CN112834475A - 一种核酸适体及调节核酸适体信号强度的方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物传感器技术领域，特别是指一种核酸适体及调节核酸适体信号强度的方法和应用。利用金属增强荧光效应以及双链DNA捕获银离子更强的优点，设计了一种高灵敏的荧光增强型适体传感器来检测银离子。将含有不同碱基A的核酸适体修饰在纳米金的表面，并加入标记有荧光基团的互补链，构成用于检测银离子浓度的工作溶液。实际实验结果表明当碱基A的长度为8nm，银离子浓度的线性检测范围为694‑6940pmol/L，检出限为694pmol/L。该传感器为检测实际水环境中的银离子浓度提供了应用基础。

Description

一种核酸适体及调节核酸适体信号强度的方法和应用
技术领域
本发明属于生物传感器技术领域，特别是指一种核酸适体及调节核酸适体信号强度的方法和应用。
背景技术
银具有对光特别敏感的特性，被广泛应用于医疗、电子、成像等领域。但银离子所带来的危害也不容忽视的问题，它可通过河流灌溉系统和海水养殖，在动植物体内积累银离子，最后通过食物链进入人体体内，与人体内的蛋白质、酶发生相互作用，严重威胁人类的身体健康。因此研究一种高灵敏、快速检测银离子浓度的方法对保护人类的生命健康起着重要的作用。
荧光分析技术具有灵敏度高、特异性强、响应速度快等优点，被广泛的用于重金属离子浓度的检测。自从one等人发现银离子与碱基对的相互作用以后，研究者开始利用核酸适体对重金属离子的特异性以及荧光分析技术的优点来检测银离子浓度。Hua Lv等人基于氧化石墨烯和银离子的核酸适体设计了一种双输出的荧光逻辑门来检测银离子，检出限为10nmol/L。Kimberly Kleinke等人利用Tb3+对DNA的敏感性，设计了一种无标记荧光适体传感器来实现银离子浓度的检测，检出限为57.6nmol/L。Ke Ma等人利用AIE活性荧光探针和含有多个胞嘧啶的DNA的来检测Ag+，该传感器的检出限为155 nmol L−1。虽然荧光适体传感器能检测纳摩尔级别的银离子浓度，但是为了进一步提高传感器的灵敏度，人们对金属增强荧光效应（MEF）进行了深入研究。金属增强荧光是指具有特殊形貌、尺寸的金属结构能使位于其邻近的荧光分子的荧光信号得到增强的现象。其增强程度受金属纳米结构局域表面等离子体共振波长及荧光基团与纳米结构距离（d）的影响。Ning Sui等利用SiO2作为隔离层来控制纳米银与Cy3之间的距离，实现银离子的灵敏性检测，检测范围为4~20nmol/L。Zhenpeng Zhou等利用含T碱基核酸适体作为隔离层，调节AgNPs与FAM的距离来实现金属增强荧光效应，此传感器能检测1nmol/L 的Hg2+。以上研究者分别用不同的方法控制隔离层的厚度来实现金属增强荧光效应，提高传感器的灵敏度。但是SiO2是无机材料不具有选择性，在制备适配体过程中具有局限性。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明利用碱基作为隔离层既具有DNA分子生物相容性高隔离层厚度容易控制的优点，又结合了核酸适体对金属离子的特异性，公开了一种核酸适体及调节核酸适体信号强度的方法和应用。
本发明的技术方案是这样实现的：
一种调节核酸适体信号强度的方法，通过调节核酸适体的荧光基团与纳米金之间的碱基A的数量实现对核酸适体信号强度的调节。
上述的方法在调节核酸适体上的荧光基团与纳米金之间的距离上的应用。
利用上述方法设计的核酸适体，所述核酸适体序列如SEQ ID No.1、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5或SEQ ID No.6所示，其5'端修饰有-SH。
上述的核酸适体在制备检测银离子的荧光增强型适体传感器中的应用，步骤如下：
（1）将核酸适体加入到TCEP溶液中，配制核酸适体的TCEP溶液；
（2）向步骤（1）的核酸适体的TCEP溶液中加入纳米金溶液，振荡培养后加入NaCl溶液，继续培养，得混合溶液；
（3）将经步骤（2）处理的混合溶液离心并去除上清液，加入Tris-CH3COOH溶液和FAM-HDNA溶液，即得用于检测银离子的荧光增强型适体传感器工作溶液。
所述步骤（1）中核酸适体序列如SEQ ID No.1所示；核酸适体的TCEP溶液的浓度为5μmol/L。
所述步骤（2）中纳米金溶液的浓度为0.05mg/mL，纳米金的直径为40nm，核酸适体与纳米金的体积比为1：（0.25-0.4）。
所述步骤（2）中NaCl溶液的终浓度为0.1 mol/L的NaCl，振荡培养的条件为37℃培养10-12小时。
所述步骤（3）中FAM-HDNA序列如SEQ ID No.2所示，其3'端修饰有FAM荧光基团。
所述步骤（3）中Tris-CH3COOH溶液的浓度为10mmol/L、用量为600 μL；FAM-HDNA溶液的浓度为5μmol/L、用量为20μL。
利用上述方法所制备的荧光增强型适体传感器在检测水环境中的银离子浓度中的应用。
本发明具有以下有益效果：
1、本申请通过添加不同数目的碱基A来控制纳米金与荧光基团之间的距离，实现金属增强荧光效应，提高传感器的灵敏度；根据金属与碱基的相互作用，利用双链核酸适体作为捕获基团来识别银离子，提高传感器的特异性，获得一种高灵敏检测银离子浓度的荧光适体传感器。
2、本申请还将含有不同碱基A的核酸适体修饰在纳米金的表面，并加入标记有荧光基团的互补链，构成用于检测银离子浓度的工作溶液。当不存在银离子时，两条核酸适体处于游离状态；当存在银离子时，两条核酸适体会通过C-Ag+-C形成双螺旋结构，此时FAM会引到纳米金的附近，通过控制碱基A的数目可以调节纳米金与FAM之间的距离，使得FAM的荧光通过纳米金的表面等离子共振效应得到增强。实验结果表明当碱基A的长度为8nm，银离子浓度的线性检测范围为694-6940pmol/L，检出限为694pmol/L。该传感器为检测实际水环境中的银离子浓度提供了应用基础。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为荧光增强型适体传感器检测银离子浓度原理图。
图2为荧光增强型适体传感器的可行性分析图。
图3为优化隔离层厚度示意图，其中左图a为纳米金与荧光基团在不同隔离层厚度下Au/ployAn-aptamer/FAM-HDNA/10nmol/LAg+溶液的荧光光谱图；右图b为不同隔离层厚度的Au/ployAn-aptamer/FAM-HDNA/10nmol/LAg+与荧光强度之间的折线图。
图4为AuNPs和aptamer的不同浓度比对应的荧光强度图，其中左图a为工作溶液中含有不同体积比的AuNPs和aptamer时的荧光光谱图；右图b为不同体积比的Au:aptamer与荧光强度之间的折线图。
图5为不同PH对荧光信号强度的影响图，其中左图a为工作溶液在不同pH时的荧光光谱图；右图b为不同pH与荧光强度之间的折线图。
图6为检测不同浓度的银离子结果图，其中a为工作溶液中加入不同浓度Ag+时的荧光光谱图；b为不同浓度Ag+与荧光强度之间的折线图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例
（1）仪器与试剂
HZQ-F200振荡培养箱（北京东联哈尔仪器制造有限公司），GL-16II离心机（上海安亭科技仪器厂），天平（梅特勒-托利多仪器有限公司），F-7000型荧光光谱仪（日本HITACHI公司），磁力搅拌机（杭州仪表电机有限公司）。
纳米金，0.05mg/mL； TCEP，10mmol/L（含20 mmol/L Tris-CH3COOH）；Tris-CH3COOH，10mmol/L；NaCl ，2 mol/L；实验用水均为18.2MΩ·cm的超纯水；
核酸适体DNA1（ployA0-aptamer）：序列如SEQ ID No.3所示，其5'端修饰有-SH。
核酸适体DNA2（ployA12-aptamer）：序列如SEQ ID No.4所示，其5'端修饰有-SH。
核酸适体DNA3（ployA18-aptamer）：序列如SEQ ID No.5所示，其5'端修饰有-SH。
核酸适体DNA4（ployA24-aptamer）：序列如SEQ ID No.1所示，其5'端修饰有-SH。
核酸适体DNA5（ployA30-aptamer）：序列如SEQ ID No.6所示，其5'端修饰有-SH。
核酸适体DNA6（FAM-HDNA）：序列如SEQ ID No.2所示，其3'端修饰有- FAM。
（2）用于检测银离子的荧光增强型适体传感器工作溶液的制备
工作溶液指的是AuNPs@ployAn-aptamer与FAM-HDNA的混合溶液。首先将核酸适体放置离心机中以7000rpm的速度离心1min，再加入10mmol/L 的TCEP溶液，使核酸适体（DNA1- DNA6）的浓度达到5μmol/L。然后将浓度为0.05mg/ml的纳米金分别与不同个数碱基A的核酸适体（DNA1- DNA5任一个）按照一定的比例混合，37℃振荡培养12h。接着加入2mol/L的NaCl，并以3h的间隔重复两次加入，最终使NaCl的浓度达到0.1mol/L。振荡培养24h后，放置离心机中以14000rpm的速度离心20min，去除上清液并加入600 μL的Tris-CH3COOH以及20μL，5μmol/L的FAM-HDNA，4℃保存备用。
（3）实验条件的优化
①纳米金与FAM之间的距离：由于金属增强荧光效应与纳米金和荧光基团之间的距离密切相关，为了获得较强的荧光信号，需要优化纳米金与荧光基团之间的距离。实验通过改变碱基A的个数来调节隔离层的厚度，考察了隔离层的厚度分别为0 nm，4nm，6 nm，8nm，10 nm时，荧光适体传感器的荧光强度变化。如图3所示，当隔离层厚度为0 nm和4nm，在工作溶液中加入银离子后荧光强度有所下降，主要因为纳米金和荧光基团之间距离在0~5nm时会发生荧光共振转移导致荧光淬灭；当隔离层厚度分别为6 nm，8 nm和10 nm时，在工作溶液中加入银离子后荧光强度有所上升，主要因为纳米金与荧光基团之间的距离处于5~100nm时，金属表面等离子共振使得荧光材料的本征辐射衰减率增加，荧光强度增加。但隔离层厚度为8nm时，荧光增强效果最明显。因此选择碱基A的个数为24的核酸适体进行后续实验。
②AuNPs和aptamer的比例：纳米金与核酸适体的比例会影响到纳米金表面核酸适体的密度，当纳米金表面修饰的核酸适体密度过大时，部分互补链无法挤进去与核酸适体结合；当纳米金表面修饰的核酸适体过少时，核酸适体会包裹在纳米金的表面，FAM的荧光直接被纳米金淬灭。因此优化纳米金和核酸适体的比例对提高传感器的灵敏度至关重要。为了改变纳米金和核酸适体的比例，实验将aptamer的浓度固定在5μmol/L 20μL，改变纳米金（0.05mg/mL）的体积，使得纳米金和核酸适体的体积比分别为1:4，1:2，1:0.5，1:0.4 ，1:0.25。如图4所示， 当纳米金与核酸适体的体积比为1:0.25~1:0.5时，随着纳米金与核酸适体的体积比减小，工作溶液的荧光强度逐渐增加。主要因为当纳米金表面修饰的核酸适体逐渐增加时，核酸适体逐渐处于线性状态而不是包裹在纳米金的表面，FAM的荧光不会被纳米金直接淬灭，因此荧光强度随着纳米金和核酸适体体积比的减小而增大；当纳米金与核酸适体的体积比为1:0.5~1:4时，溶液中的荧光强度随着纳米金与核酸适体体积比的减小而减小。主要因为当纳米金表面核酸适体的密度继续增大时，部分互补链难以挤进与核酸适体结合，导致荧光强度有所下降。因此，为了提高传感器的灵敏度，选择AuNPs和aptamer的体积为1:0.5进行后续实验。
③pH的优化：pH会影响FAM的活性从而影响荧光信号的强度，因此优化pH对提高传感器的灵敏度至关重要。实验通过Tris-CH3COOH缓冲液来调节工作溶液的pH，考察了pH5~10范围内对工作溶液荧光强度的影响。如图5所示随着pH的增大工作溶液的荧光强度逐渐升高，主要因为低pH会抑制FAM的活性导致溶液中的荧光信号较低，而高pH会使荧光信号得到明显的增强，但在碱性情况下Ag+能与OH-发生反应，从而影响传感器的检测效果。因此，为了提高荧光信号的强度，又避免OH-对银离子检测的干扰，选择pH=7的缓冲液进行Ag+的检测。
实施效果例
（1）灵敏性
为了评价该传感器的灵敏性，分别把5 nmol/L，10 nmol/L，20 nmol/L，30 nmol/L，50nmol/L的银离子加入到工作溶液中并监测荧光强度的变化。如图6（a）所示，随着银离子浓度的增加，C-Ag+-C复合结构逐渐增加，荧光强度不断增加。如图6（b）所示，不同浓度的银离子与荧光强度之间的线性回归方程为：y=0.007x+151（y代表荧光强度，x代表银离子浓度），R2=0.99，检测范围是694nmol/L~6940pmol/L，检出限为694pmol/L。
（2）银离子的检测
将100μL不同浓度的银离子加入到工作溶液中，37℃振荡培养1h，取600μL放入培养皿中，用荧光光谱仪测量工作溶液的荧光强度。并计算不同浓度银离子与荧光强度之间的关系见图6a随着银离子浓度的增加，C-Ag+-C复合结构逐渐增加，荧光强度不断增加。
本申请的一种荧光增强型适体传感器用于检测银离子的浓度，利用银离子与碱基C形成C-Ag+-C的结构实现银离子的特异性捕获；以及ployAn能更好的控制纳米金和荧光基团之间的距离，实现金属增强荧光效应。同时，为了提高传感器的灵敏度，优化了传感器的各项制备工艺，并对不同浓度的银离子进行检测，检出限为694pmol/L，具有一定的特异性识别作用，为实际水环境的应用提供了研究基础。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
<110> 郑州轻工业大学
<120> 一种核酸适体及调节核酸适体信号强度的方法和应用
<141> 2021-04-14
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<170> SIPOSequenceListing 1.0
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Claims (10)

1.一种调节核酸适体信号强度的方法，其特征在于：通过调节核酸适体与纳米金之间的ployA的数量实现对核酸适体信号强度的调节。
2.权利要求1所述的方法在调节核酸适体上的荧光基团与纳米金之间的距离上的应用。
3.利用权利要求1所述的方法设计的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体序列如SEQID No.1、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5或SEQ ID No.6所示，其5'端修饰有-SH。
4.权利要求3所述的核酸适体在制备检测银离子的荧光增强型适体传感器中的应用，其特征在于，步骤如下：
（1）将核酸适体加入到TCEP溶液中，配制核酸适体的TCEP溶液；
（2）向步骤（1）的核酸适体的TCEP溶液中加入纳米金溶液，振荡培养后加入NaCl溶液，继续培养，得混合溶液；
（3）将经步骤（2）处理的混合溶液离心并去除上清液，加入Tris-CH3COOH溶液和FAM-HDNA溶液，即得用于检测银离子的荧光增强型适体传感器工作溶液。
5.根据权利要求4所述的用于检测银离子的荧光增强型适体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中核酸适体序列如SEQ ID No.1所示；核酸适体的TCEP溶液的浓度为5μmol/L。
6.根据权利要求4所述的用于检测银离子的荧光增强型适体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中纳米金溶液的浓度为0.05mg/mL，纳米金的直径为40nm，核酸适体与纳米金的体积比为1：（0.25-0.4）。
7.根据权利要求4所述的用于检测银离子的荧光增强型适体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中NaCl溶液的终浓度为0.1 mol/L的NaCl，振荡培养的条件为37℃培养10-12小时。
8.根据权利要求4所述的用于检测银离子的荧光增强型适体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中FAM-HDNA序列如SEQ ID No.2所示，其3'端修饰有FAM荧光基团。
9.根据权利要求4所述的用于检测银离子的荧光增强型适体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中Tris-CH3COOH溶液的浓度为10mmol/L、用量为600 μL；FAM-HDNA溶液的浓度为5μmol/L、用量为20μL。
10.利用权利要求4-9任一项方法所制备的荧光增强型适体传感器在检测水环境中的银离子浓度中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112630439A (zh) * 2020-12-11 2021-04-09 郑州轻工业大学 基于纳米金的分裂型适体传感器及其制备方法和应用
CN116858909B (zh) * 2023-04-04 2024-08-23 无锡学院 一种基于邻位连接电化学发光分析的mc-lr检测方法

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2015019607A (ja) * 2013-07-17 2015-02-02 日産化学工業株式会社 マウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ２６に特異的に結合する核酸
CN106052872A (zh) * 2016-06-01 2016-10-26 江南大学 一种基于纳米材料自组装的土霉素sers检测方法
US20160362691A1 (en) * 2013-12-11 2016-12-15 Hong Kong Baptist University Triptolide derivatives and preparation method and use thereof
CN108872173A (zh) * 2018-06-29 2018-11-23 郑州轻工业学院 一种荧光增强型适体传感器及其制备方法和应用
WO2019112178A1 (ko) * 2017-12-06 2019-06-13 고려대학교 산학협력단 오담에 특이적으로 결합하는 dna 앱타머 및 그의 용도
CN110249060A (zh) * 2017-01-17 2019-09-17 生命技术公司 用于免疫组库测序的组合物和方法
CN111007053A (zh) * 2020-01-17 2020-04-14 郑州轻工业大学 用于检测银离子浓度的荧光适体传感器及其制备方法和应用
CN111004622A (zh) * 2019-11-28 2020-04-14 郑州轻工业大学 一种检测多巴胺的高灵敏荧光探针的制备方法及其应用

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2015019607A (ja) * 2013-07-17 2015-02-02 日産化学工業株式会社 マウス大腸癌Ｃｏｌｏｎ２６に特異的に結合する核酸
US20160362691A1 (en) * 2013-12-11 2016-12-15 Hong Kong Baptist University Triptolide derivatives and preparation method and use thereof
CN106052872A (zh) * 2016-06-01 2016-10-26 江南大学 一种基于纳米材料自组装的土霉素sers检测方法
CN110249060A (zh) * 2017-01-17 2019-09-17 生命技术公司 用于免疫组库测序的组合物和方法
WO2019112178A1 (ko) * 2017-12-06 2019-06-13 고려대학교 산학협력단 오담에 특이적으로 결합하는 dna 앱타머 및 그의 용도
CN108872173A (zh) * 2018-06-29 2018-11-23 郑州轻工业学院 一种荧光增强型适体传感器及其制备方法和应用
CN111004622A (zh) * 2019-11-28 2020-04-14 郑州轻工业大学 一种检测多巴胺的高灵敏荧光探针的制备方法及其应用
CN111007053A (zh) * 2020-01-17 2020-04-14 郑州轻工业大学 用于检测银离子浓度的荧光适体传感器及其制备方法和应用

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