CN112903646B - 一种检测抗体亲和力的方法、系统及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种检测抗体亲和力的方法、系统及其应用。所述方法包括如下步骤：获取孔板中待测样品的显微图像，所述待测样品为靶细胞与候选抗体混合并孵育后，再加入携带荧光标记A的二抗混合并孵育后得到的细胞样品，所述待测样品的显微图像经与所述荧光标记A匹配的荧光激发光激发后进行显微成像得到；分析所述待测样品的显微图像，得到所述待测样品的图像分析结果；基于所述待测样品的图像分析结果确定所述候选抗体的亲和力。本发明提供的方法结合荧光显微成像和图像识别技术，直接对孔板进行成像，根据靶细胞的荧光强度在细胞水平实现高通量且准确的抗体亲和力检测。

Description

一种检测抗体亲和力的方法、系统及其应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及抗体药的研发和筛选，尤其涉及一种检测抗体亲和力的方法、系统及其应用。

背景技术

抗体药的研发主要基于杂交瘤细胞或者体外抗体库的筛选。通过对抗原设计和抗体筛选，可以初步获得阳性的先导抗体，再进一步通过一系列生物性质检测和功能验证，最终得到有药用潜力的抗体。在抗体药的评估研究中，抗体亲和力是研究的重要方向之一。理论上，抗体亲和力的提高有助于改善抗体的特异性和效力，有助于减少用药剂量，降低毒副作用等。抗体亲和力的评估，不仅有助于抗体药物的研发和质量改善，同时也有助于人们更好地理解抗体与靶点相互作用的机理，更好地认识靶点的功能。

抗体与抗原表位或抗原决定簇之间的结合力称为抗体亲和力，其本质是一种非共价作用力，包括对氨基酸之间的吸引力，氢键，疏水性作用力等。抗体亲和力体现了一个抗体分子和一个半抗原分子或抗原分子的一个决定簇起反应的能力。

常用的抗体亲和力检测方法有很多，如：生物膜干涉技术(BLI)、固相放射免疫法(SP-RIA)、固相放射免疫法(SP-RIA)、结合抗原沉淀法、酶联免疫吸附实验(ELISA法)和表面等离子共振法(SPR)等。其中，酶联免疫吸附实验(ELISA法)因其灵敏度高，操作简便，通量高等原因，是目前常用的亲和力测定方法。以竞争ELISA法为例，抗体与不同浓度的抗原在水溶液中混合孵育达到平衡后，未结合的抗体被微孔板中包被的抗原捕获，并通过ELISA方法检测出来。竞争ELISA法不需要制备纯化的抗体，因为ELISA结合就相当于抗体的亲和纯化，但是考虑到抗原-抗体复合物的稳定性，竞争ELISA与电泳条带迁移分析相似，只适用于高亲和力的抗体。

此外，包括ELISA方法在内，上述测定抗体亲和力的方法都属于蛋白水平，为了进一步验证抗体的功能，还需在细胞水平上进一步验证。且很多抗原片段的选择和体内真实情况并不一致，用蛋白水平筛选的抗体和细胞水平筛选的抗体相关性并不好，这也是为何在蛋白水平筛选完成后还需在细胞水平上再次进行功能验证的原因。同时，对于一些新型抗体，ELISA平台需要活性蛋白，但对于很多尚不成熟的靶点没有好的活性蛋白，也很难用ELISA平台直接进行筛选。而对于细胞水平验证，目前主要使用流式方法检测，但流式细胞仪不能获取图片，且只能将细胞消化下来检测，改变了细胞原有的形态，且通量低、速度慢。

因此，提供一种细胞水平的、检测速度快、更加直观且方便验证的抗体亲和力检测方法，对本领域而言具有重要的意义。

发明内容

鉴于现有技术中存在的问题，本发明目的在于提供一种检测抗体亲和力的方法、系统及其应用。所述方法不仅可以替代流式细胞仪的细胞水平功能验证，其通量和操作便捷性也可以替代ELISA方法，直接用高通量的细胞水平对抗体活性进行筛选，有助于缩短抗体药物的研发周期。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种高通量检测抗体亲和力的方法，所述方法包括如下步骤：

获取孔板中待测样品的显微图像，所述待测样品为靶细胞与候选抗体混合并孵育后，再加入携带荧光标记A的二抗混合并孵育后得到的细胞样品，所述待测样品的显微图像经与所述荧光标记A匹配的荧光激发光激发后进行显微成像得到；

分析所述待测样品的显微图像，得到所述待测样品的图像分析结果；

基于所述待测样品的图像分析结果确定所述候选抗体的亲和力。

本发明结合荧光显微成像和图像识别技术，直接对孔板进行成像并得到对应孔内的平均荧光强度，根据待测样品的图像分析结果来评估候选抗体的亲和力。简单来说就是，显微图像中，靶细胞的荧光强度越强，抗体亲和力越高。本发明在检测时保留了细胞原有的形态，可信度较高；同时，所得细胞图像也为后续的实验结果提供了依据和对比；且因该分析方法不属于液流分析，因此该方法不仅适用于96孔板或384孔板等孔板的检测分析，还具有通量大、检测效率高的优点。

作为本发明优选的技术方案，所述孔板有多个样品孔，所述候选抗体至少包括两种类型。

进一步地，所述多个样品孔中同一类型的候选抗体至少包括两个浓度。

进一步地，所述候选抗体通过梯度稀释得到不同浓度。

作为本发明优选的技术方案，所述待测样品的图像的获取方法包括：通过高通量细胞分析系统的显微成像模块对孔板上各孔中的待测样品分别进行拍摄，得到各待测样品的显微图像；

或者，通过高通量细胞分析系统的控制样品自动更换模块更新孔板，再由显微成像模块对更新后的孔板上的待测样品进行拍摄，得到更新后的孔板上的待测样品的显微图像。

作为本发明优选的技术方案，所述待测样品的图像分析结果包括：平均荧光强度、总细胞数、抗体结合细胞数或抗体结合细胞数占总细胞数的百分比中的任意一种或至少两种的组合。

进一步地，通过高通量细胞分析系统的分析处理模块识别所述显微图像中的抗体结合细胞和细胞，根据识别结果得到抗体结合细胞数，并根据所述抗体结合细胞数和所述总细胞数得到所述抗体结合细胞数占所述总细胞数的百分比。

进一步地，通过高通量细胞分析系统的分析处理模块分别确定显微图像中每个抗体结合细胞的荧光强度，根据各荧光强度和显微图像中的总细胞数，得到各所述抗体结合细胞的平均荧光强度。

作为本发明优选的技术方案，所述方法还包括构建拟合曲线确定所述候选抗体的亲和力；

所述拟合曲线由高通量细胞分析系统的分析处理模块进行拟合，所述拟合的方法为：以所述候选抗体的浓度、平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比为变量，得到反映抗体亲和力的剂量依赖曲线图。

进一步地，基于量-效关系方程拟合得到反映抗体亲和力的剂量依赖曲线：

Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((Log EC50-X)*Hill Slope)

其中，X表示候选抗体的浓度；

Y表示候选抗体在X浓度下，待测样品的平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比；

Bottom表示阴性对照孔中待测样品的平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比；

Top表示阳性对照孔中待测样品的平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比；

EC50表示能引起50％个体有效的候选抗体浓度；

Hill Slope为斜率，通过至少两组XY数据求解得到。

作为本发明优选的技术方案，所述靶细胞包括携带荧光标记B的靶细胞，所述荧光标记A和荧光标记B所匹配的荧光激发光不同。

进一步地，所述方法还包括获取所述荧光标记B匹配的荧光激发光激发后得到的待测样品的显微图像。

进一步地，针对分别在与荧光标记A匹配的荧光通道下拍摄的待测样品的第一显微图像和与荧光标记B匹配的荧光通道下拍摄的所述待测样品的第二显微图像，对所述第一显微图像和所述第二显微图像进行对比，根据对比结果确定各细胞中的当前细胞在所述第一显微图像和所述第二显微图像中的位置信息是否一致。

进一步地，所述靶细胞与候选抗体混合前，获取所述靶细胞的显微图像并基于所述靶细胞的显微图像确定所述靶细胞的数量。

第二方面，本发明还提供一种检测抗体亲和力的系统，其特征在于，所述系统包括如下模块：

显微成像模块，用于获取孔板中待测样品显微图像，所述待测样品为靶细胞与候选抗体混合并孵育后，再加入携带荧光标记A的二抗混合并孵育后得到的细胞样品，所述待测样品的显微图像经与所述荧光标记A匹配的荧光激发光激发后进行显微成像得到；

分析处理模块，用于分析所述待测样品的显微图像，得到所述待测样品的图像分析结果及基于所述待测样品的图像分析结果确定所述候选抗体的亲和力。

进一步地，所述系统还包括：样品台模块，用于承载所述孔板，所述孔板有多个样品孔，用于承载至少两种类型的候选抗体，所述多个样品孔中同一类型的候选抗体至少包括两个浓度，所述显微成像模块对所述孔板上各孔中的待测样品分别进行拍摄，得到各待测样品的显微图像。

进一步地，所述系统还包括：样品自动更换模块，用于更新孔板，再由显微成像模块对更新后的孔板上的待测样品进行拍摄，得到所述更新后的孔板上的待测样品的显微图像。

第三方面，本发明还提供一种如第一方面所述的检测抗体亲和力的方法或如第二方面所述的检测抗体亲和力的系统在抗体筛选或抗体药研发中的应用。

本发明所述的数值范围不仅包括上述列举的点值，还包括没有列举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。

与现有技术相比，本发明至少具有以下有益效果：

(1)本发明提供的高通量检测抗体亲和力的方法，结合荧光显微成像和图像识别技术，直接对孔板进行成像，在荧光通道下区分出与抗体结合的靶细胞，并拍照留存作为后续对照验证的依据，根据靶细胞的平均荧光强度在细胞水平实现对抗体亲和力的检测；

(2)本发明提供的高通量检测抗体亲和力的方法不属于液流分析，而是直接对孔板进行成像，本发明提供的方法不仅适用于96孔板，也适用于384等其他孔板的检测分析，因此，其还具有通量大、检测效率高的优点；

(3)本发明提供的检测抗体亲和力的方法，结合荧光显微成像和图像合成分析方法，快速、准确地检测靶细胞荧光强度，保留了细胞原有的形态，利用荧光强度评估抗体亲和力，可以明显提高抗体筛选过程中的准确性和可靠性。

附图说明

图1为实施例中使用的高通量细胞分析系统的结构示意图。

图2为本发明中所述检测抗体亲和力的方法的流程示意图。

图3为以CHO细胞为靶细胞在荧光通道A下得到的细胞荧光图片。

图4为以CHO-GFP细胞为靶细胞在荧光通道A下得到的细胞荧光图片。

图5为以CHO-GFP细胞为靶细胞在荧光通道B下得到的细胞荧光图片。

图6为单荧光方法处理后输出的平均荧光强度值拟合得到的曲线图。

图7为双荧光方法处理后输出的平均荧光强度值拟合得到的曲线图。

具体实施方式

下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案，但下述的实例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明的保护范围以权利要求书为准。

若无特殊说明，本发明中所用反应试剂和实验耗材均可购自本领域常规生产厂商；同样的，若无特殊说明，所用实验方法和技术手段均为本领域技术领域人员熟知的方法和手段。

本发明中，所使用的高通量细胞分析系统的结构如图1所示，具体包括：光源模块、显微成像模块、样品台模块、控制模块、分析处理模块及样品自动更换模块；

(1)所述分析处理模块与所述显微成像模块相连，用于分析处理显微成像装置采集的显微图像，获取图像分析结果，图像分析结果包括但不仅限于平均荧光强度、总细胞数、抗体结合细胞数或抗体结合细胞数占总细胞数的百分比。；

(2)所述控制模块分别与光源模块、样品台模块、显微成像模块及样品自动更换模块相连，分别控制光源通道、样品位置移动、显微成像设置及自动更换样品；

(3)所述光源模块包括明场光源和/或荧光光源。所述光源模块提供荧光激发光经样品台模块中的样品形成图像信息；具体地，所述光源模块包括荧光光源组件以及用于支撑和移动荧光光源的荧光光源座；所述荧光光源组件包括滤光立方体和荧光发生单元；所述光源模块还包括与荧光光源相连的用于调节荧光光源位置的荧光光源电机；所述荧光光源电机与控制模块相连；

(4)所述显微成像模块采集样品台模块中样品的光学信息形成显微图像；所述显微成像模块包括明场光源、物镜、管镜和相机；

(5)所述样品自动更换模块可以自动更换样品载板，对多块样品载板上的样品进行批量检测，可以24小时不间断工作，高效实现对样品的高通量检测。

图2给出了本发明中检测抗体亲和力的步骤，具体包括如下步骤：

S1、获取孔板中待测样品的显微图像

高通量细胞分析系统获取样品台模块上孔板中待测样品的显微图像。所述孔板用于承载待测样品，可以是单孔或多孔(如96孔、384孔等)的。所述待测样品为靶细胞与候选抗体混合并孵育后，再加入携带荧光标记A的二抗混合并孵育后得到的细胞样品。

其中，靶细胞与候选抗体孵育的温度为2～8℃，例如可以是2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃或8℃等；时间为40～100min，例如可以是40min、50min、60min、70min、80min、90min或100min等；加入携带荧光标记A的二抗后孵育的温度为2～8℃，例如可以是2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃或8℃等；时间为20～40min，例如可以是20min、22min、25min、26min、28min、30min、32min、34min、35min、36min、38min或40min等。

所述靶细胞包括悬浮细胞和/或贴壁细胞；同样的，所述靶细胞除按照贴壁或悬浮的形态进行区分之外，也可以以种类进行区分，包括癌细胞、通过细胞株构建的稳转靶细胞或瞬转的靶细胞中的任意一种，适用范围较广。

在一些实施例中，所述待测样品在与二抗混合孵育后，还可以进行洗脱操作，洗脱未结合的候选抗体和二抗。

在一些实施例中，所述待测样品的显微图像经与所述荧光标记A匹配的荧光激发光激发后进行显微成像得到。所述荧光标记A(包括但不限于如FITC、PE、APC或Percp等)。

在另一些实施例中，靶细胞也可以携带荧光标记B(包括但不限于Calcein AM或CFSE等化学标记或荧光标记)，且荧光标记A和荧光标记B所匹配的荧光通道不同。靶细胞携带荧光标记B，即对抗体和靶细胞同时进行标记，可以提高检测结果的准确度。

在一些实施例中，高通量细胞分析系统可以依次自动获取孔板上多孔中待测样品的显微图像，还可以在拍摄完一块孔板后通过样品自动更换模块(如全自动机械手臂)快速更换新的孔板进行拍摄。在该应用场景下，对于同一种类型的候选抗体，可以制备至少两种不同浓度的候选抗体置于不同的样品孔中。高通量细胞分析系统依次自动拍摄不同样品孔中的待测样品，得到不同候选抗体浓度下待测样品的显微图像。

当一块孔板不足以满足检测要求，如需要对十多种候选抗体的亲和力进行检测时，可以将待测样品置于多块孔板中，高通量细胞分析系统还可以在拍摄完一块孔板后通过样品自动更换模块(如全自动机械手臂)快速更换新的孔板进行拍摄。如此，可以高效准确地拍摄多份样品的显微图像，免去人为更换孔板、对焦、移动样品台模块等复杂操作对拍摄显微图像的干扰。

在一些实施例中，在拍摄待测样品的显微图像前，可以拍摄靶细胞的显微图像，基于靶细胞的显微图像对靶细胞进行计数并确定其活率，以制备浓度及活率符合要求的靶细胞悬液。

S2、分析待测样品的显微图像

高通量细胞分析系统的分析处理模块对待测样品的显微图像进行分析。

在一些实施例中，以CHO细胞为靶细胞，对在与荧光标记A(如FITC)匹配的荧光通道下获取了待测样品的显微图像(如图3)，分析处理模块可以分析显微图像得到图像分析结果。

图像分析结果为与评价候选抗体的抗体亲和力相关的信息，例如抗体结合细胞数、平均荧光强度，或抗体结合细胞数占总细胞数的百分比中的任意一种或至少两种的组合。

对于抗体结合细胞数和细胞总数，可以基于图像识别算法识别后计数得到。

对于图像的平均荧光强度，分析处理模块可以先确定每个抗体结合细胞的荧光强度，接着计算荧光强度的和再除以细胞总数得到平均荧光强度。对比ELISA法只能获得样品累计荧光强度，本发明可以基于图像清晰地辨别出每个抗体结合细胞、准确地计算出每个抗体结合细胞的荧光强度，进而确定平均荧光强度。

在另一些实施例中，以CHO-GFP细胞为靶细胞，对待测样品拍摄了两张显微图像，分析处理模块可以对分别在与荧光标记A(如PE)匹配的荧光通道下拍摄的第一显微图像(如图4)和与荧光标记B(如GFP)匹配的荧光通道下拍摄的第二显微图像(如图5)进行分析。

与单荧光方法相比，采用双荧光法获取两张显微图像，可以更准确地得到图像分析结果，例如抗体结合细胞数、平均荧光强度，或抗体结合细胞数占总细胞数的百分比中的任意一种或至少两种的组合。同时，通过对比两张显微图像，可以验证同一视野下拍摄得到的第一显微图像和第二显微图像中的细胞处于同一位置，进一步验证分析结果的准确定。

与ELISA方法相比，本发明方案通过获取待测样品的显微图像，可以基于显微图像准确地识别出细胞总数、抗体结合细胞数，并且可以获得单个抗体结合细的荧光强度从而计算平均荧光强度。这些信息都是通过ELISA方法无法获取的信息。ELISA属于蛋白水平的检测，为了进一步验证抗体的功能，还需在细胞水平上进一步验证。且很多抗原片段的选择和体内真实情况并不一致，用蛋白水平筛选的抗体和细胞水平筛选的抗体相关性并不好，这也是在蛋白水平筛选完成后还需在细胞水平上再次进行功能验证的原因。

同时，对于一些新型抗体，ELISA平台需要活性蛋白，但对于很多尚不成熟的靶点没有好的活性蛋白，也很难用ELISA平台直接进行筛选。而对于细胞水平验证，目前主要使用流式方法检测，但流式细胞仪不能获取图片，且只能将细胞消化下来检测，改变了细胞原有的形态，且通量低、速度慢。

S3、确定候选抗体的亲和力

高通量细胞分析系统的分析处理模块可以基于图像分析结果确定候选抗体的亲和力。

具体地，分析处理模块可以基于量-效关系方程拟合得到反映抗体亲和力的剂量依赖曲线：

Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((Log EC50－X)*Hill Slope)

其中，X为候选抗体的浓度；

Y为对应候选抗体在X浓度下，待测样品的平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比；

Y为候选抗体在X浓度下，待测样品的平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比；

Bottom：阴性对照孔中待测样品的平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比；

Top：阳性对照孔中待测样品的平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比；

EC50：能引起50％个体有效的候选抗体浓度。

基于拟合得到的某一候选抗体的剂量依赖曲线，可以得到该抗体的抗体亲和力值，即EC50。

通过对比不同候选抗体的剂量依赖曲线或EC50值，可以筛选出抗体亲和力满足需求的候选抗体。在一些实施例中，对候选抗体进行梯度稀释，所得浓度参数如表1所示：

表1

高通量细胞分析系统的分析处理模块可以输出在同一个坐标系上的多个候选抗体的剂量依赖曲线，进行更直观的对比，例如图6(单荧光方法处理样品)，图7(双荧光方法处理样品)。

根据单荧光方法的拟合曲线，所检测的候选抗体中，AB6抗体的平均荧光强度最高，即抗体亲和力最好；而AB4和AB5抗体的平均荧光强度次之，抗体亲和力稍差；AB1抗体的平均荧光强度较低，抗体亲和力较差；AB7、AB8和AB9抗体检测不到荧光强度，基本上不具有抗体亲和力；同时，当候选抗体的浓度偏低时，所有候选抗体的亲和力大致相同，随着抗体浓度的升高，平均荧光强度的差异逐渐变大。

根据双荧光方法的拟合曲线，所检测的候选抗体中，AB6抗体的平均荧光强度最高，即抗体亲和力最好；而HM002-BMK1抗体的平均荧光强度次之，抗体亲和力稍差；AB3抗体的平均荧光强度较低，抗体亲和力较差；同时，当候选抗体的浓度偏低时，所有候选抗体的亲和力大致相同，随着抗体浓度的升高，平均荧光强度的差异逐渐变大。

综上所述，本发明提供的检测方法，能够一次检测多种候选抗体在多种浓度下的亲和力，操作步骤简单，具有高通量检测的优势，且检测结果准确，还可以根据所得到的图片对检测结果进行验证。

申请人声明，以上所述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，所属技术领域的技术人员应该明了，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (8)

1.一种检测抗体亲和力的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

获取孔板中待测样品的显微图像，所述待测样品为靶细胞与候选抗体混合并孵育后，再加入携带荧光标记A的二抗混合并孵育后得到的细胞样品，所述待测样品的显微图像经与所述荧光标记A匹配的荧光激发光激发后进行显微成像得到；

分析所述待测样品的显微图像，得到所述待测样品的图像分析结果；

基于所述待测样品的图像分析结果确定所述候选抗体的亲和力；

所述获取孔板中待测样品的显微图像包括：通过高通量细胞分析系统的显微成像模块对孔板上各孔中的待测样品分别进行拍摄，得到各待测样品的显微图像；

或者，通过高通量细胞分析系统的控制样品自动更换模块更新孔板，再由显微成像模块对更新后的孔板上的待测样品进行拍摄，得到所述更新后的孔板上的待测样品的显微图像；

所述方法还包括：通过高通量细胞分析系统的分析处理模块识别所述显微图像中的抗体结合细胞和细胞，根据识别结果得到抗体结合细胞数，并根据所述抗体结合细胞数和总细胞数得到所述抗体结合细胞数占所述总细胞数的百分比；

所述方法还包括：通过高通量细胞分析系统的分析处理模块分别确定显微图像中每个抗体结合细胞的荧光强度，根据各荧光强度和显微图像中的总细胞数，得到各所述抗体结合细胞的平均荧光强度；

所述方法还包括构建拟合曲线确定所述候选抗体的亲和力；

所述拟合曲线由高通量细胞分析系统的分析处理模块进行拟合，所述拟合的方法为：以所述候选抗体的浓度、平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比为变量，得到反映抗体亲和力的剂量依赖曲线图；

所述方法还包括：基于量-效关系方程拟合得到反映抗体亲和力的剂量依赖曲线：

Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((Log EC50-X)*Hill Slope)

X表示候选抗体的浓度；

Y表示候选抗体在X浓度下，待测样品的平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比；

Bottom表示阴性对照孔中待测样品的平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比；

Top表示阳性对照孔中待测样品的平均荧光强度/抗体结合细胞数/抗体结合细胞数占总细胞数的百分比；

EC50表示能引起50％个体有效的候选抗体浓度；

Hill Slope为斜率，通过至少两组XY数据求解得到；

所述孔板有多个样品孔，所述候选抗体至少包括两种类型；

所述多个样品孔中同一类型的候选抗体至少包括两个浓度；

所述靶细胞包括携带荧光标记B的靶细胞，所述荧光标记A和荧光标记B所匹配的荧光激发光不同；

所述方法还包括获取所述荧光标记B匹配的荧光激发光激发后得到的待测样品的显微图像；

所述方法还包括：针对分别在与荧光标记A匹配的荧光通道下拍摄的待测样品的第一显微图像和与荧光标记B匹配的荧光通道下拍摄的所述待测样品的第二显微图像，对所述第一显微图像和所述第二显微图像进行对比，根据对比结果确定各细胞中的当前细胞在所述第一显微图像和所述第二显微图像中的位置信息是否一致。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述候选抗体通过梯度稀释得到不同浓度。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品的图像分析结果包括：平均荧光强度、总细胞数、抗体结合细胞数或抗体结合细胞数占总细胞数的百分比中的任意一种或至少两种的组合。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述靶细胞与候选抗体混合前，获取所述靶细胞的显微图像并基于所述靶细胞的显微图像确定所述靶细胞的数量。

5.一种用于执行权利要求1所述的检测抗体亲和力的方法的系统，其特征在于，所述系统包括如下模块：

显微成像模块，用于获取孔板中待测样品显微图像，所述待测样品为靶细胞与候选抗体混合并孵育后，再加入携带荧光标记A的二抗混合并孵育后得到的细胞样品，所述待测样品的显微图像经与所述荧光标记A匹配的荧光激发光激发后进行显微成像得到；

分析处理模块，用于分析所述待测样品的显微图像，得到所述待测样品的图像分析结果及基于所述待测样品的图像分析结果确定所述候选抗体的亲和力。

6.根据权利要求5所述的系统，其特征在于，所述系统还包括：

样品台模块，用于承载所述孔板，所述孔板有多个样品孔，用于承载至少两种类型的候选抗体，所述多个样品孔中同一类型的候选抗体至少包括两个浓度，所述显微成像模块对所述孔板上各孔中的待测样品分别进行拍摄，得到各待测样品的显微图像。

7.根据权利要求6所述的系统，其特征在于，所述系统还包括：

样品自动更换模块，用于更新孔板，再由显微成像模块对更新后的孔板上的待测样品进行拍摄，得到所述更新后的孔板上的待测样品的显微图像。

8.如权利要求1～4任一项所述的检测抗体亲和力的方法或如权利要求5～7所述的检测抗体亲和力的系统在抗体筛选或抗体药研发中的应用。

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