CN112816571A - 石斛中10种有效成分的含量检测方法 - Google Patents

石斛中10种有效成分的含量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种石斛中10种有效成分的含量检测方法，该方法采用超高效液相色谱‑质谱联用方法进行检测，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，流动相由乙腈A和0.1％甲酸水溶液B组成，采用梯度洗脱方式洗脱；质谱用MRM模式进行检测。本发明的方法快速、准确、重现性好。

Description

石斛中10种有效成分的含量检测方法
技术领域
本发明涉及一种石斛中10种有效成分的含量检测方法。
背景技术
石斛(Dendrobium nobile Lindl.)为兰科石斛属植物，生于密林中树干上或山谷阴湿岩石上，主要分布在我国的广西省、贵州省和云南省，具有益胃生津，滋阴清热等功效，临床用于治疗阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明等症。市面上售卖的石斛种类、产地、年限不明，其质量检测方法对于选择品质高的石斛十分重要，然而目前石斛的质量检测方法还未见报道。对于石斛，现有文献仅报道了超高效液相色谱-质谱联用方法测定其中多种酚类成分的方法。对石斛中的联苄类、菲类等成分并未进行统一的分析。
因此，需要一种能够更全面地衡量石斛质量的检测方法。
发明内容
本发明提供一种石斛中10种有效成分的含量检测方法，该方法能够同时检测石斛中10种有效成分，从而更全面地衡量石斛的质量。
本发明提供石斛中10种有效成份的含量检测方法，采用超高效液相色谱-质谱联用方法进行检测，其中，超高效液相色谱条件包括：
色谱柱，采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂；
流动相由乙腈A和0.1％甲酸水溶液B组成，洗脱方式为：
0→T1，流动相中乙腈的体积百分比由A1增加至A2；
T1→T2，流动相中乙腈的体积百分比由A2增加至A3；
T2→T3，流动相中乙腈的体积百分比由A3增加至A4；
T3→T4，流动相中乙腈的体积百分比由A4增加至A5；
T4→T5，流动相中乙腈的体积百分比由A5增加至A6；
其中，T1为2～6min，T2为4～8min，T3为5～10min，T4为7～12min，T5为9～14min；A1为8％～12％，A2为22％～30％，A3为36％～49％，A4为63％～80％，A5为80％～95％，A6为90％～99％；所述乙腈的体积百分比均以流动相的总体积为基准。
其中，所述10种有效成分为香草酸，丁香酸，牡荆素，2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲，7,4'-二羟基黄酮，甘草素，丁香脂素，柚皮素，石斛酚，毛兰素。
其中，质谱用MRM模式进行检测，雾化气(GS1)、加热气(GS2)、气帘气(CUR)和碰撞气为氮气，参数如下：GS1，45psi；GS2，45psi；雾化温度，300℃。离子喷射针电压，正离子模式4500V，负离子模式-3500V。去簇电压(DP)135V。10种有效成分的离子对、碰撞能量为：
Figure BDA0002856068220000021
其中，每个化合物都用两个离子对进行检测，加粗的离子对用来定量。
其中，C1为-5～-15eV，C2为-15～-30eV，C3为-10～-25eV，C4为-15～-25eV，C5为-15～-30eV，C6为-35～-45eV，C7为-15～-35eV，C8为-35～-45eV，C9为-25～-45eV，C10为-15～-25eV，C11为-25～-35eV，C12为-5～-15eV，C13为15～25eV，C14为15～35eV，C15为-5～-20eV，C16为-25～-35eV，C17为-25～-35eV，C18为-10～-15eV，C19为15～25eV，C20为10～20eV。
本发明提供石斛中10种有效成分的含量检测方法，还包括供试品溶液的制备，具体包括取石斛醇提物，加溶剂溶解，再用微孔滤膜过滤得到供试品溶液。具体地，所述溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液。
具体地，所述供试品溶液的浓度为1.0～3.0mg/mL。
具体地，所述石斛醇提物的制备方法包括：将石斛采用75％乙醇作为溶剂进行加热回流提取，所得提取液回收，残渣用95％乙醇作为溶剂再次进行加热回流提取，合并两次所得提取液，离心后取上清液，浓缩至干，得到石斛醇提物。
本发明提供石斛中10种有效成分的含量检测方法，还包括对照品溶液的制备，具体包括将对照品用溶剂溶解，再用微孔滤膜过滤，得到对照品溶液；所述对照品选自如下化合物：香草酸，丁香酸，牡荆素，2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲，7,4'-二羟基黄酮，甘草素，丁香脂素，柚皮素，石斛酚，毛兰素。具体地，所述溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液。
具体地，将所述对照品中的全部溶解于同一溶剂中，得到对照品溶液，且该对照品溶液中含有的单种对照品的浓度为10～100ng/mL。
本发明提供石斛中10种有效成分的含量检测方法，还包括采用超高效液相色谱-质谱联用方法测定所述供试品溶液和对照品溶液。
本发明提供石斛中10种有效成分的含量检测方法，具体地，流动相的流速为0.3mL·min-1；和/或，柱温为40℃。
本发明提供石斛中10种有效成分的含量检测方法，优选地，洗脱方式：T1为2～5min，T2为4～6min，T3为6～9min，T4为7～10min，T5为9～11min；A1为9％～10％，A2为22％～28％，A3为38％～41％，A4为70％～77％，A5为88％～91％，A6为90％～97％。更优选地，洗脱方式：T1为3min，T2为5min，T3为7min，T4为9min，T5为10min；A1为10％，A2为26％，A3为40％，A4为75％，A5为90％，A6为95％。
本发明提供石斛中10种有效成分的含量检测方法，优选地，质谱检测中CE值(eV)：C1为-8～-12eV，C2为-18～-23eV，C3为-12～-17eV，C4为-15～-18eV，C5为-20～-25eV，C6为-35～-40eV，C7为-15～-20eV，C8为-35～-40eV，C9为-30～-35eV，C10为-20～-25eV，C11为-25～-30eV，C12为-10～-15eV，C13为20～25eV，C14为20～25eV，C15为-15～-20eV，C16为-30～-35eV，C17为-30～-35eV，C18为-13～-15eV，C19为20～25eV，C20为15～20eV。更优选地，质谱检测中CE值(eV)：C1为-10eV，C2为-20eV，C3为-16eV，C4为-18eV，C5为-24eV，C6为-39eV，C7为-19eV，C8为-36eV，C9为-35eV，C10为-22eV，C11为-28eV，C12为-14eV，C13为23eV，C14为25eV，C15为-18eV，C16为-32eV，C17为-32eV，C18为-14eV，C19为22eV，C20为17eV。
根据本发明实施例，所述石斛为流苏石斛(学名：Dendrobium fimbriatumHook.)，也可为其他任意品种石斛。
本发明建立了石斛中10种有效成分的含量检测方法，采用该方法可同时检测石斛中含有的10种有效成分，能够更有效地衡量石斛的质量，从而更全面有效地控制其质量，保证临床有效性。同时，本发明的方法快速、准确、重现性好。
附图说明
图1为实施例1的对照品溶液的总离子图谱。
图2为实施例1的供试品溶液的总离子图谱。
图1和图2中：
1为香草酸的色谱峰；
2为丁香酸的色谱峰；
3为牡荆素的色谱峰；
4为2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲的色谱峰；
5为7,4'-二羟基黄酮的色谱峰；
6为甘草素的色谱峰；
7为丁香脂素的色谱峰；
8为柚皮素的色谱峰；
9为石斛酚的色谱峰；
10为毛兰素的色谱峰。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护范围并不限于此。
本发明中，所述香草酸，丁香酸，牡荆素，2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲，7,4'-二羟基黄酮，甘草素，丁香脂素，柚皮素，石斛酚，毛兰素结构式如下：
Figure BDA0002856068220000051
10个有效成分的结构：香草酸(1),丁香酸(2),牡荆素(3),2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲
(4),7,4'-二羟基黄酮(5),甘草素(6),丁香脂素(7),柚皮素(8),石斛酚(9),毛兰素(10)
本发明的石斛的质量检测方法，包括：供试品溶液的制备步骤，对照品溶液的制备步骤和采用超高效液相色谱-质谱联用方法检测所述供试品溶液和对照品溶液中的10种有效成分的步骤。本发明的质量检测方法还可以包括对照品溶液的制备步骤。
<供试品溶液的制备>
本发明的供试品溶液的制备，是将石斛醇提物用溶剂溶解，再用微孔滤膜过滤，得到所述的供试品溶液。所述的溶剂可以选自甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液中的一种或几种。优选地，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分比为30～95％；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为30～95％，所述乙腈水溶液中乙腈的体积百分比为30～95％。优选地，所述的溶剂为甲醇。所述供试品溶液的浓度可以为1.0～3.0mg/mL，优选为1.5～2.0mg/mL，更优选为1.8～2.0mg/mL。根据本发明的一个优选的实施方式，所述供试品溶液的浓度为2.0mg/mL。所述供试品溶液的浓度是指石斛醇提物的重量与提取的溶剂的体积之比，例如当浓度为0.5mg/mL，是指每mL溶剂提取0.5mg的石斛醇提物。所述的微孔滤膜优选为孔径为0.22μm的微孔滤膜。
当所述供试品溶液为石斛醇提物的供试品溶液时，本发明的供试品溶液的制备步骤还可以包括石斛醇提物的制备步骤。石斛醇提物的制备步骤具体包括：将石斛采用75％乙醇作为溶剂进行加热回流提取，所得提取液回收，残渣用95％乙醇作为溶剂再次进行加热回流提取，合并两次所得提取液，离心后取上清液，浓缩至干，得到石斛醇提物。
<对照品溶液的制备>
本发明的方法还包括对照品溶液的制备步骤，包括将对照品用溶剂溶解，再用微孔滤膜过滤。通过将对照品溶液进行超高效液相色谱-质谱联用方法测定，能够对供试品溶液中含有的与对照品相同的化学成分进行定性和定量检测。
本发明中，所述的对照品选自如下化合物中的一种或多种：香草酸，丁香酸，牡荆素，2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲，7,4'-二羟基黄酮，甘草素，丁香脂素，柚皮素，石斛酚，毛兰素。根据本发明的一个实施方式，所述的对照品包括上述全部10种化合物。
本发明中，所述的溶剂可以选自甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液中的一种或几种，并优选为甲醇。优选地，所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分比为30～95％；所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比为30～95％，所述乙腈水溶液中乙腈的体积百分比为30～95％。优选地，所述的溶剂与供试品制备步骤采用的溶剂相同。所述的微孔滤膜优选为孔径为0.22μm的微孔滤膜。
本发明中，所述的对照品溶液可以是将上述对照品分别溶解在单独的溶剂中，制成每份仅包含一种对照品的多份对照品溶液；也可以是将上述对照品中的多种或全部共同溶解在同一溶剂中，制成混合对照品溶液，该对照品溶液中含有上述的多种或全部对照品。根据本发明优选的实施方式，所述的对照品溶液是将多种或全部对照品溶解于同一溶剂中制备而成。优选地，所述的对照品溶液中每种对照品的浓度为10～100ng/mL。
<超高效液相色谱-质谱联用检测>
本发明采用超高效液相色谱-质谱联用方法测定，将供试品溶液注入超高效液相色谱-质谱联用仪，得到总离子图谱。所述的检测方法还包括将对照品溶液注入超高效液相色谱-质谱联用仪，得到总离子图谱。本发明的超高效液相色谱-质谱联用方法中，超高效液相色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，流动相由乙腈(A)和含量为0.1％的甲酸水溶液(B)组成。本发明中，流动相由A组分和B组分组成，当A组分的体积含量确定后，余量即为B组分，这是本领域技术人员容易理解的。本发明采用梯度洗脱方式将石斛醇提物中的上述的10种有效成分分离开，具体的梯度洗脱条件如下：
0→T1，流动相中乙腈的体积百分比由A1增加至A2；
T1→T2，流动相中乙腈的体积百分比由A2增加至A3；
T2→T3，流动相中乙腈的体积百分比由A3增加至A4；
T3→T4，流动相中乙腈的体积百分比由A4增加至A5；
T4→T5，流动相中乙腈的体积百分比由A5增加至A6；
其中，
T1为2～6min，优选为2～5min，更优选为3min；
T2为4～8min，优选为4～6min，更优选为5min；
T3为5～10min，优选为6～9min，更优选为7min；
T4为7～12min，优选为7～10min，更优选为9min；
T5为9～14min，优选为9～11min，更优选为10min；
其中，
A1为8％～12％，优选为9％～10％，更优选为10％；
A2为22％～30％，优选为22％～28％，更优选为26％；
A3为36％～49％，优选为38％～41％，更优选为40％；
A4为63％～80％，优选为70％～77％，更优选为75％；
A5为80％～95％，优选为88％～91％，更优选为90％；
A6为90％～99％，优选为90％～97％，更优选为95％。
根据本发明一个优选的实施方式，T1为3min，T2为5min，T3为7min，T4为9min，T5为10min；A1为10％，A2为26％，A3为40％，A4为75％，A5为90％，A6为95％。
本发明中，所述乙腈的体积百分比均以流动相的总体积为基准。
本发明中，优选地，流动相的流速为0.3mL·min-1；柱温为40℃。
本发明采用超高效液相色谱-质谱联用方法测定所述供试品溶液和对照品溶液，质谱用MRM模式进行检测，雾化气(GS1)、加热气(GS2)、气帘气(CUR)和碰撞气为氮气，参数如下：GS1，45psi；GS2，45psi；雾化温度，300℃。离子喷射针电压，正离子模式4500V，负离子模式-3500V。去簇电压(DP)135V。10种有效成分的离子对、碰撞能量为：
Figure BDA0002856068220000081
其中，每个化合物都用两个离子对进行检测，加粗的离子对用来定量；
其中，
C1为-5～-15eV，优选为-8～-12eV，更优选为-10eV；
C2为-15～-30eV，优选为-18～-23eV，更优选为-20eV；
C3为-10～-25eV，优选为-12～-17eV，更优选为-16eV；
C4为-15～-25eV，优选为-15～-18eV，更优选为-18eV；
C5为-15～-30eV，优选为-20～-25eV，更优选为-24eV；
C6为-35～-45eV，优选为-35～-40eV，更优选为-39eV；
C7为-15～-35eV，优选为-15～-20eV，更优选为-19eV；
C8为-35～-45eV，优选为-35～-40eV，更优选为-36eV；
C9为-25～-45eV，优选为-30～-35eV，更优选为-35eV；
C10为-15～-25eV，优选为-20～-25eV，更优选为-22eV；
C11为-25～-35eV，优选为-25～-30eV，更优选为-28eV；
C12为-5～-15eV，优选为-10～-15eV，更优选为-14eV；
C13为15～25eV，优选为20～25eV，更优选为23eV；
C14为15～35eV，优选为20～25eV，更优选为25eV；
C15为-5～-20eV，优选为-15～-20eV，更优选为-18eV；
C16为-25～-35eV，优选为-30～-35eV，更优选为-32eV；
C17为-25～-35eV，优选为-30～-35eV，更优选为-32eV；
C18为-10～-15eV，优选为-13～-15eV，更优选为-14eV；
C19为15～25eV，优选为20～25eV，更优选为22eV；
C20为10～20eV。优选为15～20eV，更优选为17eV。
根据本发明一个优选的实施方式，C1为-10eV，C2为-20eV，C3为-16eV，C4为-18eV，C5为-24eV，C6为-39eV，C7为-19eV，C8为-36eV，C9为-35eV，C10为-22eV，C11为-28eV，C12为-14eV，C13为23eV，C14为25eV，C15为-18eV，C16为-32eV，C17为-32eV，C18为-14eV，C19为22eV，C20为17eV。
本发明中，流动相的组成和梯度洗脱条件对于石斛中组分的分离具有重要影响。离子对以及CE值的选择对各有效成分的定性具有显著作用。采用本发明的条件，能够将石斛中的属于不同类别的10种有效成分分离开来。因而，本发明的方法能够更全面、准确地检测石斛。同时，本发明的方法快速、准确、重现性好，适用于石斛的质量控制。
以下实施例中液相色谱三重四极杆串联质谱联用仪为安捷伦公司1290InfinityⅡ，6470LC/TQ型号。色谱柱为安捷伦公司Zorbax SB-C18(2.1×50mm,1.8μm)。采用的试剂均为色谱纯。
实施例1流苏石斛的质量检测方法
对照品溶液的制备：精密称取10种对照品适量，加甲醇溶解，使得混合对照品溶液中的各组分为：香草酸，丁香酸，牡荆素，2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲，7,4'-二羟基黄酮，甘草素，丁香脂素，柚皮素，石斛酚，毛兰素，浓度分别为50ng/mL，得到对照品溶液。
供试品溶液的制备：称取流苏石斛醇提物适量，用甲醇溶解，使其浓度为2mg/mL，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。
超高效液相色谱-质谱联用检测：分别将上述对照品溶液、供试品溶液注入超高效液相色谱-质谱联用仪，获得总离子图谱。
色谱条件为：流动相为乙腈(A)-0.1％甲酸水溶液(B)，流速0.3mL·min-1；柱温40℃；梯度洗脱条件为：
0→3min，流动相中乙腈的体积百分比由10％增加至26％；
3min→5min，流动相中乙腈的体积百分比由26％增加至40％；
5min→7min，流动相中乙腈的体积百分比由40％增加至75％；
7min→9min，流动相中乙腈的体积百分比由75％增加至90％；
9min→10min，流动相中乙腈的体积百分比由90％增加至95％。
质谱条件为：MRM模式检测，雾化气(GS1)、加热气(GS2)、气帘气(CUR)和碰撞气为氮气，参数如下：GS1，45psi；GS2，45psi；雾化温度，300℃。离子喷射针电压，正离子模式4500V，负离子模式-3500V。去簇电压(DP)135V。10种有效成分的离子对、碰撞能量为：
Figure BDA0002856068220000111
a每个化合物都用两个离子对进行检测，加粗的离子对用来定量
上述对照品溶液和供试品溶液的总离子图谱分别见图1和图2，10种有效成分的吸收峰具有良好的分离度，能够有效实现定性和定量检测。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种石斛中10种有效成分的含量检测方法，其特征在于，采用超高效液相色谱-质谱联用方法进行检测，其中，超高效液相色谱条件包括：：
色谱柱，采用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂；
流动相由乙腈A和0.1％甲酸水溶液B组成，洗脱方式为：
0→T1，流动相中乙腈的体积百分比由A1增加至A2；
T1→T2，流动相中乙腈的体积百分比由A2增加至A3；
T2→T3，流动相中乙腈的体积百分比由A3增加至A4；
T3→T4，流动相中乙腈的体积百分比由A4增加至A5；
T4→T5，流动相中乙腈的体积百分比由A5增加至A6；
其中，T1为2～6min，T2为4～8min，T3为5～10min，T4为7～12min，T5为9～14min；A1为8％～12％，A2为22％～30％，A3为36％～49％，A4为63％～80％，A5为80％～95％，A6为90％～99％；所述乙腈的体积百分比均以流动相的总体积为基准。
2.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，所述10种有效成分为香草酸，丁香酸，牡荆素，2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲，7,4'-二羟基黄酮，甘草素，丁香脂素，柚皮素，石斛酚，毛兰素。
3.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，洗脱方式：T1为2～5min，T2为4～6min，T3为6～9min，T4为7～10min，T5为9～11min；A1为9％～10％，A2为22％～28％，A3为38％～41％，A4为70％～77％，A5为88％～91％，A6为90％～97％；
优选地，洗脱方式：T1为3min，T2为5min，T3为7min，T4为9min，T5为10min；A1为10％，A2为26％，A3为40％，A4为75％，A5为90％，A6为95％。
4.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，流动相的流速为0.3mL·min-1；和/或，柱温为40℃。
5.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，质谱用MRM模式进行检测，雾化气(GS1)、加热气(GS2)、气帘气(CUR)和碰撞气为氮气，参数如下：GS1，45psi；GS2，45psi；雾化温度，300℃；离子喷射针电压，正离子模式4500V，负离子模式-3500V；去簇电压(DP)135V；10种有效成分的离子对、碰撞能量为：
Figure FDA0002856068210000021
其中，每个化合物都用两个离子对进行检测，加粗的离子对用来定量；
其中，C1为-5～-15eV，C2为-15～-30eV，C3为-10～-25eV，C4为-15～-25eV，C5为-15～-30eV，C6为-35～-45eV，C7为-15～-35eV，C8为-35～-45eV，C9为-25～-45eV，C10为-15～-25eV，C11为-25～-35eV，C12为-5～-15eV，C13为15～25eV，C14为15～35eV，C15为-5～-20eV，C16为-25～-35eV，C17为-25～-35eV，C18为-10～-15eV，C19为15～25eV，C20为10～20eV。
6.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，质谱检测中CE值(eV)：C1为-8～-12eV，C2为-18～-23eV，C3为-12～-17eV，C4为-15～-18eV，C5为-20～-25eV，C6为-35～-40eV，C7为-15～-20eV，C8为-35～-40eV，C9为-30～-35eV，C10为-20～-25eV，C11为-25～-30eV，C12为-10～-15eV，C13为20～25eV，C14为20～25eV，C15为-15～-20eV，C16为-30～-35eV，C17为-30～-35eV，C18为-13～-15eV，C19为20～25eV，C20为15～20eV；
优选地，质谱检测中CE值(eV)：C1为-10eV，C2为-20eV，C3为-16eV，C4为-18eV，C5为-24eV，C6为-39eV，C7为-19eV，C8为-36eV，C9为-35eV，C10为-22eV，C11为-28eV，C12为-14eV，C13为23eV，C14为25eV，C15为-18eV，C16为-32eV，C17为-32eV，C18为-14eV，C19为22eV，C20为17eV。
7.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，还包括供试品溶液的制备，具体包括取石斛醇提物，加溶剂溶解，再用微孔滤膜过滤得到供试品溶液；
优选地，所述溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液；
更优选地，所述供试品溶液的浓度为1.0～3.0mg/mL。
8.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，所述石斛醇提物的制备方法包括：将石斛采用75％乙醇作为溶剂进行加热回流提取，所得提取液回收，残渣用95％乙醇作为溶剂再次进行加热回流提取，合并两次所得提取液，离心后取上清液，浓缩至干，得到石斛醇提物。
9.根据权利要求1所述的含量检测方法，其特征在于，还包括对照品溶液的制备，具体包括将对照品用溶剂溶解，再用微孔滤膜过滤，得到对照品溶液；所述对照品选自如下化合物：香草酸，丁香酸，牡荆素，2,4,7-三羟基-9,10-二氢菲，7,4'-二羟基黄酮，甘草素，丁香脂素，柚皮素，石斛酚，毛兰素；
优选地，所述溶剂为甲醇、乙醇、乙腈、甲醇水溶液、乙醇水溶液或乙腈水溶液；
更优选地，将所述对照品中的全部溶解于同一溶剂中，得到对照品溶液，且该对照品溶液中含有的单种对照品的浓度为10～100ng/mL。
10.根据权利要求1-9任一项所述的含量检测方法，其特征在于，所述石斛为流苏石斛，也可为其他任意品种石斛。
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