CN112695069A - 一种Tris-HCl溶液的应用及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种Tris‑HCl溶液的应用及其制备方法。本发明所述的Tris‑HCl溶液用于浮游动物的短期保存中，保存7天后检测浮游动物的蛋白酶活力时发现，保存7天的浮游动物的蛋白酶活力较活体样本并无显著差异。对大批量检测浮游生物具有重要的应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种Tris-HCl溶液的应用及其制备方法。
背景技术
浮游动物在水域生态系统的物质和能量循环过程中扮演着非常重要的角色。在自然界中，浮游动物的种群极易受到外界环境因子的影响。其中，食物条件是最主要的环境因子之一。在不良的食物条件下，浮游动物通过提高对关键营养物质和能量的消化吸收能力来提高存活率。同时，也有研究表明，浮游动物的消化酶活力对于适应不良食物环境具有重要作用。因此，开展不同食物条件下，浮游动物的消化酶活力研究，对于探究浮游动物种群对于不同食物环境的适应性就显得尤为必要。但是，由于消化酶易分解的特性，研究人员在进行消化酶测量的时候，需要即时取样即时检测，并且目前浮游动物常用的荧光蛋白检测方法周期长(每12样品需要约3小时)，这就限制了实验样品的数量，从而制约了大样本实验的开展。
另外，传统的浮游动物利用95％的乙醇(Ethanol)来保存荧光法蛋白酶检测用浮游动物，由于高浓度乙醇(Ethanol)(>70％)会导致抱卵成体的卵释放(Black and Dodson2003)，从而导致样品的总蛋白含量降低。因此，使用高浓度乙醇(Ethanol)保存抱卵成体会人为增高蛋白酶的活力，会降低测量的准确性。并且使用高浓度乙醇保存，须在蛋白酶测量前将样品移出再次清洗，在此过程中会增加样品与外界接触的机会，增加蛋白酶的分解几率。因此，开发一种对浮游动物蛋白酶活力无影响的溶液用于浮游生物的短期保存，对大批量检测浮游生物具有重要的应用价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种对浮游动物蛋白酶活力无影响的短期保存浮游生物的溶液及其制备方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种Tris-HCl溶液在浮游动物短期保存中的应用。
本发明还提供了一种所述Tris-HCl溶液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将Trizima base试剂溶于水中，得到摩尔浓度为0.04～0.06mol/L的Tris溶液；
(2)用盐酸调节步骤(1)Tris溶液的pH值，得到Tris-HCl溶液。
作为优选，所述Tris溶液的摩尔浓度为0.05mol/L。
作为优选，所述盐酸的摩尔浓度为0.5～1.5mol/L。
作为优选，所述盐酸的摩尔浓度为1.0mol/L。
作为优选，所述pH值为7.9～8.1。
本发明提供了一种Tris-HCl溶液的应用及其制备方法，本发明的技术方案具有以下优点：
本发明的方法不仅改善了传统的消化酶测量时即取即测的模式，提高了实验设置的灵活性和样本量，还不会造成抱卵成体的卵释放，而且本发明使用的保存液即为蛋白酶测量的缓冲溶液，解冻后即可使用，保证样品无须再次接触外界，具备降低蛋白酶分解风险等优点，可为开展浮游动物消化吸收能力研究提供方便实用的样品保存方法，因此可认为该方法具备多种优点，适合于在本领域推广应用，其科研意义重大。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
取100ml烧杯，并向其中加入60ml蒸馏水，然后称取0.484g Trizima base溶于水中，充分搅拌溶解后，加蒸馏水定容至100ml得到摩尔浓度为0.04mol/L的Tris溶液。
取100ml烧杯，向其中计入1ml 37％的浓盐酸，然后再加入23ml蒸馏水，充分混匀后，配制成0.5N盐酸溶液，最后置于试剂瓶中4℃保存。
利用0.5N盐酸溶液，调节摩尔浓度为0.04mol/L的Tris溶液的pH至7.9，最后置于试剂瓶中4℃保存，得到实施例1的Tris-HCl保存溶液。
实施例2
取100ml烧杯，并向其中加入60ml蒸馏水，然后称取0.605Trizima base溶于水中，充分搅拌溶解后，加蒸馏水定容至100ml得到摩尔浓度为0.05mol/L的Tris溶液。
取100ml烧杯，向其中计入2ml 37％的浓盐酸，然后再加入22ml蒸馏水，充分混匀后，配制成1N盐酸溶液，最后置于试剂瓶中4℃保存。
利用1N盐酸溶液，调节摩尔浓度为0.05mol/L的Tris溶液的pH至8.0，最后置于试剂瓶中4℃保存，得到实施例2的Tris-HCl保存溶液。
实施例3
取100ml烧杯，并向其中加入60ml蒸馏水，然后称取0.726g Trizima base溶于水中，充分搅拌溶解后，加蒸馏水定容至100ml得到摩尔浓度为0.06mol/L的Tris溶液。
取100ml烧杯，向其中计入3ml 37％的浓盐酸，然后再加入22ml蒸馏水，充分混匀后，配制成1.5N盐酸溶液，最后置于试剂瓶中4℃保存。
利用1.5N盐酸溶液，调节摩尔浓度为0.06mol/L的Tris溶液的pH至8.1，最后置于试剂瓶中4℃保存，得到实施例3的Tris-HCl保存溶液。
实施例4
取同一母本在同一天出生的健康单克隆蚤状溞(Daphniapulex)培养在注满曝气过的自来水的培养瓶中，并在培养瓶中加入1.0mg C/L的斜生栅藻(Scenedesmusobliquus)。在温度为20℃，24h光照的条件下培养，每两天换一次水，每天投喂1.0mg C/L的斜生栅藻(Scenedesmus obliquus)，经过5天的养殖后，得到待检测的蚤状溞。
应用实施例1
随机选取3只实施例4得到的待检测蚤状溞个体；用10ml胶头滴管从养殖水体中转移至30ml培养皿中，为了防止浮游动物被吸走，使用吸口更小的2ml胶头滴管将培养皿中的养殖水移走，然后用足量的蒸馏水冲洗浮游动物表面，并再次用2ml胶头滴管移走蒸馏水，如此反复冲洗三次。
根据Tian等2019年在《Evolution of asexual Daphnia pulex in Japan:variations and covariations of the digestive,morphological and life historytraits》一文中报道的碱性磷酸酶的测量方法对3只蚤状溞的碱性磷酸酶活力进行测量。测量结果见表1。
应用实施例2
随机选取3只实施例4得到的待检测蚤状溞个体，按照应用实施例1的清洗方式清洗后，分别保存到装有200μL实施例1配制的溶液的0.6ml离心管中，最后关闭离心管，将其置于-20℃保存。7天后，将离心管在室温下解冻，充分解冻后，根据以上Tian等报道的碱性磷酸酶的测量方法测量每只保存7天后蚤状溞中的碱性磷酸酶活力。测量结果见表1。
应用实施例3
随机选取3只实施例4得到的待检测蚤状溞个体；按照应用实施例1的方法对蚤状溞进行清洗。
将清洗后的3只蚤状溞，分别保存到装有200μL实施例2配制的溶液的0.6ml离心管中，最后关闭离心管，将其置于-20℃保存。7天后，将离心管在室温下解冻，充分解冻后，根据以上Tian等报道的碱性磷酸酶的测量方法测量每只保存7天后蚤状溞中的碱性磷酸酶活力。测量结果见表1。
应用实施例4
随机选取3只实施例4得到的待检测蚤状溞个体；按照应用实施例1的方法对蚤状溞进行清洗。
将清洗后的3只蚤状溞，分别保存到装有200μL实施例3配制的溶液的0.6ml离心管中，最后关闭离心管，将其置于-20℃保存。7天后，将离心管在室温下解冻，充分解冻后，根据以上Tian等报道的碱性磷酸酶的测量方法测量每只保存7天后蚤状溞中的碱性磷酸酶活力。测量结果见表1。
表1蚤状溞个体碱性磷酸酶活力测定结果
由表1可以看出，采用实施例1～3的保存液体对蚤状溞进行保存7天后再检测个体中碱性磷酸酶的活力，较直接对蚤状溞活体进行检测的结果并无差异。说明本申请的Tris-HCl保存液不会影响浮游动物消化酶活力的表达。
由以上实施例可知，本发明的方法不仅改善了传统的消化酶测量时即取即测的模式，提高了实验设置的灵活性和样本量，还不会造成抱卵成体的卵释放，而且本发明使用的保存液即为蛋白酶测量的缓冲溶液，解冻后即可使用，保证样品无须再次接触外界，具备降低蛋白酶分解风险等优点，可为开展浮游动物消化吸收能力研究提供方便实用的样品保存方法，因此可认为该方法具备多种优点，适合于在本领域推广应用，其科研意义重大。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.Tris-HCl溶液在浮游动物短期保存中的应用。
2.一种权利要求1所述的Tris-HCl溶液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将Trizima base试剂溶于水中，得到摩尔浓度为0.04～0.06mol/L的Tris溶液；
(2)用盐酸调节步骤(1)Tris溶液的pH值，得到Tris-HCl溶液。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述Tris溶液的摩尔浓度为0.05mol/L。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述盐酸的摩尔浓度为0.5～1.5mol/L。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述盐酸的摩尔浓度为1.0mol/L。
6.根据权利要求2～5任意一项所述的制备方法，其特征在于，所述pH值为7.9～8.1。
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20210423 |