CN112912098A - 用于治疗乙型肝炎病毒感染的组合疗法 - Google Patents
用于治疗乙型肝炎病毒感染的组合疗法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及提供治疗有需要的受试者中的乙型肝炎病毒(HBV)感染的方法，其包括向所述受试者施用肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂(例如，针对所述受体的激动性抗体、可溶性TNFRSF激动剂(包括但不限于其天然配体)或前述任一项的片段)和干扰素(IFN)或其功能性片段的组合，以减少所述受试者中的HBV感染的一种或多种症状。
Description
技术领域
本发明涉及用于治疗受试者的乙型肝炎病毒(HBV)感染的方法。
背景技术
HBV感染全世界3亿多人，并且是肝病和肝癌的常见病因。(Liang(2009)Hepatology 49:S13。)HBV是具有与逆转录病毒类似的罕见特征的小DNA病毒，它通过RNA中间体(前基因组RNA)复制并且可以整合到宿主基因组中。HBV复制周期的独特特征赋予病毒在受感染细胞中持久存在的独特能力。HBV感染会导致多种肝病，从急性(包括暴发性肝功能衰竭)到慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌。急性HBV感染可以是无症状的，或是有症状的急性肝炎。被HBV感染的90％-95％的儿童和5％-10％的成人无法清除病毒并变成慢性感染。许多慢性感染者患有轻度肝病，且几乎没有或没有长期发病或死亡。其他患有慢性HBV感染的个体会患上活动性疾病，所述疾病可能会进展为肝硬化和肝癌。这些患者需要仔细监测并保证治疗干预。
需要用于通过调节细胞中的HBV感染来治疗HBV感染的新方法。特别地，需要用于有效地破坏HBV感染细胞的HBV病毒载量、减少HBV感染细胞中共价闭合的环状HBV DNA的转录和/或减少HBV感染细胞中前基因组HBV RNA的量的方法。
发明内容
本发明基于使用肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂(例如，针对TNFRSF的成员的激动性抗体、可溶性TNFRSF激动剂(包括但不限于其天然配体))或其功能性片段与干扰素(IFN)药剂或其功能性片段的组合来治疗受试者的HBV感染的新方法的发现。本文所述的新方法可用于减少HBV感染细胞中共价闭合环状DNA(cccDNA)转录为前基因组RNA(pgRNA)，进而减少HBV感染细胞产生的HBV蛋白，并最终减少HBV感染细胞的病毒载量。
在一方面，提供了肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂或其功能性片段与干扰素(IFN)药剂或其功能性片段的组合，用于治疗HBV感染。
在特定实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段选自淋巴毒素α3受体激动剂、淋巴毒素β受体激动剂、疱疹病毒进入介体激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂激动剂、分化簇因子40激动剂、CD27激动剂、CD30激动剂、4-1BB激动剂、核因子κB受体激活因子激动剂、Troy激动剂和OX40受体激动剂或其功能性片段。
在特定实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段选自CD40L、LTα3、LIGHT和TWEAK或其功能性片段。在特定实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段选自CD40L、LIGHT和TWEAK或其功能性片段。
在特定实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段是选自以下的CD40激动剂或其功能性片段：CD40配体(CD40L)或其功能性片段、激动性抗CD40抗体、其功能性片段或其抗原结合片段以及包含CD40配体或其功能性片段的融合蛋白。在特定实施方案中，CD40L是六聚体CD40L或三聚体CD40L。
在特定实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段是多肽或其功能性片段、抗体或其功能性片段或其抗原结合片段。
在特定实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段以包含所述TNFRSF激动剂或其功能性片段的融合蛋白的形式提供。
在特定实施方案中，所述IFN药剂或其功能性片段选自I型IFN药剂、II型IFN药剂和III型IFN药剂或其功能性片段。
在特定实施方案中，所述IFN药剂或其功能性片段是IFNα、IFNβ、IFNγ或IFNλ或其功能性片段。在特定实施方案中，所述IFN药剂或其功能性片段是IFNβ或IFNγ或其功能性片段。在特定实施方案中，所述IFN药剂或其功能性片段是IFNβ或其功能性片段。在特定实施方案中，所述IFN药剂或其功能性片段是IFNα或其功能性片段。
在特定实施方案中，IFN药剂或其功能性片段以包含所述IFN药剂或其功能性片段的融合蛋白的形式提供。
在特定实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段和IFN药剂或其功能性片段以包含所述TNFRSF激动剂或其功能性片段、所述IFN药剂或其功能性片段和接头的双功能免疫刺激融合蛋白的形式提供。
在特定实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段和IFN药剂或其功能性片段包含在单一药物组合物中。
在特定实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段和IFN药剂或其功能性片段包含在不同的药物组合物中。
在另一方面，药物组合物包含：TNFRSF激动剂或其功能性片段；以及II型IFN药剂、II型IFN药剂的功能性片段、III型IFN药剂或III型IFN药剂的功能性片段。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和/或一种或多种HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用TNFRSF激动剂(例如，针对TNFRSF成员的激动性抗体，可溶性TNFRSF激动剂(包括但不限于其天然配体))或其功能性片段与IFN药剂或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：
(i)TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自淋巴毒素α3(LTα3)受体(TNFRSF1A、TNFRSF1B或TNFRSF14)激动剂(例如LTα3)、淋巴毒素β(LTβ)受体(TNFRSF3)激动剂(例如LIGHT或LTβ)、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(例如LIGHT)、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂(例如TWEAK，也称为TNFSF12)、分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂(例如CD40L)、CD27(TNFRSF7)激动剂(例如CD70)、CD30(TNFRSF8)激动剂、4-1BB(CD137、TNFRSF9)激动剂、核因子κB受体激活因子(RANK、TNFRSF11A)激动剂、Troy(TNFRSF19)激动剂和OX40受体(TNFRSF4)激动剂；以及
(ii)IFN药剂或其功能性片段，
以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：
(i)TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自淋巴毒素α3(LTα3)受体(TNFRSF1A、TNFRSF1B或TNFRSF14)激动剂(例如LTα3)、淋巴毒素β(LTβ)受体(TNFRSF3)激动剂(例如LIGHT或LTβ)、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(LIGHT)、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂(例如TWEAK，也称为TNFSF12)、分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂(CD40L)、CD27(TNFRSF7)激动剂(CD70)、CD30(TNFRSF8)激动剂、4-1BB(CD137、TNFRSF9)激动剂、核因子κB受体激活因子(RANK、TNFRSF11A)激动剂、Troy(TNFRSF19)激动剂和OX40受体(TNFRSF4)激动剂；以及
(ii)IFN药剂或其功能性片段，
以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：
(i)TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自淋巴毒素α3(LTα3)受体(TNFRSF1A、TNFRSF1B或TNFRSF14)激动剂(例如LTα3)、淋巴毒素β(LTβ)受体(TNFRSF3)激动剂(例如LIGHT或LTβ)、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(例如LIGHT)、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂(例如TWEAK，也称为TNFSF12)、分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂(例如CD40L)、CD27(TNFRSF7)激动剂(例如CD70)、CD30(TNFRSF8)激动剂、核因子κB受体激活因子(RANK、TNFRSF11A)激动剂、Troy(TNFRSF19)激动剂和OX40受体(TNFRSF4)激动剂；以及
(ii)IFN药剂或其功能性片段，
以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
根据特定实施方案，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：
(i)TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述选自淋巴毒素α3(LTα3)受体(TNFRSF1A、TNFRSF1B或TNFRSF14)激动剂(例如LTα3)、淋巴毒素β(LTβ)受体(TNFRSF3)激动剂(例如LIGHT或LTβ)、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(LIGHT)、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂(例如TWEAK，也称为TNFSF12)、分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂(CD40L)、CD27(TNFRSF7)激动剂(CD70)、CD30(TNFRSF8)激动剂、核因子κB受体激活因子(RANK、TNFRSF11A)激动剂、Troy(TNFRSF19)激动剂和OX40受体(TNFRSF4)激动剂；以及
(ii)IFN药剂或其功能性片段，
以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段；以及I型IFN或I型IFN的功能性片段、或II型IFN或II型IFN的功能性片段、或III型IFN或III型IFN的功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段；以及I型IFN或I型IFN的功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段；以及II型IFN或II型IFN的功能性片段、或III型IFN或III型IFN的功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述TNFRSF激动剂选自LTα3、TWEAK、LIGHT和CD40L；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂和疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和LTβ受体(TNFRSF3)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3、TWEAK和LIGHT；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自CD40L、TWEAK和LIGHT；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：CD40L或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂(并且特别是TWEAK)或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LTβ受体(TNFRSF3)激动剂或疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(并且特别是LIGHT)或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LTβ受体(TNFRSF3)激动剂(并且特别是LIGHT)或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(并且特别是LIGHT)或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
根据特定实施方案，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3、TWEAK、LIGHT和CD40L；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
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在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
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在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
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根据特定实施方案，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：CD40L或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
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在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TWEAK或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LTβ受体(TNFRSF3)激动剂或疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LTβ受体(TNFRSF3)激动剂或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LIGHT或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LTβ受体(TNFRSF3)激动剂或疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LTβ受体(TNFRSF3)激动剂或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LIGHT或其功能性片段；以及IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供治疗有需要的受试者中的HBV感染和HBV相关症状的方法，所述方法包括向所述受试者施用包含TNFRSF激动剂或其功能性片段的药物组合物，以及向所述受试者施用包含IFN药剂或其功能性片段的药物组合物，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，用于与IFN药剂或其功能性片段组合治疗受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种IFN药剂或其功能性片段，用于与TNFRSF激动剂或其功能性片段组合治疗受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供了一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段；以及(ii)至少一种IFN药剂或其功能性片段。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自I型IFN、II型IFN、和III型IFN。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ(TNFRSF3)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自I型IFN、II型IFN、和III型IFN。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自I型IFN、II型IFN、和III型IFN。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3、TWEAK、LIGHT和CD40L；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自I型IFN、II型IFN、和III型IFN。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、受体LTβ(TNFRSF3)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3、TWEAK、LIGHT和CD40L；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ。根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自TWEAK、LIGHT和CD40L；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα、IFNβ、IFNγ和IFNλ。根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、受体LTβ(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、受体LTβ(TNFRSF3)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3、TWEAK和LIGHT；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ。根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自TWEAK、LIGHT和CD40L；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNα和IFNβ。根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3受体激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTα3、TWEAK和LIGHT；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ。根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自LTβ受体(TNFRSF3)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种以下的组合，以用于治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段，所述激动剂选自TWEAK、LIGHT和CD40L；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段，所述IFN药剂选自IFNγ和IFNλ。根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供了一种以下的组合，以用于通过减少HBV感染细胞中前基因组HBV RNA的量来治疗HBV感染：(i)至少一种TNFRSF激动剂或其功能性片段；以及(ii)至少一种IFN药剂或其功能性片段。根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用TNFRSF激动剂和IFN药剂或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在本发明的任一方面的实施方案中或与本发明的任何其他实施方案组合，受试者的受感染细胞中共价闭合环状(ccc)DNA转录产生前基因组(pg)RNA受抑制。
在本发明的任一方面的实施方案中或与本发明的任何其他实施方案组合，TNFRSF激动剂和IFN药剂或其功能性片段的组合协同抑制受试者的受感染细胞中的pgRNA的转录。
在本发明的任一方面的实施方案中或与本发明的任何其他实施方案组合，抑制受试者的HBV感染细胞的乙型肝炎e抗原(HBeAg)释放。
在本发明的任一方面的实施方案中或与本发明的任何其他实施方案组合，TNFRSF激动剂和IFN药剂或其功能性片段协同抑制受试者的受感染细胞的HBeAg释放。
在本发明的任一方面的实施方案中或与本发明的任何其他实施方案组合，TNFRSF激动剂和IFN药剂或其功能性片段的组合刺激受试者的IFN途径。
在本发明的任一方面的实施方案中，所述受试者中IFN途径生物标记物水平升高，其中所述生物标记物选自C-X-C基序趋化因子9(CXCL9)、C-X-C基序趋化因子10(CXCL10)和C-X-C基序趋化因子11(CXCL11)。
在特定实施方案中，TNFRSF激动剂和IFN药剂或其功能性片段的组合协同增加受试者中的IFN途径生物标记物水平。
在本发明的任一方面的实施方案中，生物标记物是C-X-C基序趋化因子10(CXCL10)。
在特定实施方案中，TNFRSF激动剂和IFN药剂或其功能性片段的组合协同增加受试者中的CXCL10生物标记物水平。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂和IFN药剂或其功能性片段的组合协同刺激受试者的CXCL10释放。
在本发明的任一方面的实施方案中，受感染细胞为肝细胞。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂选自LTα3受体(TNFRSF1A、TNFRSF1B或TNFRSF14)激动剂(例如LTα3)、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂(例如LIGHT或LTβ)、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(例如LIGHT)、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂(例如TWEAK，也称为TNFSF12)、分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂(例如CD40L)、CD27(TNFRSF7)激动剂(例如CD70)、CD30(TNFRSF8)激动剂、4-1BB(CD137、TNFRSF9)激动剂、核因子κB受体激活因子(RANK、TNFRSF11A)激动剂、Troy(TNFRSF19)激动剂和OX40受体(TNFRSF4)激动剂。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂选自由淋巴毒素α3(LTα3)受体(TNFRSF1A、TNFRSF1B或TNFRSF14)激动剂、淋巴毒素βLTβ受体(TNFRSF3)激动剂(例如LIGHT或LTβ)、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(LIGHT)、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂(例如TWEAK，也称为TNFSF12)、分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂(CD40L)、CD27(TNFRSF7)激动剂、CD30(TNFRSF8)激动剂、4-1BB(CD137、TNFRSF9)激动剂、核因子κB受体激活因子(RANK、TNFRSF11A)激动剂、Troy(TNFRSF19)激动剂和OX40受体(TNFRSF4)激动剂。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂选自淋巴毒素α3(LTα3)受体(TNFRSF1A、TNFRSF1B或TNFRSF14)激动剂(例如LTα3)、淋巴毒素βLtβ受体(TNFRSF3)激动剂(例如LIGHT或LTβ)、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(例如LIGHT)、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂(例如TWEAK，也称为TNFSF12)、分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂(例如CD40L)、CD27(TNFRSF7)激动剂(例如CD70)、CD30(TNFRSF8)激动剂、核因子κB受体激活因子(RANK、TNFRSF11A)激动剂、Troy(TNFRSF19)激动剂和OX40受体(TNFRSF4)激动剂。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂选自淋巴毒素α3(LTα3)受体(TNFRSF1A、TNFRSF1B或TNFRSF14)激动剂、淋巴毒素βLTβ受体(TNFRSF3)激动剂(例如LIGHT或LTβ)、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(LIGHT)、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂(例如TWEAK，也称为TNFSF12)、分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂(CD40L)、CD27(TNFRSF7)激动剂、CD30(TNFRSF8)激动剂、核因子κB受体激活因子(RANK、TNFRSF11A)激动剂、Troy(TNFRSF19)激动剂和OX40受体(TNFRSF4)激动剂。
根据本发明的TNFRSF激动剂或其功能性片段可以包含所述TNFRSF激动剂或其功能性片段的融合蛋白的形式提供。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂是选自以下的CD40激动剂：CD40配体(CD40L)或其功能性片段、激动性抗CD40抗体或其抗原结合片段，以及包含CD40配体或其功能性片段的融合蛋白。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂包含TWEAK或其功能性片段或由其组成。特别地，TNFRSF激动剂是包含TWEAK或其功能性片段的融合蛋白。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂包含LIGHT或其功能性片段或由其组成。特别地，TNFRSF激动剂是包含LIGHT或其功能性片段的融合蛋白。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂包含CD40L或其功能性片段或由其组成。特别地，TNFRSF激动剂是包含CD40L或其功能性片段的融合蛋白。
在本发明的任一方面的实施方案中，CD40L是六聚体CD40L或三聚体CD40L。
在本发明的任一方面的实施方案中，融合蛋白是双功能免疫刺激融合蛋白，其包含TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或其功能性片段和接头。
根据特定实施方案，TNFRSF激动剂或其功能性片段和IFN药剂或其功能性片段以包含所述TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或其功能性片段和接头的双功能免疫刺激融合蛋白的形式提供。
在本发明的任一方面的实施方案中，IFN药剂或其功能性片段选自I型IFN、II型IFN和III型IFN。
在本发明的任一方面的实施方案中，所述IFN药剂或其功能性片段是IFNα、IFNβ、IFNγ或IFNλ。
在本发明的任一方面的实施方案中，所述IFN药剂或其功能性片段是IFNβ或IFNγ。
根据特定实施方案，IFN药剂或其功能性片段以包含所述IFN药剂或其功能性片段的融合蛋白的形式提供。
在本发明的任一方面的实施方案中，所述IFN药剂或其功能性片段是IFNβ。特别地，IFNβ以包含IFNβ或其功能性片段的融合蛋白的形式提供。
在本发明的任一方面的实施方案中，所述IFN药剂或其功能性片段是IFNα。特别地，IFNα以包含IFNα或其功能性片段的融合蛋白的形式提供。
在本发明的任一方面的实施方案中，所述IFN药剂或其功能性片段是IFNλ。特别地，IFNλ以包含IFNλ或其功能性片段的融合蛋白的形式提供。
在本发明的任一方面的实施方案中，所述IFN药剂或其功能性片段是IFNγ。特别地，IFNγ以包含IFNγ或其功能性片段的融合蛋白的形式提供。
在本发明的任一方面的实施方案中，IFN药剂以融合蛋白的形式提供。
在本发明的任一方面的实施方案中，融合蛋白是双功能免疫刺激融合蛋白。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白还包含TNFRSF激动剂或其功能性片段。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段选自CD40L、LTα3、LIGHT和/或TWEAK。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段选自CD40L、LIGHT和/或TWEAK。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂是多肽、抗体或其抗原结合片段。
在本发明的任一方面的实施方案中，直接向受试者提供TNFRSF多肽、抗体或其抗原结合片段。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF多肽、抗体或其抗原结合片段以双功能免疫刺激融合蛋白的形式提供。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF多肽、抗体或其抗原结合片段由向受试者提供的多核苷酸表达。
在本发明的任一方面的实施方案中，向受试者直接提供IFN药剂或其功能性片段。
在本发明的任一方面的实施方案中，IFN药剂或其功能性片段以双功能免疫刺激融合蛋白的形式提供。
在本发明的任一方面的实施方案中，IFN药剂或其功能性片段由向受试者提供的多核苷酸表达。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向受试者施用以下的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状：(i)淋巴毒素α3(LTα3)受体(TNFRSF1A、TNFRSF1B或TNFRSF14)激动剂、淋巴毒素β(LTβ受体(TNFRSF3)激动剂(例如LIGHT或LTβ)、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(LIGHT)、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂(例如TWEAK，也称为TNFSF12)、分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂(CD40L)、CD27(TNFRSF7)激动剂(CD70)、CD30(TNFRSF8)激动剂、4-1BB(CD137、TNFRSF9)激动剂、核因子κB受体激活因子(RANK、TNFRSF11A)激动剂、Troy(TNFRSF19)激动剂和OX40受体(TNFRSF4)激动剂；以及(ii)IFN药剂或其功能性片段。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂；以及I型IFN或I型IFN的功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂；以及II型IFN、II型IFN的功能性片段、III型IFN或III型IFN的功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LTα3、LIGHT和/或TWEAK；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：CD40L；以及IFN药剂或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂；以及IFNα或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LTα3、LIGHT和/或TWEAK；以及IFNα或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：CD40L；以及IFNα或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂；以及IFNβ或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LTα3、LIGHT和/或TWEAK；以及IFNβ或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：CD40L；以及IFNβ或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂；以及IFNγ或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LTα3、LIGHT和/或TWEAK；以及IFNγ或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：CD40L；以及IFNγ或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：TNFRSF激动剂；以及IFNλ或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：LTα3、LIGHT和/或TWEAK；以及IFNλ或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用以下的组合：CD40L；以及IFNλ或其功能性片段，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，其包括：向所述受试者施用包含TNFRSF激动剂的药物组合物；以及向所述受试者施用包含IFN药剂或其功能性片段的药物组合物，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在本发明的任一方面的实施方案中，依次施用所述药物组合物。
在本发明的任一方面的实施方案中，同时施用所述药物组合物。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂和IFN药剂或其功能性片段以单一药物组合物施用。
在本发明的任一方面的实施方案中，TNFRSF激动剂和IFN药剂或其功能性片段包含在不同的药物组合物中。
在本发明的另一方面，提供一种TNFRSF激动剂，用于与IFN药剂或其功能性片段组合治疗受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在本发明的另一方面，提供一种IFN药剂或其功能性片段，用于与TNFRSF激动剂组合治疗受试者的HBV感染的一种或多种症状。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂和IFNα或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用CD40L和IFNα或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用CD40L和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂和INFγ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂和IL28或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用CD40L和IL28或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂和IL29或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用CD40L和IL29或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTα3受体激动剂和IFNα或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTα3和IFNα或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和IFNα或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用TWEAK和IFNα或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTβ受体(TNFRSF3)激动剂或疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和IFNα或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTβ受体(TNFRSF3)激动剂和IFNα或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和IFNα或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LIGHT和IFNα或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTα3受体激动剂和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTα3和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用TWEAK和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTβ受体(TNFRSF3)激动剂或疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTβ受体(TNFRSF3)激动剂和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LIGHT和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTα3受体激动剂和IFNγ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTα3和IFNγ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂和IFNγ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用TWEAK和IFNγ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTβ受体(TNFRSF3)激动剂或疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和IFNγ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LTβ受体(TNFRSF3)激动剂和IFNγ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂和IFNγ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在特定实施方案中，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用LIGHT和IFNγ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述实施方案，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述实施方案，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用Ig-TWEAK和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用Ig-CD40L和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用Ig-LTα3和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种治疗有需要的受试者中的HBV感染的方法，所述方法包括向所述受试者施用Ig-LIGHT和IFNβ或其功能性片段的组合，以减少受试者的HBV感染的一种或多种症状。根据所述方面，提供所述组合，用于在受试者中治疗HBV感染和/或减少HBV感染的一种或多种症状。仍根据所述方面，提供所述组合用于制备用于在受试者中治疗HBV感染和/或用于减少HBV感染的一种或多种症状的药物的用途。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：TNFRSF激动剂；以及II型IFN、II型IFN的功能性片段、III型IFN或III型IFN的功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：TNFRSF激动剂；以及I型IFN或I型IFN的功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：LTα3、LIGHT和/或TWEAK；以及IFN药剂或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：TNFRSF激动剂；以及IFNα或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：LTα3、LIGHT和/或TWEAK；以及IFNα或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：CD40L；以及IFNα或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：TNFRSF激动剂；以及IFNβ或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：LTα3、LIGHT和/或TWEAK；以及IFNβ或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：CD40L；以及IFNβ或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：TNFRSF激动剂；以及IFNγ或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：LTα3、LIGHT和/或TWEAK；以及IFNγ或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：CD40L；以及IFNγ或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：TNFRSF激动剂；以及IFNλ或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：LTα3、LIGHT和/或TWEAK；以及IFNλ或其功能性片段。
在本发明的另一方面，提供一种药物组合物，其包含：CD40L；以及IFNλ或其功能性片段。
附图说明
根据以下说明性实施方案的详细描述结合附图，将更充分地理解本发明的前述和其他特征和优点。
图1A-图1B图解示出了在乙型肝炎病毒(HBV)感染的原代人肝细胞中使用干扰素β(IFNβ)和分化簇40配体(CD40L)的组合或干扰素α(IFNα)和分化簇40配体(CD40L)的组合协同减少乙型肝炎e-抗原(HBeAg)的释放。在感染后8天测定原代人肝细胞，并在第2天和第6天用IFNα、IFNβ和/或CD40L处理。IFNα，1000U；IFNβ，100U；CD40L，150ng/mL。图1A示意性地示出了实验的时间线。图1B图解示出了使用不同药剂的Hbe Ag水平。
图2A-图2B示出了在HBV感染的原代肝细胞中IFNβ和CD40L对闭合环状DNA(cccDNA)转录成前基因组RNA(pgRNA)的作用。图2A示意性地示出了测定的概要。图2B图解显示短期刺激足以极大地减少pgRNA转录。
图3A-图3B示出了IFNβ和CD40L对信号传导途径的作用。
图3A图解示出了在IFN途径中的CXCL10释放，这表明IFNβ和CD40L的组合协同增强IFN途径。图3B图解示出了在炎性途径中的IL8释放，这表明IFNβ和CD40L没有协同增强炎性途径。
图4A-图4B示出了不同IFN类型对CXCL10释放的作用。图4A图解示出了不同TNF家族成员与不同IFN类型的组合的作用。图4B图解示出了用CD40L和III型干扰素(IL28和IL29)共刺激肝细胞的协同作用。
图5图解示出了由各种CD40激动剂与IFNβ的组合介导的对CXCL10释放的协同作用。具体地，图5示出六聚体CD40L(hCD40L)、三聚体CD40L(tCD40L)和抗CD40激动性抗体(α-CD40)对CXCL10释放的作用。
图6A-图6B图解示出了CD40L与IFNβ的组合的协同作用的效力。图6A示出了CD40L与IFNβ的组合对CXCL10释放的作用；哈希标记框(Hash marked box)表示饱和点。图6B示出了CD40L与IFNβ的组合对IL8释放的作用。
图7A-图7F图解示出了CD40L与IFNβ的组合的协同作用，如通过在选定时间点进行转录组分析来测量。它以每百万映射片段的外显子的每千碱基片段数(FPKM)表示。图7A示出了CD40L与IFNβ的组合对CXCL10mRNA表达的作用。图7B示出了CD40L与IFNβ的组合对CXCL8/IL8 mRNA表达的作用。图7C示出了CD40L与IFNβ的组合对CXCL9 mRNA表达的作用。图7D示出了CD40L与IFNβ的组合对mRNA CXCL11表达的作用。图7E示出了CD40L与IFNβ的组合对CXCL3 mRNA表达的作用。图7F示出了CD40L与IFNβ的组合对CCL20 mRNA表达的作用。
图8图解示出了CD40L与IFNβ的组合对原代人肝细胞的CXCL10释放的协同作用。在刺激感染或未感染HBV的原代人肝细胞(PHH)后第3天和第7天测定CXCL10释放。
图9A-图9B图解示出了Ig-Tweak(图9A)和Ig-LIGHT(图9B)与IFNβ的组合对肝细胞(HepaRG细胞)中的CXCL10释放的协同作用。图9C-图9D图解示出了Ig-Tweak(图9C)和Ig-LIGHT(图9D)对A549细胞中的NFkB途径的功能作用。图9E-图9F图解示出了Ig-Tweak(图9E)和Ig-LIGHT(图9F)与IFNb(干扰素β)的组合对HBV感染的原代肝细胞的IFNb诱导的抗病毒作用的增强。NS：未刺激；NT：未治疗。
图10A-图10B图解示出了三种Duokine分子对激活CD40L介导的NFκB途径(图10A)和I型IFN介导的JAK/STAT途径报告物测定(图10B)的作用。Duokine包括IFNβ-IgG1 Fc-CD40L融合物(IFNb-Ig-CD40L)、具有简单接头的IFNβ-CD40L融合物(IFNb-CD40L)和IFNβ-亮氨酸拉链(LZ)-CD40L融合物(IFNb-LZ-CD40L)。
图11A-图11B图解示出了Duokine分子对肝细胞(hepaRG细胞)的CXCL10释放的作用。图11A示出了单独的三种不同Duokine分子对CXCL10释放的作用。图11B示出了Duokine与抗CD40L拮抗抗体的组合的作用。
图12图解示出了Duokine分子对肝细胞(HepaRG细胞)的CXC L10释放的作用。Duokine是IFNβ-IgG1 Fc-Tweak融合物(IFNb-Ig-Tweak)。Vvide：空载体。
图13图解示出了Duokine分子对肝细胞的CXCL10释放的作用。Duokine包括IFNβ-IgG1 Fc-Light融合物(IFNb-Ig-Light)和IFNβ-亮氨酸拉链(LZ)-Light融合物(IFNb-LZ-Light)。Vvide：空载体。
图14A-图14B图解示出了在小鼠中注射腺相关病毒(AAV)/HBV后长达49天中的各个时间点，病毒血症和病毒抗原的持久性。图14A示出了血清HBV DNA水平。图14B示出了血清HBV抗原水平。
图15示出了在AAV/HBV模型中的cccDNA形成。
图16图解示出了mCD40L与mIFNβ的组合对体内鼠模型的CXCL10释放的协同作用。“MIX-mCD40L”：mIFNb和mCD40L的组合。
图17A图解示出了使用IFN-报告原始双细胞得到的重组鼠mIFNb-Fc-mIgG1对干扰素途径的活性。图17B图解示出了HEK-CD40报告细胞中重组鼠Fc-mIgG1-mCD40L对CD40诱导的NFkB途径的活性。图17C图解示出了在施用0.84μg重组蛋白的小鼠的血清中mIFNb-Fc-mIgG1的ELISA剂量。图17D图解示出了在向小鼠施用30μg重组蛋白后的不同时间取样的血清中Fc-mIgG1-mCD40L的剂量。
图18示出了在AAV/HBV转导的小鼠模型中包含干扰素β(mIFNb-Fc-mIgG1)的鼠融合蛋白和包含CD40L的鼠融合蛋白(Fc-mIgG1-mCD40L)单独或组合的抗病毒活性。示出研究设计和研究组(图18A)以及每个采样时间的病毒参数。外周血病毒蛋白HBe-Ag(图18B)、病毒血症：外周血HBV DNA水平(图18C)和肝HBV DNA水平(图18D)均表示为具有平均值+/-sem的单一值。肝HBV pgRNA(图18E)表示为具有几何平均值的倍数变化个体数据。
图19A-图19C图解示出了融合蛋白IFNa-huIgG1-huCD40L对HEK-Blue-CD40细胞(图19A)、HEK-Blue-IFNa/b细胞(图19B)和对原代肝细胞的HBV感染(Hbe释放)(图19C)的功能活性。IFNa：干扰素α。
具体实施方式
本发明部分基于组合疗法的发现，所述组合疗法协同抑制乙型肝炎病毒(HBV)感染的细胞中HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)转录成前基因组RNA(pgRNA)，协同抑制HBV感染的细胞的乙型肝炎e-抗原(HBeAg)释放，并且在未感染和HBV感染的肝细胞中，特别是在未感染和HBV感染的原代人肝细胞中协同增强IFN途径。提供组合疗法，其包括向HBV感染细胞或被HBV感染的受试者施用TNFRSF激动剂(例如，针对TNFRSF成员的激动抗体、可溶性TNFRSF激动剂(包括但不限于其天然配体))或其功能性片段和干扰素(IFN)药剂或其功能性片段。
根据下文定义的所选术语，可以更容易地理解本公开文本。
如本文所用，“TNFRSF激动剂”是指激活TNFRSF的化合物(例如蛋白质、融合蛋白、多肽、抗体、抗体的抗原结合片段等)。例如，TNFRSF激动剂可以是针对TNFRSF成员的激动抗体、可溶性TNFRSF激动剂(包括但不限于其天然配体)或其功能性片段。
如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子，其包含四条多肽链，即通过二硫键相互连接的两条重(H)链和两条轻(L)链，以及其多聚体(例如IgM)。每条重链包含重链可变区(缩写为VH或VH)和重链恒定区(CH或CH)。重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(缩写为VL)和轻链恒定区(CL或CL)。轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。VH和VL区可以进一步细分为高变性区域，称为互补决定区(CDR)，散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR构成，从氨基末端到羧基末端按照以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
如本文所用，术语“配体”是指能够结合或被结合至另一种物质的任何物质。配体可以是肽、多肽、蛋白质、适体、多糖、糖分子、碳水化合物、脂质、寡核苷酸、多核苷酸、合成分子、无机分子、有机分子及其任何组合。
如本文所用，术语“功能性片段”是指物质的保留原始物质的一种或多种功能活性的片段。例如，TNFRSF激动剂的功能性片段是指TNFRSF激动剂的保留如本文所述的TNFRSF激动剂的功能(例如其激活靶TNFRSF)的片段。干扰素的功能性片段是指干扰素的保留如本文所述的IFN功能(例如，其介导IFN途径信号传导)的片段。
如本文所用，“乙型肝炎病毒”或“HBV”是指引起乙型肝炎的双链DNA病毒，其属于密切相关的DNA病毒家族，称为嗜肝性DNA病毒。嗜肝性DNA病毒对感染肝细胞有强烈的偏好，但是可以在肾脏、胰腺和单核细胞中发现少量的嗜肝性DNA病毒的DNA。但是，这些部位的感染与肝外疾病无关。
HBV病毒体(即丹氏颗粒(Dane particle))由外部脂质包膜和由蛋白质构成的二十面体核衣壳核心组成。核衣壳包围病毒DNA和具有与逆转录病毒相似的逆转录酶活性的DNA聚合酶。外部包膜含有嵌入蛋白，所述嵌入蛋白参与易感细胞的病毒结合和进入易感细胞。所述病毒是病毒体直径为42nm的最小包膜动物病毒之一，但存在多形形式，包括缺少核心的丝状体和球形体。这些颗粒不具感染性，并且它们由脂质和蛋白质构成，所述蛋白质形成病毒体表面的一部分，被称为表面抗原(HBsAg)，并且在病毒的生命周期期间过量产生。HBV包括HBsAg、HBcAg(及其剪接变体HBeAg)、DNA聚合酶和Hbx。HBV是采用逆转录作为其复制过程的一部分的少数已知非逆转录病毒之一。
HBV核衣壳含有相对较小且部分双链的3.2kb环状DNA、病毒聚合酶和核心蛋白。基因组仅具有四个长的开放阅读框。基因组的前-S-S(前-表面-表面)区域通过在三个框内起始密码子中的每一个的差异性翻译起始来编码三种病毒表面抗原。
HBV中最丰富的蛋白是24kD S蛋白(其被称为HBsAg)。前-C-C(前-核心-核心)区域编码HBcAg(HBV核心抗原)和HBeAg(HBV e抗原)。HBeAg并非病毒复制所需，并且在病毒组装中不起作用。P编码区对病毒聚合酶具有特异性，所述病毒聚合酶是参与DNA合成和RNA衣壳化的多功能酶。X开放阅读框编码病毒X蛋白(HBx)，所述蛋白质调节宿主细胞信号转导，并且可以直接和间接影响宿主和病毒基因表达。
据信，HBV的生命周期是在病毒通过其包膜蛋白附着到宿主细胞膜上时开始的。已经提出，作为HBV感染的初始步骤，HBV通过大包膜蛋白的前S1结构域与质膜上主要在人肝细胞上表达的受体结合。但是，所述受体的性质仍存在争议。然后，病毒膜与细胞膜融合，并且病毒基因组被释放到细胞中。
HBV的复制可能受多种因子调节，所述因子包括激素、生长因子和细胞因子。病毒基因组到达细胞核后，病毒聚合酶将部分双链DNA(dsDNA)基因组转化为共价闭合的环状DNA(cccDNA)。此DNA被宿主RNA Pol-II转录，并且所得DNA是用于进一步扩增前基因组RNA和亚基因组RNA的模板。
前基因组RNA是双功能的，充当病毒DNA合成的模板，且充当前C、C和P翻译的信使。亚基因组RNA仅用于包膜和X蛋白的翻译。所有病毒RNA都被转运到细胞质，在细胞质中其翻译产生病毒包膜、核心和聚合酶蛋白以及HBx和HBcAg。
HBV核心颗粒在胞质溶胶中组装，并且在此过程期间，前基因组RNA的单分子被并入正在组装的病毒核心中。一旦病毒RNA被衣壳化，就开始逆转录。两条病毒DNA链的合成是依次进行的。第一DNA链由衣壳化的RNA模板制成；在此链合成期间或之后，RNA模板被降解，并且使用新制备的第一DNA链作为模板，继续进行第二DNA链的合成。一些携带成熟基因组的核心被转运回到细胞核，在细胞核中它们的新产生的DNA基因组可以转化为cccDNA，以维持转录模板的稳定核内池。
最初在糙面内质网中合成并聚合HBV表面抗原(HBsAg)蛋白。这些蛋白质被转运到ER后和高尔基体前区室，其中随后核衣壳出芽。组装的HBV病毒体和亚病毒颗粒被转运到高尔基体，以进一步修饰表面蛋白的聚糖，然后从宿主细胞中分泌出来以完成生命周期。
在特定实施方案中，本文所述的方法和组合物可用于协同抑制HBV感染细胞的HBeAg释放，和/或协同增强HBV感染细胞(例如，肝细胞)中的IFN途径。如本文所用，术语“协同地”和“协同的”是指由两种或更多种组分(例如，TNFRSF激动剂和IFN或其功能性片段)介导的强于单独使用的每种组分的加和作用的作用。协同作用可以是单独组分的加和作用的约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％或更高。
在特定实施方案中，本文所述的方法和组合物可用于治疗HBV感染。如本文所用，“治疗HBV感染”和“HBV感染的治疗”是指以下中的一种或多种：(i)降低HBV病毒载量/病毒滴度(即，降低每mL感染性病毒颗粒的数量)；(ii)降低cccDNA的转录；(iii)降低细胞中前基因组RNA的水平；(iv)减少一种或多种HBV相关障碍；以及(v)减少受试者的一种或多种HBV相关症状。
在特定实施方案中，本文所述的方法和组合物可用于降低HBV感染细胞的HBV病毒载量/病毒滴度。与未治疗HBV感染细胞相比，HBV病毒载量/病毒滴度可降低约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
在特定实施方案中，本文所述的方法和组合物可用于减少HBV感染细胞中HBVcccDNA的转录。与未治疗HBV感染细胞相比，cccDNA转录可减少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
在特定实施方案中，本文所述的方法和组合物可用于降低HBV感染细胞中前基因组HBV RNA的水平。与未治疗HBV感染细胞相比，前基因组HBV RNA水平可降低约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
如本文所用，“HBV相关障碍”是指因HBV感染受试者引起的障碍。HBV相关障碍包括但不限于急性肝炎、慢性肝炎、黄疸性肝炎、暴发性肝炎、亚暴发性肝炎以及由任何这些障碍引起的症状和/或并发症。
如本文所用，“HBV相关症状”、“HBV感染的症状”或“HBV相关并发症”包括与HBV感染相关的一种或多种身体机能障碍。HBV症状和并发症包括但不限于肝硬化、肝细胞癌(HCC)、膜性肾小球肾炎(MGN)、死亡、急性坏死性血管炎(结节性多发性动脉炎)、膜性肾小球肾炎、儿童期丘疹性肢端皮炎(Gianotti-Crosti综合征)、HBV相关性肾病(例如，膜性肾小球肾炎)、免疫介导的血液系统障碍(例如，特发性混合性冷球蛋白血症、再生障碍性贫血)、门静脉高压、腹水、脑病、黄疸、瘙痒、灰白色粪便、脂肪痢、结节性多发性动脉炎、肾小球疾病、异常ALT水平、异常AST水平、异常碱性磷酸酶水平、胆红素水平升高、厌食、不适、发烧、恶心、呕吐等。
如本文所用，“干扰素药剂”或“IFN”是指通常由细胞响应于病原体或肿瘤细胞的存在而产生和释放的细胞因子或其衍生物。IFN包括I型IFN(例如IFNα、IFNβ、IFNε、IFNκ、IFNτ、IFNζ和IFNω)、II型IFN(例如IFNγ)和III型IFN(例如IFNλ1、IFNλ2和IFNλ3)。
根据某些示例性实施方案，本文所述的组合疗法利用以下中的一种或多种：全长IFN、其修饰的变体(例如，化学(例如，PEG化的)修饰的变体或突变蛋白)或其生物活性片段，所述变体或片段保留全长IFN的一种或多种信号传导活性。在某些实施方案中，所述IFN药剂是人IFN药剂。
在某些实施方案中，本文所述的组合疗法利用以下中的一种或多种：IFNα、IFNα片段、IFNβ、IFNβ片段、IFNγ、IFNγ片段、IFNλ或IFNλ片段。
在其他示例性实施方案中，本文所述的组合疗法利用以下中的一种或多种作为融合蛋白的一部分：IFNα、IFNα片段、IFNβ、IFNβ片段、IFNγ、IFNγ片段、IFNλ或IFNλ片段，所述融合蛋白例如双功能免疫刺激融合蛋白(例如，TNFRSF激动剂/IFN Duokine)。在其他示例性实施方案中，本文所述的组合疗法利用以下中的一种或多种：由核酸序列表达的IFNα、IFNα片段、IFNβ、IFNβ片段、IFNγ、IFNγ片段、IFNλ或IFNλ片段。
在某些实施方案中，在用本文所述的组合疗法(例如，TNFRSF激动剂和IFN药剂或其片段的组合)治疗的HBV感染细胞中，一种或多种IFN信号传导途径生物标记物的表达水平发生改变，即上调或下调。根据某些示例性实施方案，在用本文所述的组合疗法(例如，TNFRSF激动剂或其片段与IFN或其片段的组合)治疗的HBV感染细胞中，一种或多种IFN途径生物标记物的表达水平上调。
根据某些实施方案，作为本文特征的合适的IFN途径生物标记物是趋化因子，例如选自CXCL9、CXCL10和CXCL11的C-X-C趋化因子。在某些示例性实施方案中，由IFN途径诱导的合适的生物标记物是CXCL9、CXCL10和/或CXCL11，以及干扰素刺激的基因ISG20。
如本文所用，肿瘤坏死因子(配体)超家族成员(或TNFSF)是指属于共享标志性细胞外TNF同源结构域(THD)的蛋白质配体超家族的蛋白质(Bremer ISRN Oncology(2013)，论文ID 371854,25页，在线访问：dx.doi.org/10.1155/2013/371854)。THD触发非共价同三聚体的形成。TNF配体通常表达为II型跨膜蛋白，但大多数可以经过蛋白水解加工成可溶性配体。TNF配体通过结合并激活TNFRSF成员来发挥其生物学功能。TNFRSF通常表达为三聚体I型跨膜蛋白，并在其细胞外结构域中含有六个富半胱氨酸结构域(CRD)。TNF超家族的重要功能是在免疫应答的不同阶段提供共刺激信号。一些配体具有结合并激活不同受体的能力(例如，结合并激活TNFRSF1A、TNFRSF1B和TNFRSF14的LTα3，以及结合并激活TNFRSF3和TNFRSF14的LIGHT(TNFSF14))。示例性TNFSF基因家族成员在以下表1中列出，其来源于HUGO基因命名委员会(HUGO Gene Nomenclature Committee，HGNC)(参见Gray等人NucleicAcids Res.43:D1079-1085(2015)；HGNC数据库，HUGO基因命名委员会(HGNC)，EMBL分站-Hinxton,European Bioinformatics Institute,Wellcome Trust Genome Campus,Hinxton,Cambridgeshire,CB10 1SD,UK www.genenames.org)。认证符号(ApprovedSymbol)表示应用于特定基因的HGNC符号，并且通用名称(Approved Name)对应于所述基因的完整拼写。先前符号(Previous Symbol)表示由HGNC用来指代特定基因的任何先前符号。异名(Synonym)是指特定基因的可替代的同义名称。
表1.示例性TNFSF基因家族成员。
表2.示例性TNFRSF基因家族成员。
如本文所用，“TNFRSF激动剂”是指激活TNFRSF(例如，表2中列出的TNFRSF)的化合物(例如蛋白质、融合蛋白、多肽、抗体、抗体的抗原结合片段等)。如同上文表1，表2源自HGNC。例如，TNFRSF激动剂可以是针对TNFRSF成员的激动抗体、可溶性TNFRSF激动剂(包括但不限于其天然配体)或其功能性片段。
在某些示例性实施方案中，TNFRSF激动剂包括但不限于LTα3受体(TNFRSF1A、TNFRSF1B或TNFRSF14)激动剂、LTβ受体(TNFRSF3)激动剂(例如LIGHT或LTβ)、疱疹病毒进入介体(HVEM或TNFRSF14)激动剂(LIGHT)、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂(TNFRSF12A)激动剂(例如TWEAK，也称为TNFSF12)、分化簇因子40(CD40、TNFRSF5)激动剂(CD40L)、CD27(TNFRSF7)激动剂(CD70)、CD30(TNFRSF8)激动剂、4-1BB(CD137、TNFRSF9)激动剂、核因子κB受体激活因子(RANK、TNFRSF11A)激动剂、Troy(TNFRSF19)激动剂和OX40受体(TNFRSF4)激动剂。
根据某些示例性实施方案，本文所述的组合疗法利用以下中的一种或多种：针对TNF受体的激动性抗体、可溶性TNFRSF激动剂(包括但不限于其天然配体)、或前述任一项的修饰的变体(例如突变蛋白)或生物活性片段，所述变体或片段保留全长或可溶性TNFRSF激动剂的一种或多种信号传导活性。
在某些实施方案中，本文所述的组合疗法利用一种或多种TNFRSF激动剂。根据某些示例性实施方案，TNFRSF激动剂以多聚体(例如，二聚体、三聚体、四聚体、五聚体、六聚体、七聚体、八聚体等)或以融合蛋白(例如包含TNFRSF激动剂和IFN药剂或IFN药剂的生物学活性片段的融合蛋白，关于合适的融合蛋白的例子，参见例如表3)的形式提供。在其他实施方案中，TNFRSF激动剂以激动抗体或其抗原结合片段的形式提供。
在某些实施方案中，本文所述的组合疗法利用一种或多种选自CD40L、TWEAK、LIGHT和LTα3的TNFRSF激动剂。在某些示例性实施方案中，本文所述的组合疗法利用一种或多种CD40激动剂，所述CD40激动剂是多聚体CD40L，例如六聚体CD40L、三聚体CD40L等。在其他示例性实施方案中，本文所述的组合疗法利用一种或多种抗CD40激动性抗体。合适的抗CD40激动剂抗体的例子包括但不限于CP-870,893(Pfizer/Roche)、SGN-40(SeattleGenetics)、ADC-1013(Janssen/Alligator BioSciences)、Chi Lob 7/4(University ofSouthampton)、达西珠单抗(dacetuzmumab)(Seattle Genetics)、APX005M(Apexigen,Inc.)、3G5(Celldex)和CDX-1140(Celldex)。在仍其他示例性实施方案中，本文所述的组合疗法利用一种或多种CD40激动剂，例如CD40L/IFNb融合蛋白，例如双功能免疫刺激融合蛋白(例如，CD40L/IFN Duokine(参见例如，WO 2016/113395，其出于所有目的通过引用以其整体并入本文))。在又其他示例性实施方案中，本文所述的组合疗法利用一种或多种由核酸序列表达的CD40激动剂。如本文所用，术语“融合蛋白”通常是指通过以下方式产生的蛋白质：接合两个或更多个不同的肽或蛋白质，得到具有源自每个原始蛋白质的一种或多种功能特性的单一蛋白质。融合蛋白包括不同融合蛋白的单体和多聚体复合物，例如二聚体、三聚体、四聚体等。
在某些示例性实施方案中，融合蛋白具有以下通式：
An-L-Bm (式I)
其中A是TNFRSF激动剂或其功能性片段，B是IFN药剂或其功能性片段，并且L包含接头或可替代地由接头组成。在某些实施方案中，两种或更多种式I融合蛋白可以通过一个或多个额外接头“L”彼此连接。
如An中所用，“n”是指1、2、3、4、5、6、7、8或更多个可与一个或多个接头“L”缔合的TNFRSF激动剂或其功能性片段。在某些实施方案中，两个或更多个TNFRSF激动剂或其功能性片段与单一接头缔合。在其他实施方案中，两个或更多个TNFRSF激动剂或其功能性片段彼此复合(例如，作为寡聚物)，并且一个或多个复合的TNFRSF激动剂或其功能性片段与一个或多个接头缔合。在仍其他实施方案中，单独的TNFRSF激动剂或其功能性片段与单一接头缔合。
如Bm中所用，“m”是指1、2、3、4、5、6、7、8个或更多个IFN药剂或其功能性片段，其中“m”可以与两个或更多个可以与一个或多个接头“L”缔合的配体或其片段或变体相关。在某些实施方案中，两个或更多个配体或其片段或变体与单一接头缔合。在其他实施方案中，两个或更多个配体或其片段或变体彼此复合(例如，作为寡聚物)，并且一个或多个复合的配体或其片段或变体与一个或多个接头缔合。在仍其他实施方案中，单独的配体或其片段或变体与单一接头缔合。
如本文所用，术语“接头”或“L”是指将一个或多个An与一个或多个Bm共价接合的任何部分。在示例性实施方案中，接头是肽接头。如本文所用，术语“肽接头”是指适于连接两个或更多个配体或其片段或变体的肽。肽接头可以具有任何长度，即包含任何数量的氨基酸残基。接头通常足够长以提供足够柔性程度，以防止所连接的部分干扰彼此的活性，例如配体多聚化和/或结合受体的能力。在示例性实施方案中，接头是或包含Fc结构域(例如，人IgG1或IgG3 Fc结构域)或其片段。在其他实施方案中，接头是由多个甘氨酸、丝氨酸和(适用时)苏氨酸残基构成的Gly-Ser或Gly-Ser-Thr接头。在其他实施方案中，接头是Fc结构域或其片段与Gly-Ser接头或Gly-Ser-Thr接头的组合。表3列出根据某些示例性实施方案的肽接头的序列。
L可以进一步包含允许融合蛋白多聚化的多聚化结构域。在此类情况下，L可包括其中已插入多聚化结构域的肽接头。在可替代实施方案中，L可包括两个肽接头，其中两个肽接头可以相同或不同。在又另一个实施方案中，多聚化结构域表示L所包含的肽接头。
多聚化可以通过非共价相互作用和/或共价相互作用来进行，特别是通过一个或多个二硫键或通过比对同一分子在多个(例如2、3、4或更多个)多聚化结构域之间的多个编码序列来进行。
合适的多聚化结构域是本领域技术人员已知的，并且包括例如腱生蛋白三聚化基序、胶原凝集素三聚化结构域和链霉亲和素，以及二聚化结构域，例如IgE重链结构域2(EHD2)、IgM重链结构域2(MHD2)、IgG重链结构域3(GHD3)、IgA重链结构域3(AHD2)、IgD重链结构域3(DHD3)、IgE重链结构域4(EHD4)、IgM重链结构域4(MHD4)、Fc结构域、子宫珠蛋白二聚化结构域和亮氨酸拉链(LZ)结构域。
在特定实施方案中，融合蛋白可以是双功能免疫刺激融合蛋白，其包含TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或其功能性片段和接头。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含CD40L或其功能性片段、IFNα或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含CD40L或其功能性片段、IFNβ或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含CD40L或其功能性片段、IFNγ或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含CD40L或其功能性片段、IFNλ或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含TWEAK或其功能性片段、IFNα或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含TWEAK或其功能性片段、IFNβ或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含TWEAK或其功能性片段、IFNγ或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含TWEAK或其功能性片段、IFNλ或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含LIGHT或其功能性片段、IFNα或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含LIGHT或其功能性片段、IFNβ或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含LIGHT或其功能性片段、IFNγ或其功能性片段和接头的蛋白质。
在本发明的任一方面的实施方案中，双功能免疫刺激融合蛋白是包含LIGHT或其功能性片段、IFNλ或其功能性片段和接头的蛋白质。
如本文所用，“Duokine”是指包含一种、两种或更多种细胞因子的融合蛋白。表3列出根据某些示例性实施方案的Duokine及其组分的序列。
表3.示例性Duokine分子及其组分的序列。粗体序列对应于接头，并且斜体序列对应于信号肽。
如上表3中所示的组分可以用于制备如本文所公开的药物或药物组合物。
在优选的实施方案中，活性剂由源自上表3中指定的那些多肽、并且尤其源自上文SEQ ID NO.1、2、3、4、5、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26和33的多肽的多肽组成，并且当被用于治疗HBV感染时全无任何信号肽。实际上，最初在合成多肽时存在于这些多肽序列中的信号肽之后被切割。
表4.图中(或文本中)使用的构建体名称与SEQ ID NO之间的对应关系
核酸和表达载体
在一方面，提供了编码TNFRSF激动剂或其功能性片段和IFN药剂或其功能性片段的多核苷酸的组合。还提供了制备TNFRSF激动剂或其功能性片段和IFN药剂或其功能性片段的组合的方法，所述方法包括表达这些多核苷酸。
通常将编码如本文所公开的TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的多核苷酸插入用于引入宿主细胞中的表达载体中，所述宿主细胞可用于产生所需量的要求保护的抗体或免疫粘附素。因此，在某些方面，本发明提供了包含本文公开的多核苷酸的表达载体以及包含这些载体和多核苷酸的宿主细胞。
出于说明书和权利要求的目的，术语“载体”或“表达载体”在本文中用于意指根据本发明用作引入细胞中并在细胞中表达所需基因的媒介物的载体。如本领域技术人员所知，此类载体可以容易地选自质粒、噬菌体、病毒和逆转录病毒。一般而言，与本发明相容的载体将包含选择标记物、促进所需基因的克隆的适当的限制性位点，以及进入真核或原核细胞和/或在所述细胞中复制的能力。
出于本发明的目的，可以使用许多表达载体系统。例如，一类载体利用来源于动物病毒如牛乳头瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、牛痘病毒、杆状病毒、逆转录病毒(RSV、MMTV或MOMLV)或SV40病毒的DNA元件。其他载体类涉及使用具有内部核糖体结合位点的多顺反子系统。另外，可以通过引入一种或多种标记物来选择已将DNA整合至其染色体中的细胞，所述一种或多种标记物允许选择转染的宿主细胞。标记物可以针对营养缺陷型宿主的原营养、杀生物剂(例如抗生素)抗性或对重金属如铜的抗性来提供。可选择标记基因可以与待表达的DNA序列直接连接，或通过共转化引入同一细胞中。还可能需要另外的元件来最佳地合成mRNA。这些元件可包括信号序列、剪接信号以及转录启动子、增强子和终止信号。在一些实施方案中，将克隆的可变区基因与如上所述合成的重链和轻链恒定区基因(如人基因)一起插入表达载体中。
在其他实施方案中，可以使用多顺反子构建体表达如本文所述的TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段。在此类表达系统中，可以从单一多顺反子构建体产生多种目标基因产物，例如TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段。这些系统有利地使用内部核糖体进入位点(IRES)以在真核宿主细胞中提供相对高水平的多肽。相容的IRES序列在美国专利号6,193,980中披露，所述专利以引用的方式并入本文。本领域技术人员将理解，此类表达系统可用于有效产生本申请中公开的全系列多肽。
更一般地，一旦已经制备了编码本公开文本的TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的载体或DNA序列，就可以将表达载体引入合适的宿主细胞中。也就是说，可以转化宿主细胞。可以通过本领域技术人员公知的各种技术来实现将质粒引入宿主细胞中。这些技术包括但不限于转染(包括电泳和电穿孔)、原生质体融合、磷酸钙沉淀、与包膜DNA的细胞融合、显微注射和完整病毒感染。参见例如，Ridgway,A.A.G.“Mammalian Expression Vectors”第24.2章,第470-472页Vectors,Rodriguez和Denhardt编辑(Butterworths，波士顿，马萨诸塞州1988)。使转化的细胞在适合于产生轻链和重链的条件下生长，并测定重链和/或轻链蛋白质合成。示例性测定技术包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)或荧光激活细胞分选仪分析(FACS)、免疫组织化学等。
如本文所用，术语“转化”应在广义上使用，是指将DNA引入受体宿主细胞中，从而改变基因型并因此导致受体细胞的变化。
沿着相同的思路，“宿主细胞”是指已经用载体转化的细胞，所述载体是使用重组DNA技术构建的并且编码至少一种异源基因。在从重组宿主分离多肽的过程的描述中，术语“细胞”和“细胞培养物”可互换使用，以表示抗体来源，除非另外明确指定。换言之，从“细胞”中回收多肽可以意指从离心沉淀的全细胞，或从含有培养基和悬浮细胞二者的细胞培养物中回收。
在一个实施方案中，用于表达TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的宿主细胞系是真核或原核来源的。在一个实施方案中，用于表达TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的宿主细胞系是细菌来源的。在一个实施方案中，用于表达TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的宿主细胞系是哺乳动物来源的；本领域技术人员可以确定最适合所需基因产物在其中表达的特定宿主细胞系。示例性宿主细胞系包括但不限于DG44和DUXB11(中国仓鼠卵巢系，DHFR-)、HELA(人宫颈癌)、CVI(猴肾系)、COS(具有SV40 T抗原的CVI的衍生物)、R1610(中国仓鼠成纤维细胞)、BALBC/3T3(小鼠成纤维细胞)、HAK(仓鼠肾系)、SP2/O(小鼠骨髓瘤)、BFA-1c1BPT(牛内皮细胞)、RAJI(人淋巴细胞)、293(人肾)。在一个实施方案中，细胞系提供由其表达的抗体的改变的糖基化，例如无岩藻糖基化(例如，
(Crucell)或FUT8敲除CHO细胞系(POTELLIGENTTM细胞)(Biowa，普林斯顿，新泽西州))。在一个实施方案中，可以使用NS0细胞。宿主细胞系通常可从商业服务机构、美国组织培养物保藏中心(AmericanTissue Culture Collection)或从公开的文献获得。
体外生产允许成比例放大规模以产生大量所需TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段。用于在组织培养条件下进行哺乳动物细胞培育的技术是本领域已知的，并且包括均质悬浮培养(例如在气升式反应器中或在连续搅拌反应器中)，或者固定化或截留式细胞培养(例如在中空纤维、微胶囊中，在琼脂糖微珠或陶瓷盒上)。如果和/或需要期望，可以通过常规色谱方法，例如凝胶过滤、离子交换色谱、在DEAE-纤维素上的色谱和/或(免疫)亲和色谱法来纯化TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的溶液。
编码TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段的一种或多种基因也可以在非哺乳动物细胞诸如细菌或酵母或植物细胞中表达。在这一方面，应当理解，也可以转化多种单细胞非哺乳动物微生物如细菌，即能够在培养或发酵中生长的那些微生物。易于转化的细菌包括肠杆菌科(enterobacteriaceae)成员，诸如大肠杆菌(Escherichiacoli)或沙门氏菌属(Salmonella)的菌株；芽孢杆菌科(Bacillaceae)，如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)；肺炎球菌(Pneumococcus)；链球菌属(Streptococcus)和流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)。还将认识到，当在细菌中表达时，TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段可成为包涵体的一部分。TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段必须进行分离和纯化。
除原核生物外，还可以使用真核微生物。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或普通面包酵母是最常用的真核微生物，但一般可使用多种其他菌株。对于在酵母属(Saccharomyces)中的表达，通常使用质粒YRp7，例如，(Stinchcomb等人,Nature,282:39(1979)；Kingsman等人,Gene,7:141(1979)；Tschemper等人,Gene,10:157(1980))。此质粒已经含有TRP1基因，所述基因提供针对缺乏在色氨酸中生长的能力的酵母突变菌株的选择标记，例如ATCC号44076或PEP4-1(Jones,Genetics,85:12(1977))。然后，作为酵母宿主细胞基因组的特征的trp1损伤的存在提供通过在没有色氨酸的情况下生长检测转化的有效环境。
治疗载体
可以将编码TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂功能性片段的核酸序列插入载体中并用作治疗载体，例如表达TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的载体。合适的功能性表达构建体和治疗性表达载体的构建是本领域普通技术人员已知的。
可以通过例如静脉内注射、局部施用(参见美国专利号5,328,470)或通过立体定向注射(参见例如，Chen等人,PNAS 91:3054-3057(1994))将治疗性载体递送至受试者。治疗载体的药物制剂可包含可接受的稀释剂中的载体。
可将编码TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的核酸并入基因构建体中，以用作治疗方案的一部分，以递送编码TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的核酸。提供了用于TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的体内转染和表达的表达载体。
如本领域普通技术人员已知的，可以任何生物学上有效的载体，例如能够在体内将组分核酸序列有效地递送至细胞的任何配制品或组合物，来施用此类组分的表达构建体。方法包括但不限于在病毒载体中插入主题核酸序列，所述病毒载体包括但不限于重组逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒和单纯疱疹病毒-1、重组细菌或真核质粒等。
逆转录病毒载体和腺相关病毒载体可以用作重组递送系统，以用于在体内，特别是向人体内转移外源核酸序列。此类载体提供了基因向细胞中的有效递送，并且转移的核酸可以稳定地整合到宿主的染色体DNA中。
仅产生复制缺陷型逆转录病毒的特化细胞系(称为“包装细胞”)的开发提高了逆转录病毒用于基因治疗的效用，并且表征缺陷型逆转录病毒用于基因治疗目的的基因转移(综述请参见例如Miller,Blood 76:271-78(1990))。可以将复制缺陷型逆转录病毒包装到病毒体中，所述病毒体可以用于通过标准技术使用辅助病毒来感染靶细胞。用于产生重组逆转录病毒和用于使用此类病毒在体外或体内感染细胞的方案可见于以下文献中：Current Protocols in Molecular Biology,Ausubel等人,(编)Greene PublishingAssociates,(1989),第9.10-9.14节，以及其他标准实验室手册。合适的逆转录病毒的非限制性例子包括本领域普通技术人员已知的pLJ、pZIP、pWE和pE M。合适的包装病毒系的例子包括*Crip、*Cre、*2和*Am。(参见例如，Eglitis等人,Science 230:1395-1398(1985)；Danos和Mulligan,Proc.Natl.Aca d.Sci.USA 85:6460-6464(1988)；Wilson等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:3014-3018(1988)；Armentano等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:6141-6145(1990)；Huber等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:8039-8043(1991)；Ferry等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:8377-8381(1991)；Chowdhury等人,Science 254:1802-1805(1991)；van Beusechem等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:7640-7644(1992)；Kay等人,Human Gene Therapy 3:641-647(1992)；Dai等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:10892-10895(1992)；Hwu等人,J.Immunol.150:4104-4115(1993)；美国专利号4,868,116；美国专利号4,980,286；PCT申请WO 89/07136；PCT申请WO 89/02468；PCT申请WO 89/05345；以及PCT申请WO 92/07573)。
在另一个实施方案中，提供了腺病毒来源的递送载体。可以操纵腺病毒的基因组，使其编码并表达目标基因产物，但其在正常裂解性病毒生命周期中复制的能力失活。参见例如，Berkner等人,BioTechniques 6:616(1988)；Rosenfeld等人,Science 252:431-434(1991)；以及Rosenfeld等人,Cell 68:143-155(1992)。源自腺病毒株Ad 5型d1324或腺病毒的其他毒株(例如，Ad2、Ad3、Ad7等)的合适腺病毒载体是本领域普通技术人员已知的。重组腺病毒在某些情况下可能是有利的，因为它们不能感染非分裂细胞，并且可以用于感染多种细胞类型，包括上皮细胞(Rosenfeld等人(1992)，同上)。此外，病毒颗粒相对稳定并且适于纯化和浓缩，并且如上文所述，可以被修饰以影响感染性谱。另外，引入的腺病毒DNA(和其中所含有的外来DNA)并未整合到宿主细胞的基因组中，而是保持游离状态，从而避免了在引入的DNA被整合到宿主基因组(例如，逆转录病毒DNA)中的情况下由于原位插入诱变而可能发生的潜在问题。而且，相对于其他递送载体，腺病毒基因组对外源DNA的携带能力很大(高达8千碱基)(Berkner等人(1998)，同上；Haj-Ahmand和Graham,J.Virol.57:267(1986))。
可用于递送编码TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的核酸序列的另一种病毒载体系统是腺相关病毒(AAV)。AAV是天然存在的缺陷病毒，其需要另一种病毒(例如腺病毒或疱疹病毒)作为辅助病毒，才能有效复制并获得生产性生命周期。(有关综述，参见Muzyczka等人,Curr.Topics in Micro.and Immunol.158:97-129(1992))。它也是可以将其DNA整合到非分裂细胞中并表现出高稳定整合频率的少数病毒之一(参见例如，Flotte等人,Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.7:349-356(1992)；Samulski等人,J.Virol.63:3822-3828(1989)；以及McLaughlin等人,J.Virol.62:1963-1973(1989))。仅含有AAV的300个碱基对的载体可以被包装并且可以整合。用于外源DNA的空间限于约4.5kb。AAV载体，诸如Tratschin等人,Mol.Cell.Biol.5:3251-3260(1985)中所述的该载体，可用于将DNA引入细胞中。已使用AAV载体将多种核酸引入不同的细胞类型中(例如参见，Hermonat等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6466-6470(1984)；Tratschin等人,Mol.Cell.Biol.4:2072-2081(1985)；Wondisford等人,Mol.Endocrinol.2:32-39(1988)；Tratschin等人,J.Virol.51:611-619(1984)；以及Flotte等人,J.Biol.Chem.268:3781-3790(1993))。
除了病毒转移方法外，还可以采用非病毒方法来使编码TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的核酸序列在受试者的组织中表达。大多数非病毒基因转移方法都依赖于哺乳动物细胞进行大分子的摄取和细胞内转运的正常机制。在一些实施方案中，非病毒递送系统依赖于用于靶细胞摄取主题基因的胞吞途径。这种类型的示例性递送系统包括脂质体衍生的系统、聚赖氨酸缀合物和人工病毒包膜。其他实施方案包括质粒注射系统，例如描述于以下文献中：Meuli等人,J.Invest.Dermatol.116(1):131-135(2001)；Cohen等人,Gene Ther 7(22):1896-905(2000)；或Tam等人,Gene Ther.7(21):1867-74(2000)。
在临床环境中，递送系统可以通过多种方法中的任一种引入受试者中，每种所述方法都是本领域中熟悉的。例如，递送系统的药物制剂可以全身性地，例如通过静脉内注射来引入。靶细胞中蛋白质的特异性转导主要因以下而发生：由递送媒介物提供的转染的特异性，由于控制受体基因表达的转录调节序列引起的细胞类型或组织类型表达，或其组合。在其他实施方案中，由于在动物中的引入的局限性很高，重组基因的初始递送更受限制。例如，递送媒介物可以通过导管(参见美国专利号5,328,470)或通过立体定向注射(例如Chen等人,PNAS 91:3054-3057(1994))来引入。
治疗性构建体的药物制剂可以基本上由可接受的稀释剂中的递送系统组成，或可以包含其中埋入递送媒介物的缓释基质。可替代地，在完整的递送系统可以从重组细胞完整地产生的情况下，例如逆转录病毒载体，药物制剂可以包含一种或多种产生递送系统的细胞。
治疗方法
在一方面，本发明提供了治疗有需要的患者(例如，被HBV感染的患者)的方法，所述方法包括施用有效量的TNFRSF激动剂或其功能性片段或编码TNFRSF激动剂或其功能性片段的核酸序列(例如，mRNA)和有效量的IFN药剂或IFN药剂的功能性片段或编码IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的核酸序列(例如，mRNA)，如本文所公开。在某些实施方案中，本公开文本提供了用于在需要此种治疗的哺乳动物受试者中治疗障碍和/或症状例如HBV相关障碍和/或HBV相关症状的试剂盒和方法。在某些示例性实施方案中，受试者是人。
本公开文本的TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或编码它们的核酸序列可用于许多不同的应用中。例如，在一个实施方案中，主题TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或编码它们的核酸序列可用于减少HBV感染细胞的HBeAg释放。在另一个实施方案中，主题TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或编码它们的核酸序列可用于减少HBV感染细胞中cccDNA的pgRNA转录。
在另一个实施方案中，主题TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或编码它们的核酸序列可用于减少与HBV感染相关的一种或多种症状和/或并发症，如本文所述(下文)。
在某些实施方案中，主题TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或编码它们的核酸序列可用于减少与慢性HBV感染相关的一种或多种障碍、症状和/或并发症，例如肝脏的慢性炎症(慢性肝炎)，其在数年内导致肝硬化；肝细胞癌(HCC)；膜性肾小球肾炎(MGN)的发展；死亡风险；急性坏死性血管炎(结节性多发性动脉炎)、膜性肾小球肾炎和儿童丘疹性肢端皮炎(Gianotti-Crosti综合征)；HBV相关性肾病(例如膜性肾小球肾炎)；免疫介导的血液系统障碍(例如特发性混合性冷球蛋白血症、再生障碍性贫血)；等等。
在某些实施方案中，主题TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或编码它们的核酸序列可用于减少与急性HBV感染有关的一种或多种症状和/或并发症，例如，急性病毒性肝炎(其始于一般性健康不佳、食欲不振、恶心、呕吐、身体疼痛、轻度发烧和尿色深，然后进展为黄疸发展、暴发性肝功能衰竭和/或血清病样综合征)；食欲不振；关节和肌肉疼痛；低烧；胃痛；恶心；呕吐；黄疸；胃胀气；等等。
因此，本公开文本还涉及一种治疗人或其他动物中与HBV感染相关的一种或多种障碍、症状和/或并发症的方法，所述方法通过向这个人或动物施用有效无毒量的TNFRSF激动剂或其功能性片段和IFN药剂或IFN药剂的功能性片段或编码它们的核酸序列来进行。本领域技术人员将能够通过常规实验来确定TNFRSF激动剂或其功能性片段和IFN药剂或IFN药剂的功能性片段或编码它们的核酸序列用于治疗HBV感染的有效无毒量。
例如，本公开文本的TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的治疗有效量可以根据诸如以下等因素而变化：受试者的疾病阶段(例如急性与慢性)、年龄、性别、医学并发症(例如，HIV合并感染、免疫抑制的病症或疾病)和体重，以及TNFRSF激动剂或其功能性片段和IFN药剂或IFN药剂的功能性片段在受试者中引起所需反应的能力。可以调整剂量方案以提供最佳的治疗反应。例如，可以每天施用几个分开的剂量，或者可以如治疗情况的紧急性所示按比例减少剂量。
一般而言，本公开文本中提供的组合物可用于预防性治疗未感染细胞或治疗性治疗包含抗原标记物的任何HBV感染细胞，所述抗原标记物允许TNFRSF激动剂或其功能性片段和IFN药剂或IFN药剂的功能性片段靶向所述HBV感染细胞。
药物组合物及其施用
制备本公开文本的TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或编码它们的核酸序列并将其施用至受试者的方法是本领域技术人员熟知的，或者本领域技术人员可以使用本说明书和本领域知识作为指导容易地确定所述方法。本公开文本的TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或编码它们的核酸序列的施用途径可以是口服、肠胃外、通过吸入或局部施用。如本文所用，术语肠胃外包括静脉内、动脉内、腹膜内、肌内、皮下、直肠或阴道施用。虽然所有这些施用形式被认为明显在本公开文本的范围内，但施用形式将是用于注射、特别是用于静脉内或动脉内注射或滴注的溶液。通常，用于注射的合适的药物组合物可以包含缓冲液(例如乙酸盐、磷酸盐或柠檬酸盐缓冲液)、表面活性剂(例如聚山梨醇酯)、任选地稳定剂(例如人白蛋白)等。在一些实施方案中，可以将TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或编码它们的核酸序列直接递送至不良细胞群的部位(例如肝脏)，从而增加患病组织对治疗剂的暴露。
在某些实施方案中，如本文所述的TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或编码它们的核酸序列的施用是依次进行的，例如施用TNFRSF激动剂或其功能性片段或编码它的核酸序列的剂量，然后施用IFN药剂或IFN药剂的功能性片段或编码它的核酸序列的剂量；或者施用IFN药剂或IFN的功能性片段剂或其编码的核酸序列的剂量，然后施用TNFRSF激动剂或其功能性片段或编码它的核酸序列的剂量。
在某些实施方案中，TNFRSF激动剂或其功能性片段的剂量和IFN药剂或IFN药剂的功能性片段的剂量或编码它们的核酸序列是同时施用的，例如，以施用时间接近的单独剂量或以同一剂量(例如，作为混合物或作为Duokine)施用。
用于肠胃外施用的制剂包括无菌的水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油、以及可注射的有机酯如油酸乙酯。水性载体包括水、醇性/水性溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。在本公开文本的组合物和方法中，药学上可接受的载体包括但不限于0.01-0.1M，例如0.05M磷酸盐缓冲液或0.8％盐水。其他常见的肠胃外媒介物包括磷酸钠溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液或不挥发油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂、电解质补充剂(如基于林格氏右旋糖的那些)等。也可以存在防腐剂和其他添加剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体等。更具体地，适合于注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(在水溶的情况下)或分散液，以及用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。在此类情况下，组合物必须是无菌的并且流动性应达到存在可注射性的程度。它应该在制造和储存条件下稳定，并且通常可以抵抗微生物如细菌和真菌的污染作用而保存。载体可以是溶剂或分散介质，所述溶剂或分散介质含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。例如，可以通过使用包衣如卵磷脂，通过在分散液的情况下维持所需的粒度以及通过使用表面活性剂来保持适当的流动性。
防止微生物的作用可以通过多种抗细菌和抗真菌剂(例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等)来实现。在许多情况下，将在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(如甘露糖醇、山梨糖醇)或氯化钠。通过在组合物中包含延迟吸收的药剂例如单硬脂酸铝和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。
在任何情况下，可以通过以下方式来制备无菌可注射溶液：将活性化合物(例如，TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段、或编码它们中任一种的核酸序列，呈其自身或与其他活性剂组合的形式)以所需的量掺入适当的溶剂中，接着进行过滤灭菌，所述溶剂根据需要具有本文所列举成分中的一种或组合。通常，通过将活性化合物掺入无菌媒介物中来制备分散液，所述无菌媒介物含有基础分散介质和来自以上列举的那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，示例性制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，从而从活性成分加任何另外的所需成分的先前无菌过滤的溶液产生其粉末。根据本领域已知的方法，将用于注射的制剂加工，填充至容器诸如安瓿、袋子、瓶子、注射器或小瓶中，并在无菌条件下密封。此外，所述制剂可以试剂盒的形式包装和出售。此类制品通常将具有标签或包装说明书，其表明相关组合物可用于治疗患有HBV感染的受试者。
本公开文本的组合物用于治疗上述HBV感染相关病症的有效剂量根据许多不同因素而变化，所述因素包括施用方式、靶部位、患者的生理状态、患者是人还是动物、施用的其他药物以及治疗是预防性的还是治疗性的。通常，患者是人，但也可以治疗包括转基因哺乳动物在内的非人哺乳动物。治疗剂量可以使用本领域技术人员已知的常规方法逐步增加，以优化安全性和功效。
对于用TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段进行的被动免疫，剂量的范围可以为例如约0.0001至约100mg/kg宿主体重，并且更通常为约0.01至约5mg/kg(例如，约0.02mg/kg、约0.25mg/kg、约0.5mg/kg、约0.75mg/kg、约1mg/kg、约2mg/kg等)。例如，剂量可以是约1mg/kg体重或约10mg/kg体重，或在约1至约10mg/kg的范围内，例如至少约1mg/kg。在上述范围中间的剂量也意图落入本公开文本的范围内。可以每日、隔日、每周或按根据经验分析确定的任何其他时间表向受试者施用此类剂量。示例性治疗使得需要在例如至少六个月的延长时期内施用多个剂量。另外的示例性治疗方案使得需要约每两周一次或约每月一次或约每3至6个月一次施用。示例性剂量时间表包括连续几日约1至约10mg/kg或约15mg/kg、隔日约30mg/kg或每周约60mg/kg。
TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或表达这些中的任一种的核酸序列可以在多种情景下施用。单剂量之间的间隔可以是每周、每月或每年。如通过测量患者中TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段的血液水平所指示的，间隔也可以是不规律的。可替代地，可以将TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或表达这些中的任一种的核酸序列作为缓释配制品施用，在这种情况下，需要的施用频率较低。剂量和频率根据TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段在患者体内的半衰期而变化。
如先前所讨论的，本公开文本的TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段可以药学有效量施用，以用于哺乳动物障碍的体内治疗。就这一点而言，将理解的是，如所公开的，将配制TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段以有助于施用并促进活性剂的稳定性。
根据本公开文本的药物组合物可以包含药学上可接受的无毒无菌载体，如生理盐水、无毒缓冲液、防腐剂等。TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂功能性片段的药学有效量是足以介导以下中的一种或多种的量：减少HBV感染细胞的HBeAg释放；减少HBV感染细胞中的pgRNA转录；以及刺激受感染细胞中的IFN药剂信号传导途径。当然，本公开文本的药物组合物可以单剂量或多剂量施用，以提供药学有效量的TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN药剂或IFN药剂的功能性片段。
与本公开文本的范围一致，TNFRSF激动剂(例如，针对TNFRSF成员的激动抗体、可溶性TNFRSF激动剂(包括但不限于其天然配体))或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或表达它们中任一种的核酸序列可以根据上述治疗方法以足以产生治疗效果的量向人或其他动物施用。TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或表达它们中任一种的核酸序列可以常规剂型向此类人或其他动物施用，所述常规剂型通过以下方式来制备：根据已知技术将TNFRSF激动剂(例如针对TNFRSF成员的激动抗体、可溶性TNFRSF激动剂(包括但不限于其天然配体))或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段，或表达它们中任一种的核酸序列与常规药学上可接受的载体或稀释剂组合。本领域技术人员将认识到，药学上可接受的载体或稀释剂的形式和特征取决于与其组合的活性成分的量，施用的途径和其他公知的变量。本领域技术人员将进一步认识到，可以证明包含本公开文本中描述的TNFRSF激动剂或其功能性片段、IFN或IFN的功能性片段或表达它们中任一种的核酸序列的一个或多个种类的混合剂是有效的。
应理解，本公开文本中描述的方法不限于本文公开的特定方法和实验条件，因为此类方法和条件可以变化。还应当理解，本文使用的术语是仅仅出于描述具体实施方案的目的，而不意图限制。
此外，除非另有说明，否则本文所述的实验使用本领域技术范围内的常规分子和细胞生物学和免疫学技术。此类技术是技术人员公知的，并且在文献中有充分的解释。参见例如，Ausubel等人编辑,Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,Inc.,纽约,纽约州(1987-2008)，包括所有增补本，Molecular Cloning:A LaboratoryManual(第四版)MR Green和J.Sambrook，以及Harlow等人,Antibodies:A LaboratoryManual,第14章,Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor(2013，第2版)。
除非另外定义，否则本文使用的科学和技术术语具有本领域普通技术人员通常所理解的含义。如果存在任何可能的歧义，本文提供的定义优先于任何字典或外部定义。除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，并且复数术语应包括单数。除非另有规定，否则“或”的使用意指“和/或”。术语“包括(including)”以及其他形式如“包括”(“includes”和“included”)的使用不是限制性的。
通常，本文所述的结合细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白质和核酸化学和杂交使用的术语是本领域公知且常用的。本文提供的方法和技术通常根据本领域公知并且如本说明书中引用和讨论的各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法进行，除非另有说明。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书如本领域通常实现或如本文所述进行。关于本文所述的分析化学、合成有机化学以及医药和药物化学的术语以及实验室程序和技术是本领域公知和常用的那些术语、实验室程序和技术。使用标准技术用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者的治疗。
本文提及或引用的文章、专利和专利申请的内容以及所有其他文件和电子可用信息通过引用以其全文并入于此，其程度如同每个单独的出版物被具体且单独地指出通过引用并入。申请人保有将来自任何此类文章、专利、专利申请或其他物理和电子文件的任何和所有材料和信息实际纳入本申请的权利。
虽然已经参考本发明的具体实施方案描述了本发明，但本领域技术人员应理解，在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下，使用本公开文本作为指导，可以进行各种改变并且可以替换等同物。虽然现已详细描述某些实施方案，但参照以下实施例将更清楚地理解所述实施方案，所述实施例仅出于说明目的而被包括，并且不打算具有限制性。
实施例I
细胞因子对HBV感染的协同控制
HBeAg释放
研究IFNβ和CD40L对原代肝细胞中的HBV感染的作用。将原代人肝细胞(PHH)细胞铺板在24孔板(约350 000个细胞/孔)的William’s E GlutaMAX培养基中，所述培养基中补充有10％胎牛血清(FCS)、胰岛素和氢化可的松+青霉素/链霉素。四小时后，冲洗细胞，并在第二天再次更换培养基。24小时后，在4％PEG 8000存在下，用1,000个病毒基因组当量(vge)/细胞感染细胞。感染后16小时，将细胞用PBS洗涤3次。感染后两天，将细胞保持不刺激，用IFNα(Pbl测定Science#11100-1，1000U/ml)、IFNβ(Pbl测定Science#1349872，100U/ml)、CD40L(Enzo#ALX-522-110，150ng/ml)或CD40L与IFNα或IFNβ的组合刺激。四天后，移除培养基，并在相同条件下再次刺激细胞。第二次刺激后两天，收集培养物上清液并保持在-80℃下。如制造商所述，使用ELISA测量细胞培养上清液中的HBV e抗原(HBeAg)水平，并且结果表示为中国国家单位(National Chinese Unit)(HBeAg CLIA 96T/K：CL0312-2Autobio)。
用作参考的IFNα使分泌的Hbe水平降低约60％。IFNβ更有效，并且使释放的Hbe减少85％。有趣的是，单独的CD40L活性不高，但增强了IFNα或IFNβ的作用。CD40L-IFNβ组合达到了95％抑制(图1A和图1B)。因此，IFNβ和CD40L的组合协同减少HBeAg释放。
pgRNA的转录
从cccDNA转录HBV前基因组RNA(pgRNA)，然后逆转录形成松弛的环状DNA(RcDNA)，使其衣壳化以形成新的病毒体。因此，pgRNA是病毒生命周期中的关键中间体。
在PHH细胞中评估IFNβ和CD40L对从cccDNA进行pgRNA转录的作用(图2A和图2B)。
感染后六天，将PHH细胞保持不受刺激，用IFNb(pbl测定#13498723，100U/ml)、CD40L(Enzo#ALX-522-110，150ng/ml)或CD40L和IFNb的组合刺激。
刺激后两天，根据制造商的说明，使用
96RNA试剂盒(Macherey-Nagel，740741.4)从感染HBV的PHH细胞中提取总RNA。在逆转录后使用
VILOTM cDNA合成试剂盒(Invitrogen)合成并获得cDNA模板。使用
快速通用PCR主混合物(Applied Biosystems)使用以下引物和探针进行pgRNA的qPCR：(正向：GCCTTAGAGTCTCCTCTGAGCA(SEQ ID NO:34)和反向：GAGGGAGTTCTTCTTCTCTAGG(SEQ ID NO:35)以及作为探针的AGTGTGGATTCGCACTCCTCTCCAGC(SEQ ID NO:36))。选择GUSB基因(Hs99999908-m1)作为所述测定的管家基因。在QuantStudio 12K Flex(AppliedBiosystems)上运行板。结果以倍数变化RQ[2-ΔΔCt]表示。RQ：相对定量值。
结果表明，用IFNβ治疗2天足以将细胞中pgRNA的量减少64％。在这些条件下，单独的CD40L无效。但是，令人惊讶的是，CD40L增强IFNβ的作用，达到88％抑制。
对信号传导途径的协同作用
在PHH细胞中确定IFNβ和CD40L对信号传导途径的作用(图3A和图3B)。通过检测CXCL10生物标记物释放来测定对IFN信号传导途径的作用(图3A)，并且通过检测IL8释放来测定对炎性途径的作用(图3B)。确定IFNβ和CD40L协同增强IFN途径中的信号传导，但不增强炎性途径中的信号传导。
用各种IFN测定其他TNF家族成员(图4A和图4B)。将HepaRG肝癌细胞接种在24孔板(约250,000个细胞/孔)的William’s E GlutaMAX培养基中，所述培养基补充有10％FCS、胰岛素和氢化可的松+P/S。六小时后，冲洗细胞并保持不受刺激或用指定的细胞因子(TWEAK(Enzo，ALX-522-021，最终浓度为1μg/ml)+小鼠单克隆抗-Flag-M2(Sigma，F-3165，最终浓度为1μg/ml)、LTα3(Enzo，ALX-522-034，最终浓度1μg/ml)、CD40L(Enzo#ALX-522-110，最终浓度150ng/ml)、CD137L(Enzo，ALX-522-111，最终浓度1μg/ml)；IFNβ-1a(pbl测定#13498723，最终浓度100U/ml)、IFNγ(Millipore#IF-002，20ng/ml)、IL28和IL29 R&D)刺激过夜。然后收集上清液，并如制造商(BioLegend 439904)所述，通过ELISA对CXCL10进行定量。
结果表明，像CD40L、LTα3和Tweak(而不是4 1-BB/CD137L，其是阴性对照，因为其受体未表达)不仅协同增强由IFNβ诱导的CXCL10释放，而且协同增强由II型干扰素(IFNγ)诱导的CXCL10释放(图4A)。此外，用CD40L和III型干扰素(IL28和IL29)对肝细胞进行共刺激也能够协同增强干扰素途径(图4B)。
总之，这些结果表明协同作用是由激活TNFRSF和IFN受体共有的途径所产生。
CD40可以不同方式，通过可溶性CD40L(三聚体形式-1μg/ml)、通过膜CD40L(其在此处用CD40L的六聚体形式模拟-1μg/ml)以及通过激动性抗CD40抗体(CP-870,893，Pfizer/Roche–1μg/ml)刺激。
为了了解是否可以诱导协同作用，将HepaRG细胞保持未刺激或用指示的细胞因子或抗体单独地或在IFNβ存在下刺激过夜。刺激过夜后收集上清液，并且如前所述，通过ELISA对CXCL10进行定量。
结果表明，除IFNβ外，没有刺激物能够作为单一药剂诱导CXCL10。但是，向三聚体CD40L、六聚体CD40L或激动性抗CD40抗体中添加IFNβ加强CXCL10释放(图5)。这些结果表明，激活CD40的几种机制导致IFNβ途径增强。
CD40L和IFNβ的协同作用可能对不同的信号传导途径具有不同的作用。将HepaRG肝癌细胞接种在24孔板(约250,000个细胞/孔)的William’s E GlutaMAX培养基中，所述培养基补充有10％FCS、胰岛素和氢化可的松++P/S。六小时后，冲洗细胞并将其保持不刺激或在存在或不存在IFNβ(100U/ml)的情况下用有效剂量的CD40L刺激。在刺激过夜后收集的上清液中通过ELISA对CXCL10和IL8和进行定量。如制造商所述，进行对CXCL10和IL8的定量。对于CXCL10：BioLegend 439904；对于IL8：Ready-Set ELISA人iL8：eBiosciences Ref 88-8086-88。
结果表明，从1ng/ml的CD40L开始，CD40L增强IFN途径(图6A)。有趣的是，CD40L以剂量依赖性方式诱导的IL8并未被IFNβ增强，而是被降低(图6B)。这些结果表明，用CD40L和IFNβ共刺激肝细胞协同增强IFN途径，同时减少炎性细胞因子IL8的释放。
进一步测定CD40L和IFNβ的协同作用，以确定协同作用是在mRNA水平下或是在翻译后水平下发生，以及所述组合是否还增强其他干扰素刺激的基因(CXCL10除外)。
为此，在HepaRG细胞中进行了RNAseq分析。用CD40L、IFNβ或两种细胞因子的组合以动力学方式刺激HepaRG细胞30分钟至24小时。收集细胞，将其洗涤并使其沉淀。通过添加QIAzol缓冲液来裂解细胞沉淀。用RNeasy试剂盒(Qiagen)提取RNA，用Xpose(ng/μl)定量并且通过Agilent生物分析器控制质量、完整性(RIN)。使用来自Illumina的TruSeq StrandedTotal RNA LT(具有Ribo-Zero Gold)试剂盒生产文库，并使用NextSeq 500高输出试剂盒在NextSeq 500仪器上进行RNA测序。
CXCL10 mRNA的分析表明，其表达受IFNβ诱导，并在刺激后2小时开始被所述组合协同诱导(图7A)。有趣的是，对于其他干扰素刺激的基因例如CXCL9和CXCL11，也观察到了协同作用(图7C和图7D)。
CXCL8/IL8 mRNA的分析表明，它仅被CD40L诱导，并且所述组合降低了其表达(图7B)。对于CD40L诱导的其他趋化因子例如CXCL3或CCL20，也观察到了这种减少(图7E和7F)。
总之，这些结果证实，用CD40L和IFNβ共刺激肝细胞增强了IFN途径，而非CD40L诱导的炎性途径。
在PHH细胞中也观察到IFN途径的增强。将细胞铺板在96孔板(约350,000个细胞/孔)的William’s E GlutaMAX培养基中，所述培养基补充有10％FCS、胰岛素和氢化可的松+P/S。24小时后，冲洗细胞，更换培养基，并添加基质胶。第二天，在存在4％PEG 8000的情况下，用1,000个病毒基因组当量(vge)/细胞感染细胞或不感染。感染后16小时，将细胞用PBS洗涤3次，保持不刺激(NS)，用IFNβ(pbl测定#1349872，100U)、CD40L(Enzo#ALX-522-110，150ng/ml)或CD40L和IFNβ的组合刺激。3天后(d3)，收集培养基，并在相同条件下再次刺激细胞。第二次刺激后4天后(d7)，再次收集培养上清液，并通过AlphaLISA hCXCL10:PerkinElmer:AL259F评估CXCL10释放。
结果表明，IFNβ而非CD40L在原代肝细胞中诱导CXCL10，并且在一次或两次刺激后以及在HBV感染或未感染细胞中，与CD40L配体共刺激增强其释放(图8)。
除CD40L以外的TNF家族成员可与IFNβ协同作用。设计构建体以表达与人IgG1的Fc区融合的人Tweak或人LIGHT(分别为Ig-Tweak，SEQ ID NO:18和Ig-Light，SEQ ID NO.19)的细胞外部分。将这些融合物克隆到表达载体中。在HEK细胞中转染后，如前所述，收集上清液并将其用于刺激HepaRG细胞。作为对照，用空载体或用编码IFNβ的质粒转染细胞。过夜刺激后，收集上清液以用于CXCL10评估。结果表明，单独的IFNβ而非单独的LIGHT或TWEAK能够诱导CXCL10释放。当用IFNβ和TWEAK(图9A)或LIGHT(图9B)共刺激细胞时，增强此释放。这些结果还表明，此类组合也可在协同增强肝细胞中的抗HBV先天免疫应答中起重要作用。
为了生成用于进一步证明TNFR激动作用和IFN处理对HBV感染细胞的协同作用的蛋白质，产生了Ig-Tweak(SEQ ID NO:18)和Ig-Light(SEQ ID NO:19)。在蛋白A柱上纯化后，在天然表达受体LTbR和TweakR的A549双细胞(InvivoGen，目录号a549d-nfis)上以剂量作用评价这些蛋白质的活性。这些细胞被设计为使用QUANTI-BlueTM(SEAP检测试剂(QUANTI-BlueTM rep-qb1 InvivoGen))，通过对上清液中分泌的报告基因SEAP的活性进行定量来监控NFkB途径的激活。结果表明，两种分子均以剂量依赖性方式激活NFkB途径(图9C和图9D)。
然后，如前所述，在HBV感染的原代肝细胞上评价与IFNb组合的Ig-Tweak(SEQ IDNO:18)和Ig-Light(SEQ ID NO:19)蛋白。使细胞感染，保持不处理(NT)，用IFNb(100U)、Ig-Light(1μg/ml)或Ig-Tweak(1μg/ml)或用组合IFNb(100U)+Ig-Light(1μg/ml)或IFNb(100U)+Ig-Tweak(1μg/ml)处理。结果表明，Ig-ak(图9E)和Ig-Light(图9F)均能够增强IFNb诱导的抗病毒作用。
研究使用单一分子来引发CD40L和IFNβ组合的协同作用。为此，设计三种Duokine并将其克隆到pCDNA3中。通过包含人IgG1的Fc部分的接头(IFNβ-Ig-CD40L或SEQ ID NO:9)、使用Gly-Ser-Thr接头(IFNβ-CD40L或SEQ ID NO:10)或包含亮氨酸拉链结构域的接头(IFNβ-LZ-CD40L或SEQ ID NO:11)，将IFNβ(位于N端)连接至CD40L的细胞外结构域(C端)(参见表3)。将构建体在HEK细胞中瞬时转染。转染后48小时，收集上清液并将其添加到HEK-BlueTM CD40L细胞(InvivoGen目录号：hkb-cd40)或HEK-BlueTM IFN-α/β细胞(InvivoGen，目录号：hkb-ifnab)。这些细胞经过专门设计，以分别监测CD40L对NFκB途径的激活或I型IFN诱导的JAK-STAT途径的激活。刺激后，检测报告基因SEAP的表达(在NFκB或JAK/STAT启动子的控制下)。SEAP分泌在上清液中，并使用QUANTI-BlueTM(SEAP检测试剂(QUANTI-BlueTM rep-qb1 InvivoGen))进行检测。
结果表明，HEK-Blue-CD40L报告细胞(图10A)而非HEK-Blue-IFN报告细胞(图10B)能够响应于重组CD40L。仅HEK-Blue-IFN报告细胞响应于IFNβ。有趣的是，用从HEK转染的细胞收集的培养基刺激这些细胞表明，所有Duokine都能刺激两种报告细胞。作为阴性对照，来自用空载体转染的细胞的上清液没有刺激细胞，并且来自用IFNβ转染的细胞的上清液仅能刺激HEK-Blue-IFN报告细胞。
结果表明，不论哪种接头，CD40L-IFNβ融合物仍对其相应受体具有活性。
然后在非报告肝细胞(HepaRG)细胞上测试Duokine分子，并评估CXCL10释放。为此并且除上述三种Duokine外，还设计了两种其他Duokine并将其克隆到pCDNA3中。通过包含人IgG1 Fc部分的接头将IFNβ(在N端)连接至TWEAK的细胞外结构域(C端)(IFNβ-Ig-TWEAK或SEQ ID NO:12)，通过包含人IgG1 Fc部分的接头(IFNβ-Ig-LIGHT或SEQ ID NO:15)或通过包含亮氨酸拉链的接头(IFNβ-LZ-LIGHT或SEQ ID NO:17)将IFNβ(在N端)连接至LIGHT的细胞外结构域(C端)(参见表3)。将从HEK转染的细胞收集的上清液用于刺激肝细胞(HepaRG)细胞。刺激过夜后，通过ELISA评估上清液中的CXCL10。结果表明，所有Duokine均能够诱导CXCL10释放，并且与使用单独IFNβ的刺激相比，这种诱导得到增强(图11A、图12和图13)。有趣的是，当在中和CD40L作用的抗CD40L拮抗性抗体(mabg-h40l-3，InvivoGen)存在下进行刺激时，CXCL10释放极大地降低(图11B)。这证实Duokine内的CD40L仍能够与IFNβ协同作用以增强IFN途径。
为了评估包含I型干扰素和CD40L的融合蛋白的作用，构建编码通过包含hu-IgG1-Fc部分的接头连接的IFNa(氨基端)和CD40L(羧基端)的duokine(IFNa-huIgG1-hu-CD40L；SEQ ID NO:25)。将HEK细胞瞬时转染，并在蛋白A柱上纯化蛋白质。在HEK-BlueTM CD40L细胞(图19A；InvivoGen目录号：hkb-cd40)或HEK-BlueTM IFN-α/β细胞(图19B；InvivoGen目录号：hkb-ifnab)上评价蛋白质，如前所述。结果表明，Duokine能够在CD40(图19A)和IFNa/b(图19B)报告细胞中以剂量依赖性方式诱导SEAP释放，表明CD40L和IFN结构域均具有活性。
然后，如前所述，在被HBV感染的原代人肝细胞上评价duokine(图19C)。使细胞感染，然后将其保持不处理(NS)，用重组IFNa(pbl测定#11100-1,100U)、megaCD40L(Enzo#ALX-522-110，100ng/ml)或用两种分子的组合进行处理。平行地，以剂量作用用duokine处理细胞。结果显示，CD40L增强IFNa诱导的抗病毒作用，并且duokine对HBV感染具有高度活性，因为它以剂量依赖性方式降低Hbe释放，IC50为约3ng/ml。
实施例II
人肝嵌合小鼠模型
由于HBV感染和复制的唯一天然细胞靶标是人肝细胞，因此人肝嵌合小鼠模型适用于研究体内HBV感染以及评价直接抗病毒和肝细胞定向宿主因子(Dandri等人BestPract Res Clin Gastroenterol.2017年六月；31(3):273-279)。这种模型基于两个要求：1)内源性鼠肝细胞受损以为移植的肝细胞重建小鼠肝脏产生空间；以及2)消除宿主免疫应答以允许移植的异种肝细胞存活。
已经开发出各种嵌合小鼠来研究HBV发病机理和潜在疗法(Giersch K等人SciRep.2017年六月16日；7(1):3757；Tsuge等人Virus Antimicrob Agents Chemother.2017年六月；61(6):e00183-17；Bissig等人J Clin Invest.2010年三月；120(3):924-30；以及Kosaka等人Biochem Biophys Res Commun.2013年十一月8日；441(1):230-5)。移植有人肝细胞的uPA-SCID小鼠是可商购获得的(KMT Hepatech,Inc.，埃德蒙顿，加拿大)。
人肝嵌合小鼠模型可用于测试本文所述的IFNβ-CD40L。人肝嵌合小鼠模型具有若干可用特征。uPa-SCID小鼠具有高度免疫缺陷，小鼠尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)基因在小鼠白蛋白增强子/启动子的控制下(Giersch K等人和Tsuge等人)。FRG小鼠具有高度免疫缺陷，具有延胡索酰乙酰乙酸水解酶敲除Fah-/-(Bissig等人)。TK-NOG小鼠具有高度免疫缺陷，并在其肝脏中表达由小鼠白蛋白增强子/启动子驱动的单纯疱疹病毒1胸苷激酶(HSVtk)转基因。
在uPA-SCID小鼠出生后不久，或在鼠肝细胞损伤诱导(对于FRG小鼠，基于2-(2-硝基-4-三氟-甲基-苯甲酰基)-1,3环己二酮(NTBC)的清除，或者对于TK-NOG小鼠，更昔洛韦注射)后，进行原代人肝细胞的脾内注射用于人肝细胞肝再生。
嵌合性水平可通过确定人血清白蛋白(HSA)和/或人α1-抗胰蛋白酶(hAAT)水平来监测，所述水平的范围根据模型和个体间差异可为20％到70％。6至8周时间段后，可以用天然HBV感染小鼠，并进行完整病毒生命周期，包括进入、cccDNA形成以及病毒的复制和传播。由于这些小鼠的免疫缺陷状态，这种人肝嵌合体小鼠模型还允许使用各种病毒读数(包括cccDNA水平和调节)研究人用药物的直接抗病毒作用。
实施例III
嵌合AAV/HBV病毒模型
通过测定血清中的CXCL10释放，在体内小鼠模型中确定CD40L与IFNβ的组合的协同作用。为此，向C57/B6J小鼠注射106单位的鼠类IFNβ(8234-MB/CF)、100μg CD40L(ALX-52-120-000)或它们的组合。向一组小鼠注射50μg LPS作为阳性对照。这表明，当在未感染小鼠体内施用时，所述组合协同增强了IFN途径，如CXCL10血浆水平所示(图16)。CXCL10将用作药效学生物标记物来限定最佳治疗方案(施用的剂量和频率)。
AAV/HBV转导的小鼠是基于病毒载体介导的HBV进入鼠肝细胞中。将AAV病毒颗粒静脉内注射到具有免疫能力的小鼠体内，并且所述颗粒将HBV基因组直接递送到肝细胞中。许多感染的细胞表达HBV c抗原(HBc)，这反映这些细胞中发生了HBV复制。这种病毒复制在感染后早期进行，如血浆中的HBV e和s抗原水平(HBe和HBs)所证明，所述抗原水平在感染后21天已经较高并且处于平台期。循环HBV DNA的水平也很高，这反映病毒体的产生。这种高且稳定的复制阶段重演了在患者中观察到的免疫耐受阶段(Dion等人(2013)JVirol.May；87(10):5554-63以及Yang等人(2014)Cell Mol Immunol.Jan；11(1):71-8)。最近的工作表明，此病毒模型中存在所有病毒中间体，包括cccDNA产生，如DNA印迹法所示(Lucifora等人(2017)Antiviral Res.Sep；145:14-19)。此cccDNA的定量仍很困难，并且方案仍在优化中。同上。
本文所述的具有免疫能力的AAV/HBV模型允许研究IFNβ-CD40L组合的免疫调节和直接抗病毒作用二者。在该情况下，读数将是病毒参数以及特定HBV Ag-抗体产量，与临床使用的参数相同。
标准方案如下。所有体内实验均根据法国和欧洲有关动物福利的规定和公共卫生服务局的建议进行，并且所有方案均已由赛诺菲机构动物护理委员会(institutionalanimal care committee of Sanofi)审查和批准。所有动物均被饲养在法国马西-莱托勒的Sanofi的动物设施的无特定病原体的环境中。八周龄C57BL6/J雌性小鼠(CharlesRiver，Les Oncins,圣日耳曼-努埃尔，法国)接受5x1010个病毒基因组小鼠的AAV8-HBV病毒颗粒的静脉内注射。注射后28天后，使用HBs-Ag血浆水平将小鼠随机分配到不同治疗群组中。在治疗期期间，每周进行血液采集用于循环病毒参数监测(HBV-Ag和DNA)。(参见图14A-图14B和图15。)治疗期后，通常在2至4周之间，对小鼠实施安乐死，收集血液并将肝碎片在液氮中速冻，并在进一步处理前保持在-80℃下。通过ELISA(AutoBio试剂盒，根据制造商的说明(AutoBio，中国))评价HBV抗原水平(HBs、Hbe)。使用PCR评价血清和肝脏中的病毒载量。通过qRT-PCR测量肝脏中的HBV pgRNA水平。如Lucifora等人所述，从肝脏活检进行DNA提取，然后进行三重消化(Xma1、Xho1和T5酶)，将允许进行cccDNA定量。
根据模型AAV/HBV或HuHep小鼠，在用HBV感染小鼠后四到八周，将每周用媒介物、IFNβ、CD40L(或激动抗体抗CD40、FKG450)和两种药剂的组合治疗小鼠3次。每周采集一次血液样品，并且在终点时将采集血液和肝脏组织。将评估不同读数，所述读数包括HBV参数(循环Hbe Ag和Hbs Ag、肝脏中的cccDNA和pgRNA)，以及宿主参数(包括细胞因子释放、血清转化和肝酶(例如AST和ALT))。
实施例IV
嵌合AAV/HBV病毒模型
为了进行体内实验，生成与长期治疗相容的鼠类工具。设计mIFNb-Fc-mIgG1分子(SEQ ID NO:20)和mIgG1-Fc-mCD40L(SEQ ID NO:21)以及Fc-mIgG1(SEQ ID NO:22)分子，并将其克隆到表达载体中。在瞬时过表达后，使用蛋白A柱纯化蛋白质，然后在报告细胞上以剂量依赖性方式进行测试以证明其活性。在RAW-DualTM IRF(IFN途径)和MIP-2(NF-kB)报告小鼠巨噬细胞(Invivogen，目录号rawd-ismip)上测试mIFNb-Fc-mIgG1。在刺激后，检测报告基因lucia的表达(在JAK/STAT启动子的控制下)。Lucia分泌在上清液中，并使用QUANTI-lucTM(lucia检测试剂(QUANTI-LucTM rep-qlc1，InvivoGen))进行检测。结果表明，mIFNb-Fc-mIgG1具有活性并且以剂量依赖性方式诱导IRF途径激活(图17A)。如先前所述，在HEK-Blue-CD40细胞上测试Fc-mIgG1-mCD40L分子。结果表明，Fc-mIgG1-mCD40L具有活性并且以剂量依赖性方式诱导SEAP释放(图17B)。
为了证明它们各自的生物利用度，IP注射0.84μg mIFNb-Fc-mIgG1和30μg Fc-mIgG1-mCD40L，并在不同时间点采集血液样品。使用ELISA试剂盒根据制造商的说明(Verikine Mouse IFNb Elisa试剂盒，42400-1)对循环mIFNb-Fc-mIgG1进行定量。对于Fc- mIgG1-mCD40L的定量：将96孔板在4℃下用100μl在碳酸钠(0.05M，pH＝9.6，C-3041，Sigma)中的0.1μg/ml重组小鼠CD40/TNFRSF5 Fc嵌合体蛋白涂覆过夜，所述嵌合体蛋白由与人IgG1的Fc部分融合的鼠CD40细胞外结构域组成(rmCD40-Fc；215-CD-050，R&D Systems)。在通过翻转排空后，然后将板在37℃下与PBS-0.05％Tween20–1％牛奶一起孵育1小时，然后用PBS-0.05％Tween20洗涤。然后将样品和对照(100μl的1/10稀释液)在37℃下孵育90分钟，然后进行3次洗涤(PBS-0.05％Tween20)，并与第二抗小鼠IgG1(1/20 000，ab97240，Abcam)抗体(在PBS-0.05％Tween20–1％牛奶中)一起孵育。用PBS-0.05％Tween2洗涤3次后，添加TMB(四甲基联苯胺)，并将板在黑暗中孵育20分钟。通过添加1N HCl终止反应。使用Ensight(Perkin Elmer)在450-650nm下读取板。
药代动力学分析表明，施用后，mIFNb-Fc-mIgG1分子(图17C)和mIgG1-Fc-mCD40L(图17D)均在血液中循环至少6h。在施用后，两种分子以可检测水平循环至少6h(图17C和图17D)。
对于体内评价，小鼠接受了5.10^10个基因组当量/小鼠的AAV8-HBV病毒颗粒的静脉内注射，或接受PBS的静脉内注射作为对照用于未感染动物。注射后14天(dpi)后，使用外周血病毒参数(HBV DNA和抗原)水平，将小鼠随机分到不同的治疗群组。创建五个组，未感染组共12只小鼠，并且在感染组中每种治疗共18只小鼠，如下所示：未感染_Fc-mIgG1(45μg/kg)；AAV/HBV_Fc-mIgG1(45μg/kg)；AAV/HBV_Fc-mIgG1(0.25μg/kg)；AAV/HBV_Fc-mIgG1-mCD40L(45μg/kg)；AAV/HBV_Combi(mIFN-Fc-mIgG1(0.25μg/kg)+Fc-mIgG1-mCD40L(45μg/kg))。每周两次通过腹膜内注射(10mL/kg)给予治疗。在治疗2周和4周后，分别在28和42dpi，对每组的一些小鼠实施安乐死并收集血液、肝脏和脾脏。将血清、血浆和肝碎片在液氮中速冻，并在进一步处理前保持在-80℃下。通过ELISA(根据制造商的说明，Autobio试剂盒(AutoBio，China))评价HBV抗原水平(Hbe-Ag)。使用ddPCR技术评价血清和肝脏中的病毒载量。通过qRT-PCR测量肝脏中的HBV pgRNA水平。
AAV/HBV病毒颗粒注射可导致高且稳定的HBV病毒表达，如追踪外周血Hbe-Ag和HBV DNA水平(图18B和图18C)以及肝脏组织中的HBV核酸(HBV DNA和pgRNA–图18D和图18E)所示。
每周两次单独给予的mIFN-Fc-mIgG1和Fc-mIgG1-mCD40L降低了外周血和肝脏组织中的HBV DNA水平(图18C和图18D)。没有检测到单独的这些分子对病毒蛋白HBe-Ag或HBVpgRNA水平的作用(图18B和图18E)。
mIFN-Fc-mIgG1和Fc-mIgG1-mCD40L的组合显示出对病毒载量读数的协同降低作用，如外周血和肝组织HBV DNA的强烈降低所显示(图18C和图18D)。另外，所述组合实现了Hbe-Ag分泌和pgRNA表达的下降(图18B和图18E)。
等同物
在不脱离本公开文本的精神或本质属性的情况下，本公开文本可以以其他特定形式实施。因此，前述实施方案在所有方面都应被认为是说明性的，而不是限制本公开文本。因此，本公开文本的范围由所附权利要求书而不是由前面的描述指示，并且因此意图将落入权利要求的等同物的含义和范围内的所有改变都包括在本文中。
序列表
<110> 赛诺菲
依沃特国际有限公司
<120> 用于治疗乙型肝炎病毒感染的组合疗法
<130> PR84187/MGJ
<150> EP18305675
<151> 2018-06-01
<160> 36
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 187
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IFNβ
<400> 1
Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg
20 25 30
Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg
35 40 45
Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu
50 55 60
Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile
65 70 75 80
Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val
100 105 110
Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu
115 120 125
Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys
130 135 140
Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser
145 150 155 160
His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr
165 170 175
Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn
180 185
<210> 2
<211> 149
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> CD40L可溶形式
<400> 2
Met Gln Lys Gly Asp Gln Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser
1 5 10 15
Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly
20 25 30
Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln
35 40 45
Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr
50 55 60
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser
65 70 75 80
Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala
85 90 95
Ala Asn Thr His Ser Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His
100 105 110
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
115 120 125
Val Thr Asp Pro Ser Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe
130 135 140
Gly Leu Leu Lys Leu
145
<210> 3
<211> 154
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> TWEAK可溶形式
<400> 3
Met Lys Gly Arg Lys Thr Arg Ala Arg Arg Ala Ile Ala Ala His Tyr
1 5 10 15
Glu Val His Pro Arg Pro Gly Gln Asp Gly Ala Gln Ala Gly Val Asp
20 25 30
Gly Thr Val Ser Gly Trp Glu Glu Ala Arg Ile Asn Ser Ser Ser Pro
35 40 45
Leu Arg Tyr Asn Arg Gln Ile Gly Glu Phe Ile Val Thr Arg Ala Gly
50 55 60
Leu Tyr Tyr Leu Tyr Cys Gln Val His Phe Asp Glu Gly Lys Ala Val
65 70 75 80
Tyr Leu Lys Leu Asp Leu Leu Val Asp Gly Val Leu Ala Leu Arg Cys
85 90 95
Leu Glu Glu Phe Ser Ala Thr Ala Ala Ser Ser Leu Gly Pro Gln Leu
100 105 110
Arg Leu Cys Gln Val Ser Gly Leu Leu Ala Leu Arg Pro Gly Ser Ser
115 120 125
Leu Arg Ile Arg Thr Leu Pro Trp Ala His Leu Lys Ala Ala Pro Phe
130 135 140
Leu Thr Tyr Phe Gly Leu Phe Gln Val His
145 150
<210> 4
<211> 167
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> LIGHT可溶形式
<400> 4
Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser
1 5 10 15
His Glu Val Asn Pro Ala Ala His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu
20 25 30
Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala
35 40 45
Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys
50 55 60
Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly
65 70 75 80
Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg
85 90 95
Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser
100 105 110
Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser
115 120 125
Phe Leu Gly Gly Val Val His Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val
130 135 140
Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser
145 150 155 160
Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val
165
<210> 5
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 肽接头IgG1 Fc结构域
<400> 5
Asp Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
1 5 10 15
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Pro Gly Lys
225
<210> 6
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 肽Gly-Ser-Thr接头
<400> 6
Ser Gly Gly Thr Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser
1 5 10
<210> 7
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 肽Gly-Ser-Thr接头
<400> 7
Ser Gly Gly Thr Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Thr
1 5 10
<210> 8
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 并入多聚化亮氨酸拉链结构域的肽接头
<400> 8
Val Ser Ser Ile Glu Lys Lys Ile Glu Glu Ile Thr Ser Gln Ile Ile
1 5 10 15
Gln Ile Ser Asn Glu Ile Thr Leu Ile Arg Asn Glu Ile Ala Gln Ile
20 25 30
Lys Gln
<210> 9
<211> 591
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IFNβ-IgG1 FC-CD40L
<400> 9
Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg
20 25 30
Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg
35 40 45
Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu
50 55 60
Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile
65 70 75 80
Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val
100 105 110
Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu
115 120 125
Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys
130 135 140
Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser
145 150 155 160
His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr
165 170 175
Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Gly Gly Thr Ser
180 185 190
Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
195 200 205
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
210 215 220
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
225 230 235 240
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
245 250 255
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
260 265 270
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
275 280 285
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
290 295 300
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
305 310 315 320
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
325 330 335
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
340 345 350
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
355 360 365
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
370 375 380
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
385 390 395 400
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
405 410 415
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser Gly Gly Thr
420 425 430
Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Thr Met Gln Lys Gly Asp Gln
435 440 445
Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr
450 455 460
Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn
465 470 475 480
Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln
485 490 495
Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu
500 505 510
Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro
515 520 525
Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser
530 535 540
Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu
545 550 555 560
Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln
565 570 575
Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
580 585 590
<210> 10
<211> 350
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IFNβ-接头-CD40L
<400> 10
Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg
20 25 30
Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg
35 40 45
Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu
50 55 60
Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile
65 70 75 80
Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val
100 105 110
Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu
115 120 125
Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys
130 135 140
Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser
145 150 155 160
His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr
165 170 175
Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Gly Gly Thr Ser
180 185 190
Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Thr Met Gln Lys Gly Asp Gln Asn
195 200 205
Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys Thr Thr
210 215 220
Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser Asn Asn
225 230 235 240
Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg Gln Gly
245 250 255
Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Ala
260 265 270
Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser Pro Gly
275 280 285
Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ala
290 295 300
Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu
305 310 315 320
Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser Gln Val
325 330 335
Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
340 345 350
<210> 11
<211> 384
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IFNβ-LZ-CD40L
<400> 11
Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg
20 25 30
Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg
35 40 45
Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu
50 55 60
Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile
65 70 75 80
Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val
100 105 110
Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu
115 120 125
Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys
130 135 140
Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser
145 150 155 160
His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr
165 170 175
Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Gly Gly Thr Ser
180 185 190
Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Thr Val Ser Ser Ile Glu Lys Lys
195 200 205
Ile Glu Glu Ile Thr Ser Gln Ile Ile Gln Ile Ser Asn Glu Ile Thr
210 215 220
Leu Ile Arg Asn Glu Ile Ala Gln Ile Lys Gln Met Gln Lys Gly Asp
225 230 235 240
Gln Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys
245 250 255
Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser
260 265 270
Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg
275 280 285
Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg
290 295 300
Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser
305 310 315 320
Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser
325 330 335
Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe
340 345 350
Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser
355 360 365
Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
370 375 380
<210> 12
<211> 596
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IFNβ-IgG1 FC-TWEAK
<400> 12
Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg
20 25 30
Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg
35 40 45
Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu
50 55 60
Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile
65 70 75 80
Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val
100 105 110
Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu
115 120 125
Lys Glu Asp Phe Thr Arg Gly Lys Leu Met Ser Ser Leu His Leu Lys
130 135 140
Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser
145 150 155 160
His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr
165 170 175
Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Gly Gly Thr Ser
180 185 190
Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
195 200 205
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
210 215 220
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
225 230 235 240
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
245 250 255
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
260 265 270
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
275 280 285
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
290 295 300
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
305 310 315 320
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
325 330 335
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
340 345 350
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
355 360 365
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
370 375 380
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
385 390 395 400
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
405 410 415
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420 425 430
Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Thr Met Lys Gly Arg Lys Thr
435 440 445
Arg Ala Arg Arg Ala Ile Ala Ala His Tyr Glu Val His Pro Arg Pro
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465 470 475 480
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485 490 495
Ile Gly Glu Phe Ile Val Thr Arg Ala Gly Leu Tyr Tyr Leu Tyr Cys
500 505 510
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515 520 525
Leu Val Asp Gly Val Leu Ala Leu Arg Cys Leu Glu Glu Phe Ser Ala
530 535 540
Thr Ala Ala Ser Ser Leu Gly Pro Gln Leu Arg Leu Cys Gln Val Ser
545 550 555 560
Gly Leu Leu Ala Leu Arg Pro Gly Ser Ser Leu Arg Ile Arg Thr Leu
565 570 575
Pro Trp Ala His Leu Lys Ala Ala Pro Phe Leu Thr Tyr Phe Gly Leu
580 585 590
Phe Gln Val His
595
<210> 13
<211> 355
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IFNβ-接头-TWEAK
<400> 13
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1 5 10 15
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20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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130 135 140
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145 150 155 160
His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr
165 170 175
Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Gly Gly Thr Ser
180 185 190
Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Thr Met Lys Gly Arg Lys Thr Arg
195 200 205
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210 215 220
Gln Asp Gly Ala Gln Ala Gly Val Asp Gly Thr Val Ser Gly Trp Glu
225 230 235 240
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245 250 255
Gly Glu Phe Ile Val Thr Arg Ala Gly Leu Tyr Tyr Leu Tyr Cys Gln
260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
Ala Ala Ser Ser Leu Gly Pro Gln Leu Arg Leu Cys Gln Val Ser Gly
305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
Gln Val His
355
<210> 14
<211> 389
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IFNβ-LZ-TWEAK
<400> 14
Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg
20 25 30
Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg
35 40 45
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50 55 60
Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile
65 70 75 80
Tyr Glu Met Leu Gln Asn Ile Phe Ala Ile Phe Arg Gln Asp Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val
100 105 110
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130 135 140
Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser
145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Leu Ile Arg Asn Glu Ile Ala Gln Ile Lys Gln Met Lys Gly Arg Lys
225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Leu Leu Val Asp Gly Val Leu Ala Leu Arg Cys Leu Glu Glu Phe Ser
325 330 335
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340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Leu Phe Gln Val His
385
<210> 15
<211> 609
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IFNβ-IgG1 FC-LIGHT
<400> 15
Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg
20 25 30
Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg
35 40 45
Leu Glu Tyr Cys Leu Lys Asp Arg Met Asn Phe Asp Ile Pro Glu Glu
50 55 60
Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile
65 70 75 80
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85 90 95
Ser Thr Gly Trp Asn Glu Thr Ile Val Glu Asn Leu Leu Ala Asn Val
100 105 110
Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu
115 120 125
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130 135 140
Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser
145 150 155 160
His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr
165 170 175
Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Gly Gly Thr Ser
180 185 190
Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
195 200 205
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210 215 220
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
225 230 235 240
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
245 250 255
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
260 265 270
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
325 330 335
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
340 345 350
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
355 360 365
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
370 375 380
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Thr Asp Gly Pro Ala Gly Ser
435 440 445
Trp Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser His Glu Val Asn Pro Ala
450 455 460
Ala His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro
465 470 475 480
Leu Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser
485 490 495
Tyr His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile
500 505 510
Tyr Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala
515 520 525
Ser Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu
530 535 540
Glu Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr
545 550 555 560
Ser Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val
565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
Val
<210> 16
<211> 368
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IFNβ-接头-LIGHT
<400> 16
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225 230 235 240
Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser
305 310 315 320
Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val His
325 330 335
Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu
340 345 350
Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val
355 360 365
<210> 17
<211> 402
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 人IFNβ-LZ-LIGHT
<400> 17
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1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Met Ser Tyr Asn Leu Leu Gly Phe Leu Gln Arg
20 25 30
Ser Ser Asn Phe Gln Cys Gln Lys Leu Leu Trp Gln Leu Asn Gly Arg
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50 55 60
Ile Lys Gln Leu Gln Gln Phe Gln Lys Glu Asp Ala Ala Leu Thr Ile
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Tyr His Gln Ile Asn His Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Leu Glu
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Arg Tyr Tyr Gly Arg Ile Leu His Tyr Leu Lys Ala Lys Glu Tyr Ser
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His Cys Ala Trp Thr Ile Val Arg Val Glu Ile Leu Arg Asn Phe Tyr
165 170 175
Phe Ile Asn Arg Leu Thr Gly Tyr Leu Arg Asn Ser Gly Gly Thr Ser
180 185 190
Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Thr Val Ser Ser Ile Glu Lys Lys
195 200 205
Ile Glu Glu Ile Thr Ser Gln Ile Ile Gln Ile Ser Asn Glu Ile Thr
210 215 220
Leu Ile Arg Asn Glu Ile Ala Gln Ile Lys Gln Asp Gly Pro Ala Gly
225 230 235 240
Ser Trp Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser His Glu Val Asn Pro
245 250 255
Ala Ala His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly
260 265 270
Pro Leu Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu
275 280 285
Ser Tyr His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr
290 295 300
Ile Tyr Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu
305 310 315 320
Ala Ser Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro
325 330 335
Glu Glu Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala
340 345 350
Thr Ser Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val
355 360 365
Val His Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu
370 375 380
Arg Leu Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe
385 390 395 400
Met Val
<210> 18
<211> 430
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> huIgG1-Fc-tweak
<400> 18
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1 5 10 15
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50 55 60
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Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
130 135 140
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Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
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195 200 205
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340 345 350
Gly Lys Ala Val Tyr Leu Lys Leu Asp Leu Leu Val Asp Gly Val Leu
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Ala Ala Pro Phe Leu Thr Tyr Phe Gly Leu Phe Gln Val His
420 425 430
<210> 19
<211> 441
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> huIgG1-Fc-Light
<400> 19
Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Ser Gly Gly Thr Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr
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Gly Ser Asp Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
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100 105 110
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180 185 190
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
195 200 205
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
210 215 220
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
225 230 235 240
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
245 250 255
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Ser Gly Gly Thr Ser Gly Ser Thr Ser Gly
260 265 270
Thr Gly Ser Thr Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp Glu Gln Leu Ile Gln
275 280 285
Glu Arg Arg Ser His Glu Val Asn Pro Ala Ala His Gly Ala Asn Ser
290 295 300
Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly
305 310 315 320
Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr His Asp Gly Ala Leu Val Val
325 330 335
Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly
340 345 350
Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr
355 360 365
Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln
370 375 380
Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp
385 390 395 400
Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val His Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val
405 410 415
Val Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr
420 425 430
Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val
435 440
<210> 20
<211> 419
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> mIFNb_Fc-mIgG1
<400> 20
Met Asn Asn Arg Trp Ile Leu His Ala Ala Phe Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Ile Asn Tyr Lys Gln Leu Gln Leu Gln Glu Arg
20 25 30
Thr Asn Ile Arg Lys Cys Gln Glu Leu Leu Glu Gln Leu Asn Gly Lys
35 40 45
Ile Asn Leu Thr Tyr Arg Ala Asp Phe Lys Ile Pro Met Glu Met Thr
50 55 60
Glu Lys Met Gln Lys Ser Tyr Thr Ala Phe Ala Ile Gln Glu Met Leu
65 70 75 80
Gln Asn Val Phe Leu Val Phe Arg Asn Asn Phe Ser Ser Thr Gly Trp
85 90 95
Asn Glu Thr Ile Val Val Arg Leu Leu Asp Glu Leu His Gln Gln Thr
100 105 110
Val Phe Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Gln Glu Glu Arg Leu Thr
115 120 125
Trp Glu Met Ser Ser Thr Ala Leu His Leu Lys Ser Tyr Tyr Trp Arg
130 135 140
Val Gln Arg Tyr Leu Lys Leu Met Lys Tyr Asn Ser Tyr Ala Trp Met
145 150 155 160
Val Val Arg Ala Glu Ile Phe Arg Asn Phe Leu Ile Ile Arg Arg Leu
165 170 175
Thr Arg Asn Phe Gln Asn Ser Gly Gly Thr Ser Gly Ser Thr Ser Gly
180 185 190
Thr Gly Ser Val Arg Ser Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro
195 200 205
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
210 215 220
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
225 230 235 240
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
245 250 255
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
260 265 270
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
275 280 285
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
290 295 300
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
305 310 315 320
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
325 330 335
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
340 345 350
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
355 360 365
Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
370 375 380
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
385 390 395 400
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
405 410 415
Ser Pro Gly
<210> 21
<211> 422
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Fc-mIgG1_mCD40L
<400> 21
Met Asn Asn Arg Trp Ile Leu His Ala Ala Phe Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Ser Gly Gly Thr Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr
20 25 30
Gly Ser Val Arg Ser Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu
35 40 45
Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr
50 55 60
Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys
65 70 75 80
Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val
85 90 95
His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe
100 105 110
Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
115 120 125
Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile
130 135 140
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val
145 150 155 160
Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser
165 170 175
Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu
180 185 190
Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro
195 200 205
Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val
210 215 220
Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu
225 230 235 240
His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser
245 250 255
Pro Gly Lys Ser Gly Gly Thr Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser
260 265 270
Thr Met Gln Arg Gly Asp Glu Asp Pro Gln Ile Ala Ala His Val Val
275 280 285
Ser Glu Ala Asn Ser Asn Ala Ala Ser Val Leu Gln Trp Ala Lys Lys
290 295 300
Gly Tyr Tyr Thr Met Lys Ser Asn Leu Val Met Leu Glu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Gln Leu Thr Val Lys Arg Glu Gly Leu Tyr Tyr Val Tyr Thr Gln Val
325 330 335
Thr Phe Cys Ser Asn Arg Glu Pro Ser Ser Gln Arg Pro Phe Ile Val
340 345 350
Gly Leu Trp Leu Lys Pro Ser Ser Gly Ser Glu Arg Ile Leu Leu Lys
355 360 365
Ala Ala Asn Thr His Ser Ser Ser Gln Leu Cys Glu Gln Gln Ser Val
370 375 380
His Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Ala Gly Ala Ser Val Phe Val
385 390 395 400
Asn Val Thr Glu Ala Ser Gln Val Ile His Arg Val Gly Phe Ser Ser
405 410 415
Phe Gly Leu Leu Lys Leu
420
<210> 22
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Fc-mIgG1
<400> 22
Met Asn Asn Arg Trp Ile Leu His Ala Ala Phe Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Ser Gly Gly Thr Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr
20 25 30
Gly Ser Val Arg Ser Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu
35 40 45
Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr
50 55 60
Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys
65 70 75 80
Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val
85 90 95
His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe
100 105 110
Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
115 120 125
Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile
130 135 140
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val
145 150 155 160
Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser
165 170 175
Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu
180 185 190
Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro
195 200 205
Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val
210 215 220
Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu
225 230 235 240
His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser
245 250 255
Pro Gly Lys
<210> 23
<211> 149
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> mCD40L可溶形式
<400> 23
Met Gln Arg Gly Asp Glu Asp Pro Gln Ile Ala Ala His Val Val Ser
1 5 10 15
Glu Ala Asn Ser Asn Ala Ala Ser Val Leu Gln Trp Ala Lys Lys Gly
20 25 30
Tyr Tyr Thr Met Lys Ser Asn Leu Val Met Leu Glu Asn Gly Lys Gln
35 40 45
Leu Thr Val Lys Arg Glu Gly Leu Tyr Tyr Val Tyr Thr Gln Val Thr
50 55 60
Phe Cys Ser Asn Arg Glu Pro Ser Ser Gln Arg Pro Phe Ile Val Gly
65 70 75 80
Leu Trp Leu Lys Pro Ser Ser Gly Ser Glu Arg Ile Leu Leu Lys Ala
85 90 95
Ala Asn Thr His Ser Ser Ser Gln Leu Cys Glu Gln Gln Ser Val His
100 105 110
Leu Gly Gly Val Phe Glu Leu Gln Ala Gly Ala Ser Val Phe Val Asn
115 120 125
Val Thr Glu Ala Ser Gln Val Ile His Arg Val Gly Phe Ser Ser Phe
130 135 140
Gly Leu Leu Lys Leu
145
<210> 24
<211> 182
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> mIFNb
<400> 24
Met Asn Asn Arg Trp Ile Leu His Ala Ala Phe Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser Ile Asn Tyr Lys Gln Leu Gln Leu Gln Glu Arg
20 25 30
Thr Asn Ile Arg Lys Cys Gln Glu Leu Leu Glu Gln Leu Asn Gly Lys
35 40 45
Ile Asn Leu Thr Tyr Arg Ala Asp Phe Lys Ile Pro Met Glu Met Thr
50 55 60
Glu Lys Met Gln Lys Ser Tyr Thr Ala Phe Ala Ile Gln Glu Met Leu
65 70 75 80
Gln Asn Val Phe Leu Val Phe Arg Asn Asn Phe Ser Ser Thr Gly Trp
85 90 95
Asn Glu Thr Ile Val Val Arg Leu Leu Asp Glu Leu His Gln Gln Thr
100 105 110
Val Phe Leu Lys Thr Val Leu Glu Glu Lys Gln Glu Glu Arg Leu Thr
115 120 125
Trp Glu Met Ser Ser Thr Ala Leu His Leu Lys Ser Tyr Tyr Trp Arg
130 135 140
Val Gln Arg Tyr Leu Lys Leu Met Lys Tyr Asn Ser Tyr Ala Trp Met
145 150 155 160
Val Val Arg Ala Glu Ile Phe Arg Asn Phe Leu Ile Ile Arg Arg Leu
165 170 175
Thr Arg Asn Phe Gln Asn
180
<210> 25
<211> 592
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IFNa-G4S-huIgG1-LN2-huCD40L
<400> 25
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu
20 25 30
Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser
35 40 45
Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu
50 55 60
Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His
65 70 75 80
Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser
85 90 95
Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr
100 105 110
Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val
115 120 125
Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys
130 135 140
Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro
145 150 155 160
Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu
165 170 175
Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu Gly Gly Gly Gly
180 185 190
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Lys Thr His Thr
195 200 205
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
210 215 220
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
225 230 235 240
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
245 250 255
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
260 265 270
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
275 280 285
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
290 295 300
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
305 310 315 320
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
325 330 335
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
340 345 350
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
355 360 365
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
370 375 380
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
385 390 395 400
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
405 410 415
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Ser
420 425 430
Pro Ala Pro Asp Pro Ala Pro Asp Pro Ser Gly Met Gln Lys Gly Asp
435 440 445
Gln Asn Pro Gln Ile Ala Ala His Val Ile Ser Glu Ala Ser Ser Lys
450 455 460
Thr Thr Ser Val Leu Gln Trp Ala Glu Lys Gly Tyr Tyr Thr Met Ser
465 470 475 480
Asn Asn Leu Val Thr Leu Glu Asn Gly Lys Gln Leu Thr Val Lys Arg
485 490 495
Gln Gly Leu Tyr Tyr Ile Tyr Ala Gln Val Thr Phe Cys Ser Asn Arg
500 505 510
Glu Ala Ser Ser Gln Ala Pro Phe Ile Ala Ser Leu Cys Leu Lys Ser
515 520 525
Pro Gly Arg Phe Glu Arg Ile Leu Leu Arg Ala Ala Asn Thr His Ser
530 535 540
Ser Ala Lys Pro Cys Gly Gln Gln Ser Ile His Leu Gly Gly Val Phe
545 550 555 560
Glu Leu Gln Pro Gly Ala Ser Val Phe Val Asn Val Thr Asp Pro Ser
565 570 575
Gln Val Ser His Gly Thr Gly Phe Thr Ser Phe Gly Leu Leu Lys Leu
580 585 590
<210> 26
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> Lz-Light
<400> 26
Met Ser Gly Gly Thr Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Thr Val
1 5 10 15
Ser Ser Ile Glu Lys Lys Ile Glu Glu Ile Thr Ser Gln Ile Ile Gln
20 25 30
Ile Ser Asn Glu Ile Thr Leu Ile Arg Asn Glu Ile Ala Gln Ile Lys
35 40 45
Gln Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg
50 55 60
Ser His Glu Val Asn Pro Ala Ala His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser
65 70 75 80
Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu
85 90 95
Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr
100 105 110
Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val
115 120 125
Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys
130 135 140
Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln
145 150 155 160
Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser
165 170 175
Ser Phe Leu Gly Gly Val Val His Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val
180 185 190
Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser
195 200 205
Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val
210 215
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 肽Gly-Ser-Thr接头
<400> 27
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 28
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 肽Gly-Ser-Thr接头
<400> 28
Gly Ser Pro Ala Pro Asp Pro Ala Pro Asp Pro Ser Gly
1 5 10
<210> 29
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 信号肽1
<400> 29
Met Thr Asn Lys Cys Leu Leu Gln Ile Ala Leu Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser
20
<210> 30
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 信号肽2
<400> 30
Met Asn Asn Arg Trp Ile Leu His Ala Ala Phe Leu Leu Cys Phe Ser
1 5 10 15
Thr Thr Ala Leu Ser
20
<210> 31
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 信号肽3
<400> 31
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser
<210> 32
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 信号肽4
<400> 32
Met Ser Gly Gly Thr Ser Gly Ser Thr Ser Gly Thr Gly Ser Thr
1 5 10 15
<210> 33
<211> 188
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IFNα2a
<400> 33
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Leu Pro Gln Thr His Ser Leu
20 25 30
Gly Ser Arg Arg Thr Leu Met Leu Leu Ala Gln Met Arg Lys Ile Ser
35 40 45
Leu Phe Ser Cys Leu Lys Asp Arg His Asp Phe Gly Phe Pro Gln Glu
50 55 60
Glu Phe Gly Asn Gln Phe Gln Lys Ala Glu Thr Ile Pro Val Leu His
65 70 75 80
Glu Met Ile Gln Gln Ile Phe Asn Leu Phe Ser Thr Lys Asp Ser Ser
85 90 95
Ala Ala Trp Asp Glu Thr Leu Leu Asp Lys Phe Tyr Thr Glu Leu Tyr
100 105 110
Gln Gln Leu Asn Asp Leu Glu Ala Cys Val Ile Gln Gly Val Gly Val
115 120 125
Thr Glu Thr Pro Leu Met Lys Glu Asp Ser Ile Leu Ala Val Arg Lys
130 135 140
Tyr Phe Gln Arg Ile Thr Leu Tyr Leu Lys Glu Lys Lys Tyr Ser Pro
145 150 155 160
Cys Ala Trp Glu Val Val Arg Ala Glu Ile Met Arg Ser Phe Ser Leu
165 170 175
Ser Thr Asn Leu Gln Glu Ser Leu Arg Ser Lys Glu
180 185
<210> 34
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> pgRNA的正向引物
<400> 34
gccttagagt ctcctgagca 20
<210> 35
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> pgRNA的反向引物
<400> 35
gagggagttc ttcttctagg 20
<210> 36
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> pgRNA的探针
<400> 36
agtgtggatt cgcactcctc cagc 24
Claims (18)
1.一种肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)激动剂或其功能性片段与干扰素(IFN)药剂或其功能性片段的组合，所述组合用于治疗HBV感染。
2.根据权利要求1所述的用于其用途的组合，其中所述TNFRSF激动剂或其功能性片段选自淋巴毒素α3受体激动剂、淋巴毒素β受体激动剂、疱疹病毒进入介体激动剂、肿瘤坏死因子样受体凋亡微弱诱导剂激动剂、分化簇因子40激动剂、CD27激动剂、CD30激动剂、4-1BB激动剂、核因子κB受体激活因子激动剂、Troy激动剂和OX40受体激动剂或其功能性片段。
3.根据权利要求1或2所述的用于其用途的组合，其中所述TNFRSF激动剂或其功能性片段选自CD40L、LTα3、LIGHT和TWEAK或其功能性片段。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述TNFRSF激动剂或其功能性片段选自CD40L、LIGHT和TWEAK或其功能性片段。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述TNFRSF激动剂或其功能性片段是选自以下的CD40激动剂或其功能性片段：CD40配体(CD40L)或其功能性片段、激动性抗CD40抗体、其功能性片段或其抗原结合片段，以及包含CD40配体或其功能性片段的融合蛋白。
6.根据权利要求5所述的用于其用途的组合，其中所述CD40L是六聚体CD40L或三聚体CD40L。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述TNFRSF激动剂或其功能性片段是多肽或其功能性片段、抗体或其功能性片段、或其抗原结合片段。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述TNFRSF激动剂或其功能性片段以包含所述TNFRSF激动剂或其功能性片段的融合蛋白的形式提供。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述IFN药剂或其功能性片段选自I型IFN药剂、II型IFN药剂和III型IFN药剂或其功能性片段。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述IFN药剂或其功能性片段是IFNα、IFNβ、IFNγ或IFNλ或其功能性片段。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述IFN药剂或其功能性片段是IFNβ或IFNγ或其功能性片段。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述IFN药剂或其功能性片段是IFNβ或其功能性片段。
13.根据权利要求1至10中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述IFN药剂或其功能性片段是IFNα或其功能性片段。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述IFN药剂或其功能性片段以包含所述IFN药剂或其功能性片段的融合蛋白的形式提供。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述TNFRSF激动剂或其功能性片段和所述IFN药剂或其功能性片段以包含所述TNFRSF激动剂或其功能性片段、所述IFN药剂或其功能性片段和接头的双功能免疫刺激融合蛋白的形式提供。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述TNFRSF激动剂或其功能性片段和所述IFN药剂或其功能性片段包含在单一药物组合物中。
17.根据权利要求1至14中任一项所述的用于其用途的组合，其中所述TNFRSF激动剂或其功能性片段和所述IFN药剂或其功能性片段包含在不同的药物组合物中。
18.一种药物组合物，所述药物组合物包含：
TNFRSF激动剂或其功能性片段；以及
II型IFN药剂、II型IFN药剂的功能性片段、III型IFN药剂或III型IFN药剂的功能性片段。
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