CN112675823B - 一种糖蛋白分子印迹纳米粒子及其合成方法 - Google Patents

Abstract

一种糖蛋白分子印迹纳米粒子及其合成方法，属于分析化学领域，涉及分子印迹聚合物的合成。所述合成方法包括以下步骤：首先将模板糖蛋白分子配制成溶液相A，功能单体和交联剂配制成溶液相B，引发剂配制成溶液相C；其次把溶液相A、B和C分别固定在三个流速可调微流控注射泵上，溶液相A和B通过Y型三通阀连接混合，该混合液与溶液相C通过另一个Y型三通阀连接混合，流入反应器进行聚合反应；最后在反应器末端收集聚合纳米粒子，去除糖蛋白模板分子后，即得糖蛋白分子印迹纳米粒子。本发明采用微流控的方式制备糖蛋白分子印迹纳米粒子，操作简单，可实现连续化生产，所得分子印迹纳米粒子能够用于特异性识别目标糖蛋白分子。

Description

一种糖蛋白分子印迹纳米粒子及其合成方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，涉及分子印迹纳米粒子的合成，具体涉及一种糖蛋白分子印迹纳米粒子及其合成方法。

背景技术

分子印迹聚合物（Molecularly Imprinted Polymer, MIP），是一种具有特殊分子识别能力的高分子聚合物，其选择性识别能力的形成原理是：先将模板分子与功能单体通过共价键或非共价作用形成复合物，随后加入交联剂和引发剂获得分子印迹预聚液；然后，引发聚合反应获得含有模板分子的高分子聚合物；最后，移除聚合物中的模板分子，从而在聚合物中会留下与模板分子形状互补的印迹空腔，该空腔中还保留有功能单体的作用官能团，因此该印迹空腔对模板分子具有选择性识别能力。由于分子印迹聚合物制备简单、成本低、稳定性高、使用寿命长、可大规模生产，在分离科学、生物传感、药物递送、模拟酶催化等领域已经展现出重要的应用价值 [L. Ye, K. Haupt, Anal. Bioanal. Chem. 378(2004) 1887-1897; L.X. Chen, X.Y. Wang, W.H. Lu, X.Q. Wu, J.H. Li, Chem. Soc. Rev. 45 (2016) 2137-2211; J.M. Pan, W. Chen, Y. Ma, G.Q. Pan, Chem. Soc. Rev.47 (2018) 5574-5587]。

近十几年来，糖蛋白分子印迹纳米粒子受到重点关注，可用于替代生物抗体，进行重要糖蛋白分子如癌症标志物甲胎蛋白（AFP）和肿瘤细胞表面糖蛋白的特异性识别 [S.Xu, L. Wang, Z. Liu, Angew. Chem. Int. Ed. (2020) https://doi.org/10.1002/anie.202005309]。糖蛋白分子印迹纳米粒子的合成方法主要有以下几种：（1）沉淀聚合法，属于非均相聚合反应，一般需要通过搅拌进行混合，过度搅拌或未搅拌通常会导致聚合物粒子团聚或形成凝胶，难以获得均匀的聚合物纳米粒子，而且需要对预聚液的组成进行充分优化；（2）乳液聚合法，需要制备均一分散而且稳定的油包水型或Pickering型乳液；（3）固相表面印迹法，通过共价可逆反应固载模板分子（比如硼酸功能单体与糖蛋白的硼亲和共价可逆反应）在纳米粒子表面，然后在纳米粒子表面制备一层聚合物，去除模板分子后即可获得分子印迹纳米粒子，但是该方法对聚合反应的类型和条件要求较高，而且需要预先合成功能纳米粒子。

发明内容

解决的技术问题：针对现有技术中存在常规搅拌反应液扩散不均匀产生颗粒团聚现象、聚合反应的类型和条件要求较高等问题，本发明提出了一种糖蛋白分子印迹纳米粒子及其合成方法，所述合成方法能够获得尺寸更加均匀的糖蛋白分子印迹纳米粒子，并且能够实现糖蛋白分子印迹纳米粒子的连续化生产。另外，所采用的溶胶凝胶聚合反应能够在常温下进行，节省能源成本；所用苯硼酸功能单体由醛基苯硼酸和氨基硅烷化试剂一步反应合成，制备过程简单。

技术方案：一种糖蛋白分子印迹纳米粒子的合成方法，所述方法包括以下步骤：

步骤一. 配制不同的溶液相，将模板分子溶于溶液中配制成溶液相A，功能单体和交联剂溶于溶液中配制成溶液相B，引发剂溶于溶液中配制成溶液相C，其中所述模板分子为糖蛋白，所述功能单体为硼酸硅烷化试剂，所述交联剂为正硅酸乙酯，所述引发剂为氨水，所述溶液为水和乙醇的混合液，所述功能单体和模板分子的摩尔比为(10~3000):1，模板分子的浓度为0.001~0.01 mM，交联剂的浓度为100~1000 mM，引发剂浓度1~10 M，溶液中乙醇含量为5~70 vt.%；

步骤二. 把溶液相A、B和C分别固定在三个流速可调微流控注射泵上，溶液相A和B通过Y型三通阀连接后混合，该混合液与溶液相C通过另一个Y型三通阀连接混合得预聚液，预聚液最后流入反应器进行聚合反应，在反应器末端收集聚合纳米粒子，其中所述溶液相A、B和C的流速比为1:1: (0.2~1)，溶液相A的流速为1~10 mL/h，所述反应器为内径200~1000 μm、长度为5 m的毛细管；

步骤三. 用洗脱溶液去除步骤二中含有模板分子的纳米粒子中的模板分子，得到糖蛋白分子印迹纳米粒子。

作为优选，所述步骤一中硼酸硅烷化试剂通过醛基苯硼酸和氨基硅烷化试剂按照摩尔比1:1在乙醇中一步反应获得。

作为优选，所述步骤一中功能单体和模板分子摩尔比为2519:1，模板分子的浓度为0.0056 mM，交联剂的浓度为 800 mM，引发剂浓度6.5 M，溶液相A中溶剂的乙醇含量为30vt.%，溶液相B中溶剂的乙醇含量为70 vt.%，溶液相C中溶剂的乙醇含量为70 vt.%。

作为优选，所述步骤一中交联剂为四乙氧基硅烷或四甲氧基硅烷。

作为优选，所述步骤一中模板分子为卵清白蛋白。

作为优选，所述步骤二中溶液相A、B和C的流速比为1:1:1，A的流速为 5~7 mL/h。

作为优选，所述步骤二中的反应器为内径250、500或800 μm的毛细管，材质是聚四氟乙烯或石英。

作为优选，所述醛基苯硼酸为2-醛基苯硼酸、3-醛基苯硼酸、4-醛基苯硼酸或含有氟取代基的醛基苯硼酸。

作为优选，所述氨基硅烷化试剂为3-氨基丙基-三乙氧基硅烷、3-氨基丙基-三甲氧基硅烷、3-(2-氨基乙基氨基)丙基-三甲氧基硅烷或二乙烯三胺基丙基-三甲氧基硅烷。

上述方法合成的糖蛋白分子印迹纳米粒子。

有益效果：1. 与现有技术相比，本发明提出的微流控合成糖蛋白分子印迹纳米粒子的技术，操作更加简单，能够实现连续化生产，纳米粒子的尺寸形貌更加均匀而且更加容易调控，在微流控反应器中，传质以扩散为主，这与传统间歇式反应器中的湍流混合有很大不同，更易于获得形貌均一的聚合物；微流控反应器具有大的比表面积，保证反应系统的传热均匀性和高传热效率；体积小，使用溶剂少，安全性高；易于高通量放大和连续生产，并能够实现在线反应监测；另外，还可以通过控制流速、管径和流体温度实现非湍流和层流流动。

2. 本发明所采用的聚合反应是溶胶-凝胶硅胶聚合反应，反应条件温和，模板分子蛋白质能够保持稳定的空间结构，印迹效率更高，有利于提升糖蛋白分子印迹纳米粒子的选择性。

3. 本发明所述方法中的功能单体是苯硼酸功能化单体，能够和糖蛋白的糖链反应形成硼亲和可逆共价键，因此能够通过使用酸性溶液较容易地洗脱糖蛋白模板分子。

4. 本发明所用苯硼酸硅烷化试剂是利用氨基硅烷化试剂与醛基苯硼酸的席夫碱反应一步合成所得，操作简单，无需纯化。

5. 现有技术中固相合成分子印迹法（Solid-phase synthesis of molecularlyimprinted nanoparticles, Nature Protocols, 11(2016)443-455），是将模板分子固载在材料表面制备分子印迹纳米粒子以便于洗脱模板分子，该方法所得分子印迹纳米粒子的产率极低 (0.1%左右)，而本发明所述方法采用了自由模板分子印迹预聚液配方，并利用苯硼酸与糖蛋白的可逆共价键反应，结合溶胶凝胶聚合反应的优势，极大提高了分子印迹纳米粒子的产率（>10%），而且模板分子容易通过酸性溶液洗脱。

6. 现有技术中固相表面印迹法是将模板分子固载到纳米粒子表面通过聚合一层一定厚度的聚合物形成分子印迹纳米粒子，固相表面印迹法对聚合反应的反应条件和操作人员技术要求较高，需要可控厚度，不能将模板分子完全包埋，而本发明所述方法属于一锅法，无需提前制备纳米粒子和固载模板分子，操作简单，重现性高，无需特别技术人员。

附图说明

图1为本发明所述糖蛋白分子印迹纳米粒子合成方法示意图；

图2为本发明实施例1和2以及对比例4中糖蛋白分子印迹纳米粒子的扫描电镜图和动态光散射粒径分布图，图中（a）为实施例1制备的糖蛋白分子印迹纳米粒子的扫描电镜图，（b）为实施例2制备的糖蛋白分子印迹纳米粒子的扫描电镜图，（c）为对比例4制备的糖蛋白分子印迹纳米粒子的扫描电镜图，（d）为实施例1和2以及对比例4中糖蛋白分子印迹纳米粒子的动态光散射粒径分布图；

图3为实施例1-3以及对比例4中糖蛋白分子印迹纳米粒子及其对照纳米粒子对目标模板分子卵清白蛋白的吸附量柱状图；

图4为实施例1-3以及对比例4中糖蛋白分子印迹纳米粒子对卵清白蛋白（OVA）及其他蛋白质（辣根过氧化物酶（HRP，糖蛋白）和牛血清白蛋白（BSA，非糖蛋白））的吸附量对比图；

图5为实施例1中糖蛋白分子印迹纳米粒子（MIP-800）对不同浓度（1, 5, 10, 20,40, 80和200 μM）卵清白蛋白（OVA）的吸附等温线。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细说明。

实施例1

本实施例采用内径为800 μm、长度为5 m的聚四氟乙烯毛细管微流控反应器。所述功能单体为苯硼酸硅烷化试剂，其制备方法如下：将3-甲酰基苯硼酸 (FPBA，7.5 mg，0.5mmol) 溶于25 mL乙醇中，然后加入3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES，120 μL，0.5 mmol)，在室温条件下搅拌反应12 h，最后在真空条件下通过旋转蒸发仪去除溶剂乙醇，即得到苯硼酸硅烷化试剂FPBA-APTES，无需纯化即可作为功能单体用于制备糖蛋白分子印迹聚合物。所用到的洗脱溶液为100 mM醋酸溶液（含60%甲醇，v/v）醋酸溶液。

按照以下步骤制备卵清白蛋白分子印迹纳米粒子，其合成工艺图参见图1：

步骤一. 配制不同的溶液相，将卵清白蛋白 (1 mg, 22.47 nmol) 溶于4.0 mL30 vt.%乙醇水溶液中配制成溶液相A，功能单体FPBA-APTES (20 mg, 56.6 μmol) 和交联剂TEOS (675 μL, 3.2 mmol) 溶于3.55 mL 70 vt.%乙醇水溶液中配制成溶液相B，引发剂氨水(27.3 mmol)溶于4.2 mL 70 vt.%乙醇水溶液中配制成溶液相C。（本步骤中溶液相A中乙醇含量如果高于50%，蛋白质容易沉淀，会降低分子印迹效率；溶液相B和溶液相C中乙醇含量如果低于50%，交联剂和引发剂的溶解性不是很好，产品产率会降低）

步骤二. 把溶液相A、B和C分别固定在三个流速可调微流控注射泵上，溶液相A和B通过Y型三通阀连接混合，该混合液与溶液相C通过另一个Y型三通阀连接混合得预聚液，预聚液最后流入反应器进行聚合反应，在反应器末端收集聚合纳米粒子，其中所述溶液相A、B和C的流速比为1:1:1，A的流速为7 mL/h。

步骤三. 用洗脱溶液去除步骤二中含有模板分子的纳米粒子中的模板分子，把纳米粒子分散到洗脱液中，在摇床上摇4 h，然后离心倒掉溶液，重复上述操作，直到最后通过测定洗脱液的上清液，确定上清液中无模板分子，即说明模板被洗脱干净，得到糖蛋白分子印迹纳米粒子。

本实施例中制备的糖蛋白分子印迹纳米粒子命名为MIP-800。制备得到的MIP-800的产率为37.0%。

实施例2

同实施例1，区别在于，本实施例中聚四氟乙烯毛细管微流控反应器的内径为500μm。

本实施例中制备的糖蛋白分子印迹纳米粒子命名为MIP-500。制备得到的MIP-500的产率为17.8%。

实施例3

同实施例1，区别在于，本实施例中聚四氟乙烯毛细管微流控反应器的内径为250μm。

本实施例中制备的糖蛋白分子印迹纳米粒子命名为MIP-250。制备得到的MIP-250的产率为13.6%。

对比例1

同实施例1，区别在于，不使用模板分子卵清白蛋白，即所述步骤一中溶液相A是30vt.%乙醇水溶液。

本对比例中制备的分子印迹纳米粒子命名为NIP-800，产率为33%。

对比例2

同实施例2，区别在于，不使用模板分子卵清白蛋白，即所述步骤一中溶液相A是30vt.%乙醇水溶液。

本对比例中制备的分子印迹纳米粒子命名为NIP-500，产率为19.4%。

对比例3

同实施例3，区别在于，不使用模板分子卵清白蛋白，即所述步骤一中溶液相A是30vt.%乙醇水溶液。

本对比例中制备的分子印迹纳米粒子命名为NIP-250，产率为15.5%。

对比例4

本对比例不采用微流控反应器，将微流控反应器替换为25 mL的圆底烧瓶。

卵清白蛋白分子印迹纳米粒子的合成方法具体步骤如下：

步骤一. 配制不同的溶液相，将卵清白蛋白 (1 mg, 22.47 nmol) 溶于4.0 mL30 vt.%乙醇水溶液中配制成溶液相A，功能单体FPBA-APTES (20 mg, 56.6 μmol) 和交联剂TEOS (675 μL, 3.2 mmol) 溶于3.55 mL 70 vt.%乙醇水溶液中配制成溶液相B，引发剂氨水(27.3 mmol)溶于4.2 mL 70 vt.%乙醇水溶液中配制成溶液相C。

步骤二. 一次把溶液相A、溶液相B和溶液相C加入圆底烧瓶中，同时使用磁力搅拌器在900 转每分钟的转速下搅拌反应，反应12 h后，通过离心收集聚合物纳米粒子。

步骤三. 用洗脱溶液去除步骤二中含有糖蛋白模板分子的纳米粒子中的模板分子，得到糖蛋白分子印迹纳米粒子。

本对比例中制备的糖蛋白分子印迹纳米粒子命名为MIP-S。制备得到的MIP-S的产率为35.2%。实施例1和2以及对比例4中糖蛋白分子印迹纳米粒子的扫描电镜图和动态光散射粒径分布图参见图2，从图中可以看出三种MIPs均是微球形状，其中三者的平均粒径大小是MIP-500（274 nm）< MIP-800（421 nm）< MIP-S（577 nm），说明微流控合成的糖蛋白分子印迹纳米粒子具有较小的尺寸，而且能够通过改变毛细管反应器的内径调控产物纳米粒子的尺寸大小。

对比例5

同对比例4，区别在于，不使用模板分子卵清白蛋白，即所述步骤一中溶液相A是30vt.%乙醇水溶液。

本对比例中制备的分子印迹纳米粒子命名为NIP-S，产率为34.2%。

对比例6

同实施例1，区别在于，步骤二中流速可调微流控注射泵中溶液相A的流速为5 mL/h，制得产品的产率为35.0%。

实施例4

对实施例1-3及对比例1-5制备的产品进行选择性评价测试。

称取5 mg的MIP-800或MIP-500或MIP-250或MIP-S及其对比纳米粒子（NIP-800或NIP-500或NIP-250或NIP-S），分别分散到含有20 μM模板分子（卵清白蛋白）的1 mL磷酸盐缓冲液中（10mM，pH=8）中，振荡反应5 h，离心取得上清液，采用紫外吸收法定量测试，计算获得纳米粒子的吸附量，图中吸附量（μmol/g）=（吸附前的OVA浓度（μmol/L） - 吸附后上清液的OVA浓度（μmol/L））/聚合物浓度（g/L）。如图3所示，所有MIPs的吸附量均高于它们对应的聚合物吸附量，MIP-800，MIP-500，MIP-250和MIP-S的印迹因子分别为1.4, 1.3, 1.4和1.1，MIP-S的印迹因子明显低于MIP-800，MIP-500和MIP-250，可见微流控合成的MIP选择性高于常规搅拌合成，证实了微流控合成技术的优越性。

实施例5

对实施例1-3及对比例4制备的产品的特异性进行测定。

分别称取5 mg的MIP-800、MIP-500、MIP-250和MIP-S，分散到含有20 μM卵清白蛋白（OVA）或牛血清蛋白（BSA）或辣根过氧化物酶（HRP）的1 mL磷酸盐缓冲液中（10mM，pH=8）中，振荡反应5 h，离心取得上清液，采用紫外吸收法定量测试，计算获得纳米粒子的吸附量，图中吸附量（μmol/g）=（吸附前的蛋白质浓度（μmol/L） - 吸附后上清液的蛋白质浓度（μmol/L））/聚合物浓度（g/L）。如图4所示，MIP-800，MIP-500，MIP-250和MIP-S均对模板糖蛋白OVA有吸附，而对蛋白质BSA和HRP几乎没有吸附，并且微流控合成的糖蛋白分子印迹纳米粒子的吸附量高于搅拌合成的糖蛋白分子印迹纳米粒子的吸附量，证明微流控合成的所有MIPs均具有超高的特异性。

实施例6

对实施例1制备的卵清白蛋白分子印迹纳米粒子（MIP-800）的平衡吸附等温线进行测定。

称取5 mg的MIP-800，分别分散到含有1, 5, 10, 20, 40, 80和200 μM模板分子（卵清白蛋白）的1 mL磷酸盐缓冲液中（10 mM，pH=8）中，振荡反应5 h，离心取得上清液，采用紫外吸收法定量测试，计算获得纳米粒子的吸附量，图中吸附量（μmol/g）=（吸附前的OVA浓度（μmol/L）- 吸附后上清液的OVA浓度（μmol/L））/聚合物浓度（g/L）。如图5所示，MIP-800对OVA的吸附量随着OVA浓度的增高不断增加，直到达到吸附平衡，根据拟合曲线可以看出，MIP-800对OVA的吸附容量达到3.2 μmol/g (144 mg/g)。

实施例7

本实施例中功能单体为硼酸硅烷试剂（PBA- AAPTES），交联剂为正硅酸乙酯，模板分子为卵清白蛋白，溶剂为水和乙醇的混合液。功能单体的制备方法如下：首先，在常温条件下，通过搅拌将3-甲酰基苯硼酸PBA (7.5 mg, 0.5 mmol)溶于15mL乙醇中，然后加入AAPTES (108 μL, 0.5 mmol)，在干燥处室温持续搅拌反应过夜，最后在真空条件下通过旋转蒸发仪去除溶剂乙醇，即得到PBA-AAPTES，无需纯化即可作为功能单体用于制备分子印迹硅胶聚合物。

所述分子印迹硅胶纳米粒子的制备方法，参见图1，包括以下步骤：

步骤一. 配制不同的溶液相，将卵清白蛋白 (1 mg, 22.47 nmol) 溶于4.0 mL30 vt.%乙醇水溶液中配制成溶液相A，功能单体 PBA-AAPTES (20 mg, 56.6 μmol) 和交联剂TEOS (675 μL, 3.2 mmol) 溶于3.55 mL 70 vt.%乙醇水溶液中配制成溶液相B，引发剂氨水(27.3 mmol)溶于4.2 mL 70 vt.%乙醇水溶液中配制成溶液相C。

步骤二. 把溶液相A、B和C分别固定在三个流速可调微流控注射泵上，溶液相A和B通过Y型三通阀连接混合，该混合液与溶液相C通过另一个Y型三通阀连接混合得预聚液，预聚液最后流入反应器进行聚合反应，在反应器末端收集聚合纳米粒子，其中所述溶液相A、B和C的流速比为1:1:1，A的流速为7 mL/h。

步骤三. 用洗脱溶液去除步骤二中含有模板分子的纳米粒子中的模板分子，得到糖蛋白分子印迹纳米粒子。

实施例8（FPBA-APTES）

同实施例7，区别在于，本实施例中功能单体为（FPBA-APTES），其制备方法如下：首先，在常温条件下通过搅拌将3-氟-4-醛基苯硼酸FPBA (8.4 mg, 0.5 mmol)溶于15 mL乙醇中，然后加入APTES (120 μL, 0.5 mmol)，在干燥处室温持续搅拌反应过夜，最后在真空条件下通过旋转蒸发仪去除溶剂乙醇，即得到FPBA-APTES，无需纯化即可作为功能单体用于制备分子印迹硅胶聚合物；另外，所述步骤一中溶液相B是由功能单体FPBA-APTES (20mg, 50.5 μmol) 和交联剂TEOS (675 μL, 3.2 mmol) 溶于3.55 mL 70 vt.%乙醇水溶液中配制而成。

Claims (6)

1.一种糖蛋白分子印迹纳米粒子的合成方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤一. 配制不同的溶液相，将模板分子溶于溶液中配制成溶液相A，功能单体和交联剂溶于溶液中配制成溶液相B，引发剂溶于溶液中配制成溶液相C，其中所述模板分子为糖蛋白，所述功能单体为硼酸硅烷化试剂，所述交联剂为正硅酸乙酯，所述引发剂为氨水，所述溶液为水和乙醇的混合液，所述功能单体和模板分子的摩尔比为(10~3000):1，模板分子的浓度为0.001~0.01 mM，交联剂的浓度为100~1000 mM，引发剂浓度1~10 M，溶液中乙醇含量为5~70 vt.%，硼酸硅烷化试剂通过醛基苯硼酸和氨基硅烷化试剂按照摩尔比1:1在乙醇中一步反应获得，功能单体和模板分子摩尔比为2519:1，模板分子的浓度为0.0056 mM，交联剂的浓度为 800 mM，引发剂浓度6.5 M，溶液相A中溶剂的乙醇含量为30 vt.%，溶液相B中溶剂的乙醇含量为70 vt.%，溶液相C中溶剂的乙醇含量为70 vt.%，模板分子为卵清白蛋白；

步骤二. 把溶液相A、B和C分别固定在三个流速可调微流控注射泵上，溶液相A和B通过Y型三通阀连接后混合，该混合液与溶液相C通过另一个Y型三通阀连接混合得预聚液，预聚液最后流入反应器进行聚合反应，在反应器末端收集聚合纳米粒子，其中所述溶液相A、B和C的流速比为1:1: (0.2~1)，溶液相A的流速为1~10 mL/h，所述反应器为内径200~1000 μm的毛细管；

步骤三. 用洗脱溶液去除步骤二中含有模板分子的纳米粒子中的模板分子，得到糖蛋白分子印迹纳米粒子。

2.根据权利要求1所述的一种糖蛋白分子印迹纳米粒子的合成方法，其特征在于，所述步骤二中溶液相A、B和C的流速比为1:1:1，A的流速为 5~ 7 mL/h。

3.根据权利要求1所述的一种糖蛋白分子印迹纳米粒子的合成方法，其特征在于，所述步骤二中的反应器为内径250、500或800 μm的毛细管，材质是聚四氟乙烯或石英。

4.根据权利要求1所述的一种糖蛋白分子印迹纳米粒子的合成方法，其特征在于，所述醛基苯硼酸为2-醛基苯硼酸、3-醛基苯硼酸、4-醛基苯硼酸或含有氟取代基的醛基苯硼酸。

5.根据权利要求1所述的一种糖蛋白分子印迹纳米粒子的合成方法，其特征在于，所述氨基硅烷化试剂为3-氨基丙基-三乙氧基硅烷、3-氨基丙基-三甲氧基硅烷、3-(2-氨基乙基氨基)丙基-三甲氧基硅烷或二乙烯三胺基丙基-三甲氧基硅烷。

6.权利要求1~5中任一所述的方法合成的糖蛋白分子印迹纳米粒子。

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