西妥昔单抗与紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒联合给药抗肿瘤效果最好,西妥昔单抗与紫杉醇亲和素白蛋白纳米粒联合给药抗肿瘤效果其次,西妥昔单抗与紫杉醇白蛋白纳米粒联合给药抗肿瘤效果较弱。
Claims (11)
1.一种药物白蛋白纳米粒,其特征在于,其组成包括亲和素、白蛋白和疏水性抗肿瘤药物。
2.如权利要求1所述的药物白蛋白纳米粒,其特征在于,其中亲和素和白蛋白的重量比为1:5-1:100,疏水性抗肿瘤药物和白蛋白的重量比为1:2-1:100。
3.如权利要求1所述药物白蛋白纳米粒,其特征在于,其粒径为50-1000nm。
4.如权利要求1所述药物白蛋白纳米粒,其特征在于,白蛋白选自人血清白蛋白、重组人血清白蛋白、牛血清白蛋白和卵清蛋白中的任意一种或几种的混合物。
5.如权利要求1所述疏水性抗肿瘤药物是紫杉醇、多西紫杉醇、卡巴他赛、10-羟基喜树碱、姜黄素中的一种或者两种以上的混合物。
6.如权利要求1所述疏水性抗肿瘤药物是紫杉醇。
7.如权利要求1所述药物白蛋白纳米粒的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
a.将白蛋白和亲和素溶解于水中,混合均匀;
b.将疏水性药物溶解在有机溶剂中;
c.将步骤a的水溶液与步骤b的有机溶液混合均匀,得到白色乳液;
d.将白色乳液高压均质,需要时可探头超声,使粒径控制在50nm-1000nm;
e.将获得的药物白蛋白纳米粒溶液减压去除有机溶剂。
8.如权利要求7所述的药物白蛋白纳米粒的制备方法,其特征在于,步骤a中,蛋白水溶液浓度为0.5-5%(W/V),亲和素在水中浓度为0.025%-0.5%(W/V)。
9.如权利要求7-8所述的药物白蛋白纳米粒的制备方法,其特征在于,还包括将步骤e所获得的药物白蛋白纳米粒的混合溶液进行脱水的步骤。
10.如权利要求1-9所述药物白蛋白纳米粒在肿瘤靶向治疗中的应用,其特征在于,药物白蛋白纳米粒可以单独使用或联合靶向肿瘤的生物素化抗体或生物素化多肽使用。
11.如权利要求10所述药物白蛋白纳米粒在肿瘤靶向治疗中的应用,其特征在于,联合靶向肿瘤的生物素化抗体或生物素化多肽使用方法包括以下步骤:
a.先施用靶向肿瘤的生物素化抗体或生物素化多肽;
b.在特定的时间间隔后,再施用权利要求1-9所述药物白蛋白纳米粒。
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Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106942256A (zh) * | 2017-02-20 | 2017-07-14 | 北京林业大学 | 一种新型包载噻虫啉和信息素的蛋白纳米球的制备方法 |
CN108125928A (zh) * | 2018-01-16 | 2018-06-08 | 西南大学 | 一种载egcg的卵清蛋白纳米粒子的制备方法及其应用 |
WO2018196819A1 (zh) * | 2017-04-28 | 2018-11-01 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种包裹有难溶于水药物的蛋白质颗粒及其制备方法 |
CN112933052A (zh) * | 2021-01-25 | 2021-06-11 | 西安交通大学医学院第一附属医院 | 改善肿瘤缺氧微环境并增强免疫治疗的纳米递药系统 |
CN114404410A (zh) * | 2022-01-29 | 2022-04-29 | 西安交通大学 | 一种基于白蛋白和氟伐他汀的纳米复合物及其应用 |
CN115400115A (zh) * | 2021-05-26 | 2022-11-29 | 石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司 | 多西他赛白蛋白组合物和免疫检查点抑制剂的组合及用途 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1515244A (zh) * | 1996-10-01 | 2004-07-28 | �Ϻ���ͨ��ѧ | 蛋白质稳定的药理活性物质及其它的制备和应用方法 |
US20120190049A1 (en) * | 2010-12-10 | 2012-07-26 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Glypican-3 targeting of liver cancer cells using multifunctional nanoparticles |
-
2016
- 2016-04-15 CN CN201610235654.1A patent/CN105816885A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1515244A (zh) * | 1996-10-01 | 2004-07-28 | �Ϻ���ͨ��ѧ | 蛋白质稳定的药理活性物质及其它的制备和应用方法 |
US20120190049A1 (en) * | 2010-12-10 | 2012-07-26 | University Of Washington Through Its Center For Commercialization | Glypican-3 targeting of liver cancer cells using multifunctional nanoparticles |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
GIL MOR,等: "Novel Biologically Active Silver-Avidin Hybrids", 《THE JOURNAL OF PHYSICAL CHEMISTRY C》 * |
吕世静等: "《药用高分子材料学》", 31 August 2015, 中国医药科技出版社 * |
张子健: "《生物化学》", 31 May 1990, 华东师范大学出版社 * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106942256A (zh) * | 2017-02-20 | 2017-07-14 | 北京林业大学 | 一种新型包载噻虫啉和信息素的蛋白纳米球的制备方法 |
WO2018196819A1 (zh) * | 2017-04-28 | 2018-11-01 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种包裹有难溶于水药物的蛋白质颗粒及其制备方法 |
US11260031B2 (en) | 2017-04-28 | 2022-03-01 | Academy Of Military Medical Sciences | Protein particle with a poorly water-soluble drug encapsulated therein and preparation method thereof |
CN108125928A (zh) * | 2018-01-16 | 2018-06-08 | 西南大学 | 一种载egcg的卵清蛋白纳米粒子的制备方法及其应用 |
CN112933052A (zh) * | 2021-01-25 | 2021-06-11 | 西安交通大学医学院第一附属医院 | 改善肿瘤缺氧微环境并增强免疫治疗的纳米递药系统 |
CN115400115A (zh) * | 2021-05-26 | 2022-11-29 | 石药集团中奇制药技术(石家庄)有限公司 | 多西他赛白蛋白组合物和免疫检查点抑制剂的组合及用途 |
CN114404410A (zh) * | 2022-01-29 | 2022-04-29 | 西安交通大学 | 一种基于白蛋白和氟伐他汀的纳米复合物及其应用 |
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