CN112881696A - 一种稳定检测黄曲霉毒素含量的检测方法及系统 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种稳定检测黄曲霉毒素含量的检测方法及系统，该检测系统包括密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条、孵育器、检测读数仪，本发明的方法使不同种类的黄曲霉毒素在使用不同批次的抗原或抗体检测中保持稳定结合，批间和批内变异系数均小于10％。本发明检测系统和配合检测方法联合使用，检测结果十分稳定，且准确度和灵敏度高。

Description

一种稳定检测黄曲霉毒素含量的检测方法及系统

技术领域

本发明涉及黄曲霉毒素检测的领域，尤其是涉及一种稳定检测多种黄曲霉毒素的含量的检测系统和方法。

背景技术

黄曲霉毒素是真菌产生的毒性次级代谢物，一种真菌可能产生多种毒素，多种真菌也可能产生一种毒素。全球已经发现的黄曲霉毒素有1000多种，被分离鉴定的有20多种，其中危害较大的主要有黄曲霉毒素AFB1、呕吐毒素(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、赭曲霉毒素A(OTA)、伏马毒素(FUM)和T-2毒素。黄曲霉毒素广泛存在于粮油食品和饲料中。据联合国粮农组织估计，全球每年约有25％的谷物受到黄曲霉毒素的污染，2％的农作物因污染严重而失去营养和经济价值。据国家粮食局统计，我国每年由黄曲霉毒素造成的粮油损失约3100万吨，超过甘肃、青海、宁夏、西藏和陕西5个西部省区全年粮食产量的总和。据测算，如果拥有科学的黄曲霉毒素防控及检测措施，中国每年能减少约850亿元损失。黄曲霉毒素也广泛存在于中药材及饮片中，中药材采集后不及时干燥、贮存不当或在制备与加工过程中处理不善，均可能被各种真菌污染并产生黄曲霉毒素。近年来有诸多文献报道中药材及其他药用植物受黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A、伏马菌素和玉米赤霉烯酮污染的报道。多篇报道表明，国内中药材AFB1污染普遍，污染水平在0.12-202.00μg·kg-1，其中陈皮、麦冬、当归、薏苡仁、胖大海、神曲等药材污染报道较多。

黄曲霉毒素会通过被污染的谷物、饲料、中药材和由被黄曲霉毒素污染的饲料喂养的动物所提供的动物性食品进入我们的食物链，从而对人畜表现出致癌性、遗传毒性、致畸性，其中，毒性最强的是黄曲霉毒素，被世界卫生组织的癌症研究机构(IARC)划定为I类致癌物。由于黄曲霉毒素污染的广泛性及危害的严重性，我国规定了食品、饲料、中药材及饮片中黄曲霉毒素的限量。《中国药典》(2020年版)中明确规定了24种中药材及其饮片中黄曲霉毒素B1的限量为5μg/kg，黄曲霉毒素总量的限量为l0μg/kg,并增加了黄曲霉毒素的检测方法。

黄曲霉毒素的检测方法主要包括仪器方法、酶联免疫法(ELISA)、胶体金试纸条法等。仪器方法包括高效液相色谱法、液质联用等，此类方法准确度、灵敏度和精密度高，但是需要昂贵的仪器和试剂，检测成本较高、耗时长、操作复杂，对操作人员的技术水平要求高，在实际应用过程中有很大的限制性，不适宜现场快速检测；酶联免疫法(ELISA)特异性好，灵敏度高，但操作步骤繁琐，检测时间通常为30-120分钟，并且存在基质效应，样品前处理复杂，只能应用于实验室，随着胶体金试纸条的广泛应用，该方法的应用越来越少。而胶体金试纸条法操作简单，检测速度快，特异性和灵敏度高，成本低，非常适用于基层、企业进行现场快速筛查。但是传统的胶体金试纸条在使用时，需要撕开包装，使得试纸暴露在空气中，出现以下问题：首先，试纸与试剂的反应过程暴露在空气中，不仅会发生氧化反应，而且随着反应的进行，样品会发生挥发，使样品体积发生变化，从而降低检测数据的准确度。其次，试纸条暴露于空气中，容易使检测条受潮，导致检测条失效。另外，试纸条的检测区域(T线和C线区域)易被污染，一旦手指触碰到检测区域，会影响结果判读，需要重新检测；黄曲霉毒素本身没有免疫原性，不能单独激发动物免疫系统产生抗体，因此需要与大分子载体蛋白进行偶联，获得人工免疫全抗原，导致黄曲霉毒素的全抗原制备过程比较复杂。相应的，黄曲霉毒素的高效特异性抗体的制备工序也很繁杂。目前，即使是同一来源的用于黄曲霉毒素量检测的抗原/抗体，不同生产批次间也普遍存在免疫结合的不稳定性。这就导致了检测人员采用不同批次的抗体或抗原检测黄曲霉毒素量时获得的结果相差较大。因此，亟需一种能够稳定不同批次抗体或抗原的检测结果的方法。

其次，为了促进样品在试纸条中的流动，试纸条在孵育过程中需要进行孵育，而光线能够影响检测结果的准确性，孵育因此过程中需要进行遮光处理，孵育器上安装有遮光封盖，但是传统的遮光封盖在盖合时并不能够达到紧固的作用，因此在检测过程中，遮光封盖一旦受到碰撞被迫打开，那么光线则会照射到孵育器上，影响检测结果。

最后，采用胶体金定量试纸条检测黄曲霉毒素，需要用到读数仪以方便使用者读取数值，但是传统的读数仪在拆装时不方便，其大多数是采用螺丝固定的，安装的螺丝多，安装耗费的时间也多，而且在检修时需要花费大量的时间，将螺丝拆除，费时费力，麻烦异常。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种稳定检测多种黄曲霉毒素的含量的检测系统和方法。

其中，检测系统包括密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条、孵育器和检测读数仪；所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条的外壳上具有向外凸出的放置腔，其与试纸条主体一端的海绵垫配合使用，放置腔一端是由外向内倾斜的内腔，具有导流作用；所述孵育器和所述检测读数仪上均设置有配合所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条使用的放置槽口。

上述检测系统中一种密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条，采用如下的技术方案：包括外壳底壳，所述外壳底壳的顶部嵌入式设置有外壳顶壳，所述外壳顶壳的底部固定有试纸条主体，所述试纸条主体一端固定连接有海绵垫，所述试纸条主体的另一端涂覆有颜色识别涂层，所述外壳底壳开设放置腔一，用于放置所述试纸条主体；所述放置腔一内腔一侧带有导流甬道，所述导流甬道内腔向其一端开设有放置腔二，所述放置腔二与所述试纸条主体一端固定连接的所述海绵垫相配合封闭连接；所述放置腔二是由外向内倾斜的内腔，所述放置腔二中心内腔由外向内设置有导流斜坡，所述导流斜坡的倾斜角度为20-25°。所述外壳顶壳四角设置多个固定凸起，所述外壳底壳相应位置处均开设有与固定凸起相适配的固定凸起卡槽。

通过采用上述技术方案，在实际使用时，相比于传统的试纸检测，该试纸条处于真空状态，在检测时能够避免与空气接触减少产生氧化反应，而且能够保证液体与试纸的充分反应，在读数仪读数的时候，可以提高检测数据的准确性，而且根据不同颜色的区分，也能够对不同种黄曲霉毒素的数据值进行检测。

通过采用上述技术方案，通过固定凸起和固定凸起卡槽的配合使用，当外壳顶壳盖合在外壳底壳上时，固定凸起会嵌入到固定凸起卡槽的内腔进行固定，保证外壳底壳和外壳顶壳的闭合密封性，从而检测数值的准确性。

优选的，放置腔二内腔的右侧设置有导流斜坡，导流斜坡的倾斜角度为20°。

优选的，放置腔一内腔的深度大于导流甬道内腔的深度，放置腔一内腔的宽度与导流甬道内腔的宽度相同。

优选的，放置腔二内腔的深度大于放置腔一内腔的深度，放置腔二内腔的宽度大于导流甬道内腔的宽度。

优选的，海绵垫右端约六分之一的部分通过粘粘剂固定在试纸条主体上，海绵垫左端约六分之五的部分向下垂落约25°。

优选的，外壳顶壳的左侧设置有固定粘粘端，外壳顶壳和固定粘粘端的连接处设置有压痕，固定粘粘端的底部通过粘粘胶固定连接在外壳底壳上。

优选的，外壳底壳和外壳顶壳均为透明材料制成的塑料外壳。

上述检测系统中检测孵育器，采用如下的技术方案：一种能够提高避光效果的真菌毒素检测孵育器，包括孵育器主体，恒温元件，孵育器主体的顶部设置有遮光盖，孵育器主体的顶部固定安装有安装框，安装框和遮光盖通过两个紧固机构固定连接，紧固机构包括固定连接在安装框上的外壳以及固定连接在遮光盖上的顶盖，外壳的顶部嵌入式安装有导向套，顶盖的底部固定连接有插入到外壳内腔的紧固销，外壳内腔的右侧设置有与紧固销相适配的定位机构，外壳的一侧贯穿设置有推杆，推杆顶部的右侧固定连接有与定位机构相适配的推板，推板的一侧固定连接有弹簧一，弹簧一远离推板的一端固定连接在外壳的内壁上，紧固销的底部开设有与推杆相适配的开口。

通过采用上述技术方案，通过在实际使用时，使用者完成前期准备工作后，将遮光盖翻转盖下，如此便能够完成遮光盖的固定，防止光线照射到孵育器上，避免对检测结构造成影响，而且在不使用时，还能够起到不使用时可以对检测口位置进行防尘处理，避免灰尘堆积的作用。

本发明如上的用于能够提高避光效果的真菌毒素检测孵育器，进一步：定位机构包括固定连接在外壳内壁上的固定管，固定管的内腔滑动连接有插销，插销的一侧固定连接有弹簧二，弹簧二远离插销的一端固定连接在固定管的内壁上。

本发明如上的用于能够提高避光效果的真菌毒素检测孵育器，进一步：固定管内腔的顶部和底部均开设有限位滑槽，插销的顶部和底部均固定连接有在限位滑槽内腔滑动的限位滑块。

通过采用上述技术方案，通过限位滑槽和限位滑块的配合使用，在插销滑动时，会带动限位滑块在限位滑槽的内腔滑动，以此对插销进行滑动，从而保证插销滑动时的稳定性。

本发明如上的用于能够提高避光效果的真菌毒素检测孵育器，进一步：安装框顶部左侧的前端和后端均固定连接有转动架，两个转动架之间转动连接有转动轴，转动轴的一侧与遮光盖固定连接。

本发明如上的用于能够提高避光效果的真菌毒素检测孵育器，进一步：安装框的内腔固定安装有放置台，放置台的顶部开设有多个放置腔。该放置腔内腔的凹槽与所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条的所述外壳底壳的腔体相配合。

本发明如上的用于能够提高避光效果的真菌毒素检测孵育器，进一步：导向套的内径是紧固销外径的两倍。

上述检测系统中的真菌毒素检测读数仪，采用如下的技术方案：一种改良前后盖连接结构的真菌毒素检测读数仪，包括读数仪底壳，读数仪底壳的顶部设置有读数仪顶壳，读数仪底壳和读数仪顶壳通过连接机构固定安装，连接机构包括固定安装在读数仪顶壳的两个固定块以及固定安装在读数仪底壳上的外壳，两个固定块的底部固定连接有滑轨，滑轨的表面滑动连接有两个卡销，两个卡销之间固定连接有弹簧，外壳的顶部贯穿设置有导管，两个固定壳均位于导管的内腔，外壳内腔的底部固定安装有螺纹套，螺纹套的内腔螺纹连接有螺纹杆，螺纹杆的顶部转动连接有移动板，移动板的顶部固定连接有固定壳，两个卡销均伸入到固定壳的内腔并卡在卡销的内腔。

通过采用上述技术方案，在实际使用时，能够简便的将读数仪顶壳和读数仪底壳拆装，以便于使用者对读数仪的内部进行检修，整个拆装过程简单快速，方便快捷，省时省力，相比于拆除螺丝能够节省大量的时间，提高拆装效率。

优选的，螺纹杆的底端贯穿至外壳的底部并固定连接有旋转块，旋转块的表面设置有防滑纹。

优选的，外壳内腔的两侧均固定连接有限位轨，移动板的两侧分别贯穿至两个限位轨的外侧，移动板与两个限位轨滑动连接，移动板的两侧均固定连接有挡块。

通过采用上述技术方案，通过限位轨和移动板的配合使用，移动板会在限位轨的内腔滑动，以此对卡销进行限位，保证卡销移动时的稳定性，而且也能够防止卡销跟随螺纹杆自转。

优选的，固定壳两侧的底部均开设有与两个卡销相适配的卡口。

优选的，两个卡销的底部均设置有斜面，斜面的倾斜角度为十五度。

优选的，读数仪顶壳顶部的一侧设置有显示屏，显示屏倾斜十度安装在读数仪顶壳上。

优选的，两个连接机构中部设置有试纸插槽。该插槽的凹槽与所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条的所述外壳底壳的腔体相配合

本发明还提供一种采用上述的检测系统稳定检测样品中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2，或其总量的方法，包括以下步骤：

1)中药样品在检测前的样品处理；

2)移取处理后的样品液至所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条的一端，打开所述外壳底壳一端，使样品液沿所述放置腔二中的导流斜坡进入试纸条的所述海绵垫内，随后密封；

3)将所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条放入所述孵育器内，所述外壳底壳一面朝下放置在孵育器的放置腔内腔的凹槽；将黄曲霉毒素特异性抗体与对应抗原在高于37℃的温度下进行孵育；

4)取出检测条，并将其放入对应的所述检测读数仪中读取结果；其中插入所述检测读数仪的试纸条前端是涂覆有颜色识别涂层的一端。

进一步的，所述样品处理步骤如下：

a)称取粉末样品至离心管中，加入甲醇，振荡；

b)室温下离心；

c)取上清液至干净离心管中，干燥；

d)加入去离子水涡旋，再加入氯仿振荡，室温下离心；

e)取下层氯仿液至离心管中，干燥，加入烷烃涡旋，再加入磷酸盐缓冲液涡旋，室温下离心，取下层液，即得。

本发明所检测的黄曲霉毒素可以是黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2，或其总量；即黄曲霉毒素的总量，或某一种黄曲霉毒素的含量，取决于试纸条所采用的抗体类型。

进一步的，所述温度为45-50℃，最优选50℃。

本发明的采用黄曲霉素专用监测系统及检测方法，能稳定不同批次抗体或抗原的检测结果的免疫试纸快速检测方法。

所述中药可以为药材、饮片或中药制剂。

所述免疫检测条为采用抗体包被玻璃纤维膜的检测条。

本发明所检测的黄曲霉毒素是指黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2，或其总量。

一般，抗黄曲霉毒素的单克隆抗曲霉毒素B1的反应率较高，有的能达到100％，而对黄曲霉毒素G1或G2的交叉反应率则较低，有的交叉反应率只有不到20％。本发明选用的商品化的黄曲霉毒素含量测定用抗体的交叉反应率：AFB1和AFB2大于95％，AFG1和AFG2大于30％。

所述抗体为黄曲霉毒素特异性单克隆抗体或多克隆抗体。

有益效果：

1.本发明的一种稳定检测多种黄曲霉毒素的含量的检测系统和方法，采用免疫检测条稳定检测中药中黄曲霉毒素的量，使不同种类的黄曲霉毒素在使用不同批次的抗原或抗体检测中保持稳定结合，批间和批内变异系数均小于10％。本发明检测系统和配合检测方法联合使用，检测结果十分稳定，且准确度和灵敏度高。

2.本发明通过单独或联合运用多种技术手段实现了对黄曲霉毒素量的准确、稳定的定量检测，并适用于多种检测情境。而且，本发明还对多因素进行了优化，获得了最佳的检测效果。

3.为了获得稳定的检测结果，本发明对整套黄曲霉毒素检测系统进行了改进，包括密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条、孵育器和检测读数仪。其中，本发明的试纸条是封闭式试纸条，其孵育、读数均在密封环境下进行，在实际使用时，相比于传统的试纸检测，该试纸条处于封闭状态，在检测时能够避免与空气接触减少产生氧化反应，而且能够保证液体与试纸的充分反应，在读数仪读数的时候，可以提高检测数据的准确性，而且根据不同颜色的区分，也能够对不同黄曲霉毒素，如B1、B2、G1和G2，或其总量的数据值进行检测。通过固定凸起和固定凸起卡槽的配合使用，当外壳顶壳盖合在外壳底壳上时，固定凸起会嵌入到固定凸起卡槽的内腔进行固定，保证外壳底壳和外壳顶壳的闭合密封性，从而检测数值的准确性。

4.本发明通过在孵育器实际使用时，使用者完成前期准备工作后，将遮光盖翻转盖下，如此便能够完成遮光盖的固定，防止光线照射到孵育器上，避免对检测结构造成影响，而且在不使用时，还能够起到不使用时可以对检测口位置进行防尘处理，避免灰尘堆积的作用。通过限位滑槽和限位滑块的配合使用，在插销滑动时，会带动限位滑块在限位滑槽的内腔滑动，以此对插销进行滑动，从而保证插销滑动时的稳定性。

5.本发明在实际使用时，能够简便的将读数仪顶壳和读数仪底壳拆装，以便于使用者对读数仪的内部进行检修，整个拆装过程简单快速，方便快捷，省时省力，相比于拆除螺丝能够节省大量的时间，提高拆装效率。通过限位轨和移动板的配合使用，移动板会在限位轨的内腔滑动，以此对卡销进行限位，保证卡销移动时的稳定性，而且也能够防止卡销跟随螺纹杆自转。

附图说明

图1为试纸条整体结构图；

图2为试纸条外壳底壳和外壳顶壳立体展开图；

图3为试纸条外壳底壳和外壳顶壳主视图；

图4为试纸条外壳底壳的主视图；

图5为孵育器结构示意图；

图6为孵育器立体展开图；

图7为孵育器紧固机构主视剖面图；

图8为孵育器紧固销立体仰视图；

图9为读数仪整体结构图；

图10为读数仪连接机构主视剖面图；

图11为读数仪连接机构局部立体图；

图12为读数仪外壳立体图；

图13为读数仪图9中A的局部放大图。

附图标记说明：1、外壳底壳；2、外壳顶壳；3、固定粘粘端；4、压痕；5、固定凸起；6、固定凸起卡槽；7、放置腔一；8、导流甬道；9、放置腔二；10、导流斜坡；11、试纸条主体；12、海绵垫；13、颜色识别涂层；14、孵育器主体；15、遮光盖；16、紧固机构；17、安装框；18、放置台；19、放置腔；20、转动架；21、转动轴；22、读数仪底壳；23、读数仪顶壳；24、连接机构；25、显示屏；26、试纸插槽；161、外壳；162、顶盖；163、导向套；164、紧固销；165、定位机构；166、推杆；167、推板；168、弹簧一；169、开口；165-1、固定管；165-2、插销；165-3、弹簧二；165-4、限位滑槽；165-5、限位滑块；241、外壳；242、导管；243、固定壳；244、弹簧；245、卡销；246、滑轨；247、固定块；248、移动板；249、螺纹杆；241-0、螺纹套；241-1、旋转块；241-2、限位轨；241-3、挡块。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。

需要说明的是，本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本发明的实施例。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。

在本发明中，术语“上”、“下”、“左”、“右”、“前”、“后”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“中”、“竖直”、“水平”、“横向”、“纵向”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系。这些术语主要是为了更好地描述本发明及其实施例，并非用于限定所指示的装置、元件或组成部分必须具有特定方位，或以特定方位进行构造和操作。

并且，上述部分术语除了可以用于表示方位或位置关系以外，还可能用于表示其他含义，例如术语“上”在某些情况下也可能用于表示某种依附关系或连接关系。对于本领域普通技术人员而言，可以根据具体情况理解这些术语在本发明中的具体含义。

另外，术语“多个”的含义应为两个以及两个以上。

需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。

实施例1密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条

结合图1和图4，本发明实施例公开一种密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条，包括外壳底壳1，外壳底壳1的顶部嵌入式设置有外壳顶壳2，外壳顶壳2底部右侧的前端和后端均固定连接有固定凸起5，外壳底壳1顶部右侧的前端和后端均开设有与固定凸起5相适配的固定凸起卡槽6，外壳顶壳2的底部固定安装有试纸条主体11，试纸条主体11底部的右侧固定连接有海绵垫12，试纸条主体11的左端涂覆有颜色识别涂层13，外壳底壳1顶部的左侧开设放置腔一7，放置腔一7内腔的右侧开设有导流甬道8，导流甬道8内腔的右侧开设有放置腔二9，通过固定凸起5和固定凸起卡槽6的配合使用，当外壳顶壳2盖合在外壳底壳1上时，固定凸起5会嵌入到固定凸起卡槽6的内腔进行固定，保证外壳底壳1和外壳顶壳2的闭合密封性，从而检测数值的准确性，放置腔二9内腔的右侧设置有导流斜坡10，导流斜坡10的倾斜角度为二十度，放置腔一7内腔的深度大于导流甬道8内腔的深度，放置腔一7内腔的宽度与导流甬道8内腔的宽度相同，放置腔二9内腔的深度大于放置腔一7内腔的深度，放置腔二9内腔的宽度大于导流甬道8内腔的宽度，海绵垫12右端约六分之一的部分通过粘粘剂固定在试纸条主体11上，海绵垫12左端约六分之五的部分向下垂落约二十五度，外壳顶壳2的左侧设置有固定粘粘端3，外壳顶壳2和固定粘粘端3的连接处设置有压痕4，固定粘粘端3的底部通过粘粘胶固定连接在外壳底壳1上，外壳底壳1和外壳顶壳2均为透明材料制成的塑料外壳。

在实际使用时，使用者将外壳顶壳2的右端向上撕开，使得外壳顶壳2的右端与外壳底壳1分离，撕开外壳顶壳2的右端直至漏出放置腔二9，进而放置腔二9内的试纸条主体11则会漏出，需要说明的是，放置腔二9在暴露前，是处于真空状态的，不需要全部撕开，只要撕开一个口子即可，以避免撕开过多漏气，影响后期的检测数据准确度，然后使用者通过撕开的口子往放置腔二9内滴入检测试剂，滴入的试剂会浸湿试纸条主体11左端的颜色识别涂层13，然后再将外壳顶壳2的右端黏在外壳底壳1的右端上，进行密封，尽量保证放置腔一7、导流甬道8和放置腔二9的真空性，以保证检测数据的准确度，然后再将外壳底壳1和外壳顶壳2插入到检测仪上，进行检测，相比于传统的试纸检测，该试纸条处于真空状态，在检测时能够避免与空气接触减少产生氧化反应，而且能够保证液体与试纸的充分反应，在读数仪读数的时候，可以保证检测数据的准确性，需要说明的是，颜色的设置，是为了使得机器能够识别测定不同霉素的信号，只需要将有颜色的一面插入机器的正侧面，即可测定霉素的种类，而且放置腔二9的设置，与黄色海绵垫12相配合，能够促进进液，快速吸收处理液，并且放置腔二9的内腔是设置有导流斜坡10的，也能够实现促进液体快速流动的作用。

实施例2提高避光效果的真菌毒素检测孵育器

结合图5和图8，本发明实施例公开一种能够提高避光效果的真菌毒素检测孵育器，包括孵育器主体14，孵育器主体14的顶部设置有遮光盖15，孵育器主体14的顶部固定安装有安装框17，安装框17和遮光盖15通过两个紧固机构16固定连接，紧固机构16包括固定连接在安装框17上的外壳161以及固定连接在遮光盖15上的顶盖162，外壳161的顶部嵌入式安装有导向套163，顶盖162的底部固定连接有插入到外壳161内腔的紧固销164，外壳161内腔的右侧设置有与紧固销164相适配的定位机构165，外壳161的一侧贯穿设置有推杆166，推杆166顶部的右侧固定连接有与定位机构165相适配的推板167，推板167的一侧固定连接有弹簧一168，弹簧一168远离推板167的一端固定连接在外壳161的内壁上，紧固销164的底部开设有与推杆166相适配的开口169，定位机构165包括固定连接在外壳161内壁上的固定管165-1，固定管165-1的内腔滑动连接有插销165-2，插销165-2的一侧固定连接有弹簧二165-3，弹簧二165-3远离插销165-2的一端固定连接在固定管165-1的内壁上，固定管165-1内腔的顶部和底部均开设有弹簧二165-4，插销165-2的顶部和底部均固定连接有在弹簧二165-4内腔滑动的限位滑块-5，通过弹簧二165-4和限位滑块-5的配合使用，在插销165-2滑动时，会带动限位滑块-5在弹簧二165-4的内腔滑动，以此对插销165-2进行滑动，从而保证插销165-2滑动时的稳定性，安装框17顶部左侧的前端和后端均固定连接有转动架20，两个转动架20之间转动连接有转动轴21，转动轴21的一侧与遮光盖15固定连接，安装框17的内腔固定安装有放置台18，放置台18的顶部开设有四个放置腔19，导向套163的内径是紧固销164外径的两倍，需要说明的是，孵育器主体14的前侧面开设有供试纸插入到插孔。

本发明在实际使用时，使用者完成前期准备工作后，将遮光盖15翻转盖下，然后顶盖162便会带动紧固销164穿过导向套163插入到外壳161的内腔，然后会与插销165-2接触，接着会压迫插销165-2向固定管165-1的内腔滑动，压缩弹簧二165-3，然后紧固销164向下划过插销165-2，当插销165-2与紧固销164上的孔洞对齐时，在弹簧二165-3的作用下穿插在紧固销164上，如此便能够将遮光盖15固定卡扣在安装框17上，打开时，使用者向外壳161的内腔按动推杆166，推杆166带动推板167移动，推板167推动插销165-2向固定管165-1的内腔滑动，压缩弹簧二165-3，当插销165-2与紧固销164脱离，因为导向套163的内径两倍与紧固销164的外径，使得遮光盖15在开启时，不会受到阻碍，使用者便能够顺利的将遮光盖15打开，如此便能够完成遮光盖15的固定，防止光线照射到孵育器上，避免对检测结构造成影响，而且在不使用时，还能够起到对检测口位置进行防尘处理，避免灰尘堆积的作用。

实施例3改良前后盖连接结构的真菌毒素检测读数仪

结合图9-图13，本发明实施例公开一种改良前后盖连接结构的真菌毒素检测读数仪，采用如下的技术方案：一种改良前后盖连接结构的真菌毒素检测读数仪，包括读数仪底壳22，读数仪底壳22的顶部设置有读数仪顶壳23，读数仪底壳22和读数仪顶壳23通过连接机构24固定安装，连接机构24包括固定安装在读数仪顶壳23的两个固定块247以及固定安装在读数仪底壳22上的外壳241，两个固定块247的底部固定连接有滑轨246，滑轨246的表面滑动连接有两个卡销245，两个卡销245之间固定连接有弹簧244，外壳241的顶部贯穿设置有导管242，两个固定壳243均位于导管242的内腔，外壳241内腔的底部固定安装有螺纹套241-0，螺纹套241-0的内腔螺纹连接有螺纹杆249，螺纹杆249的顶部转动连接有移动板248，移动板248的顶部固定连接有固定壳243，两个卡销245均伸入到固定壳243的内腔并卡在卡销245的内腔，在实际使用时，能够简便的将读数仪顶壳23和读数仪底壳22拆装，以便于使用者对读数仪的内部进行检修，整个拆装过程简单快速，方便快捷，省时省力，相比于拆除螺丝能够节省大量的时间，提高拆装效率，螺纹杆249的底端贯穿至外壳241的底部并固定连接有旋转块241-1，旋转块241-1的表面设置有防滑纹，外壳241内腔的两侧均固定连接有螺纹套241-2，移动板248的两侧分别贯穿至两个螺纹套241-2的外侧，移动板248与两个螺纹套241-2滑动连接，移动板248的两侧均固定连接有挡块241-3，通过螺纹套241-2和移动板248的配合使用，移动板248会在螺纹套241-2的内腔滑动，以此对卡销245进行限位，保证卡销245移动时的稳定性，而且也能够防止卡销245跟随螺纹杆249自转，固定壳243两侧的底部均开设有与两个卡销245相适配的卡口，两个卡销245的底部均设置有斜面，斜面的倾斜角度为十五度，读数仪顶壳23顶部的一侧设置有显示屏25，显示屏25倾斜十度安装在读数仪顶壳23上,需要说明的是，读数仪底壳22的前侧面开设有供试纸插入到插孔。

在实际使用时，使用者将读数仪顶壳23往读数仪底壳22上按压，然后两个卡销245便会穿过导管242，然后接触到固定壳243，受到固定壳243的挤压，两个卡销245便会向一起收缩，挤压弹簧244，同时两个卡销245会在滑轨246上滑动，然后两个卡销245插入到固定壳243内，直至进入到固定壳243内腔的底部，然后两个卡销245的底端便会牢牢的卡在固定壳243上的两个卡扣内，完成读数仪顶壳23与读数仪底壳22的固定，拆除时，使用者转动旋转块241-1底端螺纹杆249转动，在螺纹套241-0的作用下，螺纹杆249会向下移动，进而带动移动板248下移，移动板248带动固定壳243下移，受到移动板248的向下拉扯，固定壳243会迫使两个卡销245收缩挤压弹簧244，然后两个卡销245收缩进固定壳243的内腔，解除锁定，这时使用者在将读数仪顶壳23向上拿掉便，完成拆除，以便于使用者对读数仪的内部进行检修，整个拆装过程简单快速，方便快捷，省时省力，相比于拆除螺丝能够节省大量的时间，提高拆装效率。

设置于读数仪底壳22前端面上的两个连接机构24中间位置设置有试纸插槽26，该试纸插槽26用于插入试纸条进行数据分析。

综上所述：该改良前后盖连接结构的真菌毒素检测读数仪，通过在实际使用时，能够简便的将读数仪顶壳23和读数仪底壳22拆装，以便于使用者对读数仪的内部进行检修，整个拆装过程简单快速，方便快捷，省时省力，相比于拆除螺丝能够节省大量的时间，提高拆装效率，解决了在真菌毒素的检测中，需要用到读数仪以方便使用者读取数值，但是传统的读数仪在拆装时不方便，其大多数是采用螺丝固定的，安装的螺丝多，安装耗费的时间也多，而且在检修时需要花费大量的时间，将螺丝拆除，费时费力，麻烦异常。

实施例4中药材、饮片及中药制剂样品处理方法

1)称取粉末样品约2.0g至50ml离心管中，加入20ml甲醇，振荡5分钟；

2)室温(如20-25℃)下以每分钟3000转离心5分钟；

3)取2ml上清液至10ml干净离心管中，于50-60℃干燥；

4)加入2ml去离子水涡旋30秒，再加入6ml氯仿振荡2分钟，室温下以每分钟3000转离心5分钟；

5)取下层氯仿液3ml至10ml离心管中，50-60℃干燥，加入lml正己烷涡旋30秒，再加入2ml磷酸盐缓冲液涡旋1分钟，室温下以每分钟3000转离心5分钟，取下层液，即得。

实施例5稳定不同批次抗体或抗原的检测结果的免疫试纸快速检测方法：

a)移取处理后的样品液300±15μL至检测条的样品垫；

b)将检测条放入孵育器；

c)将孵育器在45℃-50℃(更优选50℃)下孵育3-5min；

d)取出检测条，并将其放入对应的读数仪中读取结果。

实施例6稳定不同批次抗体或抗原的检测结果的关键因素的确定

发明人出乎意料地发现，特定的免疫结合温度竟然能够使不同批次的抗体/抗原对黄曲霉毒素总量的检测结果准确而稳定。以检测加标陈皮样品为例，加标浓度为5μg/kg，每个样品分别采用3个批次的黄曲霉毒素总量的抗原/抗体组合，孵育时间为3-5分钟，结果见表1。

表1不同孵育温度的检测结果

批次编号	室温(25℃)	37℃	45℃	50℃
					第一批次	3.605	4.872	5.010	5.019
第二批次	3.147	4.305	4.988	4.789
					第三批次	3.089	4.521	5.002	4.855

由表1可见，当孵育温度为45℃-50℃时，三个批次差别最小，表明在该温度下，各批次的检测结果最接近。而且，45℃-50℃时，回收率非常高，均接近100％，这是出乎意料的结果。

因为通常，免疫试纸条检测法都在常温或室温下进行，此时免疫结合能够正常发生，并能够满足免疫快速检测的要求，因此，技术人员在研究如何保证不同批次抗原抗体检测结果的稳定性时，几乎忽略了温度的因素。而且，即便是出于提高抗原/抗体特异性结合的效率考虑，基于动物或人体内的温度通常为37℃左右，研究人员也会很自然地模仿并设置体内温度环境下进行免疫结合实验，并认为37℃是最佳的结合温度。但是，没有人预料到，对于检测黄曲霉毒素总量(而非单一的某种黄曲霉毒素)而言，免疫结合温度高于37℃、尤其在45℃-50℃时，竟然能消除不同批次抗原/抗体的差异，使采用不同批次抗原/抗体在免疫试纸条上测量的结果高度稳定、一致。

实施例7本发明方法在同批次抗原/抗体内检测结果的稳定性

向阴性陈皮样品中添加总黄曲霉毒素标准品，加标浓度为1.25ng/g、2.5ng/g，使用本发明所述方法进行样品提取和检测，在48℃下孵育，每个浓度5次重复，结果取平均值。准确度＝检测结果/实际浓度×100％。结果见表2。

表2同批次抗原/抗体内检测结果的稳定性

由表2可见，本发明试剂盒的正确度为100.34％～100.62％之间。每个浓度的5次重复间的变异系数(CV值)为0.58-2.05％。结果表明，该试剂盒准确度高，批内变异系数小，检测结果稳定性高。

实施例8不同批次抗原/抗体检测结果的稳定性

用本发明所述方法检测陈皮加标样品(共3个浓度)，使用3批次抗原/抗体，每个浓度做5个平行，在48℃下孵育，结果取平均值，检测结果见表3。

表3不同批次抗原/抗体检测结果的稳定性

由表3可见，本发明试剂盒检测陈皮加标的3个浓度的变异系数为0.82-2.71％，稳定性非常好。

实施例9本发明方法的检测限

使用本发明所述方法，在45℃下孵育，分别检测20份阴性陈皮、柏子仁、大枣和僵蚕样品中的黄曲霉毒素总量，计算平均值(AVG)和标准偏差(SD)，再按照AVG加上3倍SD计算检测限(LOD)，AVG加上10倍SD计算定量限(LOQ)。检测结果见表4。

表4本发明方法的检测限

经计算，陈皮、柏子仁、大枣和僵蚕的检测限均为0.01μg/kg，定量限为0.02-0.03μg/kg。可见，本发明方法的灵敏度也很高。

实施例10不同材质的海绵检测结果的稳定性

用本发明所述方法检测陈皮加标样品，加标浓度为2.5ng/g，其中检测条的样品垫选用不同材质的海绵，每种材质做5个平行，在45℃下孵育，结果取平均值，检测结果见表5。

表5不同材质的海绵检测结果的稳定性

由表5可见，当海绵垫材质为复合纤维素时，平均准确度为100.8％，变异系数为1.01％；当海绵垫材质为聚氨酯时，平均准确度为90.4％，变异系数为13.89％；当海绵垫材质为聚酯时，平均准确度为88.00％，变异系数为15.13％；当海绵垫材质为聚氨酯时，平均准确度为89.52％，变异系数为11.87％；当海绵垫材质为聚氨酯时，平均准确度为90.16％，变异系数为13.77％。当材质为复合纤维素时，准确度最高，变异系数最低，因此，选择复合纤维素作为海绵垫的最佳材质。

实施例11不同孔隙度的海绵检测结果的稳定性

用本发明所述方法检测陈皮加标样品，加标浓度为2.5ng/g，其中检测条的样品垫选用不同孔隙度的海绵，每种孔隙度做5个平行，在45℃下孵育，结果取平均值，检测结果见表6。

表6不同孔隙度的海绵检测结果的稳定性

由表6可见，当孔隙大小为30PPI时，准确度最高，为99.36％，变异系数最小，为4.54％。因此选择30PPI作为海绵垫的最佳孔径。

实施例12不同硬度的海绵检测结果的稳定性

用本发明所述方法检测陈皮加标样品，加标浓度为2.5ng/g，其中检测条的样品垫选用不同硬度的海绵，每种硬度做5个平行，在45℃下孵育，结果取平均值，检测结果见表7。

表7不同硬度的海绵检测结果的稳定性

由表7可见，当海绵硬度为40D时，准确度最高，为99.84％，变异系数最小，为2.36％。因此选择40D作为海绵垫的最佳硬度。

以上均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种稳定检测黄曲霉毒素含量的检测系统，其特征在于，所述检测系统包括密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条、孵育器和检测读数仪；所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条的外壳上具有向外凸出的放置腔，其与试纸条主体一端的海绵垫配合使用，放置腔一端是由外向内倾斜的内腔，具有导流作用；所述孵育器和所述检测读数仪上均设置有配合所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条使用的放置槽口。

2.如权利要求1所述的检测系统，其特征在于，所述检测试纸条，包括外壳底壳(1)，所述外壳底壳(1)的顶部嵌入式设置有外壳顶壳(2)，所述外壳顶壳(2)的底部固定有试纸条主体(11)，所述试纸条主体(11)一端固定连接有海绵垫(12)，所述试纸条主体(11)的另一端涂覆有颜色识别涂层(13)，所述外壳底壳(1)开设放置腔一(7)，用于放置所述试纸条主体(11)；所述放置腔一(7)内腔一侧带有导流甬道(8)，所述导流甬道(8)内腔向其一端开设有放置腔二(9)，所述放置腔二(9)与所述试纸条主体(11)一端固定连接的所述海绵垫(12)相配合封闭连接；所述放置腔二(9)是由外向内倾斜的内腔，所述放置腔二(9)中心内腔由外向内设置有导流斜坡(10)。

3.如权利要求2所述的检测系统，其特征在于，所述导流斜坡(10)的倾斜角度为20-25°。

4.如权利要求1所述的检测系统，所述孵育器，包括孵育器主体(14)，恒温元件，其特征在于，所述孵育器主体(14)的顶部设置有遮光盖(15)，所述孵育器主体(14)的顶部固定安装有安装框(17)，所述安装框(17)和遮光盖(15)通过两个紧固机构(16)固定连接，所述紧固机构(16)包括固定连接在安装框(17)上的外壳(161)以及固定连接在遮光盖(15)上的顶盖(162)，所述外壳(161)的顶部嵌入式安装有导向套(163)，所述顶盖(162)的底部固定连接有插入到所述外壳(161)内腔的紧固销(164)，所述外壳(161)内腔的右侧设置有与紧固销(164)相适配的定位机构(165)，所述外壳(161)的一侧贯穿设置有推杆(166)，所述推杆(166)顶部的右侧固定连接有与定位机构(165)相适配的推板(167)，所述推板(167)的一侧固定连接有弹簧一(168)，所述弹簧一(168)远离推板(167)的一端固定连接在外壳(161)的内壁上，所述紧固销(164)的底部开设有与推杆(166)相适配的开口(169)。

5.根据权利要求4所述的检测系统，其特征在于：所述安装框(17)的内腔固定安装有放置台(18)，所述放置台(18)的顶部开设有多个放置腔(19)，该放置腔内腔的凹槽与所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条的所述外壳底壳(1)的腔体相配合。

6.如权利要求1所述的检测系统，所述检测读数仪，包括读数仪底壳(22)，检测光源，感光元件及信号传输装置，其特征在于：所述读数仪底壳(22)的顶部设置有读数仪顶壳(23)，所述读数仪底壳(22)和读数仪顶壳(23)通过连接机构(24)固定安装，所述连接机构(24)包括固定安装在读数仪顶壳(23)的两个固定块(247)以及固定安装在读数仪底壳(22)上的外壳(241)，两个固定块(247)的底部固定连接有滑轨(246)，所述滑轨(246)的表面滑动连接有两个卡销(245)，两个卡销(245)之间固定连接有弹簧(244)，所述外壳(241)的顶部贯穿设置有导管(242)，两个固定壳(243)均位于导管(242)的内腔，所述外壳(241)内腔的底部固定安装有螺纹套(241-0)，所述螺纹套(241-0)的内腔螺纹连接有螺纹杆(249)，所述螺纹杆(249)的顶部转动连接有移动板(248)，所述移动板(248)的顶部固定连接有固定壳(243)，两个卡销(245)均伸入到固定壳(243)的内腔并卡在卡销(245)的内腔。

7.如权利要求6所述的检测系统，其特征在于，两个所述连接机构(24)中部设置有试纸插槽(26)，该插槽的凹槽与所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条的所述外壳底壳(1)的腔体相配合。

8.一种采用权利要求1所述的检测系统稳定检测样品中黄曲霉毒素含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)中药样品在检测前的样品处理；

2)移取处理后的样品液至所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条的一端，打开所述外壳底壳(1)一端，使样品液沿所述放置腔二(9)中的导流斜坡(10)进入试纸条的所述海绵垫(12)内，随后密封；

3)将所述密封封闭式黄曲霉毒素检测试纸条放入所述孵育器内，所述外壳底壳(1)一面朝下放置在孵育器的放置腔内腔的凹槽；将黄曲霉毒素特异性抗体与对应抗原在高于37℃的温度下进行孵育；

4)取出检测条，并将其放入对应的所述检测读数仪中读取结果；其中插入所述检测读数仪的试纸条前端是涂覆有颜色识别涂层(13)的一端。

9.如权利要求8的方法，其特征在于，所述样品处理步骤如下：

a)称取粉末样品至离心管中，加入甲醇，振荡；

b)室温下离心；

c)取上清液至干净离心管中，干燥；

d)加入去离子水涡旋，再加入氯仿振荡，室温下离心；

e)取下层氯仿液至离心管中，干燥，加入烷烃涡旋，再加入磷酸盐缓冲液涡旋，室温下离心，取下层液，即得。

10.如权利要求8的方法，其特征在于，所述温度为45-50℃，最优选50℃。

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