CN112986375A - 一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒及其应用 - Google Patents

一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112986375A
CN112986375A CN202110204133.0A CN202110204133A CN112986375A CN 112986375 A CN112986375 A CN 112986375A CN 202110204133 A CN202110204133 A CN 202110204133A CN 112986375 A CN112986375 A CN 112986375A
Authority
CN
China
Prior art keywords
tube
enrichment
short
long
kit
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202110204133.0A
Other languages
English (en)
Inventor
董世雷
周青雪
陈旭
李萌
孙龙
朱杰
张亚培
王选
范芳华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Hospital
Original Assignee
Zhejiang Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Hospital filed Critical Zhejiang Hospital
Priority to CN202110204133.0A priority Critical patent/CN112986375A/zh
Publication of CN112986375A publication Critical patent/CN112986375A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
    • G01N27/62—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating the ionisation of gases, e.g. aerosols; by investigating electric discharges, e.g. emission of cathode
    • G01N27/64—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating the ionisation of gases, e.g. aerosols; by investigating electric discharges, e.g. emission of cathode using wave or particle radiation to ionise a gas, e.g. in an ionisation chamber
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/34—Purifying; Cleaning
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/38—Diluting, dispersing or mixing samples

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Electrochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及细菌药敏检测领域，公开了一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒及其应用。该试剂盒中含有各自独立保存或者两者以上混合保存的以下单元：微量富集装置、质谱基质试剂、细菌培养试剂和抗生素；其中，所述微量富集装置中含有长底离心管、富集管和短底离心管，所述富集管为圆锥形，且该圆锥形的富集管的锥顶由滤膜构成，以及所述富集管能够置于所述长底离心管和所述短底离心管中，使得液体能够在离心作用下通过所述滤膜引出所述富集管以进入所述长底离心管或所述短底离心管中。该试剂盒用于药敏检测时具有样本需求量低，检测所需时长短的特点。

Description

一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏 检测试剂盒及其应用
技术领域
本发明涉及细菌药敏检测领域，具体地，涉及一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒及其应用。
背景技术
耐多药细菌的逐年增加是一个全球性的挑战，因此迫切需要新的解决方法，不仅包括预防和治疗方法，而且还包括检测和确定菌株的抗生素抗性方法。
目前，检测细菌耐药性的方法有标准表型药敏试验法和基于耐药基因DNA的快速分子检测法等，但前述两种方法均存在一定的局限性，严重限制了临床快速靶向抗感染治疗的发展。
标准表型抗药性试验是目前标准的药敏测试方法，该方法依赖于在抗生素存在下检测细菌的生长或抑制情况，它能检测绝大多数细菌的耐药性，而不受耐药机制的影响，但目前可用的标准表型抗药性试验标准方法大约需要 1天才能提供结果，并且需要的样本量大，成本也高。
现有虽已提出新颖的快速表型抗药性试验技术，但是由于缺乏商业开发，在实际实施中困难重重，且其高成本等问题阻碍了临床检验诊断中的广泛应用。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有细菌药敏检测技术存在的样本需求量高、检测所需时间长的缺陷。
为了实现上述目的，本发明的第一方面提供一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒，该试剂盒中各自独立保存或者两者以上混合保存的以下单元：
微量富集装置、质谱基质试剂、细菌培养试剂和抗生素；
其中，所述微量富集置中含有长底离心管、富集管和短底离心管，所述长底离心管和所述短底离心管的容积各自独立地为0.5-0.7mL，所述富集管的容积小于所述长底离心管和所述短底离心管的容积，
所述长底离心管和所述短底离心管的管体部分均由直筒结构和圆锥结构连接而构成，所述长底离心管的圆锥结构的高h1大于所述短底离心管的圆锥结构的高h2，
所述富集管为圆锥形，且该圆锥形的富集管的锥顶由滤膜构成，以及所述富集管能够置于所述长底离心管和所述短底离心管中，使得液体能够在离心作用下通过所述滤膜引出所述富集管以进入所述长底离心管或所述短底离心管中；
所述抗生素选自美罗培南、亚胺培南、左氧氟沙星、头孢哌酮/舒巴坦、苯唑西林、多粘菌素、替加环素、氨曲南、头孢他啶阿维巴坦、青霉素G、庆大霉素、红霉素、万古霉素、氨苄西林、利奈唑胺、替考拉宁、头孢唑啉、头孢吡肟、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星、呋喃妥因、阿莫西林/棒酸、头孢曲松、头孢西丁、复方新诺明、莫西沙星中的至少一种。
本发明的第二方面提供前述第一方面的试剂盒在细菌药敏检测中的应用。
本发明提供的试剂盒用于药敏检测时具有减少样品损耗，能够实现富集，进而实现样品需求量低、检测时长短的优点。
本发明的其他特征和优点将通过随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
图1为本发明的微量富集装置的立体示意图。
附图标记说明
1-长底离心管、2-富集管、3-短底离心管、c-盖
11-第一凸沿、21-第三凸沿、31、第二凸沿
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
如前所述，本发明的第一方面提供了一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒，该试剂盒中各自独立保存或者两者以上混合保存的以下单元：
微量富集装置、质谱基质试剂、细菌培养试剂和抗生素；
其中，所述微量富集置中含有长底离心管、富集管和短底离心管，所述长底离心管和所述短底离心管的容积各自独立地为0.5-0.7mL，所述富集管的容积小于所述长底离心管和所述短底离心管的容积，
所述长底离心管和所述短底离心管的管体部分均由直筒结构和圆锥结构连接而构成，所述长底离心管的圆锥结构的高h1大于所述短底离心管的圆锥结构的高h2，
所述富集管为圆锥形，且该圆锥形的富集管的锥顶由滤膜构成，以及所述富集管能够置于所述长底离心管和所述短底离心管中，使得液体能够在离心作用下通过所述滤膜引出所述富集管以进入所述长底离心管或所述短底离心管中；
所述抗生素选自美罗培南、亚胺培南、左氧氟沙星、头孢哌酮/舒巴坦、苯唑西林、多粘菌素、替加环素、氨曲南、头孢他啶阿维巴坦、青霉素G、庆大霉素、红霉素、万古霉素、氨苄西林、利奈唑胺、替考拉宁、头孢唑啉、头孢吡肟、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星、呋喃妥因、阿莫西林/棒酸、头孢曲松、头孢西丁、复方新诺明、莫西沙星中的至少一种。
本发明中，采用所述试剂盒中的微量富集装置能够使微量物质实现富集，进而降低样本的需求量，能够显著缩短药敏检测所需的时间，对细菌药敏检测具有重要的应用价值。
优选地，所述长底离心管和所述短底离心管均设置有用于密封的盖。本发明中对于盖和所述长底离心管和所述短底离心管的连接方式没有特别限定，例如可以为可拆卸地连接于所述长底离心管和所述短底离心管，也可以与所述长底离心管和所述短底离心管一体。
优选地，所述长底离心管的直筒结构的直径d1和所述短底离心管的直筒结构的直径d2相等，所述富集管的截面最大直径d3小于所述d1。
优选地，所述富集管的截面相对较大的一端能够可拆卸地连接于所述长底离心管和所述短底离心管的上端。其中，所述上端为所述直筒结构的开口端。
优选地，所述长底离心管的上端面内侧设置有第一凸沿，所述短底离心管的上端面内侧设置有第二凸沿。
根据一种优选的具体实施方式，所述富集管的上端面的外侧设置有与所述第一凸沿和所述第二凸沿配套的第三凸沿，使得所述第三凸沿能够与所述第一凸沿或所述第二凸沿紧密接触以使得所述富集管能够在所述长底离心管和所述短底离心管中实现相对固定。所述相对固定是指富集管在离心时能够保持稳定。
优选地，所述第一凸沿、所述第二凸沿以及所述第三凸沿的结构使得将所述富集管置于所述长底离心管和所述短底离心管中时，所述长底离心管和所述短底离心管能够保持密封。
优选地，所述第一凸沿、所述第二凸沿和所述第三凸沿的宽度相等。其中，所述宽度是指凸沿的环宽。
根据另一种优选的具体实施方式，所述滤膜为不吸水的滤膜，平均直径为2-8mm，平均孔径为0.18-0.25μm。优选情况下，所述滤膜的孔径为0.22μm。
优选地，所述质谱基质试剂为能够溶解分子量为0.7kDa-20kDa的多肽和/或分子量为0.7kDa-20kDa的蛋白质的试剂。
优选地，所述质谱基质试剂中含有α-氰基-4-羟基肉桂酸、乙腈和三氟乙酸。
优选地，所述α-氰基-4-羟基肉桂酸的浓度大于10mg/mL，所述乙腈的浓度为50体积％，所述三氟乙酸的浓度为0.05-2.5体积％。示例性地，所述α-氰基-4-羟基肉桂酸的浓度可以为10-50mg/mL。
根据另一种优选的具体实施方式，所述细菌培养试剂中含有灭菌阳离子调节的MH肉汤培养基(即CAMHB)和灭菌稀释液；所述灭菌阳离子调节的MH肉汤培养基与所述灭菌稀释液的含量体积比为200：1-3。
优选地，所述灭菌阳离子的浓度为不大于25mg/L。示例性地，铁离子的浓度可以为不小于0.03mg/L，锌离子的浓度可以为0.5-1mg/L，钙离子的浓度可以为20-25mg/L，镁离子浓度可以为10-12.5mg/L。
优选地，所述灭菌稀释液选自灭菌水和灭菌生理盐水中的至少一种。
优选地，所述灭菌阳离子选自钙离子、镁离子、锌离子和铁离子中的至少一种。
本发明中，对所述试剂盒中所述微量富集装置的数量没有特别的限制。示例性地，所述微量富集装置的数量可以为1-100个。所述质谱基质试剂的含量可以为1μL、3μL、5μL、10μL、100μL。所述细菌培养试剂的含量可以为100μL、200μL、1mL、10mL、20mL、50mL。所述抗生素的含量可以为 0.1μg、1μg、2μg、3μg、4μg、5μg、10μg。
以下结合图1提供本发明的试剂盒在药敏检测中的使用流程：
(1)取菌悬液(示例性地：100μL的7.5×105cfu/mL菌悬液，该菌悬液浓度参照《中国卫生行业标准-抗菌药物敏感性试验的技术要求(WS/T 639-2018)》)加入长底离心管1中，与长底离心管1中的抗生素混合均匀，获得特定浓度的抗生素菌悬液。
(2)将所述抗生素菌悬液全部转移至富集管2中，并将富集管2置于长底离心管1中，盖好盖c置于35℃恒温培养箱中孵育2-5h后，12000rpm 离心2min，弃去长底离心管1中的液体。
(3)将100μL的灭菌水加入置于长底离心管1中的富集管2中，对滤膜上的沉淀进行洗涤，12000rpm离心2min，弃去长底离心管1中的液体。
(4)将富集管2取出，然后置于短底离心管3中，并向富集管2滤膜加入3-5μL质谱基质试剂后，12000rpm离心2min，将短底离心管3中的液体全部转移至质谱靶板中，进行质谱鉴定。
如前所述，本发明的第二方面提供了前述第一方面的试剂盒在细菌药敏检测中的应用。
以下将通过实例对本发明进行详细描述。以下实例中，在没有特别说明的情况下使用的各种原料均为市售品，纯度均为分析纯。
质谱基质试剂：
α-氰基-4-羟基肉桂酸：浓度为饱和溶液(25℃)，购自Sigma-Aldrich 公司。
乙腈：浓度为50体积％，购自Sigma-Aldrich公司。
三氟乙酸：浓度为0.1体积％，购自Sigma-Aldrich公司。
细菌培养试剂：
CAMHB：阳离子为钙离子和镁离子，钙离子的浓度为20mg/mL，镁离子的浓度为10mg/mL，购自温州市康泰生物科技有限公司。
灭菌稀释液：
灭菌生理盐水：浓度为0.45wt％的NaCl溶液，购自梅里埃诊断产品(上海)有限公司。
灭菌水。
抗生素：
亚胺培南：购自温州市康泰生物科技有限公司。
美罗培南：购自温州市康泰生物科技有限公司。
左氧氟沙星：购自温州市康泰生物科技有限公司。
苯唑西林：购自温州市康泰生物科技有限公司。
肺炎克雷伯菌：菌株编号N471，分离自临床痰标本。
大肠埃希菌：菌株编号ATCC25922，购自北京中科质检生物技术有限公司。
粘质沙雷菌：菌株编号1109，分离自临床痰标本。
铜绿假单胞菌：菌株编号ATCC27853，购自北京中科质检生物技术有限公司。
鲍曼不动杆菌：菌株编号1024，分离自临床痰标本。
金黄色葡萄球菌：菌株编号P941，分离自临床痰标本。
屎肠球菌：菌株编号20P112，分离自临床血标本。
粪肠球菌：菌株编号20P118，分离自临床尿标本。
仪器：
离心机：型号为Allergra X-22R，厂家为美国贝克曼公司。
细菌鉴定及药敏测试仪：VITEK-2Compact全自动微生物分析系统及配套细菌药敏卡，厂家为梅里埃诊断产品(上海)有限公司。
质谱仪：
Figure BDA0002949156980000082
MS微生物鉴定系统，厂家为梅里埃诊断产品(上海) 有限公司。
质谱法鉴定细菌所需最低菌量的确定
用灭菌水将培养16-24h的新鲜肺炎克雷伯菌的菌浓度分别调至 0.938×105、1.875×105、3.75×105、7.5×105、1.5×106、3.0×106、6.0×106cfu/mL，然后取上述各浓度的菌悬液100μL，12000rpm离心2min，向沉淀物中加入质谱基质试剂后直接进行质谱鉴定，鉴出率如表1所示。其中，鉴出率＝鉴出次数/鉴定总次数×100％，鉴定总次数为6次。
表1
Figure BDA0002949156980000081
由表1可看出，鉴定所需理论最低菌悬液浓度为7.5×105cfu/mL，即最低菌量为7.5×104cfu，考虑到灭菌CAMHB培养基中蛋白成分的影响、洗涤操作中所带来的损耗，经洗涤处理步骤后可鉴定的理论最低菌悬液浓度为 3.0×106cfu/mL，即最低菌量为3.0×105cfu。
本发明中，用于药敏检测的最低菌量为3.0×105cfu。
不同病原细菌达到质谱可鉴定量(即3.0×105cfu)的孵育时间的测定
取出恒温培养箱中分别孵育1h、2h、3h、4h、5h后的菌悬液，依次离心、洗涤后，进行质谱鉴定(具体过程见前述使用流程)。设置6组平行试验，结果见表2。
表2病原细菌在不同孵育时间的鉴出次数
Figure BDA0002949156980000091
从表2可知，肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、粘质沙雷菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌、屎肠球菌、粪肠球菌孵育后可被鉴定所需要的最短时间依次为2h、3h、4h、4h、3h、3h、5h、5h。
以下实例中，菌悬液的制备方法如下：
在无菌操作台中，用接种环挑取恒温培养箱中孵育16-24h的新鲜纯菌落于灭菌稀释液中，调制成0.5±0.01麦氏浊度的菌悬液(1.5×108cfu/mL)后，取10μL的0.5±0.01麦氏浊度的菌悬液加入至2mL的CAMHB培养基中，将菌悬液稀释为7.5×105cfu/mL。
实施例1
取100μL的7.5×105cfu/mL的肺炎克雷伯菌的菌悬液分别加入至含有 0.0016μg、0.0032μg、0.0064μg、0.0125μg、0.025μg、0.05μg、0.1μg、0.2μg、 0.4μg、0.8μg、1.6μg、3.2μg美罗培南的长底离心管中，混合均匀。
采用移液枪将混合液全部转移至富集管中，将富集管置于长底离心管中，盖上盖置于35℃恒温培养箱中孵育2h后，置于离心机中12000rpm离心2min，弃去长底离心管中的液体。
将100μL的灭菌水加入置于长底离心管中的富集管中，对滤膜上的沉淀进行洗涤，12000rpm离心2min，弃去长底离心管中的液体。
将5μL质谱基质试剂加入富集管中溶解滤膜上的沉淀，将富集管置于短底离心管中，12000rpm离心2min，将短底离心管中的液体全部转移至质谱靶板中，进行质谱鉴定。结果见表4。
实施例2
采用与实施例1相似的方法进行，不同的是：将美罗培南替换为亚胺培南。结果见表4。
实施例3
采用与实施例1相似的方法进行，不同的是：将肺炎克雷伯菌替换为大肠埃希菌，孵育时间为3h。结果见表4。
实施例4
采用与实施例1相似的方法进行，不同的是：将肺炎克雷伯菌替换为粘质沙雷菌，将美罗培南替换为亚胺培南，孵育时间为4h。结果见表4。
实施例5：
采用与实施例1相似的方法进行，不同的是：将肺炎克雷伯菌替换为铜绿假单胞菌，孵育时间为4h。结果见表4。
实施例6
采用与实施例1相似的方法进行，不同的是：将肺炎克雷伯菌替换为鲍曼不动杆菌，将美罗培南替换为亚胺培南，孵育时间为3h。结果见表4。
实施例7
采用与实施例1相似的方法进行，不同的是：将肺炎克雷伯菌替换为金黄色葡萄球菌，将美罗培南替换为苯唑西林，孵育时间为3h。结果见表4。
实施例8
采用与实施例1相似的方法进行，不同的是：将肺炎克雷伯菌替换为屎肠球菌，将美罗培南替换为左氧氟沙星，孵育时间为5h。结果见表4。
实施例9
采用与实施例1相似的方法进行，不同的是：将肺炎克雷伯菌替换为粪肠球菌，将美罗培南替换为左氧氟沙星，孵育时间为5h。结果见表4。
对比例1
采用VITEK 2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对实施例1中的肺炎克雷伯菌进行美罗培南药敏检测。检测所需时间见表3，检测结果见表 4。
对比例2
采用VITEK 2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对实施例2中的肺炎克雷伯菌进行亚胺培南药敏检测。检测所需时间见表3，检测结果见表 4。
对比例3
采用VITEK 2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对实施例3中的大肠埃希菌进行美罗培南药敏检测。检测所需时间见表3，检测结果见表4。
对比例4
采用VITEK 2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对实施例4中的粘质沙雷菌进行亚胺培南药敏检测。检测所需时间见表3，检测结果见表4。
对比例5
采用VITEK 2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对实施例5中的铜绿假单胞菌进行美罗培南药敏检测。检测所需时间见表3，检测结果见表 4。
对比例6
采用VITEK 2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对实施例6中的鲍曼不动杆菌进行亚胺培南药敏检测。检测所需时间见表3，检测结果见表 4。
对比例7
采用VITEK 2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对实施例7中的金黄色葡萄球菌进行苯唑西林药敏检测。检测所需时间见表3，检测结果见表4。
对比例8
采用VITEK 2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对实施例8中的屎肠球菌进行左氧氟沙星药敏检测。检测所需时间见表3，检测结果见表4。
对比例9
采用VITEK 2Compact全自动细菌鉴定及药敏分析系统对实施例9中的粪肠球菌进行左氧氟沙星药敏检测。检测所需时间见表3，检测结果见表4。
测试例
采用MALDI-TOF MS法和VITEK 2Compact法对16株肺炎克雷伯菌进行美罗培南药敏检测。具体信息及测试结果见表5。
表3
检测时长(h)
对比例1 18.07
对比例2 18.02
对比例3 16.53
对比例4 18.95
对比例5 16.03
对比例6 12.59
对比例7 16.57
对比例8 13.65
对比例9 13.4
表4
Figure BDA0002949156980000131
注：R：表示耐药，S：表示敏感。
表5
Figure BDA0002949156980000132
Figure BDA0002949156980000141
注：R：表示耐药，S：表示敏感。
通过表2、表3和表5的结果可以看出，采用本发明的试剂盒能够显著降低药敏检测所需时长，并且对样本的需求量低。
通过表4和表5的结果可知，采用本发明的试剂盒结合质谱法能够更快速得到药敏检测结果，且比传统VITEK 2Compact法的检测结果更精确，并且采用本发明的试剂盒结合质谱法得到的药敏检测结果与传统VITEK 2 Compact法的检测结果是一致的，具有较广阔的临床应用前景。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中含有各自独立保存或者两者以上混合保存的以下单元：
微量富集装置、质谱基质试剂、细菌培养试剂和抗生素；
其中，所述微量富集装置中含有长底离心管、富集管和短底离心管，所述长底离心管和所述短底离心管的容积各自独立地为0.5-0.7mL，所述富集管的容积小于所述长底离心管和所述短底离心管的容积，
所述长底离心管和所述短底离心管的管体部分均由直筒结构和圆锥结构连接而构成，所述长底离心管的圆锥结构的高h1大于所述短底离心管的圆锥结构的高h2，
所述富集管为圆锥形，且该圆锥形的富集管的锥顶由滤膜构成，以及所述富集管能够置于所述长底离心管和所述短底离心管中，使得液体能够在离心作用下通过所述滤膜引出所述富集管以进入所述长底离心管或所述短底离心管中；
所述抗生素选自美罗培南、亚胺培南、左氧氟沙星、头孢哌酮/舒巴坦、苯唑西林、多粘菌素、替加环素、氨曲南、头孢他啶阿维巴坦、青霉素G、庆大霉素、红霉素、万古霉素、氨苄西林、利奈唑胺、替考拉宁、头孢唑啉、头孢吡肟、阿米卡星、妥布霉素、环丙沙星、呋喃妥因、阿莫西林/棒酸、头孢曲松、头孢西丁、复方新诺明、莫西沙星中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，所述长底离心管的直筒结构的直径d1和所述短底离心管的直筒结构的直径d2相等，所述富集管的截面最大直径d3小于所述d1。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其中，所述长底离心管的上端面内侧设置有第一凸沿，所述短底离心管的上端面内侧设置有第二凸沿；
优选地，所述富集管的上端面的外侧设置有与所述第一凸沿和所述第二凸沿配套的第三凸沿，使得所述第三凸沿能够与所述第一凸沿或所述第二凸沿紧密接触以使得所述富集管能够在所述长底离心管和所述短底离心管中实现相对固定；
优选地，所述第一凸沿、所述第二凸沿以及所述第三凸沿的结构使得将所述富集管置于所述长底离心管和所述短底离心管中时，所述长底离心管和所述短底离心管能够保持密封。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的试剂盒，其中，所述滤膜为不吸水的滤膜，平均直径为2-8mm，平均孔径为0.18-0.25μm。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的试剂盒，其中，所述质谱基质试剂为能够溶解分子量为0.7kDa-20kDa的多肽和/或分子量为0.7kDa-20kDa的蛋白质的试剂。
6.根据权利要求1-5中任意一项所述的试剂盒，其中，所述质谱基质试剂中含有α-氰基-4-羟基肉桂酸、乙腈和三氟乙酸；
优选地，所述α-氰基-4-羟基肉桂酸的浓度大于10mg/ml，所述乙腈的浓度为50体积％，所述三氟乙酸的浓度为0.05-2.5体积％。
7.根据权利要求1-6中任意一项所述的试剂盒，其中，所述细菌培养试剂中含有灭菌阳离子调节的MH肉汤培养基和灭菌稀释液；所述灭菌阳离子调节的MH肉汤培养基与所述灭菌稀释液的含量体积比为200：1-3。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中，所述灭菌稀释液选自灭菌水和灭菌生理盐水中的至少一种。
9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其中，所述灭菌阳离子选自钙离子、镁离子、锌离子和铁离子中的至少一种。
10.权利要求1-9中任意一项所述的试剂盒在细菌药敏检测中的应用。
CN202110204133.0A 2021-02-23 2021-02-23 一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒及其应用 Pending CN112986375A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110204133.0A CN112986375A (zh) 2021-02-23 2021-02-23 一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110204133.0A CN112986375A (zh) 2021-02-23 2021-02-23 一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112986375A true CN112986375A (zh) 2021-06-18

Family

ID=76349935

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110204133.0A Pending CN112986375A (zh) 2021-02-23 2021-02-23 一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112986375A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100120085A1 (en) * 2008-10-31 2010-05-13 Biomerieux, Inc. Method for separation, characterization and/or identification of microorganisms using mass spectrometry
CN203678544U (zh) * 2013-12-30 2014-07-02 王江雁 微量快速分离纯化收集器
CN104284984A (zh) * 2012-02-29 2015-01-14 哈佛大学校长及研究员协会 抗生素药敏性的快速测试
CN110305933A (zh) * 2019-08-20 2019-10-08 郑州安图生物工程股份有限公司 一种快速检测药敏的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100120085A1 (en) * 2008-10-31 2010-05-13 Biomerieux, Inc. Method for separation, characterization and/or identification of microorganisms using mass spectrometry
CN104284984A (zh) * 2012-02-29 2015-01-14 哈佛大学校长及研究员协会 抗生素药敏性的快速测试
CN203678544U (zh) * 2013-12-30 2014-07-02 王江雁 微量快速分离纯化收集器
CN110305933A (zh) * 2019-08-20 2019-10-08 郑州安图生物工程股份有限公司 一种快速检测药敏的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
彭阳 等: "丝状真菌的快速鉴定及药敏试验", 《临床检验杂志》 *
赵红阳: "基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）崎肠杆菌及其药物敏感性分析", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2019515662A (ja) 細菌の同定、および抗生物質感受性プロファイリング装置
Haigh et al. Rapid identification of bacteria from bioMérieux BacT/ALERT blood culture bottles by MALDI-TOF MS
Nimer et al. Accuracy of the VITEK 2 system for a rapid and direct identification and susceptibility testing of gram-negative rods and gram-positive cocci in blood samples
Ilki et al. Rapid reporting of urine culture results: impact of the uro-quick screening system.
US20110294158A1 (en) Rapid Detection of Bacteria Using Mass Spectrometric Analysis
CN111735673A (zh) 针对病原菌检测的液基薄层制片及其应用
CN112986375A (zh) 一种基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱的细菌药敏检测试剂盒及其应用
WO2016150871A1 (en) Test for determining susceptibility or resistance to polymyxins in enterobacteriaceae
CN110760559A (zh) 一种快速微生物抗生素敏感性检测方法
CN113552259A (zh) 一种快速检测产a/b类碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的试剂盒与检测方法
Sun et al. Matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry combined with UF-5000i urine flow cytometry to directly identify pathogens in clinical urine specimens within 1 hour
Wu et al. A novel improved gram staining method based on the capillary tube
Fukuzawa et al. Selective detection of DNA from viable Mycobacterium tuberculosis complex strains using the EMA-PCR method
CN112229896A (zh) 一种快速检测菌株携带tet(X)基因的方法及其应用
JP4510222B2 (ja) 細菌の鑑別方法
Gupta et al. Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization Time of Flight (MALDI-TOF) as an Indispensable Tool in Diagnostic Bacteriology: A Comparative Analysis With Conventional Technique
CN215209420U (zh) 一种离心式微量富集装置
CN112301140A (zh) 一种检测微生态活菌制品中金黄色葡萄球菌的方法
GB2594619A (en) Method for testing of antibiotic susceptibility in microorganisms
CN112051320B (zh) 基于激光解析离子化质谱技术快速检测细菌活性的方法
US20170211120A1 (en) Pathogen Identification in Complex Biological Fluids
RU2735983C1 (ru) Способ экспресс-анализа in vitro чувствительности к антибиотикам бактерий и грибов у пациента
CN111172305B (zh) 一种检测大肠埃希菌的方法及试剂盒
Akgun et al. Comparison of rapid and routine methods of identification and antibiotic susceptibility testing of microorganisms from blood culture bottles
Traub et al. A cluster of nosocomial cross-infection due to multiple antibiotic-resistant Acinetobacter baumannii: characterization of the strain and antibiotic susceptibility studies

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination