CN112933285A - 一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法,包括超声处理、去除杂蛋白、高压预处理、酸浸预处理、酶解处理、盐析处理、透析处理、纯化处理、提胶、静电纺丝以及将制备的明胶‑醋酸纤维素纳米纤维膜进行载药的步骤。本发明通过超声处理能有助于去除猪皮的脂腺组织内的脂肪，配合十二烷基苯磺酸钠溶液，能进一步去除脂肪的同时，还能保证猪皮组织中明胶不被破坏，提高明胶的纯度以及保留了明胶的天然类三螺旋结构；本发明制备的医用敷料呈现下粗细均匀且表面光滑的明胶‑醋酸纤维素纳米纤维膜，具有优异的载药量以及均匀释放药物的优点，起到显著的促进修复作用。

Description

一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法
技术领域
本发明涉及医用生物领域，具体而言，涉及一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法。
背景技术
目前在伤口护理的临床上，普遍采用普通脱脂纱布、微孔薄膜等来护理伤口，这种方法容易使伤口处于一种干燥的状态，大大影响了伤口愈合的进度，容易结痂而且会产生大量的伤口斑痕。现有的纱布在处理伤口后仍需二次手术取出，极易导致再出血、细菌感染和炎症等并发症状，加剧病人痛苦和降低医疗效果。可吸收医用敷料虽然能同时具有亲水性和吸湿性，能为伤口愈合提供良好的环境，能溶于血液并降解后排出体外或直接吸收利用等优点，但由于来源有限，成本高，技术复杂等限制，尚不可大量生产，且现有技术中也存在一些医用敷料有效成分少，其医用敷料的促进修复效果差的问题。另外，现在技术制备医用敷料的原材料含有杂质多，使用的明胶普遍为明胶和脂肪的混合物，无法在保留明胶本身的前提下去除脂肪，对医用敷料的使用效果有影响，且现有技术中的明胶提取的效率低，提取的产量低，间接导致生产医用敷料的成本高。
综上，在制备医用敷料领域，仍然具有亟待解决的上述问题。
发明内容
基于此，为了解决现有技术医用敷料的材料的来源有限、杂质多、成本高以及制备医用敷料的促进修复的效果差的问题，本发明提供了一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法，具体技术方案如下：
一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法，包括以下步骤：
将清洗、剪切完成的猪皮放置于十二烷基苯磺酸钠溶液中，并超声处理；
利用去离子水将超声处理后的猪皮进行洗涤，然后放置于NaCl溶液中磁力搅拌6h，并每2h更换一次NaCl溶液，得到去除杂蛋白的猪皮；
利用去离子水洗涤去除杂蛋白的猪皮，真空包装后，进行高压预处理；
利用去离子水洗涤高压预处理后的猪皮，然后放置于酸溶液中酸浸预处理，待膨胀均匀后，破碎，继续加入酸溶液，搅拌均匀得到浆液；
调节所述浆液的pH值至1.5-2.5，然后加入胃蛋白酶进行酶解处理，得到酶解液；
将所述酶解液真空抽滤，取滤液，然后调节所述滤液的pH值，继续往所述滤液中加入NaCl固体进行盐析处理；
第一次离心得到第一沉淀物，往所述第一沉淀物中加入醋酸溶液，后进行第二次离心得到第二沉淀物；
将所述第二沉淀物进行透析处理后，得到胶体沉淀；
往所述胶体沉淀中加入质量百分比浓度为1％的盐酸，于室温下浸泡8h后，然后滴加浓氢氧化钠调节pH值至7-7.5，第三次离心得到第三沉淀物；
将所述第三沉淀物进行纯化处理，得到纯化的第三次沉淀物；
往纯化的第三沉淀物中添加纯水，并置于45℃水浴振荡器上振荡提胶2h-6h，第四次离心后得到上清液，将所述上清液放置于胶盘中干燥处理，得到明胶；
将所述明胶与醋酸纤维素添加至所述冰醋酸溶液中，常温下磁力搅拌10h-16h，然后进行超声波脱泡处理，得到纺丝液；
将所述纺丝液进行静电纺丝后，得到明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜；
准备药液；
将所述明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜浸泡于所述药液中，浸泡完成后取出，得到所述促进修复的医用明胶敷料。
优选地，按照料液比，所述猪皮与十二烷基苯磺酸钠溶液的比例为1:2-3。
优选地，所述十二烷基苯磺酸钠溶液的质量百分比浓度为0.5％-10％。
优选地，所述超声处理的功率为120W-500W，所述超声处理的时间为2h-6h。
优选地，在所述去除杂蛋白的步骤中，按照料液比，所述猪皮与所述NaCl溶液的比例为1:5，且所述NaCl溶液的浓度为10g/L。
优选地，所述高压预处理的真空度为150MPa-350MPa，所述高压预处理的时间为1min-30min。
优选地，所述酸浸预处中，按照料液比，所述猪皮与所述酸溶液的比例为1:10-20。
优选地，所述酸溶液为醋酸溶液，且所述醋酸溶液的pH为2-3。
优选地，所述酸浸预处理的温度为4℃，所述酸浸预处理的时间为8h-10h。
优选地，调节所述滤液的pH值中采用NaOH溶液进行调节，且调节所述滤液的pH值至7-8。
上述方案中通过超声处理能有助于去除猪皮的脂腺组织内的脂肪，配合十二烷基苯磺酸钠溶液，能进一步去除脂肪的同时，还能保证猪皮组织中明胶不被破坏，且在保有高冻力和低粘度的同时，崭新的脱脂技术配合生产过程中的多次纯化有效的提高了产品明胶的纯度，全生产过程可在低温甚至室温下进行，较大程度的保留了明胶的天然类三螺旋结构；本发明制备的医用敷料呈现下粗细均匀且表面光滑的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜，具有优异的载药量，且能更均匀地将明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜上的有效成分释放，达到显著地促进修复的作用；另外，本申请明胶的提取方法简单，杂质少，提取的效率高，间接地降低了医用敷料的制备成本以及提高制备医用敷料的质量以及安全性。
附图说明
图1是本发明实施例1中的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜扫描电镜示意图；
图2是本发明实施例2中的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜扫描电镜示意图；
图3是本发明实施例3中的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜扫描电镜示意图；
图4是本发明实施例4中的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜扫描电镜示意图；
图5是本发明实施例5中的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜扫描电镜示意图；
图6是本发明一种促进修复的医用明胶敷料的FTIR示意图；
图7为本发明一种促进修复的医用明胶敷料的与普通医用敷料在兔子耳朵伤口治疗效果的对比示意图；
图8为本发明实施例4-5制备一种促进修复的医用明胶敷料与对比例3制备的醋酸纤维素纳米纤维膜的药物释放百分比示意图。
具体实施方式
为了使得本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合其实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用以解释本发明，并不限定本发明的保护范围。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明一实施例中的一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将清洗、剪切完成的猪皮放置于十二烷基苯磺酸钠溶液中，并超声处理；
利用去离子水洗涤超声处理后的猪皮，然后放置于NaCl溶液中磁力搅拌6h，并每2h更换一次NaCl溶液，得到去除杂蛋白的猪皮；
利用去离子水洗涤去除杂蛋白的猪皮，真空包装后，进行高压预处理；
利用去离子水洗涤高压预处理后的猪皮，然后放置于酸溶液中进行酸浸预处理，待膨胀均匀后，破碎，继续加入同体积的酸溶液，搅拌均匀得到浆液；
调节所述浆液的pH值至1.5-2.5，然后加入胃蛋白酶进行酶解处理，得到酶解液；
将所述酶解液真空抽滤，取滤液，然后调节所述滤液的pH值，继续往所述滤液中加入NaCl固体进行盐析处理；
第一次离心后得到第一沉淀物，往所述第一沉淀物中加入醋酸溶液，后进行第二次离心得到第二沉淀物；
将所述第二沉淀物进行透析处理后，得到胶体沉淀；
往所述胶体沉淀中加入盐酸，于室温下浸泡8h，然后滴加浓氢氧化钠调节pH值至7-7.5，离心，得到第三沉淀物；
将所述第三沉淀物进行纯化处理，得到纯化的第三沉淀物；
往纯化的第三沉淀物中添加纯水，并置于45℃水浴振荡器上振荡提胶2h-6h，第三次离心后得到上清液，将所述上清液放置于胶盘中进行干燥处理，得到明胶；
将所述明胶与醋酸纤维素添加至所述冰醋酸溶液中，常温下磁力搅拌10h-16h，然后进行超声波脱泡处理，得到纺丝液；
将所述纺丝液进行静电纺丝后，得到明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜；
准备药液；
将所述明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜浸泡于所述药液中，浸泡完成后取出，得到所述促进修复的医用明胶敷料。
在其中一个实施例中，按照料液比，所述猪皮与十二烷基苯磺酸钠溶液的比例为1:2-3。
在其中一个实施例中，所述料液比指固体的质量与液体的体积的比例，单位为g/mL。
在其中一个实施例中，所述十二烷基苯磺酸钠溶液的质量百分比浓度为0.5％-10％。
在其中一个实施例中，所述超声处理的功率为120W-500W，所述超声处理的时间为2h-6h。
在其中一个实施例中，在所述去除杂蛋白的步骤中，按照料液比，所述猪皮与所述NaCl溶液的比例为1:5，且所述NaCl溶液的浓度为10g/L。
在其中一个实施例中，所述高压预处理的真空度为150MPa-350MPa，所述高压预处理的时间为1min-30min。
在其中一个实施例中，所述酸浸预处理中，按照料液比，所述猪皮与所述酸溶液的比例为1:10-20。
在其中一个实施例中，所述酸溶液为醋酸溶液，且所述醋酸溶液的pH为2-3。
在其中一个实施例中，所述酸浸预处理的温度为4℃，所述酸浸预处理的时间为8h-10h。
在其中一个实施例中，所述调节所述滤液的pH值中采用NaOH溶液进行调节，且调节所述滤液的pH值至7-8。
在其中一个实施例中，按照料液质量比，所述猪皮和所述十二烷基苯磺酸钠溶液的比例为1:2.5。
在其中一个实施例中，所述超声处理的功率为300W，所述超声处理的时间为2.5h。
在其中一个实施例中，所述胃蛋白酶的添加量占所述猪皮质量的1％。
在其中一个实施例中，所述酶解处理的时间为18h，所述酶解处理的温度为4℃，所述酶解处理的过程中每2h进行磁力搅拌1min，且磁力搅拌的速度为300r/min。
在其中一个实施例中，所述盐析处理的时间为12h。
在其中一个实施例中，所述盐析处理中需要进行搅拌直至NaCl浓度为4mol/L-5mol/L或出现不溶的NaCl固体。
在其中一个实施例中，所述盐析处理中搅拌的速度为100r/min-350r/min。
在其中一个实施例中，所述第一离心的速度为8000r/min，所述第一次离心的时间为15min。
在其中一个实施例中，所述第二次离心的速度为8000r/min，所述第二次离心的时间为10min。
在其中一个实施例中，所述透析处理为：将所述第二沉淀物放置于透析袋中，并置于pH值为3.0的醋酸溶液中，3d-4d后取出透析袋，然后将放置于纯水中再次进行透析处理1d-2d。
在其中一个实施例中，所述透析袋的分子截流量为8000mW-14000mW。
在其中一个实施例中，所述第三次离心的速度为9000r/min,所述第三次离心的时间为15min。
在其中一个实施例中，所述纯化处理为：将所述第三沉淀物用去离子水溶解后，在9000r/min的速度下离心10min，并重复2-3次。
在其中一个实施例中，所述振荡器的振荡速度为200r/min。
在其中一个实施例中，所述振荡器的振荡时间为2.5h。
在其中一个实施例中，按照料液比，所述胶体沉淀与所述盐酸的比例为1:2.5。
在其中一个实施例中，将所述上清液放置于胶盘中进行干燥处理的温度为70℃，干燥处理的时间为24h。
在其中一个实施例中，将所述上清液放置于胶盘中进行干燥处理的温度为45℃。
在其中一个实施例中，按照所述明胶和所述醋酸纤维素的混合质量与所述冰醋酸溶液的体积比为12％-16％。
在其中一个实施例中，所述脱泡处理的时间为5min。
在其中一个实施例中，所述静电纺丝中的电压大于10kV，针头与收集装置的距离不高于16cm。
在其中一个实施例中，所述药液包括草药提取液以及合成药液中一种或两种。
在其中一个实施例中，所述中草药提取液的制备为：将中草药放置蒸馏装置中，并往所述蒸馏装置中添加蒸馏水以及无水乙醇，采用蒸馏提取处理，获得处理液；按照体积比为1:50的吐温80乳化剂与蒸馏水混合均匀得到混合液；将所述处理液添加至所述混合液中，搅拌15min-25min后置于超声中交联15min，得到中药提取液。
在其中一个实施例中，所述中草药包括黄芩、黄莲、鱼腥草以及金银花中的一种或多种。
在其中一个实施例中，所述合成药液的制备为：按照质量体积比，将占溶液A体积3％-5％的合成药添加至溶液A中,搅拌15min-25min，然后置于超声中交联，15min后取出得到合成药液。
在其中一个实施例中，所述合成药包括吲哚美辛、萘普生以及蛇毒血凝酶、阿莫西林中的一种或多种。
在其中一个实施例中，所述溶液A中含有质量百分比为2％的吐温80。
在其中一个实施例中，所述剪切后的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜浸泡于所述药液中的时间为24h，且每隔1h进行超声交联5min。
下面将结合具体实施例对本发明的实施方案进行详细描述。
实施例1
一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理过程：将规格为3mmx3mm的30g猪皮放入烧杯，按照料液比为1:2.5往所述烧杯中加入75mL质量百分比浓度为0.5％的十二环基苯磺酸钠(SDBS)溶液，置入超声设备在360W的超声功率下超声辅助脱脂2.5h，然后用去离子水洗涤三次，按照料液比为1：5(g/mL)继续加入150mL质量百分比浓度为10g/L的NaCl溶液，磁力搅拌6h，在磁力搅拌期间每2h更换一次NaCl溶液后继续搅拌，搅拌完成后继续用去离子水洗三次，真空包装后，在500MPa下高压预处理5min；
(2)酶解过程：按照料液为比1:10(g/mL)往高压预处理后的猪皮中加入300mLpH为2.2的醋酸溶液，置于4℃的温度条件下浸泡10h，继续加入300mLpH为2.2的醋酸溶液，然后加入3g胃蛋白酶，置于4℃的温度条件下酶解18h，得到酶解液；
(3)纯化过程：利用医用纱布，对上述酶解液真空抽滤，取滤液，使用NaOH溶液调节所述滤液pH至7.2后，加入160g的NaCl固体进行盐析处理16h，以8000r/min的转速离心15min，得到第一沉淀物，用pH为2.7的醋酸溶液洗涤所述第一沉淀物，再次以8000r/min转速离心10min，得到第二沉淀物；将所述第二沉淀物装入处理好的透析袋(分子截流量8000-14000mW)中，置入pH为3.0的醋酸溶液进行透析出料3天后取出透析袋，期间换一次透析液并缓慢搅拌透析液；后再以纯水进行透析处理，2天后取出透析袋内的胶体沉淀，然后往所述胶体沉淀加入300mL质量百分比浓度为1％的HCl溶液，于室温下浸泡搅拌6h，使用NaOH溶液调节溶液pH至7.2，以转速9000r/min的转速离心15min，得到第三沉淀物，再次用去离子水溶解后再次以9000r/min的转速离心10min，并重复3次，得到纯化后的第三沉淀物；
(4)明胶提胶过程：将纯化后的第三沉淀物用40mL去离子水溶解，取出溶液置于烧杯中，放入45℃的水浴振荡器上振荡提取6h，且振荡速度为200r/min，然后以10000r/min的转速离心15min，过滤取上清液，将所述上清液放入胶盘中并在70℃的条件下干燥24h，制得明胶3.03g；
(5)纺丝过程：将0.75g明胶和0.25g醋酸纤维素溶于7.15mL的冰醋酸溶液(w/v为14％)中，常温下磁力搅拌12h后，在超声条件下去泡5min，然后放入2mL的注射器，装上内径为0.58mm的针头，配置针筒推进速度为1.21mL/h，针头端施加15kV电压，针头与收集装置的距离为14cm，将铝箔覆盖在圆筒上作为收集装置，在30％的湿度和25℃下进行纺丝1h，收集形成的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜；
(6)与药物交联过程：利用蒸馏法提取黄莲，得到黄莲提取液5ml；将47.5mL的蒸馏水和1mL的吐温80溶液，磁力搅拌混合10min，然后加入1.5mL的黄莲提取液，搅拌20min，然后置于超声条件中脱泡15min，得到药液；将收集的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜切成适宜大小后，然后置于所述药液中浸泡24h，且浸泡期间每一小时就超声交联5min，浸泡完成后取出，制得促进修复的医用明胶敷料。
实施例2：
一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理过程：将规格为3mmx3mm的30g猪皮放入烧杯，按照料液比为1:2.5往所述烧杯中加入75mL质量百分比浓度为0.75％的十二环基苯磺酸钠(SDBS)溶液，置入超声设备以360W的超声功率超声辅助脱脂2h，然后用去离子水洗涤三次，按照料液比为1：5(g/mL)继续加入150mL质量百分比浓度为10g/L的NaCl溶液，磁力搅拌6h，且磁力搅拌期间每2h更换一次NaCl溶液后继续搅拌，搅拌完成后利用去离子水洗三次后真空包装，在500MPa下高压预处理5min；
(2)酶解过程：按照料液比为1:15(g/mL)往高压预处理后的猪皮中加入450mL的pH为2.2的醋酸溶液，置于4℃的温度条件下浸泡8h，继续加入300mL的pH为2.2的醋酸溶液，然后加入3g胃蛋白酶，置于4℃的温度条件下酶解20h，得到，酶解液；
(3)纯化过程：利用医用纱布，对上述酶解液进行真空抽滤，取滤液，使用NaOH溶液调节所述滤液pH至7.2后，加入160g的NaCl固体进行盐析处理16h，以8000r/min的转速离心15min，得到第一沉淀物，用pH为2.7的醋酸溶液洗涤所述第一沉淀物，再次以8000r/min转速离心10min，得到第二沉淀物；将所述第二沉淀物装入处理好的透析袋(分子截流量8000-14000mW)中，置入pH为3.0的醋酸溶液进行透析出料3天后取出透析袋，期间换一次透析液并缓慢搅拌透析液；后再以纯水进行透析处理，2天后取出透析袋内的胶体沉淀，然后往所述胶体沉淀加入300mL质量百分比浓度为1％的HCl溶液，于室温下浸泡搅拌6h，使用NaOH溶液调节溶液pH至7.2，以转速9000r/min的转速离心15min，得到第三沉淀物，再次用去离子水溶解后再次以9000r/min的转速离心10min，并重复3次，得到纯化后的第三沉淀物；
(4)明胶提胶过程：往纯化后的第三沉淀物加入适量的纯水溶解后，获得40mL的pH为4的溶解液，取出溶解液置于烧杯中，放入温度为50℃的水浴振荡器上振荡提取8h，且振荡速度为200r/min，然后在10000r/min的转速下离心15min，取上清液，将上清液放入胶盘中并在温度为70℃条件下干燥24h，制得明胶2.98g；
(5)纺丝过程：称量0.5g明胶和0.5g醋酸纤维素溶于7.15mL的冰醋酸溶液(w/v为14％)中，常温下磁力搅拌12h后，置于超声条件中去泡5min，然后放入2mL的注射器，装上内径为0.58mm的针头，配置针筒推进速度为1.20mL/h，针头端施加20kV电压，针头与收集装置的距离为14cm，将铝箔覆盖在圆筒上作为收集装置，在湿度为28％、温度为25℃的条件下进行纺丝1h，收集得到明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜；
(6)与药物交联过程：利用蒸馏法提取分离鱼腥草，得到鱼腥草提取液5mL；将47.5mL的蒸馏水和1mL的吐温80溶液，磁力搅拌10min后加入1.5mL的鱼腥草提取液，搅拌20分钟，然后置于超声条件中脱泡15min，得到药液；将收集的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜切成适宜大小，然后置于所述药液中浸泡24h，浸泡期间每一小时超声交联5min，浸泡完成后取出，制得促进修复的医用明胶敷料。
实施例3：
一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理过程：将已经切碎成3mmx3mm的30g猪皮放入烧杯，按料液比为1:3往烧杯中加入90mL质量百分比浓度为10％的十二环基苯磺酸钠(SDBS)溶液，置于超声设备以超声功率为360W的条件下超声辅助脱脂3h，然后用去离子水洗涤三次，按料液比1：5(g/mL)继续加入150mL质量百分比浓度为10g/L的NaCl溶液，磁力搅拌6h，在磁力搅拌期间每2h更换一次NaCl溶液后继续搅拌，搅拌完成后用去离子水洗三次，真空包装，在500MPa下高压预处理30min；
(2)酶解过程：按料液比1:20(g/mL)往高压预处理后的猪皮中加入600mL的pH为2.2的醋酸溶液，并置于温度为4℃的条件下浸泡10h，继续加入600mL的pH为2.2的醋酸溶液，然后加入3g胃蛋白酶，置于温度为4℃的条件下酶解20h，得到酶解液；
(3)纯化过程：利用医用纱布，对上述酶解液进行真空抽滤，取滤液，使用NaOH溶液调节所述滤液pH至7.2后，加入160g的NaCl固体进行盐析处理16h，以8000r/min的转速离心15min，得到第一沉淀物，用pH为2.7的醋酸溶液洗涤所述第一沉淀物，再次以8000r/min转速离心10min，得到第二沉淀物；将所述第二沉淀物装入处理好的透析袋(分子截流量8000-14000mW)中，置入pH为3.0的醋酸溶液进行透析出料3天后取出透析袋，期间换一次透析液并缓慢搅拌透析液；后再以纯水进行透析处理，2天后取出透析袋内的胶体沉淀，然后往所述胶体沉淀加入300mL质量百分比浓度为1％的HCl溶液，于室温下浸泡搅拌6h，使用NaOH溶液调节溶液pH至7.2，以转速9000r/min的转速离心15min，得到第三沉淀物，再次用去离子水溶解后再次以9000r/min的转速离心10min，并重复3次，得到纯化后的第三沉淀物；
(4)明胶提胶过程：将纯化后的第三沉淀物用适量的纯水溶解，获得40mLpH为4的溶解液，将所述溶液液放置于温度为45℃的水浴振荡器上振荡提取6h，且振荡速度为200r/min，然后在10000r/min的转速下离心15min，取上清液，将所述上清液置于胶盘中并以在70℃的条件下干燥24h，制得明胶2.71g；
(5)纺丝过程：将0.25g明胶和0.75g醋酸纤维素溶于7.15mL的冰醋酸溶液(w/v为14％)中，常温下磁力搅拌12h后，置于超声的条件下去泡5min，然后放入2mL的注射器，装上内径为0.58mm的针头，配置针筒推进速度为1.21mL/h，针头端施加25kV电压，针头与收集装置的距离为14cm，将铝箔覆盖在圆筒上作为收集装置，在湿度为30％、温度为25℃的条件下进行纺丝1h，收集得到明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜；
(6)与药物交联过程：利用蒸馏法提取分离金银花，得到金银花提取液5mL；将47.5mL的蒸馏水和1mL的吐温80溶液混合，磁力搅拌10min后加入1.5mL的所述金银花提取液，搅拌20min，然后置于超声的条件中脱泡15min，得到药液；将收集的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜切出适宜大小，置于所述药液中浸泡24h，浸泡期间每一小时就超声交联5min，浸泡完成后取出，得到所述促进修复的医用明胶敷料。
实施例4：
一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理过程：将已经切碎成3mmx3mm的30g猪皮放入烧杯，按料液比1:2.5往所述烧杯中加入75mL浓度为10％的十二环基苯磺酸钠(SDBS)溶液，置于超声设备中以超声功率为360W的条件下超声辅助脱脂2h，然后用去离子水洗涤三次，按料液比1：10(g/mL)加入150mL质量百分比浓度为10g/L的NaCl溶液，磁力搅拌6h，在磁力搅拌期间每2h更换一次NaCl溶液后继续搅拌，搅拌完成后用去离子水洗三次，然后真空包装，在500MPa下高压预处理5min；
(2)酶解过程：按料液比1:15(g/mL)往高压预处理后的猪皮中加入450mL的pH为2.2的醋酸溶液，并置于温度为4℃的条件下浸泡8h，继续加入450mL的pH为2.2的醋酸溶液，然后加入3g胃蛋白酶，置于温度为4℃的条件下酶解18h，得到酶解液；
(3)纯化过程：利用医用纱布，对上述酶解液进行真空抽滤，取滤液，使用NaOH溶液调节所述滤液pH至7.2后，加入160g的NaCl固体进行盐析处理16h，以8000r/min的转速离心15min，得到第一沉淀物，用pH为2.7的醋酸溶液洗涤所述第一沉淀物，再次以8000r/min转速离心10min，得到第二沉淀物；将所述第二沉淀物装入处理好的透析袋(分子截流量8000-14000mW)中，置入pH为3.0的醋酸溶液进行透析出料3天后取出透析袋，期间换一次透析液并缓慢搅拌透析液；后再以纯水进行透析处理，2天后取出透析袋内的胶体沉淀，然后往所述胶体沉淀加入300mL质量百分比浓度为1％的HCl溶液，于室温下浸泡搅拌6h，使用NaOH溶液调节溶液pH至7.2，以转速9000r/min的转速离心15min，得到第三沉淀物，再次用去离子水溶解后再次以9000r/min的转速离心10min，并重复3次，得到纯化后的第三沉淀物；
(4)明胶提胶过程：将纯化后的第三沉淀物用40mL去离子水溶解，取出溶液置于烧杯中，放入45℃的水浴振荡器上振荡提取6h，且振荡速度为200r/min然后以12000r/min的转速离心15min，过滤取上清液，将所述上清液放入胶盘中并在70℃的条件下干燥24h，制得明胶2.53g；
(5)纺丝过程：将1g明胶和2g醋酸纤维素溶于6.25mL的冰醋酸溶液(w/v为16％)中，在常温下磁力搅拌12h后，置于超声的条件中去泡5min，然后放入2mL的注射器，装上内径为0.58mm的针头，配置针筒推进速度为1.20mL/h，针头端施加20kV电压，针头与收集装置的距离为14cm，将铝箔覆盖在圆筒上作为收集装置，在湿度为20％、温度为25℃的条件下进行纺丝1h，收集得到的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜；
(6)与药物交联过程：将40mL的蒸馏水和1mL的吐温80溶液混合，并继续加入黄莲提取液、鱼腥草提取液和金银花提取液各3mL，磁力搅拌30min，在超声条件下脱泡15min，得到药液；将收集的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜切出适宜大小，置于所述药液中浸泡24h，在浸泡期间每一小时就超声交联5min，浸泡完成后取出，制得促进修复的医用明胶敷料。
实施例5：
一种促进修复的医用敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理过程：将已经切碎成3mmx3mm的30g猪皮放入烧杯，按料液比1:2.5加入75mL质量百分比浓度为3％的十二环基苯磺酸钠(SDBS)溶液，置于超声设备以超声功率360W的条件超声辅助脱脂2h，然后用去离子水洗涤三次，按料液比1：5(g/mL)往所述烧杯中加入150mL质量百分比浓度为10g/L的NaCl溶液，磁力搅拌6h，在磁力搅拌期间每2h更换一次NaCl溶液后继续搅拌，搅拌完成用去离子水洗三次，然后真空包装，在500MPa下高压预处理5min；
(2)酶解过程：按料液比为1:15(g/mL)往高压预处理后的猪皮加入300mL的pH为2.2的醋酸溶液，并置于温度为4℃的条件下浸泡10h，继续加入300mL的pH为2.2的醋酸溶液，然后加入3g胃蛋白酶，置于温度为4℃的条件下酶解18h，得到酶解液；
(3)纯化过程：利用医用纱布，对上述酶解液进行真空抽滤，取滤液，使用NaOH溶液调节所述滤液pH至7.2后，加入160g的NaCl固体进行盐析处理16h，以8000r/min的转速离心15min，得到第一沉淀物，用pH为2.7的醋酸溶液洗涤所述第一沉淀物，再次以8000r/min转速离心10min，得到第二沉淀物；将所述第二沉淀物装入处理好的透析袋(分子截流量8000-14000mW)中，置入pH为3.0的醋酸溶液进行透析出料3天后取出透析袋，期间换一次透析液并缓慢搅拌透析液；后再以纯水进行透析处理，2天后取出透析袋内的胶体沉淀，然后往所述胶体沉淀加入300mL质量百分比浓度为1％的HCl溶液，于室温下浸泡搅拌6h，使用NaOH溶液调节溶液pH至7.2，以转速9000r/min的转速离心15min，得到第三沉淀物，再次用去离子水溶解后再次以9000r/min的转速离心10min，并重复3次，得到纯化后的第三沉淀物；
(4)将纯化后的第三沉淀物加入适量的纯水溶解后，获得40mL的pH为4的溶解液，取出溶解液置于烧杯中，放入温度为45℃的水浴振荡器上振荡提取6h，且振荡速度为200r/min，然后在10000r/min的转速下离心15min，取上清液，将上清液放入胶盘中并在温度为70℃条件下干燥24h，制得明胶2.84g；
(5)纺丝过程：称量1g明胶和1g醋酸纤维素溶于6.25mL的冰醋酸溶液(w/v为14％)中，常温下磁力搅拌12h后，置于超声条件中去泡5min，然后放入2mL的注射器，装上内径为0.58mm的针头，配置针筒推进速度为1.20mL/h，针头端施加15kV电压，针头与收集装置的距离为14cm，将铝箔覆盖在圆筒上作为收集装置，在湿度为30％、温度为25℃的条件下进行纺丝1h，收集得到明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜；
(6)与药物交联过程：往1.5g的蛇毒血凝酶中加入47.5mL的蒸馏水和1mL的吐温80溶液，磁力搅拌30min，然后置于超声条件中脱泡5min，得到药液，将收集的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜切出适宜大小，放于所述药液中浸泡24h，在浸泡期间每一小时超声交联5min，浸泡完成后取出，制得促进修复的医用明胶敷料。
实施例6：
一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理过程：将已经切碎成3mmx3mm的30g猪皮放入烧杯，按料液比1:2.5往所述烧杯中加入75mL浓度为0.75％的十二环基苯磺酸钠(SDBS)溶液，置于超声设备以超声功率360W的条件下超声辅助脱脂1h，然后用去离子水洗涤三次，按料液比1：5(g/mL)继续加入150mL质量百分比浓度为10g/L的NaCl溶液，并磁力搅拌6h，在磁力搅拌期间每2h更换一次NaCl溶液后继续搅拌，搅拌完成用去离子水洗三次，然后真空包装，在500MPa下高压预处理5min；
(2)酶解过程：按料液比1:15(g/mL)往高压预处理后的猪皮中加入300mL的pH为2.2的醋酸溶液，置于4℃下浸泡10h，继续加入300mL的pH为2.2的醋酸溶液，然后加入3g胃蛋白酶，置于4℃的温度条件下酶解18h，得到，酶解液；
(3)纯化过程：利用医用纱布，对上述酶解液进行真空抽滤，取滤液，使用NaOH溶液调节所述滤液pH至7.2后，加入160g的NaCl固体进行盐析处理16h，以8000r/min的转速离心15min，得到第一沉淀物，用pH为2.7的醋酸溶液洗涤所述第一沉淀物，再次以8000r/min转速离心10min，得到第二沉淀物；将所述第二沉淀物装入处理好的透析袋(分子截流量8000-14000mW)中，置入pH为3.0的醋酸溶液进行透析出料3天后取出透析袋，期间换一次透析液并缓慢搅拌透析液；后再以纯水进行透析处理，2天后取出透析袋内的胶体沉淀，然后往所述胶体沉淀加入300mL质量百分比浓度为1％的HCl溶液，于室温下浸泡搅拌6h，使用NaOH溶液调节溶液pH至7.2，以转速9000r/min的转速离心15min，得到第三沉淀物，再次用去离子水溶解后再次以9000r/min的转速离心10min，并重复3次，得到纯化后的第三沉淀物；
(4)将纯化后的第三沉淀物加入适量的纯水溶解后，获得40mL的pH为4的溶解液，取出溶解液置于烧杯中，放入温度为45℃的水浴振荡器上振荡提取6h，且振荡速度为200r/min，然后在10000r/min的转速下离心15min，取上清液，将上清液放入胶盘中并在温度为70℃条件下干燥24h，制得明胶2.73g；
(5)纺丝过程：将1g明胶与1g醋酸纤维素溶于6.25mL的冰醋酸溶液(w/v为16％)，常温下磁力搅拌12h后，在超声条件下去泡5min，然后放入2mL的注射器中，装上内径为0.58mm的针头，配置针筒推进速度为1.20mL/h，针头端施加15kV电压，针头与收集装置的距离为14cm，将铝箔覆盖在圆筒上作为收集装置，在湿度为30％、温度为18-26℃的条件下进行纺丝1h，收集得到的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜；
(6)与药物交联过程：将48.5mL的蒸馏水和1mL的吐温80溶液混合，继续加入阿莫西林克拉维酸钾颗粒0.5g，磁力搅拌10min，然后置于超声条件中脱泡15min，得到药液；将收集的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜切出适宜大小，放入所述药液中浸泡24h，在浸泡期间每一小时超声交联5min，浸泡完成后取出，制得促进修复的医用明胶敷料。
对比例1：
一种明胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理过程：将规格为3mmx3mm的30g猪皮放于脱脂棉筒内，按料液比为1:2.5往所述脱脂棉筒中加入75mL质量百分比浓度为0.5％的十二环基苯磺酸钠(SDBS)溶液，置于超声设备中并在360W的超声功率下超声辅助脱脂2.5h，然后用去离子水洗涤三次，再按料液比为1：5(g/mL)继续加入150mL质量百分比浓度为10g/L的NaCl溶液，磁力搅拌6h，在磁力搅拌期间每2h更换一次NaCl溶液后继续搅拌，搅拌完成后用去离子水洗三次，得到预完成处理的猪皮；
(2)酶解过程：按料液比为1:10(g/mL)往预处理完成的猪皮内加入300mLpH为2.2的醋酸溶液，置于温度为4℃的条件下浸泡10h，浸泡完成后继续加入300mLpH为2.2的醋酸溶液，然后加入3g胃蛋白酶，并置于温度为4℃的条件下酶解处理18h，得到，酶解液。
(3)洗涤纯化过程：使用医用纱布为滤纸，对所述酶解液进行真空抽滤，取滤液，使用NaOH溶液进行调节至滤液pH至7.2后，加入160g的NaCl固体进行盐析处理16h，并以8000r/min的转速离心15min，得第一沉淀，继续用pH为2.7的醋酸溶液洗涤离心后得到的第一沉淀物，再次以8000r/min的转速离心10min，得第二沉淀物；将第二沉淀物装入处理好的透析袋(分子截流量8000-14000mW)中，置于ph为3.0的醋酸溶液中透析处理3天后取出透析袋，期间换一次透析液并缓慢搅拌透析液；然后再以纯水进行透析，2天后取出透析袋内的胶体沉淀。往所述胶体沉淀加入300mL的质量百分比浓度为1％的HCl溶液，置于室温浸泡搅拌6h，使用NaOH溶液调节溶液pH至7.2，以9000r/min的转速离心
15min，得到第三沉淀物，并用去离子水溶解所述第三沉淀后再次以9000r/min的转速离心10min，以此重复3次，得到纯化的第三沉淀物。
(4)明胶提胶过程：往纯化后的第三沉淀物中加入40mL去离子水溶解，取出溶液置于烧杯中，并放置与温度为45℃的水浴振荡器上振荡提取6h，且振荡速度为200r/min，以10000r/min转速离心15min得到上清液，将所述上清液放置于胶盘中并在温度为70℃的条件下干燥24h，制得明胶2.13g。
对比例2：
一种明胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)预处理过程：将规格为3mmx3mm的30g猪皮放置于脱脂棉筒中，利用索氏脱脂法进行脱脂，然后用去离子水洗涤三次，按照料液比为1：5(g/mL)往所述脱脂棉筒内加入150mL质量百分比浓度为10g/L的NaCl溶液，并磁力搅拌6h，在磁力搅拌期间每2h更换一次NaCl溶液后继续搅拌，搅拌完成后用去离子水洗三次，得到预处理完成的猪皮。
(2)酶解过程：按照料液比为1:10(g/mL)往预处理完成的猪皮中加入300mLpH为2.2的醋酸溶液，并置于温度为4℃的条件下浸泡10h，继续加入300mLpH为2.2的醋酸溶液，然后加入3g胃蛋白酶，并置于温度为4℃的条件下酶解处理18h；
(3)洗涤纯化过程：使用医用纱布为滤纸，对所述酶解液进行真空抽滤，取滤液，使用NaOH溶液进行调节至滤液pH至7.2后，加入160g的NaCl固体进行盐析处理16h，并以8000r/min的转速离心15min，得第一沉淀，继续用pH为2.7的醋酸溶液洗涤离心后得到的第一沉淀物，再次以8000r/min的转速离心10min，得第二沉淀物；将第二沉淀物装入处理好的透析袋(分子截流量8000-14000mW)中，置于ph为3.0的醋酸溶液中透析处理3天后取出透析袋，期间换一次透析液并缓慢搅拌透析液；然后再以纯水进行透析，2天后取出透析袋内的胶体沉淀。往所述胶体沉淀加入300mL的质量百分比浓度为1％的HCl溶液，置于室温浸泡搅拌6h，使用NaOH溶液调节溶液pH至7.2，以9000r/min的转速离心
15min，得到第三沉淀物，并用去离子水溶解所述第三沉淀后再次以9000r/min的转速离心10min，以此重复3次，得到纯化的第三沉淀物。
(4)明胶提胶过程：往纯化的第三沉淀物中加入40mL的去离子水溶解，取出溶液置于烧杯中，放置于温度为45℃的水浴振荡器上振荡提取6h，且振荡速度为200r/min，以10000r/min转速离心15min得到上清液，将所述上清液放置于胶盘中并在温度为70℃的条件下干燥24h，制得明胶1.27g。
对比例3：
一种纳米纤维膜的制备方法，包括以下步骤：
(1)纺丝过程：将1g醋酸纤维素溶于7.15mL的冰醋酸溶液中(w/v为14％)，常温下磁力搅拌12h后，在超声条件下去泡5min，然后放入2mL的注射器，装上内径为0.58mm的针头，配置针筒推进速度为1.21mL/h，针头端施加15kV电压，针头与收集装置的距离为14cm，将铝箔覆盖在圆筒上作为收集装置，在湿度为30％、温度为25℃的条件下进行纺丝1h，收集形成的醋酸纤维素纳米纤维膜；
(2)与药物交联过程：利用蒸馏法提取黄莲，得到黄莲提取液5mL；将47.5mL的蒸馏水和1mL的吐温80溶液混合，磁力搅拌10分钟后加入1.5mL所述黄莲提取液，继续搅拌20min，然后置于超声添加中脱泡15min，得到药液；将收集的醋酸纤维素纳米纤维膜切出适宜大小，放入所述药液中浸泡24h，在浸泡期间每一小时就超声交联5min，浸泡完成后取出，制得醋酸纤维素纳米纤维膜。
实施例1-6以及对比例1-2在不同条件下制备得到的残余脂肪含量、明胶质量以及明胶得率记录如下表1所示。
表1：
Figure BDA0002939354990000221
需要说明的是：上述表1中的SDBS的测定是根据国家标准DBS22/010—2013，利用色谱法测试，激发波长为230nm，发射波长为290nm；脂肪含量测试方法则是称量并记录1g明胶，加入2mol/L的HCl溶液在60℃水浴上水解2h，后加入石油醚做萃取液将脂肪提取，将石油醚放入120℃环境下3h，反复称量直至质量不再变化，残留的质量为脂肪含量。由表1的数据分析可知，本申请通过超声处理能有助于去除猪皮的脂腺组织内的脂肪，配合十二烷基苯磺酸钠溶液制备的明胶具有残余脂肪含量低的优点，且明胶的产出率高，进而增加医用敷料的制备原料。
另外，由图1-5的扫描电镜示意图分析可知，本发明制备的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜粗细均匀且表面光滑，且能更具调整明胶和醋酸纤维素的比例来调整制备的明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜的粗细，具有操作强的优点；并结合图8分析可知，本申请制备的医用敷料的载药量优异，能更均匀地负载在明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜上有效成分释放，达到更优异的促进修复的效果,而对比例中有效成分的释放较实施例4、实施例5以及实施例6的快；另外，由图6分析可知，其中，图6中从上到下依次是实施例1到实施例5制备的对应的明胶，由图可得五组实施例制备的明胶都保留了明胶的三螺旋结构，杂质较少，有助于其应用在制备医用敷料中；由图7中的效果验证试验分析可知，将本发明制备的医用敷料以及普通的医用敷料分别敷在兔子的受伤程度相同的两只耳朵上，治疗一星期后，观察到使用本申请医用敷料的兔子耳朵修复，恢复正常，但是采用普通敷料的兔子耳朵出现明显的瘢痕，修复效果明显比本发明制备的医用敷料的效果差。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种促进修复的医用明胶敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将清洗、剪切完成的猪皮放置于十二烷基苯磺酸钠溶液中，并超声处理；
利用去离子水洗涤超声处理后的猪皮，然后放置于NaCl溶液中磁力搅拌6h，并每2h更换一次NaCl溶液，得到去除杂蛋白的猪皮；
利用去离子水洗涤去除杂蛋白的猪皮，真空包装后，进行高压预处理；
利用去离子水洗涤高压预处理后的猪皮，然后放置于酸溶液中进行酸浸预处理，待膨胀均匀后，破碎，继续加入同体积的酸溶液，搅拌均匀得到浆液；
调节所述浆液的pH值至1.5-2.5，然后加入胃蛋白酶进行酶解处理，得到酶解液；
将所述酶解液真空抽滤，取滤液，然后调节所述滤液的pH值，继续往所述滤液中加入NaCl固体进行盐析处理；
第一次离心后得到第一沉淀物，往所述第一沉淀物中加入醋酸溶液，后进行第二次离心得到第二沉淀物；
将所述第二沉淀物进行透析处理后，得到胶体沉淀；
往所述胶体沉淀中加入盐酸，于室温下浸泡8h，然后滴加浓氢氧化钠调节pH值至7-7.5，离心，得到第三沉淀物；
将所述第三沉淀物进行纯化处理，得到纯化的第三沉淀物；
往纯化的第三沉淀物中添加纯水，并置于45℃水浴振荡器上振荡提胶2h-6h，第三次离心后得到上清液，将所述上清液放置于胶盘中进行干燥处理，得到明胶；
将所述明胶与醋酸纤维素添加至所述冰醋酸溶液中，常温下磁力搅拌10h-16h，然后进行超声波脱泡处理，得到纺丝液；
将所述纺丝液进行静电纺丝后，得到明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜；
准备药液；
将所述明胶-醋酸纤维素纳米纤维膜浸泡于所述药液中，浸泡完成后取出，得到所述促进修复的医用明胶敷料。
2.根据权利要求1所述的促进修复的医用明胶敷料的制备方法，其特征在于，按照料液比，所述猪皮与十二烷基苯磺酸钠溶液的比例为1:2-3。
3.根据权利要求2所述的促进修复的医用明胶敷料的制备方法，其特征在于，所述十二烷基苯磺酸钠溶液的质量百分比浓度为0.5％-10％。
4.根据权利要求2所述的促进修复的医用明胶敷料的制备方法，其特征在于，所述超声处理的功率为120W-500W，所述超声处理的时间为2h-6h。
5.根据权利要求1所述的促进修复的医用明胶敷料的制备方法，其特征在于，在所述去除杂蛋白的步骤中，按照料液比，所述猪皮与所述NaCl溶液的比例为1:5，且所述NaCl溶液的浓度为10g/L。
6.根据权利要求1所述的促进修复的医用明胶敷料的制备方法，其特征在于，所述高压预处理的真空度为150MPa-350 MPa，所述高压预处理的时间为1min-30min。
7.根据权利要求1所述的促进修复的医用明胶敷料的制备方法，其特征在于，所述酸浸预处中，按照料液比，所述猪皮与所述酸溶液的比例为1:10-20。
8.根据权利要求7所述的促进修复的医用明胶敷料的制备方法，其特征在于，所述酸溶液为醋酸溶液，且所述醋酸溶液的pH为2-3。
9.根据权利要求8所述的促进修复的医用明胶敷料的制备方法，其特征在于，所述酸浸预处理的温度为4℃，所述酸浸预处理的时间为8h-10h。
10.根据权利要求1所述的促进修复的医用明胶敷料的制备方法，其特征在于，调节所述滤液的pH值中采用NaOH溶液进行调节，且调节所述滤液的pH值至7-8。
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