CN112826925B - 一种治疗骨关节疾病的中药液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于中成药的技术领域，本发明提供了一种治疗骨关节疾病的中药液及其制备方法。所述中药液由包括如下组分的原料制备得到：D‑氨基葡萄糖盐酸盐、牛骨胶原蛋白肽、鱼骨胶原蛋白肽、软骨素、氮酮、川芎、九里香、乳香、苦参、艾叶。本发明提供的中药液主要由关节核心物质和中药成分构成，各中药成分配合，起到消炎止痛、消肿生肌的作用，再配合关节核心物质，能够达到修复软骨、促进恢复，提高骨免疫力的效果。

Description

一种治疗骨关节疾病的中药液及其制备方法
技术领域
本发明涉及中成药的技术领域，尤其涉及一种治疗骨关节疾病的中药液及其制备方法。
背景技术
骨关节是人体经常使用和活动的部位，也是容易受到损伤和容易产生病变的部位。骨关节疾病主要包括颈椎病、肩周炎、腰椎病、骨质增生、滑囊炎、滑膜炎、风湿性关节炎、类风湿性关节炎、股骨头坏死等。中医认为跌扑、闪挫或寒湿之邪是出现关节损伤和病变的主要诱因，会导致经脉困阻、气血运行不畅，进而出现关节疼痛、肿胀、变形、骨刺增生等多种症状；西医认为骨关节损伤和病变主要由内外两方面因素造成，内因主要是骨关节的退行性病变，而外因则主要是劳损、损失和受寒湿等原因，多种关节内损伤引起滑膜功能异常，导致关节液无法正常生成和吸收，产生关节积液、滑膜形态变形，甚至会侵袭关节软骨。
骨关节疾病给患者带来的最大困扰是长期的关节疼痛和长久不愈，以及由此带来的行动不便和家庭负担。西药制剂主要以缓解疼痛、消除炎症为主，毒副作用较大，且只能缓解疼痛，不能治愈；中药多以外敷为主，虽然无毒副作用，但疗效差、见效慢。有鉴于此，有必要提供一种既能消炎止痛，又能修复软骨、促进关节恢复，还能提高骨免疫作用的药物，用于治疗骨关节疾病。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗骨关节疾病的外用中药液，该中药液具有消炎止痛、增强骨免疫力的作用，用于治疗骨关节疾病疗效显著。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种治疗骨关节疾病的中药液，所述中药液由包括如下组分的原料制备得到：D-氨基葡萄糖盐酸盐、牛骨胶原蛋白肽、鱼骨胶原蛋白肽、软骨素、氮酮、川芎、九里香、乳香、苦参、艾叶。
优选的，所述中药液由包括如下重量份的原料制备得到：D-氨基葡萄糖盐酸盐5～10份、牛骨胶原蛋白肽5～10份、鱼骨胶原蛋白肽5～10份、软骨素0.5～1份、氮酮0.3～0.8份、川芎10～20份、九里香10～15份、乳香5～15份、苦参3～8份、艾叶1～2份。
本发明还提供了一种治疗骨关节疾病的中药液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取川芎、九里香、乳香、苦参、艾叶冷冻后低温粉碎，再进行高温瞬时灭酶，得到中药粉；
(2)在所述中药粉中加入2～3倍重量的水煎煮，固液分离，得到中药提取液；
(3)将D-氨基葡萄糖盐酸盐、牛骨胶原蛋白肽、鱼骨胶原蛋白肽、软骨素和氮酮与步骤(2)制得的中药提取液混合，即可。
优选的，所述冷冻的温度为-80～-100℃，时间为3～5h。
优选的，所述低温粉碎的温度为-5～-20℃。
优选的，所述低温粉碎后过200～400目筛。
优选的，所述高温瞬时灭酶的温度为130～140℃，时间为2～3min。
优选的，所述固液分离为离心；所述离心的条件是在6000～8000r/min下离心10～120min。
本发明提供的中药液主要由关节核心物质和中药成分构成。本发明提供的中药成分中，川芎：活血化瘀、行气止痛；九里香：行气活血、散瘀止痛、解毒消肿；乳香：活血行气止痛、消肿生肌；苦参：清热祛湿；艾叶：理气血、温中逐冷、除湿开郁。各中药成分配合作用，具有快速消炎止痛、消肿生肌的作用，再配合关节核心物质(D-氨基葡萄糖盐酸盐、牛骨胶原蛋白肽、鱼骨胶原蛋白肽、软骨素)，能够起到修复软骨、促进关节恢复、提高骨免疫力的效果。本发明提供的中药液，可用于治疗颈椎病、肩周炎、腰椎突出增生、腱鞘炎、滑膜炎、腰肌劳损、肌肉拉伤、跌打损伤、风湿类风湿等骨关节疾病。
具体实施方式
本发明提供了一种治疗骨关节疾病的中药液，所述中药液由包括如下组分的原料制备得到：D-氨基葡萄糖盐酸盐、牛骨胶原蛋白肽、鱼骨胶原蛋白肽、软骨素、氮酮、川芎、九里香、乳香、苦参、艾叶。
本发明的牛骨胶原蛋白肽提取自内蒙古大草原纯种壮年蒙古牛的新鲜牛骨，具有预防和改善骨质疏松、加速骨骼愈合、提高骨韧性、防治钙流失、提高钙吸收率的作用。是治疗骨关节疾病的关节核心物质之一。
本发明的鱼骨胶原蛋白提取自阿拉斯加深海黑鳕鱼，具有增加机体组织韧性、增强骨骼弹性、增加骨密度的作用。是治疗骨关节疾病的关节核心物质之一。
本发明提供的软骨素采用酶解-树脂提取工艺，提取过程中分子不被降解，制备的软骨素纯度高。是治疗骨关节疾病的关节核心物质之一。
在本发明中，所述治疗骨关节疾病的中药液，优选由包括如下重量份的原料制备得到：D-氨基葡萄糖盐酸盐5～10份、牛骨胶原蛋白肽5～10份、鱼骨胶原蛋白肽5～10份、软骨素0.5～1份、氮酮0.3～0.8份、川芎10～20份、九里香10～15份、乳香5～15份、苦参3～8份、艾叶1～2份。
在本发明中，所述D-氨基葡萄糖盐酸盐优选为5～10份，进一步优选为6～9份，再进一步优选为8份；所述牛骨胶原蛋白肽优选为5～10份，进一步优选为6～9份，再进一步优选为8份；所述鱼骨胶原蛋白肽优选为5～10份，进一步优选为6～9份，再进一步优选为8份；所述软骨素优选为0.5～1份，进一步优选为0.6～0.8份，再进一步优选为0.7份；所述氮酮优选为0.3～0.8份，进一步优选为0.4～0.7份，再进一步优选为0.5份；所述川芎优选为10～20份，进一步优选为12～18份，再进一步优选为15份；所述九里香优选为10～15份，进一步优选为12～14份，再进一步优选为13份；所述乳香优选为5～15份，进一步优选为8～12份，再进一步优选为10份；所述苦参优选为3～8份，进一步优选为4～7份，再进一步优选为6份；所述艾叶优选为1～2份，进一步优选为2份。
本发明还提供了一种治疗骨关节疾病的中药液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取川芎、九里香、乳香、苦参、艾叶进行冷冻后低温粉碎，再采用高温瞬时灭酶，得到中药粉；
(2)在所述中药粉中加入2～3倍重量的水煎煮，固液分离，得到中药提取液；
(3)将D-氨基葡萄糖盐酸盐、牛骨胶原蛋白肽、鱼骨胶原蛋白肽、软骨素和氮酮与步骤(2)制得的中药提取液混合，即可。
本发明取川芎、九里香、乳香、苦参、艾叶进行冷冻后低温粉碎，再采用高温瞬时灭酶，得到中药粉。
多糖是中药中的主要活性物质之一，且无毒副作用、来源广泛。本发明采用冷冻、低温粉碎和高温瞬时灭酶的中药加工方法，有利于最大限度的保留住多糖等活性成分。中药粉碎后，会增加多糖等活性成分与酶的接触几率，酶的降解作用会造成多糖等活性成分的损失，从而降低药效。本发明将冷冻的中药材在低温下粉碎，由于冷冻处理已经降低和抑制了酶的降解活性，且在低温下粉碎能够保证短时间内多糖等活性成分不会被酶破坏，再结合高温瞬时灭酶处理使酶失活，从而彻底避免了多糖等活性成分被降解的风险，从而最大限度的保留住多糖等活性成分。
在本发明中，所述冷冻在真空冷冻机中进行。
在本发明中，所述冷冻的温度优选为-80～-100℃，进一步优选为-80℃、-85℃、-90℃、-95℃、-100℃，再进一步优选为-90℃。
在本发明中，所述冷冻的时间优选为3～5h，进一步优选为3h、3.5h、4h、4.5h、5h，再进一步优选为4h。
在本发明中，所述低温粉碎的温度优选为-5～-20℃，进一步优选为-5℃、-10℃、-15℃、-20℃，再进一步优选为-20℃。
在本发明中，所述低温粉碎后优选过200～400目筛，进一步优选过200目、250目、270目、325目、400目筛，再进一步优选为过270目筛。
在本发明中，所述高温瞬时灭酶的温度优选为130～140℃，进一步优选为130℃、135℃、140℃，再进一步优选为135℃；时间优选为2～3min，进一步优选为2min。
制得中药粉后，在所述中药粉中加入2～3倍重量的水煎煮4～5h，固液分离，得到中药提取液；
在本发明中，所述固液分离优选为离心。
在本发明中，所述离心的转速优选为6000～8000r/min，进一步优选为6000r/min、6800r/min、7000r/min、7200r/min、7600r/min、8000r/min，再进一步优选为8000r/min；所述离心的时间优选为10～120min，进一步优选为10min、20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min、100min、110min、120min，再进一步优选为90min。
制得中药提取液后，将D-氨基葡萄糖盐酸盐、牛骨胶原蛋白肽、鱼骨胶原蛋白肽、软骨素和氮酮与制备的中药提取液混合均匀，即得到用于治疗骨关节疾病的中药液。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
按照重量份取川芎15份、九里香13份、乳香10份、苦参6份、艾叶2份，置于真空冷冻机中在-90℃下冷冻4h，取出在-20℃下粉碎，过270目筛，过筛后，立即进行高温蒸汽灭酶，灭酶温度为135℃，灭酶2min，取出得到中药粉；在中药粉中加入其重量2倍的水煎煮4h，然后在8000r/min下离心90min，进行固液分离，得到中药提取液。采用苯酚-硫酸法测定该中药提取液中的多糖含量为47.90mg/g。
将上述中药提取液与8份D-氨基葡萄糖盐酸盐、8份牛骨胶原蛋白肽、8份鱼骨胶原蛋白肽、0.7份软骨素和0.5份氮酮混合均匀，即得到用于治疗骨关节疾病的中药液。
本发明的中药提取液的提取工艺参数，对提取液中的多糖含量具有显著的影响。如对比例1：
对比例1
1.探究冷冻-低温粉碎-高温灭酶的提取工艺对多糖含量的影响
直接将中药在常温下(25℃)粉碎，过270目筛，然后加入其重量2倍的水煎煮4h，然后在8000r/min下离心90min，进行固液分离，得到中药提取液，采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量为20.75mg/g。因此，本发明采用冷冻-低温粉碎-高温灭酶的提取工艺，能够显著提高中药提取液中的多糖含量。
2.探究冷冻温度对多糖含量的影响
以冷冻温度为单一变量，分别在-20℃、-45℃、-60℃、-80℃、-90℃、-100℃、-120℃、-150℃下对中药进行冷冻处理，其余操作同实施例1，得到不同冷冻温度下的中药提取液，并采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。如表1所示：
表1冷冻温度对多糖含量的影响
冷冻温度/℃ -20 -45 -60 -80 -90 -100 -120 -150
多糖含量/mg/g 30.49 31.52 34.15 47.60 47.90 46.54 47.32 46.51
由表1可以看出，冷冻温度高于-80℃时，中药提取液中的多糖含量要显著低于-80～-150℃时的多糖含量。这表明本发明设置的冷冻温度能够显著降低酶的降解活性，有利于最大限度的保留中药中的多糖成分。虽然冷冻温度在-120℃和-150℃也检测到了高含量的多糖，但是在抗炎试验中，-120℃和-150℃组的中药液却未取得较好的抗炎效果，这可能是因为过低的温度破坏了多糖的空间结构，导致活性多糖的损失(见表4)。
3.探究冷冻时间对多糖含量的影响
以冷冻时间为单一变量，分别在0.5h、1h、2h、4h、6h、8h下对中药进行冷冻处理，其余操作同实施例1，得到不同冷冻温度下的中药提取液，并采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。如表2所示：
表2冷冻时间对多糖含量的影响
冷冻时间/h 0.5 1 2 4 6 8
多糖含量/mg/g 26.37 29.56 30.43 47.90 46.89 48.02
由表2可以看出，冷冻时间多短不利于多糖的提取，这表明较短的冷冻时间不能很好的降低酶的活性，从而造成多糖的损失；同时，结合抗炎试验，过长的冷冻时间和过低的冷冻温度一样，也对多糖的空间结构具有破坏作用，导致活性多糖的损失(见表4)。
4.探究低温粉碎对多糖含量的影响
按照实施例1的提取工艺，将冷冻后的中药材在常温下(25℃)粉碎，过270目筛，其与操作同实施例1，得到中药提取液。并采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量为25.65mg/g。可见，在低温下对冷冻后的中药进行粉碎能够大大降低酶对多糖的降解作用，即使在粉碎中酶与多糖的接触增加了，但由于酶活性得到抑制，使得活性多糖得以被保护。从而能够大大提高提取液中的多糖含量。
实施例2
按照重量份取川芎10份、九里香10份、乳香5份、苦参3份、艾叶1份，置于真空冷冻机中在-100℃下冷冻3h，取出在-5℃下粉碎，过200目筛，过筛后，立即进行高温蒸汽灭酶，灭酶温度为140℃，灭酶2min，取出得到中药粉；在中药粉中加入其重量3倍的水煎煮5h，然后在6000r/min下离心60min，进行固液分离，得到中药提取液。采用苯酚-硫酸法测定该中药提取液中的多糖含量为46.46mg/g。
将上述中药提取液与5份D-氨基葡萄糖盐酸盐、10份牛骨胶原蛋白肽、10份鱼骨胶原蛋白肽、0.5份软骨素和0.8份氮酮混合均匀，即得到用于治疗骨关节疾病的中药液。
实施例3
按照重量份取川芎20份、九里香15份、乳香15份、苦参8份、艾叶2份，置于真空冷冻机中在-80℃下冷冻5h，取出在-15℃下粉碎，过400目筛，过筛后，立即进行高温蒸汽灭酶，灭酶温度为130℃，灭酶3min，取出得到中药粉；在中药粉中加入其重量2倍的水煎煮5h，然后在7200r/min下离心120min，进行固液分离，得到中药提取液。采用苯酚-硫酸法测定该中药提取液中的多糖含量为48.60mg/g。
将上述中药提取液与10份D-氨基葡萄糖盐酸盐、6份牛骨胶原蛋白肽、9份鱼骨胶原蛋白肽、0.8份软骨素和0.7份氮酮混合均匀，即得到用于治疗骨关节疾病的中药液。
实施例4
按照重量份取川芎12份、九里香12份、乳香8份、苦参4份、艾叶1份，置于真空冷冻机中在-85℃下冷冻3.5h，取出在-10℃下粉碎，过250目筛，过筛后，立即进行高温蒸汽灭酶，灭酶温度为135℃，灭酶2min，取出得到中药粉；在中药粉中加入其重量2倍的水煎煮4h，然后在7000r/min下离心10min，进行固液分离，得到中药提取液。采用苯酚-硫酸法测定该中药提取液中的多糖含量为48.06mg/g。
将上述中药提取液与10份D-氨基葡萄糖盐酸盐、5份牛骨胶原蛋白肽、5份鱼骨胶原蛋白肽、1份软骨素和0.3份氮酮混合均匀，即得到用于治疗骨关节疾病的中药液。
实施例5
按照重量份取川芎18份、九里香14份、乳香12份、苦参7份、艾叶2份，置于真空冷冻机中在-90℃下冷冻4.5h，取出在-20℃下粉碎，过325目筛，过筛后，立即进行高温蒸汽灭酶，灭酶温度为135℃，灭酶2min，取出得到中药粉；在中药粉中加入其重量3倍的水煎煮4h，然后在8000r/min下离心30min，进行固液分离，得到中药提取液。采用苯酚-硫酸法测定该中药提取液中的多糖含量为47.88mg/g。
将上述中药提取液与9份D-氨基葡萄糖盐酸盐、9份牛骨胶原蛋白肽、6份鱼骨胶原蛋白肽、0.6份软骨素和0.4份氮酮混合均匀，即得到用于治疗骨关节疾病的中药液。
实施例6
按照重量份取川芎20份、九里香10份、乳香12份、苦参6份、艾叶2份，置于真空冷冻机中在-100℃下冷冻4h，取出在-5℃下粉碎，过270目筛，过筛后，立即进行高温蒸汽灭酶，灭酶温度为135℃，灭酶3min，取出得到中药粉；在中药粉中加入其重量2倍的水煎煮4h，然后在8000r/min下离心100min，进行固液分离，得到中药提取液。采用苯酚-硫酸法测定该中药提取液中的多糖含量为46.28mg/g。
将上述中药提取液与10份D-氨基葡萄糖盐酸盐、10份牛骨胶原蛋白肽、10份鱼骨胶原蛋白肽、0.5份软骨素和0.5份氮酮混合均匀，即得到用于治疗骨关节疾病的中药液。
实施例7
本实施例利用动物实验对实施例1～6制备的中药液的抗炎效果进行说明。
将70只新西兰白兔采用Hulth手术制成兔骨关节炎模型。取兔右膝关节内侧入路，切断内侧副韧带，摘除内侧半月板，切断前交叉韧带。术后连续3天肌肉注射抗生素以防感染，1周后开始每天强迫活动1h，连续4周。造模成功后，将其随机分为模型组、实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组、实施例6组，每组10只。并以10只未经造模的新西兰白兔为对照，作为空白组。除模型组和空白组外，其余各组分别在关节处涂膜对应实施例的中药液。每天3次，每次1mL，按摩至完全吸收，共治疗6周。治疗结束后，于膝外侧髌骨下方施行关节腔穿刺，以0.9％生理盐水0.5mL注入，反复回抽、注入3次，抽出关节冲洗液，测定其中炎症因子白介素1L-1β的含量。见表3：
表3本发明中药液对兔骨关节炎模型的抗炎作用
组别 白介素IL-1β含量/pg/mL TNF-α/pg/mL
空白组 1.35±0.16 59.46±3.19
模型组 5.11±0.48 166.48±6.21
实施例1组 1.43±0.44<sup>*</sup> 40.46±6.83<sup>*</sup>
实施例2组 2.16±0.64<sup>*</sup> 42.46±9.29<sup>*</sup>
实施例3组 1.46±0.82<sup>*</sup> 56.87±8.49<sup>*</sup>
实施例4组 1.87±0.84<sup>*</sup> 58.94±2.19<sup>*</sup>
实施例5组 1.46±0.32<sup>*</sup> 5291±4.38<sup>*</sup>
实施例6组 2.46±0.13<sup>*</sup> 43.53±6.56<sup>*</sup>
注：*表示与模型组相比，p＜0.05。
由表3可以看出，本发明提供的中药液对骨关节疾病——骨关节炎具有显著的抗炎作用。
此外，本实施例还对对比例1中冷冻温度为-120℃、-150℃和冷冻时间为6h、8h的条件下制备的中药液进行了抗炎试验，实验结果如表4：
表4不同冷冻温度和冷冻时间下制备的中药液的抗炎作用
组别 白介素IL-1β含量/pg/mL TNF-α/pg/mL
-120℃ 3.35±1.15 89.46±0.19
-150℃ 3.31±0.62 91.37±6.11
6h 4.34±0.61 86.46±0.46
8h 4.46±0.03 90.37±9.26
证明过低的冷冻温度和过长的冷冻时间，会影响药物的有效性。
本发明经过多年的临床试验证明，本发明的中药液具有消炎止痛、消肿生肌、修复软骨、促进恢复，提高骨免疫力的作用。
病例1
刘某，女，45岁，膝关节红肿，疼痛难忍，行走不便，诊断为膝关节骨质增生；吃西药消炎止痛药治疗，症状未能缓解；使用本发明实施例1的中药液，每日3次，一次2mL，在红肿疼痛处按摩至完全吸收，3周为一个疗程，使用1周后红肿消失，2周后疼痛减缓；使用4个疗程后红肿、疼痛消失，行走无障碍，基本痊愈。
病例2
许某，男，42岁，肘关节摔伤，患处红肿、疼痛、水肿、充血；使用本发明实施例1的中药液治疗，每日3次，一次2mL，在红肿疼痛处按摩至完全吸收，3周为一个疗程，使用2个疗程后痊愈。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种治疗骨关节疾病的中药液，其特征在于，所述中药液由包括如下组分的原料制备得到：D-氨基葡萄糖盐酸盐5～10份、牛骨胶原蛋白肽5～10份、鱼骨胶原蛋白肽5～10份、软骨素0.5～1份、氮酮0.3～0.8份、川芎10～20份、九里香10～15份、乳香5～15份、苦参3～8份、艾叶1～2份；
所述中药液的制备方法，包括如下步骤：
(1)取川芎、九里香、乳香、苦参、艾叶冷冻后低温粉碎，再进行高温瞬时灭酶，得到中药粉；
(2)在所述中药粉中加入2～3倍重量的水煎煮，固液分离，得到中药提取液；
(3)将D-氨基葡萄糖盐酸盐、牛骨胶原蛋白肽、鱼骨胶原蛋白肽、软骨素和氮酮与步骤(2)制得的中药提取液混合，即可；
所述冷冻的温度为-80～-100℃，时间为3～5h。
2.权利要求1所述的一种治疗骨关节疾病的中药液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取川芎、九里香、乳香、苦参、艾叶冷冻后低温粉碎，再进行高温瞬时灭酶，得到中药粉；
(2)在所述中药粉中加入2～3倍重量的水煎煮，固液分离，得到中药提取液；
(3)将D-氨基葡萄糖盐酸盐、牛骨胶原蛋白肽、鱼骨胶原蛋白肽、软骨素和氮酮与步骤(2)制得的中药提取液混合，即可；
所述冷冻的温度为-80～-100℃，时间为3～5h。
3.如权利要求2所述的一种治疗骨关节疾病的中药液的制备方法，其特征在于，所述低温粉碎的温度为-5～-20℃。
4.如权利要求3所述的一种治疗骨关节疾病的中药液的制备方法，其特征在于，所述低温粉碎后过200～400目筛。
5.如权利要求2所述的一种治疗骨关节疾病的中药液的制备方法，其特征在于，所述高温瞬时灭酶的温度为130～140℃，时间为2～3min。
6.如权利要求2所述的一种治疗骨关节疾病的中药液的制备方法，其特征在于，所述固液分离为离心；所述离心的条件是在6000～8000r/min下离心10～120min。
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