CN112970789B - 化橘红挥发油的提取方法及其产品和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种化橘红挥发油的提取方法，化橘红挥发油从化橘红果实的外层果皮提取得到。化橘红挥发油具有显著抑制罗汉果斑枯病原菌菌丝生长的作用和抑制吴茱萸锈菌夏孢子萌发的作用。提供了化橘红挥发油在制备防治罗汉果斑枯病的产品中的应用和在制备防治吴茱萸锈病的产品中的应用。本发明的化橘红挥发油具有开发为病害绿色防治药剂的巨大潜力。

Description

化橘红挥发油的提取方法及其产品和应用

技术领域

本发明涉及吴茱萸锈病、罗汉果斑枯病防治技术领域。更具体地说，本发明涉及一种化橘红挥发油的提取方法及其产品和应用。

背景技术

罗汉果属葫芦科多年生藤本植物，是广西大宗道地药材，主要在桂北地区种植。罗汉果人工栽培时间较长，病害发生种类多且危害严重，据文献报道罗汉果地上部分发生的病害主要有病毒病、疱叶丛枝病、炭疽病、青枯病及生理性芽枯病。近年来随着罗汉果品种选育的不断推进，无籽罗汉果开始在桂林等地推广种植，在此过程中我们发现一种危害罗汉果叶片的病害，该病害的田间症状主要表现为叶片出现多个黄褐色小斑点，且病斑周围叶片组织大范围地褪绿变黄色，发生后期叶片呈黄褐色，枯萎，与罗汉果现有病害的症状均不一致，暂称之罗汉果斑枯病。据笔者田间调查植株发病率为84.0％，病叶率为42.46％，属严重发生的病害。

吴茱萸锈病，是吴茱萸树的重要病害之一，在吴茱萸种植基地附近有栽植桧柏的地区均有发生。吴茱萸锈病菌不直接危害吴茱萸果实只危害叶子。吴茱萸锈病菌为转主寄生菌，其转主寄主有桧析、龙柏、刺柏等。吴茱萸锈病使吴茱萸树叶片干枯，果实呈畸形，易早落，影响吴茱萸产量和质量，吴茱萸锈病会因为吴茱萸种植基地周围有寄主的差异，而有不同程度的吴茱萸锈病危害。吴茱萸锈病病症：主要危害叶片、幼果和新梢。叶片受害，开始在叶片下面发生鲜明的橙黄色圆形斑点，数目不一，以后当病斑扩展到4～8mm直径时，病部中央密生橙黄色针头大小的小粒点，即病菌的性孢子器。天气潮湿时，溢出浅黄色粘液，此粘液由无数的性孢子组成，粘液干后小粒点变成黑色。病斑组织变厚，正面凹陷，背面隆起，在隆起的部位上长出灰黄色的毛状物，长约4～5mm，此为病菌孢子器。一个病斑长出毛状物10至数十条。锈子器成熟时，先端破裂，散出黄褐色粉末，即病菌的锈孢子。后期病部变黑，叶片枯焦，易引起早期落叶。

吴茱萸锈病菌无夏孢子阶段，不发生重复侵染，一年中仅有短时间的由担孢子孙侵染吴茱萸树。病害发生轻重，与吴茱萸园周围有无桧柏的栽植，数量级多少及距离远近有关，尤其距吴茱萸园2.5～5公里范围内有无桧柏关系极大。在桧柏存在的条件下,病害能否发生严重,主要决定于气候因素。若在吴茱萸树展叶至幼果期间温暖多雨,冬孢子大量萌发,则吴茱萸锈病发生严重；若天气干旱无雨，冬孢子不能萌发，则病菌受到抑制。

以上两种植物病均未研究得到效果显著的防治药物或防治方法，因此，研究一种能够有效防治上述病害的药物或方法是具有重大意义的。

化橘红为芸香科常绿乔木，性温，味辛、苦。化橘红片药食两用，可用于中药制剂用药材，也常常直接泡水饮用，是一味非常重要的中药食材。化橘红中富含黄酮类成分，如柚皮苷、野漆树苷、柚皮素等，其中以柚皮苷含量最高。柚皮素为柚皮苷的苷元，具有比柚皮苷更强的抗氧化活性。据药典记载，化橘红辛、苦、温、归肺脾经，具散寒、燥湿、利气、消痰功能，用于风寒咳嗽，喉痒痰多、食积伤酒、呕恶痞闷。化橘红可能还有更多功能成分和功效待研究开发。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种化橘红挥发油的提取方法，挥发油提取率高。提供一种化橘红挥发油，具有抑制罗汉果斑枯病原菌菌丝生长的作用和抑制吴茱萸锈菌夏孢子萌发的作用，以及防治罗汉果斑枯病和吴茱萸锈病的作用。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种化橘红挥发油的提取方法，其特征在于，化橘红挥发油从化橘红果实的外层果皮提取得到。

优选的是，化橘红果实为从挂果起3个月后的果实。

优选的是，包括以下步骤：

将化橘红的外层果皮干燥、粉碎，然后与6～10倍外层果皮质量的水混合，于100℃下回流提取得油水混合物；

用乙醚萃取油水混合物，分离乙醚层，挥去乙醚，得淡黄色挥发油，即得化橘红挥发油。

优选的是，化橘红的外层果皮干燥条件为温度为50～60℃，湿度为60～80％。

优选的是，化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目。

优选的是，在与水混合前，将粉碎的外层果皮与0.2M的磷酸缓冲液混合，然后置于50～60℃水浴加热10～15min，再置于超声频率为40KHz下超声处理10～25min，其中，磷酸缓冲液的质量为外层果皮的质量的2～5倍。

提供一种化橘红挥发油，由上述任一项所述的提取方法提取得到。

提供化橘红挥发油在制备防治罗汉果斑枯病的产品中的应用。

提供化橘红挥发油在制备防治吴茱萸锈病的产品中的应用。

本发明至少包括以下有益效果：

第一、提供了一种化橘红挥发油的提取方法，提取率高。

第二、提取的化橘红挥发油具有抑制罗汉果斑枯病原菌菌丝生长的作用和抑制吴茱萸锈菌夏孢子萌发的作用，以及防治罗汉果斑枯病和吴茱萸锈病的作用。

第三、磷酸缓冲液、50～60℃水浴加热处理、超声处理对化橘红挥发油的提取率影响虽然不显著，但是对提取时间影响显著，实施例1～3的提取时间在5h以上，而实施例5～7在得到同样提取率的挥发油时，其提取时间少于2h(20～40min+1h)，显著缩短了提取时间，提高了提取效率。

第四、磷酸缓冲液、50～60℃水浴加热处理、超声处理后提取的化橘红挥发油，在抑制罗汉果斑枯病病原菌丝的作用上具有显著增强。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1为本发明其中一种技术方案的罗汉果斑枯病原菌菌丝抑制率；

图2为本发明其中一种技术方案的吴茱萸锈菌夏孢子萌发率。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得；在本发明的描述中，术语指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，并不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。

<实施例1>

化橘红挥发油的提取方法，包括以下步骤：

取从挂果起3个月后的化橘红果实(未成熟果实)；

取化橘红果实的外层果皮干燥、粉碎，干燥后质量为500g，置于烧瓶中，然后加入3000mL(密度以1g/mL计算)的水和数粒玻璃珠，振摇混合后，连接回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸5h，停止加热，开启测定器下端的活塞，将油水混合物缓缓放出，其中，化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目；

向油水混合物中加入20mL乙醚萃取，分离乙醚层，再向油水混合物中加入20mL乙醚，分离乙醚层，将两次的乙醚层混合，并挥去乙醚，得淡黄色挥发油，即得化橘红挥发油，放于褐色密闭容器中，于4℃冰箱内保存。

<实施例2>

化橘红挥发油的提取方法，包括以下步骤：

取从挂果起3个月后的化橘红果实(未成熟果实)；

取化橘红果实的外层果皮干燥、粉碎，干燥后质量为500g，置于烧瓶中，然后加入5000ml(密度以1g/ml计算)的水和数粒玻璃珠，振摇混合后，连接回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸5h，至测定器中油量不再增加，停止加热，开启测定器下端的活塞，将油水混合物缓缓放出，其中，化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目；

向油水混合物中加入20mL乙醚萃取，分离乙醚层，再向油水混合物中加入20mL乙醚，分离乙醚层，将两次的乙醚层混合，并挥去乙醚，得淡黄色挥发油，即得化橘红挥发油，放于褐色密闭容器中，于4℃冰箱内保存。

<实施例3>

化橘红挥发油的提取方法，包括以下步骤：

取从挂果起3个月后的化橘红果实(未成熟果实)；

取化橘红果实的外层果皮干燥、粉碎，干燥后质量为500g，置于烧瓶中，然后加入4000ml(密度以1g/ml计算)的水和数粒玻璃珠，振摇混合后，连接回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸5h，至测定器中油量不再增加，停止加热，开启测定器下端的活塞，将油水混合物缓缓放出，其中，化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目；

向油水混合物中加入20mL乙醚萃取，分离乙醚层，再向油水混合物中加入20mL乙醚，分离乙醚层，将两次的乙醚层混合，并挥去乙醚，得淡黄色挥发油，即得化橘红挥发油，放于褐色密闭容器中，于4℃冰箱内保存。

<实施例4>

化橘红挥发油的提取方法，包括以下步骤：

取化橘红果实(成熟果实)；

取化橘红果实的外层果皮干燥、粉碎，干燥后质量为500g，置于烧瓶中，然后加入4000ml(密度以1g/ml计算)的水和数粒玻璃珠，振摇混合后，连接回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸5h，至测定器中油量不再增加，停止加热，开启测定器下端的活塞，将油水混合物缓缓放出，其中，化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目；

向油水混合物中加入20mL乙醚萃取，分离乙醚层，再向油水混合物中加入20mL乙醚，分离乙醚层，将两次的乙醚层混合，并挥去乙醚，得淡黄色挥发油，即得化橘红挥发油，放于褐色密闭容器中，于4℃冰箱内保存。

<实施例5>

化橘红挥发油的提取方法，包括以下步骤：

取从挂果起3个月后的化橘红果实(未成熟果实)；

取化橘红果实的外层果皮干燥、粉碎，干燥后质量为500g，其中，化橘红的外层果皮干燥条件为温度为50℃，湿度为60％，化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目；

将粉碎的外层果皮与1000mL0.2 M的磷酸缓冲液(密度以1g/mL计)混合，然后置于50℃水浴加热10min，再置于超声频率为40KHz下超声处理10min。

置于烧瓶中，然后加入3000ml(密度以1g/ml计算)的水和数粒玻璃珠，振摇混合后，连接回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸1h，停止加热，开启测定器下端的活塞，将油水混合物缓缓放出，其中，化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目；

向油水混合物中加入20mL乙醚萃取，分离乙醚层，再向油水混合物中加入20mL乙醚，分离乙醚层，将两次的乙醚层混合，并挥去乙醚，得淡黄色挥发油，即得化橘红挥发油，放于褐色密闭容器中，于4℃冰箱内保存。

<实施例6>

化橘红挥发油的提取方法，包括以下步骤：

取从挂果起3个月后的化橘红果实(未成熟果实)；

取化橘红果实的外层果皮干燥、粉碎，干燥后质量为500g，其中，化橘红的外层果皮干燥条件为温度为60℃，湿度为80％，化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目；

将粉碎的外层果皮与2500mL0.2 M的磷酸缓冲液(密度以1g/mL计)混合，然后置于60℃水浴加热15min，再置于超声频率为40KHz下超声处理25min。

置于烧瓶中，然后加入5000ml(密度以1g/ml计算)的水和数粒玻璃珠，振摇混合后，连接回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸1h，停止加热，开启测定器下端的活塞，将油水混合物缓缓放出，其中，化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目；

向油水混合物中加入20mL乙醚萃取，分离乙醚层，再向油水混合物中加入20mL乙醚，分离乙醚层，将两次的乙醚层混合，并挥去乙醚，得淡黄色挥发油，即得化橘红挥发油，放于褐色密闭容器中，于4℃冰箱内保存。

<实施例7>

化橘红挥发油的提取方法，包括以下步骤：

取从挂果起3个月后的化橘红果实(未成熟果实)；

取化橘红果实的外层果皮干燥、粉碎，干燥后质量为500g，其中，化橘红的外层果皮干燥条件为温度为55℃，湿度为70％，化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目；

将粉碎的外层果皮与1500mL0.2 M的磷酸缓冲液(密度以1g/mL计)混合，然后置于55℃水浴加热12min，再置于超声频率为40KHz下超声处理15min。

置于烧瓶中，然后加入4000ml(密度以1g/ml计算)的水和数粒玻璃珠，振摇混合后，连接回流冷凝管。自冷凝管上端加水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入烧瓶时为止。置电热套中缓缓加热至沸，并保持微沸1h，停止加热，开启测定器下端的活塞，将油水混合物缓缓放出，其中，化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目；

向油水混合物中加入20mL乙醚萃取，分离乙醚层，再向油水混合物中加入20mL乙醚，分离乙醚层，将两次的乙醚层混合，并挥去乙醚，得淡黄色挥发油，即得化橘红挥发油，放于褐色密闭容器中，于4℃冰箱内保存。

<对比例1>

化橘红挥发油的提取方法同实施例7，其中，干燥方法不同。干燥方法具体为：将化橘红果实的外层果皮于常温下阴干。

<对比例2>

化橘红挥发油的提取方法同实施例7，其中，不同的是，在与水混合前，将粉碎的外层果皮与1500mL0.2 M的磷酸缓冲液混合，然后置于55℃水浴加热40min。

<对比例3>

化橘红挥发油的提取方法同实施例7，其中，不同的是，在与水混合前，将粉碎的外层果皮与1500mL水混合，超声频率为40KHz下超声处理40min。

<试验结果>

化橘红挥发油的提取率

表1各组试验的化橘红挥发油的提取率

组别	提取率％
		实施例1	0.86
实施例2	0.88
		实施例3	0.83
实施例4	0.52
		实施例5	0.89
实施例6	0.87
		实施例7	0.85
对比例1	0.76
		对比例2	0.81
对比例3	0.83

备注：提取率为挥发油质量占原料质量的百分比。

由表1中实施例4和实施例3比较可知，化橘红果实的成熟度对挥发油的含量影响显著，未成熟的化橘红果实的外层果皮中挥发油的含量显著高于成熟的化橘红果实的外层果皮。

由表1中对比例1和实施例7比较可知，化橘红果实的外层果皮的干燥方式对终提取率影响显著，采用在干燥条件为温度为50～60℃，湿度为60～80％相比于常温阴干可以显著减少挥发油的干燥损失。

由表1中对比例2、3与实施例7比较可知，磷酸缓冲液、50～60℃水浴加热处理、超声处理对化橘红挥发油的提取率影响不显著。

由表1中实施例1～3和实施例5～7比较可知，磷酸缓冲液、50～60℃水浴加热处理、超声处理对化橘红挥发油的提取率影响虽然不显著，但是对提取时间影响显著，实施例1～3的提取时间在5h以上，而实施例5～7在得到同样提取率的挥发油时，其提取时间少于2h(20～40min+1h)，显著缩短了提取时间，提高了提取效率。

<应用试验>

1、对罗汉果斑枯病原菌菌丝抑制效果

采用生长速率法测定：

(1)用未冷却的PDA培养基将实施例3和实施例7制备的挥发油稀释不同浓度倍数，依次为500倍、1000倍、2000倍、4000倍、8000倍，然后分别倒入直径为9cm培养皿中，每个培养皿10mL，制成含药平板，每个浓度处理3次重复，以PDA培养基为对照。

(2)将直径为6mm的罗汉果斑枯病病原菌饼接种至含药培养基平板中央，置于28℃培养箱培养5d后(此时对照病原菌菌丝已长满培养皿)用十字交叉法测量各处理的菌落直径，减去接种菌饼直径，求出3次重复的平均值，得出各处理的平均菌落扩展直径，用下述公式计算抑制率。

抑制率＝(对照菌落扩展直径-处理菌落扩展直径)/对照菌落扩展直径×100％

扩展直径＝培养5d天后的菌落直径-6mm

表2化橘红挥发油对罗汉果斑枯病原菌菌丝的抑制效果

表2数据显示，实施例3的化橘红挥发油稀释500倍、1000倍，对罗汉果斑枯病原菌菌丝的抑制率达100％；稀释2000倍，抑制率有所降低，为63.7％；稀释4000倍，抑制率降低至22.4％。可见，稀释化橘红挥发油≤1000倍时，对罗汉果斑枯病病原菌丝表现出极强的抑制作用，抑制率可达100％。

实施例7的化橘红挥发油稀释2000倍、4000倍、8000倍，抑制率均高于实施例3的化橘红挥发油对应的稀释倍数。可见，采用实施例7的方法(增加磷酸缓冲液、50～60℃水浴加热处理、超声处理三个技术手段结合)可以提高化橘红挥油对罗汉果斑枯病病原菌丝的抑制强度，发明人分析可能是上述技术手段结合后促进了少量对罗汉果斑枯病病原菌丝有特效作用的挥发油成分的溶出，或者是减少了对罗汉果斑枯病病原菌丝有特效作用的挥发油成分损失，但发明人更倾向于前者基理，但无论如何，均为后期对罗汉果斑枯病病原菌丝进行定向抑制提供了数据支持。

同上，采用生长速率法测定稀释2000倍的对比例1、对比例2、对比例3制备的化橘红挥发油对罗汉果斑枯病病原菌丝的抑制率，结果如表3所示：

表3对比例1、对比例2、对比例3的化橘红挥发油对罗汉果斑枯病原菌菌丝的抑制效果

表3数据显示，对比例1的化橘红挥发油的抑制率相差不大，并且只略大于实施例3的抑制率，却显著小于实施例7的抑制率，说明干燥方式对提升化橘红挥发油对罗汉果斑枯病病原菌丝的抑制强度的影响不显著。

对比例2～3的化橘红挥发油的抑制率相差不大，并且只略大于实施例3的抑制率，却显著小于实施例7的抑制率，进一步说明磷酸缓冲液、50～60℃水浴加热处理、超声处理三个技术手段单独作用并不能够显著提升化橘红挥发油对罗汉果斑枯病病原菌丝的抑制强度。

2、检测方法：将收集培养的夏孢子用无菌水配置成孢子悬浮液，该悬浮液在10倍物镜下观察，每个视野80～100个孢子。定量吸取孢悬液分别与实施例3和实施例7制备的挥发油混合使之达到规定浓度，以孢悬液为对照，3次重复。用移液枪吸取100μL加到凹面载玻片上，放置在保湿器中，25～28℃下保湿培养，48h后检查孢子萌发情况，用下述公式计算孢子萌发抑制率。

萌发率＝萌发的孢子数/检查的孢子数×100％

表4不同浓度挥发油对吴茱萸锈菌夏孢子萌发的抑制作用

表4数据显示，化橘红挥发油稀释500倍、1000倍，对吴茱萸锈菌夏孢子的抑制率均>90％，表现出了较强的抑制夏孢子萌发活性。稀释倍数为4000倍、8000倍时，孢子萌发率接近对照，抑制率均<10％。

由于实施例3和实施例7的挥发油对吴茱萸锈菌夏孢子的抑制效果相近，说明干燥方式、磷酸缓冲液、50～60℃水浴加热处理、超声处理对化橘红挥发油的抑制吴茱萸锈菌夏孢子效果影响不显著，即没有特效作用。因此，无需进行对比例1～3的挥发油对吴茱萸锈菌夏孢子的抑制试验。

3、挥发油与化学杀菌剂对罗汉果斑枯病菌菌丝生长及吴茱萸夏孢子萌发的抑制作用

化学药剂粉锈宁、苯醚甲环唑、代森锰锌通常用来防治吴茱萸锈病，咪鲜胺锰盐、戊唑醇、恶霉灵·甲霜等为防治罗汉果斑枯病的推荐药剂，参照以上供试化学杀菌剂的使用说明，用无菌水将各杀菌剂稀释至相应浓度(如表5所示)，与实施例3制备的化橘红挥发油稀释1000倍进行试验，分别测定各试验处理对罗汉果斑枯病菌菌丝生长的抑制作用及对吴茱萸夏孢子萌发的抑制作用(测定方法同上)。

结果如图1和2所示，化橘红挥发油对与常用化学杀菌的室内药效试验结果显示，化橘红挥发油对罗汉果斑枯病菌菌丝的抑制率与恶霉灵·甲霜一致，达100％，而高于咪鲜胺锰盐；化橘红挥发油对吴茱萸锈病夏孢子萌发的抑制率与苯醚甲环唑一致，达100％，而高于粉锈宁与代森锰锌。

表5供试药剂及使用浓度

4、化橘红挥发发油对罗汉果斑枯病、吴茱萸锈病的田间防治效果

综上试验数据显示，化橘红挥发油对罗汉果斑枯病、吴茱萸锈病的抑制作用等同甚至优于目前市场上化学杀菌剂。为此，进行将上述化学药剂及挥发油进行田间小区防治试验田间防治试验。

方法：化学杀菌剂按照其商品包装使用说明(见表4)，用清水稀释相应倍数，喷雾使用；实施例3挥发油的稀释，先用75％乙醇与挥发油按照1:1助溶，再用清水稀释1000倍。在病害发生初期每隔7d喷一次，连续施药3次，以不施用任何药剂为空白对照，每小区面积为20m²，重复3次。分别于用药前1天和第三次施药后7d调查田间发病情况，调查时每小区取5点，每点10株，调查叶片发病情况，统计情指数和防效。

锈病田间分级的标准：

0级：无病；

1级：发病病斑面积占整片叶面积的5％以下；

3级：发病病斑面积占整片叶面积的5％～25％；

5级：发病病斑面积占整片叶面积的26％～50％；

7级：发病病斑面积占整片叶面积的51％～75％；

9级：发病病斑面积占整片叶面积的76％以上。

斑枯病田间分级标准：

1级：叶片无病斑；

2级：病斑占叶片表面积≤20％；

3级：20％＜病斑占叶片表面积≤50％；

4级：50％＜病斑占叶片表面积≤70％；

5级：70％＜病斑占叶片表面积≤100％。

根据调查结果，按照下面公式计算病情指数及防治效果，统计分析防治效果差异。

病情指数＝∑(病级叶片数×代表数值)/(调查叶片总数×发病最重级别的代表数值)

×100

CK0——空白对照区施药前病情指数；

CK1——空白对照区施药后病情指数；

PT0——药剂处理区施药前病情指数；

PT1——药剂处理区施药后病情指数。

表6化橘红挥发油及常用杀菌性对罗汉果斑枯病及吴茱萸锈病的田间防治效果

结果：表6数据显示，化橘红挥发油稀释1000倍液对吴茱萸锈病及罗汉果斑枯病均有较好的防治效果，防效分别为85.2％、81.5％，在供试的对照化学药剂中分别仅略次于45％恶霉灵·甲霜可湿性粉剂、10％苯醚甲环唑微乳剂，而显著高于其他两种同类化学药剂，可见，化橘红挥发油具有开发为病害绿色防治药剂的巨大潜力。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (2)

1.化橘红挥发油在制备防治罗汉果斑枯病的产品中的应用，化橘红挥发油由下述方法提取得到：化橘红挥发油从化橘红果实的外层果皮提取得到，化橘红果实为从挂果起3个月后的果实；

将化橘红的外层果皮干燥、粉碎，然后与6～10倍外层果皮质量的水混合，于100℃下回流提取得油水混合物；

用乙醚萃取油水混合物，分离乙醚层，挥去乙醚，得淡黄色挥发油，即得化橘红挥发油；

其中，化橘红的外层果皮干燥条件为温度为50～60℃，湿度为60～80％；

化橘红的外层果皮粉碎至颗粒粒径小于50目；

在与水混合前，将粉碎的外层果皮与0.2M的磷酸缓冲液混合，然后置于50～60℃水浴加热10～15min，再置于超声频率为40KHz下超声处理10～25min，其中，磷酸缓冲液的质量为外层果皮的质量的2～5倍。

2.如权利要求1所述的化橘红挥发油在制备防治吴茱萸锈病的产品中的应用。

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