CN112823014A - 艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供艰难梭菌(Clostridium difficile)感染的新的预防和/或治疗剂。发现肠球菌属的细菌可预防和/或治疗艰难梭菌感染。艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其含有肠球菌属的细菌。艰难梭菌感染的预防和/或治疗用药物，其含有肠球菌属的细菌。艰难梭菌感染的预防和/或治疗用食品，其含有肠球菌属的细菌。

Description

艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂

技术领域

本发明涉及艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂。

背景技术

艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection，CDI)大多由于由使用抗菌药等造成的消化道细菌群的受损而发病。其大部分以较多使用抗菌药，并且年龄增长、有无基础疾病等为患病因素。

CDI的大部分为消化道感染，症状以腹泻、腹痛居多，也伴有发热、白细胞增多，如果发展为重症则可能由中毒性巨结肠，肠梗阻，消化道穿孔而导致死亡。

已确认有在消化道保持存在艰难梭菌而不显现症状的“携带者”，在使用抗菌药较多的住院治疗患者中，这样的“携带者”较为多见。艰难梭菌与CDI患者及无病状携带者的粪便一起被排泄，并污染包括医疗工作者的手指在内的环境，从而作为医疗相关感染成为问题。因此，其为在需要进行如换尿布/护理垫这样的排泄护理的老年人住院治疗较多，没有充分进行包括对抗菌药的合理使用的感染管理的医疗现场中多见的感染。但是，在滥用抗菌药、没有充分进行感染管理的医疗机构中，视为问题的是由于对CDI的关注及知识较低，因此，多数是没有适当诊断本疾病而表面上发生率较低的问题。

像这样，在医疗机构、老年人设施中有CDI容易慢性化的环境，对采取感染预防对策的必要性正在讨论中。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1

Difficile菌感染的基础和临床，Modern media，56卷10号，2010，www.eiken.co.jp/modern_media/backnumber/pdf/MM1010_01.pdf

发明内容

发明要解决的问题

本发明的目的在于提供艰难梭菌感染的新的预防和/或治疗剂。

用于解决问题的手段

本发明人进行了深入研究，结果发现肠球菌属的乳酸菌能够预防和/或治疗艰难梭菌感染，从而完成了本发明。

本发明的要点如下。

(1)艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其含有肠球菌属(Enterococcus)的细菌。

(2)根据(1)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌为乳球菌(Lactococcus)。

(3)根据(2)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中，乳球菌为粪肠球菌(Enterococcus faecalis)。

(4)根据(3)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中，粪肠球菌为EF-2001株。

(5)根据(1)～(4)中任一项所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌为死菌。

(6)根据(1)～(5)中任一项所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌口服施用。

(7)根据(6)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以每次1亿～1,000亿CFU/kg体重口服施用。

(8)根据(7)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上，每次1亿～1,000亿CFU/kg体重口服施用。

(9)根据(8)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上5次以下的次数，每次1亿～1,000亿CFU/kg体重口服施用。

(10)根据(6)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以每次10～500亿CFU/kg体重口服施用。

(11)根据(10)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上，每次10～500亿CFU/kg体重口服施用。

(12)根据(11)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上5次以下的次数，每次10～500亿CFU/kg体重口服施用。

(13)根据(6)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以每次120亿以上的CFU/kg体重口服施用。

(14)根据(13)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上，每次120亿以上的CFU/kg体重口服施用。

(15)根据(14)所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上5次以下的次数，每次120亿以上的CFU/kg体重口服施用。

(16)根据(6)～(15)中任一项所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌口服施用7天以上。

(17)根据(1)～(16)中任一项所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其用于艰难梭菌感染的预防。

(18)根据(1)～(16)中任一项所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其用于艰难梭菌感染的治疗。

(19)艰难梭菌感染的预防和/或治疗用药物，其含有肠球菌属的细菌。

(20)艰难梭菌感染的预防和/或治疗用食品，其含有肠球菌属的细菌。

(21)艰难梭菌感染的预防和/或治疗方法，包括将肠球菌属的细菌以药学上有效的量施用给受试者。

(22)肠球菌属的细菌的用于艰难梭菌感染的预防和/或治疗的用途。

(23)肠球菌属的细菌，其用于艰难梭菌感染的预防和/或治疗方法中。

发明效果

根据本发明能预防和/或治疗艰难梭菌感染。

在本说明书中，包含作为本申请的优先权的基础的日本专利申请特愿2018-191488的说明书和/或附图中记载的内容。

附图说明

[图1]示出实施例1的试验结果(生存率(Kaplan-Meier作图的结果))。

[图2]示出实施例1的试验结果(体重)。

[图3]示出实施例1的试验结果(摄食量)。

[图4]示出实施例1的试验结果(饮水量)。

[图5-1]示出实施例1的试验结果(艰难梭菌(Clostridium difficile)(ATCC43255，下文称为艰难梭菌)接种前一天的粪便中的活菌数)。

[图5-2]示出实施例1的试验结果(接种艰难梭菌1天后的粪便中的活菌数)。

[图5-3]示出实施例1的试验结果(接种艰难梭菌4天后的粪便中的活菌数)。

[图5-4]示出实施例1的试验结果(接种艰难梭菌22天后的粪便中的活菌数)。

[图6]示出实施例1的试验日程表。

具体实施方式

以下，对本发明的实施方式进行更详细地说明。

本发明提供艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其含有肠球菌属的细菌。

对肠球菌属的细菌而言，可以为乳球菌(例如：粪肠球菌(Enterococcusfaecalis)，屎肠球菌(Enterococcus faecium)，鸟肠球菌(Enterococcus avium)，鹑鸡肠球菌(Enterococcus gallinarum)，铅黄肠球菌(Enterococcus casseliflavus)等)，优选具有生物应答调节物质(Biological Response Modifier，BRM)活性(药学志112：919-9251992；药学志113：396-3991992；动物临床医学3：11-201994)的那些。粪肠球菌作为具有BRM活性的乳球菌为人所知。粪肠球菌EF-2001株可从日本Berumu株式会社(东京都千代田区永田町2-14-3)获得。

粪肠球菌-2001株可以从正常人的粪便提取，具有下述性质。

为革兰氏阳性球菌。菌落形态(Trypto-Soya琼脂培养基，培养24小时)：直径1.0mm、光滑、正圆形、白色菌落，细菌形态：球至卵圆形(1.0×1.5μm)，在液体培养基中常形成链。不形成芽胞。兼性厌氧。发酵葡萄糖而产生乳酸(最终pH 4.3)。非产气。过氧化氢酶阴性。于10～45℃进行增殖(最适为37℃)。在pH 9.6，6.5％NaCl、40％胆汁中增殖。0.04％亚碲酸钾阳性。0.01％四唑鎓阳性。0.1％亚甲蓝乳阳性。对精氨酸进行水解。其发酵苦杏仁苷、纤维二糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、丙三醇、乳糖、麦芽糖、甘露糖、甘露醇、核糖、水杨苷、蔗糖、松三糖、山梨糖醇而产生酸。在60℃耐性30分钟。消化酪蛋白、明胶。将酪氨酸脱羧成为酪胺。Lancefield抗原分组D。GC％35.0±1.0％。

对于肠球菌属细菌而言，可以为活菌，也可以为死菌，也可以对菌体实施破坏处理(匀浆处理、酶处理、超声波处理等)、加热、干燥(冷冻干燥、喷雾干燥等)等处理。通过加热处理，活菌可成为死菌。对于活菌可以期待由乳酸发酵带来的作用，死菌可以期待肠道免疫活化作用。菌体的粒径可为0.05μm～50μm，优选0.08～20μm，更优选0.1～10μm。菌体可以与稀释剂混合后，添加糊料而制成颗粒状。对稀释剂、糊料而言，从作为在食品、药物中添加的物质而被许可的材料中进行选择即可。

本发明的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂可以用于艰难梭菌感染的防御。在本说明书中，术语“感染防御”的概念不仅指感染的预防，也包括治疗。本发明的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂可以作为药物，或作为食品添加剂使用。艰难梭菌可以为多重耐药艰难梭菌。

本发明提供艰难梭菌感染的预防和/或治疗用药物，其含有肠球菌属的细菌。

在用作药物的情况下，将肠球菌属细菌单独，或与赋形剂或载体混合而制剂成为片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、液剂、糖浆、气溶胶、栓剂、注射剂等即可。对赋形剂或载体而言，只要为本领域中常规使用的，药学上允许的那些即可，对其种类及组成进行适当选择。例如，作为液态载体，可以使用水、植物油等。作为固体载体，可使用：乳糖、白糖、葡萄糖等糖类，马铃薯淀粉、玉米淀粉等淀粉，结晶纤维素等纤维素衍生物等。也可以添加硬脂酸镁等润滑剂，明胶、羟丙基纤维素等粘合剂，羧甲基纤维素等崩解剂等。此外，也可以添加抗氧化剂、着色剂、矫味剂、保存剂等。另外，也可以以冷冻干燥制剂形式使用。

肠球菌属细菌可通过口服、经鼻、直肠、经皮、皮下、静脉内、肌内等各种途径进行施用。

肠球菌属细菌在制剂中的含量根据制剂的种类而不同，通常为0.001～100质量％、优选为0.01～100质量％。

肠球菌属的细菌的施用量只要是药学上有效的量即可，即，为能够确认艰难梭菌感染的预防和/或治疗效果的量即可，根据剂型，施用途径，患者的年龄，体重，疾病的危重度等而不同，例如，在成人的情况下，每次的施用量换算为肠球菌属的细菌的量约为1亿～1，000亿CFU/kg体重、优选约为10亿～500亿CFU/kg体重，更优选约为60亿～120亿CFU/kg体重，以1天1次至多次(例如：2次，3次，4次，5次左右)进行施用。对施用期没有特别限定，例如为7天以上，10天以上，17天以上。

肠球菌属细菌也可以添加到食品中。本发明提供艰难梭菌感染的预防和/或治疗用食品，其含有肠球菌属的细菌。

在本发明的食品中，也可以添加：蛋白质、脂质、碳水化合物、钠等一般成分，钾、钙、镁、磷等矿物质类，铁、锌、铜、硒、铬等微量元素，维生素A、β-胡萝卜素、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素C、烟酸、叶酸、维生素D3、维生素E、生物素、泛酸等维生素类，辅酶Q10、α-硫辛酸、低聚半乳糖、膳食纤维、赋形剂(水、羧甲基纤维素、乳糖等)、甜味料、矫味剂(苹果酸、柠檬酸、氨基酸等)、香料等。在将本发明的食品制成液剂时，作为将食品成分分散或溶解的液体，可以使用水、生理盐水、果汁等，出于在口服施用中改善味觉的目的，优选使用果汁。

本发明的食品也可以制成粉末、颗粒、片剂、液剂等任何形状，但为了使病人、老年人可以容易摄取，因此，优选制成果冻等凝胶态产品。

作为胶凝剂，可以使用：糊精、琼脂、黄原胶、刺槐豆胶、卡拉胶、果胶等增稠多糖类，结冷胶、洋车前子胶，塔拉胶、瓜尔胶、葡甘露聚糖、藻酸盐、罗望子籽胶、纤维素等，优选使用一种或两种以上的增稠多糖类。凝胶态产品的凝胶强度，优选在5℃的凝胶强度为7,000±2,000N/m²，另外，在凝胶强度为7,000±2,000N/m²时，更优选粘附能量为60±40J/m³、凝聚性为0.7±0.1J/m³。像这样粘附性低、凝聚性高的凝胶具有优异的适吞咽性。

凝胶强度可以如下所述测定。作为凝胶强度测定仪器，使用山电公司稠度测定仪及直径16mm的活塞，利用测定温度25℃、压缩速度(活塞按入速度)10mm/s、测定应变率(相对于试样的厚度的按入率)40.00％，活塞按入距离10.00mm，活塞按入次数2次进行测定。

对粘附能量而言，可以通过在上述凝胶强度测定中，在按入1次后，拔出活塞时的负的能量进行测定。

对凝聚性而言，可以通过在上述凝胶强度测定中，按入2次时第1次和第2次的能量的比率进行测定。

肠球菌属的细菌的摄取量只要是能确认艰难梭菌感染的预防和/或治疗效果的量即可，根据剂型，施用途径，患者的年龄，体重，疾病的危重度等而不同，例如，在成人的情况下，每次的摄取量换算成肠球菌属的细菌的量约为1亿～1,000亿CFU/kg体重、优选约为10亿～500亿CFU/kg体重，更优选约为60亿～120亿CFU/kg体重，以1天1次至多次(例如：2次，3次，4次，5次左右)摄取即可。

实施例

以下结合实施例对本发明进行详细的说明，但本发明并不限定于这些实施例。

〔实施例1〕乳酸菌EF-2001株的艰难梭菌感染防御试验

使用艰难梭菌(Clostridium difficile)感染模型，口服施用含有乳酸菌的饮料，对艰难梭菌的感染的防御效果通过生存率等指标进行了评价。

(材料及方法)

被测物质及介质

·被测物质

名称：乳酸菌粉末EF-2001(日本Berumu株式会社)(经加热杀菌的粪肠球菌(E.faecalis)，直径为500nm＝0.5μm)

性状：黄褐色的粉末

保管条件：室温，遮光，防湿

管理温度：18.0～28.0℃

·介质

名称：注射用水

保管条件：室温

管理温度：18.0-28.0℃

制造商：株式会社大琢制药工厂

被检物

·被测物质

制备方法

称量(电子天平：XP205DR，Mettler Toledo株式会社)乳酸菌粉末EF-2001 20mg，悬浊于注射用水中后，使总量为125mL，制成0.16mg/mL。由于乳酸菌粉末会沉淀，因此充分搅拌并悬浊。在用时进行制备。

病原微生物

·使用菌株

艰难梭菌(ATCC43255，下文称为艰难梭菌)

·保存条件

在超低温冰箱(管理温度：-90～-70℃，MDF-394AT，三洋电机株式会社)中冻存至使用时。

·试剂

(1)GAM琼脂培养基(日水制药株式会社)

(2)GAM肉汤培养基(日水制药株式会社)

(3)生理盐水(株式会社大琢制药工厂)

·前培养

将艰难梭菌(C.difficile)的保存菌株解冻，接种至GAM琼脂培养基中，放入填充有脱氧剂的厌氧袋中，在设定37℃的恒温器(ILE800，Yamato科学株式会社)中培养5天。培养后，将菌落挑起，加入GAM肉汤培养基中，放入填充有脱氧剂的厌氧袋中，在设定37℃的恒温器中培养2天。将培养后的培养液作为接种细菌原液。

·接种菌液的制备及活菌数确认

将接种细菌原液利用生理盐水稀释10倍而成的作为接种菌液。

在活菌数的确认中，收集接种菌液的一部分，用生理盐水适当稀释，涂抹到GAM琼脂培养基中后，放入填充有脱氧剂的厌氧袋中，在设定37℃的恒温器中培养5天。利用手动菌落计数器(CC-1，Azwan株式会社)测量了培养后的菌落数，算出接种菌液1mL中包含的活菌数。其结果，接种菌液的活菌数为3.5×10⁵CFU/mL。

试验体系

·动物种系

动物种：仓鼠(SPF)

系：Slc：syrian

·动物的性别，周龄，获取只数

雄性，3周龄，33只

·获得之后1天的体重范围

40.8～58.0g

·来源

Japan SLC，Inc.

·预备饲养

对获得的动物设5天的预备饲养期。这期间1天1次进行通常状态的观察，用电子天平(MS3002S/02，Mettler Toledo株式会社)测定2次体重(动物获得的次日及预备饲养时期结束日)测定，将没有确认到体重推移及通常状态发生异常的动物用于分组。

·分组方法

在分组日使用计算机程序(IBUKI，株式会社日本生物研究中心)将体重按分层分开后，利用随机抽取法以使各组的平均体重及方差基本相等的方式进行分组。

·识别个体的方法

对于动物，组合使用了在获取日用油性墨水在背部及四肢的染料涂布法而进行识别。分组后，通过使用与标志同色的油性墨水在背部及四肢的染料涂布法而进行识别。各笼上，在预备饲养期中挂上记录有试验编号，获取年月日，预备饲养动物编号的标志，在分组之后挂上记录有试验编号，组名及动物编号并按组区分颜色的标志。

·环境条件及饲养管理

在管理温度：18～28℃(实测值：19～25℃)，管理湿度：30～80％(实测值：47～65％)，保持明暗各12小时(照明：上午6时～下午6时)的饲养室(木曾三川分室饲养室2号室)中饲养动物。对动物而言，在预备饲养期中及分组后，均使用塑料制笼(W：175×D：245×H：125mm)铺了金属网制的踏板进行单只饲养。

笼、饲喂器及金属网制踏板的更换为1周进行1次以上，给水瓶的更换为1周进行2次以上。对动物饲养室的打扫而言，每天实施用浸消毒液的拖把进行地板的擦拭消毒。需要说明的是，饲养结束后将动物饲养室使用Actril(Minntech Corporation)进行了喷雾消毒。

·饲料

将制造后5个月以内的γ线照射饲料(30kGy照射CRF-1，Oriental Yeast株式会社)放入饲喂器中，供其自由摄取。其中，在菌液接种后禁食20小时。

关于饲料的使用批次，确认γ线照射前的饲料中的污染物质浓度，细菌数及营养成分含量符合试验设施的允许标准。

·饮用水

氯化盐酸水[向进行了高压釜处理(121℃，15分钟)的自来水1L中加入5％次氯酸钠(Bigenlux，Kazusa株式会社)1mL，添加盐酸(1N，富士胶片和光纯药株式会社)7mL]放入给水瓶中，任其自由摄取。约每6个月分析自来水中的污染物浓度，确认分析值符合试验设施的允许标准。

施用

·施用途径：口服

·施用方法

使用安装有大鼠用灌胃针(FUCHIGAMI器械有限公司)的1mL容量及2.5mL容量的一次性注射器(Terumo株式会社)，强制进行口服施用。需要说明的是，在施用时搅拌被检物而取了必要的量。

·施用液量，施用时刻，施用次数及施用期间

施用液量：基于施用日的体重值以10mL/kg算出。

施用时刻：在上午11时从第1组依次进行。

施用次数：使为1天1次。

施用期间：将施用开始日作为1天起算。对被测物质的施用而言，在第1组及第2组中，在菌液接种前7天间，从菌液接种日起22天间施用(第1组为注射用水)。在第3组中，在从菌液接种日起22天期间施用。其中，在第3组中，在菌液接种前7天施用了注射用水。

·组构成

将动物数及组构成示于下表。

*：施用了作为介质的注射用水。

**：在细菌接种前7天期间1天1次施用注射用水。

将乳酸菌粉末EF-2001以80mg/125mL的量1天1次施用给小鼠，相当于120亿CFU/kg/天的施用量。

克林霉素施用方法及菌液接种方法

在菌液接种3天前的施用后，将克林霉素(特丽仙(注册商标)S注射液300mg，pfizer株式会社)以100mg/kg，1次/天，连续3天进行腹膜内施用(液量：10mL/kg)。在克林霉素最终施用的次日，口服接种了接种菌液1mL。需要说明的是，每次接种时搅拌接种菌液进行使用。在被测物质施用的2小时前接种菌液。

观察及检验

·通常状态的观察

从分组日到菌液接种前一天，为在1天1次的施用前进行观察，从菌液接种日到接种之后10日，为以1天4次(上午2次，下午2次)进行观察，在接种后11天以后以上午、下午1次，计2次而进行了观察。需要说明的是，在菌液接种日时为在菌液的接种前进行上午第1次。

·体重测定

在施用开始日以后，每天测定(电子天平：MS3002S/02，ME3002，Mettler Toledo株式会社)体重。

·摄食量及饮水量的测定

在分组日以后，每天测定每个饲喂器及给水瓶的饲喂量及给水量(电子天平：MS3002S/02，ME3002，Mettler Toledo株式会社)，次日测定剩余量。根据饲喂量及给水量和各自的剩余量的差，算出每一天的摄食量及饮水量。

·人道主义终点

接种4天后，由于在M01101及M01106中，确认到通常状态下观察结果严重(躺卧位及体温降低)，因此，在异氟烷麻醉下进行了安乐死。

·粪便收集及粪便中的细菌数测定

在接种前一天，接种之后1天，4天及观察结束日，将活着的所有案例的粪便收集到离心管中。收集后，测定(电子天平：ME204，Mettler Toledo株式会社)粪便的重量。向粪便中加入2mL PBS进行悬浊。将该悬浊液作为原液，用PBS制备了102、104倍的稀释溶液。将原液及稀释溶液100μL涂抹在CCFA培养基(日本Becton Dickinson株式会社)上，放入填充有脱氧剂的厌氧袋中，在设定37℃的恒温器中培养5天。利用手动菌落计数器(CC-1，Azwan株式会社)测量了培养后的菌落数。作为菌落数，采用了由能够测量的最大稀释倍率算出的菌落数。

统计学方法

对各组算出生存率。关于体重，摄食量，饮水量及粪便中的细菌数算出了各组的平均值及标准误。

对于显著性检验而言，关于生存率，在每个观察日在对照组与各组间使用Fisher准确概率检验进行。观察期间对于全部实施了Kaplan-Meier作图，进行了Logrank test检验，对于组间比较，为了进行重复性的调整而进行了Holm校正。

关于体重，摄食量，饮水量及粪便中的细菌数的显著性检验，使用了多重比较检验。即，进行基于Bartlett法的等分散性的检验，在为等分散的情况下使用Tukey检验进行。另一方面，确认不到等分散时，使用Steel-Dwass检验进行。

将危险率设为5％，分别分成低于5％及低于1％进行表示。

需要说明的是，统计分析使用了市售的统计程序(SAS系统：SAS InstituteJapan)。

(试验成绩)

通常状态

将观察结果示于表1。对于生存率，将Kaplan-Meier作图示于图1。

在对照组中，从接种1天后观察到软便，接种3天后观察到立毛。接种4天后有2例呈现濒死，因此进行了安乐死。在接种6天后观察到4例死亡，接种7天后观察到2例死亡。接种22天后的生存率为20％。

在全时期施用组中，与对照组同样观察到了软便和立毛，但立毛的表现例数较少。接种7天后有1例死亡。接种22天后的生存率为90％，与对照组相比，接种6天后以后观察到更高的值并具有显著差异(Fisher准确概率检验)，在整个观察期间(Logrank test检验)也确认到更高的值并具有显著差异。

在细菌接种后施用组中，与对照组同样观察到了软便和立毛，但立毛的现例数较少。接种7天后有2例死亡。接种22天后的生存率为80％，与对照组相比，接种6天后以后观察到更高的值并具有显著差异(Fisher准确概率检验)，在整个观察期间(Logrank test检验)也确认到更高的值并具有显著差异。

(表1)

研究编号380109

表1.临床表现

a)施用的起始 (续)

研究编号380109

表1.(续)临床表现

AM1：上午第一次观察 AM2：上午第二次观察， (续)

PM1：下午第一次观察， PM2：下午第二次观察。

研究编号380109

表1.(续)临床表现

AM1：上午第一次观察， AM2：上午第二次观察， (续)

PM1.下午第一次观察， PM2：下午第二次观察。

研究编号380109

表1.(续)临床表现

AM1：上午第一次观察 AM2：上午第二次观察， (续)

PM1：下午第一次观察， PM2：下午第二次观察。

研究编号380109

表1.(续)临床表现

AM：上午，PM：下午

体重

将体重示于图2。

在对照组中，平均体重在接种1天后减少，之后为顺利地推移。

在全时期施用组及细菌接种后施用组中也与对照组同样进行推移。

摄食量

将测定结果示于图3。

在对照组中，平均摄食量在接种2天前(初次施用克林霉素的次日)发生一过性减少，之后恢复。

在全时期施用组中，与对照组进行了同样的摄取。

在细菌接种后施用组中，与对照组进行了同样的摄取。与对照组相比，接种5天后确认了更高值并具有显著差异。

饮水量

将测定结果示于图4。

在对照组中，平均饮水量在接种2天前(初次施用克林霉素的次日)发生一过性减少。之后，虽然可见变动，但与克林霉素施用前的饮水量相比，显示为没有变化的推移。

在全时期施用组及细菌接种后施用组中，平均饮水量也与对照组基本相同。

粪便中的活菌数

将测定结果示于图5-1～5-4。

在接种前一天的粪便中，在所有组中没有检测到活菌(图5-1)。

在接种1天后的粪便中，在对照组中为53.6±6.4×10³CFU/mL，全时期施用组中为21.6±1.6×10³CFU/mL，细菌接种后施用组中为39.3±3.3×10³CFU/mL(图5-2)。在全时期施用组中，与对照组相比为更低值并有显著差异，在细菌接种后施用组中，与全时期施用组相比，确认了更高值并有显著差异。

在接种4天后的粪便中，在对照组中为397.4±50.6×10³CFU/mL，在全时期施用组中为16.0±4.9×10³CFU/mL，在细菌接种后施用组中为19.7±4.5×10³CFU/mL(图5-3)。在全时期施用组及细菌接种后施用组中，与对照组相比，确认为更低值并有显著差异。

在接种22天后的粪便中，在对照组中为2.1×10³CFU/mL，在全时期施用组中为0.4±0.3×10³CFU/mL，在细菌接种后施用组中为0.7±0.3×10³CFU/mL(图5-4)。

(考察)

使用艰难梭菌(Clostridium difficile)感染模型，口服施用含有乳酸菌的饮料，对艰难梭菌的感染和施用开始时期的时刻对感染防御造成的影响通过生存率等指标进行了评价，研究了最有效果的摄取条件。

在全部案例中确认了软便，但对立毛而言，与在对照组中的全部案例中观察到立毛相比，在施用乳酸菌粉末的情况下，有1/10例或者2/10例的极少数例表现了立毛。

对生存率而言，相对于对照组为20％(8/10例死亡)，全时期施用组为90％(1/10例死亡)，细菌接种后施用组为80％(2/10例死亡)，观察到通过乳酸菌粉末的施用出现升高并有显著差异。

粪便中的活菌数在接种1天后按全时期施用组，细菌接种后施用组，对照组的顺序依次为更低的值，在乳酸菌粉末组之间确认有差异。在接种4天后及22天后，乳酸菌粉末组也为与对照组相比更低的值，其中，在乳酸菌粉末组之间没有确认到差异。

对体重，摄食量及饮水量的变化而言，乳酸菌粉末组与对照组相比的推移相同，在乳酸菌粉末组之间没有差异。

根据以上可见，显示了乳酸菌粉末EF-2001(含有乳酸菌的饮料的成分)的摄取，当从艰难梭菌的接种前开始，在接种之后也继续的情况下，对感染的防御有效。另一方面，确认了在艰难梭菌接种之后的摄取也对感染防御造成了效果。

将本说明书所引用的全部刊物、专利及专利申请直接作为参考而并入本说明书中。

工业实用性

本发明可用于艰难梭菌的感染的预防和/或治疗中。

Claims (23)

1.艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其含有肠球菌属的细菌。

2.根据权利要求1所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌为乳球菌。

3.根据权利要求2所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中，乳球菌为粪肠球菌。

4.根据权利要求3所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中，粪肠球菌为EF-2001株。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌为死菌。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌口服施用。

7.根据权利要求6所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以每次1亿～1，000亿CFU/kg体重口服施用。

8.根据权利要求7所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上，每次1亿～1,000亿CFU/kg体重口服施用。

9.根据权利要求8所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上5次以下的次数，每次1亿～1,000亿CFU/kg体重口服施用。

10.根据权利要求6所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以每次10～500亿CFU/kg体重口服施用。

11.根据权利要求10所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上，每次10～500亿CFU/kg体重口服施用。

12.根据权利要求11所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上5次以下的次数，每次10～500亿CFU/kg体重口服施用。

13.根据权利要求6所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以每次120亿以上的CFU/kg体重口服施用。

14.根据权利要求13所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上，每次120亿以上的CFU/kg体重口服施用。

15.根据权利要求14所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌以1天1次以上5次以下的次数，每次120亿以上的CFU/kg体重口服施用。

16.根据权利要求6～15中任一项所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其中肠球菌属的细菌口服施用7天以上。

17.根据权利要求1～16中任一项所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其用于艰难梭菌感染的预防。

18.根据权利要求1～16中任一项所述的艰难梭菌感染的预防和/或治疗剂，其用于艰难梭菌感染的治疗。

19.艰难梭菌感染的预防和/或治疗用药物，其含有肠球菌属的细菌。

20.艰难梭菌感染的预防和/或治疗用食品，其含有肠球菌属的细菌。

21.艰难梭菌感染的预防和/或治疗方法，包括将肠球菌属的细菌以药学上有效的量施用给受试者。

22.肠球菌属的细菌用于艰难梭菌感染的预防和/或治疗的用途。

23.肠球菌属的细菌，其用于艰难梭菌感染的预防和/或治疗方法中。

Images