CN112771172A - 筛选皮肤产品的方法 - Google Patents

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Abstract

评估皮肤清洁组合物治疗皮肤状况的能力的方法可包括a)鉴定皮肤样本上的目标皮肤状况或目标皮肤状况的缺乏；b)经由皮肤健康微生物指数方法采取皮肤健康微生物指数的基线测量；c)经由洗涤方案方法用清洁组合物执行洗涤方案；以及d)在洗涤方案之后采取微生物皮肤健康测量的第二次测量；其中从基线微生物皮肤健康指数增加5或更多表示所述清洁产品对于治疗所鉴定的皮肤状况是有效的。

Description

筛选皮肤产品的方法
技术领域
本专利申请涉及评估皮肤产品治疗皮肤状况的能力的方法。
背景技术
皮肤是限定在生物体与环境之间的交互式边界的护盖的复杂的多层且动态的系统。它是身体最大的器官，并且对我们的健康和我们的自我形象至关重要。皮肤包括三个主要层：表皮、真皮和皮下脂肪层。
保持皮肤健康的愿望增加了皮肤的复杂性。一些皮肤状况可影响皮肤的微生物群，反之亦然。遗憾的是，皮肤微生物群是多种多样的，并且可能难以理解特定皮肤状况如何影响微生物群以及如何利用此类信息来筛选可有助于治疗皮肤状况的清洁剂。因此，需要用于筛选皮肤产品的改进方法。
发明内容
评估皮肤清洁组合物治疗皮肤状况的能力的方法可包括a)鉴定皮肤样本上的目标皮肤状况或目标皮肤状况的缺乏；b)经由皮肤健康微生物指数方法采取皮肤健康微生物指数的基线测量；c)经由洗涤方案方法用清洁组合物执行洗涤方案；以及d)在洗涤方案之后采取微生物皮肤健康测量的第二次测量；其中从基线微生物皮肤健康指数增加5或更多表示所述清洁产品对于治疗所鉴定的皮肤状况是有效的。
附图说明
图1是几种细菌及其相对丰度的图示；并且
图2是示出前25种最具判别性的细菌的曲线图。
具体实施方式
皮肤是限定在生物体与环境之间的交互式边界的护盖的复杂的多层且动态的系统。它是身体最大的器官，并且对我们的健康很重要。皮肤上有多种细菌，称为微生物群。可存在于皮肤上的一些细菌的示例包括：葡萄球菌属(Staphylococcus)、微球菌属(Micrococcus)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)和奈瑟氏球菌属(Neisseria)。
人体上的共生细菌对人体健康具有重要意义。这些细菌的破坏可能是潜在状况的症状。因此，细菌类型的组成和每种细菌各自的密度可以说是皮肤的当前状态。皮肤微生物群趋于相当稳定的。因此，当由于皮肤状况而发生转变时，这些转变可潜在地用于确定存在哪种状况以及施用给患病的人和/或皮肤的产品是否改善皮肤状况。因此，据信通过查看健康皮肤和受损皮肤的微生物群，并且确定两者之间的差异，可鉴定与皮肤状况相关的微生物群的子组。如果可将特定细菌组与特定皮肤状况相关联，则该细菌组可用于确定产品是否可用于改善具有潜在状况的皮肤。
因此，一旦鉴定出所关注的皮肤状况，就可收集健康的皮肤样本和患病的皮肤样本。这可例如通过依赖人们自我诊断皮肤状况或由专业人员或医师诊断他们的皮肤具有目标状况或是健康的来完成。例如，个体可注意到皮肤干燥和/或片状斑块，或甚至发红，其均可用于自我诊断皮肤状况。可根据进行测试的那些受试者的需要来优化每个受试者群体的参数以及他们的选择方式。一旦鉴定出每组所需数量的皮肤样本，就可分析皮肤样本与目标皮肤状况相关的任何细菌、细菌属或它们的组合。这可例如通过三部分过程进行：收集、测序和分析。
皮肤样本的收集可通过任何已知的方法来进行。例如，可通过在皮肤的所需区域上擦拭约30次，用棉拭子采集皮肤样本。皮肤的所需区域可根据目标皮肤状况而变化。例如，对于具有病变的皮肤状况，皮肤收集可从病变处、病变附近或两者进行。对于具有病变区域和非病变区域两者的皮肤，从非病变区域收集信息可提供关于潜在皮肤状况的广度的有帮助的信息。擦拭可采用任何所需的方式，如圆周运动或前后运动。棉拭子可首先用缓冲液治疗以帮助收集皮肤细胞。可如何收集皮肤细胞的一个示例见于下文所述的收集方法中。根据标准收集程序，皮肤细胞收集的附加方法可包括例如D-Squame、胶带剥离、皮肤活检或它们的组合。
一旦收集了皮肤样本，就可对它们进行测试。皮肤样本的测试可包括对皮肤样本上的DNA测序。这可例如通过16S核糖体RNA测序按照已知的程序进行。测序方法的示例可见于下文。测序可包括相关区，如V1-V4，例如V1-V3。这种类型的测序可用于表征细菌群落。
一旦测序完成，就可例如使用随机森林模型来分析数据。程序(如Parallel-META3)可用于利用模型分析数据并输出样本的细菌和/或菌属。可对输出进行挖掘以寻找健康样本与具有皮肤状况的样本之间的细菌类型和/或丰度的转变或变化，这可导致发现目标皮肤状况的目标微生物群。
例如，健康皮肤和患有特应性皮炎的皮肤的皮肤样本取自中国两个城市和美国一个城市的个体。研究了这些个体的微生物群。利用健康个体和特应性皮炎个体两者的微生物群使用六个不同系统发育水平(从菌属到门)的分类群的特征图，来构建随机森林模型。曲线下面积(AUC)在菌属水平下最大化，并且在包括前25种最具判别性的细菌属之后，模型的性能最小。这些细菌包括：梭杆菌属(Fusobacterium)、二氧化碳噬纤维菌属(Capnocytophaga)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、丛毛单胞菌属(Comamonas)、考克氏菌属(Kocuria)、卡氏菌属(Carica)、链球菌属(Streptococcus)、短杆菌属(Brachybacterium)、不动杆菌属(Acinetobacter)、莫拉氏菌属(Moraxella)、奈瑟氏球菌属(Neisseria)、普氏菌属(Prevotella)、伯杰菌属(Bergeyella)、根瘤菌属(Rhizobium)、卟啉单胞菌属(Porphyromonas)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、罗氏菌属(Rothia)、沃特氏菌属(Wautersiella)、芽孢杆菌属(Bacillus)、金黄杆菌属(Chryseobacterium)、异常球菌属(Deinococcus)、瓜氨酸菌属(Citrullus)、链形植物属(Streptophyta Group)、副球菌属(Paracoccus)和葡萄球菌属(Staphylococcus)(参见图1和图2)。该细菌簇构成皮肤健康微生物指数(MiSH)的目标，该目标是通过基于模型判别后的相似度算法的“随机森林建模的概率”并将该值乘以100获得的。皮肤微生物健康标度是指MiSH的0-100值，其中数字越高，就越有可能是健康的。MiSH 100的值是指给定皮肤样本是完全健康的概率。
为了测试其空间可扩展性，在(i)一城市中个体的匹配地点之间、(ii)一城市中的个体之间、(iii)两个中国城市中的个体之间、以及最后(iv)所有三个城市中的个体之间对MiSH的性能进行比较。诊断准确度从0.98、0.97、0.93至0.90的逐步降低表明，在每个附加的空间标度下引入微生物群异质性将降低模型性能。与此一致的是，对于健康样本，核心微生物组的大小(定义为在>50％的样本中发现的菌属的数量)遵循类似的下降趋势；这表明基于累积样本数量而不是基于地理位置的效应，因为核心微生物组大小的减小与样本数量而不是与城市数量相关。对于病变样本，核心微生物组大小在将标度扩大超过单个城市时在很大程度上是平稳的，并且在所有标度的健康样本的核心微生物组小，表明一组保守的特应性皮炎标记在很大程度上与所包括的城市数量无关。这一观察解释了为什么该诊断模型在大的地理距离上缩放。
一旦细菌簇已被鉴定为与特定皮肤状况相关，就可设置测试以评估特定产品是否影响该细菌簇并因此可潜在地影响皮肤的状态。例如，可对皮肤样本进行收集并测序(如上文中更详细地讨论)。可鉴定引物和/或探针并将其用于目标菌属。这些引物和探针可以是通用的或特异性的。可使用目标产品按指定的方案治疗患病的皮肤，然后测试相关细菌簇的变化。例如，每天将皮质类固醇施用于病变部位，持续四周。病变样本和非病变样本两者的MiSH在治疗前分别为20.2±17.9和25.1±10.4，在治疗后显著改善(分别为41.3±16.7，p＝9.07e-6和40.9±19.9，p＝2.07e-5；在病变部位和非病变部位处的响应在统计学上不可区分，p＝0.43)。此外，该治疗将整个身体的病变部位和非病变部位两者的皮肤微生物群移动成与病变样本和非病变样本相比更类似于健康样本的结构。这些结果支持使用MiSH来客观地评估产品治疗目标状况的功效。
此外，评估三种清洁组合物以确定MiSH是否可用作对施用于患有特应性皮炎的皮肤的产品的筛选器。在基线处收集皮肤样本，并且在用清洁组合物与皮质类固醇的组合治疗四周后再次收集皮肤样本。对皮肤样本进行分析并计算MiSH。一种包含吡啶硫酮锌的清洁组合物诱导了与健康皮肤最相似的微生物群变化模式。其在所测试的3种清洁组合物的MiSH得分中具有最大提高。吡啶硫酮锌清洁组合物的此类优异功效可能是由于其抗菌活性(其他两种清洁剂均不含抗微生物剂)，这杀灭更多特应性皮炎相关联的细菌诸如金黄色葡萄球菌(S.aureus)，从而将皮肤微生物群改变成更健康的状态。皮肤微生物组的变化似乎对于表征和区分不同成分在皮肤清洁剂中的效应足够敏感，并且此类基于微生物组的标志可以为客观比较治疗功效奠定基础。此外，据信MiSH指数也可用于筛选其他皮肤产品，如皮肤保湿剂、皮肤霜膏、卸妆品等。
收集方法
样本收集者应洗手并戴上橡胶手套以帮助防止污染。为了收集皮肤细胞进行测量，确定用于测试的所需区域。如果特定皮肤状况导致可见的症状，如发红或病变，则应从那些可见的症状区域采集样本。如果没有可见的症状，则应在对于目标皮肤状况可能出现此类症状的地方采集样本。标记将从其进行收集的区域。对于大多数皮肤状况，约8cm2的面积将足够。对于具有低生物质的区域，可能需要较大的区域，如≥10cm2。
用相关信息标记所有的收集管。制备单次使用的无菌植绒拭子(PurFlock Ultra)以用于皮肤取样。确保在收集过程中拭子不与不是目标皮肤区域及其相应的管的表面接触。拭子具有柄部和棉签头，但可使用任何可接受的拭子或取样器。为了有助于收集皮肤样本，可用缓冲液处理拭子的棉签头。例如，可将拭子的棉签头浸入含有0.15M NaCl和0.1％Tween 20的去离子水的无菌溶液中。可通过将拭子压在将用于所收集样本的管的侧面来移除过量的溶液。将拭子在目标区域上水平和垂直地连续摩擦总共约30秒。然后切下拭子的头部并将其置于适当标记的管中。然后将盖放置在管上以将管紧密地密封。然后将具有样本的管置于冰盒子或冷藏机中，直至其可置于-80℃的冷藏装置中或可直接置于冷藏装置中。
一旦收集到皮肤样本，就提取DNA。为了从样本中提取DNA，将样本解冻。将350μL磷酸盐缓冲盐水(PBS)加入到含有用于提取的样本的管中。将350μL AL缓冲溶液(来自QIAGEN)、40μL溶菌酶(10mg/mL)、6μL变溶菌素(25000U)和300mg玻璃珠加入管中。通过涡旋将管的内容物混合。然后，将管在37℃温育一小时。然后将管转移到组织研磨机(由QIAGEN供应)中并在26Hz下处理3分钟。将20μL蛋白酶K(来自Qiagen试剂盒)加入到管中，然后将管盖上并摇动直至均匀。然后，将管在56℃温育3小时。
然后将管中的上清液转移到新的干净管中，并弃去拭子。用200μL蒸馏水洗涤玻璃珠两次。将1/2体积的醇加入到管中，并且将内容物混合直至它们变得均匀。将管内容物上样到DNeasy离心色谱柱(购自QIAGEN)中，该色谱柱已置于干净的离心管中并使其被吸收。将柱以8000rpm/min离心一分钟。弃去经过柱和离心管的废液。
将色谱柱置于干净的离心管中。加入500μL AW1缓冲液(QIAGEN)，使其吸收到柱中，然后将柱以8000rpm/min离心一分钟。弃去废液和收集管。再次将色谱柱置于干净的离心管中。加入500μL AW2缓冲液，使其吸收到柱中，然后将柱以14000rpm/min离心3分钟。弃去废液和收集管。使色谱柱在室温下干燥。每个样本使用新的柱。
将干燥的柱置于干净的离心管中，并使其在37℃静置2分钟。将50μL AE缓冲溶液(QIAGEN)加入到干燥的柱上并在37℃温育3分钟。将样本以14000rpm/min离心3分钟。通过将50μL AE缓冲溶液加入到干燥的柱上，将其在37℃温育3分钟，并且将样本以14000rpm/min离心3分钟来重复上述操作。组合的洗脱样本包含准备用于测序的皮肤DNA。
测序方法
从皮肤样本提取的DNA的微生物群可通过使其通过已知的16S rRNA测序方法来确定。测序可在目标区上并且用所选择的引物进行。例如，对于MiSH细菌簇，目标区为V1-V3并且引物为27F/534R。此外，测序可通过使用试剂盒(Illumina Miseq 250/300)进行。通过将10μL Sybr green、0.5μL上游引物、0.5μL下游引物、5μL去离子H2O(5μl)和4μL提取的DNA混合来制备20μL反应混合物。然后将反应体系置于96孔板中。将96孔板置于实时荧光定量PCR装置中进行反应，包括在94℃预变性10min，在94℃变性30s，在合适的退火温度下退火30s，在72℃延伸45s，持续45次循环；最后，在72℃延伸10分钟。一旦这完成，就可计算样本中细菌的多个菌属的基因拷贝数。结合标准样本的扩增曲线，可获得样本中各种菌株的相对丰度。
分析方法
一旦测序完成，就可分析数据。可使用QIIME来拆分原始数据的条形码。可使用Trimmomatic进行质量控制。可使用FLASH进行序列两端的序列数据的合并。可使用FastxToolkit来实施第二次质量控制。最后，可再次使用QIIME来去除嵌合体以便获得干净的读数。可使用Parallel-Meta 3来实施下游OUT拾取，然后进行计数和分析。该方法中的主要参数包括：Trimmomatic：SLIDINGWINDOW:30:25MINLEN:25；FLASH：-M 200-m 5-x 0.1；FastxToolkit：-Q 33-q 25-p 80；以及Parallel-Meta 3：-L 123456。
皮肤健康微生物指数方法
如上所述，通过使用随机森林模型和来自健康皮肤和患有特应性皮炎(病变和非病变两者)的皮肤的数据开发MiSH模型。由此，25种细菌被鉴定为具有帮助确定皮肤样本是否患有皮肤状况如特应性皮炎，以及组合物是否可用于有效地治疗目标状况的能力。这些细菌包括：梭杆菌属、二氧化碳噬纤维菌属、嗜血杆菌属、丛毛单胞菌属、考克氏菌属、卡氏菌属、链球菌属、短杆菌属、不动杆菌属、莫拉氏菌属、奈瑟氏球菌属、普氏菌属、伯杰菌属、根瘤菌属、卟啉单胞菌属、类芽孢杆菌属、罗氏菌属、沃特氏菌属、芽孢杆菌属、金黄杆菌属、异常球菌属、瓜氨酸菌属、链形植物属(Streptophyta Group)、副球菌属和葡萄球菌属。该模型可在www.single-cell.cn/skin网上获得。当通过遵循可在网站上获得的模型使用说明输入一组16S rRNA测序数据时，将显示MiSH的图形报告。
洗涤方案方法
洗涤方案方法包括两个阶段：预洗阶段和治疗阶段。该预洗阶段是通过对于所有参与者使用相同的洗涤产品一段时间来使皮肤状况归一化。预洗产品可选自条皂、液体沐浴剂、擦拭物、粉末清洁剂或仅水。优选地，预洗产品为不会对皮肤造成任何刺激或损伤的温和清洁剂。示例为玉兰油敏感肌肤无味美容棒(Olay Sensitive Skin UnscentedBeauty Bar)。任选地，在预洗阶段限制参与者使用任何免洗型产品(保湿洗剂、防晒剂或美容化妆品)，以使来自免洗型产品的潜在干扰最小化。预洗时间可持续一天至约30天，其由测试仪确定。优选地，预洗阶段可持续3天至21天。甚至更优选地，预洗阶段可持续约5天至约14天。最优选地，预洗阶段可持续约7天至约10天。在预洗阶段结束时，获取基线微生物皮肤健康指数。可基于视觉评估和生物物理方法对皮肤进行评估。
在处理治疗阶段期间，参与者将使用预先指定的清洁产品。任选地，治疗阶段可包含清洁产品和免洗型治疗产品。治疗阶段可持续约1天至约90天。优选地，治疗阶段可持续7天至约60天。优选地，治疗可持续约14天至约40天。最优选地，治疗阶段可持续约28天。在治疗阶段结束时，获取皮肤健康微生物指数。任选地，基于视觉评估和生物物理方法对皮肤进行评估。将治疗阶段结束时的皮肤健康微生物指数与基线处的皮肤健康微生物指数进行比较。5分或更高分的提高表明来自治疗产品的皮肤健康有益效果。
组合
A.一种评估皮肤清洁组合物治疗皮肤状况的能力的方法，所述方法包括：a)鉴定皮肤样本上的目标皮肤状况或目标皮肤状况的缺乏；b)经由洗涤方案方法用温和的清洁产品执行预洗方案；c)经由皮肤健康微生物指数方法采取皮肤健康微生物指数的基线测量；d)经由洗涤方案方法用所述清洁组合物执行治疗洗涤方案；以及e)在洗涤方案之后采取微生物皮肤健康测量的第二次测量；其中从基线微生物皮肤健康指数增加5或更多表示所述清洁产品对于治疗所鉴定的皮肤状况是有效的。
B.根据段落A所述的方法，其中所述皮肤状况包括干燥皮肤、瘙痒皮肤、特应性皮炎、敏感性皮肤或它们的组合。
C.根据段落A至B所述的方法，其中所述皮肤状况通过擦拭皮肤的目标区域以收集皮肤细胞并测试所述皮肤细胞的皮肤状况来鉴定。
D.一种评估皮肤清洁组合物治疗皮肤状况的能力的方法，所述方法包括：a)预洗将从其收集样本的皮肤部位；b)从经预洗的部位收集预洗皮肤样本作为基线；c)对所述预洗皮肤样本的细菌群体进行测序以产生预洗细菌群体数据；d)查看所述预洗细菌群体数据中以下细菌的丰度：梭杆菌属、二氧化碳噬纤维菌属、嗜血杆菌属、丛毛单胞菌属、考克氏菌属、卡氏菌属、链球菌属、短杆菌属、不动杆菌属、莫拉氏菌属、奈瑟氏球菌属、普氏菌属、伯杰菌属、根瘤菌属、卟啉单胞菌属、类芽孢杆菌属、罗氏菌属、沃特氏菌属、芽孢杆菌属、金黄杆菌属、异常球菌属、瓜氨酸菌属、链形植物属(Streptophyta Group)、副球菌属和葡萄球菌属；e)为所述预洗细菌群体的相对丰度指定1-100的数；f)用所述皮肤清洁组合物洗涤所述皮肤部位；g)收集洗涤后皮肤样本；h)对所述洗涤后皮肤样本的细菌群体进行测序以产生洗涤后细菌群体数据；i)查看以下细菌丰度的洗涤后细菌群体数据：梭杆菌属、二氧化碳噬纤维菌属、嗜血杆菌属、丛毛单胞菌属、考克氏菌属、卡氏菌属、链球菌属、短杆菌属、不动杆菌属、莫拉氏菌属、奈瑟氏球菌属、普氏菌属、伯杰菌属、根瘤菌属、卟啉单胞菌属、类芽孢杆菌属、罗氏菌属、沃特氏菌属、芽孢杆菌属、金黄杆菌属、异常球菌属、瓜氨酸菌属、链形植物属(Streptophyta Group)、副球菌属和葡萄球菌属；j)为所述洗涤后细菌群体的相对丰度指定1-100的数；k)将所述预洗细菌群体数与所述洗涤后细菌群体数进行比较，其中所述洗涤后细菌群体数比所述预洗细菌群体数增加5或更多表示所述清洁组合物对于治疗所述皮肤状况是有效的。
E.根据段落4所述的方法，其中所述预洗步骤包括在收集所述预洗皮肤样本之前，用指定的清洁剂洗涤所述皮肤部位达至少3天。
F.根据段落D至E中任一项所述的方法，其中对所述预洗皮肤样本进行测序是经由16S rRNA测序方法进行的。
G.根据段落F所述的方法，其中所述16S rRNA测序方法包括V1-V3区。
H.根据段落D至G中任一项所述的方法，其中所述预洗细菌群体的相对丰度的指定是经由www.single-cell.cn/skin进行的。
I.根据段落D至H中任一项所述的方法，其中所述预洗细菌群体的相对丰度的指定是经由Parall-Meta 3进行的。
J.根据段落D至I中任一项所述的方法，其中所述洗涤后步骤包括在收集所述洗涤后皮肤样本之前，用所述皮肤清洁组合物洗涤所述皮肤部位达至少3天。
K.根据段落D至J中任一项所述的方法，其中对所述洗涤后皮肤样本进行测序是经由16S rRNA测序方法进行的。
L.根据段落D至K中任一项所述的方法，其中所述16S rRNA测序方法包括V1-V3区。
M.根据段落D至L中任一项所述的方法，其中所述洗涤后细菌群体的相对丰度的指定是经由www.single-cell.cn/skin进行的。
N.根据段落D至L中任一项所述的方法，其中所述洗涤后细菌群体的相对丰度的指定是经由Parall-Meta 3进行的。
O.一种评估免洗型皮肤组合物治疗皮肤状况的能力的方法，所述方法包括：i)鉴定皮肤样本上的目标皮肤状况或目标皮肤状况的缺乏；ii)经由洗涤方案方法用温和的清洁产品执行预洗方案；iii)经由皮肤健康微生物指数方法采取皮肤健康微生物指数的基线测量；iv)用所述免洗型皮肤组合物执行治疗方案，其中至少每天一次向所述皮肤施用所述免洗型皮肤组合物；以及v)在用所述免洗型皮肤组合物治疗之后采取微生物皮肤健康测量的第二次测量；其中从基线微生物皮肤健康指数增加5或更多表示所述免洗型皮肤组合物对于治疗所鉴定的皮肤状况是有效的。
P.根据段落O所述的方法，其中所述皮肤状况包括干燥皮肤、瘙痒皮肤、特应性皮炎、敏感性皮肤或它们的组合。
Q.根据段落O至P中任一项所述的方法，其中所述皮肤状况通过擦拭皮肤的目标区域以收集皮肤细胞并测试所述皮肤细胞的皮肤状况来鉴定。
R.一种评估免洗型皮肤组合物治疗皮肤状况的能力的方法，所述方法包括：a)预洗将从其收集样本的皮肤部位；b)从经预洗的部位收集预洗皮肤样本作为基线；c)对所述预洗皮肤样本的细菌群体进行测序以产生预洗细菌群体数据；d)查看所述预洗细菌群体数据中以下细菌的丰度：梭杆菌属、二氧化碳噬纤维菌属、嗜血杆菌属、丛毛单胞菌属、考克氏菌属、卡氏菌属、链球菌属、短杆菌属、不动杆菌属、莫拉氏菌属、奈瑟氏球菌属、普氏菌属、伯杰菌属、根瘤菌属、卟啉单胞菌属、类芽孢杆菌属、罗氏菌属、沃特氏菌属、芽孢杆菌属、金黄杆菌属、异常球菌属、瓜氨酸菌属、链形植物属(Streptophyta Group)、副球菌属和葡萄球菌属；e)为所述预洗细菌群体的相对丰度指定1-100的数；f)将所述免洗型皮肤组合物施用到所述皮肤部位；g)收集施用后皮肤样本；h)对所述施用后皮肤样本的细菌群体进行测序以产生洗涤后细菌群体数据；i)查看所述洗涤后细菌群体数中以下细菌的丰度的：梭杆菌属、二氧化碳噬纤维菌属、嗜血杆菌属、丛毛单胞菌属、考克氏菌属、卡氏菌属、链球菌属、短杆菌属、不动杆菌属、莫拉氏菌属、奈瑟氏球菌属、普氏菌属、伯杰菌属、根瘤菌属、卟啉单胞菌属、类芽孢杆菌属、罗氏菌属、沃特氏菌属、芽孢杆菌属、金黄杆菌属、异常球菌属、瓜氨酸菌属、链形植物属(Streptophyta Group)、副球菌属和葡萄球菌属；j)为所述施用后细菌群体的相对丰度指定1-100的数；k)将所述预洗细菌群体数与所述施用后细菌群体数进行比较，其中所述施用后细菌群体数比所述预洗细菌群体数增加5或更多表示所述免洗型皮肤组合物对于治疗所述皮肤状况是有效的。
S.根据段落R所述的方法，其中所述预洗步骤包括在收集所述预洗皮肤样本之前，用指定的清洁剂洗涤所述皮肤部位达至少3天。
T.根据段落R至S中任一项所述的方法，其中对所述预洗皮肤样本进行测序是经由16S rRNA测序方法进行的。
U.根据段落T所述的方法，其中所述16S rRNA测序方法包括V1-V3区。
V.根据段落R至U中任一项所述的方法，其中所述预洗细菌群体的相对丰度的指定是经由www.single-cell.cn/skin进行的。
W.根据段落R至U中任一项所述的方法，其中所述预洗细菌群体的相对丰度的指定是经由Parall-Meta 3进行的。
X.根据段落R至W中任一项所述的方法，其中所述施用后步骤包括在收集所述施用后皮肤样本之前，将所述免洗型皮肤组合物至少每天一次施用到所述皮肤部位达至少3天。
Y.根据段落R至X中任一项所述的方法，其中对所述施用后皮肤样本进行测序是经由16S rRNA测序方法进行的。
Z.根据段落Y所述的方法，其中所述16S rRNA测序方法包括V1-V3区。
AA.根据段落R至Z中任一项所述的方法，其中所述洗涤后细菌群体的相对丰度的指定是经由www.single-cell.cn/skin进行的。
BB.根据段落R至Z中任一项所述的方法，其中所述洗涤后细菌群体的相对丰度的指定是经由Parall-Meta 3进行的。
本文所公开的量纲和值不应理解为严格限于所引用的精确数值。相反，除非另外指明，否则每个此类量纲旨在表示所述值以及围绕该值功能上等同的范围。例如，公开为“40mm”的量纲旨在表示“约40mm”。
除非明确排除或以其他方式限制，本文中引用的每一篇文献，包括任何交叉引用或相关专利或专利申请以及本申请对其要求优先权或其有益效果的任何专利申请或专利，均据此全文以引用方式并入本文。对任何文献的引用不是对其作为与本发明的任何所公开或本文受权利要求书保护的现有技术的认可，或不是对其自身或与任何一个或多个参考文献的组合提出、建议或公开任何此类发明的认可。此外，当本发明中术语的任何含义或定义与以引用方式并入的文献中相同术语的任何含义或定义矛盾时，应当服从在本发明中赋予该术语的含义或定义。
虽然已举例说明和描述了本发明的具体实施方案，但是对于本领域技术人员来说显而易见的是，在不脱离本发明的实质和范围的情况下可作出各种其他变化和修改。因此，本文旨在于所附权利要求中涵盖属于本发明范围内的所有此类变化和修改。

Claims (17)

1.一种评估皮肤清洁组合物治疗皮肤状况的能力的方法，所述方法包括：
a.鉴定皮肤样本上的目标皮肤状况或目标皮肤状况的缺乏；
b.经由洗涤方案方法用温和的清洁产品执行预洗方案；
c.经由皮肤健康微生物指数方法采取皮肤健康微生物指数的基线测量；
d.经由洗涤方案方法用所述清洁组合物执行治疗洗涤方案；以及
e.在所述洗涤方案之后采取微生物皮肤健康测量的第二次测量；
其中从基线微生物皮肤健康指数增加5或更多表示所述清洁产品对于治疗所鉴定的皮肤状况是有效的。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述皮肤状况包括干燥皮肤、瘙痒皮肤、特应性皮炎、敏感性皮肤或它们的组合。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述皮肤状况通过擦拭皮肤的目标区域以收集皮肤细胞并测试所述皮肤细胞的皮肤状况来鉴定。
4.一种评估皮肤清洁组合物治疗皮肤状况的能力的方法，所述方法包括：
a.预洗将从其收集样本的皮肤部位；
b.从经预洗的部位收集预洗皮肤样本作为基线；
c.对所述预洗皮肤样本的细菌群体进行测序以产生预洗细菌群体数据；
d.查看所述预洗细菌群体数据中以下细菌的丰度：梭杆菌属(Fusobacterium)、二氧化碳噬纤维菌属(Capnocytophaga)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、丛毛单胞菌属(Comamonas)、考克氏菌属(Kocuria)、卡氏菌属(Carica)、链球菌属(Streptococcus)、短杆菌属(Brachybacterium)、不动杆菌属(Acinetobacter)、莫拉氏菌属(Moraxella)、奈瑟氏球菌属(Neisseria)、普氏菌属(Prevotella)、伯杰菌属(Bergeyella)、根瘤菌属(Rhizobium)、卟啉单胞菌属(Porphyromonas)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)、罗氏菌属(Rothia)、沃特氏菌属(Wautersiella)、芽孢杆菌属(Bacillus)、金黄杆菌属(Chryseobacterium)、异常球菌属(Deinococcus)、瓜氨酸菌属(Citlanlus)、链形植物属(Streptophyta Group)、副球菌属(Paraceles)和葡萄球菌属(Staphylococcus)；
e.为所述预洗细菌群体的相对丰度指定1-100的数；
f.用所述皮肤清洁组合物洗涤所述皮肤部位；
g.收集洗涤后皮肤样本；
h.对所述洗涤后皮肤样本的细菌群体进行测序以产生洗涤后细菌群体数据；
i.查看所述洗涤后细菌群体数据中以下的细菌丰度：梭杆菌属、二氧化碳噬纤维菌属、嗜血杆菌属、丛毛单胞菌属、考克氏菌属、卡氏菌属、链球菌属、短杆菌属、不动杆菌属、莫拉氏菌属、奈瑟氏球菌属、普氏菌属、伯杰菌属、根瘤菌属、卟啉单胞菌属、类芽孢杆菌属、罗氏菌属、沃特氏菌属、芽孢杆菌属、金黄杆菌属、异常球菌属、瓜氨酸菌属、链形植物属、副球菌属和葡萄球菌属；
j.为所述洗涤后细菌群体的相对丰度指定1-100的数；
k.将所述洗涤前细菌群体数与所述洗涤后细菌群体数进行比较，其中所述洗涤后细菌群体数比所述洗涤前细菌群体数增加5或更多表示所述清洁组合物对于治疗所述皮肤状况是有效的。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述预洗步骤包括在收集所述预洗皮肤样本之前，用指定的清洁剂洗涤所述皮肤部位达至少3天。
6.根据权利要求5所述的方法，其中对所述预洗皮肤样本进行测序是经由16S rRNA测序方法进行的。
7.根据权利要求6所述的方法，其中所述16S rRNA测序方法包括V1-V3区。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述预洗细菌群体的相对丰度的指定是经由www.single-cell.cn/skin进行的。
9.根据权利要求7所述的方法，其中所述预洗细菌群体的相对丰度的指定是经由Parallel-Meta 3进行的。
10.根据权利要求4所述的方法，其中所述洗涤后步骤包括在收集所述洗涤后皮肤样本之前，用所述皮肤清洁组合物洗涤所述皮肤部位达至少3天。
11.根据权利要求10所述的方法，其中对所述洗涤后皮肤样本进行测序是经由16SrRNA测序方法进行的。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述16S rRNA测序方法包括V1-V3区。
13.根据权利要求10所述的方法，其中所述洗涤后细菌群体的相对丰度的指定是经由www.single-cell.cn/skin进行的。
14.根据权利要求10所述的方法，其中所述洗涤后细菌群体的相对丰度的指定是经由Parallel-Meta 3进行的。
15.一种评估免洗型皮肤组合物治疗皮肤状况的能力的方法，所述方法包括：
a.鉴定皮肤样本上的目标皮肤状况或目标皮肤状况的缺乏；
b.经由洗涤方案方法用温和的清洁产品执行预洗方案；
c.经由皮肤健康微生物指数方法采取皮肤健康微生物指数的基线测量；
d.用所述免洗型皮肤组合物执行治疗方案，其中至少每天一次向所述皮肤施用所述免洗型皮肤组合物；以及
e.在用所述免洗型皮肤组合物治疗之后采取微生物皮肤健康测量的第二次测量；
其中从基线微生物皮肤健康指数增加5或更多表示所述免洗型皮肤组合物对于治疗所鉴定的皮肤状况是有效的。
16.根据权利要求1所述的方法，其中所述皮肤状况包括干燥皮肤、瘙痒皮肤、特应性皮炎、敏感性皮肤或它们的组合。
17.根据权利要求1所述的方法，其中所述皮肤状况通过擦拭皮肤的目标区域以收集皮肤细胞并测试所述皮肤细胞的皮肤状况来鉴定。
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