CN112979791B - 针对新型冠状病毒的抗体 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了针对新型冠状病毒的抗体。本发明还涉及编码抗体的核酸分子以及使用这些抗体进行诊断的方法。
Description
技术领域
本发明属于细胞免疫学、分子生物学领域，涉及针对新型冠状病毒的抗体。
背景技术
国际病毒分类委员会将新型冠状病毒命名为SARS-CoV-2，世界卫生组织将感染此病毒引起的肺炎称为COVID-19。此病毒传染性强，传播途径广。该病毒能迅速适应人体环境，感染后在潜伏期即具有传播能力，同时还有一些无症状感染者报道，甚至在多种动物体内也检测到病毒核酸。这些因素使得对该病毒的防控变的非常复杂，而且目前没有有效治疗药物及疫苗上市。SARS-CoV-2属于冠状病毒属，为单股正链RNA病毒，大小约30kb，与SARS-CoV相似性为79％，与蝙蝠体内分离的冠状病毒(Coronavirus，CoV)相似性最高约88％。SARS-CoV-2具有典型的冠状病毒特征，病毒包膜上有典型的棘突，形似日冕。核衣壳为螺旋对称型，主要结构蛋白是核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,NP)，NP全长420个氨基酸。NP在病毒结构蛋白中含量最多，在宿主感染早期大量表达，且免疫原性较强，能引起宿主强烈的免疫应答。因此，NP可作为SARS-CoV-2感染血清学诊断的主要靶标抗原。
由于特异性治疗药物及有效疫苗尚未研发成功，早期诊断成为防控疫情重要的措施，早期核酸诊断及临床诊断为确诊重要依据。虽然核酸诊断速度快，受采样的质量的影响大，存在假阳性和假阴性，影响防控措施的落实。部分无症状感染者在病程晚期核酸检测也呈阴性，单凭核酸检测很容易出现漏诊。血清学诊断是检测病原感染后机体的免疫反应，持续时间长，免疫反应稳定，且免疫反应随着病程进展呈动态变化趋势。因此，血清学诊断同样也是早期诊断和感染现状评价的的重要手段。
发明内容
本发明提供了抗体或其抗原结合片段，它们能特异地结合新型冠状病毒NP蛋白。这些抗体是人源单克隆杭体。
根据本发明的一个方面，本发明提供了能与新型冠状病毒NP蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含含有SEQ ID NO.1-3所示的序列的CDR区的重链可变区。
在本发明的具体实施方案中，重链可变区包含SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。
本发明的抗体或其抗原结合片段进一步包含含有SEQ ID NO.5-7所示的序列的CDR区的轻链可变区。
在本发明的具体实施方案中，轻链可变区包含SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。
本发明的抗体或其抗原结合片段可以是免疫球蛋白G(IgG)、IgM、IgE、IgA或IgD分子，在一种优选的实施方案中，这种人源抗体是IgG。可能是IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4亚型。这种抗体或其抗原结合片段可以从Fab片段、F(ab’)2片段、Fv片段、单链抗体或嵌合抗体衍生而来。
在一些实施方案中，本发明的抗体或其抗原结合片段可以作为融合蛋白的一部分。
根据本发明的另一个方面，本发明提供了包含前面所述的抗体或其抗原结合片段编码序列的多核苷酸分子，特别是提供了编码重链和轻链可变区、编码重链和轻链CDR1到CDR3连续的氨基酸序列以及编码单独CDRs的核苷酸序列。
所述核酸分子包括SEQ ID NO.17和18所示的序列。
根据本发明的又一个方面，本发明提供了一种表达载体，其包含前面所述的多核苷酸分子。
进一步，所述表达载体还包含与前面所述的多核苷酸分子可操作性连接的表达控制序列。
根据本发明的又一个方面，本发明提供了一种宿主细胞，其被前面所述的多核苷酸分子或前面所述的表达载体所转化。
根据本发明的又一个方面，本发明提供了一种组合物，所述组合物可以是经过标记的或衍生的前面所述的抗体或其抗原结合片段。在一种实施方案中，这种抗体或其抗原结合片段是经过放射性标记物、酶标记物、毒素、滋性物质或药物偶联物的标记。在另一种实施方案中，这种抗体或其抗原结合片段经过衍生以提高其一种或多种特性，比如半衰期、生物利用度或活性。在一种优选的实施方案中，这种抗体或其抗原结合片段用聚乙二醇，至少1个甲基或乙基或至少一个糖链衍生。在另一种优选的实施方案中，经过标记或衍生的抗体或其抗原结合片段被用于诊断或治疗方法。
所述组合物可以是几种抗体的组合，所述组合除了包含前面所述的抗体或其抗原结合片段之外，还包含其他一种或几种抗体或其抗原结合片段。作为其他抗体的实例，本发明的组合物还包含第二种抗体或其抗原结合片段，所述第二种抗体或其抗原结合片段包含重链可变区CDR1、重链可变区CDR2、重链可变区CDR3、轻链可变区CDR1、轻链可变区CDR2、轻链可变区CDR3；其中，
重链可变区CDR1含有SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列；
重链可变区CDR2含有SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列；
重链可变区CDR3含有SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列；
轻链可变区CDR1含有SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列；
轻链可变区CDR2含有SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列；
轻链可变区CDR3含有SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列；
优选地，所述第二种抗体包含重链可变区、轻链可变区；其中，重链可变区含有SEQID NO.12所示的氨基酸序列，轻链可变区含有SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列。
根据本发明的又一个方面，本发明提供了包含前面所述的抗体或其抗原结合片段的试剂盒。
所述试剂盒还可包括前面所述的第二种抗体。
进一步，所述试剂盒还包含显色剂。试剂盒中还有诊断方法的说明书。该试剂盒可利用包含的前面所述的抗体或其抗原结合片段以检测生物样品中的新型冠状病毒。
检测方法包括常规的免疫实验，包括(不限于)ELISA、RIA、FACS、免疫组化、Westernblot或免疫沉淀等。本发明的抗体或其抗原结合片段可用于检测新型冠状病毒NP蛋白。
本发明提供了一种检测生物样品中新型冠状病毒NP蛋白的方法，包括用本发明的前面所述的抗体或其抗原结合片段与生物样品接触，检测抗体与NP蛋白的结合，以确定样品中的新型冠状病毒是否存在。在一种实施方案中，抗体直接用某种可检测的标记物标记。在另一种实施方案中，抗NP蛋白的抗体(第一抗体)不标记，而第二抗体或其他可结合抗NP蛋白抗体的分子被标记。本领域的专业人员都知道，选择的第二抗体应能特异性结合第一抗体的种属和类别。例如，如果抗NP蛋白的抗体是一种人源IgG，那么第二抗体可以是抗人IgG抗体。能结合抗体的其他分子包括(不限于)蛋白A和蛋白G。
合适的抗体或第二抗体标记物在上文已做了描述，包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料和放射性物质等。合适的酶标记物包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、或乙酰胆碱酯酶等；合适的辅基复合物包括链亲和素/生物素和卵清亲和素/生物素等；合适的荧光材料包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、若丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白等；发光材料有发光氨；合适的放射性物质包括125I、131I、35S或3H等。
在另一种实施方案中，生物样品中的NP蛋白可以通过竞争免疫试验来检测，即使用以可测物质标记的NP蛋白标准品和未标记的抗NP蛋白的抗体进行试验。在这项试验中，生物样品、标记的NP蛋白标准品和抗NP蛋白抗体混合在一起，测定与未标记的抗体结合的标记的NP蛋白标准品的量。生物样品中的NP蛋白的量与抗NP蛋白抗体结合的标记的NP蛋白标准品的量成反比。
本发明还提供了制备本发明的抗体或其抗原结合片段的方法，包括用永生性细胞株、人工合成、重组表达或噬菌体展示技术等方法来制备。在具体实施方案中，本发明的方法包括培养前面所述的宿主细胞的步骤。
根据本发明的又一个方面，本发明提供了一种应用，其包含以下任一项所述的应用：
(1)前面所述的抗体或其抗原结合片段在制备新型冠状病毒检测产品中的应用；
(2)前面所述的抗体或其抗原结合片段在制备新型冠状病毒感染诊断产品中的应用；
(3)前面所述的组合物在制备新型冠状病毒的检测产品中的应用。
所述检测产品或诊断产品包括前面所述的试剂盒。
利用本发明的检测产品或诊断产品实现检测功能或诊断功能的方法同前面所述。
定义与一般技术
除在这里特别定义的以外，本发明中使用的科学和技术术语其含义与本领域普通技术人员通常所理解的一致。此外，除非上下文需要，本发明中使用的单数名词包括复数含义，复数名词包含单数含义。通常来说，这里描述的细胞组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学、蛋白质和核酸化学的相关术语是本领域中众所周知和常用的。本发明使用的方法和技术除非特别说明基本上是按照本领域中众所周知的常规方法进行的，这些方法在各种普通或专门的参考书籍中都有描述，如Sambrook et al.Molecular Cloning：ALaboratory Manual，2d ed.，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold SpringHarbor，N.Y.(1989)；Ausubel et al.，Current Protocols in Molecular Biology，Greene PublishingAssociates(1992)；Harlow and Lane Antibodies：ALaboratoryManual Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(1990)等。酶促反应和纯化技术按制造商说明书操作，有的是本领域的常规方法，有的在这里做了描述。这里使用的与分析化学、有机合成化学和药物化学相关的名词或实验操作程序都是本领域众所周知的和常用的。化学合成、化学分析、药物制剂、处方、运输和对病人的治疗均采用标准技术。
除非特别说明下列名词术语均为下述含义：
术语“免疫球蛋白”是一种四聚体分子。自然界存在的免疫球蛋白四聚体是由两个相同多肽链对组合物的，每个多肽链对有一条“轻”链(约25kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每条链的氨基端部分包含一个约100-110左右氨基酸的可变区，主要负责识别抗原。每条链的羧基端部分是恒定区主要负责发挥功能效应。人类的轻链分为κ链和λ链两类；重链被分为μ、δ、γ、α、ε五类，对应抗体的亚类分别为IgM，IgD，IgG，IgA和IgE。轻重链的可变区和恒定区均由一个约12个左右氨基酸的“J”区连接，重链还包括一个约10个左右氨基酸的“J”区。参考文献见：See generally，FundamentalImmunology Ch.7(Paul，W.，ed.，2nded.Raven Press，N.Y.(1989))。每个轻/重链对的可变区形成抗体的结合位点，因此完整的免疫球蛋白分子有两个结合位点。
免疫球蛋白链具有基本相同的结构：在相对保守的骨架区(FR)间有三个高度可变的区域，也叫互补决定区(CDRs)。两条链的CDRs被骨架区排成一列，使它们能够结合特异的表位。无论轻链或重链从N端到C端的功能区依次为FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。每个功能区所含氨基酸的划分与下列文献一致：Kabat，Sequences ofProteins ofImmunological Interest(National Institutes ofHlealth，Bethesda，Md.(1987 and1991))；Chothia&Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)；Chothia et al.Nature 342：878-88(1989)。
术语“抗体”是指完整的免疫球蛋白或者其抗原结合片段，该片段能和完整抗体竞争特异的结合位点。抗原结合片段可以由完整抗体通过重组蛋白质技术、酶解反应或化学切割等方法而获得。抗原结合片段主要包括：Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、dAb、互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双价抗体(diabodies)以及至少包括某种免疫球蛋白一部分而具有抗原结合特性的多肽。Fab是一种单价片段，由VL、VH、CL、CHI几个结构域组合物；F(ab′)2是一种二价片段，由两个Fab片段通过位于铰链区的二硫键连接而成；Fd片段由VH和CHI组合物；Fv由抗体的VL和VH组合物；dAb片段(Wardet al.，Nature 341：544-546，1989)由一个VH结构域构成。单链抗体(scFv)是由VL和VH区通过合成的接头相连为一条蛋白链而形成的一种单价的抗体分子(Bird et al.，Science 242：423-426，1988；Huston etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883，1988)。双价抗体(diabodies)是双价双特异性的抗体，它的VH和VL区位于一条多肽链，但是二者间的接头太短使同条链的两个结构域无法配对，因此迫使其与另一条链对应结构域配对而形成两个抗原结合位点(Holliger，P.，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448，1993；Poljak，R.J.，et al.，Structure 2：1121-1123，1994)。一个或多个CDR可以用共价或非共价的形式插入某个分子形成免疫粘附素。免疫粘附素可以是将CDR插入一条大的多肽链，也可以用共价或非共价的形式将CDR与另一条多肽链相连。CDR使免疫粘附素能特异性的结合感兴趣的特定抗原。
抗体可以有一个或不止一个结合位点。如果结合位点不止一个，那么它们可以相同也可以不同。比如自然界存在的免疫球蛋白有两个相同的结合位点，单链抗体或Fab片段仅有一个结合位点，而“双特异性”或“双功能性”抗体有两个不同的结合位点。双特异性抗体可用多种方法获得，如杂交瘤细胞融合或不同Fab′片段结合。参考文献见：Songsivilai&Lachmann Clin/.Exp.Immunol.79：315-321(19190)；Kostlny et al.J.Immunol.148：1547-1553(1992)。
抗体或免疫球蛋白分子片段或类似物可用本领域的常规技术按本说明书的介绍进行制备。优选的片段或类似物的氨基端或羧基端位于功能结构域附近。通过与公共或私有数据库中核苷酸和/或氨基酸数据的比较可以确定抗体的结构和功能结构域。优选的方法是用计算机比较方法来鉴别序列基序或预测在其他已知结构和/或功能的蛋白质中出现过的构象结构域。已有方法可以确定蛋白序列是否折叠成已知的三维结构(Bowie etal.Science 253：164(1991))。
优选的氨基酸置换可以：(1)降低对蛋白水解的敏感性，(2)降低对氧化作用的敏感性，(3)改变形成蛋白复合物时的结合亲合力，(4)改变结合亲和性，和(5)给予或改变这些类似物的其他物理化学或功能特性。类似物可以包含与自然界存在的蛋白序列不同的各种突变。比如，可在自然界存在的蛋白序列中(特别是在发生分子间接触的结构域以外的部分)进行单个或多个氨基酸置换(特别是保守氨基酸的置换)。保守氨基酸的置换不应该改变亲本序列的结构特性(比如取代的氨基酸不应该打断亲本序列的螺旋结构，或改变亲本序列的其他特定二级结构)。一些已知的蛋白二级和四级结构的例子参见Proteins，Structures and Molecular Principles(Creighton，Ed.，W.H.Freeman and Company，NewYork(1984))；Introductionto Protein Structure(C.Branden and J.Tooze，eds.，GarlandPublishing，New York，N.Y.(1991))；Thornton et at.Nature354：105(1991)。
本说明书使用的二十种基本氨基酸及其缩写均采用常规格式，参考文献见Immunology-A Synthesis(2nd Edition，E.S.Golub andD.R.Gren，Eds.，SinauerAssociates，Sunderland，Mass.(1991))。二十种基本氨基酸的立体异构体(如D-氨基酸)，非自然界氨基酸如α，α-双取代氨基酸、N-烷基氨基酸、乳酸，以及其他非传统氨基酸也可以在本发明的多肽中使用。非传统氨基酸的例子有：4-羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸、ε-N，N，N-三甲基色氨酸、ε-N-乙酰基赖氨酸、O-磷酸丝氨酸、N-乙酰丝氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸、s-N-甲基精氨酸，以及其他类似氨基酸和亚氨基酸(如4-羟脯氨酸)。这里采用的多肽表示方法左边是氨基末端，右边是羧基末端，与常规标准用法一致。
术语“多核苷酸”这里指至少10个碱基长的核苷酸聚合物，核苷酸可以是核糖核苷酸或脱氧核糖核苷酸，也可以是核苷酸的修饰形式。多核苷酸包括DNA的单链或双链形式。
术语“可操作地连接”序列包括与目的基因连在一起的表达控制序列，也包括反式作用的或与目的基因间隔有一段距离的表达控制序列。“表达控制序列”这里指能够影响与其相连的编码序列的表达或加工的多聚核苷酸序列。表达控制序列包括适当的转录启始、终止、启动子和增强子序列；有效的RNA加工信号如剪切和PolyA信号；能稳定细胞质mRNA的序列；能增强翻译效率的序列(如Kozak序列)；能增强蛋白稳定性的序列；在需要时能增强蛋白分泌性的序列。自然界中不同的宿主的这些控制序列不同；在原核生物，这些序列一般包括启动子、核糖体结合位点和转录终止序列；在真核生物，这些序列一般包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”至少包括所有表达和加工必需的成分，也包括对表达和加工有用的其他成分，比如引导序列和融合序列。
术语“载体”这里指能运输与其相连的其他核酸的核酸分子。一类载体是“质粒”，它是环形双链DNA，其他DNA片段可以插入其中。另一类载体是病毒载体，其他DNA片段可以插入病毒基因组。某些载体可以在其进入的宿主细胞中自动复制(如包含细菌复制原点的细菌载体和游离的哺乳动物载体)。有些载体(如非游离的哺乳动物载体)可以在进入宿主细胞后整合到宿主细胞的基因组中，与宿主基因组一起复制。此外，某些载体可以指导其所连基因的表达。这样的载体在这里称为“重组表达载体”(或简称“表达载体”)。在重组DNA技术上使用的表达载体一般为质粒的形式。本说明书中“质粒”和“载体”交替使用，因为质粒是最常用的载体形式。但是，本发明包括了其他形式的表达载体，如病毒载体(如复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)，它们具有同样的功能。
术语“重组宿主细胞”(或简称“宿主细胞”)这里指被转进重组表达载体的细胞。需要指出这个术语不仅指特定的原始细胞，还包括其后代细胞。因为突变或环境因素的作用，后代细胞可能出现某些改变，从而与亲本细胞不完全相同，但是仍包括在这里使用的术语“宿主细胞”的范围之内。
术语“患者”包括人及动物患病者。
整个说明书和权利要求书中，词语“包括″或相关词如“包含”或“含有”等理解为含所述数字或数字组，但不排除其他数字或数字组。
附图说明
图1显示本发明的重组SARS-CoV2 NP蛋白的SDS-PAGE图；
图2显示利用间接ELISA检测抗体滴度的结果图；
图3显示利用WB检测抗体与抗原结合的结果图；
图4显示利用SPR检测JS01的亲和活性结果图；
图5显示利用SPR检测JS02的亲和活性结果图；
图6显示利用SPR检测JS03的亲和活性结果图；
图7显示利用SPR检测JS04的亲和活性结果图；
图8显示利用SPR检测JS05的亲和活性结果图；
图9显示利用SPR检测JS06的亲和活性结果图；
图10显示利用SPR检测JS07的亲和活性结果图；
图11显示利用SPR检测JS08的亲和活性结果图；
图12显示利用SPR检测JS09的亲和活性结果图；
图13显示利用SPR检测JS10的亲和活性结果图；
图14显示利用SPR检测JS11的亲和活性结果图；
图15显示利用SPR检测JS12的亲和活性结果图；
图16显示利用SPR检测JS13的亲和活性结果图；
图17显示利用SPR检测JS14的亲和活性结果图；
图18显示利用SPR检测JS15的亲和活性结果图；
图19显示利用SPR检测JS16的亲和活性结果图；
图20显示利用双抗体夹心法检测抗体包被浓度的结果图；
图21显示利用双抗体夹心法检测抗体检测灵敏度的结果图；
图22显示本发明的抗原检测层析条的检测效果图。
具体实施方式
下面通过附图和实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。
实施例1抗体筛选
一、重组SARS-CoV2核蛋白(NP)表达
1.1主要试剂
SARS-CoV2 NP基因序列(GenBank序列号:MT066176.1)以及相关引物合成和测序均由通用生物系统(安徽)有限公司完成；E.coli DH5α，BL21(DE3)感受态细胞购自通用生物系统(安徽)有限公司；BamHⅠ和NotⅠ核酸内切酶购自NewEngland Biolabs(NEB)公司；EXTaq酶购自TaKaRa公司；HRP标记抗人Fc抗体购自Sigma公司；其他化学试剂均为国产分析纯试剂；感染2019-nCoV患者血清由本中心收集及保存。
1.2原核表达质粒构建
设计NP基因原核表达引物，上游引物带BamHⅠ酶切位点，下游引物带NotⅠ酶切位点。引物序列为：Cov2-NP-F:CGGGATCCTCTGATAATGGACCCCAAAATC；Cov2-NP-R:ATAAGAATGCGGCCGCAGGCCTGAGTTGAGTCAGCAC。使用EX Taq酶扩增NP基因，PCR反应程序为：94℃3min；94℃30s,58℃30s,72℃80s，共30个循环；72℃10min。PCR产物经胶回收约1 300bp目的片段，然后经BamHⅠ和NotⅠ双酶切后连接pET28a载体，转化E.coli DH5α感受态细胞。次日挑选单菌落测序正确后，提质粒转化原核表达菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞。
1.3 NP表达及纯化
将NP表达菌培养至OD600＝0.6后，加入终浓度0.5mmol/L的IPTG，16℃诱导6h，收集菌体，超声破碎后离心收集包涵体。将包涵体溶于8mol/L尿素中，然后用镍柱亲和层析纯化包涵体蛋白。纯化后梯度减少尿素含量，使蛋白透析复性至PBS中，最后经SDS-PAGE检测蛋白表达及纯化效果。小量表达成功以后即上100L发酵罐进行大量发酵，发酵培养基为TB培养基(1％甘油)，发酵参数为280rpm，通气比为0.5vvm(15L/min)，pH控制在6.8～7.2，罐压0.06MPa～0.1MPa，发酵温度为16℃，培养24h。
SDS-PAGE结果显示：NP全长加上载体中的His tag及其他附带氨基酸，预计蛋白相对分子质量约50×103。表达菌经IPTG诱导后，发现在50×103左右出现明显的条带，与预计分子量大小一致(图1A)。包涵体溶解后，过镍柱纯化，在150mmol/L咪唑时有明显的洗脱峰。蛋白经透析复性后，经SDS-PAGE发现在同样的位置出现单一蛋白条带(图1B)。此说明NP被成功诱导表达并且纯化后纯度较高。注：图中M：蛋白Makers；1：未诱导的pET28a-NP表达菌；2：IPTG诱导后pET28a-NP重组表达菌；3：纯化后重组核衣壳蛋白。
二、噬菌体文库构建
1、采集COVID-19患者恢复期外周血，从外周血中分离单个核细胞(PBMC)
本项目于2020年2月14日，经过知情同意，采集5位COVID-19确诊患者出院前外周血各20ml。使用GE的Ficoll-Paque PLUS，经密度梯度离心法，分离20ml肝素抗凝血中的单个核细胞(PBMC)。
2、PBMC中RNA的提取和cDNA的合成
使用QIAGEN的RNeasy Mini Kit提取PBMC细胞RNA，然后使用罗氏公司的第一链合成试剂盒(Transcriptor First Strand cDNA Synthesis Kit，Roche，Cat No.：04896866001)将RNA反转录成cDNA。
3、PCR扩增VK，VL和VH(EX Taq，Takara,Cat No.:DRR001A)
(1)扩增VK&VL体系如表1所示。
表1扩增VK&VL体系
| 溶液或组分 | 体积(μL) |
| cDNA | 1 |
| EX Buffer(10x) | 5 |
| dNTPs(10mM each) | 4 |
| P1(10μM) | 2 |
| P2(10μM) | 2 |
| EX Taq 1U/μl | 0.3 |
| dH<sub>2</sub>O | 35.7 |
(2)扩增重链Fd段体系如表2所示。
表2扩增重链Fd段体系
| 溶液或组分 | 体积(μL) |
| cDNA | 2 |
| EX Buffer(10x) | 10 |
| dNTPs(10mM each) | 8 |
| P1(10μM) | 2 |
| P2(10μM) | 2 |
| EX Taq 1U/μl | 0.6 |
| dH<sub>2</sub>O | 75.4 |
(3)反应程序如表3所示。
表3反应程序
PCR产物过2％琼脂糖凝胶电泳，回收750bp左右的片段。
4、轻链克隆(将VK和VL克隆入pComb3H载体)
VK和VL经XbaⅠ和SacⅠ酶切后与同样经XbaⅠ和SacⅠ酶切的pComb3H载体连接后，回收连接产物，然后电转XL1-Blue感受态细胞。
电击菌液涂15cm大平皿，次日刮菌，提质粒即为轻链库。此时重组质粒为pComb3H-VK和pComb3H-VL。
5、重链克隆(将VH基因克隆入pComb3H-VK和pComb3H-VL轻链库中)
将轻链库pComb3-L和Fd片段分别经XhoI和SpeI双酶切，与同样经XhoI和SpeI双酶切的pComb3H-VK和pComb3H-VL连接，然后电转即得到抗体文库。
6、抗体库的包装
(1)从-80℃冰箱取出抗体库，冰上融化后取1ml加入10ml A+(20μg/ml)2YT培养基中，37℃200rpm摇1小时；
(2)加100ml A+(100μg/ml)，T+(20μg/ml)2YT培养基，200rpm摇1小时；
(3)加1012pfu的VCSM13辅助噬菌体，37℃静置20min，200rpm摇2小时；
(4)加终浓度70μg/ml卡那30℃200rpm摇过夜；
(5)次日6000rpm离心20min，倒出上清，加入4％PEG8000(4g)和3％NaCl(3g)，混匀，置于冰上30min以上；
(6)分装于50ml离心管中9000rpm离心25min，弃去上清，控干，沉淀用1ml PBS重悬即为包装文库。
三、噬菌体文库筛选
1、将重组SARS-CoV2核蛋白(NP)包被于免疫管中，按50μg/管包被3管，于4℃放置过夜，次日用2％脱脂牛奶封闭免疫管1h。
2、向免疫管中加1.75ml含2％脱脂牛奶的PBS和250μl噬菌体文库，37℃摇1h，再37℃静置1h。
3、倒去噬菌体文库，用PBST洗20次，每次摇5min。
4、用1ml pH＝2.2的Gly-HCl洗脱免疫管，室温静置5min，再37℃摇5min，然后吸至1.5ml EP管中，加入57μl 2M Tris中和至pH＝7。
5、将洗脱液转移至一个新的50ml离心管中，立即加入10ml OD＝1的新鲜XL1-Blue，混匀后37℃孵育30min，加入10ml 2YT(Amp 100μg/ml，Tet 20μg/ml)。
6、取10μl菌液用来测洗脱库容量，剩下20ml培养基倒入500ml三角瓶，230rpm摇1h。
7、加入130ml 2YT(Amp 100ug/ml，Tet 20μg/ml)，230rpm摇1h。
8、加入MOI＝20的辅助噬菌体，37℃静置孵育30min。
9、3000g 10min离心，重悬沉淀至150ml 2YT(Amp 100μg/ml，Tet 20μg/ml)中，37℃，230rpm摇2h。
10、加入110μl 70mg/ml卡那霉素，30℃230rpm过夜。次日再加1/5体积的PEG-NaCl(40ml)，混匀后冰浴至少1h，然后10000g 4℃离心20min，沉淀重悬于2-3ml PBS中，瞬时离心去除杂菌，过0.45μm滤器后用于下一轮筛选。
11、重复上述筛选步骤3次，以达到对噬菌体文库富集筛选的目的。
12、第三轮富集完以后，挑选2*96个克隆。经IPTG诱导后，次日进行ELSA检测。
四、ELISA检测2*96个克隆的结合特异性
1、分别包被2块抗人Fab抗体(1:3000)和2块NP蛋白(2μg/ml)，于4℃包被过夜。
2、次日用3％脱脂牛奶封闭1h，然后加入50μl诱导上清和50μl脱脂牛奶，37℃孵育1h，PBST洗涤。
3、4块板均加入HRP标记的抗人Fab抗体(1:3000)，37℃孵育1h，PBST洗涤后，TMB显色。
经筛选共获得178株能与NP特异性结合的噬菌体抗体片段，该片段为人源的Fab段，包括轻链全长及重链的Fd段。将178个单菌落扩增后送测序，共获得159株轻重链齐全的合格序列。
实施例2全抗体的表达及相关功能验证
从获得的159株抗体中最终选定16株抗体用于全抗体的表达及相关功能验证，将此16株抗体命名为JS01～JS16。
其中，JS02抗体序列如下所示：
重链可变区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；
重链可变区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；
重链可变区CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
轻链可变区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；
轻链可变区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；
轻链可变区CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示；
重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，核酸序列如SEQ ID NO.17所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，核酸序列如SEQ ID NO.18所示。
JS08抗体序列如下所示：
重链可变区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；
重链可变区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；
重链可变区CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示；
轻链可变区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示；
轻链可变区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；
轻链可变区CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示。
重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO.16所示。
1、全抗体表达
将上述16株人源抗体，构建成IgG形式人源全分子抗体，并在293F细胞中表达，用Protein A纯化后备用。
2、ELISA检测16株抗体与重组NP结合特异性
将重组NP用PBS按1μg/ml浓度包被ELISA板，将所有抗体浓度稀释到1mg/ml，然后从1:10000开始倍比稀释，37℃孵育30min。然后PBST洗3次，加入HRP标记的抗人IgG(1:5000)，37℃孵育30min后PBST洗3次，然后TMB显色，终止后读取OD450吸光度值。
采用间接ELISA检测16株NP抗体的稀释滴度，阴性对照的平均OD值为0.119，标准差为0.132，因此将cutoff值定义为
由此判断16株抗体的检测滴度为1:80000～1:1280000之间(图2)。
3、16株抗体与纯化NP的Western Blot结果
将1μg重组NP经SDS-PAGE电泳后，转印至PVDF膜中，用上述16种抗体(0.5μg/ml)37℃孵育1h，用PBST洗涤3次，然后用HRP标记的抗人IgG(1:5000)孵育30min，PBST洗涤3次，然后用DAB之间在膜上显色。
WB实验结果显示16株抗体均能特异性结合重组表达的核蛋白(NP)，并在50kDa处出现明显的显色带，此提示该组抗体全部为线性表位的抗体(图3)。
4、抗体亲和活性检测
抗体亲和力测定由Biacore T200工作站完成，具体按以下步骤进行：首先使用氨基偶联活化剂NHS和EDC以10μl/min 300s活化CM5芯片，然后用10mM醋酸钠缓冲液(pH5.5)将重组表达的SARS-CoV-2NP稀释到1ug/mL，以10μl/min流经芯片30s使响应值(Responseunits,RUs)达到600左右，最后设置10μl/min、420s，进样乙醇胺对芯片表面剩余活化位点进行封闭。系列稀释的抗体，在25℃时以30μl/min流速依次进样，每测定一次浓度以后用pH2.0的甘氨酸-盐酸再生CM5芯片，然后进行下个浓度检测。实验结束后，利用Biacore T200Evaluation Software软件全局拟合曲线来获得结合亲和力。
实验结果如图4-19所示，JS01-JS16可高效结合SARS-CoV-2NP蛋白，亲和活性相关参数见表4。
表4抗体亲和力参数
5、抗体配对实验
5.1抗体包被浓度的确定
(1)将100μl JS12抗体从5μg/ml开始倍比稀释到0.0024μg/ml共稀释12个稀释度，然后包被于ELISA板中。4℃包被过夜，次日用1％BSA封闭2h，PBST洗3次。
(2)向每个包被浓度的第一孔加入50ng的重组NP，然后倍比稀释到0.39ng/孔，共8个稀释度，37℃孵育1h，PBST洗3次。
(3)加入1:1000稀释HRP标记的JS08，37℃孵育1h，PBST洗3次，TMB显色后读取OD450nm吸光度值。
由图20的曲线可以看出，包被抗体的量对检测灵敏性有影响，从5μg/ml到0.00245μg/ml的包被量看来，影响不大，检测NP抗原的灵敏性看小于3.9ng/ml。因此，后续配对实验，我们均选择2μg/ml浓度作为抗体包被量，用1:4000作为酶标抗体的稀释度。
5.2双抗夹心法检测NP
(1)将16株NP抗体JS01～JS16按2μg/ml浓度包被ELISA板，于4℃包被过夜，次日用1％BSA封闭2h，PBST洗3次。
(2)加入0.1μg/ml重组NP蛋白，然后倍比稀释至0.78ng/ml，共8个稀释度，37℃孵育1h，PBST洗3次。
(3)加入HRP标记的JS08(1:1000)，37℃孵育1h，PBST洗3次，TMB显色，读取OD450nm吸光度值。
由图21可见，酶标的JS08不能与JS06，JS11和JS08自身配对，而与其他13株NP抗体均可配对用于双抗夹心法检测NP。其中JS08与JS16配对效果最好，其检测限可达0.78ng/ml以下，其他配对抗体检测限在12.5-1.56ng/ml之间。
6、双抗体夹心免疫层析法检测重组NP的灵敏度
将抗JS08单抗包被在硝酸纤维素膜上形成T线，抗人IgG抗体标记至C线处。NP蛋白系列稀释后加50μL于样本孔中，样本孔下的结合垫上的标有色微球的JS01～JS16抗体与NP形成免疫复合物，然后通过层析作用迁移至T线处，与此处标记抗体结合固定，形成有色T线。多余的人源单抗再继续迁移至C线处，与抗人抗体结合，形成C线。以此来测定对NP的结合灵敏度。
采用有色微球标记JS08抗体与13株抗体分别配对，制成抗原检测层析条。用2ng/ml的重组NP验证试纸条，从结果可见全部层析条均可见明显的检测T线，而质控C线也非常明显(图22)。这说明13对抗体组合均可用于检测新冠状病毒的核蛋白，且检测限小于2ng/ml。
虽然以上仅描述了本发明的具体实施方式范例，但是本领域的技术人员应当理解，这些仅是举例说明，本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下，可以对这些实施方式做出多种变更或修改，但这些变更或修改均落入本发明的保护范围。
序列表
<110> 江苏省疾病预防控制中心（江苏省公共卫生研究院）
<120> 针对新型冠状病毒的抗体
<160> 18
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Gly Phe Thr Phe Ser Phe Tyr Ala
1 5
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys
1 5
<210> 3
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Ala Arg Glu Trp Phe Gly Glu Thr Trp Glu Gly Met Asp Ala
1 5 10
<210> 4
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Phe Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Trp Phe Gly Glu Thr Trp Glu Gly Met Asp Ala Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 5
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Gln Ser Val Ser Ser Tyr
1 5
<210> 6
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Asp Ala Ser
1
<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Leu Thr
1 5 10
<210> 8
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 11
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Ala Arg Glu Gln Phe Ser Gly Gly Asp Tyr Glu Gly Phe Asp Phe
1 5 10 15
<210> 12
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Gln Phe Ser Gly Gly Asp Tyr Glu Gly Phe Asp Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 13
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp
1 5
<210> 14
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Gly Asn Ser
1
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Trp Val
1 5 10
<210> 16
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Gln Ser Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 17
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
gaggtgcagc tgctcgagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt ttctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taagtactac 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gagggaatgg 300
ttcggggaga catgggaagg tatggacgcc tggggccaag ggaccacggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 18
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
gagaatgtgc tcacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agctacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagcaact ggcctttgct cactttcggc 300
ggagggacca aggtggagat caaa 324
Claims (11)
1.能与新型冠状病毒NP蛋白特异性结合的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的CDR区的氨基酸序列如SEQID NO.1-3所示；所述轻链可变区的CDR区的氨基酸序列如SEQ ID NO.5-7所示。
2.如权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
3.一种多核苷酸分子，其编码权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段。
4.根据权利要求3所述的核苷酸分子，所述多核苷酸分子包括SEQ ID NO.17和18所示的序列。
5.一种表达载体，其包含权利要求4所述的多核苷酸分子以及与其可操作性连接的表达控制序列。
6.一种宿主细胞，其被权利要求3所述的多核苷酸分子或权利要求5所述的表达载体所转化。
7.一种制备特异性结合新型冠状病毒NP蛋白的抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括培养权利要求6所述的宿主细胞的步骤。
8.一种组合物或试剂盒，其含有权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段。
9.根据权利要求8所述的组合物或试剂盒，其特征在于，所述组合物或试剂盒还包含第二种抗体或其抗原结合片段，所述第二种抗体包含重链可变区CDR1、重链可变区CDR2、重链可变区CDR3、轻链可变区CDR1、轻链可变区CDR2、轻链可变区CDR3；其中，
重链可变区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示；
重链可变区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示；
重链可变区CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示；
轻链可变区CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示；
轻链可变区CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示；
轻链可变区CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示。
10.根据权利要求9所述的组合物或试剂盒，其特征在于，所述第二种抗体包含重链可变区、轻链可变区；其中，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。
11.一种应用，其包含以下任一项所述的应用：
(1)权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段在制备新型冠状病毒检测产品中的应用；
(2)权利要求1或2所述的抗体或其抗原结合片段在制备新型冠状病毒感染诊断产品中的应用；
(3)权利要求8-10中任一项所述的组合物在制备检测新型冠状病毒的产品中的应用。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111060691A (zh) * | 2020-03-17 | 2020-04-24 | 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 | 检测covid-19的荧光免疫层析装置及其使用方法 |
| GB202003632D0 (en) * | 2020-03-12 | 2020-04-29 | Harbour Antibodies Bv | SARS-Cov-2 (SARS2, COVID-19) antibodies |
| CN111153991A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-05-15 | 北京博奥森生物技术有限公司 | 一种人SARS-CoV-2单克隆抗体及其制备方法和应用 |
| CN111187354A (zh) * | 2020-02-20 | 2020-05-22 | 北京新创生物工程有限公司 | 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)IgM/IgG抗体检测试剂盒 |
-
2020
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111187354A (zh) * | 2020-02-20 | 2020-05-22 | 北京新创生物工程有限公司 | 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)IgM/IgG抗体检测试剂盒 |
| CN111153991A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-05-15 | 北京博奥森生物技术有限公司 | 一种人SARS-CoV-2单克隆抗体及其制备方法和应用 |
| GB202003632D0 (en) * | 2020-03-12 | 2020-04-29 | Harbour Antibodies Bv | SARS-Cov-2 (SARS2, COVID-19) antibodies |
| CN111060691A (zh) * | 2020-03-17 | 2020-04-24 | 深圳市易瑞生物技术股份有限公司 | 检测covid-19的荧光免疫层析装置及其使用方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Detection of Nucleocapsid Antibody to SARS-CoV-2 is More Sensitive than Antibody to Spike Protein in COVID-19 Patients;Peter D Burbelo，等;《medRxiv》;20200424;全文 * |
| 新型冠状病毒3种抗体试剂盒的性能评估及临床应用初探;谭明凯，等;《中华微生物学和免疫学杂志》;20200430;全文 * |
| 血清2019-nCoV IgM和IgG抗体用于诊断新型冠状病毒肺炎的初探;李萍，等;《中华检验医学杂志》;20200411;全文 * |
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