CN112940090A - 耐受辐照灭菌及高效消毒的蛋白a免疫吸附介质 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了耐受辐照灭菌及高效消毒的蛋白A免疫吸附介质，重组蛋白A及其串联体或多聚体，所述重组蛋白A的氨基酸序列选自SEQ ID NO.：1～15所示氨基酸序列中的至少一条。本发明一些实例的重组蛋白A，具有高稳定性，可以耐受辐照灭菌和高效消毒性的处理。用15KGy的电子束辐照灭菌后，吸附介质的吸附性能保留率达到90%以上；使用0.5%的过氧乙酸溶液处理25h后吸附性能保留率可达到90%以上；使用1M NaOH浸泡填料处理36h，吸附性能的保留率可达到80%以上。

Description

耐受辐照灭菌及高效消毒的蛋白A免疫吸附介质
技术领域
本发明属于基因工程技术及抗体吸附技术领域，更具体地涉及耐受辐照灭菌及高效消毒的蛋白A免疫吸附介质。
背景技术
天然蛋白A是金黄色葡萄球菌细胞壁分离得到的一种蛋白。利用蛋白A能选择性地与人体免疫球蛋白（主要是IgG，含少量的IgA、IgM、IgE）结合的特性，用蛋白A制成亲和层析柱，通过体外循环的方法，能有效地清除血液中的免疫球蛋白，用于治疗自身免疫性疾病、器官移植排斥反应等疾病。目前德国费森尤斯公司推出了一次性的LIGASORB吸附柱，用于治疗自身免疫性疾病。
因蛋白A免疫吸附产品用于临床治疗时需建立体外循环，与人血液直接接触，在产品分类上属于三类无菌医疗器械。无菌产品的生产工艺分为两种：最终灭菌生产工艺和无菌生产工艺。天然的蛋白A免疫吸附产品在灭菌时蛋白A配体失活导致产品吸附性能大幅下降，因此只能采用无菌工艺。无菌工艺的无菌保证水平（≤10-3），而终端灭菌的无菌保证水平（≤10-6），安全性更高。按照药典要求，湿热灭菌和辐照灭菌属于终端灭菌。湿热灭菌温度高，条件苛刻，灭菌吸附柱对柱壳材料的收缩性要求也较高，辐照灭菌相对更加温和。辐照灭菌指将物品至于适宜放射源辐射的γ射线或适宜的电子加速器发生的电子束中进行电离辐射而达到杀灭微生物的方法（药典）。辐照灭菌优点：无污染无残留，也不会产生放射性；辐照杀菌效果彻底，穿透性强，可杀死表面及内部的微生物；冷灭菌，可在常温下进行；辐照效果稳定，环境温度、湿度等对辐照效果影响不大；无二次染菌问题，产品可在包装后灭菌，只要包装不透菌，便可长期保证质量；辐照技术还具有处理成本低，能耗少，灭菌速度快、操作简便、加工易控制等优点。辐照灭菌是美国FDA认可的医疗用品终端灭菌的最优方法。目前，发达国家生产的一次性医疗用品40～50% 的份额是采用辐射灭菌的（IAEA，2008）。因此能够采用辐照灭菌对蛋白A吸附柱进行灭菌，将大大提高产品的安全性。
高效消毒剂(high-efficacy disinfectant)指可杀灭一切细菌繁殖体（包括分枝杆菌）、病毒、真菌及其孢子等，对细菌芽孢（致病性芽孢菌）也有一定杀灭作用，达到高水平消毒要求的制剂。按照消毒技术规范的要求，医疗器械和用品(灭菌与高水平消毒)应对枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭对数值≥5.00。常用的高效消毒剂戊二醛、过氧乙酸、二溴海因、二氧化氯和含氯消毒剂如漂白粉、次氯酸钠、次氯酸钙（漂粉精）、二氯异氰尿酸钠（优氯净）、三氯异氰尿酸等。因高效消毒剂含有强氧化剂成分，所以大多数蛋白会分解或变性，导致蛋白失活，失去其功能。通过对蛋白A的基因工程改造，能够提高蛋白的稳定性。CN107405541A公开了一种用于亲和色谱基质的消毒方法，将蛋白A/G /L亲和色谱基质与过氧化氢、过氧甲酸和过氧乙酸接触，灭活基质中的细菌或芽孢。CN105518020提到以葡萄球菌蛋白A的C结构域为变体，固定于聚乙烯醚、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸酯等聚合物上，合成的介质可以耐受pH1.5的磷酸、乙酸、苯甲醇溶液，可以同时用酸和碱进行清洗消毒。
蛋白A吸附介质的耐碱性能主要用于常规的清洗消毒，强碱性溶液对脂蛋白有良好的清洗作用，同时可以有效去除溶液中的内毒素，是工业层析中最常用的清洗消毒溶液。
蛋白A与IgG的结合属于中性结合酸性洗脱，所以吸附柱可以反复使用多次，以降低患者治疗成本。蛋白A吸附柱作为三类医疗器械，在重复使用时，如果能够达到高效消毒的目的，产品更加安全。然而现有的蛋白A吸附介质，普遍不能耐受辐照灭菌或高效消毒，这导致其使用成本相对高昂。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供耐受辐照灭菌及高效消毒的蛋白A免疫吸附介质。
本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供：
重组蛋白A及其串联体或多聚体，所述重组蛋白A的氨基酸序列选自SEQ ID NO.：1～15所示氨基酸序列中的至少一条。
本发明的第二个方面，提供：
一种蛋白A免疫吸附介质，包括固相载体，所述固相载体上固载有重组蛋白A，所述重组蛋白A的氨基酸序列选自SEQ ID NO.：1～15所示氨基酸序列中的至少一条。
在一些实例中，所述重组蛋白A以多聚体分子或串联体的形式固载在固相载体上。固载的方式可以按现有技术进行。
在一些实例中，所述多聚体分子的聚合度为2～6，所述串联体的串联分子数为2～6。在这种条件下，部分重组蛋白A依然可以保持其原有的稳定，甚至具有更高的稳定性有吸附能力。
在一些实例中，所述蛋白A免疫吸附介质使用辐照进行辐照灭菌后吸附性能保留率不低于90%。
在一些实例中，所述蛋白A免疫吸附介质使用强氧化剂浸泡消毒后吸附性能保留率不低于90%。
在一些实例中，所述蛋白A免疫吸附介质使用碱溶液浸泡后吸附性能保留率不低于80%。
使用的辐照可以是本领域常用的灭菌用辐照源。在一些实例中，所述辐照选自电子束或γ射线。
辐照的剂量以能有效终端灭菌为准。在一些实例中，所述辐照的剂量不低于15KGy。必要时，可以适当增加。
强氧化剂优选为使用后无残留的强氧化剂，或其他医疗器械消毒过程中可以接受的强氧化剂。在一些实例中，所述强氧化剂选自戊二醛、过氧乙酸、二溴海因和含氯消毒剂。
在一些实例中，所述含氯消毒剂选自二氧化氯，次氯酸钠、次氯酸钙、氯化磷酸三钠，有机氯化合物中的至少一种。
在一些实例中，有机氯化合物包括但不限于二氯异氰尿酸钠、三氯异氰尿酸中的至少一种。
在一些实例中，使用强氧化剂浸泡消毒后，对枯草杆菌黑色变种芽孢杀灭对数值≥5.00。
在一些实例中，所述碱溶液的pH值不低于14。
在一些实例中，所述碱为NaOH、KOH中的至少一种。
固相载体为常用的可以耐受灭菌、消毒或强碱处理的固相载体。在一些实例中，所述固相载体选自壳聚糖、琼脂糖、纤维素、葡聚糖、树脂、纤维素中的至少一种。
本发明的第三个方面，提供：
重组蛋白A在制备吸附人免疫球蛋白相关产品中的应用，所述重组蛋白A的氨基酸序列选自SEQ ID NO.：1～15所示氨基酸序列中的至少一条。
在一些实例中，所述重组蛋白A以多聚体分子或串联体的形式存在。
在一些实例中，所述多聚体分子的聚合度为2～6。
在一些实例中，所述串联体的串联分子数为2～6。
在一些实例中，所述产品选自蛋白A免疫吸附柱、蛋白A亲和介质、蛋白A检测试剂盒、蛋白A磁珠、蛋白A免疫药物中的至少一种。
本发明的有益效果是：
本发明一些实例的重组蛋白A，具有高稳定性，可以耐受辐照灭菌和高效消毒性的处理。
本发明一些实例的蛋白A免疫吸附介质，能够耐受辐照灭菌和高效消毒性的处理。
本发明一些实例的蛋白A免疫吸附介质，用15KGy的电子束辐照灭菌后，吸附介质的吸附性能保留率达到90%以上。
本发明一些实例的蛋白A免疫吸附介质，能够耐受过氧乙酸消毒。
本发明一些实例的蛋白A免疫吸附介质，使用0.5%的过氧乙酸溶液处理25h后吸附性能保留率可达到90%以上。按照高效消毒要求，每次消毒时间15-30min即可，计算产品至少可重复使用50次。
本发明一些实例的蛋白A免疫吸附介质，使用1M NaOH浸泡填料处理36h，吸附性能的保留率可达到80%以上。按照CIP清洗时间30min计算，可重复清洗至少72次。
附图说明
图1是天然蛋白B 结构域序列与突变后序列比对结果；
图2是合成的琼脂糖免疫吸附介质形态。
具体实施方式
下述非限制性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何形式限制本发明。凡基于本发明上述内容所实现的技术均应当属于本申请要求保护的范围之中。
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂盒生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
合成吸附填料的基质载体应具有足够的稳定性，包括机械、物理和化学的稳定性，粒度约几十微米，含有多孔的结构和良好的生物相容性。可以选择稳定性较高的耐强氧化剂的载体，如市售填料sepharose、bestarose系列琼脂糖载体，苯乙烯树脂。配体偶联至载体可以选择常用的偶联技术，如通过-NH3、-OH、-SH进行连接。
蛋白A免疫吸附介质的合成可以使用现有技术进行，如参考本公司在先的专利CN110026166A（一种用于靶向吸附的蛋白A吸附材料及其制备方法）进行。
相对于绝大多数的蛋白质而言，蛋白A分子的结构非常简单，解折叠（denaturation）和重折叠（reorganization）很方便，因此多个串联的蛋白也能保持较高的活性。
实施例1 蛋白的表达纯化及吸附剂的合成
重组蛋白A的氨基酸序列如SEQ ID NO.：1～15所示，分别记为SEQ-1～SEQ-15。重组蛋白A的核苷酸序列可参考天然蛋白A的核苷酸序列进行设计或优化（Uhlen，1984）也可以使用其他公知的方法设计得到。
图1是天然蛋白B 结构域序列与突变后序列比对结果。
重组蛋白A可以使用现有方法制备得到。或按如下方法进行制备：
设计重组蛋白A或其串联体表达序列：CATATG-（重组蛋白A的核苷酸序列）n-GTAGACTGTCTCGAG，载体为PET30a，利用载体合成的his标签；所用表达菌株为大肠杆菌BL21（DE3），委托上海生工生物工程有限公司构建表达菌株。用LB培养基（卡那霉素终浓度为50μg/ml），培养4h后加入IPTG至终浓度为0.5mM，继续培养5h后离心收集菌体。超声破碎后用金属离子螯合层析进行纯化，平衡液为PBS，洗脱液为含有250mM咪唑的PBS溶液，收集洗脱峰后置于3K的透析袋中，透析置换为PBS体系溶液。
实施例2 各蛋白A吸附介质对辐照灭菌的耐受性
将各个蛋白合成的蛋白A吸附介质(代表性的形态照片如图2所示)分别取5mL置于EP管中，用电子束进行辐照灭菌（(15KGy)）。灭菌后取1mL用静态吸附的方法测定填料对人IgG溶液的吸附性能，1 mL填料加入80 mg人 IgG溶液，置于室温脱色摇床上100rpm 混匀1h，反应完成后，将上述反应液倒入一次性亲和层析柱中，先用约10mL平衡液(PBS)冲洗，然后用10mL洗脱液（柠檬酸2.1g/L，NaCl 8.0g/L）洗脱，收集洗脱峰，用紫外检测OD280的数值，吸附性能（mg/mL）= (OD280/1.38)×10。结果如表1所示。
Figure DEST_PATH_IMAGE002
表中，重组蛋白A序列后的数字为串联体中重组蛋白A的个数，下同。
由表1结果看出，SEQ-7、SEQ-12、SEQ-13、SEQ-14、SEQ-15这几个序列的蛋白合成的蛋白A吸附介质用辐照灭菌处理后稳定性较高。（SEQ-12）3、（SEQ-13）3、（SEQ-15）6这几个串联体的稳定性较高。
实施例3 各蛋白A吸附介质对强氧化剂的耐受性
将各个蛋白合成的蛋白A吸附介质分别取1mL，用0.5% CH3COOOH （环凯，稀释后过氧乙酸终浓度为5000mg/L）25h（按照消毒时间15-30min计算，至少可重复使用50次）后，用纯化水把介质清洗至pH为中性。然后用静态吸附的方法测定填料对人IgG溶液的吸附性能，测定方法同实施例2，结果如表2所示。
Figure DEST_PATH_IMAGE004
由表2结果看出，SEQ-7、SEQ-12、SEQ-13、SEQ-14、SEQ-15这几个序列的蛋白合成的蛋白A吸附介质用过氧乙酸处理后稳定性较高。（SEQ-12）4、（SEQ-13）6、（SEQ-15）5这几个串联体的稳定性较高。
实施例4 各蛋白A吸附介质对氢氧化钠的耐受性
将各个蛋白合成的蛋白A吸附介质分别取1mL，用1M NaOH浸泡处理36h后，用纯化水把介质清洗至pH为中性。然后用静态吸附的方法测定填料对人IgG溶液的吸附性能，测定方法同实施例2，结果如表3所示。
Figure DEST_PATH_IMAGE006
由表3结果看出，SEQ-7、SEQ-12、SEQ-13、SEQ-14、SEQ-15这几个序列的蛋白合成的蛋白A吸附介质用氢氧化钠灭菌处理后稳定性较高。（SEQ-7）3、（SEQ-13）3这两个串联体的稳定性较高。
以上是对本发明所作的进一步详细说明，不可视为对本发明的具体实施的局限。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的简单推演或替换，都在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州康盛生物科技股份有限公司
<120> 耐受辐照灭菌及高效消毒的蛋白A免疫吸附介质
<130>
<160> 15
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Ala Asp Ala Lys Phe Asp Lys Glu Gln Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Thr Glu Glu Gln Arg Asn Gly Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Val Ser Lys Asn Leu Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 2
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Ala Asp Ala Lys Phe Asp Lys Glu Ala Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Gly Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Gln Ser Lys Ala Leu Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 3
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Ala Asp Asn Lys Phe Asp Lys Glu Ala Gln Glu Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Gly Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ala Ala Ile Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 4
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Ala Asp Asn Lys Phe Asn Lys Glu Gln Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Thr Glu Glu Gln Arg Asn Ala Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ala Ala Ile Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 5
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Ala Asp Ala Lys Phe Asn Lys Glu Gln Gln Glu Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Thr Glu Glu Gln Arg Asn Ala Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Gln Ser Lys Asn Leu Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 6
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
Ala Asp Asn Lys Phe Asp Lys Glu Gln Gln Glu Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ala Ala Leu Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 7
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Ala Asp Asn Lys Phe Asn Lys Glu Ala Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Thr Glu Glu Gln Arg Asn Gly Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Val Ser Ala Asn Ile Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 8
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 8
Ala Asp Ala Lys Phe Asn Lys Glu Ala Gln Glu Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Thr Glu Glu Gln Arg Asn Gly Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Val Ser Ala Ala Leu Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 9
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 9
Ala Asp Ala Lys Phe Asp Lys Glu Gln Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Val Ser Lys Asn Leu Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 10
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Ala Asp Ala Lys Phe Asn Lys Glu Gln Gln Glu Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Gly Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Val Ser Lys Ala Leu Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 11
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 11
Ala Asp Asn Lys Phe Asp Lys Glu Ala Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Val Ser Lys Ala Ile Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Phe Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 12
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 12
Val Asp Ala Lys Phe Asp Lys Glu Ala Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Thr Glu Glu Gln Arg Asn Ala Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Val Ser Lys Ala Ile Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 13
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 13
Val Asp Ala Lys Phe Asp Lys Glu Ala Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Thr Glu Glu Gln Arg Asn Ala Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Val Ser Lys Ala Ile Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Phe Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 14
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 14
Val Asp Ala Lys Phe Asp Lys Glu Gln Gln Glu Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Thr Glu Glu Gln Arg Asn Ala Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Val Ser Lys Ala Ile Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys
50 55
<210> 15
<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 15
Val Asp Ala Lys Phe Asp Lys Glu Gln Gln Glu Ala Phe Tyr Glu Ile
1 5 10 15
Leu His Leu Pro Asn Leu Thr Glu Glu Gln Arg Asn Ala Phe Ile Gln
20 25 30
Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Val Ser Lys Ala Ile Leu Ala Glu Ala
35 40 45
Lys Lys Leu Asn Phe Ala Gln Ala Pro Lys
50 55

Claims (10)

1.重组蛋白A及其串联体或多聚体，其特征在于：所述重组蛋白A的氨基酸序列选自如下序列中的至少一条：
SEQ-1：ADAKFDKEQQNAFYEILHLPNLTEEQRNGFIQSLKDDPSVSKNLLAEAKKLNDAQAPK
SEQ-2：ADAKFDKEAQNAFYEILHLPNLNEEQRNGFIQSLKDDPSQSKALLAEAKKLNDAQAPK
SEQ-3：ADNKFDKEAQEAFYEILHLPNLNEEQRNGFIQSLKDDPSQSAAILAEAKKLNDAQAPK
SEQ-4：ADNKFNKEQQNAFYEILHLPNLTEEQRNAFIQSLKDDPSQSAAILAEAKKLNDAQAPK
SEQ-5：ADAKFNKEQQEAFYEILHLPNLTEEQRNAFIQSLKDDPSQSKNLLAEAKKLNDAQAPK
SEQ-6：ADNKFDKEQQEAFYEILHLPNLNEEQRNAFIQSLKDDPSQSAALLAEAKKLNDAQAPK
SEQ-7：ADNKFNKEAQNAFYEILHLPNLTEEQRNGFIQSLKDDPSVSANILAEAKKLNDAQAPK
SEQ-8：ADAKFNKEAQEAFYEILHLPNLTEEQRNGFIQSLKDDPSVSAALLAEAKKLNDAQAPK
SEQ-9：ADAKFDKEQQNAFYEILHLPNLNEEQRNAFIQSLKDDPSVSKNLLAEAKKLNDAQAPK
SEQ-10：ADAKFNKEQQEAFYEILHLPNLNEEQRNGFIQSLKDDPSVSKALLAEAKKLNDAQAPK
SEQ-11：ADNKFDKEAQNAFYEILHLPNLNEEQRNAFIQSLKDDPSVSKAILAEAKKLNFAQAPK
SEQ-12：VDAKFDKEAQNAFYEILHLPNLTEEQRNAFIQSLKDDPSVSKAILAEAKKLNDAQAPK
SEQ-13：VDAKFDKEAQNAFYEILHLPNLTEEQRNAFIQSLKDDPSVSKAILAEAKKLNFAQAPK
SEQ-14：VDAKFDKEQQEAFYEILHLPNLTEEQRNAFIQSLKDDPSVSKAILAEAKKLNDAQAPK
SEQ-15：VDAKFDKEQQEAFYEILHLPNLTEEQRNAFIQSLKDDPSVSKAILAEAKKLNFAQAPK。
2.一种蛋白A免疫吸附介质，包括固相载体，所述固相载体上固载有重组蛋白A，其特征在于：所述重组蛋白A如权利要求1所述。
3.根据权利要求2所述的蛋白A免疫吸附介质，其特征在于：所述重组蛋白A以多聚体分子或串联体的形式固载在固相载体上。
4.根据权利要求3所述的蛋白A免疫吸附介质，其特征在于：所述多聚体分子的聚合度为2～6，所述串联体的串联分子数为2～6。
5.根据权利要求2～4任一所述的蛋白A免疫吸附介质，其特征在于：
所述蛋白A免疫吸附介质使用辐照进行终端灭菌后吸附性能保留率不低于90%；和/或
所述蛋白A免疫吸附介质使用强氧化剂浸泡消毒后吸附性能保留率不低于90%；和/或
所述蛋白A免疫吸附介质使用碱溶液浸泡后吸附性能保留率不低于80%。
6.根据权利要求5所述的蛋白A免疫吸附介质，其特征在于：
所述辐照选自电子束或γ射线，且辐照的剂量不低于15 KGy；
所述强氧化剂选自戊二醛、过氧乙酸、二溴海因和含氯消毒剂；
所述碱溶液的pH值不低于14。
7.根据权利要求2～4任一所述的蛋白A免疫吸附介质，其特征在于：所述固相载体选自壳聚糖、琼脂糖、纤维素、葡聚糖、树脂、纤维素中的至少一种。
8.根据权利要求6所述的蛋白A免疫吸附介质，其特征在于：所述含氯消毒剂选自二氧化氯，次氯酸钠、次氯酸钙、氯化磷酸三钠，有机氯化合物中的至少一种。
9.权利要求1所述重组蛋白A在制备人免疫球蛋白相关产品中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述人免疫球蛋白相关产品选自蛋白A免疫吸附柱、蛋白A亲和介质、蛋白A检测试剂盒、蛋白A磁珠或蛋白A免疫药物。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115010804A (zh) * 2022-07-20 2022-09-06 广州康盛生物科技股份有限公司 一种在线分离高纯度免疫球蛋白的生产方法及设备

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1988003166A1 (en) * 1986-10-23 1988-05-05 Farmitalia Carlo Erba S.R.L. Human apolipoprotein ai and variant form of the same expressed in escherichia coli
US6133431A (en) * 1996-01-25 2000-10-17 Kaneka Corporation Adsorbent for immunoglobulins and complexes thereof, adsorption method, and adsorption device
CN107429244A (zh) * 2015-03-26 2017-12-01 Jsr株式会社 免疫球蛋白结合蛋白质和使用其的亲和载体
CN111057153A (zh) * 2019-12-06 2020-04-24 广州康盛生物科技股份有限公司 一种免疫球蛋白结合蛋白及其制备方法和应用
CN111875706A (zh) * 2020-07-16 2020-11-03 广州康盛生物科技股份有限公司 一种抗人IgE蛋白的单域抗体及其应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1988003166A1 (en) * 1986-10-23 1988-05-05 Farmitalia Carlo Erba S.R.L. Human apolipoprotein ai and variant form of the same expressed in escherichia coli
US6133431A (en) * 1996-01-25 2000-10-17 Kaneka Corporation Adsorbent for immunoglobulins and complexes thereof, adsorption method, and adsorption device
CN107429244A (zh) * 2015-03-26 2017-12-01 Jsr株式会社 免疫球蛋白结合蛋白质和使用其的亲和载体
CN111057153A (zh) * 2019-12-06 2020-04-24 广州康盛生物科技股份有限公司 一种免疫球蛋白结合蛋白及其制备方法和应用
CN111875706A (zh) * 2020-07-16 2020-11-03 广州康盛生物科技股份有限公司 一种抗人IgE蛋白的单域抗体及其应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
I SHIMANOVICH等: "Treatment of severe pemphigus with protein A immunoadsorption, rituximab and intravenous immunoglobulins", 《BRITISH JOURNAL OF DERMATOLOGY》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115010804A (zh) * 2022-07-20 2022-09-06 广州康盛生物科技股份有限公司 一种在线分离高纯度免疫球蛋白的生产方法及设备

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