CN112708578A - 一种卷曲乳杆菌及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及微生物技术领域，公开了一种卷曲乳杆菌及其应用，该卷曲乳杆菌具有优势的细胞粘附力，使其能够粘附于阴道上皮细胞，形成微生态屏障，防止致病菌定植或竞争上皮细胞受体；同时，其产乳酸的能力强，能够降低pH，抑制致病菌的繁殖；并且，其产生的抑菌物质，如过氧化氢、乳酸和细菌素等，还能够抑制阴道加德纳菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌等多种致病菌的生长。

Description

一种卷曲乳杆菌及其应用

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，具体是一种卷曲乳杆菌及其应用。

背景技术

目前，女性阴道感染已成为全球危害严重的重要传染病之一，每年全球有数百万女性患有此疾病。女性阴道是一个复杂的微生态体系，由阴道的解剖结构、微生态菌群、局部免疫及机体的内分泌调节功能共同组成，疾病受病因、环境和宿主3个因素的支配，但其核心是正常微生物群与其宿主的相互关系。从临床角度看，女性生殖道微生态与生殖道感染关系密切。各种阴道炎的发病大多与阴道微生态失衡有关，细菌性阴道病(bacterialvagingsis，BV)是由于阴道加德纳菌和其他厌氧菌为主过度繁殖取代乳杆菌，造成正常阴道菌群失调的常见妇科疾病，感染率在15％～52％；老年性阴道炎是由于卵巢功能退化、雌激素水平降低而出现的阴道黏膜组织改变导致局部抵抗力降低，以需氧致病菌为主的其他致病菌过度繁殖引起的炎症，在中国的发病率是56.8％。据资料报道，BV是导致组织性绒毛膜炎、羊水感染、剖腹产后子宫内膜炎及其他妊娠不良和妊娠并发症的危险因素。因此，恢复阴道微生态平衡是一个不可忽视的问题。

抗生素是目前针对BV的首选治疗方法。BV治疗指南中首先推荐口服和/或阴道内甲硝唑用药治疗。虽然这些药物有效，但治疗1～3个月内约30％患者会有复发。同时，由于副作用，例如胃肠不适、金属味、酒精不耐受和罕见的神经系统及其他器官系统不良反应，患者口服甲硝唑治疗常常耐受度较差。甲硝唑可能的副作用在妊娠女性中特别引起关注，在需要重复和延长甲硝唑疗程的复发性疾病患者中更加明显。此外，应用抗生素治疗，虽然可暂时缓解BV的症状，但也使本已减少的乳杆菌进一步减少，加重阴道微生态失调，从而使BV反复复发。

治疗老年性阴道炎原则是补充雌激素，虽然雌激素可治疗绝经期妇女的外阴萎缩等症状，但是长期使用雌激素，可刺激乳腺和子宫内膜的异常增生，增加患乳腺癌和子宫癌的风险，治疗老年性阴道炎同时使用抗生素以抑制细菌生长，如诺氟沙星制剂，诺氟沙星等抗生素不仅可以抑制致病菌的生长，也能抑制阴道微生态中相应抗生素敏感微生物的生长，在阴道微生态这个天然屏障已经失衡的情况下，使用抗生素治疗老年性阴道炎极易陷入反复感染的困境。因此，如何控制复发、彻底根治细菌性阴道病和老年性阴道炎是亟需解决的棘手问题。

在健康女性的阴道中包含300多种不同的微生物。在这些微生物中，乳杆菌相对丰度通常大于70％。在中国，健康女性的阴道中最常见的优势菌有卷曲乳杆菌、格氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、约氏乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、惰性乳杆菌等。这些乳杆菌通过多种机制维持阴道的微生态平衡：一是竞争性粘附作用，占据生殖道粘膜表面，阻止有害菌的粘附；二是抑制致病菌的生长，乳杆菌可以产生乳酸等酸性物质，降低pH，抑制假丝酵母、阴道加德纳菌等致病菌的繁殖，产生具有抑菌能力的H₂O₂和乳酸等抑菌活性物质，并与致病菌竞争营养物质；三是免疫防御作用，乳杆菌既可以引起宿主有益的免疫反应，还可以下调不良免疫反应、炎症反应和过敏反应，既可以调节非特异性免疫功能，增强粘膜的屏障作用、产生细胞因子等，还可以调节特异性免疫功能，刺激免疫细胞的增殖、分化及产生细胞因子的能力。由此可知，采用益生菌微生态制剂治疗阴道炎是以目前最为优选的一种方式。而卷曲乳杆菌作为占据主导地位的一种乳杆菌，在阴道微生态平衡方面应用前景广阔。

中国专利文献CN201710935239.1，申请日20171010，名称为：卷曲乳杆菌及其应用，公开了一种卷曲乳杆菌SQ1505，保藏编号为CGMCC NO.14488，其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、枯草芽孢杆菌、粪肠球菌、绿脓杆菌和蜡样芽孢杆菌等多种阴道疾病致病菌具有抑制作用。

中国专利文献CN201310002837.5，申请日20130105，名称为：卷曲乳杆菌菌株及其用途，公开了一种卷曲乳杆菌，保藏编号为CGMCC No.6360，其可针对治疗白色念珠菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌引起的阴道炎症。

中国专利文献CN201910732778.4，申请日为20190809，名称为：一种卷曲乳杆菌及其应用，公开了一种卷曲乳杆菌Lcris-2，保藏编号为CCTCC No.M2019427，其对阴道加德纳菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌具有抑制作用。

上述专利文献提到的三种卷曲乳杆菌虽然都具有一定的阴道上皮细胞的粘附能力，能够在阴道中定植，但因其粘附能力相对较弱，因其在应用中需要加大用量才能达到治疗效果。

因此，我们亟需一种兼具良好的细胞粘附力以及产生抑菌物质的能力，从而能够抑制多种致病菌生长的卷曲乳杆菌。

发明内容

本发明的目的之一在于克服现有技术的不足，提供一种卷曲乳杆菌，以至少达到兼具良好的细胞粘附力以及产生抑菌物质的能力，从而能够抑制多种致病菌生长的效果。

上述目的是通过以下技术方案来实现的：一种卷曲乳杆菌，所述卷曲乳杆菌命名为卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)Lcris-18，保藏编号为CCTCC No.M 2020888。

在上述技术方案中，所述卷曲乳杆菌是来源于健康女性生殖道的优势菌株，其益生作用机制为：

1)所述卷曲乳杆菌具有优势的细胞粘附力，使其能够粘附于阴道上皮细胞，形成微生态屏障，防止病原体定植或竞争上皮细胞受体；实验证明，该卷曲乳杆菌粘附Hela细胞的能力强；

2)实验证明，所述卷曲乳杆菌产乳酸的能力强，能够降低pH，抑制致病菌的繁殖；同时，其产生的抑菌物质，如过氧化氢、乳酸和细菌素等，能够抑制致病菌生长；

3)基于上述两点，所述卷曲乳杆菌达到了抑制多种致病菌生长的效果。

本发明的目的之二在于提供上述卷曲乳杆菌的发酵液。

本发明的目的之三在于提供以上述卷曲乳杆菌作为活性成分的菌剂。

在某些实施方案中，所述菌剂包括菌悬浮液和冻干菌粉中的至少一种。

本发明的目的之四在于提供上述卷曲乳杆菌或发酵液或菌剂在制备用于预防和/或治疗阴道炎的产品中的应用。

在某些实施方案中，所述产品包括药物和外用保健品中的至少一种。

本发明的目的之五在于提供上述卷曲乳杆菌或发酵液或菌剂在制备用于调节阴道菌群平衡的产品中的应用。

在某些实施方案中，所述产品包括药物和外用保健品中的至少一种。

本发明的目的之六在于提供上述卷曲乳杆菌或发酵液或菌剂在制备对阴道上皮细胞具有粘附功能的产品中的应用。

在某些实施方案中，所述产品包括药物和外用保健品中的至少一种。

本发明的目的之七在于提供上述卷曲乳杆菌或发酵液或菌剂在制备用于预防和/或治疗阴道致病菌的产品中的应用。

在某些实施方案中，所述致病菌包括阴道加德纳菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌中的至少一种。

在某些实施方案中，所述产品包括药物和外用保健品中的至少一种。

本发明的目的之八在于提供上述卷曲乳杆菌或发酵液或菌剂在制备卫生用品中的应用。

在某些实施方案中，所述卫生用品包括卫生巾、卫生棉条和用于外生殖器的卫生护理液中的至少一种。

本发明的目的之九在于提供上述卷曲乳杆菌或发酵液或菌剂在制备用于剖腹产婴儿的外用护理品中的应用。

在上述技术方案中，由于所述剖腹产婴儿在生产过程中未经过女性阴道，从而没有获得外源的益生菌，因此将所述卷曲乳杆菌或发酵液或菌剂制备成外用护理品给所述剖腹产婴儿使用，能够为其提供外源的益生菌，从而达到抑制多种致病菌生长的效果。

生物保藏信息

本发明的卷曲乳杆菌Lcris-18，已于2020年12月10日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国湖北省武汉市武汉大学，邮政编码：430072，电话：027-68754052，保藏编号为CCTCC No.M 2020888，分类命名是卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)。

本发明的有益效果是：

1.本发明的一种卷曲乳杆菌，具有优势的细胞粘附力，使其能够粘附于阴道上皮细胞，形成微生态屏障，防止病原体定植或竞争上皮细胞受体。

2.本发明的一种卷曲乳杆菌，产乳酸的能力强，能够降低pH，抑制致病菌的繁殖；同时，其产生的抑菌物质，如过氧化氢、乳酸和细菌素等，能够抑制致病菌。

3.本发明的一种卷曲乳杆菌，对阴道加德纳菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌均表现出优秀的抑菌能力。

具体实施方式

下面进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1细菌培养基的制备

1.MRS肉汤的制备：

称量MRS成品培养基粉末52.0g，溶解至1L蒸馏水中；加热煮沸，冷却至室温加入0.55g半胱氨酸盐酸盐，搅拌溶解后调节pH值至6.5；装上定量分液器并通N₂，加热至沸腾，在微沸状态下煮20min，冷却后分装至10mL厌氧管中，在118℃下高温湿热灭菌20min，荫凉并避光存放，备用。

2.MRS固体培养基的制备：

称量MRS成品培养基粉末52.0g，琼脂粉15.0g，溶解至1L蒸馏水中，加热煮沸，沸腾后加入0.55g半胱氨酸盐酸盐，调节pH值至6.5，在118℃下高温湿热灭菌20min，荫凉并避光存放，备用。

3.过氧化氢半定量培养基的制备：

称量MRS成品培养基粉末52.0g，琼脂粉15.0g，溶解至1L蒸馏水中，调节pH值至6.5，在118℃下高温湿热灭菌20min，灭菌结束后放入50℃水浴锅保温30min，加入TMB(使TMB终浓度为0.25mg/mL)和HRP(使HRP终浓度为0.01mg/mL)混匀；冷却凝固后，标记培养基名称及配制日期，放于4℃冰箱，备用。

4.无菌无氧的PBS缓冲液的制备：

称量磷酸二氢钾0.27g，磷酸氢二钠1.42g，氯化钠8g，氯化钾0.2g，溶解至1L的蒸馏水中，加热煮沸，冷至室温加入0.55g半胱氨酸盐酸盐，搅拌溶解后调节pH值至6.5，装上定量分液器并通N₂，加热至沸腾，在微沸状态下煮30min，冷却后分装至10mL厌氧管中，在121℃下高温湿热灭菌30min，荫凉并避光存放，备用。

5.无氧BHI液体培养基的制备：

称量BHI成品培养基粉末37.0g，溶解至1L蒸馏水中，加热煮沸，凉至室温加入0.55g半胱氨酸盐酸盐，搅拌溶解后调节pH值至6.5，装上定量分液器并通N₂，加热至沸腾，在微沸状态下煮20min，冷却和分装过程中通入N₂和CO₂(1:1比例)，分装至10mL厌氧管中，在118℃下高温湿热灭菌20min，荫凉并避光存放，备用。

6.无氧BHI半固体培养基的制备：

称量BHI成品培养基粉末37.0g，溶解至1L蒸馏水中；加热煮沸，凉至室温加入6g琼脂粉，0.55g半胱氨酸盐酸盐，搅拌溶解后调节pH值至6.5，装上定量分液器并通N₂，加热至沸腾，在微沸状态下煮20min，稍稍冷却，冷却和分装过程中通入N₂和CO₂(1:1比例)，及时分装至10mL厌氧管中，在118℃下高温湿热灭菌20min，荫凉并避光存放，备用。

7.营养肉汤培养基的制备：

称量蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化钠5g溶解至1L蒸馏水中，调节pH至7.2，加热煮沸，凉至室温后分装，每支10mL；在121℃下高温湿热灭菌15min，荫凉并避光存放，备用。

8.营养琼脂半固体培养基配制：

称量蛋白胨10g，牛肉粉3g，氯化钠5g，琼脂粉6g溶解至1L蒸馏水中，调节pH至7.2，稍稍冷却，及时分装至10mL厌氧管中；在121℃下高温湿热灭菌15min，荫凉并避光存放，备用。

实施例2卷曲乳杆菌的分离和筛选

1.卷曲乳杆菌的分离：

用阴道棉拭子采集年龄为20～40岁，并且通过健康体检的中国女性的阴道分泌物样品；取2mL无菌无氧的PBS缓冲液于装有上述棉拭子的厌氧管中，充分震荡混匀，并以其为原液连续10倍梯度稀释；取100μL稀释10000倍的液体涂布于MRS固体培养基，置于厌氧培养箱中，在37℃下培养，培养48h后，挑取疑似乳杆菌单菌落在MRS肉汤中培养24h，并将培养后得到菌液的一部分转接继续培养，菌液的另一部分进行细菌DNA提取；通过细菌16S rRNA扩增及测序，并将测序结果BLAST对比，根据对比结果分析菌种并分别保藏，得到共计1336株乳杆菌。

2.卷曲乳杆菌的筛选：

通过对上述保藏的1336株乳杆菌进行低pH培养环境活力试验、16S rRNA基因型筛选、抑制阴道加德纳菌试验、产乳酸试验、产过氧化氢试验以及粘附Hela细胞试验的筛选后，得到性能最好的一株卷曲乳杆菌，命名为Lcris-18。筛选方法如下：

1)低pH培养环境活力试验，包括以下步骤：

S1.活化：将保藏的乳杆菌置于pH值为6.5的MRS肉汤中活化，在37℃下过夜培养；

S2.转接：将活化菌液转接至pH值为4～5的MRS肉汤培养中，每2～3h测量一次OD₆₀₀值；

S3.比较OD₆₀₀值：筛选能够快速增殖或OD₆₀₀值较高的来自不同样品的菌株。

2)16S rRNA基因型的筛选：

由于分离自同一样品的相同种属的乳杆菌，若16S rRNA序列不同，表明其基因型不同，则其生理特性也可能有差异；因此，对步骤1)得到的菌株进行16S rRNA基因型筛选。

3)抑制阴道加德纳菌试验，包括以下步骤：

步骤2)得到的乳杆菌经活化后，取0.1mL菌液与MRS固体培养基混匀，倾注入6cm平皿内，完全凝固后，在37℃下培养48h，取出平皿，用内径6mm的打孔器在琼脂培养基上打孔，获得菌饼；

阴道加德纳菌接种至无氧BHI液体培养基中，经活化转接后，用无氧无菌的PBS缓冲液以10倍梯度，将阴道加德纳菌菌液稀释至100倍，分别取10^-1和10^-2稀释液0.5mL与5.25mL含5％马血清的无氧BHI半固体培养基混匀，倾注入9cm平皿内，待其完全凝固；

将乳酸菌菌饼轻放在无氧BHI半固体培养基表面，每皿对称放4个菌饼，每株菌2个平行，平皿正置放入放有厌氧产气袋的厌氧密封罐中，在37℃下培养48h，用游标卡尺测量抑菌圈大小。

4)产乳酸试验，包括以下步骤：

步骤2)得到的乳杆菌经活化后，转接至MRS肉汤中，2个平行，在37℃下培养48h，用pH为0.5～5.0的试纸测定并记录培养48h的乳杆菌菌液pH值，按以下两个条件选择菌株进行液相色谱：

①pH值为2.5的菌株进行液相色谱；

②同种属的乳杆菌，挑取pH值较低的菌株进行液相色谱；

确定液相色谱样品后，将上清液稀释5倍，加入浓硫酸进行前处理，上样前用0.22μm针头滤器过滤，液相色谱相关参数如下：

仪器型号：Agilent，分析型液相色谱1200；

色谱柱型号：伯乐，Aminex HPX-87H；

流动相：0.005M H₂SO₄，速度0.6mL/min；

检测器及检测波长：DAD，207nm；RID，示差折光信号；

进样量：20μL。

5)卷曲乳杆菌对过氧化氢的代谢能力测定，包括以下步骤：

步骤2)得到的乳杆菌经活化后，用移液器吸取2μL菌液点种于过氧化氢半定量培养基中，在24h、48h和72h观察时间点设置2个平行，并将相同观察时间点的平皿置于相同的放有厌氧产气袋的厌氧密封罐中，在37℃下培养，培养满相应时间后，取出相应平皿，暴露于空气中，30min后观察显色反应并拍照记录：以德氏乳杆菌DM8909为阳性对照，比德氏乳杆菌DM8909产生的蓝色深计为4分，与德氏乳杆菌DM8909产生的蓝色相当计为3分，比德氏乳杆菌DM8909产生的蓝色浅计为2分，显蓝色非常弱计为1分(轻微显色反应)，不变色的计0分。

6)粘附Hela细胞试验

步骤3)、4)、5)筛选得到的乳杆菌经活化后，离心洗涤菌体2次，PBS重悬，吸取100μL乳杆菌悬浮液于含Hela细胞的96孔细胞培养板，在37℃下静置孵育，设置两个观察时间点，30min和4h，孵育满相应时间后用无菌PBS洗涤2次以未洗去粘附乳杆菌，向含Hela细胞的96孔细胞培养板每孔加入25μL胰酶溶液，置于37℃恒温箱消化细胞，待Hela细胞消化变成球状后，每孔加入75μL含10％FBS的DMEM完全培养基，反复吹打均匀，完全消化后吸取20μL菌悬液，用无菌PBS 10倍梯度稀释，选择适当稀释梯度进行倾注法计数实验，在37℃下培养48h后计数。

经上述筛选，得到本发明的卷曲乳杆菌Lcris-18的益生性能如下表所示：

由上表可知，相比于德氏乳杆菌DM8909，本发明的卷曲乳杆菌Lcris-18的产乳酸能力、细胞粘附力以及对阴道加德纳菌抑菌圈直径的抑菌能力均得到提高；其中，细胞粘附力的提升最为显著。

应当理解的是：

乳杆菌以产生有机酸作为其发酵代谢的终产物，主要以产生乳酸维持健康女性阴道的酸性环境，其在对数生长期的乳酸产量和微生物的生长曲线成正相关，而当乳杆菌生长进入稳定期后，乳酸产量虽然有增加，但表现较为微弱。具体地，乳杆菌达到生长稳定期的时间一般不超过24h；但是从24h到48h，部分乳杆菌的乳酸产量仅会微弱增加。在本实施例中，为了使乳酸产量更加准确，将48h作为时间点来分析乳酸产量。

实施例3菌株鉴定

将卷曲乳杆菌Lcris-18培养后收集，提取基因组DNA，利用引物27F和1492R对16SrRNA序列进行扩增，得到PCR产物，并对PCR产物进行测序。

测序结果表明，PCR产物的序列如SEQ ID No.1所示，将此序列经过在NCBI网站(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)比对分析，鉴定为卷曲乳杆菌。

实施例4抑菌能力试验

卷曲乳杆菌Lcris-18经活化后，取0.1mL菌液与MRS固体培养基混匀，倾注入6cm平皿内，完全凝固后，在37℃下培养48h，取出平皿，用内径6mm的打孔器在琼脂培养基上打孔，获得菌饼；

将金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌分别接种至营养肉汤培养基中，经活化转接后，用0.9％生理盐水以10倍梯度，将致病菌菌液稀释至100倍，分别取10^-1和10^-2稀释液0.5mL与5mL营养琼脂半固体培养基混匀，倾注入9cm平皿内，完全凝固后，将乳酸菌菌饼轻放在营养琼脂半固体培养基表面，每皿对称放4个菌饼，每株菌2个平行，平皿正置放入密封罐中，在37℃培养24h，用游标卡尺测量抑菌圈大小。结果如下表所示：

由上表可知，相比于德氏乳杆菌DM8909，本发明的卷曲乳杆菌Lcris-18对金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌的抑菌能力均得到提高。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 四川厌氧生物科技有限责任公司

<120> 一种卷曲乳杆菌及其应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1461

<212> DNA

<213> 卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)

<400> 1

ggggcggcat gcatactgca gtcgagcgag cggactaaca gatttacttc ggtaatgacg 60

ttaggaaagc gagcggcgga tgggtgagta acacgtgggg aacctgcccc atagtctggg 120

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aaaaggcggc gtaagctgtc gctatgggat ggccccgcgg tgcattagct agttggtaag 240

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gactgagaca cggcccaaac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc cacaatggac 360

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tgttggtgaa gaaggataga ggtagtaact ggcctttatt tgacggtaat caaccagaaa 480

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gccggtgaca aaccggagga aggtggggat gacgtcaagt catcatgccc cttatgacct 1200

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atcgctagta atcgcggatc agcacgccgc ggtgaatacg ttcccgggcc ttgtacacac 1380

cgcccgtcac accatgggag tctgcaatgc ccaaagccgg tggcctaacc ttcgggaagg 1440

agccgtctag cagttagggg g 1461

Claims (10)

1.一种卷曲乳杆菌，其特征在于，所述卷曲乳杆菌命名为卷曲乳杆菌(Lactobacilluscrispatus)Lcris-18，保藏编号为CCTCC No.M 2020888。

2.权利要求1所述的卷曲乳杆菌的发酵液。

3.将权利要求1所述的卷曲乳杆菌作为活性成分的菌剂。

4.权利要求1所述的卷曲乳杆菌或权利要求2所述的发酵液或权利要求3所述的菌剂在制备用于预防和/或治疗阴道炎的产品中的应用。

5.权利要求1所述的卷曲乳杆菌或权利要求2所述的发酵液或权利要求3所述的菌剂在制备用于调节阴道菌群平衡的产品中的应用。

6.权利要求1所述的卷曲乳杆菌或权利要求2所述的发酵液或权利要求3所述的菌剂在制备对阴道上皮细胞具有粘附功能的产品中的应用。

7.权利要求1所述的卷曲乳杆菌或权利要求2所述的发酵液或权利要求3所述的菌剂在制备用于预防和/或治疗阴道致病菌的产品中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述致病菌包括阴道加德纳菌、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌、大肠杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌中的至少一种。

9.权利要求1所述的卷曲乳杆菌或权利要求2所述的发酵液或权利要求3所述的菌剂在制备卫生用品中的应用。

10.权利要求1所述的卷曲乳杆菌或权利要求2所述的发酵液或权利要求3所述的菌剂在制备用于剖腹产婴儿的外用护理品中的应用。