CN112898281B - 一种皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮c的制备方法及其应用 - Google Patents

一种皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮c的制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C的制备方法及其应用，可有效解决快速从皂角刺中提取黄酮类化合物皂荚新酮C，实现制备抗脓毒症急性肾损伤药物中的应用问题，其解决的技术方案是，其制备方法包括以下步骤：1）制备粗提取物；2）一次分离；3）二次分离；4）纯化；本发明制备方法分离效率高、时间短，溶剂消耗量小，样品回收率高，得到的目标成分纯度高，所得皂荚新酮C对脂多糖诱导的肾损伤具有较好的保护作用，有效用于制备治疗脓毒症或者其它感染因素引起的肾损伤的药物，是皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C新用途上的创新。

Description

一种皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是一种皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C的制备方法及其应用。
背景技术
脓毒症是由感染引起的全身炎症反应，常常引起多组织损伤及功能障碍。目前，脓毒症已成为重症监护病房(ICU)患者死亡的主要原因，是1～7岁患儿的第七大致死原因和65～75岁老人的第八大致死原因，急性肾损伤(acute kidney injury，AKI)是脓毒症常见并发症，是脓毒症患者病死率升高的独立危险因素，其严重程度与脓毒症的高病死率显著相关。随着我国人口老龄化的加剧、侵入性医疗手段和免疫抑制剂的应用，脓毒症急性肾损伤的发病率呈逐年升高趋势。有研究表明，住院脓毒症患者中急性肾损伤发病率为68.4％，院内死亡率高达30.2％。如何预防和治疗脓毒症并发症急性肾损伤，成为非常严峻的医学问题。
中草药在细胞保护方面的应用历史悠久，从中草药中寻找具有肾细胞保护的活性物质，研制特异性强、毒副作用小的新型药物具有重要的社会效益和经济效益。
皂角刺为皂荚属皂荚(Gleditsia sinensis Lam.)的干燥棘刺，又称皂刺、皂针、天丁等，具有消肿托毒、排脓、杀虫等功效。皂角刺广泛分布于我国河南、河北、江苏等省区，在日本、韩国也有广泛分布，全年均可采收。化学成分研究表明皂角刺主要含有黄酮类、酚酸类和萜类等成分，黄酮类化合物为皂角刺中主要活性成分，具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化等活性，但至今未见有从皂角刺中提取黄酮类化合物用于制备抗脓毒症急性肾损伤药物的公开报导。
发明内容
针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C的制备方法及其应用，可有效解决快速从皂角刺中提取黄酮类化合物皂荚新酮C，实现制备抗脓毒症急性肾损伤药物中的应用问题。
本发明解决的技术方案是，一种皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C，分子结构式为：
Figure BDA0002924198790000011
其制备方法包括以下步骤：
1)制备粗提取物，方法是，将皂角刺粉碎，过40目筛，每次用皂角刺重量8～10倍的体积浓度为50％的含水丙酮溶液(体积比)，提取3次，每次2～3min，合并3次提取液，减压浓缩至相当于含生药量1.2g/mL的浓缩物，加浓缩物重量体积3～5倍量的蒸馏水混悬，再依次加入与混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏，即皂角刺粗提取物；所述的重量体积是指固体物以g计，液体物以mL计，以下同，如浓缩物为1g时，蒸馏水为3～5mL；
2)一次分离，方法是，乙酸乙酯萃取部位的浸膏经硅胶柱色谱初步分离，采用体积比为25:1、12:1的二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，流速为20mL/min，每200mL为1个流份，每个梯度洗脱250min，收集一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份；
3)二次分离，将一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份再经硅胶柱色谱进一步分离，采用体积比为10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，流速为10mL/min，每50mL为1个流份，每个梯度洗脱120min，收集得二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份；
4)纯化，将二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份采用半制备液相进行纯化，采用体积比为35:65的甲醇-水进行洗脱，流速为3mL/min，洗脱30min，收集洗脱液，45℃减压浓缩、干燥，得到皂荚新酮C。
所述的皂荚新酮C在制备抗脓毒症急性肾损伤药物中的应用。
本发明制备方法分离效率高、时间短，溶剂消耗量小，样品回收率高，得到的目标成分纯度高，所得皂荚新酮C对脂多糖诱导的肾损伤具有较好的保护作用，有效用于制备治疗脓毒症或者其它感染因素引起的肾损伤的药物，是皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C新用途上的创新。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1
本发明在具体实施中，具体包括以下步骤：
1)制备粗提取物，方法是，将皂角刺4.87kg粉碎，过40目筛，每次用皂角刺重量8倍的体积浓度为50％的含水丙酮溶液(体积比)，提取3次，每次3min，合并3次提取液，减压浓缩至相当于含生药量1.2g/mL的浓缩物，加浓缩物重量体积3倍量的蒸馏水混悬，再依次加入与混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏(89.5g皂角刺粗提取物)；
2)一次分离，方法是，乙酸乙酯萃取部位的浸膏用过100～200目筛的硅胶100g拌样，上含有过100～200目筛的硅胶1000g的硅胶柱，经硅胶柱色谱初步分离，采用体积比为25:1、12:1的二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，流速为20mL/min，每200mL为1个流份，每个梯度洗脱250min，收集一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份；
3)二次分离，将一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份再经硅胶柱色谱进一步分离，采用体积比为10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，流速为10mL/min，每50mL为1个流份，每个梯度洗脱120min，收集得二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份；
4)纯化，将二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份采用半制备液相进行纯化，采用体积比为35:65的甲醇-水进行洗脱，流速为3mL/min，洗脱30min，收集洗脱液，45℃减压浓缩、干燥，得到皂荚新酮C。
实施例2
本发明在具体实施中，具体包括以下步骤：
1)制备粗提取物，方法是，将皂角刺5.04kg粉碎，过40目筛，每次用皂角刺重量10倍体积浓度为50％的含水丙酮溶液(体积比)提取3次，每次2min，合并3次提取液，减压浓缩至相当于含生药量1.2g/mL的浓缩物，加浓缩物重量体积4倍量的蒸馏水混悬，再依次加入与混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏(85.6g皂角刺粗提取物)；
2)一次分离，方法是，乙酸乙酯萃取部位的浸膏用过100～200目筛的硅胶90g拌样，上含有过100～200目筛的硅胶900g的硅胶柱，经硅胶柱色谱初步分离，采用体积比为25:1、12:1的二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，流速为20mL/min，每200mL为1个流份，每个梯度洗脱250min，收集一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份；
3)二次分离，将一次分离得到的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份再经硅胶柱色谱进一步分离，采用体积比为10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，流速为10mL/min，每50mL为1个流份，每个梯度洗脱120min，收集得到二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份；
4)纯化，将二次分离得到的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份采用半制备液相进行纯化，采用体积比为35:65的甲醇-水进行洗脱，流速为3mL/min，洗脱30min，收集洗脱液，45℃减压浓缩、干燥，得到皂荚新酮C。
实施例3
本发明在具体实施中，具体包括以下步骤：
1)制备粗提取物，方法是，将皂角刺5.62kg粉碎，过40目筛，每次用皂角刺重量9倍的体积浓度为50％的含水丙酮溶液(体积比)，提取3次，每次3min，合并3次提取液，减压浓缩至相当于含生药量1.2g/mL的浓缩物，加浓缩物重量体积4倍量的蒸馏水混悬，再依次加入与混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏(92.6g皂角刺粗提取物)；
2)一次分离，方法是，乙酸乙酯萃取部位的浸膏用过100～200目筛的硅胶100g拌样，上含有过100～200目筛的硅胶1000g的硅胶柱，经硅胶柱色谱初步分离，采用体积比为25:1、12:1的二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，流速为20mL/min，每200mL为1个流份，每个梯度洗脱250min，收集一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份；
3)二次分离，将一次分离得到的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份再经硅胶柱色谱进一步分离，采用体积比为10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，流速为10mL/min，每50mL为1个流份，每个梯度洗脱120min，收集得二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份；
4)纯化，将二次分离得到的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份采用半制备液相进行纯化，采用体积比为35:65的甲醇-水进行洗脱，流速为3mL/min，洗脱30min，收集洗脱液，45℃减压浓缩、干燥，得到皂荚新酮C。
实施例4
本发明在具体实施中，具体包括以下步骤：
1)制备粗提取物，方法是，将皂角刺4.79kg粉碎，过40目筛，每次用皂角刺重量8倍体积浓度为50％的含水丙酮溶液(体积比)，提取3次，每次2min，合并3次提取液，减压浓缩至相当于含生药量1.2g/mL的浓缩物，加浓缩物重量体积5倍量的蒸馏水混悬，再依次加入与混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏(85.4g皂角刺粗提取物)；
2)一次分离，方法是，乙酸乙酯萃取部位的浸膏用过100～200目筛的硅胶90g拌样，上含有过100～200目筛的硅胶900g的硅胶柱，经硅胶柱色谱初步分离，采用体积比为25:1、12:1的二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，流速为20mL/min，每200mL为1个流份，每个梯度洗脱250min，收集一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份；
3)二次分离，将一次分离得到的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份再经硅胶柱色谱进一步分离，采用体积比为10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，流速为10mL/min，每50mL为1个流份，每个梯度洗脱120min，收集得二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份；
4)纯化，将二次分离得到的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份采用半制备液相进行纯化，采用体积比为35:65的甲醇-水进行洗脱，流速为3mL/min，洗脱30min，收集洗脱液，45℃减压浓缩、干燥，得到皂荚新酮C。
本发明制备的皂荚新酮C，具有肾细胞保护活性，可用于制备各种原因引起的肾损伤治疗药物，并经实验得到了充分证明，相关试验资料如下：
一、皂荚新酮C结构鉴定(以实施例1为例)：
上述化合物经过核磁共振光谱(1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、1H-1HCOSY、NOESY)及高分辨质谱(HR-ESI-MS)光谱技术鉴定其化学结构：
皂荚新酮C：黄色粉末，易溶于甲醇。
Figure BDA0002924198790000052
经HR ESI MS测定得到其准分子离子峰[M+H]+m/z:535.1201(C31H35O12计算值为535.1210)。
1H NMR(500MHz,CD3OD)中，δH 6.94(1H,br s,H-6'),6.91(1H,br s,H-2'),6.71(2H,br s,H-2”,6”),5.92(1H,d,J＝1.9Hz,H-8),5.89(1H,d,J＝1.9Hz,H-6)为三个1,3,4,5-四取代苯环上的氢信号；δH 5.59(1H,d,J＝6.0Hz,H-7”),4.94(1H,d,J＝11.5Hz,H-2),4.52(1H,d,J＝11.5Hz,H-3)为三个次甲基氢信号；δH 3.88(1H,dd,J＝11.1,5.1Hz,H-9”a),3.83(1H,m,H-9”b)为一个亚甲基氢信号；δH 3.82(3”,5”-OCH3)为甲氧基氢信号。13CNMR(125MHz,CD3OD)中共出现25个碳信号，δ198.3为羰基碳信号，综合HSQC和HMBC可以知道δ198.3(C-4)，168.7(C-7)，165.3(C-5)，164.5(C-9)，149.4(C-4')，142.2(C-3')，129.9(C-5')，131.7(C-1')，116.9(C-2')，116.6(C-6')，101.8(C-10)，97.3(C-6)，96.3(C-8)，85.2(C-2)，73.8(C-3)，是二氢黄酮醇C6-C3-C6结构片段的碳信号；δ149.4(C-3,5”)，136.3(C-4”)，134.1(C-1”)，104.0(C-2”,6”)，89.1(C-7”)，64.9(C-9”)，55.8(C-8”)为苯丙素C6-C3结构片段的碳信号；以上信号与silychristin A基本一致，该化合物相对silychristin A多一个甲氧基，结合HMBC谱中相关信号推断出甲氧基所连位置。综合以上分析，可得出化合物的结构，经文献检索发现为一新化合物，命名为皂荚新酮C。
表1皂荚新酮C的核磁数据
Figure BDA0002924198790000051
Figure BDA0002924198790000061
aNMRspectroscopicdatawererecordedinCD3ODat500MHz(1HNMR)and125MHz(13CNMR)
上述化合物属于皂角刺中具有肾细胞保护活性的黄酮类化合物皂荚新酮C。
实施例2-4的化合物粉末经过核磁共振(1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、1H-1HCOSY、NOESY)及高分辨率质谱(HR-ESI-MS)等光谱学技术进行鉴定(同实施例1中的化合物的结构鉴定)，分子结构相同，均为皂角刺中具有肾细胞保护活性的黄酮类化合物皂荚新酮C，其他实施例亦相同，不再一一详述。
二、活性实验
本发明方法提取分离得到的皂荚新酮C经药理学实验证明，可有效抑制脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK52e)的凋亡，可用于制备各种原因引起的肾损伤治疗药物，有关实验资料如下：
用DMEM培养基将细胞复苏、传代，取对数期的细胞，以培养基将细胞分散，使成为密度为2×104cell/mL的单细胞悬液，并以每孔0.2mL接种于96孔板中，培养24h后，将细胞分为对照组、模型组及不同用药组，正常组加入等量培养基，模型组加入浓度为1mg/mL的LPS培养基溶液(终浓度为1μg/mL)，不同用药组加入浓度为0.1、1、10、50、100μM的待测化合物和浓度为1μg/mL的脂多糖。培养24h后每孔加入MTT溶液(5mg/mL)
20μL，37℃继续培养4h，小心吸净培养基，每孔加入150μLDMSO，震荡10min，使结晶物完全溶解。以DMSO调零，用酶标仪在490nm下测定各孔的吸光度值(A)，用下面公式计算药物对细胞的抑制率，根据计算得到的各浓度的抑制率通过SPSS18.0软件处理得到半数有效浓度(EC50)，重复测试3次，取平均值为最终结果。
Figure BDA0002924198790000062
通过检测皂荚新酮C对LPS诱导的NRK52e细胞凋亡的影响，EC50值分别为8.3μM，经反复实验均取得了相同或相近似的结果。
以上表明，本发明采用硅胶柱色谱法富集目标成分，再用硅胶柱色谱法结合制备液相分离纯化，建立了皂角刺中一个痕量的黄酮类化合物皂荚新酮C的快速制备方法，制备出的皂荚新酮C可有效抑制LPS诱导的肾脏细胞凋亡，有效用于制备治疗脓毒症或其它感染因素引起的肾损伤的药物，开辟了皂角刺用于肾细胞保护作用药物的新用途，是治疗肾损伤药物上的创新，开辟了皂角刺的药用新途径和商业价值。

Claims (6)

1.一种皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C的制备方法，其特征在于，分子结构式为：
Figure FDA0002924198780000011
其制备方法包括以下步骤：
1)制备粗提取物，方法是，将皂角刺粉碎，过40目筛，每次用皂角刺重量8～10倍的体积浓度为50％的含水丙酮溶液，提取3次，每次2～3min，合并3次提取液，减压浓缩至相当于含生药量1.2g/mL的浓缩物，加浓缩物重量体积3～5倍量的蒸馏水混悬，再依次加入与混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏，即皂角刺粗提取物；所述的重量体积是指固体物以g计，液体物以mL计，以下同，如浓缩物为1g时，蒸馏水为3～5mL；
2)一次分离，方法是，乙酸乙酯萃取部位的浸膏经硅胶柱色谱初步分离，采用体积比为25:1、12:1的二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，流速为20mL/min，每200mL为1个流份，每个梯度洗脱250min，收集一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份；
3)二次分离，将一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份再经硅胶柱色谱进一步分离，采用体积比为10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，流速为10mL/min，每50mL为1个流份，每个梯度洗脱120min，收集得二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份；
4)纯化，将二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份采用半制备液相进行纯化，采用体积比为35:65的甲醇-水进行洗脱，流速为3mL/min，洗脱30min，收集洗脱液，45℃减压浓缩、干燥，得到皂荚新酮C。
2.根据权利要求1所述的皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1)制备粗提取物，方法是，将皂角刺4.87kg粉碎，过40目筛，每次用皂角刺重量8倍的体积浓度为50％的含水丙酮溶液，提取3次，每次3min，合并3次提取液，减压浓缩至相当于含生药量1.2g/mL的浓缩物，加浓缩物重量体积3倍量的蒸馏水混悬，再依次加入与混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏；
2)一次分离，方法是，乙酸乙酯萃取部位的浸膏用过100～200目筛的硅胶100g拌样，上含有过100～200目筛的硅胶1000g的硅胶柱，经硅胶柱色谱初步分离，采用体积比为25:1、12:1的二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，流速为20mL/min，每200mL为1个流份，每个梯度洗脱250min，收集一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份；
3)二次分离，将一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份再经硅胶柱色谱进一步分离，采用体积比为10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，流速为10mL/min，每50mL为1个流份，每个梯度洗脱120min，收集得二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份；
4)纯化，将二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份采用半制备液相进行纯化，采用体积比为35:65的甲醇-水进行洗脱，流速为3mL/min，洗脱30min，收集洗脱液，45℃减压浓缩、干燥，得到皂荚新酮C。
3.根据权利要求1所述的皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1)制备粗提取物，方法是，将皂角刺5.04kg粉碎，过40目筛，每次用皂角刺重量10倍体积浓度为50％的含水丙酮溶液提取3次，每次2min，合并3次提取液，减压浓缩至相当于含生药量1.2g/mL的浓缩物，加浓缩物重量体积4倍量的蒸馏水混悬，再依次加入与混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏；
2)一次分离，方法是，乙酸乙酯萃取部位的浸膏用过100～200目筛的硅胶90g拌样，上含有过100～200目筛的硅胶900g的硅胶柱，经硅胶柱色谱初步分离，采用体积比为25:1、12:1的二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，流速为20mL/min，每200mL为1个流份，每个梯度洗脱250min，收集一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份；
3)二次分离，将一次分离得到的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份再经硅胶柱色谱进一步分离，采用体积比为10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，流速为10mL/min，每50mL为1个流份，每个梯度洗脱120min，收集得到二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份；
4)纯化，将二次分离得到的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份采用半制备液相进行纯化，采用体积比为35:65的甲醇-水进行洗脱，流速为3mL/min，洗脱30min，收集洗脱液，45℃减压浓缩、干燥，得到皂荚新酮C。
4.根据权利要求1所述的皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1)制备粗提取物，方法是，将皂角刺5.62kg粉碎，过40目筛，每次用皂角刺重量9倍的体积浓度为50％的含水丙酮溶液，提取3次，每次3min，合并3次提取液，减压浓缩至相当于含生药量1.2g/mL的浓缩物，加浓缩物重量体积4倍量的蒸馏水混悬，再依次加入与混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏；
2)一次分离，方法是，乙酸乙酯萃取部位的浸膏用过100～200目筛的硅胶100g拌样，上含有过100～200目筛的硅胶1000g的硅胶柱，经硅胶柱色谱初步分离，采用体积比为25:1、12:1的二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，流速为20mL/min，每200mL为1个流份，每个梯度洗脱250min，收集一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份；
3)二次分离，将一次分离得到的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份再经硅胶柱色谱进一步分离，采用体积比为10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，流速为10mL/min，每50mL为1个流份，每个梯度洗脱120min，收集得二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份；
4)纯化，将二次分离得到的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份采用半制备液相进行纯化，采用体积比为35:65的甲醇-水进行洗脱，流速为3mL/min，洗脱30min，收集洗脱液，45℃减压浓缩、干燥，得到皂荚新酮C。
5.根据权利要求1所述的皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
1)制备粗提取物，方法是，将皂角刺4.79kg粉碎，过40目筛，每次用皂角刺重量8倍体积浓度为50％的含水丙酮溶液，提取3次，每次2min，合并3次提取液，减压浓缩至相当于含生药量1.2g/mL的浓缩物，加浓缩物重量体积5倍量的蒸馏水混悬，再依次加入与混悬液等体积的石油醚、乙酸乙酯，减压回收溶剂，得到乙酸乙酯萃取部位的浸膏；
2)一次分离，方法是，乙酸乙酯萃取部位的浸膏用过100～200目筛的硅胶90g拌样，上含有过100～200目筛的硅胶900g的硅胶柱，经硅胶柱色谱初步分离，采用体积比为25:1、12:1的二氯甲烷-甲醇系统进行梯度洗脱，流速为20mL/min，每200mL为1个流份，每个梯度洗脱250min，收集一次分离的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份；
3)二次分离，将一次分离得到的二氯甲烷-甲醇体积比为12:1洗脱流份再经硅胶柱色谱进一步分离，采用体积比为10:1、5:1的石油醚-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱，流速为10mL/min，每50mL为1个流份，每个梯度洗脱120min，收集得二次分离的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份；
4)纯化，将二次分离得到的石油醚-乙酸乙酯体积比为5:1洗脱流份采用半制备液相进行纯化，采用体积比为35:65的甲醇-水进行洗脱，流速为3mL/min，洗脱30min，收集洗脱液，45℃减压浓缩、干燥，得到皂荚新酮C。
6.权利要求1-5任一项所述的皂角刺中黄酮类化合物皂荚新酮C的制备方法制备的皂荚新酮C在制备抗脓毒症急性肾损伤药物中的应用。
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