CN112826785B - 包括蜂蜜提取物的美容护肤产品及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包括蜂蜜提取物的美容护肤产品及其用途。描述了包含治疗有效量的蜂蜜提取物的美容护肤产品，该蜂蜜提取物具有的酚类化合物与糖类的比例为该提取物所源自的原始蜂蜜的至少5倍，且包括至少乙醇、水和一种或多种MMP抑制性酚类化合物的混合物。

Description

包括蜂蜜提取物的美容护肤产品及其用途

本申请是申请日为2015年5月5日发明名称为“基质金属蛋白酶(MMP)抑制性提取物及其使用方法”的申请号为2015800368660(国际申请号为PCT/NZ2015/000034)的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明描述了基质金属蛋白酶(MMP)抑制性提取物及其使用方法。更具体地，描述了源自于蜂蜜的提取物以及该提取物在美容护肤产品中抑制MMP活性的用途。

背景技术

蜂蜜是许多产品中众所周知的活性成分，包括用于烹饪应用、局部医疗，包括掺入到现有的美容护肤制剂中。美容护肤制剂通常可能不包含足够的蜂蜜以赋予任何活性，或者如果存在的话，或所选择的蜂蜜的类型仅提供低水平的(如果有的话)MMP抑制。这是因为较高浓度的蜂蜜引起了制剂问题，诸如蜂蜜的粘性和高粘度，而且，本发明人已经发现只有某些蜂蜜类型赋予了MMP抑制。

基质金属蛋白酶(MMP)在皮肤老化中起重要作用。通过紫外线辐射(UV)活化，MMP的过表达可导致皮肤中胶原蛋白的分解。因此，这可能导致降低皮肤弹性且形成皱纹。MMP抑制剂是抗衰老护肤制剂中的有用成分，因为MMP抑制剂减少了由胶原降解所引起的皮肤光老化。天然MMP抑制剂近来在市场上广受青睐。

发明人已经发现，一些蜂蜜(例如麦卢卡蜂蜜)可能具有MMP抑制作用。麦卢卡蜂蜜源自于植物物种松红梅树，并包含各种各样的酚类和黄酮类化合物，其中一些已被鉴定，且其他仍然未知。各种酚类和类黄酮的确切活性仍然是一个丰富的研究领域，伴有许多新化合物被鉴定以及阐明其活性。由于麦卢卡蜂蜜具有非过氧化物的作用，部分归因于接受进入局部医学应用，并且特别是甲基乙二醛(MGO)在这种蜂蜜中的抗菌作用，因此，麦卢卡蜂蜜是一种特别熟知的蜂蜜。其他的松红梅属蜂蜜也有类似的抗菌作用并与MGO相关联，诸如松红梅亚属(Leptospermum subtenue)和澳洲茶树(Leptospermum polygalifolium)。除了松红梅属蜂蜜，来自昆士兰属和奈特山龙眼属的另外的蜂蜜(诸如卡努卡(新西兰茶树)和忍冬花(新西兰龙眼木)蜂蜜)也具有高水平的酚类和类黄酮浓度。这些蜂蜜并不含有MGO，但仍显示有望在体内具有其他形式的活性。

根据发明人的工作和知识，蜂蜜的酚类成分似乎是作为MMP抑制作用的主要成分。虽然赋予活性的确切酚类化合物是未知的，但发明人已经确定酚类提取物具有这种活性。

丁香酸甲酯(虽然其本身不具有活性)是许多酚类化合物的基本结构单元。可以容易地测量丁香酸甲酯(例如通过HPLC)，并且其在富含酚的蜂蜜中得以发现。丁香酸甲酯可以以8μg/mL至40μg/mL的浓度范围存在于现有的市售护肤制剂中，并且通过推断，一系列的丁香酸甲酯相关的酚类化合物也存在于这些产品中。在任何情况下，MMP抑制作用的存在和程度似乎与提取物中丁香酸甲酯的浓度相关。

尽管蜂蜜具有本发明人所确定的有用的MMP抑制作用，但是当配制护肤产品时蜂蜜的确存在巨大的挑战。一方面，配制设计师希望将制剂中蜂蜜的浓度最大化，以使MMP抑制活性最大化。另一方面，即使在5％(w/w)的低浓度下，也可以证明蜂蜜中的糖在护肤制剂中是令人苦恼的。糖可能引起不舒适、粘的皮肤感觉，并且可能存在皮肤吸收的问题。因此，这可能限制了蜂蜜的浓度，并因而限制了成品的活性。

为了用蜂蜜实现有用的MMP抑制效果，必须将引起不适的高糖浓度引入护肤制剂中，由于差的美容(cosmetic)特性，可能使得产品不具市场性。

应当理解的是，增加护肤制剂的MMP抑制作用，同时还避免了蜂蜜在制剂中的负面影响或至少为公众提供选择将是有用的。

根据仅作为示例给出的后续描述，提取物和使用方法的另外的方面和优点将变得显而易见。

发明内容

本发明描述了MMP抑制性提取物及其使用方法。更具体地，描述了源自于蜂蜜的提取物以及该提取物在抑制基质金属蛋白酶(MMP)活性和相关护肤产品中的用途。该提取物允许包含更高浓度的酚类物质，因此具有更高的MMP抑制作用，同时避免了使用未处理的蜂蜜所固有的配制问题。

在第一方面，提供了包含治疗有效量的蜂蜜提取物的美容护肤产品，该蜂蜜提取物具有的酚类化合物与糖类(saccharides)的比例为该提取物所源自于的原始蜂蜜的至少5倍，且蜂蜜提取物包括至少乙醇、水和一种或多种MMP抑制性酚类化合物的混合物。

在第二方面，提供了治疗有效量的蜂蜜提取物在制备用以抑制施用美容产品的受试者皮肤上或皮肤中的MMP活性的美容护肤产品中的用途，其中该美容护肤产品含有蜂蜜提取物，蜂蜜提取物具有的酚类化合物与糖类的比例为该提取物所源自于的原始蜂蜜的至少5倍，且所述蜂蜜提取物包括至少乙醇、水和一种或多种MMP抑制性酚类化合物的混合物。

在第三方面，提供了通过将美容护肤产品局部施用于受试者的皮肤来处理美容皮肤症状的方法，其中所述美容护肤产品起到抑制皮肤MMP活性的作用，并且其中该美容护肤产品含有治疗有效量的蜂蜜提取物，蜂蜜提取物具有的酚类化合物与糖类的比例为该提取物所源自于的原始蜂蜜的至少5倍，且蜂蜜提取物包括至少乙醇、水和一种或多种MMP抑制性酚类化合物的混合物。

在第四方面，提供了一种生产抑制MMP的蜂蜜提取物的方法，其包括以下步骤：

(a)将所选的蜂蜜与乙醇混合；

(b)分离混合物以从包括乙醇、水和一种或多种MMP抑制性酚类化合物的第二相基本上除去糖类浓缩的第一相；

(c)进行进一步分离步骤以通过降低乙醇和/或水浓度来增加酚类化合物浓度；

(d)收集所得的酚类化合物浓缩物。

应当显而易见的是，上述提取物、产品、用途和方法允许在美容护肤产品中包括比用纯蜂蜜可能高得多的浓度的MMP抑制化合物的能力。如上所述，当在护肤产品中使用时，纯蜂蜜赋予产品有害的特性。通过浓缩MMP抑制化合物，可以使用比用纯蜂蜜的情况要高得多的浓度的这些化合物，并且这也避免了配制问题。提取产物和方法还具有一些额外的优点，即酚类的稳定和保存以及透皮增强特征。结果是具有更好功效与改善的稳定性、处理和使用性质相结合的增强价值产品。

附图说明

仅作为示例给出并参考附图的以下描述，MMP抑制性提取物的其他方面及其使用方法将变得显而易见，其中：

图1示出了生产本文所述的提取物的一种方法的流程图。

图2为示出了不同蜂蜜的不同酚类浓度与MMP-1活性之间的关系的图。

图3为示出不同蜂蜜的不同酚类浓度与MMP-2活性之间的关系的图。

图4为示出了不同蜂蜜的不同酚类浓度与MMP-9活性之间的关系的图。

图5为示出了基于固体比例的蜂蜜提取物样品的浓度与MMP-1活性之间的关系的图。

图6为示出了丁香酸甲酯浓度和MMP-1活性之间的关系的图。

具体实施方式

如上所述，描述了MMP抑制性提取物和其使用方法。更具体地，描述了源自于蜂蜜的提取物以及该提取物在抑制基质金属蛋白酶(MMP)活性和相关护肤产品中的用途。该提取物允许包含更高浓度的酚类物质，因此具有更高的MMP抑制作用，同时避免了使用未处理的蜂蜜所固有的配制问题。

出于本说明书之目的，术语“约”或“大约”及其语法变体意味着相对于基准总量、水平、程度、值、数量、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度变化30％、25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的总量、水平、程度、值、数量、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度。

术语“基本上”或其语法变体是指至少约50％，例如75％、85％、95％或98％。

术语“包括”及其语法变体应当具有包含的意思-即，其将被理解为不仅包括其直接引用的所列出的成分，而且还包括其他未指定的成分或元素。

术语“护肤产品”或其语法变体是指用于美容用途的局部施用制剂。

术语“美容”或其语法变体是指可施用于人体用于清洁、美化、促进吸引力或改变皱纹外观的组合物。

关于本文所述的组合物的量或剂量，术语“治疗有效量”或其语法变体是指足以引起美容效果的组合物的量。

术语“蜂蜜”或其语法变体是指由蜜蜂和其他昆虫所产生的来自花的花蜜的甜的且粘性的流体。

本文所用的术语“纯蜂蜜”或“未提取的蜂蜜”或“原始蜂蜜”或其语法变体是指由蜜蜂所生产的蜂蜜。可能已经进行可正常的加工步骤，诸如脱水或还原，蜂蜜的过滤达50微米和/或灭菌(例如通过照射)。

关于植物的特定属或种的术语“基本上源自于…的蜂蜜”是指由花蜜所产生的蜂蜜，其中至少约50％、或75％、或85％、或95％或98％是源自于所指明的物种。

如本文所用的术语“提取物”及其语法变体是指具有至少大部分天然存在的糖或糖类已从纯蜂蜜中除去的蜂蜜。

本文所用的术语“酚类化合物”或语法变体是指包括以下基本酚结构的化合物：

本文提及的酚类化合物可以是简单酚类或多酚类。

术语“MMP抑制”或其语法变体是指在体内抑制基质金属蛋白酶(MMP)活性的化合物。MMP活性可以完全停止(完全抑制)或降低至至少一定程度，取决于存在的MMP抑制剂的浓度以及存在的该抑制性化合物的相对抑制强度。

在第一方面，提供了包含治疗有效量的蜂蜜提取物的美容护肤产品，蜂蜜提取物具有的酚类化合物与糖类的比例为该提取物所源自于的原始蜂蜜的至少5倍，且所述蜂蜜提取物包括至少乙醇、水和一种或多种MMP抑制性酚类化合物的混合物。

上述提取物可具有的酚类化合物与糖类的比例为该提取物所源自于的原始蜂蜜的约5倍、或6倍、或7倍、或8倍、或9倍、或10倍、或11倍、或12倍、或13倍、或14倍、或15倍、或16倍、或17倍、或18倍、或19倍、20倍或更多倍。在一种实施方式中，该提取物可以具有的酚类化合物与糖类的比例为原始蜂蜜的大约10-20倍。在另一种实施方式中，该提取物可具有比原始蜂蜜大大约15倍的酚类化合物与糖类的比例。

上述提取物可以具有的丁香酸甲酯的浓度为原始蜂蜜中的丁香酸甲酯的浓度的约5倍、或6倍、或7倍、或8倍、或9倍、或10倍、或11倍、或12倍、或13倍、或14倍、或15倍、或16倍、或17倍、或18倍、或19倍，或20倍。在一种实施方式中，该提取物可具有的丁香酸甲酯浓度为原始蜂蜜的大约10-20倍。在另一种实施方式中，该提取物可以具有的丁香酸甲酯浓度为原始蜂蜜多大约15倍。然而，应当理解的是，丁香酸甲酯不是MMP抑制性化合物本身；该化合物易于测量并提供了一般MMP抑制性酚浓度的可重复且可靠的测量。事实上，根据发明人的工作，MMP抑制性效应的程度与提取物中丁香酸甲酯的浓度良好相关。结果是丁香酸甲酯可以提供测量MMP抑制的有效方法。测量可以通过各种已知的方法(包括例如通过高效液相色谱(HPLC))来完成。

该提取物可以含有约200μg/mL、或300μg/mL、或400μg/mL、或500μg/mL、或600μg/mL、或700μg/mL、或800μg/mL、或900μg/mL、或1000μg/mL的丁香酸甲酯。在一种实施方式中，该提取物可以含有200μg/mL至1000μg/mL的丁香酸甲酯。如可以理解的，与通常在蜂蜜或皮肤护理产品中所测量的水平相比，该水平的丁香酸甲酯大大增加。举例说明，与上述提取物相比，一种市售的护肤产品包括仅8μg/mL至40μg/mL的丁香酸甲酯(并且通过推论得出类似低的其他酚类浓度)。

如上所述，丁香酸甲酯是简单的酚类化合物形式，其中衍生出许多其他酚类化合物。然而造成所观察到的MMP抑制的一种或多种确切的酚类化合物不是明确已知的，举例说明，蜂蜜含有许多酚类，其中一些显示在下表中：

如可以理解的，实际的活性酚类化合物可以是这些中的任何一种，或者可以是这些或甚至其他化合物的协同作用。

被抑制的MMP可以是MMP-1(胶原酶-1)、MMP-2(明胶酶-A)和MMP-9(明胶酶-B)。

基于蜂蜜提取物中的0.5％的酚类如所测量的抑制程度可以为至少10％。应当理解的是，美容护肤产品中所测得的抑制程度可以根据产品中酚类的浓度及其花来源而变化，并且提供该数字仅为举例说明。

在配制于护肤产品中前，该提取物可以含有大约10％、或15％、或20％、或25％、或30％、或35％、或40％、或45％、或50％、或55％、或60％、或65％、或70％、或75％、或80％的乙醇。在一种实施方式中，该提取物可以含有大约50％至70％的乙醇。然而，应当理解的是，提供该量是举例说明，乙醇的实际量可以根据完成的乙醇分离的量(例如通过蒸发或蒸馏)和各种其他参数(诸如在提取物中协助进一步配制工作所想要的乙醇的所需量)而显著地变化。发明人已经发现，在提取物中保留乙醇可能是重要的且有利于帮助(a)在配制前的储存期间，酚类稳定性；(b)作为防腐剂并避免微生物生长，以及(c)在配制时乙醇辅助酚类的透皮渗透。更具体地，所提取的酚类化合物被理解为至少部分地不溶于水。提取物中乙醇的存在意味着酚类化合物保留在溶液中并避免沉淀问题，从而避免不稳定性和分离。其次，乙醇用作防止或至少限制微生物在溶液中生长的防腐剂。在本申请中乙醇的稳定特性和保存特性都意味着提取物可以在配制成护肤产品之前储存相当长的时间。乙醇的最后一个优点是乙醇中的酚类将更容易地被吸收到皮肤中，因为乙醇是透皮增强剂。使酚类处于用于施用的即用状态使得配制更容易，并避免或至少最小化添加另外的透皮剂的需要。从营销和商业角度来看，作为溶剂乙醇也可以是有利的，因为乙醇可以由天然加工方法制备或获得，且乙醇是众所周知的并在产业中使用。

在配制于护肤产品中前，该提取物可以含有大约0.1％、或0.5％、或1％、或2％、或3％、或4％、或5％、或6％、或7％、或8％、或9％、或10％、或11％、或12％、或13％、或14％、或15％、或16％、或17％、或18％的水。在一种实施方式中，该提取物可以含有大约5％至15％的水。在一种实施方式中，该提取物可以含有8％至12％的水。正如可以理解的，蜂蜜本身天然含有高达18％的水，并且该提取物中的水可以是从蜂蜜本身获取并且不通过任何其他方式添加水。

护肤产品可以含有大约0.1％、或0.2％、或0.3％、或0.4％、或0.5％、或0.6％、或0.7％、或0.8％、或0.9％、或1％、或2％、或3％、或4％、或5％、或6％、或7％、或8％、或9％、或10％、或11％、或12％、或13％、或14％、或15％、或16％、或17％、或18％、或19％、或20％(w/w)的提取物。在一种实施方式中，该护肤产品可以含有大约1％至5％的提取物。通过比较，护肤产品中大约2％的提取物产生了与30％的纯蜂蜜浓度相当的MMP抑制效果。护肤产品中的这种水平的蜂蜜将是完全不可控的，具有许多问题，诸如分离、稳定性、气味、高粘度和高粘性。所有这些因素实际上使得诸如产品不具市场价值。相比之下，上述护肤产品不具有纯蜂蜜的负面影响，并且可以容易地配制(根据需要在2％、或甚至更高、或更低)。

如上所述的美容护肤产品可以配制为用于作为霜、凝胶、软膏、块(bar)、露(lotion)或液体进行局部给药。具体产品类型包括清洁剂和化妆水(toner)、去角质剂和面膜、润肤霜(moisturiser)和露以及精华。

该提取物可源自于的蜂蜜是那些天然富含酚类化合物的蜂蜜。实例可以包括基本上源自于由松红梅属(Leptospermum)、昆士兰属(Kunzea)和奈特山龙眼属(Knightia)及其组合的植物所产生的花蜜。

松红梅属植物可以是桃金娘科植物(Myrtaceae)，且可以包括：麦卢卡树(Leptospermum scoparium)、澳洲茶树(Leptospermum polygalifolium)、松红梅亚属(Leptospermum subtenue)、Leptospermum semibaccatum、leptospermum trinervium、怀特松红梅(Leptospermum whitei)、Leptospermum speciosum和Leptospermumliversidgei。

昆士兰(Kunzea)属植物可以是新西兰茶树(Kunzea ericoides)或卡努卡树(kanuka tree)品种的植物。

奈特山龙眼(Knightea)属植物可以是新西兰龙眼木(Knightia excelsa)或忍冬花(rewarewa)树品种的植物。

在第二方面，提供了治疗有效量的蜂蜜提取物在制备用以抑制施用美容产品的受试者的皮肤上或皮肤中的MMP活性的美容护肤产品中的用途，其中该美容护肤产品含有蜂蜜提取物，蜂蜜提取物具有的酚类化合物与糖类的比例为该提取物所源自于的原始蜂蜜的至少5倍，且蜂蜜提取物包括至少乙醇、水和一种或多种MMP抑制性酚类化合物的混合物。

在第三方面，提供了通过将美容护肤产品局部施用于受试者的皮肤来处理美容皮肤症状的方法，其中美容护肤产品起到抑制皮肤MMP活性的作用，并且其中美容护肤产品含有治疗有效量的蜂蜜提取物，蜂蜜提取物具有的酚类化合物与糖类的比例为该提取物所源自于的原始蜂蜜的至少5倍，且蜂蜜提取物包括至少乙醇、水和一种或多种MMP抑制性酚类化合物的混合物。

在上述方法和用途中，该产品可用于在美容方面地减缓皮肤老化的可见迹象。MMP通过紫外线辐射(UV)活化，并且如上所述，MMP的过表达可能导致皮肤中胶原蛋白的分解，使得降低了皮肤弹性且形成皱纹。上述方法和用途可以是增加皮肤弹性，减少皮肤的光老化以及甚至通过减少皱纹的长度、深度和形成来影响皮肤皱纹。

所使用的美容护肤产品可以每天施用一次或两次，这取决于成品中抑制性化合物的最终浓度和强度。

在第四方面，提供了一种生产抑制MMP的蜂蜜提取物的方法，包括以下步骤：

(a)将所选的蜂蜜与乙醇混合；

(b)分离混合物以从包括乙醇、水和一种或多种MMP抑制性酚类化合物的第二相基本上除去糖类浓缩的第一相；

(c)进行进一步分离步骤以通过降低乙醇和/或水浓度来增加酚类化合物浓度；

(d)收集所得的酚类化合物浓缩物。

步骤(a)中蜂蜜与乙醇的比例可以是大约1份至10份蜂蜜与10份至1份乙醇。该比例可以是按照重量大约1份蜂蜜与0.1份、或0.2份、或0.3份、或0.4份、或0.5份、或0.6份、或0.7份、或0.8份、或0.9份、或1.0份、或1份、或1.5份、或2.0份、或2.5份、或3.0份、或3.5份、或4.0份、或4.5份、或5份、或5.5份、或6.0份、或6.5份、或7.0份、或7.5份、或8.0份、或8.5份、或9.0份、或9.5份、或10份乙醇。在一种实施方式中，该比例可以是大约1份的蜂蜜与1份的乙醇或50:50的重量比。

步骤(a)中的混合可以在大约15℃、或20℃、或25℃、或30℃、或35℃、或40℃、或45℃、或50℃的温度下进行。在一种实施方式中，该温度可以为30℃至35℃。尽管可以使用其他方法，但混合可以在搅拌槽中进行。较低的温度(低于50℃)是优选的，以避免提取物中存在的活性物质的活性的有害的降解。较高的温度也产生了处理问题，乙醇变得高度挥发。混合可以进行至少1分钟。混合可以进行10分钟至120分钟。在一种实施方式中，混合进行直到形成均匀的泥。

在步骤(a)中混合之后和在步骤(b)中分离之前，可以使混合物沉降成步骤(b)中所述的两相中。沉降可以例如涉及停止正进行的任何搅拌并且允许两相通过重力进行分开。可以通过冷却该混合溶液(例如通过使冷却剂在混合罐的壁周围经过)来促进沉降。沉降可以发生至少1分钟。在一种实施方式中，沉降可能需要大约6小时至48小时。在另一种实施方式中，沉降可能需要1周至2周。正如应当理解的，对于该时间段没有上限，因为混合后的酚类化合物在乙醇中稳定，并且当加工限制需要进一步加工时可进行分离。

步骤(b)中的分离可通过将一相从另一相中滗析(decanting)进行。正如可以理解的，除去的糖类可主要是果糖和蔗糖。所分离的第一糖类或糖浆相可循环回到第一混合步骤中以回收所需的更多的酚类，注意到随着时间将达到最佳，限定了再循环的限度，其是再循环的能量成本超过在提取酚类中潜在的额外增益的点。应当明白的是，滗析后的乙醇浓度为约70％、或75％、或80％、或85％、或90％、或95％(w/w)。还将存在一些水(<18％)，该水是来源于蜂蜜中天然存在的水。

尽管可以使用其他分离方法诸如通过蒸馏，但步骤(c)中的分离可以通过蒸发。一个蒸发装置可以通过使用降膜蒸发器和在真空下蒸发。特别地，真空可以有益于避免升高温度的需要，因为较高的温度可能对所提取的酚类化合物的活性具有影响。如上所述，保持较低的温度对于防止对活性酚类化合物的潜在危害以及避免乙醇处理问题都是有利的。预计在蒸发过程中也可以除去一些水。

在步骤(c)中的分离之后，可以进行进一步加工以使得到的提取物标准化。标准化步骤可以例如包括将多种提取物共混在一起以形成一致量的标记酚类化合物，诸如丁香酸甲酯。正如可以理解的，作为所谓的天然产物的蜂蜜可以产生不同浓度的酚类化合物，这取决于许多因素，诸如花来源、地理来源和花纯度。共混可以是实现一致的提取活性以进一步用于产品(诸如美容护肤品)的方式。

除了标准化之外，最终提取物可以在进一步加工之前包装。包装对于处理和储存是有用的。包装对于确保储存稳定性也是重要的。

提取物可以具有低于水的比重。在一种实施方式中，比重可以为大约0.9至0.999。该比重可以为大约0.990。

提取物可以是酸性的。在一种实施方式中，pH可以为大约3.0至6.0。pH可以为大约4.0至5.0。

提取物可以具有大约0.1％至99.9％w/w的提取后的固体含量，或者至多与提取加工将允许的一样高。在一种实施方式中，固体含量可以为大约30％至40％w/w。在另一实施方式中，固体含量可以为50％至60％w/w。在另一实施方式中，固体含量可以为60％至75％。在又一实施方式中，固体含量可以为75％至85％。固体可以是残留糖、蜂蛋白、蜡颗粒和环境灰尘，所有都是蜂蜜中存在的典型固体。正如应当理解的，在进行上述提取过程之前精细过滤的蜂蜜可以具有较少的固体，而未过滤的蜂蜜可以具有在所述范围的较高端的固体。

提取物的进一步特征在于具有蜂蜜芳香气味和金黄色。

预计提取物可以具有至少24个月的保质期，条件是其储存在阴凉干燥的区域并且避免受到UV照射。

应进一步注意的是，上文已提及提取物中酚类化合物的存在。如可以理解的，蜂蜜还含有黄酮类化合物(flavonoid compound)，并且发明人的理解是，黄酮类化合物也可以存在于提取物和护肤产品中。

正如应当显而易见的，上述提取物、产品、用途和方法允许在美容护肤产品中包括比用纯蜂蜜可能的浓度高得多的MMP抑制化合物的浓度。如上所述，当用于护肤产品中时，纯蜂蜜赋予了产品有害的特性。通过浓缩MMP抑制化合物，可以使用比纯蜂蜜的情况高得多的这些化合物的浓度，并且这也避免了配制问题。提取产物和方法也具有一些额外的优点，即酚类的稳定和保存以及透皮增强特征。结果是具有更好功效与改善的稳定性、处理和使用特性相结合的增强价值产品。

上述实施方式还可广泛地说成包括单独地或共同地在本申请的说明书中提及或指明的部分、元素和特征以及任何两个或多个所述部分、元素或特征的任何或所有组合，并且其中在本文中提及的特定整体在实施方式涉及的领域中具有已知的等同物，这样的已知的等同物被认为并入本文，如同单独阐述的一样，

当本文提及了具有本发明涉及的领域中已知的等同物的特定整体时，这样的已知的等同物被认为并入本文，如同单独阐述的一样。

工作实施例

现在，通过参考具体实施例对以上描述的MMP抑制性提取物以及使用方法进行描述。

实施例1

描述了产生提取物的实施例方法。

参考图1，选择蜂蜜，并将其在标注“混合”的条目1中与乙醇混合。

蜂蜜可以是已知具有较高浓度的酚类和黄酮类化合物的蜂蜜，诸如来源于松红梅属、昆士兰属和奈特山龙眼属植物的那些。乙醇可以为95％纯度(无水乙醇)。蜂蜜和乙醇可以以50:50的比例(即以相等的重量)加入，直到达到所需的体积。该混合过程可以在隔热罐中在30℃-35℃的温度下30分钟至60分钟或直到形成平滑的泥而完成。

混合(条目1)和沉降(条目2)后，结果是溶液形成两相，上层是主要由来自蜂蜜的糖类(诸如果糖和蔗糖)所形成的糖浆。下层是乙醇、从蜂蜜提取的水(通常0％-18％)和酚类化合物的混合物。可以通过例如通过围绕罐壁泵送的冷却剂来冷却混合物而增强沉降和分离。沉降可能需要大约24小时，但此时间段可根据操作员的偏好而变化。在这种状态下，酚类化合物是稳定的。

在条目3中，滗析，将上层富含糖类层滗析出去以留下乙醇混合物。所分离的糖类部分可以再循环(条目7)回到混合(条目1)以将酚类的分离最大化。

在条目4中，蒸发，通过蒸发工序除去乙醇和/或水来浓缩酚类。一种蒸发器处理单元可以是降膜蒸发器。

可以在真空条件下完成蒸发，以便将热的使用以及对活性化合物的可能的损害最小化。可以使用其他分离方法，诸如蒸馏。

条目5和条目6是可以任选地进行的精加工步骤。条目5中的共混是指可以完成以确保实现一致的或标准化的产品质量的步骤，例如将产品与其他提取物共混以在最终提取物中实现一致的和可测量的酚类水平。条目6，包装，可以是完整的，以便于处理和储存以及在储存期间稳定提取物。

实施例2

已知的蜂蜜提取物组合物和组合物的各种特性的预期变化幅度在以下表1中阐明。

表1-蜂蜜提取物

实施例3

在护肤制剂基础霜和洗液(rinse)中测试上述提取物。鉴于该提取物含有的酚类化合物为原始蜂蜜(相对低浓度的蜂蜜提取物)的至少15倍，例如1％-4％(w/w)浓度等于护肤制剂中15％-100％(w/w)的相当蜂蜜浓度。

下面在表2中示出了一些更具体的制剂。

表2-实施例美容护肤制剂

除了上述之外，每种产品还可以含有防腐剂和/或香料。

正如可以理解的，15％或更高的蜂蜜浓度将是完全不可行的，且具有粘性的，以及没有商业价值。相比之下，含有蜂蜜提取物的美容护肤产品非常容易配制，并提供了比现有产品具有高得多的MMP抑制率。另外的优点是当与额外的护肤化合物配制之前储存时，提取物中的残留乙醇有助于保持酚类稳定并且使微生物的生长最小化。乙醇还可以作为促进酚类转移到皮肤中的渗透促进剂。没有由使用提取物所导致的令人不适的气味，正如蜂蜜的情况一样。

实施例4

在该实施例中，在体外实验中阐明了各种蜂蜜提取物的MMP抑制效果。直接测试了该提取物的MMP抑制效果。

制备MMP-1、MMP-2和MMP-9的测定，并用通过上述方法从麦卢卡蜂蜜、卡努卡蜂蜜、麦卢卡蜂蜜和卡努卡蜂蜜的混合物以及三叶草蜂蜜所制作的提取物来处理。使用了多种浓度的蜂蜜提取物。

如图2中所示，相对于MMP-1测试了每种蜂蜜提取物的每分钟相对荧光(RFU/min)。富含酚类化合物的蜂蜜(麦卢卡、卡卢卡和麦卢卡/卡卢卡混合物)表现出最大程度的抑制，而含有少量酚类化合物的三叶草蜂蜜具有最小的MMP抑制效果。对于0.5％的酚类浓度归一化，发现麦卢卡蜂蜜抑制MMP-1活性19.5％、卡努卡蜂蜜抑制MMP-1 13.5％，麦卢卡/卡努卡混合物抑制58％。三叶草蜂蜜具有抑制数据不可靠的显著的变化程度。

图3和4分别示出了蜂蜜对MMP-2和MMP-9的抑制效果。

所有四种蜂蜜提取物显示MMP-2抑制在一定程度上伴有三叶草蜂蜜提取物具有最小的效果。将三叶草蜂蜜再次归一化时，有太多的变化而不是可靠的，而其他蜂蜜提取物显示强烈的相关性。基于0.5％酚类的已归一化的抑制为麦卢卡69.5％；卡努卡24.0％，麦卢卡/卡努卡混合物76.0％和三叶草蜂蜜提取物8.5％。

MMP-9抑制率显著高于MMP-1和MMP-2抑制率。对MMP-9抑制记录了相同的趋势同时富酚类的蜂蜜具有良好相关的已归一化结果和抑制(对于0.5％的酚类浓度，该结果是麦卢卡蜂蜜提取物39.5％抑制；卡努卡蜂蜜提取物13.0％抑制；麦卢卡/卡努卡混合物82.0％抑制和三叶草蜂蜜9.0％抑制。

实施例5

在该实施例中，测试了提取物的不同浓度(通过固体比例测量)的MMP-1抑制效果。在乙醇提取后，蒸发乙醇和一些水以获得不同的固体浓度。该固体主要由源自于所提取的蜂蜜的糖组成。在蒸发过程中，样品为20％、25％、45％、67％和75％的固体。如图5中所示，MMP-1抑制在较高浓度下增加。还通过HPLC分析样品以测定丁香酸甲酯浓度，其测定如下。具有0％的固体的样品是不含蜂蜜提取物的对照：

样品中固体％	丁香酸甲酯浓度(微克/mL)
		0％	0
0％	0
		0％	0
20％	3
		20％	3
20％	3
		25％	2
25％	2
		25％	2
45％	30
		45％	30
45％	30
		67％	259
67％	259
		67％	259
75％	238

如图6中所示，较高的丁香酸甲酯浓度显示更高程度的MMP-1活性抑制。这说明丁香酸甲酯作为MMP抑制的标记化合物的有效性。

仅通过示例的方式对MMP抑制性提取物和使用方法的方面进行描述，并且应当理解的是，在不背离本文权利要求的范围的情况下可以对其进行修改和增加。

Claims (17)

1.一种护肤产品，其包括治疗有效量的蜂蜜提取物，所述蜂蜜提取物包括：

一种或多种基质金属蛋白酶(MMP)抑制性酚类化合物、乙醇和水；

其中，所述蜂蜜提取物含有300μg/mL至1000μg/mL的丁香酸甲酯，

所述蜂蜜提取物具有的酚类化合物与糖类的比例为其所源自于的原始蜂蜜的至少5倍，

其中产生了所述提取物的蜂蜜源自于由松红梅属(Leptospermum)、新西兰茶树(Kunzea ericoides)或其组合的植物所产生的花蜜，

其中所述松红梅属植物选自以下的一种或多种：麦卢卡树(Leptospermumscoparium)、Leptospermum polygalifolium、Leptospermum subtenue、Leptospermumsemibaccatum、Leptospermumtrinervium、Leptospermum whitei、Leptospermumspeciosum和Leptospermum liversidgei。

2.根据权利要求1所述的护肤产品，其中所述护肤产品为皮肤敷料。

3.根据权利要求1或2所述的护肤产品，其中所述提取物在配制于所述护肤产品之前含有10％-80％的乙醇。

4.根据权利要求1或2所述的护肤产品，其中所述提取物在配制于所述护肤产品之前含有0.1％-18％的水。

5.根据上述权利要求1或2所述的护肤产品，其中所述产品含有0.1％至20％(w/w)的蜂蜜提取物。

6.根据上述权利要求1所述的护肤产品，其中所述产品配制为用于作为霜、凝胶、软膏、块、露或液体进行局部给予。

7.根据权利要求1-6中任一项所限定的蜂蜜提取物在制备护肤产品中的用途，所述护肤产品用于抑制施用所述护肤产品的受试者的皮肤上或皮肤中的MMP活性。

8.一种生产抑制MMP的蜂蜜提取物的方法，所述蜂蜜提取物包括酚类化合物，所述方法包括以下步骤：

(a)将所选的蜂蜜与乙醇混合；

(b)分离所述混合物以从包括乙醇、水和一种或多种MMP抑制性酚类化合物的第二相除去糖类浓缩的第一相；

(c)进行进一步分离步骤以通过降低所述乙醇和/或水的浓度来增加所述酚类化合物的浓度；以及

(d)收集所得的酚类化合物浓缩物以提供所述蜂蜜提取物；

其中所述蜂蜜提取物包含300μg/mL至1000μg/mL的丁香酸甲酯，以及

其中所述蜂蜜源自于由松红梅属(Leptospermum)、新西兰茶树(Kunzea ericoides)或其组合的植物所产生的花蜜，

其中所述松红梅属植物选自以下的一种或多种：麦卢卡树(Leptospermumscoparium)、Leptospermum polygalifolium、Leptospermum subtenue、Leptospermumsemibaccatum、Leptospermumtrinervium、Leptospermum whitei、Leptospermumspeciosum和Leptospermum liversidgei。

9.根据权利要求8所述的方法，其中在步骤(a)中，以按照重量一份蜂蜜与0.1份至10份乙醇的比例将所述蜂蜜与乙醇混合。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中步骤(a)中的混合在15℃至50℃的温度下进行。

11.根据权利要求8或9所述的方法，其中在步骤(b)中开始分离之前，将所述混合物冷却并使其沉降。

12.根据权利要求8或9所述的方法，其中步骤(b)中的分离通过滗析来完成。

13.根据权利要求8所述的方法，其中步骤(c)中的分离通过蒸发来完成。

14.根据权利要求13所述的方法，其中蒸发在真空下进行。

15.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述酚类浓缩物包括10％-80％的乙醇。

16.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述酚类浓缩物包括0.1％-18％的水。

17.一种蜂蜜提取物，所述蜂蜜提取物包括：

一种或多种MMP抑制性酚类化合物、乙醇和水；

其中，所述蜂蜜提取物含有300μg/mL至1000μg/mL的丁香酸甲酯，

所述蜂蜜提取物具有的酚类化合物与糖类的比例为其所源自于的原始蜂蜜的至少5倍，

其中产生了所述提取物的蜂蜜源自于由松红梅属(Leptospermum)、新西兰茶树(Kunzea ericoides)或其组合的植物所产生的花蜜，

其中所述松红梅属植物选自以下的一种或多种：麦卢卡树(Leptospermumscoparium)、Leptospermum polygalifolium、Leptospermum subtenue、Leptospermumsemibaccatum、Leptospermum trinervium、Leptospermum whitei、Leptospermumspeciosum和Leptospermum liversidgei。