CN112807304B - 坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的用途 - Google Patents

坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN112807304B
CN112807304B CN202110152014.5A CN202110152014A CN112807304B CN 112807304 B CN112807304 B CN 112807304B CN 202110152014 A CN202110152014 A CN 202110152014A CN 112807304 B CN112807304 B CN 112807304B
Authority
CN
China
Prior art keywords
canagliflozin
cells
tuberous sclerosis
tsc
treatment
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110152014.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112807304A (zh
Inventor
薛斌
叶娟
曹鹏
吴菁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sir Run Run Hospital Nanjing Medical University
Original Assignee
Sir Run Run Hospital Nanjing Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sir Run Run Hospital Nanjing Medical University filed Critical Sir Run Run Hospital Nanjing Medical University
Priority to CN202110152014.5A priority Critical patent/CN112807304B/zh
Publication of CN112807304A publication Critical patent/CN112807304A/zh
Priority to PCT/CN2022/083399 priority patent/WO2022161510A1/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112807304B publication Critical patent/CN112807304B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A61K31/381—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4178—1,3-Diazoles not condensed 1,3-diazoles and containing further heterocyclic rings, e.g. pilocarpine, nitrofurantoin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的用途，坎格列净能够选择性靶向TSC突变细胞，并显著影响TSC突变细胞活力，促进TSC突变细胞凋亡。

Description

坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的 用途
技术领域
本发明涉及结节性硬化症介导的疾病的治疗和预防领域，属于结节性硬化症治疗及相关药物领域。
背景技术
结节性硬化症(TSC)又称Boumeville病，是一种多系统遗传性疾病，为常染色体显性疾病，全球发病率为1/6000-10000。据估计，全世界有100多万人受到影响。结节性硬化症发病机制主要为抑癌基因TSC1和/或TSC2的突变，这两种基因任一种中的突变都会导致结节性硬化症的临床表现，即两个基因TSC1和TSC2的突变与TSC的发展有因果关系。TSC2/TSC1所编码的蛋白错构瘤蛋白(hamartin)和结节蛋白(tuberin)会调控mTOR(mammaliantarget of rapamycin)信号通路的表达。哺乳动物的雷帕霉素靶(mammalian target ofrapamycin，mTOR)是一种非典型丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，可整合细胞外信号，磷酸化下游靶蛋白核糖体p70S6激酶，如S6K1及4E-BP1，影响基因转录与蛋白质翻译，从而参与调控细胞生长、增殖等过程。据研究报道，大部分的肿瘤发生发展过程中都会有mTOR信号通路的过度激活，所以mTORC1被作为治疗靶点解决TSC中不受控制的细胞和肿瘤生长和TSC相关的疾病。
TSC的特点是良性肿瘤生长在全身各个器官，包括脑、肾、肺、周围神经和皮肤等。它还与行为、精神、智力、学术、神经心理和社会心理困难有关，归为总称TAND(TSC相关神经心理障碍)。TSC临床表现复杂，其自然病程因个体而异，症状在不同年龄段出现，严重程度从非常轻微到严重不等，甚至可能导致死亡。此外，患有TSC的患者需要终身随访，以确保早期发现可能危及生命的并发症。多样化的临床表现代表了重大的疾病、医疗保健和治疗负担。结节性硬化症常见的临床症状包括癫痫发作、精神发育迟缓、孤独症、肾衰竭，面部血管纤维瘤和贲门横纹肌瘤，且此外，许多受侵害个体在某些骨骼区域，特别是指和趾的骨(趾骨)中具有囊肿样区域。根据受累部位，结节性硬化症大致可分为：
皮肤损害，特征在于口鼻三角区皮脂腺瘤，对称蝶形分布，呈淡红色或红褐色，为针尖至蚕豆大小的坚硬蜡样丘疹，按之稍褪色。
神经系统损害，主要症状表现为(1)癫痫为本病的主要神经症状，发病率占70％～90％，早自婴幼儿期开始，发作形式多样，可自婴儿痉挛症开始，至部分性局灶性或复杂性发作、全面性大发作。频繁而持续的癫痫发作后可继发违拗、固执等癫痫性人格障碍。若伴有皮肤色素脱失可诊断为结节性硬化症，以后转化为全面性、简单部分性和复杂部分性发作，频繁发作者多有性格改变。(2)智能减退多进行性加重，伴有情绪不稳、行为幼稚、易冲动和思维紊乱等精神症状，智能减退者几乎都有癫痫发作，早发癫痫者易出现智能减退，癫痫发作伴高峰节律异常脑电图者常有严重的智能障碍，部分患者可表现为孤独症。(3)少数可有神经系统阳性体征。如锥体外系体征或单瘫、偏瘫、截瘫、腱反射亢进等，如室管膜下结节阻塞脑脊液循环通路或局部巨大结节、并发肿瘤等可引起颅内压增高表现。
眼部症状，50％患者有视网膜胶质瘤，称为晶体瘤。眼底检查在眼球后极视乳头或附近可见多个虫卵样或桑椹样钙化结节，或在视网膜周边有黄白色环状损害。此外尚可出现小眼球、突眼、青光眼、晶体混浊、白内障、玻璃体出血、色素性视网膜炎、视网膜出血和原发性视神经萎缩。
心脏病变，47％～67％患者可出现心脏横纹肌瘤，该肿瘤一般在新生儿期最大，随年龄增大而缩小至消失，可引起心力衰竭，是本病婴儿期最重要的死亡原因，产前超声最早能在妊娠22周时发现肿瘤，提示患结节性硬化症的可能为50％。
尽管结节性硬化症中的许多特征实际上为神经性的，但是肾脏病变为该病的常见特征。大约70-80％的结节性硬化症患者发生肾血管肌脂肪瘤(AML)。AML为由包括平滑肌、血管和脂肪细胞在内的三种不同细胞类型组成的异种良性肿瘤。表现为无痛性血尿、蛋白尿、高血压或腹部包块等，在结节性硬化症死亡者中因肾脏疾病而夭折者约占27.5％，是该病死亡的第二大原因。
结节性硬化症患者还存在具有称作淋巴管平滑肌增多症(LAM)的肺病的破坏性形式的证据。据报导结节性硬化症基因突变为淋巴管平滑肌增多症(1ymphyangioleiomyomatosis)(LAM)的原因。例如，参见″Mutations in the tuberoussclerosis complexgene TSC2 are a cause of sporaticlymphyangioleiomyomatosis″；Carsillo，Astrinidis and Henske；PNAS 200097：6085-90。LAM为独特和罕见的囊性肺(肺)疾病，它主要侵害绝经前女性，可发病于肺部、胸导管、腹部、腹膜后腔、盆腔、子宫、卵巢等，肺部最易受累。肺淋巴管平滑肌瘤(pulmonarylymphangioleiomyomatosis，PLAM)是淋巴管平滑肌增多症中肺部病变，临床主要表现为渐进性的呼吸困难(dysapnea)、慢性咳嗽、喘鸣、气胸和胸痛、乳糜性胸腔积液。这些症状在LAM细胞迁移入肺时发生并且恶化，导致囊性实质破坏和进行性呼吸衰竭。肺淋巴平滑肌瘤大多作为独立的病症发生(散发性LAM)，也有少数作为结节性硬化症的继发性病症发生(TSC-LAM)。肺淋巴管肌瘤病的发病特征是平滑肌样的肺淋巴管细胞的过多增殖、迁移和分化，导致肺囊性结构的破坏，阻碍气管和淋巴管的功能，使得肺功能逐渐丧失。通常无症状的肾肿瘤还可以在具有LAM的患者中发现。
AML为LAM(50％的患者出现)和结节性硬化症(70％的患者出现)的症状，并且在这两种障碍之间不存在放射学、形态学或在AMLs之间的遗传差别。参见“TheLymphangioleiomyomatosis Lung Cell and Its Human Cell Models″；Wendy K.Steagal| etc.，Translational Review；58(6)：678-683”
部分结节性硬化症患者发生室管膜下巨细胞星形细胞瘤(SEGA)(参见“TheLymphangioleiomyomatosis Lung Cell and Its Human Cell Models″；WendyK.Steagall etc.，Translational Review；58(6)：678-683)，它们为一般无症状的缓慢进行性肿瘤，直到发生心室阻塞，从而导致威胁生命的急性脑积水。由于这些肿瘤的深部位置，所以手术切除是困难的并且通常与明显的发病率相关。
骨骼病变，骨质硬化，颅骨硬化症最为常见，亦好发于指、趾骨，为骨小梁增生所致；囊性变，全身骨骼均可受累，X线可发现；脊柱裂和多趾(指)畸形。
其他脏器，包括消化道、甲状腺、甲状旁腺、子宫、膀胱、肾上腺、乳腺、胸腺等均可能有受累，目前认为结节性硬化症除骨骼肌、松果体外可累及所有组织器官。对于肺淋巴管肌瘤病病灶区LAM细胞的来源现阶段还是不清楚，多认为其来自于淋巴管或是血管。
由于肺淋巴管平滑肌瘤和哮喘、慢性阻塞性肺病以及肺气肿相似的临床症状，因此其病理诊断比较困难。HRCT以肺部均匀分布的多个薄壁囊状影为特征，双肺出现边界清晰的圆形囊肿，分布均匀。肺组织活检是该病诊断的金标准。目前肺淋巴管平滑肌瘤病尚无成熟的病理诊断意见，除了与黑色素瘤相关的HMB 45抗体阳性，雌激素受体(ER)及孕激素受体(PR)阳性为LAM的标记性抗体，以及近几年新发现的组织蛋白酶k(Cathepsin-k)也是作为其诊断的辅助分子标记之一。
同时，现阶段针对肺淋巴管平滑肌瘤的治疗无特别有效方法，主要是药物控制和肺移植。
在结节性硬化症介导的肺淋巴管肌瘤病的临床治疗方面，大环内酯类抗生素雷帕霉素(rapamycin)是近几年发现的可以有效控制肿瘤恶化的药物，其作用的靶点就是mTOR信号通路中的mTORC1蛋白复合物，但是病人停止使用雷帕霉素后，短期内肿瘤出现复发，并且在某些散发性的肺淋巴管肌瘤病人身上并无治疗效果。肺淋巴管平滑肌瘤与大部分的恶质瘤一样，单个的治疗靶点不利于该病的治疗。
发明内容
解决的技术问题：在第一方面，本发明提供了坎格列净用于治疗结节性硬化症介导的疾病，诱导通过结节性硬化症介导的疾病退化，治疗与结节性硬化症介导的疾病相关的症状，治疗结节性硬化症介导的疾病相关的疾病，和/或抑制或控制结节性硬化症介导的疾病，例如，其中结节性硬化症介导的疾病包括结节性硬化症、肾血管肌脂肪瘤(ALM)、淋巴管平滑肌增多症(LAM)或室管膜下巨细胞星形细胞瘤(SEGA)。
在第二方面，本发明提供了治疗结节性硬化症介导的疾病的方法，包括对有此需要的个体施用治疗有效量的坎格列净；诱导结节性硬化症介导的疾病退化的方法，包括对有此需要的个体施用治疗有效量的坎格列净；治疗与结节性硬化症介导的疾病有关的症状的方法，包括对有此需要的个体施用治疗有效量的坎格列净；治疗结节性硬化症介导的疾病相关的疾病的方法，包括对有此需要的个体施用治疗有效量的坎格列净；抑制或控制结节性硬化症介导的疾病的方法，包括对有此需要的个体施用治疗有效量的坎格列净。
在第三方面，本发明提供了用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途的任何化合物，其中所述化合物为坎格列净。
在一些实施例中，本发明提供了用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途中的任何化合物，其用于治疗结节性硬化症。
在一些实施例中，本发明提供了用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途中的任何化合物，其用于治疗肾血管肌脂肪瘤(ALM)。
在一些实施例中，本发明提供了用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途中的任何化合物，其用于治疗淋巴管平滑肌增多症(LAM)。
在第四方面，本发明提供了坎格列净在制备用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途的药物中的用途。
在第五方面，本发明提供了药物组合物，其包含坎格列净与至少一种药学上可接受的赋形剂，例如适当的载体和/或稀释剂，例如包括填充剂、粘合剂、崩解剂、流动调节剂、润滑剂、糖类或甜味剂、香料、防腐剂、稳定剂、湿润剂和/或乳化剂、增溶剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂，该药物组合物用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途。
在第六方面，坎格列净可以单独或与至少一种第二种药物物质联合用于本发明提供的任何方法，任何用途和任何药物组合物。
在第七方面，本发明提供了用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途的坎格列净与至少一种第二种药物物质的组合；用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途的包含坎格列净与至少一种第二种药物物质的药物组合；用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途的包含坎格列净与至少一种第二种药物物质和一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物；用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途的坎格列净在制备用于与第二种药物物质组合的药物中的用途。
在第一方面或第二方面中定义的任何方法，包括间歇施用治疗有效量的坎格列净，同时或依次共同施用治疗有效量的坎格列净与至少一种第二种药物物质，例如以药物组合或组合物的形式。
组合包括：固定组合，其中坎格列净和至少一种第二种药物物质在相同的制剂中；药盒，其中将在不同的制剂中的本发明化合物和至少一种第二种药物物质提供在同一包装中，例如其中具有用于共同施用的说明书；和自由的组合，其中将坎格列净和至少一种第二种药物物质分别包装，但给出用于同时或依次施用的说明书。
在第八方面，本发明提供了药物包装，其包含为坎格列净的第一种药物物质和至少一种第二种药物物质，还包含用于联合施用的说明书；药物包装，其包含坎格列净，还包含与至少一种第二种药物物质联合施用的说明书；药物包装，其包含至少一种第二种药物物质，还包含与坎格列净联合施用的说明书；所述药物包装用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途。
使用本发明的组合的治疗可以提供与单一治疗相比的改善。
在第九方面，本发明提供了药物组合，其包含一定量的坎格列净和一定量的第二种药物物质，其中所述的用量适合于产生协同治疗作用；改善坎格列净的治疗应用的方法，包括共同施用，例如同时或依次施用治疗有效量的本发明化合物和第二种药物物质；改善第二种药物物质的治疗应用的方法，包括共同施用，例如同时或依次施用治疗有效量的坎格列净和第二种药物物质，所述药物组合用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途。
在第九方面所定义的药物组合或方法中，坎格列净或第二种药物物质的活性与单一治疗相比可以得到增强，例如当用于第一方面或第二方面中所定义的任何方法或用途时，例如组合治疗可以产生协同作用或可以克服对坎格列净或化疗剂的抗性。
如第七方面至第九方面中指出的组合物的(药物)组合，其包含为坎格列净的第一种活性剂；和作为共同使用的活性剂的第二种药物物质，其为例如化疗剂。
本发明提供的治疗包括预防。本文所用的病症包括疾病。
就这类治疗而言，适当的剂量当然根据例如所用坎格列净的化学性质和药代动力学数据、个体宿主、施用方式和所治疗的病症的性质和严重性的不同而改变。然而，一般而言，为了在较大哺乳动物，例如人中获得令人满意的效果，指定的每日剂量包括约0.0001g至约1.5g，诸如0.001g至1.5g；约0.001mg/kg体重至约20mg/kg体重，诸如0.01mg/kg体重至20mg/kg体重，例如，以每天4次的分次剂量施用。
在本发明提供的方法、用途、组合、药物组合或药物组合物中，如果合适，可以例如经肠道，例如通过口服或通过肠胃外施用坎格列净，例如通过口服，剂量在0.1mg至15mg，诸如0.1mg至10mg，例如0.1mg、O.25mg、0.5mg、0.75mg、1mg、2.5mg、5mg或10mg，更优选0.5mg至10mg，这取决于所治疗的疾病。
如果合适，可以在联合疗法中施用第二种药物物质，例如按照常规的方法，例如按照与对单一治疗的具体药物指定的施用指示类似的方式。可以通过任何常规途径施用本文所用的第二种药物物质，例如通过肠道，例如包括鼻部、口含、直肠、口服施用；肠胃外，例如包括静脉内、动脉内、肌内、心内、皮下、骨内输注、透皮(通过完整皮肤扩散)、跨粘膜(通过粘膜扩散)、吸入施用；通过局部；例如包括表皮、鼻内、气管内施用；腹膜内(输注或注入腹腔)；硬膜上(硬膜外)(注射或输注入硬膜外腔)；鞘内(注射或输注入脑脊髓液)；玻璃体内(通过眼施用)；或通过医疗器械，例如用于局部递送，例如支架；例如以包衣或非包衣片、胶囊、(可注射)溶液、输注溶液、固体溶液、混悬液、分散体、固体分散体的形式；例如以安瓿、小瓶的形式，霜剂、凝胶、糊剂、吸入粉末、泡沫、酊剂、唇膏、滴剂、喷雾剂的形式或栓剂的形式。可以以药学上可接受的盐的形式或游离形式；任选以溶剂合物形式施用本文所用的第二种药物物质。
可以按照，例如与作为常规的方法类似的方式，例如通过混合、制粒、包衣、溶解或冻干方法制备本发明的药物组合物。单位剂型可以包含，例如约0.1mg至约1500mg，诸如1mg至约1000mg。
如果合适，例如按照例如与作为常规或如本文对本发明药物组合物所述类似的方法提供包含本发明组合的组合物和包含如本文所述的第二种药物物质的药物组合物。
治疗结节性硬化症介导的疾病的方法包括治疗个体缺陷性TSC途径所致的疾病。
“缺陷性TSC途径”包括调节产生生物作用的TSC途径，这种生物作用对TSC途径内的细胞或组织产生不良影响。例如以表型、遗传、生化和分子方式表现在结节性硬化症的疾病中。如果合适，例如按照作为常规的方法可以鉴定缺陷性TSC途径。
结节性硬化症包括在实际上为神经性和肾功能不全的功能疾病。与结节性硬化症疾病相关的症状和疾病例如包括癫痫发作、精神发育迟缓、孤独症、肾衰竭、面部血管纤维瘤和贲门横纹肌瘤；在某些骨骼区域，特别是指和趾的骨(趾骨)中具有囊肿样区域；特征性皮肤损害，包括肤色减退的边界清楚的区域(色素沉着不足)，可能在面颊和鼻部上出现的相对小的淡红色结节，这些淡红色损害最终扩大，彼此掺合(融合)并且发展成疣样外观(皮脂腺腺瘤)；皮肤色素沉着增加的扁平″咖啡色″区域(咖啡牛奶色素斑)；例如在指甲周围或其下出现的良性纤维性结节(纤维瘤)；或在腰部上粗糙隆起的″疣状″损害(鲨革斑)；涉及因组成细胞大小增加导致的器官或身体部分扩大或过度生长的肥大，例如包括右心室肥大、肥大性心肌病、良性前列腺肥大；肾血管肌脂肪瘤(AML)；例如在异种良性肿瘤中表现，例如由三种不同细胞类型，包括平滑肌、血管和脂肪细胞组成的异种良性肿瘤；肺病的破坏性形式，诸如淋巴管平滑肌增多症(LAM)，阻断气流、血液和淋巴液到达和离开肺，与LAM相关的肾肿瘤，呼吸困难，慢性咳嗽，喘鸣，气胸和胸痛，囊性实质破坏，进行性呼吸衰竭。
本文所用的术语“第二种药物物质”意指非本发明化合物的任何化合物。
例如，本文所用的第二种药物物质包括例如抗癌药、抗炎和/或免疫抑制和/或抗过敏性药物、止痒药、收敛剂、局部麻醉药。
本文所用的第二种药物物质包括例如用于治疗与结节性硬化症介导的疾病相关的症状的药物，诸如用于治疗结节性硬化症、肾血管肌脂肪瘤(ALM)、淋巴管平滑肌增多症(LAM)和/或与之相关的症状和/或疾病的药物。
易于用作与本发明任何化合物，例如易于用于坎格列净的组合伴侣的抗癌药包括：雷帕霉素；Necrostatin-1；Necrosulfonamide；临床用于治疗LAM的其他药物及坏死性凋亡抑制剂。
有益效果：
坎格列净的分子式：C24H25FO5S；化学名称为：(1S)-1，5-脱水-1-C-(3-{[5-(4-氟苯基)噻吩-2-基]甲基}-4-甲基苯基)-D-葡萄糖醇；英文名称为：Canagliflozin(PubchemCID：24812758)；化学结构式如式I所示：
Figure BDA0002932856250000071
发明人的研究表明，
(1)坎格列净能够选择性靶向TSC突变细胞，并显著影响TSC突变细胞活力，促进TSC突变细胞凋亡，从而抑制淋巴管平滑肌增多症，尤其是肺淋巴管平滑肌瘤，肺淋巴管平滑肌瘤包括肺组织以及肺门内的平滑肌结节性及弥漫性增生。
(2)坎格列净与雷帕霉素；Necrostatin-1；和/或Necrosulfonamide等临床用于治疗LAM的其他药物及坏死性凋亡抑制剂达到意想不到的效果。
(3)坎格列净能被机体迅速吸收，口服2小时即可在血清中检测到最大浓度(Cmax)；并且对此给药后，坎格列净能在机体稳定存在4-5天，说明该药物作用具有相对持久性。口服生物利用度高达65％，能与血清中几乎99％的蛋白结合，特别是更易于与白蛋白结合，这可能有助于药物在机体的稳定性和流动性。
附图说明
图1是CCK8检测不同坎格列净浓度对TSC突变细胞活力影响及IC50的检测图
图2是CCK8检测不同坎格列净浓度选择性影响TSC突变细胞活力影响的检测图；
图3是坎格列净促进TSC突变细胞细胞凋亡的检测图；
图4是坎格列净抑制TSC突变细胞细胞周期检测以及数据统计图；
图5是坎格列净治疗TSC突变细胞细胞裸鼠皮下成瘤实验用药后检测肺淋巴管平滑肌瘤肺部成瘤病理分析图(HE)、皮下肿瘤大小、细胞Ki67和Tunnel染色图。
图6是坎格列净联合雷帕霉素、坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1和Necrosulfonamide抑制TSC突变细胞活力检测图。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
采用的实验材料来源如下：CCK8检测试剂盒购买于美国MCE中国分公司，TUNEL检测试剂盒购买于Promiga公司，Ki67抗体购买于CST公司，6～8周龄的STOCK-Foxnlnu/Nju雌性裸鼠购于南京大学模式动物研究所。小鼠正常维持饲料购于江苏省协同生物工程有限公司。坎格列净购于美国MCE中国分公司。
由于大部分散发肺淋巴管平滑肌瘤和结节性硬化伴随症大部分的基因诊断都是依赖TSC2基因的突变，TSC2-/-细胞被广泛用于缺陷性TSC途径所致的疾病模型，包括结节性硬化症，如LAM、AML等等(参见“Selective inhibition ofgrowth oftuberous sclerosiscomplex 2null cells by atorvastatin is associated with impaired Rheb and RhoGTPase function and reduced mTO则S6 kinase activity；Finlay GA，etc.，Cancerresearch；67(20)：9878-86.”“The Lymphangioleiomyomatosis Lung Cell and ItsHuman Cell Models″；Wendy K.Steagall etc.，Translational Review；58(6)：678-683”“Human TSC2-null fibroblast-like cells induce hair follicle neogenesis andhamartoma morphogenesis.Li S，et al.，Nature communications.2011；2：235.”“Lymphangioleiomyomatosis and TSC2-/-cells；Darling TN，et al.，Lymphaticresearch and biology.2010；8(1)：59-69.”“Evolving Strategies in the Treatmentof Tuberous Sclerosis Complex-associated Angiomyolipomas(TSC-AML)；Kapoor A，etal；Urology.2016；89：19-26.”)。在研究实践中，选择小鼠胚胎成纤维细胞(MEF细胞)作为试验细胞，通过比较正常MEF细胞与TSC突变细胞，如TSC1-/-或TSC2-/-细胞进行研究。本发明的以下实施例的细胞水平验证坎格列净药效时，选择TSC2-null(TSC2-/-)小鼠胚胎成纤维细胞作为其检测的细胞，对照细胞为同类型的非TSC2突变的MEF(TSC2+/+)细胞，从而以TSC2-/-MEF细胞作为缺陷性TSC途径所致的结节性硬化症模型来验证坎格列净的活性。
实施例1
96孔板每孔104个TSC2-/-MEF细胞，贴壁12-24小时。按实验分组加入不同浓度的药物，每组都有至少6个重复孔，作用48小时。药物处理结束后每孔100μL的无血清培养基加入10μL的CCK8溶液，37℃培养箱培养1小时，小心吸出培养基，用酶标仪在450nm波长检测其吸光值。
本实验共分为10组分别是对照组，坎格列净0、16777.2、20971.5、26214.4、32768、40960、51200、64000、80000和100000nM组，其中对照组为坎格列净的溶剂DMSO，细胞为TSC2-/-MEF细胞，DMEM+10％FBS正常培养条件下处理48小时。
如图1所示，坎格列净可以浓度依赖的抑制TSC2-/-细胞活性，IC50为53.93μM，40Mm等量临床剂量100mg/kg。
实施例2
96孔板每孔104个TSC2-/-MEF细胞，贴壁12-24小时。按实验分组加入不同浓度的药物，每组都有至少6个重复孔，作用48小时。药物处理结束后每孔100μL的无血清培养基加入10μL的CCK8溶液，37℃培养箱培养1小时，小心吸出培养基，用酶标仪在450nm波长检测其吸光值。
本实验共分为三组分别是对照组，坎格列净20μM，30μM，40μM组，其中对照组为坎格列净的溶剂DMSO，细胞为TSC2-/-MEF细胞，DMEM+10％FBS正常培养条件下处理48小时。
由图2可知，随着坎格列净的浓度越来越高，细胞的增殖活力越来越低，并且相对于20μM的浓度，40μM的坎格列净细胞增殖效率的下降更加明显，出现显著性的差异。因此坎格列净浓度依赖性抑制TSC2-/-活性，对正常细胞无影响，具有选择性杀伤作用。
实施例3
将结合缓冲液(Binding Buffer)(10×)稀释成1×结合缓冲液工作液备用(1ml结合缓冲液(10×)需加入9mL无菌去离子水)。用不含EDTA的胰酶消化TSC2-/-细胞，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。收集细胞后，加入预冷PBS溶液用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。在细胞沉淀中加入1×结合缓冲液工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106个细胞/mL。吸取100μL细胞悬液(细胞总数为1×105个细胞)至一新管中，加入5uL Annexin V-FITC和5uL PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。染色孵育后，每管加入400Ul1×结合缓冲液工作液，混匀后使用流式细胞仪检测(1小时内检测)。本实验共分为三组分别是对照组，坎格列净20μM，30μM，40μM组，其中对照组为坎格列净的溶剂DMSO，细胞为TSC2-/-MEF细胞，DMEM+10％FBS正常培养条件下处理48小时。
本实验共分为三组分别是对照组，坎格列净20μM，30μM，40μM组，其中对照组为坎格列净的溶剂DMSO，细胞为TSC2-/-MEF细胞，DMEM+10％FBS正常培养条件下处理48小时。
由图3可知，坎格列净可以浓度依赖的促进TSC2-/-细胞凋亡，对早期凋亡影响大于晚期凋亡。与正常细胞相比，具有选择性，可以选择性促进TSC2-/-细胞凋亡。
实施例4
六孔板种下TSC2-/-细胞，每孔1.5×106个，细胞处于生长对数期，50-80％贴壁后换含药培养液(三复孔)，处理48h后，收细胞检测。细胞处理：胰酶消化含血清培养基中和，2000rpm 5min，用预冷PBS重悬洗涤，小心地吸去上清，残留约50ul，不要倾倒；细胞固定：1ml PBS充分重悬，成单细胞，轻轻边vortex，边缓慢滴加3ml预冷的无水乙醇，至终浓度75％，4度静置过夜(18-24h)，-20度长期保存一个月(预约流式细胞仪)将过夜固定好的细胞用预冷PBS洗两次，2000rpm 5min去除PBS后加入200ul PBS(约400u1)，为减少细胞损失可用1.5ml离心。移至1.5ml EP管中，轻轻弹击离心管底，以适当分散细胞，避免细胞成团；加入20uLRNase(储存浓度25mg/mL，PBS稀释成1mg/ml，工作浓度50ug/m1)，重悬细胞，37℃水浴消化30min；加入PI 20ul至终浓度50ug/ml(储存液浓度25mg/ml，PBS稀释1mg/ml加入10u1)锡箔纸包住，避光4度染色30min，24h内上机检测。
本实验共分为三组分别是对照组，坎格列净20μM，30μM，40μM组，其中对照组为坎格列净的溶剂DMSO，细胞为TSC2-/-MEF细胞，DMEM+10％FBS正常培养条件下处理48小时。
结果如图4所示，坎格列净浓度依赖的影响TSC2-/-细胞周期，产生G1期阻滞，与正常细胞相比，具有选择性，可以选择性抑制TSC2-/-细胞生长。
实施例5
购买6～8周的雌性裸鼠，在其背部擦拭酒精后，0.45mm的针头注射107个细胞，拔出针头时注意无细胞溢出。在小鼠背部肿瘤长至直径约为3mm时，进行灌胃坎格列净给药。裸鼠灌胃给药的剂量为100mg/kg，连续8天，共给药近1周8次。裸鼠皮下实质瘤的具体构建流程如图5A所示。由图5B可知，在皮下成瘤的裸鼠灌胃给坎格列净的剂量为100mg/kg，连续8天，共给药近1周8次，相对于打PBS的对照组，坎格列净治疗组裸鼠皮下的肿瘤的生长速度明显减缓，肿瘤体积的增长出现明显的差异，可以得出结论坎格列净能有效的抑制TSC2-/-细胞皮下实质瘤的生长。肿瘤生长示意图结果如图5C所示。
为了进一步检测坎格列净对裸鼠皮下肿瘤生长的抑制作用，本实施例进一步利用病理检测(HE)联合免疫荧光技术检测了皮下肿瘤细胞的增殖，从图5D中可见，坎格列净处理组Tunnel染色增加，说明坎格列净促进肿瘤细胞凋亡；Ki67蛋白的表达明显减少，说明坎格列净抑制TSC2-/-细胞转移。因此，从动物模型的坎格列净治疗中进一步得出结论：坎格列净在动物体内可以有效的控制皮下肿瘤的生长。
实施例6
96孔板每孔104个TSC2-/-细胞，贴壁12-24小时。按实验分组加入不同浓度的药物，每组都有至少6个重复孔，作用48小时。药物处理结束后每孔100μL的无血清培养基加入10μL的CCK8溶液，37℃培养箱培养1小时，小心吸出培养基，用酶标仪在450nm波长检测其吸光值。
本实验所用坎格列净为40μM组，其中对照组为坎格列净的溶剂DMSO，联合用药的Necrostatin-1为100nM和500nM，Necrosulfonamide浓度为500nM，细胞为TSC2-/-小鼠胚胎成纤维细胞，DMEM+10％FBS正常培养条件下处理48小时。
由图6A所示，坎格列净与雷帕霉素联合用药显著性抑制TSC2-/-细胞活力，效果优于坎格列净和雷帕霉素分别使用的效果之和用药组；其次，坎格列净与坏死性凋亡制剂联用也显著抑制TSC2-/-细胞活力。如图6B所示，坎格列净与500nM Necrosulfonamide联合用药显著性抑制TSC2-/-细胞活力，抑制率为40％；而单用500nM Necrosulfonamide对TSC2-/-细胞抑制率为10％，联用效果优于坎格列净和500nM Necrosulfonamide分别用药组；如图6C所示，坎格列净单独给药，或Necrostatin-1单独给药对TSC2-/-抑制率为20％，而坎格列净与Necrostatin-1联合用药显著性抑制TSC2-/-细胞活力，效果远优于坎格列净和Necrostatin-1分别用药组，且浓度依赖的抑制TSC2-/-细胞活力，即500nMNecrostatin-1联合40uM坎格列净对细胞抑制率为80％，效果远远优于分别使用的抑制率20％。

Claims (3)

1.坎格列净在制备治疗结节性硬化症药物中的用途。
2.一种用于治疗结节性硬化症的药物，所述药物由雷帕霉素、Necrostatin-1或Necrosulfonamide中的一种与坎格列净组合。
3.如权利要求2所述的药物在制备治疗结节性硬化症药物中的用途。
CN202110152014.5A 2021-01-29 2021-02-03 坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的用途 Active CN112807304B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110152014.5A CN112807304B (zh) 2021-02-03 2021-02-03 坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的用途
PCT/CN2022/083399 WO2022161510A1 (zh) 2021-01-29 2022-03-28 坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110152014.5A CN112807304B (zh) 2021-02-03 2021-02-03 坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112807304A CN112807304A (zh) 2021-05-18
CN112807304B true CN112807304B (zh) 2022-04-08

Family

ID=75861167

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110152014.5A Active CN112807304B (zh) 2021-01-29 2021-02-03 坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112807304B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022161510A1 (zh) * 2021-01-29 2022-08-04 南京医科大学附属逸夫医院 坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的用途

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111617075A (zh) * 2020-07-23 2020-09-04 中国药科大学 卡格列净在制备治疗胰腺癌药物中的应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111617075A (zh) * 2020-07-23 2020-09-04 中国药科大学 卡格列净在制备治疗胰腺癌药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112807304A (zh) 2021-05-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20180116977A1 (en) Novel treatment of prostate carcinoma
US6569845B1 (en) Neovascularization inhibitor containing dienogest as the active ingredient
CN109069645A (zh) 用rxr激动剂与甲状腺激素的组合的肌肉疾病的治疗
WO2022012329A1 (zh) 一种在肿瘤治疗中具有增效作用的化合物的应用
JP2013231076A (ja) ｍＴＯＲ阻害剤とＲａｆキナーゼ阻害剤を含む医薬組合せ剤
CN107530309A (zh) 共晶组合物及其药物用途
CN112807304B (zh) 坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的用途
JP2001288115A (ja) 下部尿路症治療剤
TWI798320B (zh) 神經系統疾患治療劑
EP3154580B1 (en) Use of negative functional modulators of erythropoietin for therapy
Yan et al. Effects of vestibular damage on the sleep and expression level of orexin in the hypothalamus of rats and its correlation with autophagy and Akt tumor signal pathway
EP1728508A1 (en) Medicine for prevention or treatment of frequent urination or urinary incontinence
EP2968219B1 (en) Novel therapy for prostate carcinoma
CN110437311B (zh) 一种多肽及其应用
JP2003503429A (ja) 腺ガンの治療におけるサブスタンスｐ拮抗薬の使用方法
WO2020201444A1 (en) Repurposing small molecules for senescence-related diseases and disorders
CN116602963A (zh) 维替泊芬在制备抑制肺纤维化的药物中的应用
JP7174444B2 (ja) 前立腺肥大症および尿路疾患におけるマルチキナーゼ阻害剤および使用
WO2021180055A1 (zh) 一种brd4抑制剂的用途
WO2022161510A1 (zh) 坎格列净在制备治疗结节性硬化症介导的疾病的药物中的用途
CN114010789B (zh) 蟾蜍甾烯类化合物在制备治疗egfr和/或stat3驱动疾病的药物中的应用
CN112979753B (zh) 一种靶向c-Met的多肽及其应用
CN110585429B (zh) 酪氨酸激酶抑制剂联合单克隆抗体以及紫杉醇类药物治疗肿瘤疾病的用途
CN111905102A (zh) Ezh2抑制剂在治疗胶质瘤中的应用
WO2015192663A1 (zh) 重组灵芝免疫调节蛋白rLZ-8在治疗肺癌，喉癌和脑胶质瘤中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant