CN112941082A - 水稻株高基因qPH-IAA30的克隆及应用 - Google Patents

Abstract

本发明的目的是分离、克隆一个介导水稻株高的新基因qPH‑IAA30及其编码蛋白，通过基因工程技术将该基因敲除后，能调控水稻等作物的株高；提出根据该基因在水稻分子标记辅助选择育种中的应用。

Description

水稻株高基因qPH-IAA30的克隆及应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一个介导水稻株高的基因qPH-IAA30的克隆和应用，通过基因工程技术将该基因敲除后，能调控水稻等作物的株高，从而影响水稻的农艺性状和产量。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，水稻的株高是组成水稻株型结构的重要农艺性状之一，适度降低株高将为水稻的高产稳产提供重要保证。20世纪50年代末水稻半矮秆基因sd-1的应用掀起了农业生产的第1次“绿色革命”，其产量几乎增加了1倍(Spielmeyer et al.Semidwarf(sd-1),"green revolution"rice,contains a defectivegibberellin 20-oxidase gene.Proceedings of the National Academy of Sciences,2002,99(13):9043-9048)。在其后的几十年里，虽然鉴定和发现了大量的矮秆、半矮秆基因，遗憾的是，仅有半矮秆基因sd-1在育种上得到了广泛的利用(于永红等.水稻矮化相关基因的研究进展.植物遗传资源学报,2005,6(3):334-347)。国际水稻所利用常规杂交的方法相继育成了一批携带半矮秆基因sd-1的籼型矮秆高产品种，如IR8和Calrose等，其产量一般比高秆品种高20％-30％以上。然而，水稻育种中矮生基因遗传单一的问题越来越突出，已严重影响了水稻产量的持续提高，寻找优良性状水稻新资源的呼声越来越高。

水稻株高生长发育是一个很复杂的过程，利用遗传学及形态学相关知识鉴定更多的株高突变体，通过进一步分离该基因，对了解其生长发育的机理、揭示株高的遗传机制及培育理想性状的新品系具有重要意义。

生长素/吲哚-3-乙酸(Aux/IAA)基因家族在植物生长素信号转导中扮演着重要的角色。其与植物细胞的伸长，分裂与分化，向光性及重力性，根和芽的发生等植物生理生化过程都密切相关。该基因家族及其各自的功能在拟南芥中有比较详尽的研究，但在水稻这种全球性重要粮食作物中的研究相对较少。

发明内容

为解决现有技术中的问题，本发明提供克隆介导水稻株高的新基因qPH-IAA30及其编码蛋白，通过基因工程技术将该基因敲除后，能调控水稻等作物的株高，同时提出根据qPH-IAA30基因在水稻分子标记辅助选择育种中的应用。

本发明公开克隆水稻株高基因qPH-IAA30，它的核苷酸序列如序列表SEQID NO:1所示、或与序列表SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列有90％以上同源性的基因序列、或因插入、替代、缺失一个或多个碱基而产生的突变体等位基因或衍生物。

本发明公开克隆水稻株高基因qPH-IAA30编码的蛋白，它的氨基酸序列如序列表SEQID NO:2所示、或与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有90％同源性以上的氨基酸序列、或因插入、替代、缺失一个或多个氨基酸而产生的功能改变的蛋白或蛋白类似物。

本发明还公开将克隆水稻株高基因qPH-IAA30应用在水稻分子标记辅助选择育种中。

本发明利用图位克隆的方法从水稻中分离获得qPH-IAA30基因，克隆的水稻qPH-IAA30基因可通过CRISPR/Cas系统、分子辅助选择等技术调控植物的株高性状，运用于改变作物品种的株高、提高品种的抗倒性地域适应范围以及提高产量等。

本发明是通过以下方法实现的：

(1)构建以佳辐占为受体、恢1586为供体的176个近等基因系群体；利用近等基因系群体分析，发现近等基因系NIL36与受体佳辐占(野生型)相比，表现株高明显降低；

(2)利用图位克隆的方法，将株高qPH-iaa30基因定位在水稻第12染色体上，位于标记Indel12-29和Indel12-31之间，物理距离为31kb；

(3)根据候选基因注释数据(http://rice.plantbiology.msu.edu/；http://www.tigr.org/)，在31kb区域有3个候选基因，并且都有相应的全长cDNA；其中，LOC_Os12g40860编码富亮氨酸重复家族蛋白，LOC_Os12g40880编码尿苷激酶家族蛋白，LOC_Os12g40890为auxin-responsive Aux/IAA基因家族成员OsIAA30；

(4)对佳辐占和NIL36中3个基因分别测序，来研究哪个基因是候选基因；结果表明，LOC_Os12g40890只缺失了1bp，其余两个基因序列没有差异；因此，推测LOC_Os12g40890为候选基因，并将NIL36株高基因命名为qPH-iaa30，其对应受体佳辐占(野生型)为qPH-IAA30；开放阅读框(ORF)区域分析表明，qPH-IAA30有5个外显子，qPH-iaa30(突变基因)是第一个外显子第120个碱基的1bp缺失，导致LOC_Os12g40890提前终止；

(5)为了证实qPH-IAA30基因是否能影响株高性状，对佳辐占中qPH-IAA30基因的进行敲除；利用CRISPR/Cas9基因编辑系统设计一种序列特异性引导RNA(sgRNA)敲除qPH-IAA30基因，共获得3个敲除系OsIAA30KO-line1、OsIAA30KO-line2和OsIAA30KO-line3，并通过测序确认3个株系在目标位点携带大部分插入或缺失，成熟期株高表型分析表明，这3个敲除株系均表现出NIL36表型；

(6)为了分析基因qPH-IAA30是否影响生长素Aux/IAA水平的变化，测量佳福占(CK)和敲除系OsIAA30KO-line1之间的Aux/IAA含量，结果表明，与佳辐占(CK)相比，OsIAA30KO-line1的Aux/IAA含量显著降低。

相较于现有技术，本发明的有益效果在于：本发明在水稻中克隆了一个能够调控水稻的株高性状基因，运用于改变品种的株高、提高品种的抗倒性地域适应范围，同时能够提高作物的产量，也为其它作物利用同源基因法克隆相关基因提供了基因序列。

附图说明

序列表SEQ ID NO:1是本发明克隆的qPH-IAA30基因组的核苷酸序列，序列长度为5418bp；

序列表SEQ ID NO:2是本发明克隆的qPH-IAA30基因编码的蛋白质序列，编码277个氨基酸；

图1为本发明实施例1中近等基因系NIL36和野生型(佳福占，下同)的株高差异比较图；

图2为本发明实施例2中图位克隆法克隆qPH-iaa30基因的示意图；

图3为本发明实施例2中克隆的qPH-IAA30基因的结构和qPH-iaa30突变位点分析图；

图4为本发明实施例3中qPH-IAA30基因功能敲除验证的结果图；

图5为本发明实施例4中野生稻和敲除系的生长素差异水平的比较示意图。

具体实施方式

下面结合附图以及具体实施例对本发明作进一步的详细描述，但并非对本发明作限定。

实施例1

近等基因系NIL36的获得：本发明构建了以佳辐占为受体以恢1586为供体的176个近等基因系群体，具体实现方法是：以籼稻品种佳辐占为受体，粳稻恢复系品种恢586为供体，进行近缘系杂交；以佳辐占为母本，以恢586为父本；F₁植株再与佳辐占回交产生BC₁F₁代；将BC₁F₁植株再与佳辐占回交获得BC2F1植株，最后以同样的方式获得了118个BC₃F₁个体，自交获得BC₃F₂株系；

根据每个株系农艺性状特征，每个株系选择1～2株单株，最终共获得176个NILs；对这176个NILs株系和两个亲本，于2019年7月种植于福建省农业科学院水稻研究所实验农场，常规田间管理，通过对这176个NILs株系和两个亲本进行株高性状调查分析发现，近等基因系NIL36表现株高明显降低(参见图1，其中，左为野生型，右为NIL36)。

实施例2

参见图2，株高基因qPH-iaa30的图位克隆方法(其中，图2A为株高基因qPH-iaa30被定位在水稻第12染色体，位于分子标记RM2854和RM235之间，遗传距离为7.7cM；图2B为株高基因qPH-iaa30被定位在水稻第12染色体，位于分子标记Indle12-7和Indle12-9之间，遗传距离为295kb；图2C为株高基因qPH-iaa30被定位在水稻第12染色体，位于分子标记Indle12-29和Indle12-31之间，遗传距离为31kb；图2D为根据注释网站预测，在31kb的区间内有3个候选基因，分别是LOC_Os12g40860、LOC_Os12g40880和LOC_Os12g40890)，具体实现步骤如下所示：

1、株系NIL36株高基因qPH-iaa30的精细定位：为了完成株高基因qPH-iaa30定位，构建NIL36与佳辐占的杂交的F2分离群体，利用296对多态性引物，对45个隐形单株进行检测，结果表明12染色体上的标记RM3326与qPH-iaa30连锁，通过筛选多态性引物，最终将株高基因qPH-iaa30被定位在水稻第12染色体，位于分子标记RM2854和RM235之间，遗传距离为7.7cM。

为了进一步缩小定位的区间，在标记RM2854和RM235之间合成6对多态性indel标记(如表1)，将株高基因qPH-iaa30被定位在水稻第12染色体，位于分子标记Indle12-7和Indle12-9之间，遗传距离为295kb。

为了进一步精细定位株高基因qPH-iaa30，在标记Indle12-7和Indle12-9之间开发8对多态性indel标记(如表1)，最终将株高基因qPH-iaa30被定位在水稻第12染色体，位于分子标记Indle12-29和Indle12-31之间，遗传距离为31kb。

表1用于精细定位基因qPH-iaa30的引物

2、株高基因qPH-iaa30的候选基因分析：根据可用的序列注释数据库(http://rice.plantbiology.msu.edu/；http://www.tigr.org/)，在定位的31kb区域有3个注释候选基因(如图2D所示)，并且都有相应的全长cDNA；其中，LOC_Os12g40860编码富亮氨酸重复家族蛋白，LOC_Os12g40880编码尿苷激酶家族蛋白，LOC_Os12g40890为auxin-responsiveAux/IAA基因家族成员OsIAA30。

3、株高基因qPH-iaa30的基因序列分析：分别对佳辐占和NIL36中的这三个基因进行测序分析哪个基因为其候选基因；结果显示，LOC_Os12g40890只缺失了一个bp(120:C)(如图3所示，其中起始密码(ATG)和终止密码(TGA)均标出，灰色方框表示qPH-IAA30基因的外显子，方框之间的线条表示内含子，qPH-iaa30在ATG后第120bp的位置缺失1bp C)，而LOC_Os12g40860和LOC_Os12g40880这两个基因均没有的差异，因此，推测，LOC_Os12g40890，编码OsIAA30类蛋白，为其候选基因，并命名NIL36中株高的基因为qPH-IAA30,其对应受体佳辐占(野生型)中的基因为qPH-IAA30。

根据测序结果和基因结构开放阅读框(ORF)分析显示(http://www.ricedata.cn/gene/gene_info.aspx？id＝LOC_Os12g40890)，qPH-IAA30全长为5418bp，qPH-IAA30有5个外显子(基因全长正向测序引物：CATATTATCATTTCTTGGCCCC，反向测序引物：CAATGTAATGCGGCATTA)，CDs全长为834bp(CDs测序正向引物：ATGGCGGCGGACCTGGCCTT，反向测序引物：TCAGCTTCTGTTCTTGCATTTC)。而NIL36中qPH-iaa30(突变基因)是第一外显子第120个碱基的1bp缺失，从而导致qPH-IAA30提前终止，影响其功能，近等基因系NIL36表现株高降低的表型。

进行常规PCR扩增后进行琼脂糖电泳检测；

其中，PCR扩增反应体系如下：

2x Reaction Mix:16μL；

引物SEQ ID NO.1(F1)(10μΜ)：1μL；

引物SEQ ID NO.1(F1)(10μΜ)：1μL；

DNA模板(20-50ng/μL):2μL；

ddH₂O：补足至25μL；

PCR温度循环条件如下：94℃5分钟；94℃30秒；55℃30秒；72℃30秒；35个循环；72℃7分钟；10℃保存；

PCR反应结束后，取适量样品在3％的琼脂糖上进行电泳检测，电泳条件为110V，40分钟。

实施例3

株高基因qPH-IAA30敲除验证

为了进一步验证qPH-IAA30基因是否真正影响株高的性状，我们利用基因编辑技术(Cas9)对佳辐占(野生型)中qPH-IAA30基因进行敲除(gRNAs-OsIAA30靶标序列：ggctgacgaccgggagaagaagg)；最终获得3个不同的等位突变体(Line1、Line2和Line3)，分子标记检测(检测正向引物：CCTTCGAGGCGACCGAGCTC，反向引物：CTGTGCACGTACTTGGGAGC)显示，3个突变体有3种不同的突变类型，Line1插入1个T，Line2缺失3bp，Line3插入15bp(如表2)；

表2 3个敲除系的敲除突变位点

对这3个等位突变体Line1、Line2和Line3进行株高性状分析表明，其表型与近等基因系NIL36表型一致，进一步说明佳辐占qPH-IAA30基因突变，导致功能丧失，从而影响水稻株高降低的表型(如图4所示)，其中3个纯合的敲除系与野生型相比，株高均明显降低。

实施例4

株高基因qPH-IAA30影响生长素(Aux/IAA)变化

在水稻拔节期取佳辐占(CK)和敲除系OsIAA30KO-line1茎；然后，利用AB SciexQTRAP4500 LC-MS/MS平台，并通过MetWare(http://www.metware.cn/)来检测生长素(IAA)含量，每个样品重复3次；结果显示，敲除系OsIAA30KO-line1与佳辐占相比，其生长素(Aux/IAA)显著降低(参见附图5)。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

序列表

<110> 福建省农业科学院水稻研究所

<120> 水稻株高基因 qPH-IAA30 的克隆及应用

<160> 2

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 5418

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

catattatca tttcttggcc cccccaacat cacctctccc ttctcctctt tatctatttc 60

catttgcatt tccatttcac tcctttacat cacatttcta gccaccctct catcatcacc 120

atcaagctca aaccaacaag aagagagcta gcttttggta ctattagcca ctagtagata 180

gccaagaaga aaccaagaaa ttctttgagc tatctaatta gctaggtcca ttgattcatc 240

atcatctcca ttgatccact tagctttgaa gaagaagaag aagaagacat ttagttagct 300

agctatattg aggtgaggtg gcggcggcaa tggcggcgga cctggccttc gaggcgaccg 360

agctccggct cggcctgccc ggcggcggcg gtgatggaga cgccgcggcg gcggcggcga 420

ggagctcctc cgggaagagg ggcttcgccg agaccatcga cctcaagctg aagctggagc 480

cggcggccgc ggcggtggac gacgacgacg acaaggagga ggcggcggct gacgaccggg 540

agaagaaggt cgacatcgtc ggagctgaca acgacgacgc ctcgccgccg gccgccgccg 600

ccgccggcgg gatgaagcgg tcgccgagcc agagcagcgt cgtcaccgcc gccgccgacc 660

ccgagaagcc aagggctccc aagtacgtgc acagctacct tagcttagct aatgcccttc 720

ttaattttgc atgcatgcaa atcatgcaat aatctctcca aataaaatca agttcaaaca 780

tcaaacatac atgtaatcat cctctccaaa taacaaaact tagcaaattt taaaccctag 840

cataacccac ctctaacctt acataacaaa agaacaagta aatccttttc atgccaagat 900

tcgcagatat tcatcctgca gttgatttgc ttttgggata aagaaagctt tattgatctt 960

agataattac aacagccgag gcaactgatt aattagctac atagttaagt taatcagtta 1020

attcctcgat ttatgtatgt gtatcacaat gatgaacacc aaggatatcg atcgatcgat 1080

cgatgtgaac caaagcgcaa aaaaattagt taattgtttt ttttttgtaa actgtaatac 1140

tagtatatga atataaacca aattgattgc tactaggaga gaagagaaaa gaattaattg 1200

gtgtggtatg tatggctgga tctaagggac agatatattc attggtagta gatgcacaga 1260

gagaaagagc aaagcaaaat gtacaaggta ctagagaaga aggcagagag acatgggcat 1320

gttacttgtg ggtcacaggg gagacactgc ctagtgccga cacgataaaa gaaataaagc 1380

cacacatact actaattctc tctctctctt tcttgcacag ttcatctttt gtccacatca 1440

ccatcatttc catatcacta gcccaaccta tagttcttga gatgttacca cacatgcatg 1500

catgataaag acgaaataaa ttaatatttg gatacactac ggccattccc aacccaatga 1560

ctaggatggt gtccatagca ttaaataagc tgccacctaa aataaaaaat gatatggcaa 1620

gtgaataaat gaagaaagat aaaaaaacca tgagacatgg tttctacaca atattaaaga 1680

catcatgtga gataagtagc attaaattta agtacggaat agtggtgctt gcattggaag 1740

agtagtgtct agtattagtt tcttgatgat gtggagctta tagaaactat gtggaactaa 1800

tatcttaggt tgggaatggc ctactacata tgttggccat gcttgttgcc ttttagttct 1860

tgagagtaaa tgtatttata catgcatggc ctaccatttt ggatctgtct atatactcta 1920

catgcacgga tgcacccttg tcgagagtct tctgttcata tttggtttta tttttattta 1980

cagaaggaaa ataattaaag gtaggtttgg gtagccattg atgttgcagg agtgtgtgtg 2040

tgtgtgtgta tatggggggt tttttttatt agttgaagat gaattggaaa tgtgatgtga 2100

aatgtggtaa atgttgggtg ttgtgtttaa ttatgtggat gaagaatagg ttgtgtgtta 2160

gcttggaagg tacatgcatg tgtgccacca caaaaggttc ctcctttttc catgatttga 2220

tgcccctccc aatagtctca tggaccagtt cacctatata atacaagttt atatacaagt 2280

aaaaggagaa tctcatataa aacagaaaag ggaaatgtaa tttattctgc atatggtgaa 2340

aactgaaaac aagtaaccat gttcactaga caaggcctga aagtaccata ttgacgggag 2400

aaaaagaaag agccatatat actccattat attggtctat ttgtggatta attggattac 2460

accatgtaca ttgattagat atatatacca cctccagttt gaagcaccat tgacttttct 2520

acaaagtttt cctttaaaaa aaactctttc tccaaagttt gaccatgcaa caatatttac 2580

ttaattactt agttaaatga agtgaaaaga ctcaaagagt actactatat ctgttaccaa 2640

aagtacttta agcatactta atttgtatct ctatcgattt acataaatat ttttagaaaa 2700

gatcaataat caaacgaatt aaaaaaatca atggtgtcat gcatatattt taaaccagag 2760

atattatatt acagagctac taccaccatt tacgagaaag ctagtattaa accttaagaa 2820

ataaataaaa aacacaaaca attcttcagt aagatatttg gtaataatat tatagagcta 2880

cttctagtaa ctagctactc ttaattatta atcggtgaaa aaaattggtt aaatcttctt 2940

cacagggcac aggtggttgg gtggccgccg gtccggtcat accggaagaa catcctggcc 3000

gtgcaggccg acaagggcaa ggacgccgcc gacggcggcg gcgacaagtc cggcgccggc 3060

gccgccgccg ccgccttcgt gaaggtgagc atggacggcg cgccatacct gcgcaaggtg 3120

gacctcaaga tgtacaagag ctaccttgag ctctccaagg cactcgagaa gatgttcagc 3180

tccttcacca ttggtaatta tattaattac acataatata tgtttttata tataccatcg 3240

tattttcatt cattccacat attcgcattt taaatgtcta ttcctttaaa aatctcacgc 3300

tcaacatatc tatcctaaaa tataacaatt tttgatagct atacacatat ctggataaca 3360

acttgttcag atacaaagct ataagttatt atattttggt atagatgtag tatttatcat 3420

ataattttac aaaagctata attgaattat attgttttgt gcaaagttag tgagaacttc 3480

caagacctaa atatatagga ctttgattag ggtattgttg cctagcttta atctttgtgc 3540

aaagtgaggt tataaagtta gtagcagcta gcttaggtgg tgcatgatga agggttgggg 3600

tatatgattg catttggggg ggcatttgca tgtgtggtgg tggtcaccat gtggtttttg 3660

ccaaggagtg cactccatga tttgattaat ttgcatcctt tggtagtagt aggtgtgtct 3720

gcctgcccta gttgtctggc ataatgccat tgtctctcat ctctctttgc tagctaacac 3780

atgtacatgg atatcatcat catatatatg tttgctatct atagatgtta atttgctagc 3840

taagctcatg atcaaggttg catatatctg cttaattagc tactagcagc tggagtttgg 3900

tccattgatc attggcatgt gctgctctaa atccaagtgc ataataatca aatccacgtg 3960

ttgatgcatg catctttaaa aaagatatgg gaaacatatg gtattgttca gagagccaaa 4020

agatgattaa attggtcggc tttttaggtg tgcaagtgtg tgtgaggttc gtttactgat 4080

tgagccttga cacttgcttt taattagtag atagctaatt acctcaatca ttgtcatata 4140

gaagtgcaat ataattctcc attccaaact gaactctgaa caaacctagc aatgcaaaaa 4200

aaaaatactc tggaaactgt taaattgcaa agaaaaatag acatcatttt aattaggttg 4260

tactgtataa tcaaattaat cggcatggag ttgtagatgc ttaatgtttt tggtatgaag 4320

cttaatgtct gaattaattt tcatcaggaa actgtgggtc tcatggggtg aacggcatga 4380

acgagagcaa gattgctgat ctgctcaacg gctctgaata tgtgccaacc tacgaggaca 4440

aggacggcga ctggatgctc gtcggcgacg tcccatggga gtcagtaatc tctacttaaa 4500

ttttctatta tctaatatct aagtgtttaa ttttaataac ctgaattaag gtactagtct 4560

gaatctctga tatgagtcca tgctctgcat ctgtgttctg aattctgacc attttgtttg 4620

gaaatggaaa tttcaggatg tttgttgaat catgcaagcg ccttaggata atgaaaggat 4680

cagaagctat tggccttggt cagtgcatat caagttttat ttctacatac aaattagctc 4740

ctttgggttt gattttaagt tggggtttaa tttaagttgg atatcagtta ctgacagaac 4800

agtgaaatat aatatatttt ttgttttgaa ttgtttcagc accgagggca atggagaaat 4860

gcaagaacag aagctgagaa agaagaacat gtcgccatca aaaacggatg gatcatcatc 4920

agatgcaaca atctatctat agcttttctt aattgcagct ttgcctcatc cctgtatcat 4980

actcgcttgc tgtcctcatc tccaagtctg tacctttcct gatcagtgaa agtcattttg 5040

gtgttgtggt cagtttctgt tctgttgcag tcattaagtt cctaagtgtg tcatcttgtc 5100

ttatacataa gaaagaagcc aagaacatgt accagtagta cctgtcccat aattatgtct 5160

tttttgctct ccctgttctt ccctttctct ctgttttttt tttaccttaa tggcacaaaa 5220

tgtaaaggca ccctgctcaa agggacctca atgtattttg tccatgaaaa ggttgtttaa 5280

ttatcttcat ggtgtatcca tcaaacaaat aattattact gcaaggtgtt atgtgttaat 5340

taattgtatt gtatgaggat ggtgtctgct ctgctccctg ccttctctta atcaattgat 5400

taatgccgca ttacattg 5418

<210> 2

<211> 277

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

Met Ala Ala Asp Leu Ala Phe Glu Ala Thr Glu Leu Arg Leu Gly Leu

1 5 10 15

Pro Gly Gly Gly Gly Asp Gly Asp Ala Ala Ala Ala Ala Ala Arg Ser

20 25 30

Ser Ser Gly Lys Arg Gly Phe Ala Glu Thr Ile Asp Leu Lys Leu Lys

35 40 45

Leu Glu Pro Ala Ala Ala Ala Val Asp Asp Asp Asp Asp Lys Glu Glu

50 55 60

Ala Ala Ala Asp Asp Arg Glu Lys Lys Val Asp Ile Val Gly Ala Asp

65 70 75 80

Asn Asp Asp Ala Ser Pro Pro Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Met Lys

85 90 95

Arg Ser Pro Ser Gln Ser Ser Val Val Thr Ala Ala Ala Asp Pro Glu

100 105 110

Lys Pro Arg Ala Pro Lys Ala Gln Val Val Gly Trp Pro Pro Val Arg

115 120 125

Ser Tyr Arg Lys Asn Ile Leu Ala Val Gln Ala Asp Lys Gly Lys Asp

130 135 140

Ala Ala Asp Gly Gly Gly Asp Lys Ser Gly Ala Gly Ala Ala Ala Ala

145 150 155 160

Ala Phe Val Lys Val Ser Met Asp Gly Ala Pro Tyr Leu Arg Lys Val

165 170 175

Asp Leu Lys Met Tyr Lys Ser Tyr Leu Glu Leu Ser Lys Ala Leu Glu

180 185 190

Lys Met Phe Ser Ser Phe Thr Ile Gly Asn Cys Gly Ser His Gly Val

195 200 205

Asn Gly Met Asn Glu Ser Lys Ile Ala Asp Leu Leu Asn Gly Ser Glu

210 215 220

Tyr Val Pro Thr Tyr Glu Asp Lys Asp Gly Asp Trp Met Leu Val Gly

225 230 235 240

Asp Val Pro Trp Glu Met Phe Val Glu Ser Cys Lys Arg Leu Arg Ile

245 250 255

Met Lys Gly Ser Glu Ala Ile Gly Leu Ala Pro Arg Ala Met Glu Lys

260 265 270

Cys Lys Asn Arg Ser

275

Claims (3)

1.克隆水稻株高基因qPH-IAA30，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示、或与序列表SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列有90％以上同源性的基因序列、或因插入、替代、缺失一个或多个碱基而产生的突变体等位基因或衍生物。

2.根据权利要求1所述的克隆水稻株高基因qPH-IAA30编码的蛋白，它的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示、或与序列表SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有90％同源性以上的氨基酸序列、或因插入、替代、缺失一个或多个氨基酸而产生的功能改变的蛋白或蛋白类似物。

3.根据权利要求1所述的克隆水稻株高基因qPH-IAA30在水稻分子标记辅助选择育种中的应用。

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