CN112684021A - 一种维生素b12注射液有关物质的检测方法 - Google Patents

一种维生素b12注射液有关物质的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112684021A
CN112684021A CN202011385341.7A CN202011385341A CN112684021A CN 112684021 A CN112684021 A CN 112684021A CN 202011385341 A CN202011385341 A CN 202011385341A CN 112684021 A CN112684021 A CN 112684021A
Authority
CN
China
Prior art keywords
mobile phase
vitamin
solution
injection
detection method
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011385341.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112684021B (zh
Inventor
唐咏群
黄锡伟
董海霞
胡铮
田欣欣
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
NANJING JIANYOU BIOCHEMICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Original Assignee
NANJING JIANYOU BIOCHEMICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by NANJING JIANYOU BIOCHEMICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd filed Critical NANJING JIANYOU BIOCHEMICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority to CN202011385341.7A priority Critical patent/CN112684021B/zh
Publication of CN112684021A publication Critical patent/CN112684021A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112684021B publication Critical patent/CN112684021B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

本发明涉及一种维生素B12注射液有关物质的检测方法，其高效液相色谱条件包括：色谱柱为：Agilent ZORBAX SB‑C8；以流动相A和流动相B作为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为磷酸氢二钠溶液；所述流动相B为甲醇。采用本发明构建的检测方法，可以分离出维生素B12及其相关的杂质，特别是针对特定杂质34‑甲基维生素B12与其相邻峰进行有效分离，在维生素B12注射液制备、稳定性及影响因素整个过程中，准确对特定杂质34‑甲基维生素B12的含量进行检测，从而对维生素B12注射液产品质量进行准确的评价，保证维生素B12注射液产品的安全及疗效。

Description

一种维生素B12注射液有关物质的检测方法
技术领域
本发明属于药物分析领域，具体涉及一种维生素B12注射液有关物质的检测方法。
背景技术
维生素B12化学名为Coα-[α-(5,6-二甲基苯并咪唑基)]-Coβ氰钴酰胺，结构式如下：
Figure BDA0002809503630000011
分子式：C63H88CoN14O14P，分子量：1355.37。
维生素B12又称钴胺素或氰钴素，是唯一含金属元素的维生素。维生素B12为浅红色的针状结晶，易溶于水和乙醇，在pH值4.5～5.0弱酸条件下最稳定，强酸或碱性溶液中分解，遇热可有一定程度破坏，遇强光或紫外线易被破坏。维生素B12的主要生理功能是参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血；防止大脑神经受到破坏。成人皮下注射治疗维生素B12缺乏症时，肌内注射或静脉注射最高可达1mg一次。鉴于维生素B12的重要作用，维生素B12注射液的质量至关重要。经查阅国内外药典及文献，ChP、USP、JP收载的维生素B12注射液中均未进行有关物质的控制。USP、EP收载的API方法中均为等度洗脱，且使用的色谱柱粒径均为5μm，不能将各未知杂质及特定杂质34-甲基维生素B12与其相邻峰进行有效分离；现有文献中的洗脱梯度及十八烷基硅烷填料的色谱柱也不能准确分离各未知杂质及特定杂质34-甲基维生素B12与其相邻峰，均无法准确检测维生素B12注射液中34-甲基维生素B12含量。
由于上述方法存在的缺点，提供一种准确可靠的高效液相色谱法测定维生素B12注射液中34-甲基维生素B12含量以保证维生素B12注射液的质量和疗效显得迫在眉睫和意义重大。
发明内容
本发明的目的是在现有技术的基础上，提供一种维生素B12注射液有关物质的检测方法，可以准确分离各未知杂质及特定杂质34-甲基维生素B12与其相邻峰。
本发明的技术方案如下：
一种维生素B12注射液有关物质的检测方法，所述检测方法采用高效液相色谱对维生素B12注射液及有关物质进行检测，其高效液相色谱条件包括：色谱柱为：Agilent ZORBAXSB-C8；以流动相A和流动相B作为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为磷酸氢二钠溶液；所述流动相B为甲醇；所述梯度洗脱的过程如下：在0～10分钟内，流动相A和流动相B的体积比由82:18匀速渐变至77:23；在10～70分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持77:23不变；在70～85分钟内，流动相A和流动相B的体积比由77:23匀速渐变至45:55；在85～95分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持45:55不变；在95～96分钟内，流动相A和流动相B的体积比由45:55匀速渐变至82:18；在96～105分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持82:18不变。
具体梯度洗脱过程按照下表1所示。
表1梯度洗脱过程
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 82 18
10 77 23
70 77 23
85 45 55
95 45 55
96 82 18
105 82 18
在一种优选方案中，本发明采用的色谱柱为不封端的Agilent ZORBAX SB-C8色谱柱，例如，色谱柱的长度为150mm，直径为4.6mm，填料粒径为3.5μm。采用本发明的色谱柱和特定的洗脱程序，在其他条件的配合下，可以准确分离各未知杂质及特定杂质34-甲基维生素B12与其相邻峰，用于测定维生素B12注射液中34-甲基维生素B12含量，专属性强，重现性好，结果准确可靠，从而对维生素B12注射液产品质量进行准确的评价，保证维生素B12注射液产品的安全及疗效。
本发明的检测方法还包括如下高效液相色谱条件：
检测波长为359～363nm，优选为361nm。
进一步地，柱温为30～40℃，优选为35℃。
进一步地，流速为0.7～0.9mL/min；优选为0.8mL/min。
更进一步地，进样量为10～50μL；优选为20μL。
本发明以流动相A和流动相B作为混合流动相进行梯度洗脱，其中流动相A为磷酸氢二钠溶液，可以按照如下方法制备：称取无水磷酸氢二钠3.5～4.5g加入至1000ml超纯水中，混和均匀后，用磷酸调节pH至3.2～3.8，即得。
在一种优选方案中，流动相A的制备方法如下：称取无水磷酸氢二钠3.97g加入至1000ml超纯水中，混和均匀后，用磷酸调节pH至3.5，即得。
采用本发明的方法检测维生素B12注射液及其有关物质时，包括配制如下溶液：
稀释剂(空白溶液)：体积比为3:1的流动相A和流动相B混合液。例如，量取流动相A750ml与流动相B 250ml，混匀后，超声脱气约3～5min，即得。
供试品溶液按照如下方法制备：移取维生素B12注射液，加入稀释剂(流动相A和流动相B的体积比为3:1)稀释至浓度为1.0mg/ml维生素B12溶液。
对照品溶液按照如下方法制备：(1)准确称取25mg维生素B12对照品于25ml容量瓶中，加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀后制备对照品储备液；(2)准确移取1.0ml对照品储备液于100ml容量瓶中，加稀释剂稀释并定容至刻度，摇匀后，即得对照品溶液。
供试品加标溶液按照如下方法制备：(1)准确称取5mg 34-甲基维生素B12对照品于10ml容量瓶中，加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀后，即得34-甲基维生素B12对照品溶液；(2)移取浓度为1.0mg/ml的维生素B12溶液10ml，向其中加入浓度为0.5mg/ml的34-甲基维生素B12对照品溶液0.1ml，摇匀后，即得供试品加标溶液。
采用本发明的技术方案，优势如下:
本发明提供的维生素B12注射液有关物质的检测方法，解决了现有技术中无法准确分离出各未知杂质及特定杂质34-甲基维生素B12与其相邻峰的问题，而本发明构建的检测方法，可以分离出维生素B12及其相关的杂质，特别是针对特定杂质34-甲基维生素B12与其相邻峰进行有效分离，在维生素B12注射液制备、稳定性及影响因素整个过程中，准确对特定杂质34-甲基维生素B12的含量进行检测，从而对维生素B12注射液产品质量进行准确的评价，保证维生素B12注射液产品的安全及疗效。
附图说明
图1是实施例1中维生素B12有关物质检测的空白溶液图谱；
图2是实施例1中维生素B12有关物质检测的对照品溶液图谱；
图3是实施例1中维生素B12有关物质检测的供试品加标溶液图谱；
图4是实施例1中维生素B12有关物质检测的供试品溶液图谱；
图5是对比例1中维生素B12有关物质检测的供试品溶液图谱。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行详尽地描述。所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域内的技术人员对本发明所做的简单替换或改进等均属于本发明所保护的技术方案之内。
实施例1：
1、色谱条件
仪器：高效液相色谱仪；
色谱柱：C8色谱柱(Agilent ZORBAX SB-C8，150mm×4.6mm，3.5μm)；
流动相A：磷酸氢二钠溶液(pH为3.50)；
流动相B：甲醇；
检测波长：361nm；
柱温：35℃；
流速：0.8ml/min；
进样量：20μl；
运行时间：105分钟；
按表1进行梯度洗脱：
Figure BDA0002809503630000041
Figure BDA0002809503630000051
2、样品制备
(1)流动相制备
流动相A：称取无水磷酸氢二钠3.97g至1000ml超纯水中，混匀后，用磷酸调节pH至3.50，采用0.45μm水系滤膜抽滤，即得。
流动相B：甲醇。
(2)空白溶液(稀释剂)
量取流动相A 750ml与流动相B 250ml，混匀后，超声脱气约3～5min，即得。
(3)对照品溶液制备
对照品储备液(1.0mg/ml)：准确称取25mg维生素B12对照品(按无水物计)于25ml容量瓶中，加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀后，即得。
对照品溶液(0.01mg/ml)：准确移取1.0ml对照品储备液于100ml容量瓶中，加稀释剂稀释并定容至刻度，摇匀，即得。
34-甲基维生素B12对照品溶液(0.5mg/ml)：准确称取5mg 34-甲基维生素B12对照品(按无水物计)于10ml容量瓶中，加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀后，即得。
(4)供试品溶液制备
取维生素B12注射液，加稀释剂至浓度为1.0mg/ml维生素B12溶液。
(5)供试品加标溶液制备
取浓度为1.0mg/ml的维生素B12溶液10ml，加浓度为0.5mg/ml的34-甲基维生素B12对照品溶液0.1ml，摇匀，即得
3、实验结果
精密量取空白溶液、对照品溶液、供试品溶液和供试品加标溶液各20μl，按照上述条件进行分析，记录色谱图。
结果显示：空白溶液对维生素B12及其杂质峰没有干扰，供试品溶液和供试品加标溶液中特定杂质34-甲基维生素B12与其相邻峰能有效分离。图谱见说明书附图1、2、3和4。
实施例2耐用性试验：
微调流速(±0.1ml)，柱温(±5℃)，检测波长(±2nm)，流动相A pH(±0.05)，以评估测定条件参数微小变化时，测定结果不受影响程度。各条件下34-甲基维生素B12与相邻未知杂质分离度的实验结果见表2。
表2
Figure BDA0002809503630000061
由表2可知，当测定条件参数微小变化时，测定结果不受影响。
实施例3专属性：
1、色谱条件
维生素B12专属性试验过程，如表3所示。
表3维生素B12专属性试验过程
Figure BDA0002809503630000062
Figure BDA0002809503630000071
维生素B12专属性试验结果，如表4所示。
表4维生素B12专属性试验结果
Figure BDA0002809503630000072
由表3和表4可知，在各降解条件下，主峰与相邻杂质峰均能有效分离，维生素B12物料平衡率均大于95.0％，且峰纯度符合要求，说明维生素B12注射液有关物质检测方法专属性良好。
对比例1
1、色谱条件
仪器：高效液相色谱仪；
色谱柱：C8色谱柱(Agilent ZORBAX SB-C8，250mm×4.6mm，5μm)；
流动相A：磷酸氢二钠溶液(pH为3.50)；
流动相B：甲醇；
检测波长：361nm；
柱温：35℃；
流速：0.8ml/min；
进样量：20μl；
运行时间：60分钟；
按表5进行梯度洗脱：
表5梯度洗脱过程
时间(分钟) 流动相A(％) 流动相B(％)
0 75 25
5 75 25
25 70 30
35 45 55
45 45 55
46 75 25
60 75 25
2、样品制备
(1)流动相制备
流动相A：称取无水磷酸氢二钠3.97g至1000ml超纯水中，混匀后，用磷酸调节pH至3.50，采用0.45μm水系滤膜抽滤，即得。
流动相B：甲醇。
(2)供试品溶液制备
取维生素B12注射液，加稀释剂至浓度为1.0mg/ml的维生素B12溶液。稀释剂的制备方法如下：量取流动相A 750ml与流动相B 250ml，混匀后，超声脱气约3～5min，即得。
3、实验结果
精密量取供试品溶液20μl，按照上述条件进行分析，记录色谱图。
结果显示：供试品溶液中特定杂质34-甲基维生素B12与未知杂质包裹在一起，无法有效分离。图谱见说明书附图5。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可能对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种维生素B12注射液有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法采用高效液相色谱对维生素B12注射液及有关物质进行检测，其高效液相色谱条件包括：色谱柱为：Agilent ZORBAX SB-C8；以流动相A和流动相B作为混合流动相进行梯度洗脱，所述流动相A为磷酸氢二钠溶液；所述流动相B为甲醇；所述梯度洗脱的过程如下：在0～10分钟内，流动相A和流动相B的体积比由82:18匀速渐变至77:23；在10～70分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持77:23不变；在70～85分钟内，流动相A和流动相B的体积比由77:23匀速渐变至45:55；在85～95分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持45:55不变；在95～96分钟内，流动相A和流动相B的体积比由45:55匀速渐变至82:18；在96～105分钟内，流动相A和流动相B的体积比保持82:18不变。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱的长度为150mm，直径为4.6mm，填料粒径为3.5μm。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱条件还包括：检测波长为359～363nm，优选为361nm。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱条件还包括：柱温为30～40℃，优选为35℃。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱条件还包括：流速为0.7～0.9mL/min；优选为0.8mL/min。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱条件还包括：进样量为10～50μL；优选为20μL。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相A的制备方法如下：称取无水磷酸氢二钠3.5～4.5g加入至1000ml超纯水中，混和均匀后，用磷酸调节pH至3.2～3.8，即得。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的检测方法，其特征在于，供试品溶液按照如下方法制备：移取维生素B12注射液，加入稀释剂稀释至浓度为1.0mg/ml维生素B12溶液；所述稀释剂为体积比为3:1的流动相A和流动相B混合液。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，对照品溶液按照如下方法制备：(1)准确称取25mg维生素B12对照品于25ml容量瓶中，加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀后制备对照品储备液；(2)准确移取1.0ml对照品储备液于100ml容量瓶中，加稀释剂稀释并定容至刻度，摇匀后，即得对照品溶液。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，供试品加标溶液按照如下方法制备：(1)准确称取5mg 34-甲基维生素B12对照品于10ml容量瓶中，加稀释剂溶解并定容至刻度，摇匀后，即得34-甲基维生素B12对照品溶液；(2)移取浓度为1.0mg/ml的维生素B12溶液10ml，向其中加入浓度为0.5mg/ml的34-甲基维生素B12对照品溶液0.1ml，摇匀后，即得供试品加标溶液。
CN202011385341.7A 2020-12-01 2020-12-01 一种维生素b12注射液有关物质的检测方法 Active CN112684021B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011385341.7A CN112684021B (zh) 2020-12-01 2020-12-01 一种维生素b12注射液有关物质的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011385341.7A CN112684021B (zh) 2020-12-01 2020-12-01 一种维生素b12注射液有关物质的检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112684021A true CN112684021A (zh) 2021-04-20
CN112684021B CN112684021B (zh) 2022-03-04

Family

ID=75447066

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011385341.7A Active CN112684021B (zh) 2020-12-01 2020-12-01 一种维生素b12注射液有关物质的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112684021B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104122363A (zh) * 2014-06-24 2014-10-29 杭州康恩贝制药有限公司 一种甲钴胺片有关物质的测定方法
CN107860847A (zh) * 2017-11-14 2018-03-30 济南维瑞医药科技开发有限公司 一种检测多种维生素制剂中维生素b12有关物质的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104122363A (zh) * 2014-06-24 2014-10-29 杭州康恩贝制药有限公司 一种甲钴胺片有关物质的测定方法
CN107860847A (zh) * 2017-11-14 2018-03-30 济南维瑞医药科技开发有限公司 一种检测多种维生素制剂中维生素b12有关物质的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
XIAO QIU ET AL.: "Determination of active vitamin B12 (cobalamin) in dietary supplements and ingredients by reversed-phase liquid chromatography: Single-laboratory validation", 《FOOD CHEMISTRY》 *
刘毅 等: "HPLC测定维生素B12注射液的含量和有关物质", 《中国药学杂志》 *
美国药典委员会: "《USP36》", 1 December 2013 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112684021B (zh) 2022-03-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111983113B (zh) 一种检测依折麦布辛伐他汀片中6-氧代辛伐他汀含量的方法
CN115060832A (zh) 奥卡西平口服混悬液中奥卡西平及防腐剂含量检测方法
CN112684021B (zh) 一种维生素b12注射液有关物质的检测方法
CN108931586A (zh) 一种复方磷酸可待因口服溶液测定方法
CN113702514A (zh) 一种阿托伐他汀钙有关杂质ⅰ的测定方法
CN112924601B (zh) 一种高效液相色谱-蒸发光法检测盐酸林可霉素注射液中的林可霉素杂质e的方法
CN114755346A (zh) 一种环孢素软胶囊有关物质的测定方法
CN110501436B (zh) 替硝唑药物组合物中有关物质的检测方法
CN111208214B (zh) 液相法检测药物制剂中吐温含量的方法
CN112433011B (zh) 一种门冬氨酸钾镁木糖醇注射液中有关物质的测定方法
CN115166083B (zh) 一种磷霉素氨丁三醇有关物质的检测方法以及应用
CN111175392B (zh) 一种止咳枇杷糖浆的质量控制方法
CN112557558B (zh) 一种检测依折麦布辛伐他汀片中sch59566杂质含量的方法
CN114609289B (zh) 一种奥美沙坦酯氨氯地平复方制剂中杂质的检测方法
CN114076801B (zh) 一种来那度胺中有关物质的检测方法
CN114113402B (zh) 一种采用高效液相色谱法测定硼替佐米中蒎烷二醇含量的方法
CN112924602B (zh) 一种高效液相色谱-蒸发光法检测盐酸林可霉素注射液中的林可霉素杂质f的方法
CN113109461B (zh) 一种咪达那新片中有关物质的检测方法
CN111529485B (zh) 一种左乙拉西坦注射用浓溶液的制备方法
CN113777185A (zh) 一种富马酸丙酚替诺福韦制剂中丙酚替诺福韦的检测方法
CN116577438A (zh) 判别烟碱浓度对烟碱表观油水分配系数影响程度的方法
CN111812227A (zh) 一种多巴丝肼复方制剂中苄丝肼杂质a的分析方法
CN115951003A (zh) 一种检测盐酸艾司洛尔注射液杂质的方法
CN116519846A (zh) 判别烟碱浓度对烟碱油水分配系数影响程度的非参数检验
CN113720944A (zh) 一种氢溴酸右美沙芬硫酸奎尼丁胶囊含量的检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant