CN112679537B - 一种粉末大豆磷脂中游离糖、糖脂的去除方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种粉末大豆磷脂中游离糖、糖脂的去除方法，粉末大豆磷脂中游离糖、糖脂的去除方法包括以下步骤：粉末大豆磷脂原料加入有机溶剂溶解，再加入酶进行水解反应，以将粉末大豆磷脂中的甾醇糖苷分解为甾醇和游离糖，去除溶剂，得到第一混合液；往所述第一混合液加入极性溶剂溶解，得到第二混合液；将所述第二混合液中加入酮类溶剂，干燥，得到脱糖及脱糖脂的粉末大豆磷脂。该去除方法步骤简单，且能够有效去除粉末大豆磷脂中的游离糖和糖脂，消除其对高纯度大豆卵磷脂、大豆磷脂酰乙醇胺等产品应用上的副作用。

Description

一种粉末大豆磷脂中游离糖、糖脂的去除方法

技术领域

本发明涉及大豆磷脂领域，具体涉及一种粉末大豆磷脂中游离糖、糖脂的去除方法。

背景技术

粉末大豆磷脂原料中含有10-20%的游离糖和糖脂，导致精制的高纯度大豆卵磷脂、大豆磷脂酰乙醇胺(PE)中也含有游离糖和糖脂。游离糖和糖脂的存在会严重干扰精制磷脂产品在脂质体上的应用，使磷脂脂质体双分子层的自组装变得困难，易发生粒径增大、渗漏和解体等。游离糖和糖脂的存在还会影响磷脂医用乳液的稳定性，特别是甾醇糖脂中的甾醇糖苷（SG），当磷脂酰胆碱（PC）存在时，甾醇糖苷本身难溶于水、乙醇，在磷脂酰胆碱的作用下，其溶解或微溶于乙醇、水等溶剂中，含有甾醇糖脂的大豆卵磷脂与药物反应后，此时甾醇糖苷会析出、形成沉淀物或附着在乳液上，使乳液粒径变大、加速乳液破乳。此外，游离糖的某些糖类物质具有称为“外源性致热源”的致热性，当磷脂用于静脉输液，易引起输液反应。

因此，急需研究出一种能够有效去除粉末大豆磷脂中游离糖、糖脂的方法。

发明内容

基于此，有必要提供一种有效去除粉末大豆磷脂中游离糖及糖脂的方法。

为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种粉末大豆磷脂中游离糖及糖脂的去除方法，包括以下步骤：

粉末大豆磷脂原料加入有机溶剂溶解，再加入酶进行水解反应，以将大豆粉末磷脂中的甾醇糖苷分解为甾醇和游离糖，去除溶剂，得到第一混合液；

往所述第一混合液加入极性溶剂溶解，得到第二混合液；

将所述第二混合液中加入酮类溶剂，干燥，得到脱糖及脱糖脂的粉末大豆磷脂。

本实施方式的去除方法，步骤简单，能够有效去除粉末大豆磷脂中的游离糖、糖脂。

一实施方式中，所述有机溶剂为磷脂可溶性溶剂，所述有机溶剂包括石油醚、正己烷、二氯甲烷中的至少一种；

一实施方式中，所述有机溶剂用量为：每g粉末大豆磷脂使用大于5mL有机溶剂溶解。

一实施方式中，所述酶为胰脂酶、β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、淀粉酶中的至少一种；

一实施方式中，所述酶的用量为：每g粉末大豆磷脂使用5-20u酶；

一实施方式中，所述酶进行水解反应前先加入缓冲溶液溶解，所述缓冲溶液的pH为4.5-7.5，所述酶的加入量为有机溶剂体积的5-20%。

一实施方式中，所述水解反应的温度为30-50℃，时间为1-24h。

一实施方式中，所述水解反应还包括加入乳化剂的步骤，所述乳化剂包括PGPR、吐温80、司班20及X-100中的至少一种。

一实施方式中，所述极性溶剂包括水、甲醇水溶液及乙醇水溶液中的至少一种；所述极性溶剂的用量：为每g第一混合液中不超过3mL极性溶剂。

一实施方式中，往所述第一混合液加入极性溶剂溶解的操作为室温下搅拌5-20min。

一实施方式中，所述酮类溶剂包括丙酮及丁酮中的至少一种；及/或，所述酮类溶剂可分批加入或一次加入。

一实施方式中，所述干燥为真空干燥，所述干燥的温度不大于60℃，压力不大于-0.09MPa，时间不大于5小时。

一种脱糖、脱糖脂的粉末大豆磷脂，由上述方法制备得到。

该粉末大豆磷脂的游离糖和糖脂得到有效去除，消除其对高纯度大豆卵磷脂、大豆磷脂酰乙醇胺等产品应用上的副作用。

本发明实施例的优点将会在下面的说明书中部分阐明，一部分根据说明书是显而易见的，或者可以通过本发明实施例的实施而获知。

具体实施方式

为更好地说明本发明，便于理解本发明的技术方案，下面对本发明进一步详细说明。但下述的实施例仅仅是本发明的简易例子，并不代表或限制本发明的权利保护范围，本发明保护范围以权利要求书为准。

粉末大豆磷脂原料中含有10-20%的游离糖和糖脂，游离糖和糖脂的存在会严重干扰精制磷脂产品在脂质体上的应用，使磷脂脂质体双分子层的自组装变得困难，易发生粒径增大、渗漏和解体等。且游离糖和糖脂的存在还会影响磷脂医用乳液的稳定性，因此，为了有效去除粉末大豆磷脂原料中的游离糖和糖脂，本申请一实施方式提供一种粉末大豆磷脂中游离糖及糖脂的去除方法。本申请的甾醇糖脂分为甾醇糖苷（SG）和酰基甾醇糖苷（ASG）。

具体地，一种粉末大豆磷脂中游离糖、糖脂的去除方法，包括步骤S100~S300；

S100、粉末大豆磷脂原料加入有机溶剂溶解，再加入酶进行水解反应，以将大豆粉末磷脂中的甾醇糖苷分解为甾醇和游离糖，去除溶剂，得到第一混合液；

通过酶水解法能够将大豆粉末磷脂中的甾醇糖苷分解为甾醇和游离糖，以利于后续去除游离糖和甾醇。

具体地，有机溶剂为磷脂可溶性溶剂；具体的示例中，有机溶剂包括石油醚、正己烷、二氯甲烷中的至少一种；

进一步地，有机溶剂用量为每g粉末大豆磷脂使用大于5mL有机溶剂溶解。

具体地，粉末大豆磷脂原料加入有机溶剂溶解后，得到大豆磷脂溶液；再往大豆磷脂溶液中加入酶进行水解；

具体地，酶选自能水解甾醇糖苷的酶；具体的示例中，酶包括胰脂酶、β-葡萄糖苷酶、纤维素酶及淀粉酶中的至少一种；

其中，酶的用量为每g粉末大豆磷脂使用5-20u酶；酶的用量在此范围内能有效将甾醇糖苷水解为甾醇和游离糖；

需要说明的是，酶进行水解反应前先加入缓冲溶液溶解，缓冲溶液可以为柠檬酸盐缓冲液；进一步地，缓冲溶液的pH为4.5-7.5，酶的加入量为有机溶剂体积的5-20%。

在一些实施方式中，水解反应中还加入乳化剂，其中，乳化剂能够增加有机溶剂与缓冲液的接触面积，便于糖脂在缓冲液中的扩散，提高糖脂的水解率；具体地，乳化剂包括PGPR、吐温80、司班20及X-100中的至少一种；乳化剂的用量为粉末大豆磷脂原料的量的2%以下；

在一些实施方式中，水解反应的温度为30-50℃，例如可以为30℃、35℃、40℃、45℃或50℃；水解反应时间为1-24h。在此温度时间范围内，水解反应更完全。

在一些实施方式中，去除溶剂的方法可以采用旋蒸方法。

通过步骤S100得到的第一混合液含有游离糖、酰基甾醇糖苷、甾醇及磷脂等物质。

S200、往第一混合液加入极性溶剂溶解，得到第二混合液；其中第一混合液中的游离糖和酰基甾醇糖苷能够溶解于极性溶剂中；

在一些实施方式中，极性溶剂包括水、甲醇水溶液（水含量≥15%）、乙醇水溶液（水含量≥15%）中的至少一种；极性溶剂的用量：为每g第一混合液中不超过3mL极性溶剂。

在一些实施方式中，溶解的方法为室温下搅拌5-20分钟。

S300、将第二混合液中加入酮类溶剂，干燥，得到脱糖及脱糖脂的粉末大豆磷脂。

具体地，游离糖与酰基甾醇糖苷随着极性溶剂一起进入酮类溶剂中，而甾醇也溶解于酮类溶剂，而磷脂形成沉淀；酮类溶剂能够将磷脂与游离糖、酰基甾醇糖苷及糖脂分离；

在一些实施方式中，酮类溶剂包括丙酮及丁酮中的至少一种；

需要说明的是，酮类溶剂可分批加入或一次加入，具体的用量不设上限。更具体地，酮类溶剂加入量为每mL极性溶剂加入不小于3mL的酮类溶剂。

通过干燥可将溶解于酮类溶剂中的游离糖、酰基甾醇糖苷及糖脂进行去除，剩下磷脂成分；

在一些实施方式中，干燥为真空干燥，干燥的温度不大于60℃，压力不大于-0.09MPa，时间不大于5小时。

本实施方式的去除方法，步骤简单，能够有效去除粉末大豆磷脂中的游离糖、糖脂。

另一实施方式的粉末大豆磷脂，由上述去除方法制备得到，该粉末大豆磷脂的游离糖和糖脂得到有效去除，消除其对高纯度大豆卵磷脂、大豆磷脂酰乙醇胺等产品应用上的副作用。

以下通过具体的实施例进行说明。

实施例1

本实施例的粉末大豆磷脂中游离糖及糖脂的去除方法，包括以下步骤：

1）称取3g粉末大豆磷脂SPW（PC20-30%）于烧瓶中，加入78mL正己烷（料液比1:10）搅拌溶解，得到大豆磷脂溶液；往大豆磷脂溶液中加入0.021g PGPR，酶缓冲溶液（诺维信纤维素酶45U溶解于12mL柠檬酸盐缓冲液（pH4.8）），加入烧瓶中，在50℃水浴中搅拌反应8h，反应结束后旋蒸去除溶剂。

2）加入少量水（约3g左右）搅拌，然后加入30-60mL丙酮搅拌，丙酮沉淀物进行真空干燥，得到的即为脱除游离糖和糖脂后的磷脂；

该实施例的糖脂的脱除率≥85%，游离糖能全部去除。

实施例2

本实施例的粉末大豆磷脂中游离糖及糖脂的去除方法，包括以下步骤：

1）称取约3g 粉末大豆磷脂SPO（PE20-30%）于烧瓶中，加入78mL正己烷（料液比1:10）搅拌溶解，得到大豆磷脂溶液；往大豆磷脂溶液中加入0.027gPGPR，酶缓冲溶液（β-葡萄糖苷酶30U溶解于12mL柠檬酸盐缓冲液（pH4.8）），加入烧瓶中，在50℃水浴中搅拌反应8h，反应结束后旋蒸去除溶剂。

2）加入加少量水（约3g左右）搅拌，然后加入30-60mL丙酮搅拌，丙酮沉淀物进行真空干燥，得到的即为脱除游离糖和糖脂后的磷脂；

本实施例的糖脂的脱除率≥83.7%，游离糖能全部去除。

实施例3

本实施例的粉末大豆磷脂中游离糖及糖脂的去除方法，包括以下步骤：

1）称取约3g 粉末大豆磷脂SPO（PE20-30%）于烧瓶中，加入78mL石油醚（料液比1:10）搅拌溶解，得到大豆磷脂溶液；往大豆磷脂溶液中加入0.021gPGPR、酶用缓冲溶液（β-葡萄糖苷酶15U、诺维信纤维素酶22.5U溶解于12mL柠檬酸盐缓冲液（pH4.8））；加入烧瓶中，在50℃水浴中搅拌反应10h，反应结束后旋蒸去除溶剂，得到混合液；

2）往混合物加少量水（约3g左右）搅拌，然后加入30-60mL丙酮搅拌，丙酮沉淀物进行真空干燥，得到的即为脱除游离糖和糖脂后的磷脂；

本实施例的糖脂的脱除率≥84.7%，游离糖能全部去除。

实施例4

本实施例的粉末大豆磷脂中游离糖及糖脂的去除方法，包括以下步骤：

1）称取约3g 粉末大豆磷脂SPO（PE20-30%）于烧瓶中，加入30mL石油醚（料液比1:10）搅拌溶解，得到大豆磷脂溶液；往大豆磷脂溶液中加入0.03g吐温80、酶用缓冲溶液（β-葡萄糖苷酶15U、诺维信纤维素酶22.5U溶解于12mL柠檬酸盐缓冲液（pH4.8））；加入烧瓶中，在40℃水浴中搅拌反应18h，反应结束后旋蒸去除溶剂，得到混合液；

2）往混合物加少量水（约3g左右）搅拌，然后加入30-60mL丁酮搅拌，丁酮沉淀物进行真空干燥，得到的即为脱除游离糖和糖脂后的磷脂；

本实施例的糖脂的脱除率≥83%，游离糖能全部去除。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (5)

1.一种粉末大豆磷脂中游离糖、糖脂的去除方法，其特征在于，包括以下步骤：

粉末大豆磷脂原料加入有机溶剂溶解，再加入酶进行水解反应，以将大豆粉末磷脂中的甾醇糖苷分解为甾醇和游离糖，去除溶剂，得到第一混合液；

往所述第一混合液加入极性溶剂溶解，得到第二混合液；

将所述第二混合液中加入酮类溶剂，干燥，得到脱糖及脱糖脂的粉末大豆磷脂；

所述有机溶剂为磷脂可溶性溶剂，所述有机溶剂包括石油醚、正己烷、二氯甲烷中的至少一种；及/或，所述有机溶剂用量为：每g粉末大豆磷脂使用大于5mL有机溶剂溶解，所述酶为胰脂酶、β-葡萄糖苷酶、纤维素酶、淀粉酶中的至少一种；及/或所述酶的用量为：每g粉末大豆磷脂使用5-20u酶；及/或所述酶进行水解反应前先加入缓冲溶液溶解；

所述缓冲溶液的pH为4.5-7.5，所述酶的加入量为有机溶剂体积的5-20%，所述水解反应的温度为30-50℃，时间为1-24h，所述水解反应还包括加入乳化剂的步骤，所述乳化剂包括PGPR、吐温80、司班20及X-100中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的去除方法，其特征在于，所述极性溶剂包括水、甲醇水溶液及乙醇水溶液中的至少一种，所述极性溶剂的用量：为每g第一混合液中加入不超过3mL极性溶剂。

3.根据权利要求1所述的去除方法，其特征在于，往所述第一混合液加入极性溶剂溶解的操作为室温下搅拌5-20min。

4.根据权利要求1所述的去除方法，其特征在于，所述酮类溶剂包括丙酮及丁酮中的至少一种；及/或，所述酮类溶剂可分批加入或一次加入。

5.根据权利要求1所述的去除方法，其特征在于，所述干燥为真空干燥，所述干燥的温度不大于60℃，压力不大于-0.09MPa，时间不大于5小时。