CN112851620A - 从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物c及其制备方法与应用 - Google Patents

从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物c及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C及其制备方法与应用，可有效解决从酒茱萸中分离制备新化合物，并实现新化合物在制备降低胆固醇和治疗冠心病药物中的应用问题，酒茱萸加水冷浸提取，减压浓缩，上HP‑20色谱柱，用水、30%乙醇洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压浓缩，得浸膏Fr.30%EtOH，经TOYOPEARL HW‑40C柱色谱，甲醇洗脱，收集相同组分，减压浓缩，得浸膏Fr.ETOH‑2，经Flash‑ODS柱色谱，用甲醇‑水梯度洗脱，收集30:70的洗脱液，减压浓缩，得浸膏Fr.ETOH‑2‑3，再用ODS‑AQ柱在半制备HPLC上进一步分离，体积比乙腈︰水＝20︰80，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，得化合物C。本发明易操作，导向性强，产品纯度高，开拓了酒茱萸的新用途和药用价值。

Description

从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C及其制备 方法与应用
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是一种从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C及其制备方法与应用。
背景技术
资料显示，中国患有冠心病的人数约为2.9亿。胆固醇蓄积是引起冠心病(CHD)的关键风险因素。CHD是威胁人类健康的第一大杀手；美国每六个死亡的人中就有一人死于CHD。已经上市的维持胆固醇稳态的药物众多，如经典的胆固醇合成抑制剂它汀类、胆固醇吸收抑制剂依折麦布及促进胆固醇排泄的多烯康等。但CHD的发病及死亡率仍呈逐年递增的趋势，且尚存在严重的副作用。冠心病的病因病机中,气虚、阳虚、阴虚、瘀血、痰浊诸因素均与肾气虚衰密切相关。其中肾中精气不足,气血渐虚是其主要病机。又因生活与工作节奏快、熬夜、压力大等致使人体各脏气暗耗多损,穷必及肾,精气渐亏。肾虚则藏精主水及气化功能失调,阻遏心阳，气机不调，络脉失养，则心血不畅,诱发本病。故从肝肾阴虚论治，降低胆固醇是临床治疗冠心病的有效途径。
山茱萸(Cornus officinalis)为山茱萸科(Cornaceae)植物山茱萸(Cornusofficinalis Sieb.et Zucc.)的干燥成熟果肉，始载于《神农本草经》，在我国药用历史已有两千余年的用药历史，是我国传统的补益肝肾阴虚的传统中药。现代中医临床多以其酒茱萸入药，但近年来鲜有酒茱萸化学成分研究的报道。现代药理学有山茱萸抗炎活性、降脂等研究。但从酒茱萸提取化合物活性成分，用于降低胆固醇，治疗冠心病，至今未见有公开报导。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C及其制备方法与应用，可有效解决从酒茱萸中分离制备新化合物，并实现新化合物在制备降低胆固醇和治疗冠心病药物中的应用问题。
本发明解决的技术方案是，一种从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C，是CornusgallatesC(化合物1)，分子结构式为：
Figure BDA0002892600080000011
其制备方法是，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加水50～200L，4℃冷浸3～15天，过滤，合并提取液，减压浓缩至相当于生药0.2g/mL～2g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1:4～12的HP-20色谱柱，依次用水10～25L、质量浓度30％乙醇(30％EtOH)20～50L，进行洗脱，流速为2～6mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH(第一浸膏)；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经TOYOPEARL HW-40C柱色谱，r＝2～4cm，H＝50～100cm，用甲醇进行洗脱，流速1～5mL/min，洗脱3～10个柱体积(1个柱体积为550mL)，收集相同组分，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2(第二浸膏)；
(4)浸膏Fr.ETOH-2经Flash-ODS(120～330g)柱色谱，用体积比10:90、20:80、30:70甲醇-水进行梯度洗脱，流速10～50mL/min，每个比例洗脱3～10个柱体积(1个柱体积为400mL)，收集30:70的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2-3(第三浸膏)；
(5)浸膏Fr.ETOH-2-3用ODS-AQ柱在半制备HPLC上进一步分离，体积比乙腈︰水＝20︰80，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，得到化合物C。
本发明经鉴定，是一个从酒茱萸中分离制备的新化合物，其制备方法易操作，导向性强，产品纯度高，该化合物降低胆固醇作用，可有效用于制备治疗冠心病的药物，开拓了酒茱萸的新用途和药用价值，有显著的经济和社会效益。
附图说明
图1为本发明化合物1的分子结构式；
图2为本发明化合物1的主要HMBC相关；
图3为本发明化合物1的1H-NMR谱图；
图4为本发明化合物1的13C-NMR谱图；
图5为本发明化合物1的HSQC谱图；
图6为本发明化合物1的HMBC谱图；
图7为本发明化合物1的红外光谱图；
图8为本发明化合物1的紫外光谱图；
图9为本发明化合物1的质谱图；
图10为本发明化合物1的工艺流程图。具体实施方式
以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，可由以下实施例给出。
实施例1
本发明一种从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C，是CornusgallatesC(化合物1)，分子结构式为：
Figure BDA0002892600080000031
其制备方法是，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加水100L，4℃冷浸10天，过滤，合并提取液，减压浓缩至相当于生药0.6g/mL的样品溶液；
(2)将上述样品溶液上样于径高比1:10的HP-20色谱柱，依次用水20L、质量浓度30％乙醇40L，进行洗脱，流速为5mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH(520g)；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经TOYOPEARL HW-40C柱色谱，r＝2.5cm，H＝80cm，用甲醇进行洗脱，流速2～4mL/min，洗脱7个柱体积，收集相同组分，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2(19.2g)；
(4)浸膏Fr.ETOH-2经Flash-ODS(300g)柱色谱，用体积比10:90、20:80、30:70甲醇-水进行梯度洗脱，流速30mL/min，每个比例洗脱7个柱体积，收集30:70的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2-3(115mg)；
(5)浸膏Fr.ETOH-2-3用ODS-AQ柱在半制备HPLC上进一步分离，体积比乙腈︰水＝20︰80，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，得到化合物C(60mg)。
实施例2
本发明一种从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C的制备方法，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加水60L，4℃冷浸14天，过滤，合并提取液，减压浓缩至相当于生药1.8g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1:8的HP-20色谱柱，依次用水12L、质量浓度30％乙醇24L，进行洗脱，流速为3mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH(515g)；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经TOYOPEARL HW-40C柱色谱，r＝2cm，H＝60cm，用甲醇进行洗脱，流速2mL/min，洗脱4个柱体积，收集相同组分，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2(20.2g)；
(4)浸膏Fr.ETOH-2经Flash-ODS(220g)柱色谱，用体积比10:90、20:80、30:70甲醇-水进行梯度洗脱，流速20mL/min，每个比例洗脱7个柱体积，收集30:70的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2-3(130mg)；
(5)浸膏Fr.ETOH-2-3用ODS-AQ柱在半制备HPLC上进一步分离，体积比乙腈︰水＝20︰80，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，得到化合物C(60mg)。
实施例3
本发明一种从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C的制备方法，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加水150L，4℃冷浸4天，过滤，合并提取液，减压浓缩至相当于生药0.5g/mL的样品溶液；
(2)将上述样品溶液上样于径高比1:10的HP-20大孔吸附树脂柱，依次用水23L、质量浓度30％乙醇45L，进行洗脱，流速为6mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH(500g)；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经TOYOPEARL HW-40C柱色谱，r＝4cm，H＝90cm，用甲醇进行洗脱，流速5mL/min，洗脱8个柱体积，收集相同组分，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2(17.4g)；
(4)浸膏Fr.ETOH-2经Flash-ODS(330g)柱色谱，用体积比10:90、20:80、30:70甲醇-水进行梯度洗脱，流速45mL/min，每个比例洗脱8个柱体积，收集30:70的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2-3(90mg)；
(5)浸膏Fr.ETOH-2-3用ODS-AQ柱在半制备HPLC上进一步分离，体积比乙腈︰水＝20︰80，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，得到化合物C(50mg)。
实施例4
本发明一种从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C的制备方法，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加水100L，4℃冷浸7天，过滤，合并提取液，减压浓缩至相当于生药1.0g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1:8的HP-20大孔吸附树脂柱，依次用水20L、质量浓度30％乙醇40L，进行洗脱，流速为4mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH(510g)；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经TOYOPEARL HW-40C柱色谱，r＝2.5cm，H＝75cm，用甲醇进行洗脱，流速2mL/min，洗脱6个柱体积，收集相同组分，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOH-2(18.2g)；
(4)浸膏Fr.ETOH-2经Flash-ODS(330g)柱色谱，用体积比10:90、20:80、30:70甲醇-水进行梯度洗脱，流速30mL/min，每个比例洗脱6个柱体积，收集30:70的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOH-2-3(100mg)；
(5)浸膏Fr.ETOH-2-3用ODS-AQ柱在半制备HPLC上进一步分离，体积比乙腈︰水＝20︰80，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，得到化合物C(55mg)。
要指出的是，上述实施例仅是用于说明本发明的具体实施方式，以对该从酒茱萸中提取具有降胆固醇活性的化合物及其提取方法进行的详细描述，是说明性的，而不是用于限定本发明的保护范围，凡是在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，均应属本发明的保护范围之内。
上述所得化合物经测定，鉴定为从酒茱萸中提取的1个新化合物C：化合物C分子结构式见图1所示。以化合物C为制备一种抗动脉粥样硬化的药物，体内实验研究，表明该药物对降低胆固醇具有显著作用。有关具体测定和实验资料如下：
化合物C：黄色粉末，易溶于甲醇等有机溶剂，遇香草醛-浓硫酸加热显蓝色。在HRESIMS中准分子离子峰[M+Na]+为285.0348(C13H10O6Na计算值为285.0375)，结合1H-NMR、13C-NMR谱确定分子式为C13H10O6不饱和度为9。
紫外光谱在202nm、283nm和386nm有最大吸收；红外光谱提示有羟基(3217cm-1)，羰基(1707,1597cm-1)的存在。1H-NMR谱显示有一个甲基δH2.36(3H,s,H-1′)；三个次甲基，包括δH6.70(1H,d,J＝15.8Hz,H-3′)，7.19(1H,s,H-4)和7.26(1H,d,J＝12.1Hz,H-4′)；一个芳环上的氢δH7.25(1H,s,H-8)。13C-NMR谱显示有13个碳信号，其中有一个甲基δC(27.5,C-1′)；两个羰基δC(163.3C-1)和δC200.3(C-2′)；一个连氧次甲基碳δC(75.4,C-3)；四个烯烃双键上的碳δC109.6(C-4)，δC126.9(C-3′)，δC136.0(C-4′)，δC147.8(C-3)；一组芳环上的碳δC107.2(C-2)，δC114.0(C-10)，δC120.6(C-9)，δC141.3(C-6)，δC142.4(C-5)，δC149.5(C-7)。详细信息见表1。
结合HMBC谱，可以看出H-4与C-3/C-10/C-4′相关2′H-8与C-1/C-6/C-7/C-9/C-10相关；H-1′与C-2′/C-3′相关；H-3′与C-4/C-1′/C-2′/C-4′；相关H-4′与C-3/C-4/C-2′/C-3′相关。结合1D和2D NMR确定了化合物C的化学结构。
表1.化合物C的1H-and 13C-NMR数据(500 and 125MHzδin ppm，MeOD)
Figure BDA0002892600080000051
Figure BDA0002892600080000061
采用的仪器与材料：
Thermo EVO 300spectrometer紫外光谱仪(Thermo,Waltham,MA,美国)；
Bruker AVⅢ500-NMR核磁共振仪(Bruker,Billerica,德国)；
Bruker maXis HD高分辨质谱仪(Bruker,德国)；
清博华LC 52型半制备高效液相色谱仪(QBH,中国)；
H&E ODS-AQ制备柱(10×250mm,5um；H&E Co.,Ltd,中国)；
柱层析硅胶(100-200目,200-300目,青岛海洋化工有限公司)；D101型大孔树脂(上海摩速科学器材有限公司)；
Toyopearl HW-40F(北京慧德易科技有限责任公司)；
Toyopearl HW-40C(北京慧德易科技有限责任公司)；
ODS-C18(日本YMC公司)；
所用试剂均为分析纯或色谱纯；
氘代试剂：MeOD(Cambridge Isotope Laboratories,USA)；
AdventurerTM电子天平(奥豪斯国际贸易上海有限公司)；
RAW264.7细胞株来源于中国科学院(上海)细胞库；
LPS从美国Sigma Aldrich购买；
DMEM培养液和胎牛血清和胎牛血清(FBS)购自美国Gibco公司；
3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)和二甲基亚砜(DMSO)购于美国Sigma-Aldrich公司；
二氧化碳培养箱(美国赛默飞公司，型号3111)；
酶标仪(美国赛默飞公司，型号MULTISKAN FC)；
台式高速冷冻离心机(索福ST-21，美国产)；
AdventurerTM电子天平(奥豪斯国际贸易上海有限公司)；
洁净工作台，北京昌平长城空气净化设备工程公司；
96孔板购于美国Corning公司；
化合物干预胆固醇作用：
RAW264.7细胞接种于含有DMEM培养基的12孔板中，在37℃，5％CO2培养箱中孵育12h。然后将细胞分组：空白对照组、ox-LDL组(50μg/mL)、阳性药组(辛伐他汀6μM)、JZY-5、6、18不同浓度组(12.5、25、50μM)，用ox-LDL造模24h，弃去培养基，换新培养基，药物干预24h后收集细胞，用总胆固醇试剂盒，在酶标仪510nm下进行检测，通过测定OD值，计算胆固醇的含量。
Figure BDA0002892600080000071
表2酒茱萸单体化合物TC测定结果
Figure BDA0002892600080000072
与模型组相比，*P＜0.05，**P＜0.001
化合物C不同浓度对ox-LDL造成的脂质堆积模型RAW264.7细胞中胆固醇(TC)的影响，如表1，结果显示当化合物在浓度为25-50M时与模型组相比有显著的降低TC的作用且有剂量依赖性(P＜0.01)，浓度小于12.5M时与模型组相比无显著差异(P＞0.05)，化合物C浓度组与阳性药物组对比无显著差异(P＞0.05)。
上述方法制备的化合物C能够显著降低ox-LDL造成的脂质堆积模型RAW264.7细胞中胆固醇(TC)的水平,对胆固醇代谢具有调节作用，实现了化合物C在制备治疗治疗高胆固醇血症中的应用，开辟了酒茱萸的新的药用价值，是治疗胆固醇代谢异常药物上的创新，有显著的经济和社会效益。安全、有效，具有较高的临床推广应用价值，开拓了酒茱萸的药用价值和商业价值，有显著的经济和社会效益。

Claims (8)

1.一种从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C，分子结构式为：
Figure FDA0002892600070000011
2.权利要求1所述的从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加水50～200L，4℃冷浸3～15天，过滤，合并提取液，减压浓缩至相当于生药0.2g/mL～2g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1:4～12的HP-20色谱柱，依次用水10～25L、质量浓度30％乙醇20～50L，进行洗脱，流速为2～6mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经TOYOPEARL HW-40C柱色谱，r＝2～4cm，H＝50～100cm，用甲醇进行洗脱，流速1～5mL/min，洗脱3～10个柱体积，收集相同组分，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2；
(4)浸膏Fr.ETOH-2经Flash-ODS柱色谱，用体积比10:90、20:80、30:70甲醇-水进行梯度洗脱，流速10～50mL/min，每个比例洗脱3～10个柱体积，收集30:70的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2-3；
(5)浸膏Fr.ETOH-2-3用ODS-AQ柱在半制备HPLC上进一步分离，体积比乙腈︰水＝20︰80，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，得到化合物C。
3.根据权利要求2所述的从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加水100L，4℃冷浸10天，过滤，合并提取液，减压浓缩至相当于生药0.6g/mL的样品溶液；
(2)将上述样品溶液上样于径高比1:10的HP-20色谱柱，依次用水20L、质量浓度30％乙醇40L，进行洗脱，流速为5mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经TOYOPEARL HW-40C柱色谱，r＝2.5cm，H＝80cm，用甲醇进行洗脱，流速2～4mL/min，洗脱7个柱体积，收集相同组分，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2；
(4)浸膏Fr.ETOH-2经Flash-ODS柱色谱，用体积比10:90、20:80、30:70甲醇-水进行梯度洗脱，流速30mL/min，每个比例洗脱7个柱体积，收集30:70的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2-3；
(5)浸膏Fr.ETOH-2-3用ODS-AQ柱在半制备HPLC上进一步分离，体积比乙腈︰水＝20︰80，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，得到化合物C。
4.根据权利要求2所述的从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加水60L，4℃冷浸14天，过滤，合并提取液，减压浓缩至相当于生药1.8g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1:8的HP-20色谱柱，依次用水12L、质量浓度30％乙醇24L，进行洗脱，流速为3mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经TOYOPEARL HW-40C柱色谱，r＝2cm，H＝60cm，用甲醇进行洗脱，流速2mL/min，洗脱4个柱体积，收集相同组分，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2；
(4)浸膏Fr.ETOH-2经Flash-ODS柱色谱，用体积比10:90、20:80、30:70甲醇-水进行梯度洗脱，流速20mL/min，每个比例洗脱7个柱体积，收集30:70的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2-3；
(5)浸膏Fr.ETOH-2-3用ODS-AQ柱在半制备HPLC上进一步分离，体积比乙腈︰水＝20︰80，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，得到化合物C。
5.根据权利要求2所述的从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加水150L，4℃冷浸4天，过滤，合并提取液，减压浓缩至相当于生药0.5g/mL的样品溶液；
(2)将上述样品溶液上样于径高比1:10的HP-20大孔吸附树脂柱，依次用水23L、质量浓度30％乙醇45L，进行洗脱，流速为6mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.30％EtOH；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经TOYOPEARL HW-40C柱色谱，r＝4cm，H＝90cm，用甲醇进行洗脱，流速5mL/min，洗脱8个柱体积，收集相同组分，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2；
(4)浸膏Fr.ETOH-2经Flash-ODS柱色谱，用体积比10:90、20:80、30:70甲醇-水进行梯度洗脱，流速45mL/min，每个比例洗脱8个柱体积，收集30:70的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.2～1.4的浸膏Fr.ETOH-2-3；
(5)浸膏Fr.ETOH-2-3用ODS-AQ柱在半制备HPLC上进一步分离，体积比乙腈︰水＝20︰80，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，得到化合物C。
6.根据权利要求2所述的从酒茱萸中提取的具有降低胆固醇作用的化合物C的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取干燥的酒茱萸10kg，加水100L，4℃冷浸7天，过滤，合并提取液，减压浓缩至相当于生药1.0g/mL的浓缩液；
(2)将浓缩液上样于径高比1:8的HP-20大孔吸附树脂柱，依次用水20L、质量浓度30％乙醇40L，进行洗脱，流速为4mL/min，收集30％乙醇部位洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.30％EtOH；
(3)浸膏Fr.30％EtOH经TOYOPEARL HW-40C柱色谱，r＝2.5cm，H＝75cm，用甲醇进行洗脱，流速2mL/min，洗脱6个柱体积，收集相同组分，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOH-2；
(4)浸膏Fr.ETOH-2经Flash-ODS柱色谱，用体积比10:90、20:80、30:70甲醇-水进行梯度洗脱，流速30mL/min，每个比例洗脱6个柱体积，收集30:70的洗脱液，减压浓缩，得50℃相对密度1.3的浸膏Fr.ETOH-2-3；
(5)浸膏Fr.ETOH-2-3用ODS-AQ柱在半制备HPLC上进一步分离，体积比乙腈︰水＝20︰80，流速3mL/min，收集25min的色谱峰，得到化合物C。
7.权利要求1所述的从酒茱萸中提取化合物C在制备降低胆固醇药物中的应用。
8.权利要求1所述的从酒茱萸中提取化合物C在制备治疗冠心病药物中的应用。
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