CN112683900A - 一种手性多巴检测专用纸芯片及检测分析方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于手性多巴检测的专用纸芯片及手性多巴检测方法。专用纸质微流控芯片纸基孔隙率在65～85％之间；纸基孔径在10μm～11μm之间的色谱纸为：厚度180μm，基本重量88g/m2，空气流速10.5s/100mL/in2，灰份含量0.06％，拉伸模量39.1N/15mm，最低α‑纤维素含量98％的纤维素纸。多巴进行含量测定的方法包打孔；配制氯金酸溶液；柠檬检测前制作左旋多巴标准曲线；制备酸钠溶液、L‑半胱氨酸溶液、磷酸缓冲液和L‑多巴溶液：制备纳米金；修饰纳米金；最低检测限测定；加样回收实验等多个步骤；同现有技术相比，无需进行特殊的样品预处理，可直接进行定量分析，检测快速、用量少、准确性良好，可对实际样品中的L‑多巴进行快速检测，具有较为深远的意义。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，涉及一种检测分析专用纸芯片及检测方法，特别涉及 一种用于手性多巴检测的专用纸芯片及手性多巴检测方法。
背景技术
手性识别是生物体内分子识别的基本模式，手性识别的研究有许多，进展也很快，根 据各种被识别物的分析检测方法众多。仅就手性多巴检测方法，在本发明以前的现有技术 中，文献报道过的就有旋光度法、光谱分析法、色谱分析法、毛细管电泳和电化学传感器法。旋光度法是目前主要最常用的手性识别方法，但是旋光性受多种测量条件影响，如： 温度、溶剂、浓度等不同的测定条件，测出的旋光性也不同，所以通过旋光度识别手性分 子受到了限制。光谱方法简单、快速和准确，常被用于手性分析，但该方法也存在一定的 缺点，如易引起生物类手性选择剂和分析化合物的构型变化或失活。色谱分析法集测定和 分离于一体，具有很大的适用性，可实现手性分子的快速定性、定量分析，但仪器昂贵， 分析时间长。毛细管电泳法具有高效快速、样品用量少等优点，但只可用于分离低浓度的 对映异构体。电分析方法因具有灵敏度高、仪器简单、检测快速等特点，但对导电性不佳 的手性物质检测信号较低，应用受限。
目前为止，本发明所用纸芯片及其检测手性多巴方法尚未见相关报道。
发明内容
针对上述现有技术状况，本发明的目的，首先提供一种专用于手性多巴检测的纸芯片， 本发明的另一个目的是提供一种用该纸芯片进行手性多巴检测分析的方法。
现将本发明构思及技术解决方案叙述如下：
本发明的基本构思是，利用纸芯片成本低、制备简便、无需复杂外围设备，能够进行 真正意义上的一次性、价格低、便携式的检测分析特点，设计一种专用于L-多巴检测分析 的纸质微流控芯片；本发明是将手性识别过程在纸芯片上实现，通过Photoshop软件分析 其颜色变化程度，本发明是基于纸芯片用一定浓度梯度的L-多巴与L-半光氨酸修饰纳米 金粒子(L-Cys-AuNPs)反应，如附图1所示，在圆形纸芯片(直径6mm)上加L-多巴溶 液，再在L-多巴上面加一定量的被L-半光氨酸修饰的纳米金，反应显色，根据L-多巴浓 度的不同，颜色呈不同程度的变化。使用Photoshop软件分析得到Red通道和Blue通道 的mean值的比值，即Red/Blue，随行空白实验，计算出扣掉空白Red/Blue比值的差值， 制作Red/Blue差值与L-多巴浓度的标准曲线，再根据显色强度对样品手性多巴含量进行 检测分析的专用方法。
本发明一种专用于手性多巴测定的纸质微流控芯片，其特征在于：所述的纸基采用空 隙率低、孔径小、且分布均匀的色谱纸基孔隙率在65～85％之间；所述的纸基孔径在10μm ～11μm之间；所述的色谱纸为：厚度180μm，基本重量88g/m2，空气流速10.5s/100mL/in2， 灰份含量0.06％，拉伸模量39.1N/15mm，最低α-纤维素含量98％的纤维素纸。
本发明还同时提供一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在 于：包括以下步骤：
步骤1：采用打孔器在色谱纸上进行打孔，打出实验所用的圆形纸芯片；
步骤2：检测前配制氯金酸溶液、柠檬酸钠溶液、L-半胱氨酸溶液、磷酸缓冲液和L-多巴溶液；
步骤3：纳米金的制备；
步骤4：L-半光氨酸(L-Cys)修饰纳米金；
步骤5：分别在L-Cys-AuNPs加样量5～8μL、L-多巴加样量5～12μL、反应时间1-20min 和反应pH 3～7.4条件下进行检测，得到最佳检测条件；
步骤6：检测前制作左旋多巴标准曲线；
步骤7：最低检测限测定；
步骤8：加样回收实验；
步骤9：重复性实验；
步骤10：实际样品测定。
本发明进一步提供一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在 于：结合步骤1、2、3、4、5、6：分别在L-Cys-AuNPs加样量5～8μL、L-多巴加样量5～12μL、 反应时间1-20min和反应pH 3～7.4条件下进行检测，得到最佳检测条件。
本发明进一步提供一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在 于：步骤7中所述的“最低检测限试验”具体如下：
配制不同浓度的L-多巴溶液，在纸芯片上进行检测，随行空白校正，显色后，用Photoshop软件分析L-多巴与空白的Red通道和Blue通道的mean值，得到最低检测限为0.004mmol/L。
本发明进一步提供一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在 于：步骤8中所述所述的“加样回收实验”具体如下：
分别配制0.02、0.04、0.08mmol/L的L-多巴溶液标准品，依次加入所含L-多巴80％、 100％、120％的对照品，在纸芯片上进行测定，得到低、中、高浓度时，纸芯片的加样回收 率分别为99.0％、98.2％、101.0％，在98.21％-101.05％之间，工作曲线的准确性良好。
本发明进一步提供一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在 于：步骤9中所述的“手性多巴检测的重复性实验”具体如下：
配制浓度为0.02、0.04、0.06mmol/L L-多巴溶液在纸芯片上进行测定，随行空白实 验，得到不同浓度的L-多巴的日内精密度为3.13％，日间精密为3.82％。实验结果在5％以内，重复性良好；
本发明进一步提供一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在 于：步骤10中所述的“实际样品测定”具体如下：
配制浓度为0.04、0.06、0.08mmol/L的DL-多巴溶液，在纸芯片上测定其中左L-多巴的含量，其中L-多巴的理论含量为50％，检测结果得DL-多巴中L-多巴的含量为50.57％、52.12％、52.07％，L-多巴浓度检测结果与标注值误差在±5％内。
本发明进一步提供一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在 于：步骤3、4具体操作如下：
对空白纳米金和L-Cys修饰纳米金进行紫外可见光谱扫描得空白纳米金的最大吸收波 长为518nm，吸光度为0.5446，L-Cys修饰纳米金的最大吸收波长为520nm，吸光度0.5434， 出现红移，说明纳米金被L-Cys成功修饰；对空白纳米金和L-Cys修饰纳米金进行粒径测 定，空白纳米金的平均粒径是36.57nm(n＝3)，L-Cys修饰纳米金的平均粒径是47.49nm (n＝3)，粒径增大，可证明L-Cys已成功修饰到纳米金表面；对空白纳米金和L-Cys修 饰纳米金进行电位测定，空白纳米金的平均电位是-7.24mV，L-Cys修饰纳米金的平均电位是-14.7mV，电位降低，可以进一步证明纳米金被L-Cys修饰；
本发明同现有技术相比，具有检测速度快、精确度高、样品用量少、能耗低、污染小、 成本低廉、安全性好等优点，且纸芯片便于携带、易于操作，制作的纸芯片用于手性多巴 的测定无需进行特殊的样品预处理，可直接进行定量分析，在临床诊断、食品质量控制和 环境监测等领域有着广阔的应用前景。
附图说明
图1：纸芯片检测显色反应原理图
图2：L-Cys-AuNPs上样量对显色反应影响
图3：L-多巴上样量对显色反应影响
图4：反应时间对显色反应影响
图5：溶剂pH值对显色反应影响
图6：基于纸芯片建立L-多巴标准曲线
图7：最低检测限测定
图8：紫外分光光度法分析表征图
图9：空白纳米金与L-Cys修饰纳米金的粒径测定结果
图10：空白纳米金与L-Cys修饰纳米金的电位测定结果
具体实施方式
下面结合附图对本发明具体实施方式作进一步详细说明。
实施例1：
步骤1，在色谱纸(Watman grade 1)上用打孔机打出直径为6±2mm的圆型纸片，得实验用纸芯片；
步骤2：检测前配制氯金酸溶液(25.4mmol/L)、柠檬酸钠溶液(38.8mmol/L)、 磷酸缓冲液(20mmol/L)、L-半光氨酸溶液(0.2mmol/L)和L-多巴溶液(5mmol/L)；
步骤3：纳米金的制备：精密量取氯金酸(25.4mmol/L)3.5mL和去离子水96.5mL，于三颈烧瓶中，油浴加热并搅拌至沸腾(约113℃)，加大搅拌力度，快速加入10mL 38.8mmol/L柠檬酸钠，颜色由黄色灰色黑色逐渐变为透亮的酒红色后，继续搅拌10min，常 温下继续搅拌15min，保存于血清瓶中，置于4℃冰箱中保存。
步骤4：L-Cys修饰纳米金：精密量取AuNPs 5mL，于10mL烧杯中，加入20μL 0.2mmol/L L-Cys，搅拌2h，置于4℃冰箱中保存。
步骤5：分别在L-Cys-AuNPs加样量5～8μL、L-多巴加样量5～12μL、反应时间1-20min 和反应pH 3～7.4条件下进行检测，得到最佳检测条件；
步骤6：检测前制作左旋多巴标准曲线；配制浓度为0.005、0.01、0.02、0.04、0.08mmol/L的L-多巴溶液，与L-Cys-AuNPs在纸芯片上反应显色4min，随行空白校正，拍照， 用Photoshop软件分析各浓度L-多巴与空白的Red通道和Blue通道的mean值，得到 Red/Blue，计算ΔR/B，以L-多巴浓度与ΔR/B进行拟合得标准工作曲线；
步骤7：最低检测限测定：配制不同浓度的L-多巴溶液，在纸芯片上进行检测，随行空白校正，显色后，用Photoshop软件分析L-多巴与空白的Red通道和Blue通道的mean 值，得到Red/Blue，计算ΔR/B，当ΔR/B接近于零时，即为最低检测限；
步骤8：加样回收实验：分别配制0.02、0.04、0.08mmol/L的L-多巴溶液标准品， 依次加入所含L-多巴80％、100％、120％的对照品，在纸芯片上进行测定，计算低、中、高 浓度时的加样回收率；
步骤9：重复性实验：
日内精密度，配制浓度为0.02、0.04、0.06mmol/LL-多巴溶液在纸芯片上进行测定， 随行空白实验，日内连续测定5次ΔR/B；
日间精密度，配制浓度为0.08mmol/L的L-多巴溶液，在纸芯片上测定，随行空白实验，连续5日测定ΔR/B值；
步骤10：实际样品测定：配制浓度为0.04、0.06、0.08mmol/L的DL-多巴溶液，在 纸芯片上测定其中左L-多巴的含量。
实施例2：
参见图1、2、3、4、5、6，结合步骤1、2、3、4、5、6：
分别在L-Cys-AuNPs加样量5～8μL、L-多巴加样量5～12μL、反应时间1-20min和反应pH 3～7.4条件下进行检测，得到最佳检测条件。
实施例3：
结合步骤7：最低检测限试验
配制不同浓度的L-多巴溶液，在纸芯片上进行检测，随行空白校正，显色后，用Photoshop软件分析L-多巴与空白的Red通道和Blue通道的mean值，得到最低检测限为0.004mmol/L。
实施例4：
结合步骤8：加样回收实验
分别配制0.02、0.04、0.08mmol/L的L-多巴溶液标准品，依次加入所含L-多巴80％、 100％、120％的对照品，在纸芯片上进行测定，得到低、中、高浓度时，纸芯片的加样回收 率分别为99.0％、98.2％、101.0％，在98.21％-101.05％之间，工作曲线的准确性良好。
实施例5：
结合步骤9：手性多巴检测的重复性实验
配制浓度为0.02、0.04、0.06mmol/L L-多巴溶液在纸芯片上进行测定，随行空白实 验，得到不同浓度的L-多巴的日内精密度为3.13％，日间精密为3.82％。实验结果在5％以内，重复性良好；
实施例6：
结合步骤10：实际样品测定
配制浓度为0.04、0.06、0.08mmol/L的DL-多巴溶液，在纸芯片上测定其中左L-多巴的含量，其中L-多巴的理论含量为50％，检测结果得DL-多巴中L-多巴的含量为50.57％、52.12％、52.07％，L-多巴浓度检测结果与标注值误差在±5％内。
实施例7：
参见图8、9、10，结合步骤3、4：空白纳米金与L-Cys修饰纳米金表征
对空白纳米金和L-Cys修饰纳米金进行紫外可见光谱扫描得空白纳米金的最大吸收波 长为518nm，吸光度为0.5446，L-Cys修饰纳米金的最大吸收波长为520nm，吸光度0.5434， 出现红移，说明纳米金被L-Cys成功修饰；
对空白纳米金和L-Cys修饰纳米金进行粒径测定，空白纳米金的平均粒径是36.57nm (n＝3)，L-Cys修饰纳米金的平均粒径是47.49nm(n＝3)，粒径增大，可证明L-Cys已成功修饰到纳米金表面；
对空白纳米金和L-Cys修饰纳米金进行电位测定，空白纳米金的平均电位是-7.24mV， L-Cys修饰纳米金的平均电位是-14.7mV，电位降低，可以进一步证明纳米金被L-Cys修 饰。
确定L-Cys修饰纳米金加样量：先加载5mmol/LL-多巴溶液4.5μL，当L-Cys修 饰纳米金加载量为5、6、7μL时，溶液没有将圆形纸芯片铺满，8μL的L-Cys-AuNPs 刚好将圆形纸芯片铺满，显色效果较好。所以L-Cys修饰纳米金最佳的点样量为8μL左 右。
确定L-多巴加样量：在纸芯片上分别加载L-多巴溶液5μL、6μL、7μL、8μL、 9μL、10μL、11μL、12μL，固定L-Cys修饰纳米金的加样量8μL，每组均进行空 白校正，显色4min时间后用手机拍照扫描，用Photoshop软件分析Red通道和Blue通 道的mean值(pixels值约300)，得到Red/Blue，计算其绝对比值ΔR/B(减去空白比值)； L-多巴的加样量不同，显色不同，随着L-多巴上样量的增加，ΔR/B在不断增大，当L- 多巴与L-Cys修饰纳米金之比增大为11:8(v/v)，ΔR/B达到最大；当L-多巴的量继续 增加，ΔR/B反而减小，所以最佳加样量L-多巴与L-Cys-AuNPs比例为11:8(v/v)。
确定反应时间：精密移取手性多巴储备液200μL、FeCl3溶液400μL混合，分别反应1min、5min、10min、15min、20min，根据纸芯片上随时间变化显色强度变化，确定最佳 手性多巴检测反应时间为9min～11min；
确定pH值；精密移取手性多巴储备液200μL、FeCl3溶液400μL混合反应10min， 在纸芯片上与邻二氮菲等比例反应，pH不同，纸芯片上显色强度也随之变化，根据显色强 度变化，确定显色剂pH值为7.3～7.5。
Claims (8)
1.一种用于手性多巴测定的纸质微流控芯片，其特征在于：所述的微流控芯片的纸基采用空隙率低、孔径小、且分布均匀的色谱纸，在色谱纸上用打孔器进行打孔，打出实验所用的圆形纸芯片；所述的纸基孔隙率在65～85％之间；所述的纸基孔径在10μm～11μm之间；所述的色谱纸为：厚度180μm，基本重量88g/m2，空气流速10.5s/100mL/in2，灰份含量0.06％，拉伸模量39.1N/15mm，最低α-纤维素含量98％的纤维素纸。
2.一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：包括以下步骤：
步骤1：采用打孔器在色谱纸上进行打孔，打出实验所用的圆形纸芯片；
步骤2：检测前配制氯金酸溶液、柠檬酸钠溶液、L-半胱氨酸溶液、磷酸缓冲液和L-多巴溶液；
步骤3：制备纳米金；
步骤4：L-半光氨酸(L-Cys)修饰纳米金；
步骤5：分别在L-Cys-AuNPs加样量5～8μL、L-多巴加样量5～12μL、反应时间1-20min和反应pH 3～7.4条件下进行检测，得到最佳检测条件；
步骤6：检测前制作左旋多巴标准曲线；
步骤7：最低检测限测定；
步骤8：加样回收实验；
步骤9：重复性实验；
步骤10：实际样品测定。
3.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：结合步骤1、2、3、4、5、6，分别在L-Cys-AuNPs加样量5～8μL、L-多巴加样量5～12μL、反应时间1-20min和反应pH 3～7.4条件下进行检测，得到最佳检测条件。
4.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：步骤7中所述的“最低检测限试验”具体如下：
配制不同浓度的L-多巴溶液，在纸芯片上进行检测，随行空白校正，显色后，用Photoshop软件分析L-多巴与空白的Red通道和Blue通道的mean值，得到最低检测限为0.004mmol/L。
5.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：步骤8中所述的“加样回收实验”具体如下：
分别配制0.02、0.04、0.08mmol/L的L-多巴溶液标准品，依次加入所含L-多巴80％、100％、120％的对照品，在纸芯片上进行测定，得到低、中、高浓度时，纸芯片的加样回收率分别为99.0％、98.2％、101.0％，在98.21％-101.05％之间，工作曲线的准确性良好。
6.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：步骤9中所述的“手性多巴检测的重复性实验”具体如下：
配制浓度为0.02、0.04、0.06mmol/L L-多巴溶液在纸芯片上进行测定，随行空白实验，得到不同浓度的L-多巴的日内精密度为3.13％，日间精密为3.82％。实验结果在5％以内，重复性良好。
7.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：步骤10中所述的“实际样品测定”具体如下：
配制浓度为0.04、0.06、0.08mmol/L的DL-多巴溶液，在纸芯片上测定其中左L-多巴的含量，其中L-多巴的理论含量为50％，检测结果得DL-多巴中L-多巴的含量为50.57％、52.12％、52.07％，L-多巴浓度检测结果与标注值误差在±5％内。
8.根据权利要求2所述的一种用纸质微流控芯片对手性多巴进行含量测定的方法，其特征在于：步骤中3、4具体操作如下：
对空白纳米金和L-Cys修饰纳米金进行紫外可见光谱扫描得空白纳米金的最大吸收波长为518nm，吸光度为0.5446，L-Cys修饰纳米金的最大吸收波长为520nm，吸光度0.5434，出现红移，说明纳米金被L-Cys成功修饰；对空白纳米金和L-Cys修饰纳米金进行粒径测定，空白纳米金的平均粒径是36.57nm(n＝3)，L-Cys修饰纳米金的平均粒径是47.49nm(n＝3)，粒径增大，可证明L-Cys已成功修饰到纳米金表面；对空白纳米金和L-Cys修饰纳米金进行电位测定，空白纳米金的平均电位是-7.24mV，L-Cys修饰纳米金的平均电位是-14.7mV，电位降低，可以进一步证明纳米金被L-Cys修饰。
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Cited By (1)
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|---|---|---|---|---|
| CN113462684A (zh) * | 2021-07-30 | 2021-10-01 | 江南大学 | 一种基于纸芯片快速提取超纯dna的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101553471B1 (ko) * | 2014-03-06 | 2015-09-16 | 영남대학교 산학협력단 | L-도파 캡핑 금나노입자 제조방법 및 l-도파 캡핑 금나노입자를 이용한 망간이온 검출방법 |
| CN107930709A (zh) * | 2017-11-22 | 2018-04-20 | 厦门大学 | 一种纸芯片及其制备方法 |
| CN109738399A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-05-10 | 中南民族大学 | 一种可视化纸传感检测多巴胺的方法 |
| CN111044585A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-21 | 浙江大学 | 一种双试纸条左旋多巴检测系统及其方法 |
-
2020
- 2020-11-09 CN CN202011240027.XA patent/CN112683900B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101553471B1 (ko) * | 2014-03-06 | 2015-09-16 | 영남대학교 산학협력단 | L-도파 캡핑 금나노입자 제조방법 및 l-도파 캡핑 금나노입자를 이용한 망간이온 검출방법 |
| CN107930709A (zh) * | 2017-11-22 | 2018-04-20 | 厦门大学 | 一种纸芯片及其制备方法 |
| CN109738399A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-05-10 | 中南民族大学 | 一种可视化纸传感检测多巴胺的方法 |
| CN111044585A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-21 | 浙江大学 | 一种双试纸条左旋多巴检测系统及其方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 吴静 等: "纸基微流控芯片的研究进展及趋势", 中国造纸学报, vol. 33, no. 02, pages 57 - 64 * |
| 张剑 等: "纸芯片显色法用于L-半胱氨酸的快速测定", 分析测试学报, vol. 38, no. 4, pages 477 - 481 * |
| 赵甜甜 等: "基于纳米金催化的血清尿酸纸芯片的构建及应用", 高等学校化学学报, vol. 37, no. 05, pages 829 - 834 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113462684A (zh) * | 2021-07-30 | 2021-10-01 | 江南大学 | 一种基于纸芯片快速提取超纯dna的方法 |
| CN113462684B (zh) * | 2021-07-30 | 2023-09-05 | 江南大学 | 一种基于纸芯片快速提取超纯dna的方法 |
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