CN112830937A

CN112830937A - 一种美登素dm1聚合物的制备方法

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Publication number: CN112830937A
Application number: CN201911161857.0A
Authority: CN
Inventors: 朱阳; 姚君亮; 姚长亮; 夏广兵; 蒋传真
Original assignee: Shanghai Phaarmaceuticals Holding Co ltd
Current assignee: Shanghai Phaarmaceuticals Holding Co ltd; Shanghai Pharmaceuticals Holding Co Ltd
Priority date: 2019-11-22
Filing date: 2019-11-22
Publication date: 2021-05-25

Abstract

本发明公开了一种美登素DM1聚合物的制备方法。本发明提供了一种如式I所示化合物的制备方法，其包括以下步骤：在溶剂中，将DM1进行如下所示氧化反应，得如式I所示化合物，所述溶剂为酰胺类溶剂、或酰胺类溶剂和水的混合溶剂。本发明公开的化合物I的制备方法工艺简单、易操作、产率高且成本低。

Description

一种美登素DM1聚合物的制备方法

技术领域

本发明涉及一种美登素DM1聚合物的制备方法。

背景技术

DM1是系列抗体偶联(ADC)药物中的一个关键化合物(N2'-去乙酰基-N2'-(3-巯基-1-氧代丙基)美登素(DM1)的简称，该化合物在合成制备过程中会产生一种美登素DM1聚合物如式I所示化合物，如式I所示化合物作为在DM1制备过程中的杂质，其在制备以及后处理等过程中的控制至为关键，研究和制备如式I所示化合物，对于选择合适方法有效控制和去除该类杂质，对提高DM1乃至ADC药物的质量意义重要。

文献J.Med.Chem.2006,49,4392-4408报道了一种如式I所示化合物的制备方法：室温下，2,2'-二硫二吡啶等试剂在磷酸缓冲溶液和乙醇存在的条件下使DM1脱氢聚合生成二聚体如式I所示化合物，最后通过HPLC制备纯化得到如式I所示化合物。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为了克服现有的DM1聚合物化合物I制备方法操作复杂和成本高的问题，本发明提供了一种与现有技术不同的美登素DM1聚合物的制备方法，该方法工艺简单、易操作且成本低。

本发明提供了一种如式I所示化合物的制备方法，其包括以下步骤：在溶剂中，将DM1进行如下所示氧化反应，得如式I所示化合物，所述溶剂为酰胺类溶剂、或酰胺类溶剂和水的混合溶剂；

在所述的制备方法中，所述的酰胺类溶剂可为本领域常规的酰胺类溶剂，以不影响反应即可(例如除酰胺结构外其余基团均为饱和烷基或环烷基的溶剂)，例如1,3-二甲基-2-咪唑啉酮DMI、二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺中的一种或多种，更优选为二甲基甲酰胺和/或1,3-二甲基-2-咪唑啉酮。

在某一方案中，所述的溶剂优选酰胺类溶剂和水的混合溶剂。

在所述的制备方法中，所述的混合溶剂中，所述的酰胺溶剂与水的体积比优选为1:1～1:10，例如1:1或1:4，更优选为1:1～1:4。

在所述的制备方法中，所述的溶剂的用量可不做限定，以不影响反应即可。所述的DM1与所述的酰胺类溶剂的质量体积比优选为1:10g/mL～1:40g/mL，例如1:26.7g/mL和1:40g/mL，更优选为1:20g/mL～1:40g/mL。

在所述的制备方法中，反应温度为本领域此类氧化反应的常规温度，所述反应的反应温度一般为0℃～150℃。

在所述的制备方法中，当所述溶剂为酰胺类溶剂时，本领域技术人员可以理解，反应温度较低(例如室温)时，反应时间须大大增加，以提高如式I所示化合物的转化率。当所述溶剂为酰胺类溶剂时，所述反应的反应温度优选为70℃～150℃，更优选75℃～85℃(例如80℃)。

在所述的制备方法中，当所述溶剂为酰胺类溶剂和水的混合溶剂时，化合物I的转化率大大加快，在室温就能完全转化为化合物I。当所述溶剂为酰胺类溶剂和水时，所述反应的反应温度一般为0℃～80℃(例如室温(10℃～30℃))，更优选为15～25℃。

在所述的制备方法中，所述的氧化反应可在惰性气体保护下进行，所述的气体保护可为本领域常规的气体保护，例如氩气保护，实验结果表明，反应是否在氩气保护下进行对反应的收率和纯度并无影响。

在所述的制备方法中，反应的进程可以采用本领域中的常规监测方法(例如TLC、HPLC)进行监测，一般以化合物DM1消失或不再反应时作为反应终点。所述的反应时间可为1-72小时，例如1h、31h和72h。

在本发明的某一方案中，所述溶剂为1,3-二甲基-2-咪唑啉酮和水，反应温度为室温。

在本发明的某一方案中，所述的氧化反应的原料仅包括DM1、酰胺类溶剂或酰胺类溶剂和水。

在所述的制备方法中，所述反应的后处理可采用该类反应常规的后处理，其包括如下步骤：在所述的氧化反应结束后，在水存在下，冷却结晶，过滤，得所述的如式I所示化合物。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：该方法工艺简单、易操作，可用于DM1生产过程中的杂质控制，对于提高DM1的质量具有重要意义。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1

1.化合物的合成方法

将150mg DM1投入到4mL 1,3-二甲基-2-咪唑啉酮中，搅拌加热至80℃，31小时，冷却至室温，加入15-20mL水，搅拌冷却至0℃左右，过滤，用水洗涤，得白色固体100mg，用1×10cm硅胶柱，二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到白色固体85mg二聚体化合物I，HPLC:94.6％(面积归一法所测)。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.17(d,J＝1.2Hz,1H),6.87(s,1H),6.69–6.44(m,3H),5.91(s,1H),5.68–5.47(m,1H),5.31(q,J＝6.6Hz,1H),4.54(dd,J＝12.0,2.5Hz,1H),4.08(t,J＝11.8Hz,1H),3.94(s,3H),3.50(d,J＝9.0Hz,1H),3.45(d,J＝12.4Hz,1H),3.27(s,3H),3.18(d,J＝12.5Hz,1H),3.10(s,3H),2.84–2.74(m,2H),2.70(s,3H),2.57–2.45(m,4H),2.05(d,J＝12.1Hz,1H),1.60(s,3H),1.46(d,J＝12.9Hz,2H),1.27(d,J＝3.4Hz,1H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H),0.79(s,3H).C₇₀H₉₄Cl₂N₆O₂₀S₂ MS-ESI计算值[M+1]⁺＝1473.53，实测值1473.56。

化合物I的HPLC检测方法如下表：

流动相梯度表：流动相A：0.05％磷酸水溶液，流动相B：乙腈，流动相C：甲醇。

DM1的保留时间为25.666min，化合物I的保留时间为37.486min。

2.化合物的检测条件

磁共振谱:仪器：AscendTM 400M Bruker型核磁共振仪；

HPLC分析条件：高效液相色谱仪配备PDA检测器；

色谱柱：Agilent Zorbax SB-phenyl，4.6×150mm，5μm；

流动相A：0.05％磷酸水溶液，流动相B：乙腈，流动相C：甲醇；

检测波长：220nm，流速：1.0mL/min，进样量：10μL；

样品浓度：1.0mg/mL，柱温：30℃，运行时间：55min。

实施例2

将100mg DM1投入到4mL二甲基甲酰胺中，搅拌加热至80℃，31小时，冷却至室温，加入15-20mL水，搅拌冷却至0℃左右，过滤，用水洗涤，得白色固体100mg，用1×10cm硅胶柱，二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到白色固体65mg二聚体化合物I，HPLC：94.9％(面积归一法所测)。

实施例3

将150mgDM1投入到4mL二甲基甲酰胺中，室温搅拌72小时，HPLC跟踪显示化合物I为40.0％，未转化原料DM1余：18.4％，加热至150℃,4小时,至DM1消失，冷却至室温，加入15-20mL水，搅拌冷却至0℃左右，过滤，用水洗涤，得棕色固体80mg，用1×10cm硅胶柱，二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到类白色固体55mg二聚体化合物I，HPLC:76.1％(面积归一法所测)。

实施例4

将150mg DM1投入到4mL二甲基乙酰胺中，搅拌加热至80℃，1小时，HPLC液相跟踪：无明显二聚体化合物I生成，加入16mL水，继续80℃反应24小时，至DM1消失,冷却至室温，加入15-20mL水，搅拌冷却至0℃左右，过滤，用水洗涤，得白色固体115mg，用1×10cm硅胶柱，二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到类白色固体75mg二聚体化合物I，HPLC:85.3％(面积归一法所测)。

实施例5

将150mgDM1投入到4mL 1,3-二甲基-2-咪唑啉酮与4mL水的混合液中，室温搅拌20小时，HPLC跟踪显示DM1已完全消失，逐渐有白色固体析出，加入20mL水，搅拌冷却至0℃左右，过滤，用水洗涤，得白色固体120mg，二聚体化合物I，HPLC:98.5％(面积归一法所测)。

对比例1

将150mg DM1投入到4mL 1,3-二甲基-2-咪唑啉酮中，室温搅拌反应20小时(HPLC跟踪显示DM1原料：93.1％，二聚体化合物I：6.7％)，72小时HPLC跟踪显示化合物I为10.5％，未转化原料DM1余：89.4％。

对比例2(参照J.Med.Chem.2006,49,4392-4408)

将150mg DM1投入到30mL1:1(v/v)乙醇与0.05M pH＝7.5的磷酸缓冲液中，加入25mg 2,2'-二硫二吡啶与6mL乙醇混合液，室温搅拌反应2小时，减压蒸除溶剂，用乙酸乙酯提取，有机相饱和氯化钠洗涤，减压蒸除溶剂，残余物用1×10cm硅胶柱，二氯甲烷/甲醇(20/1)洗脱，得到白色固体65mg二聚体化合物I，HPLC：87.04％(面积归一法)。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.18(s,1H),6.88(s,1H),6.64–6.48(m,3H),5.92(s,1H),5.66–5.49(m,1H),5.32(q,J＝6.7Hz,1H),4.54(dd,J＝12.0,2.5Hz,1H),4.08(t,J＝11.9Hz,1H),3.94(s,3H),3.51(d,J＝9.0Hz,1H),3.45(d,J＝12.2Hz,1H),3.27(s,3H),3.19(d,J＝12.3Hz,1H),3.10(s,3H),2.80(d,J＝9.5Hz,2H),2.71(s,3H),2.58–2.44(m,4H),2.05(d,J＝12.2Hz,1H),1.60(s,3H),1.46(d,J＝12.9Hz,2H),1.26(d,J＝12.9Hz,1H),1.18(d,J＝6.8Hz,3H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H),0.79(s,3H).MS-ESI计算值[M+1]⁺＝1473.53，实测值1473.56。

对比例3

将480mgDM1投入到38mL乙酸乙酯溶液中，加热至70℃左右溶解，室温搅拌20小时，过滤，得白色固体420mg,二聚体化合物I，HPLC：0.079％，DM1，HPLC:99.06％(面积归一法所测)。

对比例4

将150mgDM1投入到4mL二氯甲烷溶液中，溶解，室温搅拌20小时，减压浓缩至溶剂尽，加入少量乙醇，搅拌过滤，得白色固体120mg,二聚体化合物I，HPLC：0.07％，DM1，HPLC:99.12％(面积归一法所测)。

Claims

1.一种如式I所示化合物的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：在溶剂中，将DM1进行如下所示氧化反应，得如式I所示化合物，所述溶剂为酰胺类溶剂、或酰胺类溶剂和水的混合溶剂；

2.如权利要求1所述的如式I所示化合物的制备方法，其特征在于，所述的溶剂为酰胺类溶剂和水的混合溶剂。

3.如权利要求1所述的如式I所示化合物的制备方法，其特征在于，所述的酰胺类溶剂为1，3-二甲基-2-咪唑啉酮、二甲基甲酰胺和二甲基乙酰胺中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的如式I所示化合物的制备方法，其特征在于，所述的混合溶剂中，所述的酰胺类溶剂与水的体积比为1∶1～1∶10；

和/或，所述的DM1与所述的酰胺类溶剂的质量体积比为1∶10g/mL～1∶40g/mL。

5.如权利要求1中所述的如式I所示化合物的制备方法，其特征在于，所述的混合溶剂中，所述的酰胺类溶剂与水的体积比为1∶1～1∶4；

和/或，所述的DM1与所述的酰胺类溶剂的质量体积比为1∶20g/mL～1∶40g/mL。

6.如权利要求1中所述的如式I所示化合物的制备方法，其特征在于，当所述溶剂为酰胺类溶剂时，所述反应的反应温度为70℃～150℃；

和/或，当所述溶剂为酰胺类溶剂和水时，所述反应的反应温度为0℃～80℃。

7.如权利要求6中所述的如式I所示化合物的制备方法，其特征在于，当所述溶剂为酰胺类溶剂时，所述反应的反应温度为75℃～85℃；

和/或，当所述溶剂为酰胺类溶剂和水时，所述反应的反应温度为室温。

8.如权利要求1中所述的如式I所示化合物的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：

在酰胺类溶剂中，温度为80℃下，将DM1进行所述的氧化反应，得如式I所示化合物；

或在酰胺类溶剂与水的体积比为1∶1的混合溶剂中，温度为室温下，将DM1进行所述的氧化反应，得如式I所示化合物。

9.如权利要求1-8中任一项所述的如式I所示化合物的制备方法，其特征在于，所述的氧化反应的原料仅包括DM1、酰胺类溶剂或酰胺类溶剂和水。

10.如权利要求1-8中任一项所述的如式I所示化合物的制备方法，其特征在于，反应的后处理包含如下步骤：在所述的氧化反应结束后，在水存在下，冷却结晶，过滤，得所述的如式I所示化合物。