CN112903839B - 定性检测单糖α、β构型异构体的方法和检测单糖异构体比例的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了定性检测单糖α、β构型异构体的方法和检测单糖异构体比例的方法，其中，该定性检测单糖α、β构异构体的方法包括：将单糖样品溶于乙腈水的溶液中，以便得到样品溶液；以及将所述样品溶液进行色谱‑质谱联用检测，基于检测结果，确定所述单糖样品是否存在异构体。该方法将单糖溶于乙腈水溶液中，易于单糖异构体的检测。

Description

定性检测单糖α、β构型异构体的方法和检测单糖异构体比例 的方法

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体地，涉及定性检测单糖异构体的方法和检测单糖异构体比例的方法。

背景技术

研究表明，单糖在液体中结构不稳定，会发生变旋现象，同时形成1种开环结构和2种环式构型(α、β构型)的化合物，并且以2种环式结构为主要构型。图5显示了D－葡萄糖在水溶液中形成的α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖的构象，这些异构体的存在使得当许多葡萄糖结合在一起的时候会形成多种多糖，例如当D-葡萄糖以α-1,4-糖苷键连接时会形成直链淀粉，而以β-1,4-糖苷键连接时会形成纤维素。此外，在生物体内，不同的异构体生理功能也存在差异，例如，只有α-D-(+)-葡萄糖能促进胰岛素分泌量的显著增加，其他糖类则无此效果。

尽管目前的研究已经清楚单糖在不同的溶剂体系中α和β两种构象的比例会发生变化，但是对于单糖在特定溶剂体系下两种异构体比例的准确定性和定量目前还没有很好的方法，因此，单糖异构体的检测方法有待研究。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种定性检测单糖异构体的方法，该方法能对乙腈水溶液中的异构体进行检测，判断该单糖的乙腈溶液中是否存在异构体。

需要说明的是，本发明是基于发明人的下列工作而完成的：

发明人发现，本发明中所提到的10种单糖，在一个固定的液相色谱分离条件下，溶解于乙腈/水(v/v)溶液体系中的每种单糖均会形成α和β两个色谱峰，且2个色谱峰的比例会随着乙腈/水(v/v)溶液体系中已腈浓度的改变而改变。

因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了一种定性检测单糖异构体的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将单糖样品溶于乙腈水的溶液中，以便得到样品溶液；以及将所述样品溶液进行液相色谱-质谱联用检测，基于检测结果，确定所述单糖样品是否存在异构体。

发明人惊奇的发现，将单糖溶于乙腈水溶液中，在进一步优化色谱分离条件后，每种单糖的α、β两个异构体可以实现基线分离，从而根据出峰情况不仅可判断乙腈水溶液中的单糖是否存在异构体，而且可以对单糖的α、β两个异构体的比例实现准确定量。从而解决了单糖α和β异构体难以准确定性定量检测的难题。

另外，根据本发明上述实施例的定性检测单糖异构体的方法，还可以具有如下附加的技术特征：

根据本发明的实施例，所述单糖选自D-甘露糖(mannose)，D-(-)-核糖(ribose)，D-甘露醇(mannitol)，L-(+)-阿拉伯糖(arabinose)，D-(+)-半乳糖(galactose)，L-(-)-岩藻糖(fucose)， D-(-)-果糖(fructose)，D-(+)-葡萄糖(glucose)的至少一种。

根据本发明的实施例，所述液相色谱-质谱联用检测的流动相的有机相为乙腈，水相为碱性溶液，优选地，为1mmol/L甲酸铵。

根据本发明的实施例，所述液相色谱-质谱联用检测的洗脱为等度洗脱。

根据本发明的实施例，所述等度洗脱的洗脱条件为90％乙腈 /1mmol甲酸铵水溶液，v/v。

根据本发明的实施例，所述液相色谱-质谱联用检测的色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLC BEH Amide色谱柱，规格为2.1mm×100mm，1.7μm；进样体积：5μL；流速：0.2-0.5 mL/min。

根据本发明的实施例，所述液相色谱-质谱联用检测的质谱条件：电离方式：负离子模式；喷雾电压：3.0kV；辅助气加热温度：280℃；传输金属毛细管温度：325℃；鞘气压力:40arb；辅助气压力:10arb；检测方式：一级质谱全扫描(Full MS-SIM)；扫描范围(m/z):80-800；一级质谱全扫描(full scan)分辨率:R＝70000；自动增益控制进入轨道阱中的离子数 (AGC target):1e6；最大注入时间:200ms；归一化碰撞能:35，45，60eV。

根据本发明的另一方面，本发明提供了一种检测单糖异构体比例的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将单糖样品溶于乙腈和水的溶液中，以便得到单糖样品溶液；以及将所述样品溶液进行液相色谱-质谱联用检测，基于检测结果，确定所述单糖样品溶液中异构体的比例。

发明人惊奇的发现，将单糖溶于乙腈/水溶液(v/v)进行液相色谱-质谱分析时,许多单糖标准品都会出现2个色谱峰，且这两个色谱峰的比例会随着乙腈/水溶液(v/v)中乙腈浓度的改变而改变，这就提示，单糖在乙腈/水溶液中形成了α和β两种异构体，进一步的研究发现，在一个固定比例的乙腈/水溶液体系(v/v)中，α和β两种异构体的相对含量是固定的。随后，经过对流动相体系的一系列优化(乙腈/水溶液体系分别添加不同浓度的甲酸胺溶液(0.1mM、 1mM、10mM)、氨水(0.01％、0.05％等)，在优选的色谱条件下，发明人将每一种单糖的 2个异构体实现了基线分离。由此，本发明的实施例建立了一种根据出峰情况即可判断乙腈水溶液中的单糖是否存在异构体的分析方法，并且，根据峰面积可以计算两种异构体的比例，解决了异构体难以检测的难题。

根据本发明的实施例，所述单糖选自鼠李糖(rhamnose)、甘露糖(mannose)、木糖(xylose)、核糖(ribose)、甘醇(mannitol)、阿拉伯糖(arabinose)、半乳糖(galactose)、岩藻糖(fucose)、果糖(fructose)和葡萄糖(glucose)的至少一种。

根据本发明的实施例，所述液相色谱-质谱联用检测的流动相的有机相为乙腈，水相为酸性溶液，优选地，为1mmol/L甲酸铵。

根据本发明的实施例，所述液相色谱-质谱联用检测的洗脱为等度洗脱。

根据本发明的实施例，所述等度洗脱的洗脱条件为90％乙腈 /1mmol甲酸铵水溶液，v/v。

根据本发明的实施例，所述液相色谱-质谱联用检测的色谱条件：色谱柱:ACQUITYUPLC BEH Amide色谱柱，规格为2.1mm×100mm，1.7μm；进样体积：5μL；流速：0.2-0.5 mL/min。

根据本发明的实施例，所述液相色谱-质谱联用检测的质谱条件：电离方式：负离子模式；喷雾电压:3.0kV；辅助气加热温度:280℃；传输金属毛细管温度:325℃；鞘气压力:40 arb；辅助气压力:10arb；检测方式：一级质谱全扫描(Full MS-SIM)；扫描范围(m/z):80-800；一级质谱全扫描(full scan)分辨率:R＝70000；自动增益控制进入轨道阱中的离子数(AGC target):1e6；最大注入时间:200ms；归一化碰撞能:35，45，60eV。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1显示了根据本发明一个实施例的3种单糖异构体的色谱示意图；

图2显示了根据本发明一个实施例的10种混标在不同流动相中的色谱示意图，其中，a 的流动相为0.1mmol/L甲酸铵-乙腈溶液；b的流动相为1mmol/L甲酸铵-乙腈溶液；

图3显示了根据本发明一个实施例的半乳糖、甘露糖、葡萄糖、果糖在不同色谱柱中的总离子流图，其中，a为XBridge Amide、b为Acquity BEH HILIC、c为InertsustainNH₂、d 为Acquity BEH Amide；色谱峰：1为甘露糖、2为葡萄糖、3为果糖、4为半乳糖；图4 显示了根据本发明一个实施例的10种单糖的分子离子提取色谱图，其中，1：核糖，2：木糖，3：阿拉伯糖，4：岩藻糖，5：鼠李糖，6：甘露醇，7：甘露糖，8：果糖，9：葡萄糖， 10：半乳糖；

图5显示了α-D-葡萄糖和β-D-葡萄糖的构象示意图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种定性检测单糖异构体的方法。发明人惊奇的发现，将单糖溶于乙腈水溶液中，如果存在α和β两种异构体，则该单糖的两种异构体可以被分成2个基线分离的色谱峰，从而根据出峰情况即可判断乙腈水溶液中的单糖是否存在异构体，解决了异构体难以检测的难题。

发明人研究发现，对于α和β两种异构体的判断，如图1所示，首先是基于分析使用的单糖如(D-(+)-葡萄糖)为有证标准品，其纯度超过了99.9％，这种标准品在溶解后，未发生化学反应，在经过色谱分离后形成了两个色谱峰，最合理的解释就是形成了α-D-(+)-葡萄糖和β-D-(+)-葡萄糖两种异构体。此外，在很多文献中也已有了相关的论述(姚远等，化学教育，2020，41，93-98；王晨晶等，分析与检测，2018，44，235-239)，因此，综合判定，此两个峰为2种异构体。

根据本发明的实施例，该方法包括：将单糖样品溶于乙腈水的溶液中，得到样品溶液；然后，将所述样品溶液进行液相色谱-质谱联用检测，基于检测结果，确定所述单糖样品是否存在异构体。

根据本发明的实施例，该单糖选自鼠李糖(rhamnose)、甘露糖(mannose)、木糖(xylose)、核糖(ribose)、甘醇(mannitol)、阿拉伯糖(arabinose)、半乳糖(galactose)、岩藻糖(fucose)、果糖(fructose)和葡萄糖(glucose)的至少一种。

根据本发明的实施例，该液相色谱-质谱联用检测的流动相的有机相为乙腈，水相为酸性溶液。由此，水相为酸性溶液，分析的灵敏度高，峰型好，能有效避免离子抑制效应由于糖的酸性弱,为弱酸，碱性溶液将使其在流动相中以离子形态存在,不利于其分离，而流动相是弱酸等话则可以使其更好的处于分子状态，由此，水相为酸性溶液，分析的灵敏度高，峰型好，能有效避免离子抑制效应。根据本发明的优选实施例，水相为1mmol/L甲酸铵。由此，单糖的分离效果好，有利于各单糖异构体实现基线分离，使异构体比例的检测更准确。

根据本发明的实施例，该液相色谱-质谱联用检测的洗脱为等度洗脱。发明人经过尝试，由于这些糖结构类似。在梯度条件下很难实现所有单糖异构体的分离，由此，单糖的等度洗脱效果好，实现了常见单糖的有效分离。

根据本发明的实施例，所述等度洗脱的洗脱条件为90％乙腈 /1mmol甲酸铵水溶液，v/v。由此，单糖的洗脱效果好，实现了常见单糖的有效分离。

根据本发明的实施例，所述色谱-质谱联用检测的色谱条件：色谱柱：ACQUITYUPLC BEH Amide色谱柱，规格为2.1mm×100mm，1.7μm；进样体积：5μL；流速：0.2-0.5mL/min。由此，该条件下，不同单糖的分离效果好。

根据本发明的实施例，所述色谱-质谱联用检测的质谱条件：电离方式：负离子模式；喷雾电压：3.0kV；辅助气加热温度：280℃；传输金属毛细管温度：325℃；鞘气压力:40arb；辅助气压力:10arb；检测方式：一级质谱全扫描(Full MS-SIM)；扫描范围(m/z):80-800；一级质谱全扫描(full scan)分辨率:R＝70000；自动增益控制进入轨道阱中的离子数(AGC target):1e6；最大注入时间:200ms；归一化碰撞能:35，45，60eV。由此，在该质谱条件下，在负离子检测方式下进行母离子全扫描，能得到单糖的分子离子峰，以每种单糖的分子离子峰为母离子，进行二级质谱扫描，采集全扫描的二级质谱图，得到碎片离子信息，再对每种糖的二级质谱参数如碰撞能、去簇电压进行优化，使每种糖的定性离子与定量离子产生的离子对强度比例达到最大时为优先，从而有利于单糖异构体的定性检测。

根据本发明的另一方面，本发明提供了一种检测单糖异构体比例的方法。根据本发明实施例的检测单糖异构体比例的方法，将单糖溶于乙腈水溶液中，易于单糖异构体的检测，在液相色谱-质谱联用检测中，如果存在异构体，则该单糖的两种异构体将实现基线分离，呈现双峰，从而根据出峰情况即可判断乙腈水溶液中的单糖是否存在异构体，并且，单糖溶解的乙腈水溶液中乙腈的含量的差异，将导致2种异构体的比例出现变化，这种变化，根据峰面积就可以进两种异构体比例的计算，解决了异构体难以检测的难题。

根据本发明的实施例，该方法包括：将单糖样品溶于乙腈和水的溶液中，得到单糖样品溶液；然后，将样品溶液进行色谱-质谱联用检测，基于检测结果，确定单糖样品溶液中异构体的比例。

根据本发明的实施例，该单糖选自鼠李糖(rhamnose)、甘露糖(mannose)、木糖(xylose)、核糖(ribose)、甘醇(mannitol)、阿拉伯糖(arabinose)、半乳糖(galactose)、岩藻糖(fucose)、果糖(fructose)和葡萄糖(glucose)的至少一种。

根据本发明的实施例，所述液相色谱-质谱联用检测的流动相的有机相为乙腈，水相为酸性溶液。由于糖的酸性弱,为弱酸，碱性溶液将使其在流动相中以离子形态存在,不利于其分离，而流动相是弱酸等话则可以使其更好的处于分子状态，从而有利于异构体的分离。 (由此，水相为酸性溶液，分析的灵敏度高，峰型好，能有效避免离子抑制效应。根据本发明的优选实施例，水相为1mmol/L甲酸铵。由此，单糖的分离效果好，有利于各实现基线分离，使异构体比例的检测更准确。

根据本发明的实施例，所述色谱-质谱联用检测的洗脱为等度洗脱。由此，单糖的洗脱效果好，实现了常见单糖不同异构体的基线分离。

根据本发明的实施例，所述等度洗脱的洗脱条件为90％乙腈 /1mmol甲酸铵水溶液，v/v。由此，单糖的洗脱效果好，实现了常见单糖的有效分离。

根据本发明的实施例，所述色谱-质谱联用检测的色谱条件：色谱柱:ACQUITYUPLC BEH Amide色谱柱，规格为2.1mm×100mm，1.7μm；进样体积：5μL；流速：0.2-0.5mL/min。由此，该条件下，不同单糖的分离效果好。

根据本发明的实施例，所述色谱-质谱联用检测的质谱条件：电离方式：负离子模式；喷雾电压:3.0kV；辅助气加热温度:280℃；传输金属毛细管温度:325℃；鞘气压力:40arb；辅助气压力:10arb；检测方式：一级质谱全扫描(Full MS-SIM)；扫描范围(m/z):80-800；一级质谱全扫描(full scan)分辨率:R＝70000；自动增益控制进入轨道阱中的离子数(AGC target): 1e6；最大注入时间:200ms；归一化碰撞能:35，45，60eV。由此，在该质谱条件下，在负离子检测方式下进行母离子全扫描，能得到单糖的分子离子峰，以每种单糖的分子离子峰为母离子，进行二级质谱扫描，采集全扫描的二级质谱图，得到碎片离子信息，再对每种糖的二级质谱参数如碰撞能、去簇电压进行优化，使每种糖的定性离子与定量离子产生的离子对强度比例达到最大时为优先，从而有利于单糖异构体的定性检测。

下面参考具体实施例，对本发明进行说明，需要说明的是，这些实施例仅仅是说明性的，而不能理解为对本发明的限制。

下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品，例如可以采购自Sigma公司。

实施例1

本实施例中，对色谱-质谱联用分析检测单糖的检测条件进行分析比较，并对市售白酒中的十种单糖进行检测，这十种单糖分别是鼠李糖、甘露糖、木糖、核糖、甘醇、阿拉伯糖、半乳糖、岩藻糖、果糖和葡萄糖。具体方法如下：

1、仪器与试剂

单糖：鼠李糖、甘露糖、木糖、核糖、甘醇、阿拉伯糖、半乳糖、岩藻糖、果糖和葡萄糖；乙腈、甲醇、甲酸铵、三氟乙酸。

仪器：UPLC-Q/Exactive(美国Thermo公司)；Acquity超高效液相色谱(美国Waters公司)；Mill-Q去离子水发生器(美国Millipore公司)；KQ-500DE型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)；DKN612C型烘箱(日本雅玛拓公司)；Allegra ^TM X-22R型离心机(美国贝克曼公司)。

2、标准溶液的制备

2.1标准储备溶液的制备

准确称取标准品100mg(精确至0.1mg)于100mL容量瓶中，用乙腈-水(1:1,v/v)溶解并定容至刻度，配置成质量浓度为1000mg/L的标准储备液，储存于4℃冰箱中备用。

2.2标准工作溶液的制备

移取1000mg/L的标准储备液添加适量乙腈-水(1:1,v/v)溶液稀释成一系列质量浓度 (0.05-5mg/L)的标准工作溶液。

3仪器条件

3.1色谱条件

色谱柱:Waters ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱(2.1mm×100mm，1.7μm)

流动相:1mmol甲酸铵水溶液，乙腈

等度洗脱：90％乙腈 /1mmol甲酸铵水溶液(v/v)

进样体积：5μL

流速：0.3mL/min

方法运行时间：35min

3.2质谱条件

电离方式：负离子模式；

喷雾电压:3.0kV；

辅助气加热温度:280℃；

传输金属毛细管温度:325℃；

鞘气压力:40arb；

辅助气压力:10arb；

检测方式：一级质谱全扫描(Full MS-SIM)

扫描范围(m/z):80-800

一级质谱全扫描(full scan)分辨率:R＝70000；

自动增益控制进入轨道阱中的离子数(AGC target):1e6；

最大注入时间:200ms；归一化碰撞能:35，45，60eV。

4色谱条件的优化

4.1色谱柱的选择

单糖或寡糖富含羟基，属于高亲水的化合物，并且由于羟基的位点不同而有许多同分异构体。本实施例中中拟检测的10种单糖包含3组同分异构体：甘露糖、半乳糖、葡萄糖、果糖为一组，岩藻糖、鼠李糖为一组、阿拉伯糖、木糖、核糖为一组。实验比较了XBridgeAmide(4.6×150mm，3.5μm)、Acquity BEH HILIC(2.1×50mm，1.7μm)、Inertsustain NH₂(2.1×100mm，3μm)和Acquity BEH Amide(2.1×100mm，1.7μm)4种亲水型色谱柱对 10种糖的分离效果影响。

单糖或寡糖富含羟基，属于高亲水的化合物，并且由于羟基的位点不同而有许多同分异构体。本实施例中拟检测的12种单糖包含4组同分异构体：组1包括甘露糖、半乳糖、葡萄糖、果糖；组2包括岩藻糖、鼠李糖；组3包括阿拉伯糖、木糖、核糖；比较了XBridgeAmide、 Acquity BEH HILIC、Inertsustain NH2和Acquity BEH Amide 4款亲水色谱柱对10种糖的分离效果。以10mmol/L甲酸铵－乙腈作为流动相，每种色谱柱在优选条件下对化合物进行分离。以组1为例，结果如图3所示，使用Acquity BEH HILIC柱和InertsustainNH2柱时，4种同分异构体均没有完全分开；使用XBridge Amide柱与Acquity BEH HILIC柱时，4种同分异构体都得到了分离，但使用XBridge Amide柱时，峰形较差。故选择AcquityBEH HILIC柱作为分析柱。

4.2流动相的选择

液相色谱-质谱法分析样品时，在流动相中添加一定量的缓冲盐，可提高分析的灵敏度，改善峰型，避免离子抑制效应。本实施例选择了10mmol/L甲酸铵、1mmol/L甲酸铵、0.1mmol/L甲酸铵三种缓冲盐，考察它们对分离的影响。结果如图2所示，其中，图2a的流动相为0.1mmol/L甲酸铵-乙腈溶液，图2b的流动相为1mmol/L甲酸铵-乙腈溶液，以半乳糖、甘露糖、葡萄糖、果糖这一组同分异构体为例，三种添加剂对四种糖的分离效果影响较大添加剂为甲酸铵时，四种糖得到了分离，虽然果糖、葡萄糖未达到基线分离，但不影响定量。因此，优选1mmol/L甲酸铵为流动相的添加剂。

5质谱条件的优化

通过针泵进样10mg/L单标溶液，在负离子检测方式下进行母离子全扫描，得到葡萄糖、半乳糖、木糖、甘露糖等的分子离子峰，以每种糖的分子离子峰为母离子，进行二级质谱扫描，采集全扫描的二级质谱图，得到碎片离子信息，再对每种糖的二级质谱参数如碰撞能、去簇电压进行优化，使每种糖的定性离子与定量离子产生的离子对强度比例达到最大时为最佳，从而得到每种糖的优选质谱参数。

经过色谱与质谱条件的优化，得到10种糖类化合物的分子离子提取色谱图，如图4所示。

6方法验证

6.1线性、检出限、定量限

在优化的色谱条件下，对12种糖类化合物在0.05-5mg/L质量浓度范围内考察了线性关系，以信噪比(S/N)为3时的进样浓度为检出限，S/N为10时的进样浓度为定量限。阿拉伯糖、岩藻糖、鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、果糖、半乳糖的线性范围为0.1-5mg/L，核糖、木糖、甘露醇的线性范围为0.05-2mg/L。10种糖的检出限在0.002-0.05mg/L之间，定量限在0.005-0.15mg/kg之间。(见表3)。

表3 12种糖类化合物的线性范围、线性关系、相关系数、检出限和定量限

6.2回收率和精密度

1)、标曲：基质配标

2)、加标浓度：1，2，5ppm，每个浓度做3个平行

步骤：酒样加标(加标浓度如上)后，再进行氮吹至干，后用95％乙腈/水溶液定容后上仪器分析。

3)实验结果：

11种糖类物质检测方法验证结果

7实际样品检测

将方法应用于市场上购买的5种白酒中单糖的检测，所有样品中均未有单糖检出。

8、结论

本研究建立了食品中10种天然糖分的高效液相色谱仪-静电场轨道阱质谱检测方法。该方法样品前处理简单，精密度和灵敏度高，能够同时测定白酒中10种天然糖类成分。方法已成功应用于白酒样品的检测。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。

Claims (4)

1.一种定性检测单糖α、β构型异构体的方法，其特征在于，包括：

将单糖样品溶于乙腈水的溶液中，以便得到样品溶液；以及

将所述样品溶液进行液相色谱-质谱联用检测，基于检测结果，确定所述单糖样品是否存在异构体，

所述单糖选自D-甘露糖，D-(-)-核糖，D-甘露醇，L-(+)-阿拉伯糖，D-(+)-半乳糖，L-(-)-岩藻糖，D-(-)-果糖，D-(+)-葡萄糖的至少一种，

所述液相色谱-质谱联用检测的流动相的有机相为乙腈，水相为酸性溶液，

所述液相色谱-质谱联用检测的洗脱为等度洗脱，

所述等度洗脱的洗脱条件为90％乙腈 /1mmol甲酸铵水溶液，v/v，

所述液相色谱-质谱联用检测的色谱条件：

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱，规格为2.1mm×100mm，1.7μm；

进样体积：5μL；

流速：0.2-0.5mL/min，

所述液相色谱-质谱联用检测的质谱条件：

电离方式：负离子模式；

喷雾电压：3.0kV；

辅助气加热温度：280℃；

传输金属毛细管温度：325℃；

鞘气压力:40arb；

辅助气压力:10arb；

检测方式：一级质谱全扫描；

扫描范围:80-800m/z；

一级质谱全扫描分辨率:R＝70000；

自动增益控制进入轨道阱中的离子数:1e6；

最大注入时间:200ms；归一化碰撞能:35，45，60eV。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述水相为1mmol/L甲酸铵。

3.一种检测单糖α、β构型异构体比例的方法，其特征在于，包括：

将单糖样品溶于乙腈和水的溶液中，以便得到单糖样品溶液；以及

将所述样品溶液进行色谱-质谱联用检测，基于检测结果，确定所述单糖样品溶液中异构体的比例，

所述单糖选自D-甘露糖，D-(-)-核糖，D-甘露醇，L-(+)-阿拉伯糖，D-(+)-半乳糖，L-(-)-岩藻糖，D-(-)-果糖，D-(+)-葡萄糖的至少一种，

液相色谱-质谱联用检测的流动相的有机相为乙腈，水相为酸性溶液，所述液相色谱-质谱联用检测的洗脱为等度洗脱，

所述等度洗脱的洗脱条件为90％乙腈 /1mmol甲酸铵水溶液，v/v，

所述液相色谱-质谱联用检测的色谱条件：

色谱柱:ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱，规格为2.1mm×100mm，1.7μm；进样体积：5μL；

流速：0.2-0.5mL/min，

所述色谱-质谱联用检测的质谱条件：

电离方式：负离子模式；

喷雾电压:3.0kV；

辅助气加热温度:280℃；

传输金属毛细管温度:325℃；

鞘气压力:40arb；

辅助气压力:10arb；

检测方式：一级质谱全扫描；

扫描范围:80-800m/z；

一级质谱全扫描分辨率:R＝70000；

自动增益控制进入轨道阱中的离子数:1e6；

最大注入时间:200ms；归一化碰撞能:35，45，60eV。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述水相为1mmol/L甲酸铵。

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