CN112673096A - 含有优良事件ee-gm4的植物,和用于在生物样品中识别所述事件的方法和试剂盒,以及其处理 - Google Patents

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Abstract

本发明提供特定的转基因大豆植物、植物材料和种子,其特征在于这些在大豆基因组中的特定位置处具有特定的线虫抗性和除草剂耐受性优良转化事件,并且还提供用化合物和/或生物防治剂或其混合物处理的所述植物、材料和种子。还提供允许在生物样品中快速且明确地识别所述事件的工具。

Description

含有优良事件EE-GM4的植物,和用于在生物样品中识别所述 事件的方法和试剂盒,以及其处理
相关申请的交叉引用
本申请要求2018年5月25日提交的第62/676,434号美国临时申请和2018 年6月18日提交的第62/686,662号美国临时申请权利,以上申请的内容以全文引用的方式并入本文中。
技术领域
本发明涉及转基因大豆植物、植物材料和种子,其特征在于在大豆基因组中的特定位置处具有赋予线虫抗性和除草剂耐受性的特定转化事件,用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物处理。本发明还涉及用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物处理的种子,并且涉及改良包含至少如所描述的优良事件的大豆产率的方法,其中大豆植物或种子或其中生长或打算生长大豆植物或种子的土壤用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物处理。在不存在一种或多种HPPD抑制剂除草剂或线虫侵染的情况下,在等效于相应非转化大豆遗传背景的不同遗传背景中,本发明的大豆植物组合线虫抗性和除草剂耐受性表型与农学性能、遗传稳定性和功能性。
背景技术
转基因在植物中的表型表达通过一种或多种基因自身的结构或其在植物基因组中的位置来确定。同时,基因组中的不同位置处转基因或“插入T-DNA”的存在将以不同方式影响植物的总体表型。农学上或工业上,通过遗传操纵成功地在植物中引入商业上令人感兴趣的性状可为取决于不同因素的冗长程序。经遗传转化的植物的实际转化和再生仅是一系列选择步骤中的第一个,所述步骤包括大量遗传表征、渐渗和田间试验中的评价,最终引起优良事件的选择。
鉴于对新颖食品/饲料的讨论、GMO和非GMO产品的区分和专有材料的识别,优良事件的明确识别变得越来越重要。理想地,所述识别方法既快又简单,而不需要大量的实验室设置。此外,所述方法应提供允许在没有专家解释的情况下明确地确定优良事件,但必要时经得起专家审查的结果。本文描述了用于识别生物样品中的优良事件EE-GM4的特定工具。
在本发明中,EE-GM4已被识别为是线虫抗性大豆(Glycine max)的开发中来自转基因大豆植物群体的优良事件,所述大豆包含编码4-羟基苯基丙酮酸双加氧酶(HPPD)抑制剂耐受性的基因,并结合了赋予线虫抗性的基因,每个基因都在植物可表达的启动子的控制下。
使用HPPD抑制剂除草剂(如异恶唑草酮(IFT)、苯吡唑草酮或硝磺草酮 (MST)除草剂),种植线虫抗性和除草剂耐受性大豆EE-GM4变种为种植者提供线虫和杂草防除的新颖选项。HPPD抑制剂除草剂为大豆种植者提供替代的杂草防除选项,帮助管理问题杂草物种,并且作为替代作用模式工具帮助减缓除草剂抗性杂草的扩散。
大豆孢囊线虫(Soybean cyst nematode,SCN)大豆异皮线虫(Heteroderaglycines)(Ichinohe)是大豆生产的全球性问题,对生产者构成持续威胁。自1954 年从北卡罗来纳州的一个县在美国首次检测到以来,SCN已传播到美国几乎每个大豆生产州,且估计在美国造成的年度产量损失超过12亿美元,使其成为那里最具破坏力的大豆病原体。SCN最早于1990年代初在巴西检测到,并且此后已传播到整个南美,并且是巴西最重要的病原体之一,几乎在所有巴西种植地区造成了损失。类似地,SCN持续在中国大豆产区传播,其中在15个省检测到,且产量损失估计超过1.2亿美元。在美国爱荷华州进行的一项多年研究(2001年到2015年)中,几乎所有SCN抗性的大豆品种都含有来自PI 88788的SCN抗性,所述研究发现这些年来SCN群体的毒性增加了,使得季末SCN群体密度增加且具有PI88788来源抗性的SCN抗性大豆品种产率减少(Mitchum(2016),《植物病理学(Phytopathology)》106(12):1444-1450,Allen等人(2017)《植物健康进展(Plant Health Progr.)》18:19-27,Arias等人(2017)见万维网地址:researchgate.net/publication/266907703_RESISTANCE_TO_SOYBEAN_CYST_N EMATODE_GENETICS_AND_BREEDING_IN_BRAZIL;McCarville等人(2017) 《植物健康进展》18:146-155)。
根部病变线虫(root lesion nematode)短尾短体线虫(Pratylenchusbrachyurus) 已成为大豆中越来越重要的病原体。它具有广泛的宿主范围,并广泛分布于热带和亚热带地区,尤其是在巴西,非洲和美国南部。短尾短体线虫已成为巴西塞拉多(Cerrado)地区棉花和大豆种植者的关注焦点,且被认为是所述地区大豆的主要线虫病原体。在大豆中,这种线虫可使产率降低30到50%,并且在沙质土壤上观察到更大的破坏。使用抗性大豆品种将是防治这种线虫的最好方法,但是,迄今尚未识别出对短尾短体线虫具有抗性的大豆品种。尽管已经针对短尾短体线虫抗性研究了若干大豆基因型,并且识别了一些耐受性增加的栽培品种,但由于这种线虫是多食性的并且与其宿主没有紧密的相互作用,因此难以针对短尾短体线虫培育抗性栽培品种(Machado(2014)《当前农业科技(Current Agricultural Science and Technology)》20:26-35;Antonio等人(2012)《维拉镇侵染有根部病变线虫地区的土壤效率损失(Soil productivity losses in areainfested by the nematoid of the root lesions in Vera,MT.)》于:巴西大豆协会(Brazilian Congress of Soy),6,2012,库亚巴(Cuiabá)摘要.隆德里纳(Londrina):大豆Embrapa (Embrapa Soja),第4页;Rios等人(2016)《农村科学(Ciência Rural)》46:580–584;Lima等人,2017,以下书籍中的第6章:《大豆-产率、生物质量和产率基础(Soybean-TheBasis of Yield,Biomass and Productivity)》;Minobu Kasai编, ISBN 978-953-51-3118-2,印刷ISBN 978-953-51-3117-5,InTech;Inomoto等人 (2011)《以植物枢纽控制为中心的作物演替:群体变异,致病性和损失估算 (
Figure BDA0002911161790000031
de culturas sob
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central para controle de fitonematoides:
Figure BDA0002911161790000033
populacional,patogenicidadee estimativa de perdas)》《热带植物病理学(Tropical Plant Pathology)》36:178-185)。
已知保护植物免受线虫(如SCN)的侵害可以帮助植物更好地应对其它压力,如土壤组成/内含物,天气条件,病原体压力,除草剂施用等。特别是当所述其它压力产生易于发现的表型,如叶失绿/黄化时,更容易看到SCN防治的效果,而在其它情况下SCN侵害通常对种植者来说是“不可见的”。举例来说,当大豆植物患有猝死综合征(SDS)或缺铁失绿症(IDC)时,针对SCN的保护将产生更绿或SDS/IDC症状较不严重的植物。尽管进行了广泛的研究和品种筛选工作,但铁缺乏仍然是美国中北部大型大豆生产地区的一项挑战。由于在易缺铁的土壤上扩大大豆生产以及与收割系统变化的可能相互作用,这个问题的重要性已经提高。铁缺乏出现在具有高pH值和碳酸盐的土壤中,但是铁缺乏的表达在空间中是高度可变的,这是由于其与空间可变的土壤特性,如水分含量、盐度、铁的可用性和其它微量营养素和金属浓度的相互作用所致。此外,铁缺乏表达与生物因素(如固氮、害虫、疾病)和管理诱导的压力(如除草剂施用)相互作用。品种选择是控制铁缺乏的最重要手段,但由于与失绿耐受性相关的环境相互作用,选择品种会因基因型庞大而复杂化(Hansen等人(2004)《土壤科学植物营养(Soil Sci.Plant Nutr.)》50(7):983-987)。
大豆猝死综合征(SDS)于1971年在阿肯色州首次发现,且此后在美国大部分大豆种植地区得到证实。SDS是一种真菌疾病,其也与大豆孢囊线虫(SCN) 以复合疾病形式出现。SDS是美国最具破坏力的土壤传播大豆疾病之一。当在 SCN存在下发生这种疾病时,症状会更早出现,并且更加严重。SDS是由茄病镰刀菌(Fusarium solani)复合种群组内的土壤传播真菌引起的。在北美,病菌枝状镰刀菌(Fusarium virguliforme),以前的茄病镰刀菌大豆专化型(Fusarium solani f.sp.glycines),为致病因子。在南美,巴西镰刀菌(F.brasiliense)、楔形台镰刀菌(F.cuneirostrum)、图库曼镰刀菌(F.tucumaniae)和病菌枝状镰刀菌引起SDS症状。尽管已经研发了对SDS较不敏感的大豆栽培品种,但尚无高抗性的栽培品种。真菌可在种植后不久侵染大豆幼苗的根部,但是直到大豆植物达到生殖阶段,SDS的地上症状很少出现。真菌在根部产生毒素,所述毒素易位到叶。SDS的第一个明显症状是上部叶片黄化和脱叶。如果疾病在季节的早期发展,花朵和幼荚就会败育。当疾病发展较晚时,植物每荚产生的种子更少或产生的种子更小。重度疾病发展越早,产率下降越多。由于SDS真菌可以在土壤中长期存在,因此在每个生长季节,更大面积的田地将会展示出疾病症状,直到大部分田地都受到影响(Westphal等人(2008).《大豆猝死综合征(Sudden DeathSyndrome of Soybean)》.《植物健康指导(The Plant Health Instructor)》.数字对象标识符:10.1094/PHI-I-2008-0102-01,见万维网地址: apsnet.org/edcenter/intropp/lessons/fungi/ascomycetes/Pages/SuddenDeath.aspx)。
目前,没有商业化的针对线虫抗性经遗传工程改造的大豆植物。所属领域中已公开了包含一种或多种除草剂耐受性基因的大豆植物。WO2006/130436描述一种草甘膦耐受性大豆事件,其包含epsps基因,并且WO2011/034704描述一种麦草畏(dicamba)耐受性大豆事件。WO2012/082548描述了包含hppd和pat 基因两者的大豆植物。WO2011/063411描述对HPPD抑制剂和草甘膦具有耐受性的大豆事件,而WO2011/063413描述对HPPD抑制剂、草铵膦和草甘膦具有耐受性的大豆植物。WO2011/066384描述对2,4-D和草铵膦具有耐受性的大豆事件,而WO2012/075426描述对2,4-D、草铵膦和草甘膦具有耐受性的大豆事件,且WO2017/059795描述对草甘膦具有耐受性的大豆事件。WO2009/064652 描述了对鳞翅目(lepidopteran)昆虫具有抗性的大豆事件,并且WO2013/016527 描述了对鳞翅目昆虫具有抗性且具有草铵膦耐受性的大豆事件。
赋予改良的HPPD抑制剂除草剂耐受性的HPPD基因和蛋白质已公开于例如WO2015138394、WO2015135881、WO2014043435中,且Cry蛋白质的杀线虫活性已描述于例如WO2010027805、WO2010027809、WO2010027804、 WO2010027799、WO2010027808和WO2007147029中。
现有技术公开均未教示或提出用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物处理的包含线虫活性Cry基因的大豆中的优良事件,并且当然也没有用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物处理的包含线虫活性Cry基因以及赋予HPPD抑制剂耐受性的基因的大豆中的优良事件。
所属领域中已知,在大豆植物中获得具有可接受的农学性能的商业优良转化事件绝非易事。
发明内容
本发明涉及一种经处理的转基因大豆植物、其植物部分、种子、细胞或组织,或其中生长或打算生长植物或种子的经处理的土壤(接着在所述土壤中种植或播种所述植物或种子),其包含稳定整合到其基因组中的表达盒,所述表达盒包含有包含cry14Ab-1.b基因的编码序列的线虫抗性基因和包含hppdPf-4Pa基因的编码序列的除草剂耐受性基因(如本文中实例1.1中所描述并且如分别在SEQ ID No.7和9中所表示),其提供对植物寄生线虫(如大豆孢囊线虫)的抗性和对HPPD抑制剂除草剂(如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮)的耐受性。在不存在HPPD抑制剂除草剂和线虫压力的情况下,所述大豆植物具有大体上等效于非转基因等基因品系的农学性能。当遇到影响田地中的植物性能的大豆孢囊线虫(SCN)压力时,与非转基因植物相比,本发明的植物将具有优良农学表型。此外,在杂草存在下,在提供耐受性的HPPD抑制剂除草剂施用之后,与未用除草剂处理的植物相比,本发明的植物将具有优良农学表型。在一个实施例中,本发明还涉及用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理的所述植物或种子,并且涉及改良包含至少如所描述的优良事件的大豆产率的方法,其中大豆植物或种子或其中生长或打算生长大豆植物或种子的土壤用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或其混合物处理。在一个实施例中,所述经处理的植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源 PI 88788、PI 548402、PI209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
根据本发明,大豆植物或其种子、细胞或组织包含优良事件EE-GM4(在本文中也描述为“本发明的(优良)事件”)。在一个实施例中,优良事件EE-GM4 包含SEQ ID No.1、3、5或24中的任一个的序列,或SEQ ID No.2、4、6或25 中的任一个的序列。在一个实施例中,EE-GM4包含SEQ ID No.1、3、5或24 中的任一个的序列和SEQ ID No.2、4、6或25中的任一个的序列,和SEQ ID No.7的cry14Ab-1.b编码序列和SEQ ID No.9的hppdPf-4Pa编码序列。在一个实施例中,优良事件EE-GM4为插入在大豆基因组中的特定位置处的外来DNA (或插入T-DNA),如以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的参考种子中所含有。在一个实施例中,EE-GM4中的所述插入T-DNA包含嵌合Cry14Ab-1编码基因和HPPD-4编码基因。在另一实施例中,所述事件的特征在于SEQ ID No.1或3 的5'交接序列,或SEQ ID No.2或4的3'交接序列;或SEQID No.1或3的5' 交接序列,以及SEQ ID No.2或4的3'交接序列。在一个实施例中,当使用与分别包含SEQ ID No.12和SEQ ID No.13的核苷酸序列的两个引物的聚合酶链反应(本文中的“PCR”)分析时,含有EE-GM4的基因组DNA产生126bp的 DNA片段。在一个实施例中,当使用与分别包含SEQ ID No.20和SEQ ID No. 21的核苷酸序列的两个引物的PCR分析时,含有EE-GM4的基因组DNA产生 90bp的DNA片段。在一个实施例中,本发明还涉及用如本文所描述的化合物和/或生物防治剂或其混合物中的一种或多种处理的所述植物或种子,尤其还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332 或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种的所述植物或种子。
在本文的一个实施例中,提供一种各自在其基因组中包含优良事件EE-GM4 的大豆植物、其细胞、植物部分、种子或后代,包含所述事件的参考种子已以保藏号PTA-123624保藏于ATCC。在一个实施例中,包含EE-GM4的植物或种子可通过用从以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的种子生长的大豆植物繁殖和/ 或育种获得。在一个实施例中,本发明涉及用如本文所描述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理的所述植物或种子,并且在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表 1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI88788、 PI 548402、PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
更确切地说,本发明涉及一种转基因大豆植物、其植物部分、花粉、种子、细胞或组织,其基因组DNA的特征在于以下事实:当在如本文所述的使用至少两个引导到由EE-GM4的5'或3'T-DNA侧接区的一部分和插入T-DNA的一部分形成的区域的引物的PCR中分析时,扩增对事件EE-GM4具有特异性的片段。引物可以被引导抵靠SEQ ID NO:6或SEQ ID NO.25内的3'T-DNA侧接区或其下游并且与其邻接的大豆植物基因组DNA,和其上游并且与其邻接的插入 T-DNA。引物还可以被引导抵靠SEQ ID NO:5或SEQ ID NO.24内的5'T-DNA 侧接区或其上游并且与其邻接的大豆植物基因组DNA,和其下游并且与其邻接的插入T-DNA。在一个实施例中,所述引物分别包含以下或(基本上)由以下组成:SEQ ID NO:12和SEQ ID NO:13或SEQ ID NO.20和SEQ ID NO.21或 SEQ ID NO.26和SEQ ID NO.28或SEQ ID NO.27和SEQID NO.29的核苷酸序列(例如包含以下的引物对:在其极端3'端处含有SEQ ID NO:12的核苷酸序列的引物和在其极端3'端处含有SEQ ID NO:13的核苷酸序列的引物;或包含以下的引物对:在其极端3'端处含有SEQ ID No.20的核苷酸序列的引物和在其极端3'端处含有SEQ ID No.21的核苷酸序列的引物;或包含以下的引物对:在其极端3'端处含有SEQ IDNO:26的核苷酸序列的引物和在其极端3'端处含有 SEQ ID NO:28的核苷酸序列的引物;或包含以下的引物对:在其极端3'端处含有SEQ ID NO:27的核苷酸序列的引物和在其极端3'端处含有SEQ ID NO:29的核苷酸序列的引物)并且产生50bp与1000bp之间的DNA片段,如126bp或90bp的片段。
包含本发明的优良事件(在本文中也称为EE-GM4)的参考种子已经以登录号PTA-123624保藏于ATCC。本发明的一个实施例是以登录号PTA-123624保藏的种子中所含的优良事件EE-GM4,其在被引入大豆植物时将提供对线虫的抗性和对除草剂的耐受性,尤其对大豆孢囊线虫(大豆异皮线虫,本文的“SCN”) 和/或病变线虫(如本文所用,病变线虫指短体线虫属种大豆害虫线虫,包括但不限于短尾短体线虫)的抗性,和对HPPD抑制剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮的耐受性。本发明的具有EE-GM4的植物还防治根结线虫(rootknot nematode)(如本文所用,根结线虫是指根结线虫属种(Meloidogyne spp.)大豆害虫线虫,包括但不限于南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、花生根结线虫(Meloidogyne arenaria)、北方根结线虫(Meloidogyne hapla)或爪哇根结线虫(Meloidogyne javanica)或其任何组合)、肾形线虫(肾形肾状线虫(Rotylenchulusreniformis))和兰斯线虫(Lance nematode)(纽带线虫属种(Hoplolaimus spp.),如哥伦布纽带线虫(H.columbus)、帽状纽带线虫(H.galeatus)和大针纽带线虫(H.magnistylus))。本发明中包括此事件的微小变体,如:具有HPPD抑制剂耐受性和SCN线虫抗性的大豆事件,其具有与如以保藏号PTA-123624保藏于 ATCC的种子中所含有的EE-GM4的核苷酸序列具有至少90%、至少95%、至少98%、至少99%、至少99,5%或至少99,9%序列一致性的核苷酸序列;或具有 HPPD抑制剂耐受性和SCN线虫抗性的大豆事件,其具有与如ATCC保藏号 PTA-123624的所保藏种子中所含有的EE-GM4的核苷酸序列1到200、1到150、1到100、1到75、1到50、1到30、1到20、1到10或1到5个核苷酸不同的核苷酸序列,或具有与由以下连续核苷酸序列(5'到3')形成的核苷酸序列1到200、1到150、1到100、1到75、1到50、1到30、1到20、1到10或 1到5个核苷酸不同的核苷酸序列:SEQ ID No.5或SEQ IDNo.24、SEQ ID No. 11核苷酸位置188到核苷酸位置7368和SEQ ID No.6或SEQ ID No.25。在一个实施例中,EE-GM4包含与由以下连续核苷酸序列(5'到3')形成的序列具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99,5%或至少99,9%序列一致性的核苷酸序列:SEQ ID No.5或24、SEQ ID No.11核苷酸位置188 到核苷酸位置7368和SEQ IDNo.6或25。由于天然遗传变异,同源DNA序列中的单个DNA碱基差异和小插入和缺失(例如单核苷酸多态性(SNP))常见于相同物种的植物中(Zhu等人(2003)《遗传学(Genetics)》163:1123-1134)。
ATCC保藏号PTA-123624的种子为对于本发明的优良事件EE-GM4纯合的转基因种子的纯种子批次,其将生长成线虫抗性植物,借此植物还耐受HPPD抑制剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮。可播种可从所保藏的种子获得的种子或后代种子(例如,在与具有不同遗传背景的其它大豆植物杂交之后),且种子或生长的植物可如本文所述用HPPD抑制剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮处理,或可如本文所述测试EE-GM4的存在,以获得包含本发明的优良事件的植物。本发明进一步涉及来自从保藏于ATCC具有登录号PTA-123624的种子生长的包含本发明的优良事件的植物的细胞、种子、组织、后代和子代。本发明进一步涉及可从包含本发明的优良事件的大豆植物获得(例如通过繁殖和/或育种)的植物(如从保藏于ATCC具有登录号PTA-123624的种子生长的植物,或包含位于SEQ ID No.1、3、5或24的序列与SEQ ID No.2、4、 6或25的序列之间的SEQ ID No.9的hppdPf-4Pa编码序列和SEQ ID No.7的 cry14Ab-1.b编码序列的植物,或包含位于SEQ ID No.1、3或5的序列中的任一个与SEQ ID No.2、4或6中的任一个的序列之间的SEQ ID No.9的HPPD编码序列和SEQ ID No.7的cry14Ab-1.b编码序列的植物)。本发明还涉及从以上植物或种子获得且包含SEQ ID No.1的序列和SEQ ID No.2的序列或SEQ ID No.3的序列和SEQ ID No.4的序列或SEQ ID No.5的序列和SEQ ID No.6的序列或SEQ ID No.24的序列和SEQ ID No.25的序列的后代植物和种子。在一个实施例中,本发明还涉及用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或其混合物中的一种或多种处理的所述植物或种子。在另一实施例中,本发明涉及所述植物或种子,其还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
可以使用本文中所描述的基于转基因植物、细胞或组织中的表征DNA序列或所述DNA序列编码的氨基酸的存在的方法来识别包含优良事件EE-GM4的转基因植物或其细胞或组织。根据本发明的一个优选实施例,所述表征DNA序列为包含事件插入位点的15bp或至少15bp、优选地20bp或至少20bp、最优选地30bp或更大的序列,即,含有含有HPPD抑制剂和线虫抗性转基因的插入T-DNA的一部分和与其邻接的延伸到大豆植物基因组中的5'或3'T-DNA侧接区的一部分的序列,其允许优良事件的特异性识别。
本文还描述了用于识别生物样品中的优良事件EE-GM4的方法,所述方法是基于特异性地识别5'和/或3'T-DNA侧接序列和与其邻接的插入T-DNA的引物或探针。本文还包括识别EE-GM4(例如以识别其特定表征序列)的任何其它方法,如全或部分(定向)基因组测序。
本文提供一种用于识别生物样品中的优良事件EE-GM4的方法,其包含使用与至少两个引物的聚合酶链反应或与至少两个引物和探针的聚合酶链反应,扩增存在于所述生物样品中的核酸的序列,其中这些引物中的一个识别EE-GM4 中的5'或3'T-DNA侧接区,另一引物识别T-DNA内的序列,其包含与所述5'或 3'T-DNA侧接区邻接的除草剂耐受性和线虫抗性基因;优选地获得大小为50bp 到1000bp的DNA片段。在一个实施例中,第一引物识别EE-GM4中的5'T- DNA侧接区,并且第二引物识别T-DNA内的序列,其包含与所述5'T-DNA侧接区邻接且在其下游的除草剂耐受性和线虫抗性基因,或第一引物识别EE-GM4 中的3'T-DNA侧接区,并且第二引物识别T-DNA内的序列,其包含与所述3'T- DNA侧接区邻接且在其上游的除草剂耐受性和线虫抗性基因,以获得优良事件EE-GM4特有的DNA片段。在一个实施例中,所述聚合酶链反应方法进一步包含使用识别由所述引物扩增的DNA,例如包含插入T-DNA的一部分和EE-GM4 中侧接所述T-DNA的DNA的一部分的交接DNA的探针(在事件的5'或3'侧,在适用时,如包含本文中SEQ ID No.14或22的核苷酸序列的探针),以便检测由所述引物产生的扩增产物。引物可分别识别EE-GM4的5'T-DNA侧接区内的序列(SEQ ID No.5核苷酸位置1到核苷酸位置227或SEQ ID No.24核苷酸位置1到核苷酸位置1058)或EE-GM4的3'T-DNA侧接区内的序列(SEQ ID No. 6核苷酸位置254到核苷酸位置501或SEQ ID No.25核苷酸位置254到核苷酸位置1339的互补序列)和插入T-DNA内的序列(SEQ ID No.5核苷酸位置228 到398或SEQ ID No.6核苷酸位置1到核苷酸位置253或SEQ ID No.23核苷酸位置1059到核苷酸位置8663或其互补序列)。识别5'或3'T-DNA侧接区的引物可包含SEQ IDNo.13、SEQ ID No.21、SEQ ID No.26或SEQ ID No.27的核苷酸序列,且识别插入T-DNA内的序列的引物可包含本文所述的SEQ ID No. 12、SEQ ID No.20、SEQ ID No.28或SEQ IDNo.29的核苷酸序列。本文还描述了一种事件特异性引物对和使用所述引物对扩增的特定DNA,如所属领域的普通技术人员可以获得,或如可以获自商业来源。
用于识别生物样品中的优良事件EE-GM4的方法可包含使用与以下的聚合酶链反应扩增存在于生物样品中的核酸的序列:分别包含或(基本上)由SEQ ID No.12和SEQ IDNo.13的核苷酸序列组成的两个引物,以获得126bp DNA 片段;或分别包含或(基本上)由SEQ ID No.20和SEQ ID No.21的核苷酸序列组成的两个引物,以获得90bp DNA片段。
本文中还描述EE-GM4的特定T-DNA侧接序列,其可以用于产生在生物样品中EE-GM4的特异性识别方法。所述特定T-DNA侧接序列还可以在识别分析中用作参考防治材料。更确切地说,本发明涉及EE-GM4的5'和/或3'T-DNA侧接区,其可以用于产生如本文进一步描述的特异性引物和探针。还适用作参考材料的是核酸分子,优选地,约150bp到850bp,其包含可以通过引物扩增的序列,所述引物包含或(基本上)由SEQ ID No.12和SEQ ID No.13或SEQ ID No.20和SEQ ID No.21的核苷酸序列组成。
本文中描述基于使用所述特异性引物或探针在生物样品中识别EE-GM4的存在的方法。引物可包含以下、由以下组成或基本上由以下组成:17到约200 个连续核苷酸的核苷酸序列,其选自SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227或SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058的核苷酸序列,或SEQ ID 6核苷酸254到核苷酸501的核苷酸序列的互补序列或SEQ ID No.25核苷酸254到核苷酸1339 的核苷酸序列的互补序列;与包含以下、由以下组成或基本上由以下组成的引物组合:17到约200个连续核苷酸的核苷酸序列,其选自SEQ ID No.11核苷酸17到核苷酸7621或SEQ ID No.23核苷酸位置1059到核苷酸位置8663的核苷酸序列,如17到约200个连续核苷酸的核苷酸序列,其选自SEQ ID No.5核苷酸228到核苷酸398的核苷酸序列或SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸235的核苷酸序列或其互补序列、或SEQ ID No.11核苷酸17到核苷酸7621的核苷酸序列或其互补序列。引物还可包含位于其极端3'端处的这些核苷酸序列,并且进一步包含不相关序列或来源于所提及的核苷酸序列但包含错配的序列。在一个实施例中,如本文所使用的引物还可以与目标DNA或其互补序列一致,其中所述目标DNA是含有来自不同来源的核苷酸序列的杂交物,其在自然界中不以所述组合出现。
本文还提供了用于识别生物样品中的优良事件EE-GM4的试剂盒,所述试剂盒包含至少一个特异性识别EE-GM4中5'或3'T-DNA侧接区和与其邻接的包含除草剂耐受性和线虫抗性基因的插入T-DNA的引物对或探针。
除特异性地识别EE-GM4的5'或3'T-DNA侧接区的引物之外,这些试剂盒可包含特异性地识别EE-GM4的插入T-DNA内包含HPPD抑制剂除草剂耐受性和线虫抗性基因的序列的第二引物,以用于PCR识别方案。这些试剂盒可以包含至少两种特异性引物,其中的一种识别EE-GM4的5'T-DNA侧接区内的序列或EE-GM4的3'T-DNA侧接区内的序列,并且另一种识别插入T-DNA内包含HPPD抑制剂除草剂耐受性和线虫抗性基因的序列。识别5'T-DNA侧接区的引物可包含SEQ ID No.21的核苷酸序列,且识别插入T-DNA的引物可包含SEQ ID No.20的核苷酸序列,或识别3'T-DNA侧接区的引物可包含SEQ ID No.13 的核苷酸序列,且识别插入T-DNA的引物可包含SEQ ID No.12的核苷酸序列,或如本文所述的任何其它引物或引物组合。所述试剂盒可以进一步包含探针,其识别位于识别5'T-DNA侧接区的引物和识别插入T-DNA内的序列的引物之间的序列,或识别识别3'T-DNA侧接区的引物和识别插入T-DNA内的序列的引物之间的序列,如包含SEQ ID No.14的序列的探针或包含SEQ ID No.22的序列的探针。
用于识别生物样品中的优良事件EE-GM4的试剂盒还可包含PCR引物,其包含以下或(基本上)由以下组成:用于本文所述的EE-GM4 PCR方案中的SEQ ID No.12和SEQ IDNo.13的核苷酸序列,或SEQ ID No.20和SEQ ID No.21 的核苷酸序列。包含有包含或(基本上)由SEQ ID No.12和SEQ ID No.13的核苷酸序列组成的引物的所述试剂盒可以进一步包含有包含或(基本上)由SEQ ID No.14的核苷酸序列组成的探针,并且包含有包含或(基本上)由SEQ ID No. 20和SEQ ID No.21的核苷酸序列组成的引物的所述试剂盒可以进一步包含有包含或(基本上)由SEQ ID No.22的核苷酸序列组成的探针。所述试剂盒可进一步包含缓冲剂和试剂,如以下化合物中的任一种或每一种:dNTP、(Taq)DNA 聚合酶、MgCl2、稳定剂和任选地染料。
一种用于识别生物样品中的优良事件EE-GM4的试剂盒还可包含特异性探针,其包含或(基本上)由与EE-GM4的特定区域具有80%到100%序列一致性的序列对应(或互补)的序列组成,其中所述特定区域包含EE-GM4的5'或3' T-DNA侧接区的一部分和与其邻接的插入T-DNA的一部分。在一个实施例中,探针的序列对应于特定区域,所述特定区域包含EE-GM4的5'或3'T-DNA侧接区的一部分和与其邻接的插入T-DNA的一部分。最优选地,特异性探针包含或 (基本上)由与SEQ ID No.1、3或5中的任一个的序列具有80%到100%序列一致性的序列,或与SEQ ID No.2、4或6中的任一个的序列具有80%到100%序列一致性的序列组成(或与其互补)。在一个实施例中,特异性探针包含或(基本上)由与SEQ ID No.5的序列的至少50个连续核苷酸的一部分具有80%到 100%序列一致性的序列,或与SEQ ID No.6的序列的至少50个连续核苷酸的一部分具有80%到100%序列一致性的序列组成(或与其互补),其中SEQ ID No. 5或6的所述部分中的每一种包含插入T-DNA的序列和长度大约相等的T-DNA 侧接序列。
本文还描述DNA分子,其包含EE-GM4的T-DNA侧接序列和插入T-DNA 的足够长度的多核苷酸,以便可用作检测EE-GM4的引物或探针,或表征包含事件EE-GM4的植物。所述序列可包含至少9、至少10、至少15、至少20或至少30个核苷酸中的任一种,或可分别在交接位点的每一侧包含T-DNA侧接序列的9、10、15、20或30个核苷酸中的任一种和EE-GM4的插入T-DNA的类似数目的核苷酸,和这在EE-GM4事件的5'和3'交接位点中的任一种或两者处。最优选地,所述DNA分子包含SEQ ID No.1、3或5中的任一个的序列或SEQ ID No.2、4或6中的任一个的序列。在一个实施例中,所述DNA分子包含SEQ ID No.23、24或25的序列。在本发明的一个方面中,提供包含所述特定DNA 分子的大豆植物和种子。
本文所公开的方法和试剂盒可以用于不同目的,如但不限于以下:识别植物、植物材料或产品(如但不限于包含或来源于植物材料的食品或饲料产品(新鲜或加工))中EE-GM4的存在或确定其(较低)阈值;另外或替代地,本发明的方法和试剂盒可以用于识别转基因植物材料以用于在转基因与非转基因材料之间进行区分的目的;另外或替代地,本发明的方法和试剂盒可用于测定包含EE-GM4的植物材料的质量(即,纯材料百分比)。
本文还提供从包含优良事件EE-GM4的植物获得的基因组DNA,确切地说,包含EE-GM4事件特异性序列的基因组DNA,如EE-GM4交接序列中的一个或两个(含有T-DNA侧接DNA的一部分和与其邻接的插入T-DNA,对EE- GM4具有特性),举例来说,SEQ ID No.1、3、5或24的序列中的任一个和/或 SEQ ID No.2、4、6或25的序列中的任一个。所述基因组DNA可以用作本文所述的识别分析中的参考防治材料。
本文还提供一种转基因线虫抗性和除草剂耐受性大豆植物,或其细胞、部分、种子或后代,其各自包含至少一种优良事件,所述优良事件包含插入T-DNA,所述插入T-DNA包含:
i)第一嵌合基因,其包含来源于苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的在植物可表达的启动子的控制下编码Cry14Ab-1蛋白质的cry14Ab-1.b基因,如包含植物可表达的启动子和SEQ ID No.7的编码序列的嵌合基因,以及
ii)第二嵌合基因,其包含来自假单胞菌(Pseudomonas)的在植物可表达的启动子的控制下编码更耐受性HPPD酶的经修饰hppdPf-4Pa基因,如包含植物可表达的启动子和SEQ ID No.9的编码序列的嵌合体。在一个实施例中,本发明还涉及用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理的所述植物或种子。在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332或PI437654的 SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
在一个实施例中,优良事件EE-GM4包含紧接在所述插入T-DNA上游并且与其邻接的SEQ ID No.5的核苷酸1到227或SEQ ID No.24的核苷酸1到 1058,和紧接在所述插入T-DNA下游并且与其邻接的SEQ ID No.6的核苷酸 254到501或SEQ ID No.25的核苷酸254到1339。
在另一实施例中,所述优良事件可通过用由以保藏号PTA-123624保藏于 ATCC的包含所述事件的参考种子生长的大豆植物培育来获得。
在另一实施例中,所述大豆植物或其细胞、部分、种子或后代的基因组DNA 当使用与分别包含SEQ ID No.12和SEQ ID No.13的核苷酸序列的两种引物的 PCR分析时,产生126bp的DNA片段,或当使用与分别包含SEQ ID No.20和 SEQ ID No.21的核苷酸序列的两种引物的PCR分析时,产生90bp的DNA片段。
本文还提供一种在生物样品中识别具有线虫抗性,如SCN和/或短体线虫和 /或根结和/或肾形线虫抗性,和对HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮的耐受性的转基因大豆植物或其细胞、部分、种子或后代的方法,所述方法包含使用与至少两个引物的聚合酶链反应从存在于生物样品中的核酸扩增50bp与150bp之间的DNA片段,所述引物中的一个识别优良事件 EE-GM4的5'T-DNA侧接区,所述5'T-DNA侧接区包含SEQ IDNo.5核苷酸1 到核苷酸227或SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058的核苷酸序列,或识别所述优良事件的3'T-DNA侧接区,所述3'T-DNA侧接区包含SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸691的互补序列的核苷酸序列,或SEQ ID No.25核苷酸254 到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列,所述引物的另一引物识别插入T-DNA 内的序列,其包含SEQ ID No.5核苷酸228到核苷酸398的互补序列的核苷酸序列或SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸253的核苷酸序列,或其中所述插入T- DNA包含SEQ ID No.11核苷酸位置17到核苷酸位置7621的核苷酸序列或其互补序列。
本文还提供一种用于在生物样品中识别具有线虫抗性和对HPPD抑制剂除草剂的耐受性的转基因大豆植物或其细胞、部分、种子或后代的试剂盒,所述试剂盒包含识别优良事件EE-GM4的5'T-DNA侧接区的一个引物,所述5'T-DNA 侧接区包含SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227的核苷酸序列或SEQ ID No.24 核苷酸1到核苷酸1058的核苷酸序列,或识别所述优良事件的3'T-DNA侧接区的一个引物,所述3'T-DNA侧接区包含SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸 501的互补序列的核苷酸序列,或SEQ ID No.25核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列;和识别插入T-DNA内的序列的一个引物,所述插入T- DNA包含SEQ IDNo.5核苷酸228到核苷酸398的互补序列的核苷酸序列或 SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸253的核苷酸序列,或所述插入T-DNA包含 SEQ ID No.11核苷酸位置17到核苷酸位置7621的核苷酸序列或其互补序列。
在一个实施例中,如本文所使用的优良事件EE-GM4的插入T-DNA包含 SEQ IDNo.5核苷酸228到核苷酸398的核苷酸序列或其互补序列,和SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸501的核苷酸序列或其互补序列,或包含与SEQ ID No.11核苷酸位置17到核苷酸位置7621的核苷酸序列或其互补序列具有至少 95、98、99、99.5或99.9%序列一致性的序列。
本文还提供一种大豆植物、植物细胞、组织或种子,其在其基因组中包含核酸分子,所述核酸分子包含SEQ ID No.1、3、5或24中的任一个的核苷酸序列或与其80到100%序列一致性的核苷酸序列和/或SEQ ID No.2、4、6或25,或与其80到100%序列一致性的核苷酸序列,和与SEQ ID No.11核苷酸位置188 到核苷酸位置7368的核苷酸序列或其互补序列具有至少80、85、90、95、97、 98、99、99.5或至少99.9%序列一致性的核苷酸序列,其中所述植物、植物细胞、组织或种子用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。在一个实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI88788、PI 548402、PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
本文还提供核酸分子的用途,所述经分离核酸分子包含与SEQ ID No.7的核苷酸序列或其互补序列具有至少90%、至少95%、至少98%或至少99%序列一致性的核苷酸序列,或经分离核酸分子包含在标准严格度条件下与SEQ ID No. 7的核苷酸序列或其互补序列杂交的核苷酸序列,其中所述核酸分子编码对孢囊线虫和/或病变线虫和/或根结线虫和/或肾形线虫,如大豆异皮线虫和/或短尾短体线虫和/或南方根结线虫和/或肾形肾状线虫具有活性的杀线虫毒素,组合如本文所描述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种,以便确保针对所述线虫的增加的保护和/或延迟或防止线虫抗性的产生。在一个实施例中,所述核酸分子可操作地连接到包含(异源)植物可表达的启动子的核酸分子以便形成嵌合基因。本文还提供经转化的植物或种子中所述核酸分子的用途,所述经转化的植物或种子用所述化合物和/或生物防治剂或混合物处理以防治植物病原性线虫。本文进一步提供一种防治根结线虫,如南方根结线虫、花生根结线虫、北方根结线虫或爪哇根结线虫,尤其南方根结线虫的方法,其包含使用Cry14Ab蛋白质或编码Cry14Ab蛋白质的DNA或含有在植物可表达的启动子的控制下的所述DNA的植物或种子,其中所述Cry14Ab蛋白质为包含SEQ ID No.8的氨基酸序列的蛋白质或与其具有至少96%或至少98或至少99%序列一致性的蛋白质,或包含SEQ ID No.8氨基酸位置1到氨基酸位置706的氨基酸序列的蛋白质,或与其具有至少96%或至少98或至少99%序列一致性的蛋白质,其中所述用途还包括本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物对包含所述(DNA编码)所述Cry蛋白质的植物或种子的用途。本文进一步提供一种防治肾形线虫 (肾形肾状线虫)的方法,其包含使用Cry14Ab蛋白质或编码Cry14Ab蛋白质的 DNA或含有在植物可表达的启动子的控制下的所述DNA的植物或种子,其中所述Cry14Ab蛋白质为包含SEQ ID No.8的氨基酸序列的蛋白质或与其具有至少96%或至少98%或至少99%序列一致性的蛋白质,或包含SEQ ID No.8氨基酸位置1到氨基酸位置706的氨基酸序列的蛋白质,或与其具有至少96%或至少98%或至少99%序列一致性的蛋白质,其中所述用途还包括本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物对包含所述(DNA编码)所述Cry蛋白质的植物或种子的用途。
本文还提供一种核酸分子,其包含SEQ ID No.11核苷酸位置131到核苷酸位置7941的核苷酸序列或与其具有至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%序列一致性的核苷酸序列,其中所述核酸分子编码杀线虫Cry14Ab 蛋白质和对HPPD抑制剂具有耐受性的HPPD蛋白质,其中所述用途还包括本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物对包含所述(DNA编码)所述Cry蛋白质的植物或种子的用途。在一个实施例中,所述核酸分子编码SEQ ID No.8 的蛋白质或与其至少99%一致的蛋白质和SEQ ID No.10的蛋白质或与其至少 99%一致的蛋白质。
本文还提供一种大豆植物、种子或细胞,其在其基因组中在所定义的基因座包含为外来DNA或插入T-DNA的优良事件EE-GM4,其中优良事件EE-GM4 如以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的参考种子中所含有,其中所述插入T- DNA包含嵌合Cry14Ab-1编码基因和嵌合HPPD-4编码基因,且其中所述优良事件的特征在于SEQ ID No.1或3的5'交接序列和SEQID No.2或4的3'交接序列;或为种子细胞的所述细胞,或所述细胞,其中所述细胞的基因组DNA当使用与分别包含SEQ ID 12和SEQ ID 13的核苷酸序列的两种引物的PCR分析时,产生126bp的DNA片段,其中所述植物、种子或细胞用本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物处理。
在一个实施例中,优良事件EE-GM4如以保藏号PTA-123624保藏于ATCC 的参考种子中所含有,并且其特征在于包含嵌合Cry14Ab-1编码基因和HPPD- 4编码基因,和包含SEQID No.1或3的序列和SEQ ID No.2或4的序列。
在一个实施例中,优良事件EE-GM4含有按顺序包含以下核苷酸序列的核酸分子:a)SEQ ID NO.5核苷酸1到227的核苷酸序列或与其至少99%一致的序列,b)SEQ ID No.11核苷酸188到核苷酸7368的核苷酸序列或与其至少99%一致的序列和c)SEQ ID NO.6核苷酸254到核苷酸501的核苷酸序列或与其至少99%一致的序列,如所述核酸分子,其包含与SEQ ID No.11核苷酸188到核苷酸7368的核苷酸序列至少99,5%或至少99,9%一致的序列b)。
在一个实施例中,优良事件EE-GM4含有按顺序包含以下核苷酸序列的核酸分子:a)SEQ ID NO.24核苷酸1到1058的核苷酸序列或与其至少99%一致的序列,b)SEQ IDNo.23核苷酸1059到核苷酸8663的核苷酸序列或与其至少99%一致的序列和c)SEQ IDNO.25核苷酸254到核苷酸1339的核苷酸序列或与其至少99%一致的序列,如所述核酸分子,其包含与SEQ ID No.23的核苷酸序列至少99,5%或至少99,9%一致的序列b)。
本文还提供用于获得经处理大豆种子的包含优良事件EE-GM4的大豆种子的用途,其中所述优良事件包含SEQ ID NO.1、3、5或24中的任一个的序列和 /或SEQ ID No.2、4、6或25中的任一个的序列,并且其中所述处理是用本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种进行。
本文进一步提供一种用于产生包含与另一SCN抗性基因座/基因组合的优良事件EE-GM4的大豆植物或种子的方法,如通过将优良事件EE-GM4与出现于大豆中的另一SCN抗性基因座/基因组合,并且种植包含EE-GM4和所述其它SCN抗性基因座/基因的种子。在一个实施例中,本发明的植物、细胞或种子含有一种或多种在大豆中出现的其它SCN抗性基因座/基因,以在本发明的大豆植物、细胞或种子中获得不同SCN抗性源的组合。已知若干种大豆SCN抗性基因座或基因,并且那些基因座或基因中的一种或多种可以与相同植物、细胞或种子中的EE-GM4组合,如来自抗性源PI 88788、PI 548402(Peking)、PI 437654 (Hartwig或
Figure BDA0002911161790000211
)的SCN抗性基因/基因座中的任一个或其任何组合,或原生SCN抗性基因座/基因rhg1、rhg1-b、rhg2、rhg3、Rhg4、Rhg5、qSCN11、 cqSCN-003、cqSCN-005、cqSCN-006、cqSCN-007中的一种或多种,或大豆染色体1、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20 或其任何组合中的任一个上所识别的SCN抗性基因座中的任一个(Kim等人2016,《理论与应用遗传学(Theor.Appl.Genet.)》129(12):2295-2311;Kim和Diers 2013,《作物科学(Crop Science)》53:775-785;Kazi等人2010,《理论与应用遗传学》120(3):633-644;Glover等人2004,《作物科学》44(3):936-941;见万维网地址:soybase.org;Concibido等人2004,《作物科学》44:1121-1131;Webb等人 1995,《理论与应用遗传学》91:574-581)。此外,在一个实施例中,本发明的植物或种子当与获自以下SCN抗性源中的任一种的大豆中的一个或多个SCN抗性基因座组合时含有EE-GM4:PI 548316、PI 567305、PI 437654、PI90763、PI 404198B、PI 88788、PI 468916、PI 567516C、PI 209332、PI 438489B、PI 89772、Peking、PI 548402、PI 404198A、PI 561389B、PI 629013、PI 507471、PI 633736、 PI507354、PI 404166、PI 437655、PI 467312、PI 567328、PI 22897或PI 494182。此处公开的表1提供报告为SCN抗性的大豆登录号的全面列表,其中SCN抗性基因/基因座(一个或几个)可以与相同大豆植物、细胞或种子中的本发明的 EE-GM4组合。在一个实施例中,本发明还涉及用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理的所述植物或种子。
表1.
Figure BDA0002911161790000221
Figure BDA0002911161790000231
在一个实施例中,本发明的方法还包含用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或包含它们的混合物中的一种或多种处理大豆植物或种子或其中生长或打算生长大豆植物或种子的土壤,如其中所述化合物或生物防治剂为杀线虫剂、杀昆虫剂或杀真菌剂。在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的 SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、 PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
本文还提供一种用于保护出苗大豆植物以免与杂草竞争的方法,其包含用 HPPD抑制剂除草剂处理其中播种如上文所描述的含有优良事件EE-GM4的种子的田地,其中所述植物对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性。在一个实施例中,在所述方法中,HPPD抑制剂除草剂为异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮。在一个实施例中,所述方法还包含用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或包含其的混合物中的一种或多种处理大豆植物或种子或其中生长或打算生长大豆植物或种子的土壤,如其中所述化合物或生物防治剂为杀线虫剂、杀昆虫剂或杀真菌剂,例如,选自以下群组中的任一个的化合物或生物防治剂或其组合:IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、IAN5、IAN6、IAN7、IAN8、 IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、 IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、IAN25、IAN26、IAN27、IAN28、 IAN29、IAN30、SIAN1、F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8、F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16、SF1、P1、BCA1、BCA2、BCA3、BCA4、BCA5、BCA6、BCA7、BCA8、BCA9、BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、SAI1、SC1 或SC2,如本文所述。
本文还提供用于保护出苗大豆植物以免与杂草竞争和由植物病原性线虫引起的损伤的方法,其包含在种植大豆植物或播种种子之前,用如本文所述的 HPPD抑制剂除草剂和杀线虫化合物或生物防治剂或其组合处理待种植如上文所描述的包含优良事件EE-GM4的大豆植物的田地,接着在所述预处理的田地中种植或播种所述大豆植物或种子,其中植物对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性。在一个实施例中,本文提供用于保护出苗大豆植物以免与杂草竞争和由植物病原性线虫引起的损伤的方法,其包含在播种大豆种子之前,用HPPD抑制剂除草剂处理待种植如上文所描述的包含优良事件EE-GM4的大豆植物的田地,接着在所述预处理的田地中播种所述大豆种子,其中植物对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性,并且其中所述种子涂布有如本文所述的化合物或生物防治剂或其组合,如选自以下群组中的任一个的化合物或生物防治剂或其组合:IAN1、 IAN2、IAN3、IAN4、IAN5、IAN6、IAN7、IAN8、IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、 IAN13、IAN14、IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、 IAN23、IAN24、IAN25、IAN26、IAN27、IAN28、IAN29、IAN30、SIAN1、F1、 F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8、F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16、 SF1、P1、BCA1、BCA2、BCA3、BCA4、BCA5、BCA6、BCA7、BCA8、BCA9、 BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、SAI1、SC1或SC2,如本文所述。
本文还提供一种在如上文所描述的包含优良事件EE-GM4的大豆植物的田地中,防除杂草和保护植物免于由植物病原性线虫引起的损伤的方法,其包含用有效量的HPPD抑制剂除草剂和如本文所述的杀线虫化合物或生物防治剂或其组合处理所述田地,其中植物对所述除草剂具有耐受性,如其中所述化合物或生物防治剂或组合选自以下群组中的任一个:IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、IAN5、 IAN6、IAN7、IAN8、IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、IAN25、IAN26、IAN27、IAN28、IAN29、IAN30、SIAN1、F1、F2、F3、F4、F5、F6、 F7、F8、F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16、SF1、P1、BCA1、 BCA2、BCA3、BCA4、BCA5、BCA6、BCA7、BCA8、BCA9、BCA10、NC1、 NC2、NC3、SBCA1、SAI1、SC1或SC2,如本文所述。
在一个实施例中,本发明的方法,如用于防除杂草和保护植物免于植物病原性线虫侵害的方法,除施用HPPD抑制剂除草剂以外,还包含用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或混合物中的一种或多种处理大豆植物或种子,或其中生长或打算生长大豆植物或种子的土壤,如其中所述化合物或生物防治剂为杀线虫剂、杀昆虫剂或杀真菌剂,或选自以下群组中的任一种的化合物或生物防治剂或其组合:IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、IAN5、IAN6、 IAN7、IAN8、IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、IAN15、IAN16、 IAN17、IAN18、IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、IAN25、IAN26、 IAN27、IAN28、IAN29、IAN30、SIAN1、F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8、 F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16、SF1、P1、BCA1、BCA2、BCA3、 BCA4、BCA5、BCA6、BCA7、BCA8、BCA9、BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、 SAI1、SC1或SC2,如本文所述。在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332或 PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
本文中甚至进一步提供转基因大豆植物、其种子或后代的用途,以用于防除大豆田地中的杂草,其中所述植物、种子或后代中的每一种在其基因组中包含优良事件EE-GM4,其中EE-GM4为在所定义的基因座处的插入T-DNA,如以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的参考种子中所含有,其中所述插入T-DNA包含嵌合Cry14Ab-1编码基因和嵌合HPPD-4编码基因,并且其中所述优良事件的特征在于SEQ ID No.1或3的5'交接序列和SEQ ID No.2或4的3'交接序列。在一个实施例中,在所述用途中,转基因大豆植物、其种子或后代对线虫具有抗性和/或对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性。在一个实施例中,所述T-DNA 包含嵌合Cry14Ab-1编码基因和嵌合HPPD-4编码基因,并且所述优良事件的特征在于SEQ ID No.5的5'交接序列和SEQ ID No.6的3'交接序列。在一个实施例中,本发明还涉及用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或其混合物中的一种或多种处理的所述植物或种子。在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI209332 或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
本文还提供了在其基因组中包含优良事件EE-GM4的大豆植物或种子的用途,以用于生长线虫抗性和/或除草剂耐受性植物,其中所述优良事件EE-GM4 为在所定义的基因座处的插入T-DNA,如以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的参考种子中所含有,其中所述插入T-DNA包含嵌合Cry14Ab-1编码基因和嵌合 HPPD-4编码基因,并且其中所述优良事件的特征在于SEQ ID No.1或3的5'交接序列和SEQ ID No.2或4的3'交接序列,并且所述用途包括使用如本文所描述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或混合物中的一种或多种,如其中所述化合物或生物防治剂为杀线虫剂、杀昆虫剂或杀真菌剂,或选自以下群组中的任一种的化合物或生物防治剂或其组合:IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、 IAN5、IAN6、IAN7、IAN8、IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、 IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、 IAN25、IAN26、IAN27、IAN28、IAN29、IAN30、SIAN1、F1、F2、F3、F4、 F5、F6、F7、F8、F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16、SF1、P1、 BCA1、BCA2、BCA3、BCA4、BCA5、BCA6、BCA7、BCA8、BCA9、BCA10、 NC1、NC2、NC3、SBCA1、SAI1、SC1或SC2,如本文所述。在一个实施例中,在所述用途中,大豆植物或种子对SCN线虫具有抗性和/或对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性。在一个实施例中,所述T-DNA包含嵌合Cry14Ab-1编码基因和嵌合HPPD-4编码基因,并且所述优良事件的特征在于SEQ ID No.5或24的5' 交接序列和SEQ IDNo.6或25的3'交接序列。
本文还提供如本文所述的包含优良事件EE-GM4的大豆种子的用途,所述大豆种子用至少一种如本文所述的化合物或生物防治剂或组合处理;以用于产生大豆作物。在一个实施例中,所述种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。在另一实施例中,所述种子包含另一大豆转化事件,如提供对额外除草剂的耐受性的大豆转化事件,通过相较于Cry14Ab-1的另一作用模式提供对线虫的耐受性的大豆转化事件,或提供昆虫防治的大豆转化事件,或以下大豆转化事件中的任一个:事件MON87751、事件pDAB8264.42.32.1、事件DAS-81419-2、事件FG-072、事件SYHT0H2、事件DAS-68416-4、事件 DAS-81615-9、事件DAS-44406-6、事件MON87708、事件MON89788、事件 DAS-14536-7、事件GTS 40-3-2、事件A2704-12、事件BPS-CV127-9、事件A5547- 127、事件MON87754、事件
Figure BDA0002911161790000271
事件MON87701、事件MON87705、事件MON87712、事件pDAB4472-1606、事件DP-356043-5、事件MON87769、事件
Figure BDA0002911161790000272
事件DP305423,或以下大豆事件组合中的任一个:MON89788×MON87708、HOS×GTS 40-3-2、FG-072×A5547-127、 MON87701×MON 89788、DAS-81419-2×DAS-44406-6、DAS-81419-2×DAS- 68416-4、DAS-68416-4×MON 89788、MON87705×MON 89788、MON 87769×MON 89788、DP305423×GTS 40-3-2、DP305423×MON87708、事件 DP305423×MON87708×事件MON89788、DP305423×MON89788、MON87705×MON87708、MON87705×MON87708×MON89788、MON89788×MON87708×A5547-127、MON87751×MON87701×MON87708×MON89788、SYHT0H2× MON89788、SYHT0H2×GTS 40-3-2、SYHT0H2×MON89788×MON87708。
在一个实施例中,如本文所描述的本发明的大豆植物或种子的用途还包括使用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或混合物中的一种或多种来处理大豆植物或种子,或处理其中生长或打算生长大豆植物或种子的土壤,如其中所述化合物或生物防治剂是杀线虫剂、杀昆虫剂或杀真菌剂。在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。在另一实施例中,所述植物或种子(具有或不具有原生大豆SCN抗性基因座或基因)还包含另一大豆转化事件,如提供对额外除草剂的耐受性的大豆转化事件,通过相较于Cry14Ab-1的另一作用模式提供对线虫(如 SCN、病变线虫、根结线虫和/或肾形线虫)的耐受性的大豆转化事件,或提供昆虫防治的大豆转化事件,或以下大豆转化事件中的任一个:事件MON87751、事件pDAB8264.42.32.1、事件DAS-81419-2、事件FG-072、事件SYHT0H2、事件DAS-68416-4、事件DAS-81615-9、事件DAS-44406-6、事件MON87708、事件MON89788、事件DAS-14536-7、事件GTS 40-3-2、事件A2704-12、事件BPS- CV127-9、事件A5547-127、事件MON87754、事件
Figure BDA0002911161790000281
事件 MON87701、事件MON87705、事件MON87712、事件pDAB4472-1606、事件 DP-356043-5、事件MON87769、事件
Figure BDA0002911161790000282
事件DP305423,或以下大豆事件组合中的任一个:MON89788×MON87708、HOS×GTS 40-3-2、FG- 072×A5547-127、MON87701×MON 89788、DAS-81419-2×DAS-44406-6、DAS- 81419-2×DAS-68416-4、DAS-68416-4×MON 89788、MON 87705×MON 89788、 MON 87769×MON89788、DP305423×GTS 40-3-2、DP305423×MON87708、事件 DP305423×MON87708×事件MON89788、DP305423×MON89788、MON87705×MON87708、MON87705×MON87708×MON89788、MON89788×MON87708×A5547-127、MON87751×MON87701× MON87708×MON89788、SYHT0H2×MON89788、SYHT0H2×GTS 40-3-2、 SYHT0H2×MON89788×MON87708。
本文还提供一种用于产生包含优良事件EE-GM4的大豆植物或种子的方法,其包含使包含EE-GM4的植物与另一大豆植物杂交,且种植从所述杂交获得的包含EE-GM4的种子。在一个实施例中,所述方法包括施用HPPD抑制剂除草剂的步骤,以及施用本文所描述的化合物或生物防治剂或组合中的一种或多种的步骤,其施用到所述种子或植物上,或施用到其中生长或打算生长所述种子或植物的土壤。
根据本发明,还提供如上文所描述的包含优良事件EE-GM4的大豆种子和 HPPD抑制剂除草剂的用途,以用于防除大豆田地中的杂草,以及包含优良事件 EE-GM4的大豆种子在生长对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性的大豆的方法中的用途,其中所述种子为经本文所述的化合物或生物防治剂或组合处理的种子,所述化合物或生物防治剂或组合如描述于以下群组中的化合物或生物防治剂或组合:SIAN1、SF1、BCA8、BCA9、BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、SAI1、 SC1或SC2,如本文所述。
本文进一步提供使用如上文所描述的优良事件EE-GM4向大豆植物或种子赋予线虫抗性和/或HPPD抑制剂除草剂耐受性,或使用包含优良事件EE-GM4 的大豆植物或种子与HPPD抑制剂除草剂组合以用于生长大豆。
本文还提供对EE-GM4具有特异性的引物对,以及使用所述引物对的试剂盒或方法,其中所述对的至少一个引物(如以添加至引物上的(异源)可检测或可筛选部分)经标记,或其中所述引物中的至少一个的5'端包含一个或多个错配或与EE-GM4的5'或3'侧接序列不相关或与EE-GM4的T-DNA序列不相关的核苷酸序列;或其中所述引物中的至少一个在其3'端处包含跨越T-DNA侧接序列与T-DNA序列之间的接合区的核苷酸序列,所述接合区处于SEQ ID No.5中的核苷酸227-228、SEQ ID No.24中的核苷酸1058-1059或SEQ ID No.6或25中的核苷酸253-254处,其条件是3'端的17个连续核苷酸不仅来源于SEQ ID No. 5或24或6或25中的T-DNA或T-DNA侧接序列;或其中所述引物中的至少一个包含分别与EE-GM4的5'或3'侧接区内或EE-GM4的插入T-DNA内的序列 80%到100%一致的序列,并且所述引物序列包含与所述5'或3'侧接区或所述T- DNA的至少一个错配,其条件是至少一个错配仍允许在优化检测条件(例如优化PCR条件)下用这些引物特异性识别优良事件EE-GM4;或其中所述引物中的至少一个的核苷酸序列包含融合到来自另一来源的核酸的核酸的核苷酸序列或其互补序列。
本发明还涉及用杀虫(例如杀线虫、杀昆虫和/或杀真菌)化合物和/或生物防治剂或其混合物处理的包含优良事件EE-GM4的上述植物或种子,其中所述处理可以通过处理其中待生长所述植物或种子的土壤,处理播种所述种子或种植所述植物的田地,或处理待种植的种子来实现。用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物处理,包括用HPPD抑制剂除草剂处理可以依序或同时进行。施用可以是随时间推移的分次施用,或个别活性剂或包含呈多个部分的活性剂的混合物的施用(依序施用)可以通过出苗前施用,出苗后施用,早期出苗后施用,或中期或后期出苗后施用,或可为其组合,尤其是对于不同的活性成分。技术人员知道适合于每种活性成分/组合的施用时序和方法。
本发明进一步涉及改良如上文所描述的包含优良事件EE-GM4的大豆产率的方法,其中大豆植物或种子或其中生长或打算生长大豆植物或种子的土壤用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或其混合物处理,并且涉及如本文所述的包含EE-GM4的植物或种子以及如本文所述的化合物和/或生物防治剂或其混合物的用途。本发明的一个实施例涉及包含优良事件EE-GM4的种子,其用杀虫 (例如杀线虫、杀昆虫、杀螨或杀真菌)化合物和/或生物试剂或包含其的混合物处理,以便确保针对农业害虫对种子、萌芽的小植株和从种子生长的植物的改良保护。在本发明的一个实施例中,包含优良事件EE-GM4的种子含有一种或多种杀线虫化合物和/或生物防治剂或包含其的混合物的涂层,如包含优良事件 EE-GM4的种子涂布有至少一种杀线虫化合物(如噻恶嗪芬(tioxazafen)、氟吡菌酰胺(fluopyram)、威百亩(metam)、杀线威(oxamyl)或阿维菌素(abamectin) 或本文中所描述或所属领域中已知的杀线虫化合物中的任一种)和至少一种杀线虫生物防治剂(如坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、西沢巴斯德氏芽菌(Pasteuria nishizawae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、里诺吉伯克氏菌 (Burkholderia rinojensis)或本文中所描述或所属领域中已知的杀线虫生物防治剂中的任一种)。在本发明的一个实施例中,所述种子涂层还含有(除杀线虫剂以外)一种或多种如本文所述的杀昆虫化合物或生物防治剂(如噻虫胺 (clothianidin)、氟氰虫酰胺(tetraniliprole)、螺虫乙酯(spirotetramat)、氟吡呋喃酮(flupyradifurone)、噻虫嗪(thiamethoxam)、毒死蜱(chlorpyrifos)、γ-三氟氯氰菊酯(gamma-cyhalothrin)、λ-三氟氯氰菊酯、氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)、联苯菊酯(bifethrin)、吡虫啉(imidacloprid)、ζ-氯氰菊酯(zetacypermethrin)、氟氯氰菊酯(cyfluthrin)、苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis)、除虫脲(diflubenzuron))和/或一种或多种如本文所述的杀真菌化合物或生物防治剂(如氟唑环菌胺(Sedaxane)、氟咯菌腈(Fludioxonil)、精甲霜灵(Mefenoxam)、粉唑醇(flutriafol)、氟唑菌酰胺(fluxapyroxad)、吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)、四氟醚唑(tetraconazole)、嘧菌酯(azoxystrobin)、丙环唑(propiconazole)、苯并烯氟菌唑(benzovindiflupyr)、戊唑醇(tebuconazole)、嘧菌酯(azoxystrobin)中的任何一种或多种)。在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的 SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。在另一实施例中,所述植物或种子(具有或不具有所述原生大豆SCN抗性基因座或基因) 还包含另一大豆转化事件,如提供对额外除草剂的耐受性的大豆转化事件,通过相较于Cry14Ab-1的另一作用模式提供对线虫(如SCN、病变线虫、根结线虫和/或肾形线虫)的耐受性的大豆转化事件,或提供昆虫防治的大豆转化事件,或以下大豆转化事件中的任一个:事件MON87751、事件pDAB8264.42.32.1、事件DAS-81419-2、事件FG-072、事件SYHT0H2、事件DAS-68416-4、事件 DAS-81615-9、事件DAS-44406-6、事件MON87708、事件MON89788、事件 DAS-14536-7、事件GTS 40-3-2、事件A2704-12、事件BPS-CV127-9、事件A5547- 127、事件MON87754、事件
Figure BDA0002911161790000321
事件MON87701、事件MON87705、事件MON87712、事件pDAB4472-1606、事件DP-356043-5、事件MON87769、事件
Figure BDA0002911161790000322
事件DP305423,或以下大豆事件组合中的任一个: MON89788×MON87708、HOS×GTS 40-3-2、FG-072×A5547-127、 MON87701×MON 89788、DAS-81419-2×DAS-44406-6、DAS-81419-2×DAS- 68416-4、DAS-68416-4×MON 89788、MON 87705×MON 89788、MON 87769×MON89788、DP305423×GTS 40-3-2、DP305423×MON87708、事件 DP305423×MON87708×事件MON89788、DP305423×MON89788、 MON87705×MON87708、MON87705×MON87708×MON89788、MON89788× MON87708×A5547-127、MON87751×MON87701×MON87708×MON89788、SYHT0H2×MON89788、SYHT0H2×GTS 40-3-2、SYHT0H2×MON89788× MON87708。在一个实施例中,所述化合物或生物防治剂或组合选自以下群组中的任一个:IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、IAN5、IAN6、IAN7、IAN8、IAN9、 IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、IAN19、 IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、IAN25、IAN26、IAN27、IAN28、IAN29、IAN30、SIAN1、F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8、F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16、SF1、P1、BCA1、BCA2、BCA3、BCA4、BCA5、BCA6、 BCA7、BCA8、BCA9、BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、SAI1、SC1或SC2,如本文所述。
本发明还涉及防治本发明的植物或种子上的大豆害虫(如大豆线虫)的方法,其通过用对大豆害虫(如大豆线虫)和/或其栖息地起作用的化合物和/或生物防治剂或其混合物处理所述植物或种子来进行。
本文还提供一种防止或延迟线虫对Cry14Ab-1蛋白质或对本发明的优良事件产生抗性的方法,其包含用一种或多种杀线虫化合物和/或一种或多种杀线虫生物防治剂或含有其的混合物处理本发明的植物或种子,或处理其中将生长本发明的植物或种子的土壤(这之后可以在所述土壤中种植或播种所述植物或种子)。在一个实施例中,所述用途为一种或多种杀线虫化合物和一种或多种杀线虫生物防治剂的用途。在一个实施例中,所述线虫为大豆孢囊线虫、短体线虫属线虫、根结线虫和/或肾形线虫,如以大豆为食的所述线虫中的任一种。在一个实施例中,使用多于一种杀线虫化合物或多于一种杀线虫生物防治剂,或使用多于一种杀线虫化合物和多于一种杀线虫生物防治剂,尤其当其各自具有不同作用模式时。在一个实施例中,用所述化合物或生物防治剂处理包含EE-GM4的种子。
在用于防治大豆害虫或防止或延迟线虫抗性产生的以上方法的一个实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。在另一实施例中,所述植物或种子(具有或不具有所述原生大豆SCN 抗性基因座或基因)还包含另一大豆转化事件,如提供对额外除草剂的耐受性的大豆转化事件,通过相较于Cry14Ab-1的另一作用模式提供对线虫(如SCN、病变线虫、根结线虫和/或肾形线虫)的耐受性的大豆转化事件,或提供昆虫防治的大豆转化事件,或以下大豆转化事件中的任一个:事件MON87751、事件 pDAB8264.42.32.1、事件DAS-81419-2、事件FG-072、事件SYHT0H2、事件 DAS-68416-4、事件DAS-81615-9、事件DAS-44406-6、事件MON87708、事件 MON89788、事件DAS-14536-7、事件GTS 40-3-2、事件A2704-12、事件BPS- CV127-9、事件A5547-127、事件MON87754、事件
Figure BDA0002911161790000341
事件MON87701、事件MON87705、事件MON87712、事件pDAB4472-1606、事件 DP-356043-5、事件MON87769、事件
Figure BDA0002911161790000342
事件DP305423,或以下大豆事件组合中的任一个:MON89788×MON87708、HOS×GTS 40-3-2、FG- 072×A5547-127、MON87701×MON 89788、DAS-81419-2×DAS-44406-6、DAS- 81419-2×DAS-68416-4、DAS-68416-4×MON 89788、MON87705×MON 89788、 MON 87769×MON 89788、DP305423×GTS 40-3-2、DP305423×MON87708、事件 DP305423×MON87708×事件MON89788、DP305423×MON89788、 MON87705×MON87708、MON87705×MON87708×MON89788、 MON89788×MON87708×A5547-127、MON87751×MON87701× MON87708×MON89788、SYHT0H2×MON89788、SYHT0H2×GTS 40-3-2、SYHT0H2×MON89788×MON87708。在一个实施例中,所述化合物或生物防治剂或组合选自以下群组中的任一个:IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、IAN5、IAN6、 IAN7、IAN8、IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、IAN15、IAN16、 IAN17、IAN18、IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、IAN25、IAN26、 IAN27、IAN28、IAN29、IAN30、SIAN1、F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8、 F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16、SF1、P1、BCA1、BCA2、BCA3、 BCA4、BCA5、BCA6、BCA7、BCA8、BCA9、BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、 SAI1、SC1或SC2,如本文所述。在一个实施例中,所述化合物或生物防治剂或组合选自以下群组中的任一个:IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、IAN5、IAN6、IAN7、 IAN8、IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、IAN25、IAN26、IAN27、 IAN28、IAN29、IAN30、SIAN1、F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8、F9、F9、 F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16、SF1、P1、BCA1、BCA2、BCA3、BCA4、 BCA5、BCA6、BCA7、BCA8、BCA9、BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、 SAI1、SC1或SC2,如本文所述。
在一个实施例中,根据本发明处理或待处理的植物和种子含有(不同于事件 EE-GM4)来自以下SCN抗性源中的一个或多个的SCN抗性基因座或基因:PI 548316、PI 567305、PI 437654、PI 90763、PI 404198B、PI 88788、PI 468916、 PI 567516C、PI 209332、PI438489B、PI 89772、Peking、PI 548402、PI 404198A、 PI 561389B、PI 629013、PI 507471、PI 633736、PI 507354、PI 404166、PI 437655、 PI 467312、PI 567328、PI 22897或PI494182。
在一个实施例中,如本文所描述的本发明的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或混合物选自如本文所描述的以下群组中的任一个:如H1、H2、 H3、H4、H5、IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、IAN5、IAN6、IAN7、IAN8、IAN9、 IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、IAN19、 IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、IAN25、IAN26、IAN27、IAN28、IAN29、 IAN30、SIAN1、F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8、F9、F9、F10、F11、F12、 F13、F14、F15、F16、SF1、P1、BCA1、BCA2、BCA3、BCA4、BCA5、BCA6、 BCA7、BCA8、BCA9、BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、SAI1、SC1或SC2,以及本文所述的优选组合或混合物。
在一个实施例中,本发明的种子用如本文所描述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或本文所描述的组合处理,其中所述化合物或试剂或组合来自群组SIAN1、BCA8、BCA9、BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、SAI1、 SC1或SC2。
在以下段落中概述本发明中提及的其它实施例:
1.一种用于识别生物样品中的优良事件EE-GM4的方法,所述方法包含用特异性识别EE-GM4中5'或3'T-DNA侧接区(的至少一部分)和与其邻接的插入T-DNA(的至少一部分)的特异性引物对或探针检测EE-GM4特异性区域。
2.段落1所述的方法,所述方法包含使用与至少两个引物的聚合酶链反应从存在于所述生物样品中的核酸扩增50bp与1000bp之间的DNA片段,所述引物中的一个识别EE-GM4中的插入T-DNA的5'T-DNA侧接区,所述5'T- DNA侧接区包含SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227或SEQ ID No.24核苷酸 1到核苷酸1058的核苷酸序列,或识别EE-GM4中的插入T-DNA的3'T-DNA 侧接区,所述3'T-DNA侧接区包含SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸501的互补序列的核苷酸序列,或SEQ ID No.25核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列,所述引物的另一引物识别插入T-DNA内的序列,其包含SEQ ID No.5核苷酸228到核苷酸398的核苷酸序列或其互补序列,或SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸253的核苷酸序列,或SEQ IDNo.11核苷酸17到核苷酸7621 的核苷酸序列,或SEQ ID No.23核苷酸1059到核苷酸8663的核苷酸序列或其互补序列。
3.段落2所述的方法,其中识别5'T-DNA侧接区的所述引物包含17到200个连续核苷酸的核苷酸序列,其选自SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227或 SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058的核苷酸序列,或识别EE-GM4的3'T- DNA侧接区的所述引物包含17到200个连续核苷酸的核苷酸序列,其选自SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸501的互补序列的核苷酸序列,或SEQ ID No.25 核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列,并且识别插入T-DNA内的序列的所述引物包含17到200个连续核苷酸,其选自SEQ ID No.5核苷酸 228到核苷酸398的核苷酸序列或其互补序列,或SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸253的核苷酸序列或其互补序列,或SEQ ID No.11核苷酸17到核苷酸 7621的核苷酸序列,或SEQ ID No.23核苷酸1059到核苷酸8663的核苷酸序列或其互补序列。
4.段落2所述的方法,其中识别5'T-DNA侧接区的所述引物在其极端3' 端处包含至少17个连续核苷酸的核苷酸序列,其选自SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227或SEQ IDNo.24核苷酸1到核苷酸1058的核苷酸序列,或识别EE- GM4的3'T-DNA侧接区的所述引物在其极端3'端处包含至少17个连续核苷酸的核苷酸序列,其选自SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸501的互补序列的核苷酸序列,或SEQ ID No.25核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列,并且识别插入T-DNA内的序列的所述引物在其3'端处包含至少17个连续核苷酸,其选自SEQ ID No.5核苷酸228到核苷酸398的核苷酸序列,或SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸253的核苷酸序列的互补序列,或SEQ ID No.11核苷酸17到核苷酸7621的核苷酸序列,或SEQ ID No.23核苷酸位置1059到核苷酸位置8663的核苷酸序列或其互补序列。
5.段落4所述的方法,其中所述引物包含分别SEQ ID No.12和SEQ ID No.13的序列或分别SEQ ID No.20和SEQ ID No.21的序列。
6.段落5所述的方法,所述方法包含使用PCR扩增126或90bp的EE- GM4特异性片段。
7.段落2到6中任一个所述的方法,其进一步包含使对扩增的DNA片段具有特异性的探针与所述至少两种引物杂交的步骤。
8.段落7所述的方法,其中所述探针识别所述5'T-DNA侧接区的一部分和与其邻接的插入T-DNA的一部分,或其中所述探针识别所述3'T-DNA侧接区的一部分和与其邻接的插入T-DNA的一部分或识别所述5'T-DNA侧接区的一部分和与其邻接的插入T-DNA的一部分,如其中所述探针包含SEQ ID No.1 或3或SEQ ID No 2或4的核苷酸序列。
9.段落8所述的方法,其中所述引物分别包含SEQ ID No.12和SEQ ID No.13的序列,并且其中所述探针包含SEQ ID No.14的序列,或其中所述引物分别包含SEQ ID No.20和SEQ ID No.21的序列,并且其中所述探针包含SEQ ID No.22的序列。
10.一种试剂盒,其包含识别EE-GM4中的插入T-DNA的5'T-DNA侧接区的一个引物,所述5'T-DNA侧接区包含SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227 或SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058的核苷酸序列,或识别EE-GM4中的插入T-DNA的3'T-DNA侧接区的一个引物,所述3'T-DNA侧接区包含SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸501的互补序列的核苷酸序列,或SEQID No.25核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列;和识别插入T-DNA内的序列的一个引物,所述插入T-DNA包含SEQ ID No.5核苷酸228到核苷酸398的核苷酸序列,或SEQID No.6核苷酸1到核苷酸253的核苷酸序列,或SEQ ID No.23核苷酸11到核苷酸17的核苷酸序列,或SEQ ID No.23核苷酸位置1059 到核苷酸位置8663的核苷酸序列或其互补序列。
11.段落10所述的试剂盒,其中识别5'T-DNA侧接区的所述引物包含17 到200个连续核苷酸的核苷酸序列,其选自SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227 或SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058的核苷酸序列,或识别EE-GM4的3' T-DNA侧接区的所述引物包含17到200个连续核苷酸的核苷酸序列,其选自 SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸501的互补序列的核苷酸序列,或SEQ ID No. 25核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列,并且识别插入T-DNA 内的序列的所述引物包含17到200个连续核苷酸,其选自SEQ ID No.5核苷酸 228到核苷酸398的核苷酸序列,或SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸253的核苷酸序列的互补序列,或SEQ ID No.11核苷酸17到核苷酸7621的核苷酸序列,或SEQ ID No.23核苷酸位置1059到核苷酸位置8663的核苷酸序列或其互补序列。
12.段落10所述的试剂盒,其中识别5'T-DNA侧接区的所述引物在其极端3'端处包含至少17个连续核苷酸的核苷酸序列,其选自SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227或SEQ IDNo.24核苷酸1到核苷酸1058的核苷酸序列,或识别EE-GM4的3'T-DNA侧接区的所述引物在其极端3'端处包含至少17个连续核苷酸的核苷酸序列,其选自SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸501的互补序列的核苷酸序列,或SEQ ID No.25核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列,并且识别插入T-DNA内的序列的所述引物在其3'端处包含至少17个连续核苷酸,其选自SEQ ID No.5核苷酸228到核苷酸398的核苷酸序列,或 SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸253的核苷酸序列的互补序列,或SEQ ID No. 11核苷酸17到核苷酸7621的核苷酸序列,或SEQ ID No.23核苷酸1059到核苷酸8663的核苷酸序列或其互补序列。
13.段落10所述的试剂盒,其包含有包含SEQ ID No.12的序列的引物和包含SEQID No.13的序列的引物,或包含有包含SEQ ID No.20的序列的引物和包含SEQ ID No.21的序列的引物。
14.段落10所述的试剂盒,其进一步包含探针,其识别识别5'T-DNA侧接区的引物与识别插入T-DNA内的序列的引物之间的序列,或识别识别3'T- DNA侧接区的引物与识别插入T-DNA内的序列的引物之间的序列。
15.段落14所述的试剂盒,其中所述探针识别所述5'T-DNA侧接区的一部分和与其邻接的插入T-DNA的一部分,或其中所述探针识别所述3'T-DNA侧接区的一部分和与其邻接的插入T-DNA的一部分。
16.段落15所述的试剂盒,其中所述引物包含SEQ ID No.12和SEQ ID No.13的序列,并且其中所述探针包含SEQ ID No.14的序列,或其中所述引物包含SEQ ID No.20和SEQID No.21的序列,并且其中所述探针包含SEQ ID No.22的序列。
17.一种适用于EE-GM4特异性检测的引物对,其包含第一引物和第二引物,所述第一引物包含在优化检测条件下特异性识别EE-GM4中的插入T-DNA 的5'或3'T-DNA侧接区内的序列的序列,所述第二引物包含在优化检测条件下特异性识别与所述侧接5'或3'区邻接的EE-GM4中的插入T-DNA内的序列的序列,所述5'T-DNA侧接区包含SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227或SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058的核苷酸序列,所述3'T-DNA侧接区包含SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸501的互补序列的核苷酸序列,或SEQ ID No.25 核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列,所述插入T-DNA包含SEQ ID No.5核苷酸228到核苷酸398的核苷酸序列,或SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸253的核苷酸序列,或SEQ IDNo.11核苷酸17到核苷酸7621的核苷酸序列,或SEQ ID No.23核苷酸1059到核苷酸8663的核苷酸序列或其互补序列。
18.一种引物,其在其极端3'端处包含SEQ ID No.12的序列或SEQ ID No. 13的序列或SEQ ID No.20的序列或SEQ ID No.21的序列。
19.一种引物对,其包含在其极端3'端处包含SEQ ID No.12的序列的第一引物和在其极端3'端处包含SEQ ID No.13的序列的第二引物,或包含在其极端 3'端处包含SEQID No.20的序列的第一引物和在其极端3'端处包含SEQ ID No. 21的序列的第二引物。
20.段落1所述的方法,所述方法包含使生物样品的核酸与EE-GM4的特异性探针杂交。
21.段落20所述的方法,其中所述特异性探针的序列与包含EE-GM4的5' T-DNA侧接序列或3'T-DNA侧接序列的一部分的序列和与其邻接的插入T-DNA 的序列具有至少80%序列一致性。
22.段落21所述的方法,其中所述特异性探针的序列包含与SEQ ID No. 1、3或5中的任一个的序列或SEQ ID No.2、4或6中的任一个的序列或所述序列的互补序列具有至少80%与序列一致性的序列。
23.段落22所述的方法,其中所述探针包含SEQ ID No.1或3中的任一个的序列或SEQ ID No.2或4中的任一个的序列。
24.一种用于识别生物样品中的优良事件EE-GM4的试剂盒,所述试剂盒包含能够与EE-GM4的特定区域特异性地杂交的特异性探针。
25.段落24所述的试剂盒,其中所述特异性探针的序列与包含EE-GM4中的5'T-DNA侧接序列的一部分或3'T-DNA侧接序列的一部分和与其邻接的插入T-DNA的一部分的序列具有至少80%序列一致性。
26.段落25所述的试剂盒,其中所述特异性探针的序列包含与SEQ ID No. 1、3或5中的任一个或SEQ ID No.2、4或6中的任一个或所述序列的互补序列具有至少80%序列一致性的核苷酸序列。
27.一种用于识别生物样品中的优良事件EE-GM4的特异性探针。
28.段落27所述的探针,其包含与包含EE-GM4中的5'T-DNA侧接序列的一部分或3'T-DNA侧接序列的一部分和与其邻接的插入T-DNA的一部分的序列或其互补序列具有至少80%序列一致性的核苷酸序列。
29.段落28所述的探针,其与SEQ ID No.1、3或5中的任一个的序列或 SEQ IDNo.2、4或6中的任一个的序列或所述序列的互补序列具有至少80%序列一致性,或所述探针包含SEQ ID No.1、3或5中的任一个的序列或SEQ ID No.2、4或6中的任一个的序列。
30.一种特异性探针,其包含基本上类似于SEQ ID No.1、3或5中的任一个或SEQID No.2、4或6中的任一个或所述序列的互补序列的核苷酸序列。
31.一种特异性探针,其包含SEQ ID No.1或3的序列或SEQ ID No.2或 4的序列。
32.一种用于确认种子纯度的方法,所述方法包含在种子样品中,用特异性识别EE-GM4中5'或3'T-DNA侧接区和与其邻接的插入T-DNA的特异性引物或探针,检测EE-GM4特异性区域。
33.段落32所述的方法,其包含使用与至少两个引物的聚合酶链反应从存在于所述生物样品中的核酸扩增50bp与1000bp之间的DNA片段,所述引物中的一个识别EE-GM4中的插入T-DNA的5'T-DNA侧接区,所述5'T-DNA侧接区包含SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227或SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058的核苷酸序列,或识别EE-GM4中的插入T-DNA的3'T-DNA侧接区,所述3'T-DNA侧接区包含SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸501的互补序列的核苷酸序列,或SEQ ID No.25核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列,所述引物的另一引物识别插入T-DNA内的序列,其包含SEQ ID No. 5核苷酸228到核苷酸398的核苷酸序列,或SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸 253的核苷酸序列的互补序列,或在SEQ ID No.11核苷酸17到核苷酸7621的核苷酸序列,或在SEQ ID No.23核苷酸位置1059到核苷酸位置8663的核苷酸序列或其互补序列;并且使对扩增的DNA片段具有特异性的探针与所述至少两种引物杂交。
34.段落33所述的方法,其包含扩增126bp的DNA片段,并且其中所述引物分别包含SEQ ID No.12和SEQ ID No.13的序列,并且其中所述探针包含 SEQ ID No.14的序列;或扩增90bp的DNA片段,并且其中所述引物分别包含 SEQ ID No.20和SEQ ID No.21的序列,并且其中所述探针包含SEQ ID No.22 的序列。
35.一种针对EE-GM4的存在筛选种子的方法,所述方法包含在种子批次样品中,用特异性识别EE-GM4中5'或3'T-DNA侧接区和与其邻接的插入T- DNA的特异性引物对或探针,检测EE-GM4特异性区域。
36.段落35所述的方法,其包含使用与至少两个引物的聚合酶链反应从存在于所述生物样品中的核酸扩增50bp与1000bp之间的DNA片段,所述引物中的一个识别EE-GM4中插入T-DNA的5'T-DNA侧接区,所述5'T-DNA侧接区包含SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸166或SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058的核苷酸序列,或识别EE-GM4中插入T-DNA的3'T-DNA侧接区,所述3'T-DNA侧接区包含SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸501的互补序列的核苷酸序列,或SEQ ID No.25核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列,所述引物的另一引物识别插入T-DNA内的序列,其包含SEQ ID No.5核苷酸228到核苷酸398的核苷酸序列,或SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸253的核苷酸序列的互补序列,或包含SEQ ID No.11核苷酸17到核苷酸7621的核苷酸序列,或SEQ ID No.23核苷酸位置1059到核苷酸位置8663的核苷酸序列或其互补序列;并且使对扩增的DNA片段具有特异性的探针与所述至少两种引物杂交,如包含SEQ ID No.1或3或SEQ ID No.2或4的序列或其互补序列的探针。
37.段落36所述的方法,其包含扩增126bp的DNA片段,并且其中所述引物分别包含SEQ ID No.12和SEQ ID No.13的序列,并且其中所述探针包含 SEQ ID No.14的序列。
38.一种检测生物样品中的优良事件EE-GM4的存在的方法,其通过与大体上互补的经标记核酸探针杂交,其中探针:目标核酸比通过目标核酸序列的再循环而扩增,所述方法包含:
a)使所述目标核酸序列与第一核酸寡核苷酸杂交,所述第一核酸寡核苷酸包含SEQ ID No.5核苷酸位置228到核苷酸位置245的核苷酸序列或其互补序列,或所述第一核酸寡核苷酸包含SEQ ID No.6核苷酸位置236到核苷酸位置 253的核苷酸序列或其互补序列;
b)使所述目标核酸序列与第二核酸寡核苷酸杂交,所述第二核酸寡核苷酸包含SEQ ID No.5核苷酸210到核苷酸227的核苷酸序列或其互补序列,或所述核酸寡核苷酸包含SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸271的核苷酸序列或其互补序列,其中所述第一和第二寡核苷酸重叠至少一个核苷酸,并且其中所述第一或所述第二寡核苷酸经标记成为所述经标记核酸探针;
c)用酶仅使探针:目标核酸序列双链体内的经标记探针裂解,其使得探针选择性裂解,使双链体解离,留下完好的目标序列;
d)通过重复步骤(a)到(c)使目标核酸序列再循环;以及
e)检测裂解的经标记探针,从而确定所述目标核酸序列的存在,并且检测所述生物样品中优良事件EE-GM4的存在。
39.一种转基因大豆植物或其细胞、部分、种子或后代,其各自在其基因组中包含优良事件EE-GM4,已以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的包含所述事件的参考种子,用如本文所述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合处理。
40.段落39所述的转基因大豆植物、种子、细胞、部分或后代,其基因组 DNA当使用与分别包含SEQ ID 12和SEQ ID 13的核苷酸序列的两种引物的 EE-GM4 PCR分析时,产生126bp的DNA片段。
41.如以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的种子或其衍生物中所含有,包含作为在大豆基因组中的特定位置处的插入T-DNA的优良事件EE-GM4的种子,其中所述种子用如本文中所描述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合中的一种或多种处理。
42.一种大豆植物、植物部分、细胞或组织或种子,其包含可从用如本文所描述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合处理的段落41所述的种子获得的优良事件EE-GM4。
43.一种大豆植物或其种子、细胞或组织,其各自在其基因组中包含可通过繁殖和/或培育从以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的种子生长的大豆植物获得的优良事件EE-GM4,用如本文所述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合处理。
44.以上段落中任一个所述的大豆植物细胞,其为非繁殖植物细胞或无法再生成植物的植物细胞。
45.一种用于产生包含优良事件EE-GM4的大豆植物或种子的方法,其包含使根据以上段落中任一个的植物与另一大豆植物杂交,且种植从所述杂交获得的种子。
46.包含核酸分子的大豆植物或种子的用途,所述核酸分子包含基本上类似于SEQID No.1、3或5中的任一个的序列或SEQ ID No.2、4或6中的任一个的序列或所述序列的互补序列的核苷酸序列,如包含与SEQ ID No.5或6的核苷酸序列或其互补序列具有至少99%或至少99,5%序列一致性的核苷酸序列的核酸分子,如大豆中赋予对HPPD抑制剂除草剂的耐受性和/或SCN抗性的所述核酸分子;和如本文所述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合的用途;以用于产生大豆作物。
47.段落46所述的用途,其中核酸分子包含SEQ ID No.1或3或SEQ ID No.2或4中的任一个的核苷酸序列或所述序列的互补序列,如也包含SEQ ID No.7和9的核苷酸序列或与其具有至少98%序列一致性的核苷酸序列或其互补序列的所述核酸分子,或包含SEQ IDNo.11核苷酸位置188到核苷酸位置7368 的核苷酸序列或与其具有至少98%序列一致性的核苷酸序列的所述核酸分子。
48.一种包含这些段落中任一个所述的核酸分子的大豆植物、其细胞、植物部分、种子或后代,如包含有包含SEQ ID No.1、3或5的核苷酸序列或SEQ ID No.2、4或6的核苷酸序列的核酸分子的大豆植物、其细胞、植物部分、种子或后代,或在其基因组中包含SEQ IDNo.3的核苷酸序列和SEQ ID No.4的核苷酸序列的大豆植物、其细胞、植物部分、种子或后代,或在其基因组中包含SEQ ID No.5的核苷酸序列和SEQ ID No.6的核苷酸序列的大豆植物、其细胞、植物部分、种子或后代,或在其基因组中包含SEQ ID No.24的核苷酸序列和SEQID No.25的核苷酸序列的大豆植物、其细胞、植物部分、种子或后代,如也包含Cry14Ab-1编码嵌合和HPPD-4编码嵌合基因,尤其分别包含SEQ ID No.7 和9的核苷酸序列的所述嵌合基因的所述大豆植物,其中所述植物、细胞、植物部分、种子或后代或其生长或打算生长的土壤用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
49.包含核酸分子的大豆植物或种子的用途,所述核酸分子包含SEQ ID No.1、3或5或SEQ ID No.2、4或6中的任一个的核苷酸序列,如核酸分子,其包含SEQ ID No.5和SEQID No.6的核苷酸序列或其互补序列,或如核酸分子,其包含SEQ ID No.24和SEQ ID No.25的核苷酸序列或其互补序列;和如本文所述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合的用途;以用于产生大豆作物。
50.一种在其基因组中包含事件EE-GM4的转基因大豆植物、植物细胞、组织或种子,其特征在于包含基本上类似于SEQ ID No.1、3、5或24中的任一个的序列或SEQ IDNo.2、4、6或25中的任一个的序列或所述序列的互补序列的核苷酸序列的核酸分子,其中所述大豆植物也包含Cry14Ab-1编码嵌合和 HPPD-4编码嵌合基因,其中所述植物、细胞、植物部分、组织或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
51.一种大豆植物、细胞、组织或种子,其包含EE-GM4且在其细胞的基因组中包含与SEQ ID No.1、3或5中的任一个的序列或SEQ ID No.2、4或6 中的任一个的序列或所述序列的互补序列具有至少80%、90%、95%或100%序列一致性的核酸序列,如也包含Cry14Ab-1编码嵌合和HPPD-4编码嵌合基因的大豆植物,或在其细胞的基因组中包含与SEQID No.24或SEQ ID No.25的序列具有至少80%、90%、95%或100%序列一致性的核酸序列的所述大豆植物、细胞、组织或种子,其中所述植物、细胞、组织或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
52.一种大豆植物、植物细胞、组织或种子,其在其基因组中包含核酸分子,所述核酸分子包含与SEQ ID No.5或24或6或25的核苷酸序列或其互补序列具有至少99%序列一致性的核苷酸序列,或所述大豆植物、植物细胞、组织或种子,其在其基因组中包含核酸分子,所述核酸分子包含与SEQ ID No.5或24和 SEQ ID No.6或25的核苷酸序列或其互补序列具有至少99%序列一致性的核苷酸序列,其中所述植物、细胞、组织或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
53.一种大豆植物、植物细胞、组织或种子,其在其基因组中包含核酸分子,所述核酸分子在标准严格度条件下与SEQ ID No.5或6的核苷酸序列或其互补序列杂交,其中所述植物、细胞、组织或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
54.包含核酸分子的大豆植物或种子的用途,所述核酸分子包含与SEQ ID No.5或6的核苷酸序列或其互补序列具有至少99%序列一致性的核苷酸序列,如包含与SEQ IDNo.5或24和SEQ ID No.6或25的核苷酸序列或其互补序列具有至少99%序列一致性的核苷酸序列的核酸分子;和如本文所述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合的用途;以用于产生大豆作物。
55.包含核酸分子的大豆植物或种子的用途,所述核酸分子包含在标准严格度条件下与SEQ ID No.5或6的核苷酸序列或其互补序列杂交的核苷酸序列;和如本文所述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合的用途;以用于产生大豆作物。
56.以上段落中任一个所述的核酸分子的用途,其还包含SEQ ID No.7和 9的核苷酸序列。
57.包含嵌合DNA的大豆植物或种子的用途,所述嵌合DNA包含T-DNA 5'侧接区、插入T-DNA和T-DNA 3'侧接区,其中所述插入T-DNA的序列包含 SEQ ID No.11核苷酸188到核苷酸7368的序列或与其至少95、96、97、98、 99或至少99,5%一致的序列,或其中所述插入T-DNA的序列包含SEQ ID No.7 和9的序列,并且其中所述T-DNA 5'侧接区位置紧接在所述插入T-DNA上游并且与其邻接,并且包含SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227的序列或与其至少95、96、97、98、99或至少99,5%一致的序列,或SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058的序列或与其至少95、96、97、98、99或至少99,5%一致的序列,并且其中所述T-DNA 3'侧接区位置紧接在所述插入T-DNA下游并且与其邻接,并且包含SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸501的序列或与其至少95、96、97、 98、99或至少99,5%一致的序列,或SEQ ID No.25核苷酸254到核苷酸1339 的互补序列的核苷酸序列或与其至少95、96、97、98、99或至少99,5%一致的序列;和如本文所述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合的用途;以用于产生大豆作物。
58.包含核酸分子的大豆植物或种子的用途,所述核酸分子包含与SEQ ID No.7的核苷酸序列或其互补序列具有至少98%序列一致性的核苷酸序列,如 SEQ ID No.7的核苷酸序列,如包含SEQ ID No.11核苷酸131到5276的核苷酸序列或其互补序列的核酸分子,或编码杀线虫Cry14Ab蛋白,与SEQ ID No.7 或SEQ ID No.11核苷酸位置131到核苷酸位置5276的序列或其互补序列具有至少95、96、97、98或至少99%序列一致性的序列;和如本文所述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合的用途;以用于产生大豆作物。
59.包含核酸分子的大豆植物或种子的用途,所述核酸分子包含与SEQ ID No.9的核苷酸序列或其互补序列具有至少98%序列一致性的核苷酸序列,如SEQ ID No.9的核苷酸序列,如包含SEQ ID No.11核苷酸5382到7621的核苷酸序列或其互补序列的DNA分子,或与SEQ ID No.9或SEQ ID No.11核苷酸位置5382到核苷酸位置7621的序列或其互补序列具有至少95、96、97、98或至少99%序列一致性的序列,其中所述序列编码当在植物中表达时,提供对 HPPD抑制剂除草剂的耐受性的HPPD蛋白质;和如本文所述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合的用途;以用于产生大豆作物。
60.一种用于产生经处理的大豆种子的方法,其包含用如本文所述的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或组合处理如这些编号段落中的任一个所描述的包含优良事件EE-GM4的大豆种子。
61.一种用于保护出苗大豆植物以免与杂草竞争和植物病原性线虫侵害的方法,其包含用HPPD抑制剂除草剂处理播种如这些段落中的任一个所述的含有优良事件EE-GM4的种子的田地,并且用如本文所述的杀线虫化合物或生物防治剂或组合处理其中生长或打算生长所述种子的土壤,或处理所述种子,其中植物对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性。
62.一种用于保护出苗大豆植物以免与杂草竞争和植物病原性线虫侵害的方法,其包含在种植大豆植物或播种种子之前,用HPPD抑制剂除草剂处理待种植如上文所描述的包含优良事件EE-GM4的大豆植物的田地,接着在所述预处理的田地中种植或播种所述大豆植物或种子,其中植物对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性,其中所述植物或种子或其生长或打算生长的土壤用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
63.这些编号段落中任一个所述的方法,其中HPPD抑制剂除草剂为异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮。
64.如这些编号段落中任一个所描述的包含优良事件EE-GM4的转基因大豆植物、其种子或后代的用途,以用于产生大豆籽粒或种子。
65.如这些编号段落中任一个所描述在其基因组中包含优良事件EE-GM4 的大豆植物或种子的用途,以用于生长线虫抗性和/或HPPD抑制剂除草剂耐受性植物。
66.如这些编号段落中任一个所描述包含优良事件EE-GM4的大豆植物或种子,组合如本文所述的HPPD抑制剂除草剂和化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种的用途,以用于生长大豆田地,或用于生长大豆作物。
67.可从以登录号PTA-123624保藏于ATCC的种子获得的包含核酸分子的大豆植物或种子的用途,其中所述核酸分子包含SEQ ID No.1、3或5中的任一个的核苷酸序列和SEQID No.2、4或6中的任一个的核苷酸序列;和如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种的用途;以用于生长大豆作物。
68.一种大豆植物、细胞、部分或种子,其在其基因组中各自包含优良事件 EE-GM4,其中所述优良事件为基因座包含含有嵌合HPPD-4蛋白质编码基因和嵌合Cry14Ab-1蛋白质编码基因的插入T-DNA,和直接环绕所述插入T-DNA的 5'和3'侧接序列,如以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的参考种子中所发现,其中所述植物、细胞、部分或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
69.段落68所述的植物、细胞、植物部分或种子的后代植物、细胞、植物部分或种子,其中所述后代植物、细胞、植物部分或种子包含SEQ ID No.3的核苷酸序列和SEQ IDNo.4的核苷酸序列,且其中所述植物、细胞、部分或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
70.段落69所述的大豆植物、细胞、部分、种子或后代,其基因组DNA当使用与分别包含SEQ ID No.12和SEQ ID No.13的核苷酸序列的两种引物的 PCR分析时,产生126bp的DNA片段。
71.上述段落中任一个所述的植物,其对异恶唑草酮和/或苯吡唑草酮和/或硝磺草酮具有耐受性,如对异恶唑草酮、苯吡唑草酮和硝磺草酮具有耐受性的所述植物。
72.一种用于产生对SCN具有抗性并对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性的大豆植物的方法,其包含将SCN抗性和HPPD抑制剂除草剂耐受性引入到大豆植物基因组中,其通过将不具有Cry14Ab-1编码基因和不具有HPPD-4编码基因的第一大豆植物与以上段落中任一个所述的大豆植物杂交,和选择对SCN具有抗性并对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性的后代植物,其中所述植物或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
73.如这些编号段落中任一个所描述的包含优良事件EE-GM4的大豆植物或种子的用途,其用于获得大豆作物,如当由线虫或由镰刀菌属真菌引起的猝死综合征侵染时产率更好的大豆作物。
74.一种产生具有改良的对线虫或由镰刀菌属真菌引起的猝死综合征的抗性的大豆作物的方法,其包含以下步骤:(a)使用如以上段落中任一个所述的种子种植田地;以及(b)收获从所述种子生长的植物上产生的大豆种子,和任选地(c)将足以杀死杂草但所述大豆种子或植物耐受的HPPD抑制剂除草剂的一个或多个剂量在种子出苗之前或之后施用到种植所述种子的田地,或施用到所述大豆植物,如其中所述线虫为SCN或短体线虫属或根结线虫或肾形线虫属线虫,并且其中所述植物或种子或其生长或打算生长的土壤用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
75.一种在其基因组中包含优良事件EE-GM4的大豆植物、种子或细胞,其中优良事件EE-GM4包含与SEQ ID NO.23中阐述的序列至少90%一致的核苷酸序列,其中所述优良事件包含嵌合HPPD-4编码基因和嵌合Cry14Ab-1编码基因,其中所述植物、种子或细胞对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性并且具有SCN抗性,其中所述植物、种子或细胞或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
76.段落75所述的植物,其中优良事件EE-GM4包含与SEQ ID NO.23中阐述的序列至少95%一致的核苷酸序列。
77.段落75所述的植物,其中优良事件EE-GM4包含与SEQ ID NO.23中阐述的序列至少99%一致的核苷酸序列。
78.包含核酸分子的大豆植物或种子的用途,所述核酸分子包含SEQ ID NO.23的核苷酸序列或与SEQ ID NO.23具有至少99%序列一致性的核苷酸序列,其赋予HPPD抑制剂除草剂耐受性和/或线虫抗性,如其中所述线虫为SCN 或短体线虫属或根结线虫或肾形线虫属线虫;以用于产生大豆作物,其中所述植物或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
79.以上段落所述的用途,其中所述核酸分子包含SEQ ID No.11核苷酸位置131到核苷酸位置7941的核苷酸序列或与其具有至少95%、至少96%、至少 97%、至少98%或至少99%序列一致性的核苷酸序列。
80.段落79所述的用途,其中所述核酸分子编码对HPPD抑制剂具有耐受性的HPPD蛋白质和不利地影响植物害虫线虫,如SCN、RKN或短体线虫属种线虫的蛋白质。
81.段落93所述的用途,其中所述核酸编码SEQ ID No.8的蛋白质或与其至少99%一致的蛋白质和SEQ ID No.10的蛋白质或与其至少99%一致的蛋白质。
82.一种用于在待种植大豆植物的田地中防除杂草和/或线虫的方法,其包含以下步骤:1)用HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮处理所述田地,以及2)在所述经处理的田地中种植或播种包含如上文所描述的优良转化事件EE-GM4的大豆植物或种子,其中包含所述优良事件的参考种子以保藏号PTA-123624保藏于ATCC,其中所述植物或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
83.一种杂草和/或线虫防治的方法,其特征在于其包含以下步骤:1)在田地中种植对HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮具有耐受性的大豆植物或种子,以及2)在所述田地中在种植所述植物或种子之前施用HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮,或在种植之后施用到所述大豆植物或种子上(可以在种子萌芽之前或之后),其中所述植物或种子在其基因组中包含大豆优良转化事件EE-GM4,包含所述优良事件的参考种子以保藏号PTA-123624保藏于ATCC,其中所述植物或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
84.一种杂草和/或线虫防治的方法,其特征在于其包含以下步骤:1)在种植大豆植物或播种种子之前,用HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮处理待种植大豆植物的田地或待播种大豆种子的田地,以及2)在所述预处理的田地中种植包含大豆优良转化事件EE-GM4的大豆植物或播种包含大豆优良转化事件EE-GM4的大豆种子,其中包含所述大豆优良转化事件EE- GM4的参考种子以保藏号PTA-123624保藏于ATCC,其中所述植物或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
85.一种用于减少待种植大豆植物的田地,尤其含有或预期含有线虫(如 SCN、RKN或短体线虫或肾形线虫或其组合)的田地中的产量损失的方法,其包含以下步骤:1)获得包含如上文所描述的优良转化事件EE-GM4的植物或种子,以及2)种植或播种大豆植物或种子,其中包含所述优良事件的参考种子以保藏号PTA-123624保藏于ATCC,其中所述植物或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
86.一种用于在种植于含有线虫(如SCN、RKN或短体线虫或肾形线虫或其组合)的田地中时增加大豆植物的产率的方法,其包含以下步骤:1)获得包含如上文所描述的优良转化事件EE-GM4的植物或种子,以及2)种植或播种大豆植物或种子,其中包含所述优良事件的参考种子以保藏号PTA-123624保藏于 ATCC,其中所述植物或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
87.一种用于产生对HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮具有耐受性的大豆植物或种子,或用于产生对线虫,如SCN、RKN或短体线虫或肾形线虫具有耐受性的大豆植物或种子,或用于产生对HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮具有耐受性和对线虫,如SCN、 RKN或短体线虫或肾形线虫具有耐受性的大豆植物或种子的方法,其特征在于以下步骤:向大豆植物或种子的基因组中引入如上文所描述的优良大豆转化事件EE-GM4,和任选地用HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮处理所述植物或种子,或任选地用HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮处理其中将种植所述植物或种子的田地,和在所述预处理的田地中种植所述植物或种子,其中所述植物或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
88.如在这些编号段落中的任一个中所描述的核酸分子的用途,其中所述核酸分子特异性地表征大豆优良转化事件EE-GM4,其特征在于其包含SEQ ID No.1、3或5中的任一个的核苷酸序列,其含有大豆植物基因组DNA的一部分和在其下游并且与其邻接的EE-GM4的插入外来DNA的一部分,和/或其特征在于其包含SEQ ID No.2、4或6的核苷酸序列,其含有EE-GM4的插入外来 DNA的一部分和在其下游并且与其邻接的大豆植物基因组DNA的一部分。
89.如这些编号段落中任一个所述的包含EE-GM4的植物或种子,其还包含如由原生大豆抗性基因座/基因或由一种或多种其它大豆转化事件所提供的对 SCN、RKN、短体线虫或肾形线虫或其组合的耐受性或抗性。
90.这些编号段落中任一个所述的植物或种子,其中所述植物或种子包含 EE-GM4和来自表1中的抗性源或来自PI 548316、PI 567305、PI 437654、PI 90763、PI 404198B、PI88788、PI 468916、PI 567516C、PI 209332、PI 438489B、PI 89772、Peking、PI 548402、PI404198A、PI 561389B、PI 629013、PI 507471、 PI 633736、PI 507354、PI 404166、PI437655、PI 467312、PI 567328、PI 22897 或PI 494182的SCN抗性等位基因/基因座中的任一个或组合,如来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
91.一种包含如这些编号段落中任一个所描述的EE-GM4的植物或种子,其也包含对其它除草剂的耐受性,如由除草剂耐受性基因(原生或突变大豆基因或转基因)提供,如对基于草甘膦、草铵膦、磺酰脲、咪唑啉酮、HPPD抑制剂、麦草畏、2,4-D或PPO抑制剂的除草剂或其任何组合的耐受性。
92.段落91所述的植物或种子,其中所述植物或种子包含如上文所描述的 EE-GM4和赋予除草剂耐受性的以下大豆转化事件中的一种或多种:
Figure BDA0002911161790000551
Figure BDA0002911161790000552
SYHT0H2、DAS-68416-4、DAS-44406-6、MON87708、MON89788、 GTS 40-3-2、A2704-12、BPS-CV127-9、A5547-127、MON87705、
Figure BDA0002911161790000553
Figure BDA0002911161790000554
DP305423、DAS-81419-2、DP-356043-5、MON87712、MON87769,或所述植物或种子包含EE-GM4和以下事件的组合:MON89788×MON87708、 HOS×GTS 40-3-2、
Figure BDA0002911161790000555
MON87701×MON 89788、DAS- 81419-2×DAS-44406-6、DAS-68416-4×MON 89788、MON87705×事件MON 89788、DP305423×GTS 40-3-2、DP305423×MON87708、DP305423×MON87708× MON89788、DP305423×MON89788、MON87705×MON87708、MON87705× MON87708×MON89788、MON89788×MON87708×A5547-127、MON87751× MON87701×MON87708×MON89788或MON87769×事件MON89788。
93.一种在SCN侵染存在下降低猝死综合征或缺铁失绿症对大豆植物的影响的严重程度,或增加侵染有猝死综合征的含SCN田地中或引起大豆的缺铁失绿症的含SCN田地中大豆植物的产率的方法,所述方法包含种植大豆植物或播种包含优良事件EE-GM4的大豆种子,其中包含所述优良事件的参考种子以保藏号PTA-123624保藏于ATCC,其中所述植物或种子或其生长或打算生长的土壤或生长介质用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
94.这些编号段落中任一个所述的大豆植物、细胞、植物部分或种子,其包含以下核酸分子中的任一种:a)包含基本上类似于SEQ ID No.1、3或5中的任一个的序列或SEQ IDNo.2、4或6中的任一个的序列或所述序列的互补序列的核苷酸序列的核酸分子,b)包含与SEQ ID No.3、4、5、6、24或25的核苷酸序列或其互补序列具有至少99%序列一致性的核苷酸序列的核酸分子,c)包含SEQ ID No.1或3或SEQ ID No.2或4中的任一个的核苷酸序列或所述序列的互补序列,或包含SEQ ID No.1或3和SEQ ID No.2或4的核苷酸序列的核酸分子,d)包含SEQ ID No.1或3或SEQ ID No.2或4中的任一个的核苷酸序列或所述序列的互补序列,和SEQ ID No.7和9的核苷酸序列或其互补序列,或包含SEQ ID No.1或3和SEQ IDNo.2或4的核苷酸序列或所述序列的互补序列,和SEQ ID No.7和9的核苷酸序列或其互补序列的核酸分子,e)包含 SEQ ID No.11核苷酸位置188到核苷酸位置7101的核苷酸序列,或与其具有至少98%或至少99%或至少99,5%或至少99,9%序列一致性的核苷酸序列的核酸分子,f)包含SEQ ID No.11核苷酸位置188到核苷酸位置7101的核苷酸序列的核酸分子,其包含SEQ ID No.5或24和SEQ ID No.6或25的核苷酸序列或其互补序列,或g)可从以登录号PTA-123624保藏于ATCC的种子获得的核酸分子,其中所述核酸分子包含SEQ IDNo.1、3或5中的任一个的核苷酸序列和SEQ ID No.2、4或6中的任一个的核苷酸序列,其中所述大豆植物、其细胞、植物部分、种子或后代或其生长或打算生长的土壤用如本文所述的化合物和 /或生物防治剂或其混合物中的一种或多种处理,如来自以下中的任一个的化合物和/或生物防治剂或混合物:H1、H2、H3、H4、H5、IAN1、IAN2、IAN3、 IAN4、IAN5、IAN6、IAN7、IAN8、IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、 IAN14、IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、 IAN24、IAN25、IAN26、IAN27、IAN28、IAN29、IAN30、SIAN1、F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8、F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16、 SF1、P1、BCA1、BCA2、BCA3、BCA4、BCA5、BCA6、BCA7、BCA8;BCA9、 BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、SAI1、SC1和SC2。
95.一种大豆植物、细胞、植物部分或种子,其在其基因组中各自包含优良事件EE-GM4,其中所述优良事件为基因座包含含有嵌合HPPD-4蛋白质编码基因和嵌合Cry14Ab-1蛋白质编码基因的插入T-DNA,和直接环绕所述插入T- DNA的5'和3'侧接序列,如以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的参考种子中所发现,如所述植物、细胞、部分或种子也包含SEQ IDNo.3的核苷酸序列和 SEQ ID No.4的核苷酸序列,其中所述大豆植物、其细胞、植物部分、种子或后代或其生长或打算生长的土壤用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理。
96.段落94或95所述的植物、植物部分或种子,其中其生长或打算生长的土壤用所述化合物和/或生物防治剂或其混合物中的一种或多种处理,并且其中所述植物、植物部分、种子或后代在用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或混合物中的一种或多种处理的土壤中种植或播种。
97.以上段落所述的植物或种子,其包含原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 437654或其组合的SCN抗性基因或基因座中的任一个。
98.一种杂草防除方法,其包含在大豆植物出苗之前但在播种种子之后,用 HPPD抑制剂除草剂和杀线虫化合物和/或杀线虫生物防治剂处理播种上述段落中的任一种所述的大豆种子的田地。
99.一种用于增加以上段落中任一个所述的大豆植物的产率的方法,其包含在种植大豆植物或播种种子之前,用HPPD抑制剂除草剂和杀线虫剂处理待播种或种植所述大豆种子或植物的田地,随后在所述预处理的田地中种植或播种所述大豆植物或种子。
100.段落98或99所述的方法,其中所述杀线虫剂含有如本文所描述的杀线虫化合物和/或杀线虫生物防治剂。
101.一种方法,其用于产生对SCN具有抗性和/或对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性的大豆植物,其包含将对SCN的抗性和/或对HPPD抑制剂除草剂的耐受性引入到大豆植物的基因组中,其通过使第一大豆植物,如不具有Cry14Ab- 1编码基因并且不具有HPPD-4编码基因的大豆植物,与包含优良事件EE-GM4 的第二大豆植物杂交,并且选择包含优良事件EE-GM4的后代植物的种子,所述方法包括用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或包含其的混合物中的一种或多种处理所述种子的步骤,其中所述优良事件包含根据段落107中所述的核酸分子,或其中所述优良事件为基因座包含含有嵌合HPPD-4蛋白质编码基因和嵌合Cry14Ab-1蛋白质编码基因的插入T-DNA,和直接环绕所述插入T-DNA的5'和3'侧接序列,如以保藏号PTA-123624保藏于 ATCC的参考种子,如还包含SEQID No.3的核苷酸序列和SEQ ID No.4的核苷酸序列的所述植物中所发现。
102.以上段落中任一个所述的植物、种子、部分或细胞以及所述化合物和/ 或生物防治剂或含有其的混合物的用途,以用于产生大豆种子。
103.以上段落中任一个所述的经处理的大豆植物或种子的用途,其用于生长线虫抗性和/或HPPD抑制剂除草剂耐受性植物。
104.一种增加大豆植物的产率的方法,其用于当在含有、曾含有或预期含有线虫或线虫卵,如SCN、RKN、短体线虫或肾形线虫或其卵的田地中种植时,所述方法包含以下步骤:1)获得包含优良事件EE-GM4的大豆植物或种子,和 2)种植或播种所述植物或种子,其中包含所述优良事件的参考种子以保藏号 PTA-123624保藏于ATCC,所述方法包含用如本文所述的一种或多种化合物和/ 或一种或多种生物防治剂或混合物中的一种或多种处理所述植物或种子的步骤。
105.一种增加大豆植物产率的方法,其用于侵染有猝死综合征的含SCN田地中,或引起大豆的缺铁失绿症的含SCN田地中的大豆植物,所述方法包含播种包含优良事件EE-GM4的经处理的种子,其中包含所述优良事件的参考种子以保藏号PTA-123624保藏于ATCC,其中所述种子用所述其它事件中的一种或多种处理,用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或包含其的混合物中的一种或多种处理,如一种或多种杀线虫、杀昆虫或杀真菌化合物和/或生物防治剂,或一种或多种杀线虫、杀昆虫和杀真菌化合物和/或生物防治剂的组合。
106.一种包含如上文所描述的优良事件EE-GM4的植物、种子、部分或细胞,其也包含以下其它事件中的一种或多种:事件MON87751、事件 pDAB8264.42.32.1、事件DAS-81419-2、事件FG-072、事件SYHT0H2、事件DAS-68416-4、事件DAS-81615-9、事件DAS-44406-6、事件MON87708、事件 MON89788、事件DAS-14536-7、事件GTS 40-3-2、事件A2704-12、事件BPS- CV127-9、事件A5547-127、事件MON87754、事件
Figure BDA0002911161790000591
事件 MON87701、事件MON87705、事件MON87712、事件pDAB4472-1606、事件 DP-356043-5、事件MON87769、事件
Figure BDA0002911161790000592
事件DP305423,如也包含所述其它事件中的一种或多种,用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或包含其的混合物中的一种或多种处理的上述段落中的任一种所述的种子。
107.一种包含如上文所描述的优良事件EE-GM4的植物、种子、部分或细胞,其也包含以下其它大豆事件组合中的一种或多种:MON89788×MON87708、 HOS×GTS 40-3-2、FG-072×A5547-127、MON87701×MON 89788、DAS-81419- 2×DAS-44406-6、DAS-81419-2×DAS-68416-4、DAS-68416-4×MON 89788、MON 87705×MON 89788、MON 87769×MON 89788、DP305423×GTS 40-3-2、 DP305423×MON87708、事件DP305423×MON87708×事件MON89788、DP305423×MON89788、MON87705×MON87708、MON87705×MON87708× MON89788、MON89788×MON87708×A5547-127、MON87751×MON87701× MON87708×MON89788、SYHT0H2×MON89788、SYHT0H2×GTS 40-3-2、 SYHT0H2×MON89788×MON87708,如也包含所述其它事件组合中的一种或多种,用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或包含其的混合物中的一种或多种处理的上述段落中的任一种所述的植物或种子。
108.这些编号段落中任一个所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,用以下杀线虫剂中的任一种处理:棉铃威(alanycarb)、涕灭威(aldicarb)、虫螨威(carbofuran)、丁硫克百威(carbosulfan)、噻唑磷 (fosthiazate)、硫线磷(cadusafos)、杀线威、硫双灭多威(thiodicarb)、乐果 (dimethoate)、灭线磷(ethoprophos)、特丁硫磷(terbufos)、阿维菌素、溴甲烷和其它卤代烃、选自棉隆(diazomet)和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、三氟咪啶酰胺(fluazaindolizine)、联氟砜(fluensulfone)、氟吡菌酰胺、噻恶嗪芬、N-[1- (2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、顺式茉莉酮(cis-Jasmone)、过敏蛋白(harpin)、印楝油(Azadirachtaindica oil)或印楝素(Azadirachtin)。
109.这些编号段落中任一个所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,用以下杀线虫剂中的任一种处理:噻唑磷、硫线磷、硫双灭多威、阿维菌素、三氟咪啶酰胺、氟吡菌酰胺、噻恶嗪芬、N-[1-(2,6-二氟苯基)- 1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、顺式茉莉酮、过敏蛋白、印楝油或印楝素。
110.段落权利要求109所述的植物、细胞、植物部分或种子,其用选自由以下组成的群组的组合处理:噻唑磷和硫线磷、噻唑磷和硫双灭多威、噻唑磷和阿维菌素、噻唑磷和三氟咪啶酰胺、噻唑磷和氟吡菌酰胺、噻唑磷和噻恶嗪芬、噻唑磷和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、噻唑磷和顺式茉莉酮、噻唑磷和过敏蛋白、噻唑磷和印楝油、噻唑磷和印楝素、硫线磷和噻唑磷、硫线磷和硫双灭多威、硫线磷和阿维菌素、硫线磷和三氟咪啶酰胺、硫线磷和氟吡菌酰胺、硫线磷和噻恶嗪芬、硫线磷和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]- 2-三氟甲基苯甲酰胺、硫线磷和顺式茉莉酮、硫线磷和过敏蛋白、硫线磷和印楝油、硫线磷和印楝素、硫双灭多威和噻唑磷、硫双灭多威和硫线磷、硫双灭多威和阿维菌素、硫双灭多威和三氟咪啶酰胺、硫双灭多威和氟吡菌酰胺、硫双灭多威和噻恶嗪芬、硫双灭多威和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、硫双灭多威和顺式茉莉酮、硫双灭多威和过敏蛋白、硫双灭多威和印楝油、阿维菌素和硫线磷、阿维菌素和硫双灭多威、阿维菌素和三氟咪啶酰胺、阿维菌素和氟吡菌酰胺、阿维菌素和噻恶嗪芬、阿维菌素和N-[1-(2,6-二氟苯基)- 1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、阿维菌素和顺式茉莉酮、阿维菌素和过敏蛋白、阿维菌素和印楝油、阿维菌素和印楝素、三氟咪啶酰胺和阿维菌素、三氟咪啶酰胺和氟吡菌酰胺、三氟咪啶酰胺和噻恶嗪芬、三氟咪啶酰胺和N-[1-(2,6- 二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、三氟咪啶酰胺和顺式茉莉酮、三氟咪啶酰胺和过敏蛋白、三氟咪啶酰胺和印楝油、三氟咪啶酰胺和印楝素、氟吡菌酰胺和三氟咪啶酰胺、氟吡菌酰胺和噻恶嗪芬、氟吡菌酰胺和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、氟吡菌酰胺和顺式茉莉酮、氟吡菌酰胺和过敏蛋白、氟吡菌酰胺和印楝油、氟吡菌酰胺和印楝素、噻恶嗪芬和N-[1- (2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、噻恶嗪芬和顺式茉莉酮、噻恶嗪芬和过敏蛋白、噻恶嗪芬和印楝油、噻恶嗪芬和印楝素、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺和顺式茉莉酮、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H- 吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺和过敏蛋白、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]- 2-三氟甲基苯甲酰胺和印楝油、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺和印楝素、顺式茉莉酮和过敏蛋白、顺式茉莉酮和印楝油、顺式茉莉酮和印楝素、过敏蛋白和印楝油以及过敏蛋白和印楝素。
111.这些编号段落中任一个所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,其用选自由以下组成的群组的生物防治剂处理:芽孢杆菌(Bacillus)属菌株、短芽孢杆菌(Brevibacillus)属菌株、伯克氏菌(Burkholderia) 属菌株、溶杆菌(Lysobacter)属菌株、巴斯德氏芽菌(Pasteuria)属菌株、节丛孢(Arthrobotrys)属菌株、毒虫霉(Nematoctonus)属菌株、漆斑菌(Myrothecium) 属菌株、拟青霉(Paecilomyces)属菌株、木霉(Trichoderma)属菌株、冢村氏菌(Tsukamurella)属菌株。
112.段落111所述的植物、细胞、植物部分或种子或其生长或打算生长的土壤,其用选自由以下组成的群组的生物防治剂处理:解淀粉芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌、线虫芽孢杆菌(Bacillus nematocida)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、枯草芽孢杆菌、穿刺芽孢杆菌(Bacillus penetrans)、苏云金芽孢杆菌 (Bacillus thuringiensis)、侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)、里诺吉伯克氏菌、抗生素溶杆菌(Lysobacterantibioticus)、产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)、西沢巴斯德氏芽菌、穿刺巴斯德氏芽菌(Pasteuria penetrans)、分支巴斯德氏芽菌(Pasteuria ramosa)、肾状巴斯德氏芽菌(Pasteuria reniformis)、多刺巴斯德氏芽菌(Pasteuria thornei)、美高协巴斯德氏芽菌(Pasteuria usage)、指状节丛孢(Arthrobotrys dactyloides)、少孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)、多孢节丛孢(Arthrobotrys superba)、地理毒虫霉(Nematoctonus geogenius)、滑孢毒虫霉(Nematoctonus leiosporus)、疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria)、淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)、宛氏拟青霉(Paecilomyces variotii)、棘孢木霉(Trichoderma asperellum)、哈茨木霉(Trichodermaharzianum)、绿色木霉 (Trichoderma viride)、里法依哈茨木霉(Trichoderma harzianumrifai)和微代谢冢村氏菌(Tsukamurella paurometabola)。
113.段落112所述的植物、细胞、植物部分或种子或其生长或打算生长的土壤,其用选自由以下组成的群组的生物防治剂处理:解淀粉芽孢杆菌菌株 IN937a、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01、解淀粉芽孢杆菌菌株 B3、解淀粉芽孢杆菌菌株D747、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219、解淀粉芽孢杆菌菌株 AP-295、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838、解淀粉芽孢杆菌菌株F727、坚强芽孢杆菌菌株I-1582、坚强芽孢杆菌菌株NRRL B- 67003、坚强芽孢杆菌菌株NRRL B-67518、坚强芽孢杆菌菌株GB126、侧孢芽孢杆菌菌株ATCC PTA-3952、侧孢芽孢杆菌菌株ATCC PTA-3593、地衣芽孢杆菌菌株ATCC PTA-6175、地衣芽孢杆菌SB3086、地衣芽孢杆菌CH200、地衣芽孢杆菌RTI 184、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株FZB24、苏云金芽孢杆菌菌株EX297512、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371或苏云金芽孢杆菌菌株AQ52、侧孢短芽孢杆菌菌株ATCC 64、侧孢短芽孢杆菌菌株NRS1111、侧孢短芽孢杆菌菌株NRS 1645、侧孢短芽孢杆菌菌株NRS 1647、侧孢短芽孢杆菌菌株BPM3、侧孢短芽孢杆菌菌株G4、侧孢短芽孢杆菌菌株NCIMB 41419、里诺吉伯克氏菌、里诺吉伯克氏菌菌株A396、抗生素溶杆菌菌株13-1、产酶溶杆菌菌株C3、疣孢漆斑菌菌株AARC-0255、淡紫拟青霉菌株251、宛氏拟青霉菌株Q-09、西沢巴斯德氏芽菌菌株Pn1、棘孢木霉菌株ICC 012、棘孢木霉菌株SKT-1、棘孢木霉菌株T34、棘孢木霉菌株T25、棘孢木霉菌株SF04、棘孢木霉菌株TV1、棘孢木霉菌株T11、哈茨木霉菌株 ICC012、里法依哈茨木霉T39、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2、绿色木霉菌株 TV1、绿色木霉菌株TV25、深绿木霉(Trichodermaatroviride)菌株CNCM I- 1237、深绿木霉菌株CNCM I-1237、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388、深绿木霉菌株NMI编号V08/002389、深绿木霉菌株NMI编号V08/002390、深绿木霉菌株ATCC 20476、深绿木霉菌株T11、深绿木霉菌株LC52、深绿木霉菌株SC1、深绿木霉菌株SKT-1、深绿木霉菌株SKT-2、深绿木霉菌株SKT-3和微代谢冢村氏菌菌株C-924。
114.这些编号段落中任一个所述的植物、细胞、植物部分或种子,其中所述处理是种子处理。
115.这些编号段落中任一个所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,用选自以下的杀线虫剂和生物防治剂的组合处理:解淀粉芽孢杆菌菌株和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株和印楝素、坚强芽孢杆菌菌株和棉铃威、坚强芽孢杆菌菌株和涕灭威、坚强芽孢杆菌菌株和虫螨威、坚强芽孢杆菌菌株和丁硫克百威、坚强芽孢杆菌菌株和噻唑磷、坚强芽孢杆菌菌株和硫线磷、坚强芽孢杆菌菌株和杀线威、坚强芽孢杆菌菌株和硫双灭多威、坚强芽孢杆菌菌株和乐果、坚强芽孢杆菌菌株和灭线磷、坚强芽孢杆菌菌株和特丁硫磷、坚强芽孢杆菌菌株和阿维菌素、坚强芽孢杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、坚强芽孢杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、坚强芽孢杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、坚强芽孢杆菌菌株和联氟砜、坚强芽孢杆菌菌株和氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌菌株和噻恶嗪芬、坚强芽孢杆菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑 -3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、坚强芽孢杆菌菌株和顺式茉莉酮、坚强芽孢杆菌菌株和过敏蛋白、坚强芽孢杆菌菌株和印楝油、坚强芽孢杆菌菌株和印楝素、侧孢芽孢杆菌和棉铃威、侧孢芽孢杆菌和涕灭威、侧孢芽孢杆菌和虫螨威、侧孢芽孢杆菌和丁硫克百威、侧孢芽孢杆菌和噻唑磷、侧孢芽孢杆菌和硫线磷、侧孢芽孢杆菌和杀线威、侧孢芽孢杆菌和硫双灭多威、侧孢芽孢杆菌和乐果、侧孢芽孢杆菌和灭线磷、侧孢芽孢杆菌和特丁硫磷、侧孢芽孢杆菌和阿维菌素、侧孢芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃、侧孢芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、侧孢芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺、侧孢芽孢杆菌和联氟砜、侧孢芽孢杆菌和氟吡菌酰胺、侧孢芽孢杆菌和噻恶嗪芬、侧孢芽孢杆菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)- 1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、侧孢芽孢杆菌和顺式茉莉酮、侧孢芽孢杆菌和过敏蛋白、侧孢芽孢杆菌和印楝油、侧孢芽孢杆菌和印楝素、迟缓芽孢杆菌菌株和棉铃威、迟缓芽孢杆菌菌株和涕灭威、迟缓芽孢杆菌菌株和虫螨威、迟缓芽孢杆菌菌株和丁硫克百威、迟缓芽孢杆菌菌株和噻唑磷、迟缓芽孢杆菌菌株和硫线磷、迟缓芽孢杆菌菌株和杀线威、迟缓芽孢杆菌菌株和硫双灭多威、迟缓芽孢杆菌菌株和乐果、迟缓芽孢杆菌菌株和灭线磷、迟缓芽孢杆菌菌株和特丁硫磷、迟缓芽孢杆菌菌株和阿维菌素、迟缓芽孢杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、迟缓芽孢杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、迟缓芽孢杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、迟缓芽孢杆菌菌株和联氟砜、迟缓芽孢杆菌菌株和氟吡菌酰胺、迟缓芽孢杆菌菌株和噻恶嗪芬、迟缓芽孢杆菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)- 1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、迟缓芽孢杆菌菌株和顺式茉莉酮、迟缓芽孢杆菌菌株和过敏蛋白、迟缓芽孢杆菌菌株和印楝油、迟缓芽孢杆菌菌株和印楝素、地衣芽孢杆菌菌株和棉铃威、地衣芽孢杆菌菌株和涕灭威、地衣芽孢杆菌菌株和虫螨威、地衣芽孢杆菌菌株和丁硫克百威、地衣芽孢杆菌菌株和噻唑磷、地衣芽孢杆菌菌株和硫线磷、地衣芽孢杆菌菌株和杀线威、地衣芽孢杆菌菌株和硫双灭多威、地衣芽孢杆菌菌株和乐果、地衣芽孢杆菌菌株和灭线磷、地衣芽孢杆菌菌株和特丁硫磷、地衣芽孢杆菌菌株和阿维菌素、地衣芽孢杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、地衣芽孢杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、地衣芽孢杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、地衣芽孢杆菌菌株和联氟砜、地衣芽孢杆菌菌株和氟吡菌酰胺、地衣芽孢杆菌菌株和噻恶嗪芬、地衣芽孢杆菌菌株和N-[1-(2,6- 二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、地衣芽孢杆菌菌株和顺式茉莉酮、地衣芽孢杆菌菌株和过敏蛋白、地衣芽孢杆菌菌株和印楝油、地衣芽孢杆菌菌株和印楝素、线虫芽孢杆菌菌株和棉铃威、线虫芽孢杆菌菌株和涕灭威、线虫芽孢杆菌菌株和虫螨威、线虫芽孢杆菌菌株和丁硫克百威、线虫芽孢杆菌菌株和噻唑磷、线虫芽孢杆菌菌株和硫线磷、线虫芽孢杆菌菌株和杀线威、线虫芽孢杆菌菌株和硫双灭多威、线虫芽孢杆菌菌株和乐果、线虫芽孢杆菌菌株和灭线磷、线虫芽孢杆菌菌株和特丁硫磷、线虫芽孢杆菌菌株和阿维菌素、线虫芽孢杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、线虫芽孢杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、线虫芽孢杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、线虫芽孢杆菌菌株和联氟砜、线虫芽孢杆菌菌株和氟吡菌酰胺、线虫芽孢杆菌菌株和噻恶嗪芬、线虫芽孢杆菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、线虫芽孢杆菌菌株和顺式茉莉酮、线虫芽孢杆菌菌株和过敏蛋白、线虫芽孢杆菌菌株和印楝油、线虫芽孢杆菌菌株和印楝素、短小芽孢杆菌菌株和棉铃威、短小芽孢杆菌菌株和涕灭威、短小芽孢杆菌菌株和虫螨威、短小芽孢杆菌菌株和丁硫克百威、短小芽孢杆菌菌株和噻唑磷、短小芽孢杆菌菌株和硫线磷、短小芽孢杆菌菌株和杀线威、短小芽孢杆菌菌株和硫双灭多威、短小芽孢杆菌菌株和乐果、短小芽孢杆菌菌株和灭线磷、短小芽孢杆菌菌株和特丁硫磷、短小芽孢杆菌菌株和阿维菌素、短小芽孢杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、短小芽孢杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、短小芽孢杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、短小芽孢杆菌菌株和联氟砜、短小芽孢杆菌菌株和氟吡菌酰胺、短小芽孢杆菌菌株和噻恶嗪芬、短小芽孢杆菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、短小芽孢杆菌菌株和顺式茉莉酮、短小芽孢杆菌菌株和过敏蛋白、短小芽孢杆菌菌株和印楝油、短小芽孢杆菌菌株和印楝素、枯草芽孢杆菌菌株和棉铃威、枯草芽孢杆菌菌株和涕灭威、枯草芽孢杆菌菌株和虫螨威、枯草芽孢杆菌菌株和丁硫克百威、枯草芽孢杆菌菌株和噻唑磷、枯草芽孢杆菌菌株和硫线磷、枯草芽孢杆菌菌株和杀线威、枯草芽孢杆菌菌株和硫双灭多威、枯草芽孢杆菌菌株和乐果、枯草芽孢杆菌菌株和灭线磷、枯草芽孢杆菌菌株和特丁硫磷、枯草芽孢杆菌菌株和阿维菌素、枯草芽孢杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、枯草芽孢杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、枯草芽孢杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、枯草芽孢杆菌菌株和联氟砜、枯草芽孢杆菌菌株和氟吡菌酰胺、枯草芽孢杆菌菌株和噻恶嗪芬、枯草芽孢杆菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、枯草芽孢杆菌菌株和顺式茉莉酮、枯草芽孢杆菌菌株和过敏蛋白、枯草芽孢杆菌菌株和印楝油、枯草芽孢杆菌菌株和印楝素、穿刺芽孢杆菌菌株和棉铃威、穿刺芽孢杆菌菌株和涕灭威、穿刺芽孢杆菌菌株和虫螨威、穿刺芽孢杆菌菌株和丁硫克百威、穿刺芽孢杆菌菌株和噻唑磷、穿刺芽孢杆菌菌株和硫线磷、穿刺芽孢杆菌菌株和杀线威、穿刺芽孢杆菌菌株和硫双灭多威、穿刺芽孢杆菌菌株和乐果、穿刺芽孢杆菌菌株和灭线磷、穿刺芽孢杆菌菌株和特丁硫磷、穿刺芽孢杆菌菌株和阿维菌素、穿刺芽孢杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、穿刺芽孢杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、穿刺芽孢杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、穿刺芽孢杆菌菌株和联氟砜、穿刺芽孢杆菌菌株和氟吡菌酰胺、穿刺芽孢杆菌菌株和噻恶嗪芬、穿刺芽孢杆菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、穿刺芽孢杆菌菌株和顺式茉莉酮、穿刺芽孢杆菌菌株和过敏蛋白、穿刺芽孢杆菌菌株和印楝油、穿刺芽孢杆菌菌株和印楝素、苏云金芽孢杆菌菌株和棉铃威、苏云金芽孢杆菌菌株和涕灭威、苏云金芽孢杆菌菌株和虫螨威、苏云金芽孢杆菌菌株和丁硫克百威、苏云金芽孢杆菌菌株和噻唑磷、苏云金芽孢杆菌菌株和硫线磷、苏云金芽孢杆菌菌株和杀线威、苏云金芽孢杆菌菌株和硫双灭多威、苏云金芽孢杆菌菌株和乐果、苏云金芽孢杆菌菌株和灭线磷、苏云金芽孢杆菌菌株和特丁硫磷、苏云金芽孢杆菌菌株和阿维菌素、苏云金芽孢杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、苏云金芽孢杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、苏云金芽孢杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、苏云金芽孢杆菌菌株和联氟砜、苏云金芽孢杆菌菌株和氟吡菌酰胺、苏云金芽孢杆菌菌株和噻恶嗪芬、苏云金芽孢杆菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、苏云金芽孢杆菌菌株和顺式茉莉酮、苏云金芽孢杆菌菌株和过敏蛋白、苏云金芽孢杆菌菌株和印楝油、苏云金芽孢杆菌菌株和印楝素、侧孢短芽孢杆菌菌株和棉铃威、侧孢短芽孢杆菌菌株和涕灭威、侧孢短芽孢杆菌菌株和虫螨威、侧孢短芽孢杆菌菌株和丁硫克百威、侧孢短芽孢杆菌菌株和噻唑磷、侧孢短芽孢杆菌菌株和硫线磷、侧孢短芽孢杆菌菌株和杀线威、侧孢短芽孢杆菌菌株和硫双灭多威、侧孢短芽孢杆菌菌株和乐果、侧孢短芽孢杆菌菌株和灭线磷、侧孢短芽孢杆菌菌株和特丁硫磷、侧孢短芽孢杆菌菌株和阿维菌素、侧孢短芽孢杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、侧孢短芽孢杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、侧孢短芽孢杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、侧孢短芽孢杆菌菌株和联氟砜、侧孢短芽孢杆菌菌株和氟吡菌酰胺、侧孢短芽孢杆菌菌株和噻恶嗪芬、侧孢短芽孢杆菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、侧孢短芽孢杆菌菌株和顺式茉莉酮、侧孢短芽孢杆菌菌株和过敏蛋白、侧孢短芽孢杆菌菌株和印楝油、侧孢短芽孢杆菌菌株和印楝素、里诺吉伯克氏菌菌株和棉铃威、里诺吉伯克氏菌菌株和涕灭威、里诺吉伯克氏菌菌株和虫螨威、里诺吉伯克氏菌菌株和丁硫克百威、里诺吉伯克氏菌菌株和噻唑磷、里诺吉伯克氏菌菌株和硫线磷、里诺吉伯克氏菌菌株和杀线威、里诺吉伯克氏菌菌株和硫双灭多威、里诺吉伯克氏菌菌株和乐果、里诺吉伯克氏菌菌株和灭线磷、里诺吉伯克氏菌菌株和特丁硫磷、里诺吉伯克氏菌菌株和阿维菌素、里诺吉伯克氏菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、里诺吉伯克氏菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、里诺吉伯克氏菌菌株和三氟咪啶酰胺、里诺吉伯克氏菌菌株和联氟砜、里诺吉伯克氏菌菌株和氟吡菌酰胺、里诺吉伯克氏菌菌株和噻恶嗪芬、里诺吉伯克氏菌菌株和N- [1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、里诺吉伯克氏菌菌株和顺式茉莉酮、里诺吉伯克氏菌菌株和过敏蛋白、里诺吉伯克氏菌菌株和印楝油、里诺吉伯克氏菌菌株和印楝素、抗生素溶杆菌菌株和棉铃威、抗生素溶杆菌菌株和涕灭威、抗生素溶杆菌菌株和虫螨威、抗生素溶杆菌菌株和丁硫克百威、抗生素溶杆菌菌株和噻唑磷、抗生素溶杆菌菌株和硫线磷、抗生素溶杆菌菌株和杀线威、抗生素溶杆菌菌株和硫双灭多威、抗生素溶杆菌菌株和乐果、抗生素溶杆菌菌株和灭线磷、抗生素溶杆菌菌株和特丁硫磷、抗生素溶杆菌菌株和阿维菌素、抗生素溶杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、抗生素溶杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、抗生素溶杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、抗生素溶杆菌菌株和联氟砜、抗生素溶杆菌菌株和氟吡菌酰胺、抗生素溶杆菌菌株和噻恶嗪芬、抗生素溶杆菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、抗生素溶杆菌菌株和顺式茉莉酮、抗生素溶杆菌菌株和过敏蛋白、抗生素溶杆菌菌株和印楝油、抗生素溶杆菌菌株和印楝素、产酶溶杆菌菌株和棉铃威、产酶溶杆菌菌株和涕灭威、产酶溶杆菌菌株和虫螨威、产酶溶杆菌菌株和丁硫克百威、产酶溶杆菌菌株和噻唑磷、产酶溶杆菌菌株和硫线磷、产酶溶杆菌菌株和杀线威、产酶溶杆菌菌株和硫双灭多威、产酶溶杆菌菌株和乐果、产酶溶杆菌菌株和灭线磷、产酶溶杆菌菌株和特丁硫磷、产酶溶杆菌菌株和阿维菌素、产酶溶杆菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、产酶溶杆菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、产酶溶杆菌菌株和三氟咪啶酰胺、产酶溶杆菌菌株和联氟砜、产酶溶杆菌菌株和氟吡菌酰胺、产酶溶杆菌菌株和噻恶嗪芬、产酶溶杆菌菌株和N-[1- (2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、产酶溶杆菌菌株和顺式茉莉酮、产酶溶杆菌菌株和过敏蛋白、产酶溶杆菌菌株和印楝油、产酶溶杆菌菌株和印楝素、西沢巴斯德氏芽菌菌株和棉铃威、西沢巴斯德氏芽菌菌株和涕灭威、西沢巴斯德氏芽菌菌株和虫螨威、西沢巴斯德氏芽菌菌株和丁硫克百威、西沢巴斯德氏芽菌菌株和噻唑磷、西沢巴斯德氏芽菌菌株和硫线磷、西沢巴斯德氏芽菌菌株和杀线威、西沢巴斯德氏芽菌菌株和硫双灭多威、西沢巴斯德氏芽菌菌株和乐果、西沢巴斯德氏芽菌菌株和灭线磷、西沢巴斯德氏芽菌菌株和特丁硫磷、西沢巴斯德氏芽菌菌株和阿维菌素、西沢巴斯德氏芽菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、西沢巴斯德氏芽菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、西沢巴斯德氏芽菌菌株和三氟咪啶酰胺、西沢巴斯德氏芽菌菌株和联氟砜、西沢巴斯德氏芽菌菌株和氟吡菌酰胺、西沢巴斯德氏芽菌菌株和噻恶嗪芬、西沢巴斯德氏芽菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、西沢巴斯德氏芽菌菌株和顺式茉莉酮、西沢巴斯德氏芽菌菌株和过敏蛋白、西沢巴斯德氏芽菌菌株和印楝油、西沢巴斯德氏芽菌菌株和印楝素、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和棉铃威、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和涕灭威、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和虫螨威、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和丁硫克百威、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和噻唑磷、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和硫线磷、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和杀线威、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和硫双灭多威、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和乐果、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和灭线磷、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和特丁硫磷、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和阿维菌素、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和三氟咪啶酰胺、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和联氟砜、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和氟吡菌酰胺、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和噻恶嗪芬、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和顺式茉莉酮、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和过敏蛋白、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和印楝油、穿刺巴斯德氏芽菌菌株和印楝素、分支巴斯德氏芽菌菌株和棉铃威、分支巴斯德氏芽菌菌株和涕灭威、分支巴斯德氏芽菌菌株和虫螨威、分支巴斯德氏芽菌菌株和丁硫克百威、分支巴斯德氏芽菌菌株和噻唑磷、分支巴斯德氏芽菌菌株和硫线磷、分支巴斯德氏芽菌菌株和杀线威、分支巴斯德氏芽菌菌株和硫双灭多威、分支巴斯德氏芽菌菌株和乐果、分支巴斯德氏芽菌菌株和灭线磷、分支巴斯德氏芽菌菌株和特丁硫磷、分支巴斯德氏芽菌菌株和阿维菌素、分支巴斯德氏芽菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、分支巴斯德氏芽菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、分支巴斯德氏芽菌菌株和三氟咪啶酰胺、分支巴斯德氏芽菌菌株和联氟砜、分支巴斯德氏芽菌菌株和氟吡菌酰胺、分支巴斯德氏芽菌菌株和噻恶嗪芬、分支巴斯德氏芽菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、分支巴斯德氏芽菌菌株和顺式茉莉酮、分支巴斯德氏芽菌菌株和过敏蛋白、分支巴斯德氏芽菌菌株和印楝油、分支巴斯德氏芽菌菌株和印楝素、肾状巴斯德氏芽菌菌株和棉铃威、肾状巴斯德氏芽菌菌株和涕灭威、肾状巴斯德氏芽菌菌株和虫螨威、肾状巴斯德氏芽菌菌株和丁硫克百威、肾状巴斯德氏芽菌菌株和噻唑磷、肾状巴斯德氏芽菌菌株和硫线磷、肾状巴斯德氏芽菌菌株和杀线威、肾状巴斯德氏芽菌菌株和硫双灭多威、肾状巴斯德氏芽菌菌株和乐果、肾状巴斯德氏芽菌菌株和灭线磷、肾状巴斯德氏芽菌菌株和特丁硫磷、肾状巴斯德氏芽菌菌株和阿维菌素、肾状巴斯德氏芽菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、肾状巴斯德氏芽菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、肾状巴斯德氏芽菌菌株和三氟咪啶酰胺、肾状巴斯德氏芽菌菌株和联氟砜、肾状巴斯德氏芽菌菌株和氟吡菌酰胺、肾状巴斯德氏芽菌菌株和噻恶嗪芬、肾状巴斯德氏芽菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、肾状巴斯德氏芽菌菌株和顺式茉莉酮、肾状巴斯德氏芽菌菌株和过敏蛋白、肾状巴斯德氏芽菌菌株和印楝油、肾状巴斯德氏芽菌菌株和印楝素、多刺巴斯德氏芽菌菌株和棉铃威、多刺巴斯德氏芽菌菌株和涕灭威、多刺巴斯德氏芽菌菌株和虫螨威、多刺巴斯德氏芽菌菌株和丁硫克百威、多刺巴斯德氏芽菌菌株和噻唑磷、多刺巴斯德氏芽菌菌株和硫线磷、多刺巴斯德氏芽菌菌株和杀线威、多刺巴斯德氏芽菌菌株和硫双灭多威、多刺巴斯德氏芽菌菌株和乐果、多刺巴斯德氏芽菌菌株和灭线磷、多刺巴斯德氏芽菌菌株和特丁硫磷、多刺巴斯德氏芽菌菌株和阿维菌素、多刺巴斯德氏芽菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、多刺巴斯德氏芽菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、多刺巴斯德氏芽菌菌株和三氟咪啶酰胺、多刺巴斯德氏芽菌菌株和联氟砜、多刺巴斯德氏芽菌菌株和氟吡菌酰胺、多刺巴斯德氏芽菌菌株和噻恶嗪芬、多刺巴斯德氏芽菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、多刺巴斯德氏芽菌菌株和顺式茉莉酮、多刺巴斯德氏芽菌菌株和过敏蛋白、多刺巴斯德氏芽菌菌株和印楝油、多刺巴斯德氏芽菌菌株和印楝素、美高协巴斯德氏芽菌菌株和棉铃威、美高协巴斯德氏芽菌菌株和涕灭威、美高协巴斯德氏芽菌菌株和虫螨威、美高协巴斯德氏芽菌菌株和丁硫克百威、美高协巴斯德氏芽菌菌株和噻唑磷、美高协巴斯德氏芽菌菌株和硫线磷、美高协巴斯德氏芽菌菌株和杀线威、美高协巴斯德氏芽菌菌株和硫双灭多威、美高协巴斯德氏芽菌菌株和乐果、美高协巴斯德氏芽菌菌株和灭线磷、美高协巴斯德氏芽菌菌株和特丁硫磷、美高协巴斯德氏芽菌菌株和阿维菌素、美高协巴斯德氏芽菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、美高协巴斯德氏芽菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、美高协巴斯德氏芽菌菌株和三氟咪啶酰胺、美高协巴斯德氏芽菌菌株和联氟砜、美高协巴斯德氏芽菌菌株和氟吡菌酰胺、美高协巴斯德氏芽菌菌株和噻恶嗪芬、美高协巴斯德氏芽菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、美高协巴斯德氏芽菌菌株和顺式茉莉酮、美高协巴斯德氏芽菌菌株和过敏蛋白、美高协巴斯德氏芽菌菌株和印楝油、美高协巴斯德氏芽菌菌株和印楝素、指状节丛孢菌株和棉铃威、指状节丛孢菌株和涕灭威、指状节丛孢菌株和虫螨威、指状节丛孢菌株和丁硫克百威、指状节丛孢菌株和噻唑磷、指状节丛孢菌株和硫线磷、指状节丛孢菌株和杀线威、指状节丛孢菌株和硫双灭多威、指状节丛孢菌株和乐果、指状节丛孢菌株和灭线磷、指状节丛孢菌株和特丁硫磷、指状节丛孢菌株和阿维菌素、指状节丛孢菌株和溴甲烷和其它卤代烃、指状节丛孢菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、指状节丛孢菌株和三氟咪啶酰胺、指状节丛孢菌株和联氟砜、指状节丛孢菌株和氟吡菌酰胺、指状节丛孢菌株和噻恶嗪芬、指状节丛孢菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、指状节丛孢菌株和顺式茉莉酮、指状节丛孢菌株和过敏蛋白、指状节丛孢菌株和印楝油、指状节丛孢菌株和印楝素、少孢节丛孢菌株和棉铃威、少孢节丛孢菌株和涕灭威、少孢节丛孢菌株和虫螨威、少孢节丛孢菌株和丁硫克百威、少孢节丛孢菌株和噻唑磷、少孢节丛孢菌株和硫线磷、少孢节丛孢菌株和杀线威、少孢节丛孢菌株和硫双灭多威、少孢节丛孢菌株和乐果、少孢节丛孢菌株和灭线磷、少孢节丛孢菌株和特丁硫磷、少孢节丛孢菌株和阿维菌素、少孢节丛孢菌株和溴甲烷和其它卤代烃、少孢节丛孢菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、少孢节丛孢菌株和三氟咪啶酰胺、少孢节丛孢菌株和联氟砜、少孢节丛孢菌株和氟吡菌酰胺、少孢节丛孢菌株和噻恶嗪芬、少孢节丛孢菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、少孢节丛孢菌株和顺式茉莉酮、少孢节丛孢菌株和过敏蛋白、少孢节丛孢菌株和印楝油、少孢节丛孢菌株和印楝素、多孢节丛孢菌株和棉铃威、多孢节丛孢菌株和涕灭威、多孢节丛孢菌株和虫螨威、多孢节丛孢菌株和丁硫克百威、多孢节丛孢菌株和噻唑磷、多孢节丛孢菌株和硫线磷、多孢节丛孢菌株和杀线威、多孢节丛孢菌株和硫双灭多威、多孢节丛孢菌株和乐果、多孢节丛孢菌株和灭线磷、多孢节丛孢菌株和特丁硫磷、多孢节丛孢菌株和阿维菌素、多孢节丛孢菌株和溴甲烷和其它卤代烃、多孢节丛孢菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、多孢节丛孢菌株和三氟咪啶酰胺、多孢节丛孢菌株和联氟砜、多孢节丛孢菌株和氟吡菌酰胺、多孢节丛孢菌株和噻恶嗪芬、多孢节丛孢菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、多孢节丛孢菌株和顺式茉莉酮、多孢节丛孢菌株和过敏蛋白、多孢节丛孢菌株和印楝油、多孢节丛孢菌株和印楝素、地理毒虫霉菌株和棉铃威、地理毒虫霉菌株和涕灭威、地理毒虫霉菌株和虫螨威、地理毒虫霉菌株和丁硫克百威、地理毒虫霉菌株和噻唑磷、地理毒虫霉菌株和硫线磷、地理毒虫霉菌株和杀线威、地理毒虫霉菌株和硫双灭多威、地理毒虫霉菌株和乐果、地理毒虫霉菌株和灭线磷、地理毒虫霉菌株和特丁硫磷、地理毒虫霉菌株和阿维菌素、地理毒虫霉菌株和溴甲烷和其它卤代烃、地理毒虫霉菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、地理毒虫霉菌株和三氟咪啶酰胺、地理毒虫霉菌株和联氟砜、地理毒虫霉菌株和氟吡菌酰胺、地理毒虫霉菌株和噻恶嗪芬、地理毒虫霉菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、地理毒虫霉菌株和顺式茉莉酮、地理毒虫霉菌株和过敏蛋白、地理毒虫霉菌株和印楝油、地理毒虫霉菌株和印楝素、滑孢毒虫霉菌株和棉铃威、滑孢毒虫霉菌株和涕灭威、滑孢毒虫霉菌株和虫螨威、滑孢毒虫霉菌株和丁硫克百威、滑孢毒虫霉菌株和噻唑磷、滑孢毒虫霉菌株和硫线磷、滑孢毒虫霉菌株和杀线威、滑孢毒虫霉菌株和硫双灭多威、滑孢毒虫霉菌株和乐果、滑孢毒虫霉菌株和灭线磷、滑孢毒虫霉菌株和特丁硫磷、滑孢毒虫霉菌株和阿维菌素、滑孢毒虫霉菌株和溴甲烷和其它卤代烃、滑孢毒虫霉菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、滑孢毒虫霉菌株和三氟咪啶酰胺、滑孢毒虫霉菌株和联氟砜、滑孢毒虫霉菌株和氟吡菌酰胺、滑孢毒虫霉菌株和噻恶嗪芬、滑孢毒虫霉菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、滑孢毒虫霉菌株和顺式茉莉酮、滑孢毒虫霉菌株和过敏蛋白、滑孢毒虫霉菌株和印楝油、滑孢毒虫霉菌株和印楝素、疣孢漆斑菌菌株和棉铃威、疣孢漆斑菌菌株和涕灭威、疣孢漆斑菌菌株和虫螨威、疣孢漆斑菌菌株和丁硫克百威、疣孢漆斑菌菌株和噻唑磷、疣孢漆斑菌菌株和硫线磷、疣孢漆斑菌菌株和杀线威、疣孢漆斑菌菌株和硫双灭多威、疣孢漆斑菌菌株和乐果、疣孢漆斑菌菌株和灭线磷、疣孢漆斑菌菌株和特丁硫磷、疣孢漆斑菌菌株和阿维菌素、疣孢漆斑菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、疣孢漆斑菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、疣孢漆斑菌菌株和三氟咪啶酰胺、疣孢漆斑菌菌株和联氟砜、疣孢漆斑菌菌株和氟吡菌酰胺、疣孢漆斑菌菌株和噻恶嗪芬、疣孢漆斑菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、疣孢漆斑菌菌株和顺式茉莉酮、疣孢漆斑菌菌株和过敏蛋白、疣孢漆斑菌菌株和印楝油、疣孢漆斑菌菌株和印楝素、淡紫拟青霉菌株和棉铃威、淡紫拟青霉菌株和涕灭威、淡紫拟青霉菌株和虫螨威、淡紫拟青霉菌株和丁硫克百威、淡紫拟青霉菌株和噻唑磷、淡紫拟青霉菌株和硫线磷、淡紫拟青霉菌株和杀线威、淡紫拟青霉菌株和硫双灭多威、淡紫拟青霉菌株和乐果、淡紫拟青霉菌株和灭线磷、淡紫拟青霉菌株和特丁硫磷、淡紫拟青霉菌株和阿维菌素、淡紫拟青霉菌株和溴甲烷和其它卤代烃、淡紫拟青霉菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、淡紫拟青霉菌株和三氟咪啶酰胺、淡紫拟青霉菌株和联氟砜、淡紫拟青霉菌株和氟吡菌酰胺、淡紫拟青霉菌株和噻恶嗪芬、淡紫拟青霉菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、淡紫拟青霉菌株和顺式茉莉酮、淡紫拟青霉菌株和过敏蛋白、淡紫拟青霉菌株和印楝油、淡紫拟青霉菌株和印楝素、宛氏拟青霉菌株和棉铃威、宛氏拟青霉菌株和涕灭威、宛氏拟青霉菌株和虫螨威、宛氏拟青霉菌株和丁硫克百威、宛氏拟青霉菌株和噻唑磷、宛氏拟青霉菌株和硫线磷、宛氏拟青霉菌株和杀线威、宛氏拟青霉菌株和硫双灭多威、宛氏拟青霉菌株和乐果、宛氏拟青霉菌株和灭线磷、宛氏拟青霉菌株和特丁硫磷、宛氏拟青霉菌株和阿维菌素、宛氏拟青霉菌株和溴甲烷和其它卤代烃、宛氏拟青霉菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、宛氏拟青霉菌株和三氟咪啶酰胺、宛氏拟青霉菌株和联氟砜、宛氏拟青霉菌株和氟吡菌酰胺、宛氏拟青霉菌株和噻恶嗪芬、宛氏拟青霉菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、宛氏拟青霉菌株和顺式茉莉酮、宛氏拟青霉菌株和过敏蛋白、宛氏拟青霉菌株和印楝油、宛氏拟青霉菌株和印楝素、棘孢木霉菌株和棉铃威、棘孢木霉菌株和涕灭威、棘孢木霉菌株和虫螨威、棘孢木霉菌株和丁硫克百威、棘孢木霉菌株和噻唑磷、棘孢木霉菌株和硫线磷、棘孢木霉菌株和杀线威、棘孢木霉菌株和硫双灭多威、棘孢木霉菌株和乐果、棘孢木霉菌株和灭线磷、棘孢木霉菌株和特丁硫磷、棘孢木霉菌株和阿维菌素、棘孢木霉菌株和溴甲烷和其它卤代烃、棘孢木霉菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、棘孢木霉菌株和三氟咪啶酰胺、棘孢木霉菌株和联氟砜、棘孢木霉菌株和氟吡菌酰胺、棘孢木霉菌株和噻恶嗪芬、棘孢木霉菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2- 三氟甲基苯甲酰胺、棘孢木霉菌株和顺式茉莉酮、棘孢木霉菌株和过敏蛋白、棘孢木霉菌株和印楝油、棘孢木霉菌株和印楝素、深绿木霉菌株和棉铃威、深绿木霉菌株和涕灭威、深绿木霉菌株和虫螨威、深绿木霉菌株和丁硫克百威、深绿木霉菌株和噻唑磷、深绿木霉菌株和硫线磷、深绿木霉菌株和杀线威、深绿木霉菌株和硫双灭多威、深绿木霉菌株和乐果、深绿木霉菌株和灭线磷、深绿木霉菌株和特丁硫磷、深绿木霉菌株和阿维菌素、深绿木霉菌株和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株和三氟咪啶酰胺、深绿木霉菌株和联氟砜、深绿木霉菌株和氟吡菌酰胺、深绿木霉菌株和噻恶嗪芬、深绿木霉菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、深绿木霉菌株和顺式茉莉酮、深绿木霉菌株和过敏蛋白、深绿木霉菌株和印楝油、深绿木霉菌株和印楝素、哈茨木霉菌株和棉铃威、哈茨木霉菌株和涕灭威、哈茨木霉菌株和虫螨威、哈茨木霉菌株和丁硫克百威、哈茨木霉菌株和噻唑磷、哈茨木霉菌株和硫线磷、哈茨木霉菌株和杀线威、哈茨木霉菌株和硫双灭多威、哈茨木霉菌株和乐果、哈茨木霉菌株和灭线磷、哈茨木霉菌株和特丁硫磷、哈茨木霉菌株和阿维菌素、哈茨木霉菌株和溴甲烷和其它卤代烃、哈茨木霉菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、哈茨木霉菌株和三氟咪啶酰胺、哈茨木霉菌株和联氟砜、哈茨木霉菌株和氟吡菌酰胺、哈茨木霉菌株和噻恶嗪芬、哈茨木霉菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、哈茨木霉菌株和顺式茉莉酮、哈茨木霉菌株和过敏蛋白、哈茨木霉菌株和印楝油、哈茨木霉菌株和印楝素、绿色木霉菌株和棉铃威、绿色木霉菌株和涕灭威、绿色木霉菌株和虫螨威、绿色木霉菌株和丁硫克百威、绿色木霉菌株和噻唑磷、绿色木霉菌株和硫线磷、绿色木霉菌株和杀线威、绿色木霉菌株和硫双灭多威、绿色木霉菌株和乐果、绿色木霉菌株和灭线磷、绿色木霉菌株和特丁硫磷、绿色木霉菌株和阿维菌素、绿色木霉菌株和溴甲烷和其它卤代烃、绿色木霉菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、绿色木霉菌株和三氟咪啶酰胺、绿色木霉菌株和联氟砜、绿色木霉菌株和氟吡菌酰胺、绿色木霉菌株和噻恶嗪芬、绿色木霉菌株和 N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、绿色木霉菌株和顺式茉莉酮、绿色木霉菌株和过敏蛋白、绿色木霉菌株和印楝油、绿色木霉菌株和印楝素、里法依哈茨木霉菌株和棉铃威、里法依哈茨木霉菌株和涕灭威、里法依哈茨木霉菌株和虫螨威、里法依哈茨木霉菌株和丁硫克百威、里法依哈茨木霉菌株和噻唑磷、里法依哈茨木霉菌株和硫线磷、里法依哈茨木霉菌株和杀线威、里法依哈茨木霉菌株和硫双灭多威、里法依哈茨木霉菌株和乐果、里法依哈茨木霉菌株和灭线磷、里法依哈茨木霉菌株和特丁硫磷、里法依哈茨木霉菌株和阿维菌素、里法依哈茨木霉菌株和溴甲烷和其它卤代烃、里法依哈茨木霉菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、里法依哈茨木霉菌株和三氟咪啶酰胺、里法依哈茨木霉菌株和联氟砜、里法依哈茨木霉菌株和氟吡菌酰胺、里法依哈茨木霉菌株和噻恶嗪芬、里法依哈茨木霉菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、里法依哈茨木霉菌株和顺式茉莉酮、里法依哈茨木霉菌株和过敏蛋白、里法依哈茨木霉菌株和印楝油、里法依哈茨木霉菌株和印楝素、微代谢冢村氏菌菌株和棉铃威、微代谢冢村氏菌菌株和涕灭威、微代谢冢村氏菌菌株和虫螨威、微代谢冢村氏菌菌株和丁硫克百威、微代谢冢村氏菌菌株和噻唑磷、微代谢冢村氏菌菌株和硫线磷、微代谢冢村氏菌菌株和杀线威、微代谢冢村氏菌菌株和硫双灭多威、微代谢冢村氏菌菌株和乐果、微代谢冢村氏菌菌株和灭线磷、微代谢冢村氏菌菌株和特丁硫磷、微代谢冢村氏菌菌株和阿维菌素、微代谢冢村氏菌菌株和溴甲烷和其它卤代烃、微代谢冢村氏菌菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、微代谢冢村氏菌菌株和三氟咪啶酰胺、微代谢冢村氏菌菌株和联氟砜、微代谢冢村氏菌菌株和氟吡菌酰胺、微代谢冢村氏菌菌株和噻恶嗪芬、微代谢冢村氏菌菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、微代谢冢村氏菌菌株和顺式茉莉酮、微代谢冢村氏菌菌株和过敏蛋白、微代谢冢村氏菌菌株和印楝油和微代谢冢村氏菌菌株和印楝素。
116.这些编号段落中任一个所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,用选自以下的杀线虫剂和生物防治剂的组合处理:解淀粉芽孢杆菌和棉铃威;解淀粉芽孢杆菌和涕灭威;解淀粉芽孢杆菌和虫螨威;解淀粉芽孢杆菌和丁硫克百威;解淀粉芽孢杆菌和噻唑磷;解淀粉芽孢杆菌和硫线磷;解淀粉芽孢杆菌和杀线威;解淀粉芽孢杆菌和硫双灭多威;解淀粉芽孢杆菌和乐果;解淀粉芽孢杆菌和灭线磷;解淀粉芽孢杆菌和特丁硫磷;解淀粉芽孢杆菌和阿维菌素;解淀粉芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;解淀粉芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;解淀粉芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺;解淀粉芽孢杆菌和联氟砜;解淀粉芽孢杆菌和氟吡菌酰胺;解淀粉芽孢杆菌和噻恶嗪芬;解淀粉芽孢杆菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;解淀粉芽孢杆菌和顺式茉莉酮;解淀粉芽孢杆菌和过敏蛋白;解淀粉芽孢杆菌和印楝油;解淀粉芽孢杆菌和印楝素;坚强芽孢杆菌和棉铃威;坚强芽孢杆菌和涕灭威;坚强芽孢杆菌和虫螨威;坚强芽孢杆菌和丁硫克百威;坚强芽孢杆菌和噻唑磷;坚强芽孢杆菌和硫线磷;坚强芽孢杆菌和杀线威;坚强芽孢杆菌和硫双灭多威;坚强芽孢杆菌和乐果;坚强芽孢杆菌和灭线磷;坚强芽孢杆菌和特丁硫磷;坚强芽孢杆菌和阿维菌素;坚强芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;坚强芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;坚强芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺;坚强芽孢杆菌和联氟砜;坚强芽孢杆菌和氟吡菌酰胺;坚强芽孢杆菌和噻恶嗪芬;坚强芽孢杆菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;坚强芽孢杆菌和顺式茉莉酮;坚强芽孢杆菌和过敏蛋白;坚强芽孢杆菌和印楝油;坚强芽孢杆菌和印楝素;侧孢芽孢杆菌和棉铃威;侧孢芽孢杆菌和涕灭威;侧孢芽孢杆菌和虫螨威;侧孢芽孢杆菌和丁硫克百威;侧孢芽孢杆菌和噻唑磷;侧孢芽孢杆菌和硫线磷;侧孢芽孢杆菌和杀线威;侧孢芽孢杆菌和硫双灭多威;侧孢芽孢杆菌和乐果;侧孢芽孢杆菌和灭线磷;侧孢芽孢杆菌和特丁硫磷;侧孢芽孢杆菌和阿维菌素;侧孢芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;侧孢芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;侧孢芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺;侧孢芽孢杆菌和联氟砜;侧孢芽孢杆菌和氟吡菌酰胺;侧孢芽孢杆菌和噻恶嗪芬;侧孢芽孢杆菌和N- [1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;侧孢芽孢杆菌和顺式茉莉酮;侧孢芽孢杆菌和过敏蛋白;侧孢芽孢杆菌和印楝油;侧孢芽孢杆菌和印楝素;迟缓芽孢杆菌和棉铃威;迟缓芽孢杆菌和涕灭威;迟缓芽孢杆菌和虫螨威;迟缓芽孢杆菌和丁硫克百威;迟缓芽孢杆菌和噻唑磷;迟缓芽孢杆菌和硫线磷;迟缓芽孢杆菌和杀线威;迟缓芽孢杆菌和硫双灭多威;迟缓芽孢杆菌和乐果;迟缓芽孢杆菌和灭线磷;迟缓芽孢杆菌和特丁硫磷;迟缓芽孢杆菌和阿维菌素;迟缓芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;迟缓芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;迟缓芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺;迟缓芽孢杆菌和联氟砜;迟缓芽孢杆菌和氟吡菌酰胺;迟缓芽孢杆菌和噻恶嗪芬;迟缓芽孢杆菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;迟缓芽孢杆菌和顺式茉莉酮;迟缓芽孢杆菌和过敏蛋白;迟缓芽孢杆菌和印楝油;迟缓芽孢杆菌和印楝素;地衣芽孢杆菌和棉铃威;地衣芽孢杆菌和涕灭威;地衣芽孢杆菌和虫螨威;地衣芽孢杆菌和丁硫克百威;地衣芽孢杆菌和噻唑磷;地衣芽孢杆菌和硫线磷;地衣芽孢杆菌和杀线威;地衣芽孢杆菌和硫双灭多威;地衣芽孢杆菌和乐果;地衣芽孢杆菌和灭线磷;地衣芽孢杆菌和特丁硫磷;地衣芽孢杆菌和阿维菌素;地衣芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;地衣芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;地衣芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺;地衣芽孢杆菌和联氟砜;地衣芽孢杆菌和氟吡菌酰胺;地衣芽孢杆菌和噻恶嗪芬;地衣芽孢杆菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H- 吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;地衣芽孢杆菌和顺式茉莉酮;地衣芽孢杆菌和过敏蛋白;地衣芽孢杆菌和印楝油;地衣芽孢杆菌和印楝素;线虫芽孢杆菌和棉铃威;线虫芽孢杆菌和涕灭威;线虫芽孢杆菌和虫螨威;线虫芽孢杆菌和丁硫克百威;线虫芽孢杆菌和噻唑磷;线虫芽孢杆菌和硫线磷;线虫芽孢杆菌和杀线威;线虫芽孢杆菌和硫双灭多威;线虫芽孢杆菌和乐果;线虫芽孢杆菌和灭线磷;线虫芽孢杆菌和特丁硫磷;线虫芽孢杆菌和阿维菌素;线虫芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;线虫芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;线虫芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺;线虫芽孢杆菌和联氟砜;线虫芽孢杆菌和氟吡菌酰胺;线虫芽孢杆菌和噻恶嗪芬;线虫芽孢杆菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;线虫芽孢杆菌和顺式茉莉酮;线虫芽孢杆菌和过敏蛋白;线虫芽孢杆菌和印楝油;线虫芽孢杆菌和印楝素;短小芽孢杆菌和棉铃威;短小芽孢杆菌和涕灭威;短小芽孢杆菌和虫螨威;短小芽孢杆菌和丁硫克百威;短小芽孢杆菌和噻唑磷;短小芽孢杆菌和硫线磷;短小芽孢杆菌和杀线威;短小芽孢杆菌和硫双灭多威;短小芽孢杆菌和乐果;短小芽孢杆菌和灭线磷;短小芽孢杆菌和特丁硫磷;短小芽孢杆菌和阿维菌素;短小芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;短小芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;短小芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺;短小芽孢杆菌和联氟砜;短小芽孢杆菌和氟吡菌酰胺;短小芽孢杆菌和噻恶嗪芬;短小芽孢杆菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;短小芽孢杆菌和顺式茉莉酮;短小芽孢杆菌和过敏蛋白;短小芽孢杆菌和印楝油;短小芽孢杆菌和印楝素;枯草芽孢杆菌和棉铃威;枯草芽孢杆菌和涕灭威;枯草芽孢杆菌和虫螨威;枯草芽孢杆菌和丁硫克百威;枯草芽孢杆菌和噻唑磷;枯草芽孢杆菌和硫线磷;枯草芽孢杆菌和杀线威;枯草芽孢杆菌和硫双灭多威;枯草芽孢杆菌和乐果;枯草芽孢杆菌和灭线磷;枯草芽孢杆菌和特丁硫磷;枯草芽孢杆菌和阿维菌素;枯草芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;枯草芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;枯草芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺;枯草芽孢杆菌和联氟砜;枯草芽孢杆菌和氟吡菌酰胺;枯草芽孢杆菌和噻恶嗪芬;枯草芽孢杆菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;枯草芽孢杆菌和顺式茉莉酮;枯草芽孢杆菌和过敏蛋白;枯草芽孢杆菌和印楝油;枯草芽孢杆菌和印楝素;穿刺芽孢杆菌和棉铃威;穿刺芽孢杆菌和涕灭威;穿刺芽孢杆菌和虫螨威;穿刺芽孢杆菌和丁硫克百威;穿刺芽孢杆菌和噻唑磷;穿刺芽孢杆菌和硫线磷;穿刺芽孢杆菌和杀线威;穿刺芽孢杆菌和硫双灭多威;穿刺芽孢杆菌和乐果;穿刺芽孢杆菌和灭线磷;穿刺芽孢杆菌和特丁硫磷;穿刺芽孢杆菌和阿维菌素;穿刺芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;穿刺芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;穿刺芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺;穿刺芽孢杆菌和联氟砜;穿刺芽孢杆菌和氟吡菌酰胺;穿刺芽孢杆菌和噻恶嗪芬;穿刺芽孢杆菌和 N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;穿刺芽孢杆菌和顺式茉莉酮;穿刺芽孢杆菌和过敏蛋白;穿刺芽孢杆菌和印楝油;穿刺芽孢杆菌和印楝素;苏云金芽孢杆菌和棉铃威;苏云金芽孢杆菌和涕灭威;苏云金芽孢杆菌和虫螨威;苏云金芽孢杆菌和丁硫克百威;苏云金芽孢杆菌和噻唑磷;苏云金芽孢杆菌和硫线磷;苏云金芽孢杆菌和杀线威;苏云金芽孢杆菌和硫双灭多威;苏云金芽孢杆菌和乐果;苏云金芽孢杆菌和灭线磷;苏云金芽孢杆菌和特丁硫磷;苏云金芽孢杆菌和阿维菌素;苏云金芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;苏云金芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;苏云金芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺;苏云金芽孢杆菌和联氟砜;苏云金芽孢杆菌和氟吡菌酰胺;苏云金芽孢杆菌和噻恶嗪芬;苏云金芽孢杆菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;苏云金芽孢杆菌和顺式茉莉酮;苏云金芽孢杆菌和过敏蛋白;苏云金芽孢杆菌和印楝油;苏云金芽孢杆菌和印楝素;侧孢短芽孢杆菌和棉铃威;侧孢短芽孢杆菌和涕灭威;侧孢短芽孢杆菌和虫螨威;侧孢短芽孢杆菌和丁硫克百威;侧孢短芽孢杆菌和噻唑磷;侧孢短芽孢杆菌和硫线磷;侧孢短芽孢杆菌和杀线威;侧孢短芽孢杆菌和硫双灭多威;侧孢短芽孢杆菌和乐果;侧孢短芽孢杆菌和灭线磷;侧孢短芽孢杆菌和特丁硫磷;侧孢短芽孢杆菌和阿维菌素;侧孢短芽孢杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;侧孢短芽孢杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;侧孢短芽孢杆菌和三氟咪啶酰胺;侧孢短芽孢杆菌和联氟砜;侧孢短芽孢杆菌和氟吡菌酰胺;侧孢短芽孢杆菌和噻恶嗪芬;侧孢短芽孢杆菌和N- [1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;侧孢短芽孢杆菌和顺式茉莉酮;侧孢短芽孢杆菌和过敏蛋白;侧孢短芽孢杆菌和印楝油;侧孢短芽孢杆菌和印楝素;里诺吉伯克氏菌和棉铃威;里诺吉伯克氏菌和涕灭威;里诺吉伯克氏菌和虫螨威;里诺吉伯克氏菌和丁硫克百威;里诺吉伯克氏菌和噻唑磷;里诺吉伯克氏菌和硫线磷;里诺吉伯克氏菌和杀线威;里诺吉伯克氏菌和硫双灭多威;里诺吉伯克氏菌和乐果;里诺吉伯克氏菌和灭线磷;里诺吉伯克氏菌和特丁硫磷;里诺吉伯克氏菌和阿维菌素;里诺吉伯克氏菌和溴甲烷和其它卤代烃;里诺吉伯克氏菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;里诺吉伯克氏菌和三氟咪啶酰胺;里诺吉伯克氏菌和联氟砜;里诺吉伯克氏菌和氟吡菌酰胺;里诺吉伯克氏菌和噻恶嗪芬;里诺吉伯克氏菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2- 三氟甲基苯甲酰胺;里诺吉伯克氏菌和顺式茉莉酮;里诺吉伯克氏菌和过敏蛋白;里诺吉伯克氏菌和印楝油;里诺吉伯克氏菌和印楝素;抗生素溶杆菌和棉铃威;抗生素溶杆菌和涕灭威;抗生素溶杆菌和虫螨威;抗生素溶杆菌和丁硫克百威;抗生素溶杆菌和噻唑磷;抗生素溶杆菌和硫线磷;抗生素溶杆菌和杀线威;抗生素溶杆菌和硫双灭多威;抗生素溶杆菌和乐果;抗生素溶杆菌和灭线磷;抗生素溶杆菌和特丁硫磷;抗生素溶杆菌和阿维菌素;抗生素溶杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;抗生素溶杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;抗生素溶杆菌和三氟咪啶酰胺;抗生素溶杆菌和联氟砜;抗生素溶杆菌和氟吡菌酰胺;抗生素溶杆菌和噻恶嗪芬;抗生素溶杆菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;抗生素溶杆菌和顺式茉莉酮;抗生素溶杆菌和过敏蛋白;抗生素溶杆菌和印楝油;抗生素溶杆菌和印楝素;产酶溶杆菌和棉铃威;产酶溶杆菌和涕灭威;产酶溶杆菌和虫螨威;产酶溶杆菌和丁硫克百威;产酶溶杆菌和噻唑磷;产酶溶杆菌和硫线磷;产酶溶杆菌和杀线威;产酶溶杆菌和硫双灭多威;产酶溶杆菌和乐果;产酶溶杆菌和灭线磷;产酶溶杆菌和特丁硫磷;产酶溶杆菌和阿维菌素;产酶溶杆菌和溴甲烷和其它卤代烃;产酶溶杆菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;产酶溶杆菌和三氟咪啶酰胺;产酶溶杆菌和联氟砜;产酶溶杆菌和氟吡菌酰胺;产酶溶杆菌和噻恶嗪芬;产酶溶杆菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;产酶溶杆菌和顺式茉莉酮;产酶溶杆菌和过敏蛋白;产酶溶杆菌和印楝油;产酶溶杆菌和印楝素;西沢巴斯德氏芽菌和棉铃威;西沢巴斯德氏芽菌和涕灭威;西沢巴斯德氏芽菌和虫螨威;西沢巴斯德氏芽菌和丁硫克百威;西沢巴斯德氏芽菌和噻唑磷;西沢巴斯德氏芽菌和硫线磷;西沢巴斯德氏芽菌和杀线威;西沢巴斯德氏芽菌和硫双灭多威;西沢巴斯德氏芽菌和乐果;西沢巴斯德氏芽菌和灭线磷;西沢巴斯德氏芽菌和特丁硫磷;西沢巴斯德氏芽菌和阿维菌素;西沢巴斯德氏芽菌和溴甲烷和其它卤代烃;西沢巴斯德氏芽菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;西沢巴斯德氏芽菌和三氟咪啶酰胺;西沢巴斯德氏芽菌和联氟砜;西沢巴斯德氏芽菌和氟吡菌酰胺;西沢巴斯德氏芽菌和噻恶嗪芬;西沢巴斯德氏芽菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑 -3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;西沢巴斯德氏芽菌和顺式茉莉酮;西沢巴斯德氏芽菌和过敏蛋白;西沢巴斯德氏芽菌和印楝油;西沢巴斯德氏芽菌和印楝素;穿刺巴斯德氏芽菌和棉铃威;穿刺巴斯德氏芽菌和涕灭威;穿刺巴斯德氏芽菌和虫螨威;穿刺巴斯德氏芽菌和丁硫克百威;穿刺巴斯德氏芽菌和噻唑磷;穿刺巴斯德氏芽菌和硫线磷;穿刺巴斯德氏芽菌和杀线威;穿刺巴斯德氏芽菌和硫双灭多威;穿刺巴斯德氏芽菌和乐果;穿刺巴斯德氏芽菌和灭线磷;穿刺巴斯德氏芽菌和特丁硫磷;穿刺巴斯德氏芽菌和阿维菌素;穿刺巴斯德氏芽菌和溴甲烷和其它卤代烃;穿刺巴斯德氏芽菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;穿刺巴斯德氏芽菌和三氟咪啶酰胺;穿刺巴斯德氏芽菌和联氟砜;穿刺巴斯德氏芽菌和氟吡菌酰胺;穿刺巴斯德氏芽菌和噻恶嗪芬;穿刺巴斯德氏芽菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;穿刺巴斯德氏芽菌和顺式茉莉酮;穿刺巴斯德氏芽菌和过敏蛋白;穿刺巴斯德氏芽菌和印楝油;穿刺巴斯德氏芽菌和印楝素;分支巴斯德氏芽菌和棉铃威;分支巴斯德氏芽菌和涕灭威;分支巴斯德氏芽菌和虫螨威;分支巴斯德氏芽菌和丁硫克百威;分支巴斯德氏芽菌和噻唑磷;分支巴斯德氏芽菌和硫线磷;分支巴斯德氏芽菌和杀线威;分支巴斯德氏芽菌和硫双灭多威;分支巴斯德氏芽菌和乐果;分支巴斯德氏芽菌和灭线磷;分支巴斯德氏芽菌和特丁硫磷;分支巴斯德氏芽菌和阿维菌素;分支巴斯德氏芽菌和溴甲烷和其它卤代烃;分支巴斯德氏芽菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;分支巴斯德氏芽菌和三氟咪啶酰胺;分支巴斯德氏芽菌和联氟砜;分支巴斯德氏芽菌和氟吡菌酰胺;分支巴斯德氏芽菌和噻恶嗪芬;分支巴斯德氏芽菌和 N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;分支巴斯德氏芽菌和顺式茉莉酮;分支巴斯德氏芽菌和过敏蛋白;分支巴斯德氏芽菌和印楝油;分支巴斯德氏芽菌和印楝素;肾状巴斯德氏芽菌和棉铃威;肾状巴斯德氏芽菌和涕灭威;肾状巴斯德氏芽菌和虫螨威;肾状巴斯德氏芽菌和丁硫克百威;肾状巴斯德氏芽菌和噻唑磷;肾状巴斯德氏芽菌和硫线磷;肾状巴斯德氏芽菌和杀线威;肾状巴斯德氏芽菌和硫双灭多威;肾状巴斯德氏芽菌和乐果;肾状巴斯德氏芽菌和灭线磷;肾状巴斯德氏芽菌和特丁硫磷;肾状巴斯德氏芽菌和阿维菌素;肾状巴斯德氏芽菌和溴甲烷和其它卤代烃;肾状巴斯德氏芽菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;肾状巴斯德氏芽菌和三氟咪啶酰胺;肾状巴斯德氏芽菌和联氟砜;肾状巴斯德氏芽菌和氟吡菌酰胺;肾状巴斯德氏芽菌和噻恶嗪芬;肾状巴斯德氏芽菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;肾状巴斯德氏芽菌和顺式茉莉酮;肾状巴斯德氏芽菌和过敏蛋白;肾状巴斯德氏芽菌和印楝油;肾状巴斯德氏芽菌和印楝素;多刺巴斯德氏芽菌和棉铃威;多刺巴斯德氏芽菌和涕灭威;多刺巴斯德氏芽菌和虫螨威;多刺巴斯德氏芽菌和丁硫克百威;多刺巴斯德氏芽菌和噻唑磷;多刺巴斯德氏芽菌和硫线磷;多刺巴斯德氏芽菌和杀线威;多刺巴斯德氏芽菌和硫双灭多威;多刺巴斯德氏芽菌和乐果;多刺巴斯德氏芽菌和灭线磷;多刺巴斯德氏芽菌和特丁硫磷;多刺巴斯德氏芽菌和阿维菌素;多刺巴斯德氏芽菌和溴甲烷和其它卤代烃;多刺巴斯德氏芽菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;多刺巴斯德氏芽菌和三氟咪啶酰胺;多刺巴斯德氏芽菌和联氟砜;多刺巴斯德氏芽菌和氟吡菌酰胺;多刺巴斯德氏芽菌和噻恶嗪芬;多刺巴斯德氏芽菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;多刺巴斯德氏芽菌和顺式茉莉酮;多刺巴斯德氏芽菌和过敏蛋白;多刺巴斯德氏芽菌和印楝油;多刺巴斯德氏芽菌和印楝素;美高协巴斯德氏芽菌和棉铃威;美高协巴斯德氏芽菌和涕灭威;美高协巴斯德氏芽菌和虫螨威;美高协巴斯德氏芽菌和丁硫克百威;美高协巴斯德氏芽菌和噻唑磷;美高协巴斯德氏芽菌和硫线磷;美高协巴斯德氏芽菌和杀线威;美高协巴斯德氏芽菌和硫双灭多威;美高协巴斯德氏芽菌和乐果;美高协巴斯德氏芽菌和灭线磷;美高协巴斯德氏芽菌和特丁硫磷;美高协巴斯德氏芽菌和阿维菌素;美高协巴斯德氏芽菌和溴甲烷和其它卤代烃;美高协巴斯德氏芽菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;美高协巴斯德氏芽菌和三氟咪啶酰胺;美高协巴斯德氏芽菌和联氟砜;美高协巴斯德氏芽菌和氟吡菌酰胺;美高协巴斯德氏芽菌和噻恶嗪芬;美高协巴斯德氏芽菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;美高协巴斯德氏芽菌和顺式茉莉酮;美高协巴斯德氏芽菌和过敏蛋白;美高协巴斯德氏芽菌和印楝油;美高协巴斯德氏芽菌和印楝素;指状节丛孢和棉铃威;指状节丛孢和涕灭威;指状节丛孢和虫螨威;指状节丛孢和丁硫克百威;指状节丛孢和噻唑磷;指状节丛孢和硫线磷;指状节丛孢和杀线威;指状节丛孢和硫双灭多威;指状节丛孢和乐果;指状节丛孢和灭线磷;指状节丛孢和特丁硫磷;指状节丛孢和阿维菌素;指状节丛孢和溴甲烷和其它卤代烃;指状节丛孢和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;指状节丛孢和三氟咪啶酰胺;指状节丛孢和联氟砜;指状节丛孢和氟吡菌酰胺;指状节丛孢和噻恶嗪芬;指状节丛孢和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;指状节丛孢和顺式茉莉酮;指状节丛孢和过敏蛋白;指状节丛孢和印楝油;指状节丛孢和印楝素;少孢节丛孢和棉铃威;少孢节丛孢和涕灭威;少孢节丛孢和虫螨威;少孢节丛孢和丁硫克百威;少孢节丛孢和噻唑磷;少孢节丛孢和硫线磷;少孢节丛孢和杀线威;少孢节丛孢和硫双灭多威;少孢节丛孢和乐果;少孢节丛孢和灭线磷;少孢节丛孢和特丁硫磷;少孢节丛孢和阿维菌素;少孢节丛孢和溴甲烷和其它卤代烃;少孢节丛孢和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;少孢节丛孢和三氟咪啶酰胺;少孢节丛孢和联氟砜;少孢节丛孢和氟吡菌酰胺;少孢节丛孢和噻恶嗪芬;少孢节丛孢和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;少孢节丛孢和顺式茉莉酮;少孢节丛孢和过敏蛋白;少孢节丛孢和印楝油;少孢节丛孢和印楝素;多孢节丛孢和棉铃威;多孢节丛孢和涕灭威;多孢节丛孢和虫螨威;多孢节丛孢和丁硫克百威;多孢节丛孢和噻唑磷;多孢节丛孢和硫线磷;多孢节丛孢和杀线威;多孢节丛孢和硫双灭多威;多孢节丛孢和乐果;多孢节丛孢和灭线磷;多孢节丛孢和特丁硫磷;多孢节丛孢和阿维菌素;多孢节丛孢和溴甲烷和其它卤代烃;多孢节丛孢和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;多孢节丛孢和三氟咪啶酰胺;多孢节丛孢和联氟砜;多孢节丛孢和氟吡菌酰胺;多孢节丛孢和噻恶嗪芬;多孢节丛孢和N- [1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;多孢节丛孢和顺式茉莉酮;多孢节丛孢和过敏蛋白;多孢节丛孢和印楝油;多孢节丛孢和印楝素;地理毒虫霉和棉铃威;地理毒虫霉和涕灭威;地理毒虫霉和虫螨威;地理毒虫霉和丁硫克百威;地理毒虫霉和噻唑磷;地理毒虫霉和硫线磷;地理毒虫霉和杀线威;地理毒虫霉和硫双灭多威;地理毒虫霉和乐果;地理毒虫霉和灭线磷;地理毒虫霉和特丁硫磷;地理毒虫霉和阿维菌素;地理毒虫霉和溴甲烷和其它卤代烃;地理毒虫霉和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;地理毒虫霉和三氟咪啶酰胺;地理毒虫霉和联氟砜;地理毒虫霉和氟吡菌酰胺;地理毒虫霉和噻恶嗪芬;地理毒虫霉和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;地理毒虫霉和顺式茉莉酮;地理毒虫霉和过敏蛋白;地理毒虫霉和印楝油;地理毒虫霉和印楝素;滑孢毒虫霉和棉铃威;滑孢毒虫霉和涕灭威;滑孢毒虫霉和虫螨威;滑孢毒虫霉和丁硫克百威;滑孢毒虫霉和噻唑磷;滑孢毒虫霉和硫线磷;滑孢毒虫霉和杀线威;滑孢毒虫霉和硫双灭多威;滑孢毒虫霉和乐果;滑孢毒虫霉和灭线磷;滑孢毒虫霉和特丁硫磷;滑孢毒虫霉和阿维菌素;滑孢毒虫霉和溴甲烷和其它卤代烃;滑孢毒虫霉和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;滑孢毒虫霉和三氟咪啶酰胺;滑孢毒虫霉和联氟砜;滑孢毒虫霉和氟吡菌酰胺;滑孢毒虫霉和噻恶嗪芬;滑孢毒虫霉和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;滑孢毒虫霉和顺式茉莉酮;滑孢毒虫霉和过敏蛋白;滑孢毒虫霉和印楝油;滑孢毒虫霉和印楝素;疣孢漆斑菌和棉铃威;疣孢漆斑菌和涕灭威;疣孢漆斑菌和虫螨威;疣孢漆斑菌和丁硫克百威;疣孢漆斑菌和噻唑磷;疣孢漆斑菌和硫线磷;疣孢漆斑菌和杀线威;疣孢漆斑菌和硫双灭多威;疣孢漆斑菌和乐果;疣孢漆斑菌和灭线磷;疣孢漆斑菌和特丁硫磷;疣孢漆斑菌和阿维菌素;疣孢漆斑菌和溴甲烷和其它卤代烃;疣孢漆斑菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;疣孢漆斑菌和三氟咪啶酰胺;疣孢漆斑菌和联氟砜;疣孢漆斑菌和氟吡菌酰胺;疣孢漆斑菌和噻恶嗪芬;疣孢漆斑菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;疣孢漆斑菌和顺式茉莉酮;疣孢漆斑菌和过敏蛋白;疣孢漆斑菌和印楝油;疣孢漆斑菌和印楝素;淡紫拟青霉和棉铃威;淡紫拟青霉和涕灭威;淡紫拟青霉和虫螨威;淡紫拟青霉和丁硫克百威;淡紫拟青霉和噻唑磷;淡紫拟青霉和硫线磷;淡紫拟青霉和杀线威;淡紫拟青霉和硫双灭多威;淡紫拟青霉和乐果;淡紫拟青霉和灭线磷;淡紫拟青霉和特丁硫磷;淡紫拟青霉和阿维菌素;淡紫拟青霉和溴甲烷和其它卤代烃;淡紫拟青霉和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;淡紫拟青霉和三氟咪啶酰胺;淡紫拟青霉和联氟砜;淡紫拟青霉和氟吡菌酰胺;淡紫拟青霉和噻恶嗪芬;淡紫拟青霉和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;淡紫拟青霉和顺式茉莉酮;淡紫拟青霉和过敏蛋白;淡紫拟青霉和印楝油;淡紫拟青霉和印楝素;宛氏拟青霉和棉铃威;宛氏拟青霉和涕灭威;宛氏拟青霉和虫螨威;宛氏拟青霉和丁硫克百威;宛氏拟青霉和噻唑磷;宛氏拟青霉和硫线磷;宛氏拟青霉和杀线威;宛氏拟青霉和硫双灭多威;宛氏拟青霉和乐果;宛氏拟青霉和灭线磷;宛氏拟青霉和特丁硫磷;宛氏拟青霉和阿维菌素;宛氏拟青霉和溴甲烷和其它卤代烃;宛氏拟青霉和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;宛氏拟青霉和三氟咪啶酰胺;宛氏拟青霉和联氟砜;宛氏拟青霉和氟吡菌酰胺;宛氏拟青霉和噻恶嗪芬;宛氏拟青霉和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;宛氏拟青霉和顺式茉莉酮;宛氏拟青霉和过敏蛋白;宛氏拟青霉和印楝油;宛氏拟青霉和印楝素;棘孢木霉和棉铃威;棘孢木霉和涕灭威;棘孢木霉和虫螨威;棘孢木霉和丁硫克百威;棘孢木霉和噻唑磷;棘孢木霉和硫线磷;棘孢木霉和杀线威;棘孢木霉和硫双灭多威;棘孢木霉和乐果;棘孢木霉和灭线磷;棘孢木霉和特丁硫磷;棘孢木霉和阿维菌素;棘孢木霉和溴甲烷和其它卤代烃;棘孢木霉和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;棘孢木霉和三氟咪啶酰胺;棘孢木霉和联氟砜;棘孢木霉和氟吡菌酰胺;棘孢木霉和噻恶嗪芬;棘孢木霉和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;棘孢木霉和顺式茉莉酮;棘孢木霉和过敏蛋白;棘孢木霉和印楝油;棘孢木霉和印楝素;哈茨木霉和棉铃威;哈茨木霉和涕灭威;哈茨木霉和虫螨威;哈茨木霉和丁硫克百威;哈茨木霉和噻唑磷;哈茨木霉和硫线磷;哈茨木霉和杀线威;哈茨木霉和硫双灭多威;哈茨木霉和乐果;哈茨木霉和灭线磷;哈茨木霉和特丁硫磷;哈茨木霉和阿维菌素;哈茨木霉和溴甲烷和其它卤代烃;哈茨木霉和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;哈茨木霉和三氟咪啶酰胺;哈茨木霉和联氟砜;哈茨木霉和氟吡菌酰胺;哈茨木霉和噻恶嗪芬;哈茨木霉和N-[1-(2,6- 二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;哈茨木霉和顺式茉莉酮;哈茨木霉和过敏蛋白;哈茨木霉和印楝油;哈茨木霉和印楝素;绿色木霉和棉铃威;绿色木霉和涕灭威;绿色木霉和虫螨威;绿色木霉和丁硫克百威;绿色木霉和噻唑磷;绿色木霉和硫线磷;绿色木霉和杀线威;绿色木霉和硫双灭多威;绿色木霉和乐果;绿色木霉和灭线磷;绿色木霉和特丁硫磷;绿色木霉和阿维菌素;绿色木霉和溴甲烷和其它卤代烃;绿色木霉和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;绿色木霉和三氟咪啶酰胺;绿色木霉和联氟砜;绿色木霉和氟吡菌酰胺;绿色木霉和噻恶嗪芬;绿色木霉和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;绿色木霉和顺式茉莉酮;绿色木霉和过敏蛋白;绿色木霉和印楝油;绿色木霉和印楝素;里法依哈茨木霉和棉铃威;里法依哈茨木霉和涕灭威;里法依哈茨木霉和虫螨威;里法依哈茨木霉和丁硫克百威;里法依哈茨木霉和噻唑磷;里法依哈茨木霉和硫线磷;里法依哈茨木霉和杀线威;里法依哈茨木霉和硫双灭多威;里法依哈茨木霉和乐果;里法依哈茨木霉和灭线磷;里法依哈茨木霉和特丁硫磷;里法依哈茨木霉和阿维菌素;里法依哈茨木霉和溴甲烷和其它卤代烃;里法依哈茨木霉和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;里法依哈茨木霉和三氟咪啶酰胺;里法依哈茨木霉和联氟砜;里法依哈茨木霉和氟吡菌酰胺;里法依哈茨木霉和噻恶嗪芬;里法依哈茨木霉和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;里法依哈茨木霉和顺式茉莉酮;里法依哈茨木霉和过敏蛋白;里法依哈茨木霉和印楝油;里法依哈茨木霉和印楝素;微代谢冢村氏菌和棉铃威;微代谢冢村氏菌和涕灭威;微代谢冢村氏菌和虫螨威;微代谢冢村氏菌和丁硫克百威;微代谢冢村氏菌和噻唑磷;微代谢冢村氏菌和硫线磷;微代谢冢村氏菌和杀线威;微代谢冢村氏菌和硫双灭多威;微代谢冢村氏菌和乐果;微代谢冢村氏菌和灭线磷;微代谢冢村氏菌和特丁硫磷;微代谢冢村氏菌和阿维菌素;微代谢冢村氏菌和溴甲烷和其它卤代烃;微代谢冢村氏菌和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;微代谢冢村氏菌和三氟咪啶酰胺;微代谢冢村氏菌和联氟砜;微代谢冢村氏菌和氟吡菌酰胺;微代谢冢村氏菌和噻恶嗪芬;微代谢冢村氏菌和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;微代谢冢村氏菌和顺式茉莉酮;微代谢冢村氏菌和过敏蛋白;微代谢冢村氏菌和印楝油;和微代谢冢村氏菌和印楝素。
117.这些编号段落中任一个所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,用选自以下的杀线虫剂和生物防治剂的组合处理:解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株 IN937a和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a 和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a 和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42 和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42 和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株 FZB42和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株 FZB42和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24 和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]- 2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRLB- 50349和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株 NRRL B-50349和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01 和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01 和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株 ABI01和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株 B3和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株B3 和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株B3和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和 N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株 D747和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株D747和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株APM- 1和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000 和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000 和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000 和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株 TJ1000和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136 和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188 和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188 和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP- 188和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP- 188和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株AP- 188和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218 和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株AP- 218和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株 AP-218和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2- 三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219 和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株AP- 219和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株AP- 295和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295 和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295 和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株 AP-295和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株 MBI 600和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI600和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI600和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838 和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株 PTA-4838和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和N-[1-(2,6- 二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838 和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838和印楝素、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和棉铃威、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和涕灭威、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和虫螨威、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和丁硫克百威、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和噻唑磷、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和硫线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和杀线威、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和硫双灭多威、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和乐果、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和灭线磷、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和特丁硫磷、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和阿维菌素、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和溴甲烷和其它卤代烃、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和三氟咪啶酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和联氟砜、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和氟吡菌酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和噻恶嗪芬、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和顺式茉莉酮、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和过敏蛋白、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和印楝油、解淀粉芽孢杆菌菌株F727和印楝素、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和棉铃威、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和涕灭威、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和虫螨威、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和丁硫克百威、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和噻唑磷、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和硫线磷、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和杀线威、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和硫双灭多威、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和乐果、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和灭线磷、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和特丁硫磷、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和阿维菌素、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和溴甲烷和其它卤代烃、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和三氟咪啶酰胺、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和联氟砜、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和噻恶嗪芬、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和顺式茉莉酮、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和过敏蛋白、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和印楝油、坚强芽孢杆菌菌株I-1582和印楝素、坚强芽孢杆菌菌株NRRL 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184和灭线磷、地衣芽孢杆菌RTI 184和特丁硫磷、地衣芽孢杆菌RTI 184和阿维菌素、地衣芽孢杆菌RTI 184和溴甲烷和其它卤代烃、地衣芽孢杆菌RTI 184和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、地衣芽孢杆菌RTI 184和三氟咪啶酰胺、地衣芽孢杆菌 RTI 184和联氟砜、地衣芽孢杆菌RTI 184和氟吡菌酰胺、地衣芽孢杆菌RTI 184 和噻恶嗪芬、地衣芽孢杆菌RTI 184和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、地衣芽孢杆菌RTI 184和顺式茉莉酮、地衣芽孢杆菌RTI 184 和过敏蛋白、地衣芽孢杆菌RTI 184和印楝油、地衣芽孢杆菌RTI 184和印楝素、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和棉铃威、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和涕灭威、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和虫螨威、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌 RTI 184的组合和丁硫克百威、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和噻唑磷、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和硫线磷、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI184的组合和杀线威、地衣芽孢杆菌 CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和硫双灭多威、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和乐果、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和灭线磷、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和特丁硫磷、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和阿维菌素、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和溴甲烷和其它卤代烃、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和三氟咪啶酰胺、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI184的组合和联氟砜、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和氟吡菌酰胺、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和噻恶嗪芬、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和顺式茉莉酮、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和过敏蛋白、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和印楝油、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合和印楝素、枯草芽孢杆菌菌株GB03和棉铃威、枯草芽孢杆菌菌株GB03和涕灭威、枯草芽孢杆菌菌株GB03和虫螨威、枯草芽孢杆菌菌株GB03和丁硫克百威、枯草芽孢杆菌菌株GB03和噻唑磷、枯草芽孢杆菌菌株GB03和硫线磷、枯草芽孢杆菌菌株GB03和杀线威、枯草芽孢杆菌菌株 GB03和硫双灭多威、枯草芽孢杆菌菌株GB03和乐果、枯草芽孢杆菌菌株GB03 和灭线磷、枯草芽孢杆菌菌株GB03和特丁硫磷、枯草芽孢杆菌菌株GB03和阿维菌素、枯草芽孢杆菌菌株GB03和溴甲烷和其它卤代烃、枯草芽孢杆菌菌株 GB03和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、枯草芽孢杆菌菌株GB03和三氟咪啶酰胺、枯草芽孢杆菌菌株GB03和联氟砜、枯草芽孢杆菌菌株GB03和氟吡菌酰胺、枯草芽孢杆菌菌株GB03和噻恶嗪芬、枯草芽孢杆菌菌株GB03和N- [1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、枯草芽孢杆菌菌株GB03 和顺式茉莉酮、枯草芽孢杆菌菌株GB03和过敏蛋白、枯草芽孢杆菌菌株GB03 和印楝油、枯草芽孢杆菌菌株GB03和印楝素、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713 和棉铃威、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和涕灭威、枯草芽孢杆菌菌株 QST713/AQ713和虫螨威、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和丁硫克百威、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和噻唑磷、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713 和硫线磷、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和杀线威、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和硫双灭多威、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和乐果、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和灭线磷、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和特丁硫磷、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和阿维菌素、枯草芽孢杆菌菌株 QST713/AQ713和溴甲烷和其它卤代烃、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和三氟咪啶酰胺、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和联氟砜、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和氟吡菌酰胺、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和噻恶嗪芬、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2- 三氟甲基苯甲酰胺、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和顺式茉莉酮、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和过敏蛋白、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和印楝油、枯草芽孢杆菌菌株QST713/AQ713和印楝素、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和棉铃威、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和涕灭威、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153 和虫螨威、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和丁硫克百威、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和噻唑磷、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和硫线磷、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和杀线威、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和硫双灭多威、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153 和乐果、枯草芽孢杆菌菌株AQ153和灭线磷、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和特丁硫磷、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和阿维菌素、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和溴甲烷和其它卤代烃、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和三氟咪啶酰胺、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和联氟砜、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和氟吡菌酰胺、枯草芽孢杆菌菌株AQ153和噻恶嗪芬、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和顺式茉莉酮、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和过敏蛋白、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和印楝油、枯草芽孢杆菌菌株AQ 153和印楝素、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和棉铃威、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和涕灭威、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和虫螨威、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和丁硫克百威、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和噻唑磷、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和硫线磷、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和杀线威、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和硫双灭多威、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和乐果、枯草芽孢杆菌菌株 AQ743和灭线磷、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和特丁硫磷、枯草芽孢杆菌菌株 AQ743和阿维菌素、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和溴甲烷和其它卤代烃、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和三氟咪啶酰胺、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和联氟砜、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和氟吡菌酰胺、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和噻恶嗪芬、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和顺式茉莉酮、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和过敏蛋白、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和印楝油、枯草芽孢杆菌菌株AQ743和印楝素、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和棉铃威、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和涕灭威、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和虫螨威、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和丁硫克百威、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和噻唑磷、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和硫线磷、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和杀线威、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和硫双灭多威、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和乐果、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和灭线磷、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和特丁硫磷、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和阿维菌素、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和溴甲烷和其它卤代烃、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和三氟咪啶酰胺、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和联氟砜、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和氟吡菌酰胺、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和噻恶嗪芬、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和N-[1-(2,6- 二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和顺式茉莉酮、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和过敏蛋白、枯草芽孢杆菌菌株DB 101 和印楝油、枯草芽孢杆菌菌株DB 101和印楝素、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和棉铃威、枯草芽孢杆菌菌株DB102和涕灭威、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和虫螨威、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和丁硫克百威、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和噻唑磷、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和硫线磷、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和杀线威、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和硫双灭多威、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和乐果、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和灭线磷、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和特丁硫磷、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和阿维菌素、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和溴甲烷和其它卤代烃、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和三氟咪啶酰胺、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和联氟砜、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和氟吡菌酰胺、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和噻恶嗪芬、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和顺式茉莉酮、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和过敏蛋白、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和印楝油、枯草芽孢杆菌菌株DB 102和印楝素、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和棉铃威、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和涕灭威、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和虫螨威、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和丁硫克百威、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和噻唑磷、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和硫线磷、枯草芽孢杆菌菌株MBI600和杀线威、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和硫双灭多威、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和乐果、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和灭线磷、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和特丁硫磷、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和阿维菌素、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和溴甲烷和其它卤代烃、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和三氟咪啶酰胺、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600 和联氟砜、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和氟吡菌酰胺、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和噻恶嗪芬、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3- 基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、枯草芽孢杆菌菌株MBI 600和顺式茉莉酮、枯草芽孢杆菌菌株MBI 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EX297512和顺式茉莉酮、苏云金芽孢杆菌菌株EX297512和过敏蛋白、苏云金芽孢杆菌菌株EX297512和印楝油、苏云金芽孢杆菌菌株EX297512和印楝素、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和棉铃威、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和涕灭威、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和虫螨威、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和丁硫克百威、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和噻唑磷、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和硫线磷、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和杀线威、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371 和硫双灭多威、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和乐果、苏云金芽孢杆菌菌株CR- 371和灭线磷、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和特丁硫磷、苏云金芽孢杆菌菌株 CR-371和阿维菌素、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和溴甲烷和其它卤代烃、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和三氟咪啶酰胺、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和联氟砜、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和氟吡菌酰胺、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和噻恶嗪芬、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2- 三氟甲基苯甲酰胺、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和顺式茉莉酮、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和过敏蛋白、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和印楝油、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371和印楝素、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和棉铃威、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和涕灭威、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和虫螨威、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和丁硫克百威、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和噻唑磷、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和硫线磷、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和杀线威、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和硫双灭多威、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和乐果、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和灭线磷、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和特丁硫磷、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和阿维菌素、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和溴甲烷和其它卤代烃、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和三氟咪啶酰胺、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和联氟砜、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和氟吡菌酰胺、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和噻恶嗪芬、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和顺式茉莉酮、苏云金芽孢杆菌菌株 AQ52和过敏蛋白、苏云金芽孢杆菌菌株AQ52和印楝油、苏云金芽孢杆菌菌株 AQ52和印楝素、短小芽孢杆菌菌株GB34和棉铃威、短小芽孢杆菌菌株GB34 和涕灭威、短小芽孢杆菌菌株GB34和虫螨威、短小芽孢杆菌菌株GB34和丁硫克百威、短小芽孢杆菌菌株GB34和噻唑磷、短小芽孢杆菌菌株GB34和硫线磷、短小芽孢杆菌菌株GB34和杀线威、短小芽孢杆菌菌株GB34和硫双灭多威、短小芽孢杆菌菌株GB34和乐果、短小芽孢杆菌菌株GB34和灭线磷、短小芽孢杆菌菌株GB34和特丁硫磷、短小芽孢杆菌菌株GB34和阿维菌素、短小芽孢杆菌菌株GB34和溴甲烷和其它卤代烃、短小芽孢杆菌菌株GB34和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、短小芽孢杆菌菌株GB34和三氟咪啶酰胺、短小芽孢杆菌菌株GB34和联氟砜、短小芽孢杆菌菌株GB34和氟吡菌酰胺、短小芽孢杆菌菌株GB34和噻恶嗪芬、短小芽孢杆菌菌株GB34和N-[1-(2,6-二氟苯基)- 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2-三氟甲基苯甲酰胺、里诺吉伯克氏菌菌株A396和顺式茉莉酮、里诺吉伯克氏菌菌株A396和过敏蛋白、里诺吉伯克氏菌菌株A396和印楝油、里诺吉伯克氏菌菌株A396和印楝素、抗生素溶杆菌菌株13-1和棉铃威、抗生素溶杆菌菌株 13-1和涕灭威、抗生素溶杆菌菌株13-1和虫螨威、抗生素溶杆菌菌株13-1和丁硫克百威、抗生素溶杆菌菌株13-1和噻唑磷、抗生素溶杆菌菌株13-1和硫线磷、抗生素溶杆菌菌株13-1和杀线威、抗生素溶杆菌菌株13-1和硫双灭多威、抗生素溶杆菌菌株13-1和乐果、抗生素溶杆菌菌株13-1和灭线磷、抗生素溶杆菌菌株13-1和特丁硫磷、抗生素溶杆菌菌株13-1和阿维菌素、抗生素溶杆菌菌株13-1和溴甲烷和其它卤代烃、抗生素溶杆菌菌株13-1和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、抗生素溶杆菌菌株13-1和三氟咪啶酰胺、抗生素溶杆菌菌株13-1和联氟砜、抗生素溶杆菌菌株13-1和氟吡菌酰胺、抗生素溶杆菌菌株13- 1和噻恶嗪芬、抗生素溶杆菌菌株13-1和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2- 三氟甲基苯甲酰胺、抗生素溶杆菌菌株13-1和顺式茉莉酮、抗生素溶杆菌菌株 13-1和过敏蛋白、抗生素溶杆菌菌株13-1和印楝油、抗生素溶杆菌菌株13-1和印楝素、产酶溶杆菌菌株C3和棉铃威、产酶溶杆菌菌株C3和涕灭威、产酶溶杆菌菌株C3和虫螨威、产酶溶杆菌菌株C3和丁硫克百威、产酶溶杆菌菌株C3 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和联氟砜、棘孢木霉菌株T11和氟吡菌酰胺、棘孢木霉菌株T11和噻恶嗪芬、棘孢木霉菌株T11和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、棘孢木霉菌株T11和顺式茉莉酮、棘孢木霉菌株T11和过敏蛋白、棘孢木霉菌株T11和印楝油、棘孢木霉菌株T11和印楝素、哈茨木霉菌株ICC012和棉铃威、哈茨木霉菌株ICC012和涕灭威、哈茨木霉菌株ICC012和虫螨威、哈茨木霉菌株ICC012和丁硫克百威、哈茨木霉菌株ICC012和噻唑磷、哈茨木霉菌株 ICC012和硫线磷、哈茨木霉菌株ICC012和杀线威、哈茨木霉菌株ICC012和硫双灭多威、哈茨木霉菌株ICC012和乐果、哈茨木霉菌株ICC012和灭线磷、哈茨木霉菌株ICC012和特丁硫磷、哈茨木霉菌株ICC012和阿维菌素、哈茨木霉菌株ICC012和溴甲烷和其它卤代烃、哈茨木霉菌株ICC012和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、哈茨木霉菌株ICC012和三氟咪啶酰胺、哈茨木霉菌株 ICC012和联氟砜、哈茨木霉菌株ICC012和氟吡菌酰胺、哈茨木霉菌株ICC012 和噻恶嗪芬、哈茨木霉菌株ICC012和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、哈茨木霉菌株ICC012和顺式茉莉酮、哈茨木霉菌株ICC012 和过敏蛋白、哈茨木霉菌株ICC012和印楝油、哈茨木霉菌株ICC012和印楝素、里法依哈茨木霉T39和棉铃威、里法依哈茨木霉T39和涕灭威、里法依哈茨木霉T39和虫螨威、里法依哈茨木霉T39和丁硫克百威、里法依哈茨木霉T39和噻唑磷、里法依哈茨木霉T39和硫线磷、里法依哈茨木霉T39和杀线威、里法依哈茨木霉T39和硫双灭多威、里法依哈茨木霉T39和乐果、里法依哈茨木霉T39和灭线磷、里法依哈茨木霉T39和特丁硫磷、里法依哈茨木霉T39和阿维菌素、里法依哈茨木霉T39和溴甲烷和其它卤代烃、里法依哈茨木霉T39和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、里法依哈茨木霉T39和三氟咪啶酰胺、里法依哈茨木霉T39和联氟砜、里法依哈茨木霉T39和氟吡菌酰胺、里法依哈茨木霉T39和噻恶嗪芬、里法依哈茨木霉T39和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑- 3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、里法依哈茨木霉T39和顺式茉莉酮、里法依哈茨木霉T39和过敏蛋白、里法依哈茨木霉T39和印楝油、里法依哈茨木霉T39和印楝素、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和棉铃威、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2 和涕灭威、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和虫螨威、里法依哈茨木霉菌株KRL- AG2和丁硫克百威、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和噻唑磷、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和硫线磷、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和杀线威、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和硫双灭多威、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和乐果、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和灭线磷、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2 和特丁硫磷、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和阿维菌素、里法依哈茨木霉菌株 KRL-AG2和溴甲烷和其它卤代烃、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和三氟咪啶酰胺、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和联氟砜、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2 和氟吡菌酰胺、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和噻恶嗪芬、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和顺式茉莉酮、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和过敏蛋白、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2和印楝油、里法依哈茨木霉菌株KRL- AG2和印楝素、绿色木霉菌株TV1和棉铃威、绿色木霉菌株TV1和涕灭威、绿色木霉菌株TV1和虫螨威、绿色木霉菌株TV1和丁硫克百威、绿色木霉菌株 TV1和噻唑磷、绿色木霉菌株TV1和硫线磷、绿色木霉菌株TV1和杀线威、绿色木霉菌株TV1和硫双灭多威、绿色木霉菌株TV1和乐果、绿色木霉菌株TV1 和灭线磷、绿色木霉菌株TV1和特丁硫磷、绿色木霉菌株TV1和阿维菌素、绿色木霉菌株TV1和溴甲烷和其它卤代烃、绿色木霉菌株TV1和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、绿色木霉菌株TV1和三氟咪啶酰胺、绿色木霉菌株TV1 和联氟砜、绿色木霉菌株TV1和氟吡菌酰胺、绿色木霉菌株TV1和噻恶嗪芬、绿色木霉菌株TV1和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、绿色木霉菌株TV1和顺式茉莉酮、绿色木霉菌株TV1和过敏蛋白、绿色木霉菌株TV1和印楝油、绿色木霉菌株TV1和印楝素、绿色木霉菌株TV25和棉铃威、绿色木霉菌株TV25和涕灭威、绿色木霉菌株TV25和虫螨威、绿色木霉菌株 TV25和丁硫克百威、绿色木霉菌株TV25和噻唑磷、绿色木霉菌株TV25和硫线磷、绿色木霉菌株TV25和杀线威、绿色木霉菌株TV25和硫双灭多威、绿色木霉菌株TV25和乐果、绿色木霉菌株TV25和灭线磷、绿色木霉菌株TV25和特丁硫磷、绿色木霉菌株TV25和阿维菌素、绿色木霉菌株TV25和溴甲烷和其它卤代烃、绿色木霉菌株TV25和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、绿色木霉菌株TV25和三氟咪啶酰胺、绿色木霉菌株TV25和联氟砜、绿色木霉菌株 TV25和氟吡菌酰胺、绿色木霉菌株TV25和噻恶嗪芬、绿色木霉菌株TV25和 N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、绿色木霉菌株TV25和顺式茉莉酮、绿色木霉菌株TV25和过敏蛋白、绿色木霉菌株TV25和印楝油、绿色木霉菌株TV25和印楝素、深绿木霉菌株CNCM I-1237和棉铃威、深绿木霉菌株CNCM I-1237和涕灭威、深绿木霉菌株CNCM I-1237和虫螨威、深绿木霉菌株CNCM I-1237和丁硫克百威、深绿木霉菌株CNCM I-1237和噻唑磷、深绿木霉菌株CNCM I-1237和硫线磷、深绿木霉菌株CNCM I-1237和杀线威、深绿木霉菌株CNCM I-1237和硫双灭多威、深绿木霉菌株CNCM I-1237和乐果、深绿木霉菌株CNCM I-1237和灭线磷、深绿木霉菌株CNCM I-1237和特丁硫磷、深绿木霉菌株CNCM I-1237和阿维菌素、深绿木霉菌株CNCM I-1237和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株CNCM I-1237和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株CNCM I-1237和三氟咪啶酰胺、深绿木霉菌株CNCM I-1237和联氟砜、深绿木霉菌株CNCM I-1237和氟吡菌酰胺、深绿木霉菌株 CNCM I-1237和噻恶嗪芬、深绿木霉菌株CNCM I-1237和N-[1-(2,6-二氟苯基)- 1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、深绿木霉菌株CNCM I-1237和顺式茉莉酮、深绿木霉菌株CNCM I-1237和过敏蛋白、深绿木霉菌株CNCM I-1237和印楝油、深绿木霉菌株CNCM I-1237和印楝素、深绿木霉菌株CNCM I-1237和棉铃威、深绿木霉菌株CNCM I-1237和涕灭威、深绿木霉菌株CNCM I-1237和虫螨威、深绿木霉菌株CNCM I-1237和丁硫克百威、深绿木霉菌株CNCM I-1237 和噻唑磷、深绿木霉菌株CNCM I-1237和硫线磷、深绿木霉菌株CNCM I-1237 和杀线威、深绿木霉菌株CNCM I-1237和硫双灭多威、深绿木霉菌株CNCM I-1237和乐果、深绿木霉菌株CNCM I-1237和灭线磷、深绿木霉菌株CNCM I- 1237和特丁硫磷、深绿木霉菌株CNCM I-1237和阿维菌素、深绿木霉菌株CNCM I-1237和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株CNCM I-1237和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株CNCM I-1237和三氟咪啶酰胺、深绿木霉菌株CNCM I-1237和联氟砜、深绿木霉菌株CNCM I-1237和氟吡菌酰胺、深绿木霉菌株CNCM I-1237和噻恶嗪芬、深绿木霉菌株CNCM I-1237和N-[1-(2,6- 二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、深绿木霉菌株CNCM I-1237和顺式茉莉酮、深绿木霉菌株CNCM I-1237和过敏蛋白、深绿木霉菌株CNCM I- 1237和印楝油、深绿木霉菌株CNCM I-1237和印楝素、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和棉铃威、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和涕灭威、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和虫螨威、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387 和丁硫克百威、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和噻唑磷、深绿木霉菌株 NMI编号V08/002387和硫线磷、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和杀线威、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和硫双灭多威、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和乐果、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和灭线磷、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和特丁硫磷、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387 和阿维菌素、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和三氟咪啶酰胺、深绿木霉菌株NMI编号 V08/002387和联氟砜、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和氟吡菌酰胺、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和噻恶嗪芬、深绿木霉菌株NMI编号 V08/002387和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和顺式茉莉酮、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387 和过敏蛋白、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387和印楝油、深绿木霉菌株NMI 编号V08/002387和印楝素、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388和棉铃威、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388和涕灭威、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388 和虫螨威、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388和丁硫克百威、深绿木霉菌株 NMI编号V08/002388和噻唑磷、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388和硫线磷、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388和杀线威、深绿木霉菌株NMI编号 V08/002388和硫双灭多威、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388和乐果、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388和灭线磷、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388 和特丁硫磷、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388和阿维菌素、深绿木霉菌株 NMI编号V08/002388和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株NMI编号 V08/002388和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株NMI编号 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20476和噻唑磷、深绿木霉菌株ATCC20476和硫线磷、深绿木霉菌株ATCC 20476和杀线威、深绿木霉菌株 ATCC 20476和硫双灭多威、深绿木霉菌株ATCC 20476和乐果、深绿木霉菌株 ATCC 20476和灭线磷、深绿木霉菌株ATCC 20476和特丁硫磷、深绿木霉菌株 ATCC 20476和阿维菌素、深绿木霉菌株ATCC20476和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株ATCC 20476和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株ATCC 20476和三氟咪啶酰胺、深绿木霉菌株ATCC 20476和联氟砜、深绿木霉菌株ATCC 20476和氟吡菌酰胺、深绿木霉菌株ATCC 20476和噻恶嗪芬、深绿木霉菌株ATCC 20476和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、深绿木霉菌株ATCC 20476和顺式茉莉酮、深绿木霉菌株ATCC 20476 和过敏蛋白、深绿木霉菌株ATCC20476和印楝油、深绿木霉菌株ATCC 20476 和印楝素、深绿木霉菌株T11和棉铃威、深绿木霉菌株T11和涕灭威、深绿木霉菌株T11和虫螨威、深绿木霉菌株T11和丁硫克百威、深绿木霉菌株T11和噻唑磷、深绿木霉菌株T11和硫线磷、深绿木霉菌株T11和杀线威、深绿木霉菌株T11和硫双灭多威、深绿木霉菌株T11和乐果、深绿木霉菌株T11和灭线磷、深绿木霉菌株T11和特丁硫磷、深绿木霉菌株T11和阿维菌素、深绿木霉菌株T11和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株T11和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株T11和三氟咪啶酰胺、深绿木霉菌株T11和联氟砜、深绿木霉菌株T11和氟吡菌酰胺、深绿木霉菌株T11和噻恶嗪芬、深绿木霉菌株T11和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、深绿木霉菌株T11和顺式茉莉酮、深绿木霉菌株T11和过敏蛋白、深绿木霉菌株T11 和印楝油、深绿木霉菌株T11和印楝素、深绿木霉菌株LC52和棉铃威、深绿木霉菌株LC52和涕灭威、深绿木霉菌株LC52和虫螨威、深绿木霉菌株LC52和丁硫克百威、深绿木霉菌株LC52和噻唑磷、深绿木霉菌株LC52和硫线磷、深绿木霉菌株LC52和杀线威、深绿木霉菌株LC52和硫双灭多威、深绿木霉菌株 LC52和乐果、深绿木霉菌株LC52和灭线磷、深绿木霉菌株LC52和特丁硫磷、深绿木霉菌株LC52和阿维菌素、深绿木霉菌株LC52和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株LC52和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株LC52和三氟咪啶酰胺、深绿木霉菌株LC52和联氟砜、深绿木霉菌株LC52和氟吡菌酰胺、深绿木霉菌株LC52和噻恶嗪芬、深绿木霉菌株LC52和N-[1-(2,6- 二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、深绿木霉菌株LC52和顺式茉莉酮、深绿木霉菌株LC52和过敏蛋白、深绿木霉菌株LC52和印楝油、深绿木霉菌株LC52和印楝素、深绿木霉菌株SC1和棉铃威、深绿木霉菌株SC1和涕灭威、深绿木霉菌株SC1和虫螨威、深绿木霉菌株SC1和丁硫克百威、深绿木霉菌株SC1和噻唑磷、深绿木霉菌株SC1和硫线磷、深绿木霉菌株SC1和杀线威、深绿木霉菌株SC1和硫双灭多威、深绿木霉菌株SC1和乐果、深绿木霉菌株SC1和灭线磷、深绿木霉菌株SC1和特丁硫磷、深绿木霉菌株SC1和阿维菌素、深绿木霉菌株SC1和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株SC1和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株SC1和三氟咪啶酰胺、深绿木霉菌株SC1和联氟砜、深绿木霉菌株SC1和氟吡菌酰胺、深绿木霉菌株SC1和噻恶嗪芬、深绿木霉菌株SC1和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、深绿木霉菌株SC1和顺式茉莉酮、深绿木霉菌株SC1和过敏蛋白、深绿木霉菌株SC1和印楝油、深绿木霉菌株SC1和印楝素、深绿木霉菌株SKT-1 和棉铃威、深绿木霉菌株SKT-1和涕灭威、深绿木霉菌株SKT-1和虫螨威、深绿木霉菌株SKT-1和丁硫克百威、深绿木霉菌株SKT-1和噻唑磷、深绿木霉菌株SKT-1和硫线磷、深绿木霉菌株SKT-1和杀线威、深绿木霉菌株SKT-1和硫双灭多威、深绿木霉菌株SKT-1和乐果、深绿木霉菌株SKT-1和灭线磷、深绿木霉菌株SKT-1和特丁硫磷、深绿木霉菌株SKT-1和阿维菌素、深绿木霉菌株 SKT-1和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株SKT-1和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株SKT-1和三氟咪啶酰胺、深绿木霉菌株SKT-1 和联氟砜、深绿木霉菌株SKT-1和氟吡菌酰胺、深绿木霉菌株SKT-1和噻恶嗪芬、深绿木霉菌株SKT-1和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、深绿木霉菌株SKT-1和顺式茉莉酮、深绿木霉菌株SKT-1和过敏蛋白、深绿木霉菌株SKT-1和印楝油、深绿木霉菌株SKT-1和印楝素、深绿木霉菌株 SKT-2和棉铃威、深绿木霉菌株SKT-2和涕灭威、深绿木霉菌株SKT-2和虫螨威、深绿木霉菌株SKT-2和丁硫克百威、深绿木霉菌株SKT-2和噻唑磷、深绿木霉菌株SKT-2和硫线磷、深绿木霉菌株SKT-2和杀线威、深绿木霉菌株SKT- 2和硫双灭多威、深绿木霉菌株SKT-2和乐果、深绿木霉菌株SKT-2和灭线磷、深绿木霉菌株SKT-2和特丁硫磷、深绿木霉菌株SKT-2和阿维菌素、深绿木霉菌株SKT-2和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株SKT-2和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株SKT-2和三氟咪啶酰胺、深绿木霉菌株SKT- 2和联氟砜、深绿木霉菌株SKT-2和氟吡菌酰胺、深绿木霉菌株SKT-2和噻恶嗪芬、深绿木霉菌株SKT-2和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、深绿木霉菌株SKT-2和顺式茉莉酮、深绿木霉菌株SKT-2和过敏蛋白、深绿木霉菌株SKT-2和印楝油、深绿木霉菌株SKT-2和印楝素、深绿木霉菌株 SKT-3和棉铃威、深绿木霉菌株SKT-3和涕灭威、深绿木霉菌株SKT-3和虫螨威、深绿木霉菌株SKT-3和丁硫克百威、深绿木霉菌株SKT-3和噻唑磷、深绿木霉菌株SKT-3和硫线磷、深绿木霉菌株SKT-3和杀线威、深绿木霉菌株SKT- 3和硫双灭多威、深绿木霉菌株SKT-3和乐果、深绿木霉菌株SKT-3和灭线磷、深绿木霉菌株SKT-3和特丁硫磷、深绿木霉菌株SKT-3和阿维菌素、深绿木霉菌株SKT-3和溴甲烷和其它卤代烃、深绿木霉菌株SKT-3和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、深绿木霉菌株SKT-3和三氟咪啶酰胺、深绿木霉菌株SKT- 3和联氟砜、深绿木霉菌株SKT-3和氟吡菌酰胺、深绿木霉菌株SKT-3和噻恶嗪芬、深绿木霉菌株SKT-3和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、深绿木霉菌株SKT-3和顺式茉莉酮、深绿木霉菌株SKT-3和过敏蛋白、深绿木霉菌株SKT-3和印楝油、深绿木霉菌株SKT-3和印楝素、微代谢冢村氏菌菌株C-924和棉铃威、微代谢冢村氏菌菌株C-924和涕灭威、微代谢冢村氏菌菌株C-924和虫螨威、微代谢冢村氏菌菌株C-924和丁硫克百威、微代谢冢村氏菌菌株C-924和噻唑磷、微代谢冢村氏菌菌株C-924和硫线磷、微代谢冢村氏菌菌株C-924和杀线威、微代谢冢村氏菌菌株C-924和硫双灭多威、微代谢冢村氏菌菌株C-924和乐果、微代谢冢村氏菌菌株C-924和灭线磷、微代谢冢村氏菌菌株C-924和特丁硫磷、微代谢冢村氏菌菌株C-924和阿维菌素、微代谢冢村氏菌菌株C-924和溴甲烷和其它卤代烃、微代谢冢村氏菌菌株C-924和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、微代谢冢村氏菌菌株C-924和三氟咪啶酰胺、微代谢冢村氏菌菌株C-924和联氟砜、微代谢冢村氏菌菌株C-924和氟吡菌酰胺、微代谢冢村氏菌菌株C-924和噻恶嗪芬、微代谢冢村氏菌菌株C- 924和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、微代谢冢村氏菌菌株C-924和顺式茉莉酮、微代谢冢村氏菌菌株C-924和过敏蛋白、微代谢冢村氏菌菌株C-924和印楝油、微代谢冢村氏菌菌株C-924和印楝素、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和棉铃威、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和涕灭威、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和虫螨威、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST 和丁硫克百威、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和噻唑磷、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和硫线磷、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和杀线威、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和硫双灭多威、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和乐果、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和灭线磷、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST 和特丁硫磷、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和阿维菌素、西沢巴斯德氏芽菌 oyacyst LF/ST和溴甲烷和其它卤代烃、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和三氟咪啶酰胺、西沢巴斯德氏芽菌oyacystLF/ST和联氟砜、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和氟吡菌酰胺、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和噻恶嗪芬、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和顺式茉莉酮、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和过敏蛋白、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和印楝油、西沢巴斯德氏芽菌oyacyst LF/ST和印楝素、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和棉铃威、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和涕灭威、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和虫螨威、西沢巴斯德氏芽菌Pn1 和丁硫克百威、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和噻唑磷、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和硫线磷、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和杀线威、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和硫双灭多威、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和乐果、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和灭线磷、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和特丁硫磷、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和阿维菌素、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和溴甲烷和其它卤代烃、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和三氟咪啶酰胺、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和联氟砜、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和氟吡菌酰胺、西沢巴斯德氏芽菌Pn1 和噻恶嗪芬、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和顺式茉莉酮、西沢巴斯德氏芽菌Pn1 和过敏蛋白、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和印楝油、西沢巴斯德氏芽菌Pn1和印楝素。
118.这些编号中任一个所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,还用选自以下的杀昆虫剂处理:IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、 IAN5、IAN6、IAN7、IAN8、IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、 IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、 IAN25、IAN26、IAN27、IAN28、IAN29、IAN30或SIAN1。
119.这些编号段落中任一个所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,还用选自以下的杀真菌剂处理:F1、F2、F3、F4、F5、F6、 F7、F8、F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16或SF1。
120.这些编号段落中任一个所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,其用选自由以下组成的群组的组合处理:噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、噻虫胺、苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、吡虫啉和硫双灭多威的组合、吡虫啉和丙硫菌唑的组合、噻虫胺和萎锈灵和甲霜灵和肟菌酯的组合、甲霜灵和丙硫菌唑和戊唑醇的组合、噻虫胺和β-氟氯氰菊酯的组合、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、噻虫胺和吡虫啉和丙硫菌唑和戊唑醇的组合、多菌灵和福美双的组合、吡虫啉和甲硫威的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺和丙硫菌唑的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑和吡虫啉的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、吡虫啉和氟吡菌酰胺的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、吡虫啉、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、吡虫啉、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑和噻虫胺的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和氟吡菌酰胺的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌 GB126)、氟吡菌酰胺和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、吡虫啉和丙硫菌唑的组合、吡虫啉和七氟菊酯的组合、吡虫啉和戊菌隆的组合、吡虫啉和氟唑菌苯胺的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑和甲霜灵的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵和吡虫啉的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、吡虫啉和氟吡菌酰胺的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、吡虫啉、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合和氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、吡虫啉、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512) 的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺和氟吡菌酰胺的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126) 和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126) 和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、甲霜灵和肟菌酯的组合、氟唑菌苯胺和肟菌酯的组合、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟嘧菌酯和丙硫菌唑和戊唑醇和咪唑嗪的组合、吡虫啉和甲硫威和福美双的组合、噻虫胺和β-氟氯氰菊酯的组合、噻虫胺和氟嘧菌酯和丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟吡菌酰胺和氟嘧菌酯和三唑醇的组合、甲霜灵和肟菌酯的组合、吡虫啉和种菌唑的组合、苯醚甲环唑和氟咯菌腈和戊唑醇的组合、吡虫啉和戊唑醇的组合、吡虫啉、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、甲霜灵、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、西沢巴斯德氏芽菌(如西沢巴斯德氏芽菌Pn1)、噻虫嗪、氟唑环菌胺、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、噻虫嗪、氟唑环菌胺、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、噻虫嗪、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺的组合、阿维菌素和噻虫嗪的组合、伯克氏菌属种菌株(如菌株 A396)和吡虫啉的组合、解淀粉芽孢杆菌(如解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838) 和噻虫胺的组合、噻恶嗪芬、吡虫啉、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、噻虫胺、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)、苏云金芽孢杆菌 (如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、吡唑醚菌酯、氟唑菌酰胺、甲霜灵和吡虫啉的组合、氟唑环菌胺、噻虫嗪、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合和西沢巴斯德氏芽菌、氟唑环菌胺、噻虫嗪、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、噻虫胺、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、噻虫胺、氟吡菌酰胺、噻恶嗪芬和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合;噻虫胺、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌 (如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、噻虫胺、氟吡菌酰胺、噻恶嗪芬、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、吡唑醚菌酯和甲基硫菌灵和芬普尼(fipronil)的组合(如称为Standak Top的BASF产品)、吡虫啉和硫双灭多威的组合(如来自拜耳作物科学(Bayer CropScience)的称为Cropstar的产品)。
121.这些编号段落中任一个所述的植物、细胞、植物部分或种子,其还包含另一大豆转化事件,如提供对额外除草剂的耐受性的大豆转化事件,通过另一作用模式提供对线虫的耐受性的大豆转化事件,或提供昆虫防治的大豆转化事件,或以下大豆转化事件中的任一个:事件MON87751、事件pDAB8264.42.32.1、事件DAS-81419-2、事件FG-072、事件SYHT0H2、事件DAS-68416-4、事件DAS-81615-9、事件DAS-44406-6、事件MON87708、事件MON89788、事件 DAS-14536-7、事件GTS 40-3-2、事件A2704-12、事件BPS-CV127-9、事件A5547- 127、事件MON87754、事件
Figure BDA0002911161790001371
事件MON87701、事件MON87705、事件MON87712、事件pDAB4472-1606、事件DP-356043-5、事件MON87769、事件
Figure BDA0002911161790001372
事件DP305423,或以下事件组合中的任一个: MON89788×MON87708、HOS×GTS 40-3-2、FG-072×A5547-127、 MON87701×MON 89788、DAS-81419-2×DAS-44406-6、DAS-81419-2×DAS- 68416-4、DAS-68416-4×MON 89788、MON 87705×MON 89788、MON 87769×MON89788、DP305423×GTS 40-3-2、DP305423×MON87708、事件 DP305423×MON87708×事件MON89788、DP305423×MON89788、 MON87705×MON87708、MON87705×MON87708×MON89788、MON89788×MON87708×A5547-127、MON87751×MON87701× MON87708×MON89788、SYHT0H2×MON89788、SYHT0H2×GTS 40-3-2、 SYHT0H2×MON89788×MON87708。
在一个实施例中,涉及打算生长所述植物、细胞、组织、植物部分或种子的土壤或生长介质的以上段落还包括在所述预处理的土壤或生长介质中种植或播种包含EE-GM4的所述植物、细胞、组织、部分或种子(具有或不具有如本文所述的一种或多种原生SCN抗性基因/基因座和/或如本文所述的一种或多种其它大豆转化事件)的步骤。
在一个实施例中,以上编号段落中的任一个中的一种或多种化合物或一种或多种生物防治剂或混合物选自如本文所描述的以下群组中的任一个:如H1、 H2、H3、H4、H5、IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、IAN5、IAN6、IAN7、IAN8、 IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、 IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、IAN25、IAN26、IAN27、IAN28、 IAN29、IAN30、SIAN1、F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8、F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16、SF1、P1、BCA1、BCA2、BCA3、BCA4、BCA5、 BCA6、BCA7、BCA8、BCA9、BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、SAI1、SC1 和SC2,或选自以下群组中的任一个:SIAN1、SF1、BCA8、BCA9、BCA10、 NC1、NC2、NC3、SBCA1、SAI1、SC1和SC2,如用于种子处理。
附图说明
可以结合以引用的方式并入本文中的附图理解不打算将本发明限制于所描述的特定实施例的以下实例,在所述附图中:
图1:所列举的核苷酸序列与引物之间的关系的示意性表示.黑色条柱:插入T-DNA;阴影条柱:侧接T-DNA的DNA;黑色箭头:寡核苷酸引物;格纹箭头(a):嵌合cry14Ab-1.b基因(对于嵌合基因的组成参见表2);阴影箭头 (b):嵌合hppdPf-4Pa基因(对于嵌合基因的组成参见表2);黑色箭头:寡核苷酸引物;(c)是指所指示的核苷酸序列的互补序列;黑线:寡核苷酸探针(下方数字为代表性SEQ ID No.)。表示SEQ ID No.5和6的条柱下方的数字为所述序列中的不同元件的核苷酸位置。注意:示意图未按比例绘制。
图2:EE-GM4身份分析的终点法.
图2展示一系列含有EE-GM4的大豆样品和常规大豆样品的实例2.1中所描述的方法的结果的实例。对于每一样品,展现EE-GM4特异性反应和内源性反应两者的S/B比率。在此图中,标记有“1-15”的样品为含有EE-GM4的大豆样品,标记有“WT”的样品为野生型大豆样品(不含有EE-GM4),并且标记有“NTC”的样品为无模板对照。标记为“a”的竖直(白色)条显示的是针对事件 EE-GM4获得的信号,标记为“b”的竖直(黑色)条显示的是针对内源大豆基因获得的信号。标记为“1”的水平线是检测事件EE-GM4的最小信噪比,标记为“2”的水平线是检测内源大豆序列的最小信噪比,标记为“3”是非目标(无 DNA)样品(背景荧光)的最大信噪比。
图3:EE-GM4身份和接合性的终点法.
图3展示一系列呈纯合状态的含有EE-GM4的大豆样品,呈半合状态的含有EE-GM4的大豆样品,和常规大豆样品的实例2.2中所描述的方法的结果的实例。在此图中,
-标记有“a”的线内的样品:呈纯合状态的含有EE-GM4的大豆样品
-标记有“b”的线内的样品:呈半合状态的含有EE-GM4的大豆样品
-标记有“c”的线内的样品:不含有EE-GM4的大豆样品
-由标记有“d”的线形成的框内的样品:不确定的样品
图4:EE-GM4低含量存在分析的实时PCR方法
图4展示如对校准样品所执行的低含量存在分析的实例2.3中所描述的RT- PCR方法的结果的实例。“a”、“b”、“c”、“d”、“e”分别指示校准样品“A”、“B”、“C”、“D”、“E”的Ct值。校准样品“A”、“B”、“C”、“D”、“E”具有减少量的EE-GM4 DNA。
图5:除草剂处理的平均最大植物毒性结果
图5展示与未转化/常规大豆植物(索恩(Thorne))相比,对于含有事件EE- GM4的大豆植物,在2年内的若干田间试验中记录的除草剂处理的最大植物植物毒性数据的平均值。处理下()中的数字给出包括于条柱中的试验数目,每一条柱上的数字给出所述处理的平均最大植物毒性值。所施用的处理为:IFT=异恶唑草酮,MST=硝磺草酮,PE=出苗前,PO=出苗后(在V2-V3阶段,其中添加辅助剂作物油浓缩物和硫酸铵以增加除草剂活性)。所展示的比率以克活性成分 /公顷为单位(出苗前4×剂量,出苗后2×剂量)。
图6.SCN侵染田地中索恩中EE-GM4的籽粒产率
于2015年和2016年,在SCN侵染田地(从低到高SCN侵染)中,在爱荷华州,伊利诺伊州,印第安纳州,密苏里州和田纳西州的9个不同地点对原始转化体背景(索恩)中的EE-GM4进行了测试。点是每个试验的纯合事件的估计产率(呈相对于无效组(null)的百分比差异),水平线表示纯合事件与无效分离子(null segregate)之间的对比的95%置信限(如果线不与无效分离子的100%产率下的竖直线重叠,那么事件与无效分离子显著不同)。“跨地点”是所有9个地点的组合分析的估计产率。
图7.SCN侵染田地中优良易感背景中EE-GM4的籽粒产率
使EE-GM4渐渗(BC2F3)到对SCN敏感的优良成熟组I(MG I)品系中,并于2016年在明尼苏达州的一个地点和北达科他州的一个地点(各自具有高 SCN侵染水平)进行了测试。点是每个试验的纯合事件的估计产率(呈相对于无效组的百分比差异),点周围的水平线表示纯合事件与无效分离子之间的对比的95%置信限(如果线不与无效分离子的100%下的竖直线重叠(即,无差异),那么事件与无效分离子显著不同)。“跨地点”是两个地点的组合分析的估计产率。
图8.美国短体线虫抗性温室分析,
在美国温室分析中,具有EE-GM4的优良大豆植物防治短尾短体线虫。将具有EE-GM4的植物(“EE-GM4”)与其它优良大豆品系比较:一个SCN易感成熟组(MG)3品系(“索恩”)、一个MG3 SCN易感品系、一个MG 6.2SCN 易感品系和一个MG9 SCN易感品系(“Susc WT”展示这3个品系的平均值)、一个MG3 SCN抗性品系(具有来自PI88788的rhg1抗性等位基因,“SCNRes (PI88788)”)和一个具有来自Peking的rhg1和Rhg4 SCN抗性的MG 6.2SCN 抗性品系(“SCN Res(Peking)”)。所标绘的是侵染后30天根部中的短体线虫的平均数目(5株植物/项),还展示在品种中观察到的变化(如典型地在温室分析中所见)。结果展示在EE-GM4品系中约85%的短体线虫防治。具有原生SCN 抗性(来自Peking或PI88788)的大豆品系不防治短尾短体线虫。
图9.巴西短体线虫抗性温室分析
具有EE-GM4的大豆植物(“EE-GM4 HH”)显著减少大豆根部中的短尾短体线虫。短尾短体线虫是从巴西当地田地中分离出来的。在巴西的温室分析中评价EE-GM4植物(属于两个不同美国优良品系(两个都是成熟组6.2,一个对 SCN敏感,且一个具有Peking SCN抗性(“EE-GM4”))和五个对短体线虫的防治有限的巴西大豆品系(“巴西品系”),一个标记为低短体线虫生殖因素(Rf) 的巴西品系(“BRS 7380(低Rf)”),一个对SCN敏感的美国优良品系(成熟组 6.2)(“SCN Susc”)和一个具有Peking SCN抗性的MG 6.2美国优良品系(“SCNRes(Peking)”)的短体线虫防治。标绘的是那些项的平均值,还展示在品种中观察到的变化(如典型地在温室分析中所见)。一种巴西大豆品系(BRS 7380) 展示短体线虫的约89%减少。EE-GM4品系约79%防治短体线虫。携带Peking 原生SCN抗性的大豆品系不防治短尾短体线虫。
图10.相较于无效组EE-GM4植物的缺铁失绿症(IDC)评分
图10展示在一个地点(具有高SCN侵染)具有EE-GM4的大豆植物的IDC 评分。试验为在3个不同背景(2个易感大豆品系和1个具有来自PI88788的 SCN抗性)中研究事件的影响的裂区设计(4个小区/项)。展示跨越三个基因背景(1个SCN抗性背景、1个SCN易感背景和SCN易感索恩背景)具有事件 EE-GM4的植物(“EE-GM4”)和对应无效分离子(“无效组”,不具有EE-GM4) 的平均IDC评分。一个条柱表示总共12个小区。竖直线指示标准误差(“SEM”为平均值的标准误差)。
图11.巴西短体线虫功效田间试验
对于EE-GM4纯合的大豆植物(“HH”)展示显著更少的大豆根部中的短尾短体线虫。在自然地侵染有短尾短体线虫的田地中,将优良成熟组IX背景中的 EE-GM4事件与缺失转基因的分离姊妹品系(“无效组”)相比较,以及与野生型优良成熟组IX亲本品系(“WT”)相比较。数据汇集自两个试验地点,其在种植后约98天取样。标绘的是那些项的平均值的自然对数,以及变化。竖直线指示标准误差(“SEM”为平均值的标准误差)。具有不同字母的处理平均值在P<0.05 下显著不同。
具体实施方式
在本发明中,在包含各自在植物可表达的启动子的控制下编码4-羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPPD)抑制剂耐受性的基因以及赋予线虫抗性的基因的线虫抗性大豆(soybean/Glycine max)的研发中,EE-GM4已经被识别为来自转基因大豆植物群体的优良事件。本文中描述了用于识别生物样品中的优良事件EE-GM4 的特定工具。
重组DNA分子在植物基因组中的并入典型地由细胞或组织的转化产生。特定并入位点通常归因于随机整合。
由于植物细胞或组织用重组DNA或“转化DNA”转化而引入到植物基因组中并且来源于所述转化DNA的DNA在下文中称为包含一个或多个“转基因”的“插入T-DNA”。EE-GM4的转基因为线虫抗性和HPPD抑制剂除草剂耐受性基因。在本发明的上下文中,“植物DNA”将指来源于经转化的植物的DNA。植物DNA将通常发现于对应的野生型植物中的相同基因座中。插入T-DNA可以通过在植物基因组中并入重组DNA分子的位点的位置和构型来表征。已插入重组DNA的植物基因组中的位点也称为“插入位点”或“目标位点”。将重组 DNA插入到称为“插入前植物DNA”(本文中也称为“插入前基因座”)的植物基因组的区域中可以与植物DNA的缺失,称为“目标位点缺失”相关。如本文所用,“侧接区”或“侧接序列”是指不同于所引入的T-DNA的DNA,优选地来自植物基因组的位置紧接在插入T-DNA上游并且与其邻接或位置紧接在插入 T-DNA下游并且与其邻接的DNA的至少10bp、至少20bp、至少50bp和至多5000bp的序列。引起插入T-DNA的随机整合的转化程序将产生具有不同侧接区的转化体,所述侧接区对于每个转化体是特有的并且独特的。当通过传统的杂交将重组DNA引入到植物中时,其在植物基因组中的插入位点或其侧接区将通常不改变。
如本文所用,“分离的核酸(序列/分子)”或“分离的DNA(序列/分子)”是指不再处于其所分离自的天然环境中的核酸或DNA(序列/分子),例如,另一细菌宿主或植物基因组中的核酸序列,或与来自另一来源的DNA或核酸(序列/分子)融合的核酸或DNA(序列/分子),如当含于处于(异源)植物可表达的启动子的控制下的嵌合基因中时。本发明的任何核酸或DNA(包括任何引物) 也可以是非天然存在的,如具有与自然界中所存在的序列一致的序列但具有标记(天然存在的对应物不具有),或具有与天然存在的核苷酸相比具有至少一个核苷酸添加或置换或至少一个固有核苷酸缺失的序列,或具有与天然存在的核酸或DNA或其片段具有低于100%(不一致)的序列一致性的序列的核酸或 DNA,或具有由自然界中不一起存在的来自不同来源的核苷酸序列组成的序列的核酸或DNA(嵌合或杂交DNA)或具有不同于天然核酸或DNA或其片段的序列的人造合成核酸或DNA。
事件被定义为(人工)基因座,其由于基因工程改造携带包含一个或多个相关基因的至少一个拷贝的插入T-DNA或转基因。事件的典型等位基因状态是存在或不存在插入T-DNA。事件典型地通过一个或多个转基因的表达来表征。在遗传水平上,事件是植物的遗传构成的一部分。在分子水平上,事件可以通过限制性酶切图谱(例如,如通过DNA印迹(Southern blotting)测定),转基因的上游和/或下游侧接序列,分子标记物的位置和/或转基因的分子构型来表征。通常用包含至少一个相关基因的转化DNA转化植物产生包含众多单独事件的转化体群体,所述单独事件中的每一种为独特的。事件由插入T-DNA和侧接序列中的至少一个表征。
如本文所用,优良事件为基于一个或多个转基因的最优性状功效和优良表达、稳定性和事件与包含事件的植物的最优农学特征的相容性,选自一组通过用相同转化DNA转化而获得的事件的事件。因此,优良事件选择的标准是以下中的一种或多种,优选地两个或更多个,有利地全部:
a)性状功效;
b)插入T-DNA的存在不损害植物的其它所需特征,如与农学性能或商业价值相关的那些特征;
c)所述事件的特征在于稳定地继承的良好定义的分子构型,且可针对其开发用于控制一致性的适当工具;
d)一个或多个相关基因在其中携带事件的植物有可能暴露于普通农学用途的环境条件范围内在商业上可接受的水平下展示正确、适当且稳定的空间和时间表型表达。
优选地,插入T-DNA与植物基因组中允许容易地渐渗到所需商业遗传背景中的位置相关。
事件作为优良事件的状态通过在不同相关遗传背景中的优良事件的渐渗和观察与标准(例如以上a)、b)、c)和d))中的一个、两个、三个或全部的遵从性而确认。
“优良事件”因此是指包含插入T-DNA的基因座,其符合上文所描述的标准。植物、植物材料或如种子的后代可在其基因组中包含一个或多个不同的优良事件。
经开发以识别优良事件或包含优良事件的植物或植物材料,或包含有包含优良事件的植物材料的产品的工具是基于优良事件的特定基因组特征,例如包含插入T-DNA、分子标记物或插入T-DNA的一个或多个侧接区的序列的基因组区域的特定限制性酶切图谱。
一旦已经对插入T-DNA的侧接区中的一个或两个测序,可以通过分子生物技术产生引物和/或探针,其特异性地识别样品的核酸(DNA或RNA)中的此 (这些)一个或多个序列。举例来说,可以研发PCR方法以识别生物样品(如植物、植物材料或包含植物材料的产品的样品)中的优良事件。所述PCR是基于至少两个特异性“引物”,一个识别优良事件的5'或3'T-DNA侧接区内的序列并且另一个识别插入T-DNA内的序列。引物优选地具有15与35个核苷酸之间的序列,其在优化PCR条件下分别“特异性地识别”优良事件的5'或3'T-DNA侧接区内的序列和优良事件的插入T-DNA,使得从包含优良事件的核酸样品扩增特定片段(“整合片段”或区分扩增子)。这意味着在优化PCR条件下仅扩增靶向的整合片段,而无植物基因组或插入T-DNA中的其它序列。
适用于本发明的PCR引物可以是以下:
-在17nt到约200nt长度范围内的寡核苷酸,其在其3'端包含至少17个连续核苷酸,优选地20个连续核苷酸的核苷酸序列,所述核苷酸选自5'T-DNA 侧接序列(SEQ IDNo.5核苷酸1到核苷酸227或SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058或在其上游并且与其邻接的植物基因组序列)(识别5'T-DNA侧接序列的引物);或
-在17nt到约200nt长度范围内的寡核苷酸,其在其3'端包含至少17个连续核苷酸,优选地20个连续核苷酸的核苷酸序列,所述核苷酸选自3'T-DNA 侧接序列(SEQ IDNo.6核苷酸254到核苷酸501的互补序列或SEQ ID No.25 核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列或在其下游并且与其邻接的植物基因组序列)(识别3'T-DNA侧接序列的引物);或
-在17nt到约200nt长度范围内的寡核苷酸,其在其3'端包含至少17个连续核苷酸,优选地20个连续核苷酸的核苷酸序列,所述核苷酸选自插入T- DNA序列(SEQ ID No.5核苷酸228到核苷酸398的互补序列或SEQ ID No.6 核苷酸1到核苷酸253的序列或SEQ IDNo.11核苷酸17到核苷酸7621的序列或SEQ ID No.23核苷酸1059到核苷酸8663的序列或其互补序列)(识别插入 T-DNA的引物)。
应理解,识别5'T-DNA侧接序列的引物可以与识别插入T-DNA的引物一起用于PCR反应,所述识别插入T-DNA的引物选自SEQ ID No.5核苷酸228 到核苷酸398的互补序列或在其下游并且与其邻接的T-DNA序列,而识别3'T- DNA侧接序列的引物可以与识别插入T-DNA的引物一起用于PCR反应,所述识别插入T-DNA的引物选自SEQ ID No.6核苷酸1到核苷酸253的序列或在其上游并且与其邻接的T-DNA。识别插入T-DNA的引物还可以选自SEQ IDNo. 11核苷酸17到核苷酸7621的序列或SEQ ID No.23核苷酸105到核苷酸8663 的序列或其互补序列。
引物当然可以长于所提及的17个连续核苷酸,并且可以例如为20、21、30、 35、50、75、100、150、200nt长或甚至更长。引物可完全由选自所提及的侧接序列和插入T-DNA序列的核苷酸序列的核苷酸序列组成。然而,引物在其5'端处的核苷酸序列(即,在3'端处的17个连续核苷酸之外)不太关键。因此,引物的5'序列可按需要包含选自侧接序列或插入T-DNA的核苷酸序列或由其组成,但与T-DNA或T-DNA侧接DNA相比可含有若干(例如1、2、5或10个) 错配。引物的5'序列甚至可完全为与侧接序列或插入T-DNA不相关的核苷酸序列,如例如表示一个或多个限制酶识别位点的核苷酸序列,或如能够结合其它寡核苷酸,如经标记的寡核苷酸,如FRET盒的核苷酸序列(LGC基因组学;参见Semagn等人,2014,《分子育种(MolBreeding)》33:1-14,和US 7615620)。所述具有错配的不相关序列或侧接DNA序列应优选地不长于100,更优选地不长于50或甚至25个核苷酸。引物还可以用标记(如荧光标记)修饰。
此外,适合引物可在其3'端包含跨越5'或3'T-DNA侧接区来源的序列与插入T-DNA序列(位于SEQ ID No.5中的核苷酸227和228和SEQ ID No.6中的核苷酸253和254,或SEQID No.24中的核苷酸1058和1059和SEQ ID No. 25中的核苷酸253和254)之间的接合区的核苷酸序列或(基本上)由其组成,其条件是所提及的位于3'端的17个连续核苷酸并非仅仅来源于SEQ ID No.5或 6或SEQ ID No.24或25中的插入T-DNA或T-DNA侧接序列。
所属领域的技术人员还将立即清楚,恰当选择的PCR引物对还不应包含彼此互补的序列。
出于本发明的目的,“SEQ ID No:X中表示的核苷酸序列的互补序列”是可以通过根据查格夫法则(Chargaff's rules)将核苷酸用其互补核苷酸置换
Figure BDA0002911161790001471
Figure BDA0002911161790001472
并且在5'到3'方向上(即,在所表示的核苷酸序列的相反方向上)读取序列衍生自所表示的核苷酸序列的核苷酸序列。
适合引物的实例为SEQ ID no.13或SEQ ID No.21或SEQ ID No.26或27 (识别3'或5'T-DNA侧接序列的引物)或SEQ ID No.14或SEQ ID No.20或 SEQ ID No.28或29(供与识别3'或5'T-DNA侧接序列的引物一起使用的识别插入T-DNA的引物)的寡核苷酸序列。
优选地,经扩增片段具有50与500个核苷酸之间的长度,例如50与150个核苷酸之间的长度。特异性引物可以具有分别与优良事件的5'或3'T-DNA侧接区和优良事件的插入T-DNA内的序列80%到100%一致的序列,其条件是错配仍允许在优化PCR条件下这些引物的优良事件特异性识别。然而,可容易地以实验方式确定可允许的错配范围,且其对于所属领域的技术人员来说是已知的。
整合片段的检测可以各种方式进行,例如,通过凝胶分析之后的大小估计。还可以直接对整合片段测序。用于检测扩增DNA片段的其它序列特异性的方法也是所属领域中已知的。扩增DNA片段还可以使用经标记序列并且检测标记来检测。举例来说,与经扩增片段特异性结合的经标记探针可包括于反应混合物中。在一个实施例中,经标记的探针(FRET杂交探针)可包含荧光标记和淬灭基团,使得FRET盒不再淬灭并且当结合到PCR产物时发射荧光。或者,经标记的FRET盒,即标记有荧光标记和淬灭基团的寡核苷酸可以包括于反应混合物中,所述盒特异性地结合反应混合物中引物中的一个,如针对反应混合物中所用引物的5'延伸部的FRET盒(参见例如Semagn等人,2014,《分子育种》33:1- 14,和US 7615620)。可以使用所属领域中已知的方法测量荧光。可以实时,即,在PCR反应的每个循环期间测量荧光。还可以在PCR反应结束时测量荧光。
因为引物的序列和其在基因组中的相对位置对于优良事件来说是独特的,所以整合片段的扩增将仅在包含优良事件(的核酸)的生物样品中发生。优选地,当进行PCR以识别未知样品中EE-GM4的存在时,包括使用其可以扩增所述事件的植物物种的“管家基因”内的片段的一个引物组的对照物。管家基因为在大多数细胞类型中表达并且涉及所有细胞常见的基本代谢活性的基因。优选地,从管家基因扩增的片段为大于扩增的整合片段的片段。取决于待分析的样品,可包括其它对照物。
标准PCR方案描述于所属领域中,如在《PCR应用手册》(《罗氏分子生物化学品(Roche Molecular Biochemicals)》1999年第2版或2006年第3版)和其它参考文献中。用于PCR的最优条件(包括特异性引物的序列)在每个优良事件的“聚合酶链反应(或PCR)识别方案”中指定。然而,应理解,PCR识别方案中的多个参数可需要调整到特定实验室条件,且可稍微修改以获得类似结果。举例来说,使用用于制备DNA的不同方法可能需要调整例如所使用引物、聚合酶的量和粘接条件。类似地,选择其它引物可以指示PCR识别方案的其它最优条件。然而,这些调整对于所属领域的技术人员将是显而易见的,并且于当前PCR应用手册(如上文所引用的PCR应用手册)中进一步详述。
或者,特异性引物可用于扩增整合片段,其可用作在生物样品中识别EE- GM4的“特异性探针”。使生物样品的核酸与探针在允许探针与核酸中其对应片段杂交的条件下接触以使得形成核酸/探针杂交物。可检测此杂交物的形成(例如,通过标记核酸或探针),由此此杂交物的形成指示EE-GM4的存在。所属领域中已描述基于与特异性探针的杂交(在固相载剂上或在溶液中)的所述识别方法。特异性探针优选地为在优化条件下与包含优良事件的5'或3'T-DNA侧接区的一部分和与其邻接的插入T-DNA的一部分的区域(下文称为“特定区域”)特异性地杂交的序列。优选地,特异性探针包含50bp与500bp之间,或100bp 到350bp的序列,其与EE-GM4的特定区域的核苷酸序列至少80%,或80与 85%之间,或85与90%之间,或90与95%之间,或95%与100%之间一致(或互补),或与其一致(或互补)。优选地,特异性探针将包含与优良事件的特定区域一致(或互补)的约15到约100个连续核苷酸的序列。
适用作检测优良事件EE-GM4的PCR引物的寡核苷酸还可以用于开发基于 PCR的方案以确定含有优良事件的植物的接合状态。为此目的,设计识别整合之前的野生型基因座的两种引物,其设计方式为使得其朝向彼此定向并且具有位于引物之间的插入位点。这些引物可以含有特异性地识别EE-GM4的5'和/或 3'T-DNA侧接序列的引物。识别整合之前的野生型基因座的此引物组,以及与转化DNA序列(插入T-DNA)互补的第三引物允许EE-GM4特异性基因座以及野生型基因座的同时诊断PCR扩增。如果植物对于转基因基因座或对应的野生型基因座是纯合的,那么诊断PCR将产生对于转基因或野生型基因座来说典型的,优选地长度典型的单一PCR产物。如果植物对于转基因基因座是半合的,那么将出现两种基因座特异性PCR产物,反映转基因和野生型基因座的扩增。
或者,为了测定含有优良事件的植物的接合状态,设计识别整合之前的野生型基因座的两种引物,其设计方式为使得其朝向彼此定向,并且一个引物特异性地识别SEQ IDNo.5或6或SEQ ID No.24或25中所含有的5'或3'T-DNA侧接序列,并且一个引物特异性地识别SEQ ID No.6或5或SEQ ID No.25或24内所含有的3'或5'T-DNA侧接序列,或特异性地识别插入前基因座。对于本发明,识别整合之前的野生型基因座的适合引物对是含有一个包含或(基本上)由SEQ ID No.18的核苷酸序列组成的引物和一个包含或(基本上)由SEQ IDNo.13的核苷酸序列组成的引物的引物对。此引物组,以及与转化DNA序列(插入T- DNA)互补,或与转化DNA序列和与其邻接的5'或3'T-DNA侧接序列互补,并且在朝向特异性地识别5'或3'T-DNA侧接序列的引物(如包含或(基本上) 由SEQ ID No.12的核苷酸序列组成的引物,其在朝向包含或(基本上)由SEQ ID No.13的核苷酸序列组成的引物的方向上)的方向上的第三引物允许EE-GM4 特异性基因座以及野生型基因座的同时诊断PCR扩增。如果植物对于转基因基因座或对应的野生型基因座是纯合的,那么诊断PCR将产生对于转基因或野生型基因座来说典型的单一PCR产物。如果植物对于转基因基因座是半合的,那么将出现两种基因座特异性PCR产物,反映转基因和野生型基因座的扩增。
对于野生型和转基因基因座典型的PCR产物的检测可以基于测定可以对于野生型和转基因基因座典型的PCR产物的长度。或者,对于野生型和转基因基因座典型的PCR产物的检测可以通过修饰对插入前基因座具有特异性的引物和通过修饰对插入T-DNA具有特异性的引物,和检测并入到经修饰引物的PCR产物中来进行。举例来说,可以使用荧光标记来标记对于插入前基因座具有特异性的引物和对于插入T-DNA具有特异性的引物,其中标记对于两个引物是不同的。当引物并入到PCR产物中时,可以检测到荧光。如果植物对于转基因基因座或对应的野生型基因座是纯合的,那么可以仅检测到对插入T-DNA具有特异性的引物或对插入前基因座具有特异性的引物的标记的荧光。如果植物对于转基因基因座是半合的,那么可以检测到对插入T-DNA具有特异性的引物和对插入前基因座具有特异性的引物的标记的荧光,这反映了转基因和野生型基因座的扩增。
或者,对插入前基因座具有特异性的引物和对插入T-DNA具有特异性的引物可以具有5'延伸部,其特异性地结合经标记的FRET盒,即标记有荧光标记和淬灭基团的寡核苷酸,其中5'延伸部和相应FRET盒对于两种引物是不同的(参见例如Semagn等人,2014,《分子育种》33:1-14,和US 7615620)。当引物并入到PCR产物中并且随后FRET盒并入到PCR产物中时,可以检测荧光。如果植物对于转基因基因座或对应的野生型基因座是纯合的,那么可以仅检测到特异性结合对插入T-DNA具有特异性的引物的FRET盒或特异性结合对插入前基因座具有特异性的引物的FRET盒的荧光。如果植物对于转基因基因座是半合的,那么可以检测到特异性结合对插入T-DNA具有特异性的引物的FRET盒和特异性结合对插入前基因座具有特异性的引物的FRET盒的荧光,这反映了转基因和野生型基因座的扩增。
如果植物对于转基因基因座或对应的野生型基因座是纯合的,那么诊断 PCR将产生对于转基因或野生型基因座来说典型的,优选地长度典型的单一 PCR产物。如果植物对于转基因基因座是半合的,那么将出现两种基因座特异性PCR产物,反映转基因和野生型基因座的扩增。
或者,为了确定含有优良事件的植物的接合状态,可以如实例中所描述的定量方式在PCR反应中确定事件的存在。为此目的,设计识别事件EE-GM4的两种引物,其设计方式为使得其朝向彼此定向,其中一种引物特异性地识别SEQ ID No.5或6内或SEQ ID No.24或25内含有的5'或3'T-DNA侧接序列,并且其中一种引物特异性地识别SEQ ID No.5或6内或SEQ ID No.24或25内或 SEQ ID No.11或23内的插入T-DNA。此引物组允许EE-GM4特异性基因座的 PCR扩增。扩增DNA片段可以使用与扩增片段特异性结合的包括于反应混合物中的经标记探针定量地检测。经标记探针可以包含荧光标记和淬灭基团,使得标记不再淬灭并且当结合到PCR产物时发射荧光。可以使用所属领域中已知的方法实时,即,在PCR反应的每个循环期间测量荧光。荧光超出某一阈值水平的 PCR循环为所分析的生物样品中EE-GM4特异性基因座的量的量度,且接合状态可基于参考纯合和杂合样品计算。
或者,还可以基于拷贝数分析、使用Taqman化学物质和实时PCR原理来确定包含EE-GM4的植物的接合状态。替代性方法将典型地包括EE-GM4特异性反应以定量EE-GM4拷贝数,和用于归一化EE-GM4拷贝数的内源基因特异性反应。处于纯合状态的含有EE-GM4事件的样品将具有比半合样品高两倍的相对拷贝数。在所述方法中不接合样品将不会扩增EE-GM4序列。
此外,还可以使用本文所提供的优良事件特异性序列信息开发不同于基于 PCR的扩增方法的对优良事件EE-GM4具有特异性的检测方法。所述替代性检测方法包括基于特定核酸结构的侵入性裂解的线性信号放大检测方法(也称为 InvaderTM技术)(如例如在美国专利5,985,557《核酸的侵入性裂解(Invasive Cleavage of Nucleic Acids)》,6,001,567《通过侵入物引导的裂解检测核酸序列 (Detection of Nucleic Acid sequences byInvader Directed Cleavage)》中所描述,所述文献以引用的方式并入本文中)。为此目的,使目标序列与经标记的第一核酸寡核苷酸杂交,所述第一核酸寡核苷酸包含SEQ ID No.5核苷酸位置228到核苷酸位置245的核苷酸序列或其互补序列,或包含SEQ ID No.6核苷酸位置236 到核苷酸位置253的核苷酸序列或其互补序列;并且进一步与第二核酸寡核苷酸杂交,所述第二核酸寡核苷酸包含SEQ ID No.5核苷酸210到核苷酸227的核苷酸序列或其互补序列,或包含SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸271的核苷酸序列或其互补序列,其中所述第一和第二寡核苷酸重叠至少一个核苷酸。
通过此杂交产生的双链体或三链体结构允许用酶
Figure BDA0002911161790001521
选择性裂解探针,留下完好的目标序列。随后检测裂解的经标记探针,潜在地通过中间步骤从而进一步放大信号。
在一个实施例中,提供一种通过与大体上互补的经标记核酸探针杂交来检测生物样品中优良事件EE-GM4的存在的方法,其中探针:目标核酸比通过目标核酸序列的再循环而扩大,所述方法包含:
a)使所述目标核酸序列与第一核酸寡核苷酸杂交,所述第一核酸寡核苷酸包含SEQ ID No.5核苷酸位置228到核苷酸位置245的核苷酸序列或其互补序列,或所述第一核酸寡核苷酸包含SEQ ID No.6核苷酸位置236到核苷酸位置 253的核苷酸序列或其互补序列;
b)使所述目标核酸序列与第二核酸寡核苷酸杂交,所述第二核酸寡核苷酸包含SEQ ID No.5核苷酸210到核苷酸227的核苷酸序列或其互补序列,或所述第二核酸寡核苷酸包含SEQ ID No.6核苷酸254到核苷酸271的核苷酸序列或其互补序列,其中所述第一和第二寡核苷酸重叠至少一个核苷酸,并且其中所述第一或所述第二寡核苷酸经标记成为所述经标记核酸探针;
c)用酶仅使探针:目标核酸序列双链体内的经标记探针裂解,其使得探针选择性裂解,使双链体解离,留下完好的目标序列;
d)通过重复步骤(a)到(c)使目标核酸序列再循环;以及
e)检测裂解的经标记探针,从而确定所述目标核酸序列的存在,并且检测所述生物样品中优良事件EE-GM4的存在。
如本文所用,当两种核酸不是彼此完全互补(如本文所定义)时,例如当其序列彼此至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%互补时,其为“大体上互补”。
如本文所用,“试剂盒”是指出于进行本发明的方法的目的,更确切地说,识别生物样品中的优良事件EE-GM4或确定含有EE-GM4的植物材料的接合状态的一组试剂。更确切地说,本发明的试剂盒的优选实施例包含至少一种或两种特异性引物,如上文所述用于识别优良事件,或三种特异性引物,或两种特异性引物和一种特异性探针,如上文所述用于确定接合状态。任选地,试剂盒可进一步包含本文所描述的PCR识别方案或如本文所描述的用于EE-GM4检测的其它方案中的任一种中的任何其它试剂。或者,根据本发明的另一实施例,试剂盒可包含如上文所描述的特异性探针,其与生物样品的核酸特异性地杂交以识别其中EE-GM4的存在。任选地,试剂盒可进一步包含用于使用特异性探针识别生物样品中EE-GM4的任何其它试剂(如但不限于杂交缓冲剂、标记)。
可以使用本发明的试剂盒,并且出于质量控制(例如,种子批次的纯度)的目的,可以特定地调整其组分,检测植物材料或包含或来源于植物材料的材料 (如但不限于食品或饲料产品)中存在或不存在优良事件。
如本文所用,就核苷酸序列(DNA或RNA)来说,“序列一致性”是指相同核苷酸的位置数目除以两个序列中的较短序列中的核苷酸数目。两个核苷酸序列的比对通过Wilbur和Lipmann算法(Wilbur和Lipmann,1983,《美国国家科学院院刊(Proc.Nat.Acad.Sci.USA)》80:726)使用20个核苷酸的窗口大小、 4个核苷酸的字长和4的空隙处罚进行。序列数据的计算机辅助分析和解释(包括如上文所描述的序列比对)可(例如)使用遗传学计算机组(GCG,威斯康星大学生物技术中心(University of Wisconsin Biotechnology Center))的序列分析软件包方便地执行。当序列具有至少约75%、至少约80%、至少约85%、至少约90%、至少约95%、至少约98%或至少约99%、或至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、至少99,5%或至少99,9%的序列一致性时,将所述序列指示为“基本上类似”。显然,当RNA序列被称为基本上类似于DNA序列或与DNA序列具有一定程度的序列一致性时,DNA序列中的胸苷(T)被视为等于RNA序列中的尿嘧啶(U)。此外,显然,随时间推移DNA序列中可能出现小差异或突变,并且对于本发明的事件特异性引物或探针可以允许一些错配,因此,在本发明的任何实施例中对于本发明的任何3'或5'T-DNA侧接DNA 或对于任何插入序列或插入T-DNA或任何引物或探针,本文中所指示的任何 DNA序列还包括基本上类似于本文所提供的序列的序列,如与对于本发明的任何3'或5'T-DNA侧接DNA、对于任何引物或探针或对于任何插入序列或插入T- DNA所给出的序列杂交或与其具有至少90%、95%、96%、97%、98%或至少99%序列一致性的序列,如与任何给定序列1到200、1到150、1到100、1到75、 1到50、1到30、1到20、1到10、1到5或1到3个核苷酸不同的核苷酸序列。
如本文所用,术语“引物”涵盖能够在模板依赖性工艺(如PCR)中引发新生核酸的合成的任何核酸。典型地,引物为10到30个核苷酸的寡核苷酸,但可以采用更长的序列。引物可以双股形式提供,但单股形式为优选的。探针可以用作引物,但被设计成结合到目标DNA或RNA并且不需要在扩增工艺中使用。
如本文所用,术语“识别”在指特异性引物或探针时是指以下事实:特异性引物或探针在方法中所阐述的条件(例如PCR识别方案的条件)下与优良事件中的核酸序列特异性地杂交,由此通过阳性和阴性对照物的存在来确定特异性。
如本文所用,术语“杂交”在指特异性探针时是指探针在标准严格度条件下结合到优良事件的核酸序列中的特定区域的事实。如本文所用,标准严格度条件是指本文所描述的杂交条件或如Sambrook等人,1989(《分子克隆:实验指南 (Molecular Cloning:ALaboratory Manual)》,第二版,纽约Cold Spring Harbor Laboratory Press)所描述的常规杂交条件,其举例来说可包含以下步骤:1)将植物基因组DNA片段固定于过滤器上,2)使所述过滤器在42℃下在50%甲酰胺、5×SSPE、2×Denhardt试剂和0.1%SDS中预杂交1到2小时,或在68℃下在6×SSC、2×Denhardt试剂和0.1%SDS中预杂交1到2小时,3)添加已经标记的杂交探针,4)培育16到24小时,5)在室温下在1×SSC、0.1%SDS中洗涤过滤器20分钟,6)各自在0.2×SSC、0.1%SDS中在68℃下洗涤过滤器三次持续20分钟,和7)用强化筛将过滤器在-70℃下暴露于X射线膜24到48小时。
如本文中所使用,生物样品是植物、植物材料或包含植物材料的产物的样品。术语“植物”打算涵盖在任何成熟阶段的大豆植物组织,以及取自或来源于任何所述植物的任何细胞、组织或器官,包括但不限于任何种子、叶、茎、花、根、单细胞、配子、细胞培养物、组织培养物或原生质体。如本文所用,“植物材料”是指从植物获得或来源于植物的材料。包含植物材料的产物涉及使用植物材料产生的或可能被植物材料污染的食品,饲料或其它产物。应理解,在本发明的上下文中,测试所述生物样品中对EE-GM4具有特异性的核酸的存在,意味着样品中核酸的存在。因此,本文中所提及的用于识别生物样品中的优良事件 EE-GM4的方法涉及在包含优良事件的核酸的生物样品中的识别。
如本文所用,“包含”应解释为指定所述特点、整体、步骤、试剂或组分如所提及的存在,但不排除一个或多个特点、整体、步骤或组分或其群组的存在或添加。因此,例如包含核苷酸或氨基酸序列的核酸或蛋白质可以包含比实际上列举的那些更多的核苷酸或氨基酸,即嵌入于更大核酸或蛋白质中。包含功能上或结构上经定义的DNA序列的嵌合基因可包含额外DNA序列,如启动子、前导序列、尾部序列和/或转录终止序列(可能还包括编码靶向或转运肽的DNA)。
本发明还涉及在包含优良事件EE-GM4的大豆植物,获自这些植物的包含优良事件EE-GM4的后代植物和种子中此事件的产生,并涉及来源于包含此事件的植物的植物细胞或植物材料,并且涉及用本发明的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂中的一种或多种或如本文所述的混合物处理的所述植物或种子。如实例中所描述,可以获得包含优良事件EE-GM4的植物。本发明还涉及以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的包含优良事件EE-GM4的种子或其包含优良事件EE-GM4的衍生物。如本文所用,“(种子的)衍生物”是指可以从所述种子生长的植物,由自交、交叉或回交产生的后代以及植物细胞、器官、部分、组织、细胞培养物、原生质体和其植物材料。这包括用本发明一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂中的一种或多种或如本文所述的混合物处理的植物或种子。
可根据如实例中所描述的EE-GM4的识别方案中的任一种识别包含EE- GM4的大豆植物或植物材料,包括实例2.1中的EE-GM4身份分析的终点法,如实例2.2中所描述的EE-GM4身份和接合性分析的终点法、如实例2.3中所描述的EE-GM4低含量存在分析的实时PCR方法。简单来说,存在于生物样品中的大豆基因组DNA通过PCR扩增,所述PCR使用特异性地识别EE-GM4的5' 或3'T-DNA侧接序列内的序列的引物,如具有SEQ ID NO:13或SEQ IDNo.21 的序列的引物;和识别插入T-DNA中的序列的引物,如具有SEQ ID No.12或 SEQ IDNo.20的序列的引物;或识别EE-GM4的5'或3'T-DNA侧接序列和与其邻接的插入T-DNA的引物。扩增内源性大豆序列的一部分的DNA引物用作 PCR扩增的阳性对照物。如果在PCR扩增之后,材料产生预期大小的片段或产生预期荧光标记的荧光,那么材料含有来自含有优良事件EE-GM4的大豆植物的植物材料。
具有EE-GM4的植物的特征在于其线虫抗性,确切地说SCN、病变线虫和/或根结(“RKN”)和/或肾形线虫抗性,以及其对HPPD抑制剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮的耐受性。具有EE-GM4的不同市售品种的大豆植物的特征还在于在不存在HPPD抑制剂除草剂施用和SCN侵染的情况下,具有与对应的非转基因等基因市售品种相当的农学特征。已观察到,本文所述的大豆植物基因组的插入区中插入T-DNA的存在向包含此事件的植物赋予尤其令人关注的表型和分子特征。
本文还提供一种产生对SCN具有抗性且对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性的大豆植物的方法,其包含将SCN抗性和HPPD抑制剂除草剂耐受性引入到大豆植物基因组中,其通过将不具有Cry14Ab-1编码基因和不具有HPPD-4编码基因的第一大豆植物与含EE-GM4大豆植物杂交,和选择对SCN具有抗性并对 HPPD抑制剂除草剂具有耐受性的后代植物。在一个实施例中,此方法包括用本发明的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂中的一种或多种或如本文所述的混合物,如本文所述的一种或多种杀线虫化合物和/或一种或多种杀线虫生物防治剂中的一种或多种处理所述植物。SCN抗性可以使用标准SCN温室分析测量,例如,见万维网地址:plantpath.iastate.edu/tylkalab/greenhouse-resistance-screening,和:plantmanagementnetwork.org/pub/php/review/2009/sce08/。
本发明的一个实施例提供了大豆植物中的优良事件,其可通过将2个转基因插入到大豆基因组中的特定位置获得,所述优良事件在所述大豆植物上赋予对线虫的抗性和对HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮的耐受性,并且其中所述优良事件具有基本上类似于等基因品系(如本文所用,“等基因品系”或“近等基因品系”为具有相同遗传背景但不具有转基因的大豆品系,如与用于转化的植物具有相同遗传背景的植物,或缺失转基因的分离姊妹品系(“无效组”))的农学性能。确切地说,本发明提供大豆植物中的优良事件,其中所述优良事件在所述大豆植物的基因组中的插入或存在似乎与等基因品系或商业大豆品系相比较,不会引起对疾病的敏感性增加、不会引起产量损失,或不会引起倒伏增加。因此,本发明提供指定为EE-GM4的大豆植物中的优良事件,其产生的大豆植物与等基因品系相比较,对线虫的抗性改良且可耐受 HPPD抑制剂除草剂(如异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮)的施用,而不会不利地影响所述大豆植物的产率,所述大豆植物在统计学上与等基因大豆植物或商业大豆栽培品种在其疾病敏感性或倒伏方面不显著不同。这些特征使得当前优良事件为线虫防治和杂草抗性管理程序中的有价值的工具。在一个实施例中,事件EE-GM4与含有除草剂耐受性基因的一个或多个大豆转化事件组合,所述一个或多个大豆转化事件如提供对以下的耐受性的一个或多个大豆转化事件:基于草甘膦的、基于草铵膦的、基于HPPD抑制剂的、基于PPO抑制剂的、基于磺酰脲或咪唑啉酮的、AHAS或ALS抑制和/或生长素类(例如麦草畏,2,4- D)除草剂中的任一个或其组合,包括但不限于事件EE-GM3(也称为FG-072、
Figure BDA0002911161790001581
描述于WO2011063411、USDA-APHIS申请09-328-01p中)、事件SYHT0H2(也称为0H2、
Figure BDA0002911161790001582
描述于WO2012/082548和12-215-01p中)、事件DAS-68416-4(也称为Enlist大豆,描述于WO2011/066384和 WO2011/066360、USDA-APHIS申请09-349-01p中)、事件DAS-44406-6(也称为Enlist E3、
Figure BDA0002911161790001583
描述于WO2012/075426和USDA-APHIS 11-234- 01p中)、事件MON87708(Roundup Ready2Xtend大豆的麦草畏耐受性事件,描述于WO2011/034704和USDA-APHIS申请10-188-01p中,
Figure BDA0002911161790001584
)、事件MON89788(也称为Genuity Roundup Ready 2Yield、MON-89788-1,描述于WO2006/130436和USDA-APHIS申请06-178-01p中)、事件40-3-2(也称为 RoundupReady、GTS 40-3-2、
Figure BDA0002911161790001585
描述于USDA-APHIS申请93-258- 01中)、事件A2704-12(也称为LL27、
Figure BDA0002911161790001586
描述于WO2006108674 和USDA-APHIS申请96-068-01p中)、事件127(也称为BPS-CV127-9,描述于 WO2010/080829中)、事件A5547-127(也称为LL55、EE-GM2、
Figure BDA0002911161790001587
Figure BDA0002911161790001588
描述于WO2006108675和USDA-APHIS申请96-068-01p中)、事件MON87705 (
Figure BDA0002911161790001591
Vistive Gold,公开的PCT专利申请WO2010/037016、USDA- APHIS申请09-201-01p)、事件
Figure BDA0002911161790001592
(也称为HB4大豆,US FDA BNF 编号000155、USDA-APHIS案卷编号APHIS-2017-0075, www.aphis.usda.gov/brs/aphisdocs/17_22301p.pdf)、事件DP305423(也称为
Figure BDA0002911161790001593
Figure BDA0002911161790001594
公开的PCT专利申请WO2008/054747、USDA-APHIS申请06-354- 01p)、事件DAS-81419-2(也称为ConkestaTM大豆,描述于WO2013016527和USDA-APHIS申请12-272-01p中)、事件3560.4.3.5(也称为DP-356043-5,描述于WO2008/002872中)、事件MON87712(也称为MON-87712-4,描述于 WO2012/051199、USDA-APHIS申请11-202-01p中)、事件MON87769(也称为 MON-87769-7,描述于WO2009102873和USDA-APHIS申请09-183-01p中,或 EE-GM4与以下事件的组合组合:事件MON89788×MON87708(也称为Roundup Ready 2Xtend大豆,
Figure BDA0002911161790001595
)、事件HOS×事件40-3-2(也称为Plenish高油酸大豆×Roundup Ready大豆)、事件EE-GM3×EE-GM2(也称为FG-072xLL55,描述于WO2011063413中)、事件MON 87701×MON 89788 (也称为Intacta RR2 Pro大豆,
Figure BDA0002911161790001596
)、DAS-81419- 2×DAS-44406-6(也称为ConkestaTMEnlist E3TM大豆,
Figure BDA00029111617900015921
Figure BDA00029111617900015922
)、事件DAS-68416-4×事件MON 89788(也称为EnlistTM RoundUp
Figure BDA0002911161790001597
大豆,DAS-68416-4×MON-89788-1)、事件MON 87705×事件MON 89788(也称为 Vistive Gold、
Figure BDA0002911161790001598
)、事件DP305423×事件40-3-2(
Figure BDA0002911161790001599
Figure BDA00029111617900015910
)、事件DP305423×MON87708(
Figure BDA00029111617900015911
Figure BDA00029111617900015912
)、事件DP305423×MON87708×事件MON89788(
Figure BDA00029111617900015913
Figure BDA00029111617900015914
)、事件DP305423×事件MON89788(
Figure BDA00029111617900015915
Figure BDA00029111617900015916
)、事件MON87705×MON87708(
Figure BDA00029111617900015917
Figure BDA00029111617900015918
)、事件MON87705×MON87708×MON89788(
Figure BDA00029111617900015919
Figure BDA00029111617900015920
)、事件MON89788×MON87708×A5547-127(MON-89788-
Figure BDA0002911161790001601
)、事件MON87751×MON87701×MON87708×MON89788(
Figure BDA0002911161790001602
Figure BDA0002911161790001603
)或事件MON87769×事件MON89788(也称为Omega- 3×Genuity Roundup Ready 2Yield大豆,MON-87769-7×MON-89788-1)。这包括用本发明的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或如本文所述的混合物中的一种或多种处理的含有大豆GM事件的所述组合的所述植物或种子。在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI88788、PI 548402、PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
在本发明的一个实施例中,包含事件EE-GM4的植物或种子还包含提供线虫防治的另一转化事件,如产生干扰对线虫进食、发育或繁殖关键的一个或多个线虫基因的双链RNA的转化事件或产生另一杀线虫毒素的转化事件(不同于 Cry14Ab-1)。在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN 抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
本文还提供一种包含事件EE-GM4的大豆植物或其部分,其中代表性包含事件EE-GM4的大豆种子已经以ATCC登录号PTA-123624保藏。本文进一步提供所述植物的种子,其包含所述事件,以及由所述种子产生的大豆产物,其中所述大豆产物包含事件EE-GM4。所述大豆产物可以是或可以包含大豆粕、磨碎的大豆籽粒、大豆片、大豆粉或包含这些经处理的大豆产物中的任一种的产物。确切地说,所述大豆产物包含产生诊断事件EE-GM4或对事件EE-GM4具有特异性的扩增子的核酸,所述扩增子包含SEQ ID No.1或3或SEQ ID No.2或4 中的任一个的序列。本文还提供一种用于产生大豆产物的方法,其包含获得包含事件EE-GM4的大豆种子或籽粒,且由此产生所述大豆产物。本文还提供了一种获得来源于大豆籽粒的加工食品,饲料或工业产品的方法,如大豆油,大豆蛋白,卵磷脂,豆浆,豆腐,人造黄油,生物柴油,生物复合材料,粘合剂,溶剂,润滑剂,清洁剂,泡沫,涂料,油墨,蜡烛,大豆油或含大豆蛋白的食品或(动物)饲料产品,所述方法包含获得包含EE-GM4的籽粒,并产生所述加工食品,饲料或工业产品。在一个实施例中,此过程还可包括以下步骤:获得包含事件 EE-GM4的大豆种子或植物,在田地中生长所述种子或植物,和收获大豆籽粒。任选地,此方法包括在种植之前、在出苗之前、在出苗之后或在包含EE-GM4的植物顶部上施用HPPD抑制剂除草剂,如IFT、苯吡唑草酮或硝磺草酮。在一个实施例中,本发明中包括以上来源于大豆的加工食品、饲料或工业产品,如使用本文所描述的方法产生EE-GM4事件特异性扩增子,或包含SEQ ID No.1、3或 5至SEQ ID No.2、4或6中的任一个的核苷酸序列的所述经处理产品。
本文还提供一种大豆植物,其为以上大豆植物中的任一种的后代,且其包含事件EE-GM4,如包含SEQ ID No.1或3的序列或SEQ ID No.2或4的序列的以上大豆植物中的任一种的后代植物或种子,或包含SEQ ID No.1或3的序列和SEQ ID No.2或4的序列的以上大豆植物中的任一种的后代植物或种子,或包含SEQ ID No.5或SEQ ID No.24的序列或SEQ IDNo.6或SEQ ID No.25的序列的以上大豆植物中的任一种的后代植物或种子,或包含SEQ IDNo.5或SEQ ID No.24的序列和SEQ ID No.6或SEQ ID No.25的序列的以上大豆植物中的任一种的后代植物或种子。在一个实施例中,所述植物或种子用本发明的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或如本文所述的混合物中的一种或多种处理。在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
本文进一步提供一种产生对线虫具有抗性且对异恶唑草酮和/或苯吡唑草酮和/或硝磺草酮除草剂具有耐受性的大豆植物的方法,其包含向所述植物的基因组引入事件EE-GM4,确切地说,通过使不具有事件EE-GM4的第一大豆植物与包含EE-GM4的大豆植物杂交,并且选择对线虫具有抗性且对异恶唑草酮和/ 或苯吡唑草酮和/或硝磺草酮除草剂具有耐受性的后代植物来进行。在一个实施例中,所述方法包含用本发明的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或如本文所述的混合物中的一种或多种处理本发明的植物或种子。在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
本文还提供一种具有可接受的农学特征的对线虫具有抗性且对异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮除草剂具有耐受性的大豆植物,其包含Cry14Ab-1和 HPPD-4蛋白,并且能够产生诊断事件EE-GM4的扩增子。本文还提供可以使用本文所述的特定检测工具获得的如所述的特定分离的扩增子(DNA序列片段),确切地说,在其序列中包括来源于5'或3'T-DNA侧接DNA的DNA片段和通过如本文所定义的转化插入在植物基因组中的T-DNA的扩增子。
本文进一步提供一种防除包含事件EE-GM4的大豆植物的田地或待种植所述大豆植物的田地中的杂草的方法(其中所述植物在处理之后种植在所述田地中),其包含用有效量的HPPD抑制剂除草剂,如基于异恶唑草酮或基于苯吡唑草酮或基于硝磺草酮的除草剂处理所述田地,其中所述植物对所述除草剂具有耐受性。在一个实施例中,所述方法包含用如本文所述的一种或多种化合物和/ 或一种或多种生物防治剂或包含其的混合物中的一种或多种处理大豆植物或种子,或其中生长或打算生长大豆植物或种子的土壤,如其中所述化合物或生物防治剂为杀线虫剂、杀昆虫剂或杀真菌剂。
本文进一步提供DNA,其包含SEQ ID No.5或6的序列或与其基本上类似的序列,和包含所述DNA序列的任何植物、细胞、组织或种子,尤其大豆,如包含EE-GM4的植物、细胞、组织或种子的序列。本文还包括任何大豆植物、细胞、组织或种子,其包含SEQ ID No.5或6的DNA序列(与常规大豆植物、种子、组织或细胞异源或外来),或包含与SEQ ID No.5或24或SEQ ID No.6 或25的序列具有至少99%或99.5%序列一致性的DNA序列。
还描述包含插入T-DNA的嵌合DNA,其中所述插入T-DNA的序列包含 SEQ ID No.11核苷酸1到核苷酸7621或SEQ ID No.23核苷酸1059到核苷酸 8663的序列,或与其具有至少97、98、99、99,5或至少99,9%序列一致性的序列,其侧接5'和3'T-DNA侧接区,其中紧接在所述插入T-DNA上游并且与其邻接的5'T-DNA侧接区的特征在于包含SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227或 SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058的序列的序列,并且其中紧接在所述插入T-DNA下游并且与其邻接的3'T-DNA侧接区的特征在于包含SEQ ID No.6 核苷酸254到核苷酸501的序列或SEQ ID No.25核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列的序列。在一个实施例中,所述插入T-DNA的序列由以下组成:SEQ ID No.11核苷酸17到核苷酸7621或SEQ ID No.23核苷酸1059 到核苷酸8663的序列,或与其具有至少97、98、99、99,5或至少99,9%序列一致性的序列,其侧接5'和3'T-DNA侧接区的一部分,其中紧接在所述插入T- DNA上游并且与其邻接的所述5'T-DNA侧接区的所述部分的特征在于由以下组成的序列:SEQ ID No.5核苷酸1到核苷酸227或SEQ ID No.24核苷酸1到核苷酸1058的序列,或与其具有至少97、98、99、99,5或至少99,9%序列一致性的序列,并且其中紧接在所述插入T-DNA下游并且与其邻接的3'T-DNA侧接区的所述部分的特征在于由以下组成的序列:SEQ IDNo.6核苷酸254到核苷酸501的序列或SEQ ID No.25核苷酸254到核苷酸1339的互补序列的核苷酸序列,或与其具有至少97、98、99、99,5或至少99,9%序列一致性的序列。
嵌合DNA是指DNA序列,包括自然界中不一起发现的调节和编码序列。因此,嵌合DNA可包含来源于不同来源或以不同于自然界中发现的方式布置的彼此邻近的DNA区。嵌合DNA的实例为SEQ ID No.5或6的序列。
本文还提供一种转基因大豆植物、植物细胞、组织或种子,其在其基因组中包含事件EE-GM4,其特征在于:包含基本上类似于SEQ ID No.1或3的核苷酸序列的核酸分子和包含基本上类似于SEQ ID No.2或4的核苷酸序列,或所述序列的互补序列的核酸分子;以及大豆植物、植物细胞、组织或种子,其在其基因组中包含事件EE-GM4,其特征在于:包含基本上类似于SEQ ID No.5或 24和SEQ ID No.6或25的核苷酸序列或所述序列的互补序列的核酸分子。
本文中甚至进一步提供一种大豆植物、细胞、组织或种子,其包含EE-GM4,其特征在于:在其细胞的基因组中包含与SEQ ID No.1、3、5或24中的任一种具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少 98%、至少99%或100%序列一致性的核酸序列,以及与SEQ ID No.2、4、6或 25中的任一种具有至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性的核酸序列或所述序列的互补序列。
在一个实施例中,用本发明的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或如本文所述的混合物/组合中的一种或多种处理包含EE-GM4的以上植物或种子。
如本文所用,术语“异恶唑草酮”是指除草剂异恶唑草酮[即(5-环丙基-4-异恶唑基)[2-(甲磺酰基)-4-(三氟甲基)苯基]甲酮]、其活性代谢物、二酮腈 (diketonitrile)以及包含所述化合物的任何混合物或溶液。适用于应用在本发明的事件上的HPPD抑制除草剂为二酮腈,例如2-氰基-3-环丙基-1-(2-甲基磺酰基 -4-三氟甲基苯基)-丙烷-1,3-二酮和2-氰基-1-[4-(甲基磺酰基)-2-三氟甲基苯基]-3- (1-甲基环丙基)丙烷-1,3-二酮;其它异恶唑;和吡唑林(pyrazolinate),例如苯吡唑草酮[即[3-(4,5-二氢-3-异恶唑基)-2-甲基-4-(甲基磺酰基)苯基](5-羟基-1-甲基- 1H-吡唑-4-基)甲酮],和磺酰草吡唑(pyrasulfotole)[(5-羟基-1,3-二甲基吡唑-4- 基(2-甲磺酰基-4-三氟甲基苯基)甲酮];或硝磺草酮[2-[4-(甲基磺酰基)-2-硝基苯甲酰]环己烷-1,3-二酮];或2-氯-3-(甲基硫烷基)-N-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺];或2-甲基-N-(5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-基)-3-(甲基磺酰基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺;或盐酸苯偶氮吡胺(pyrazofen)[2-[4-(2,4-二氯苯甲酰)-1,3-二甲基吡唑-5-基氧基]苯乙酮]。
在本发明的一个实施例中,在播种大豆之前,待种植含有EE-GM4事件的大豆植物的田地可以用HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮('IFT')、苯吡唑草酮或硝磺草酮处理,或用HPPD抑制剂除草剂和草甘膦两者处理,其清除田地中的由HPPD抑制剂和/或草甘膦杀死的杂草,允许免耕(no-till)操作,随后在所述相同预处理的田地中种植或播种大豆(使用HPPD抑制剂除草剂的燃尽 (burn-down)应用)。IFT的残余活性还将保护出苗且生长的大豆植物以免在早期生长阶段与杂草竞争。一旦大豆植物具有一定大小,并且杂草倾向于重新出现,HPPD抑制剂或HPPD抑制剂与选择性(常规)大豆除草剂的混合物,或 HPPD抑制剂与在大豆中非选择性的除草剂(例如草甘膦或草铵膦)(但植物含有对其的耐受性基因/基因座,使得所述植物对所述除草剂具有耐受性)的混合物可以作为出苗后除草剂在植物顶上施用。
在本发明的另一实施例中,可以在大豆植物出苗之前但在播种种子后用 HPPD抑制剂除草剂(如IFT,苯吡唑草酮或硝磺草酮)处理播种含有EE-GM4 事件的种子的田地(在播种之前,可以使用其它方式,包括常规耕耘操作,如翻犁,凿犁或种床准备工作使田间无杂草),其中的残留活性将使田地中没有被除草剂杀死的杂草,从而使出苗且生长的大豆植物没有杂草竞争(HPPD抑制剂除草剂的出苗前施用)。一旦大豆植物具有一定大小,并且杂草倾向于重新出现, HPPD抑制剂或HPPD抑制剂-大豆选择性(常规)除草剂混合物,或HPPD抑制剂与在大豆中非选择性的除草剂(例如草甘膦或草铵膦)(但植物含有对其的耐受性基因/基因座,使得其对所述除草剂具有耐受性)的混合物可以作为出苗后除草剂在植物顶上施用。在本发明的一个实施例中,提供一种用于防除杂草的方法,其包含在田地中播种含EE-GM4的大豆种子,并且在植物从所述种子出苗之前,但在播种种子之后,用HPPD抑制剂除草剂处理所述田地。
在本发明的另一实施例中,含有EE-GM4事件的植物可以用HPPD抑制剂除草剂,如IFT、苯吡唑草酮或硝磺草酮,在已经从所播种的种子出苗的大豆植物的顶上处理,其清除田地中的由HPPD抑制剂杀死的杂草,所述施用可以与以下一起(例如,在喷雾槽混合物中)、在以下之前或在以下之后进行:使用选择性(常规)大豆出苗后除草剂或在大豆中非选择性的除草剂(例如草甘膦或草铵膦)(但植物含有对其的耐受性基因/基因座,使得所述植物对所述除草剂具有耐受性),在植物顶上的处理(HPPD抑制剂除草剂的出苗后施用(具有或不具有所述大豆选择性或非选择性除草剂))。
在一个实施例中,涉及HPPD抑制剂除草剂的使用的所述方法还包含用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或包含其的混合物中的一种或多种处理大豆植物或种子,或其中生长或打算生长大豆植物或种子的土壤,如其中所述化合物或生物防治剂为杀线虫剂、杀昆虫剂或杀真菌剂。在另一实施例中,所述植物或种子还包含一种或多种原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332或PI 437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种。
此外,根据本发明,可以用任何大豆杀昆虫剂、除草剂或杀真菌剂处理具有 EE-GM4的大豆植物(其还可以含有如本文所述的另一除草剂耐受性大豆事件/ 性状),或可以用其涂布具有EE-GM4的大豆种子。在一个实施例中,所述植物或种子还含有来自表1的抗性源的一种或多种大豆SCN抗性基因,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332或PI437654的SCN抗性基因或基因座中的一种或多种,或包含选自由以下组成的群组的大豆SCN抗性基因座或基因中的一种或多种:rhg1、rhg1-b、rhg2、rhg3、Rhg4、Rhg5、qSCN11、cqSCN-003、 cqSCN-005、cqSCN-006和cqSCN-007。
下文描述如本文中所提及的本发明的化合物(如农药或除草剂)、生物防治剂或植物生长调节剂,以及处理的配制物、混合物和类型。在一个实施例中,本发明的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或包含其的混合物用作本发明的种子的种子处理剂,如下所述。
杀昆虫剂/杀螨剂/杀线虫剂
本文中通过其通用名称指定的活性成分是已知的并且描述于例如《农药手册(ThePesticide Manual)》(第17版,英国作物保护委员会(British Crop ProtectionCouncil),更新版本见万维网地址:bcpc.org/product/bcpc-online-pesticide-manual-latest-version),或可在因特网上搜索(例如,见万维网地址: alanwood.net/pesticides)。所述分类是基于在提交本专利申请当时的IRAC行动模式分类方案(IRACMode of Action Classification Scheme)。
在一个实施例中,本发明中使用的杀昆虫剂/杀螨剂/杀线虫剂是来自以下群组IAN1到IAN30:
IAN1:乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂,优选地氨基甲酸酯,其选自棉铃威、涕灭威、恶虫威(bendiocarb)、丙硫克百威(benfuracarb)、丁酮威(butocarboxim)、丁酮砜威(butoxycarboxim)、甲萘威(carbaryl)、虫螨威、丁硫克百威、乙硫苯威(ethiofencarb)、仲丁威(fenobucarb)、伐虫脒(formetanate)、呋线威 (furathiocarb)、叶蝉散(isoprocarb)、甲硫威、灭多虫(methomyl)、速灭威 (metolcarb)、杀线威、抗蚜威(pirimicarb)、残杀威(propoxur)、硫双灭多威、久效威(thiofanox)、唑蚜威(triazamate)、混灭威(trimethacarb)、XMC和灭杀威(xylylcarb);或有机磷酸酯,其选自欧杀松(acephate)、甲基吡啶磷 (azamethiphos)、乙基谷硫磷(azinphos-ethyl)、甲基谷硫磷(azinphos-methyl)、硫线磷、氯氧磷(chlorethoxyfos)、毒虫畏(chlorfenvinphos)、氯甲磷 (chlormephos)、甲基毒死蜱(chlorpyrifos-methyl)、蝇毒磷(coumaphos)、杀螟腈(cyanophos)、甲基内吸磷(demeton-S-methyl)、二嗪农(diazinon)、敌敌畏(dichlorvos)/DDVP、百治磷(dicrotophos)、乐果、甲基毒虫畏(dimethylvinphos)、乙拌磷(disulfoton)、EPN、乙硫磷(ethion)、灭线磷、伐灭磷(famphur)、克线磷(fenamiphos)、杀螟硫磷(fenitrothion)、倍硫磷(fenthion)、噻唑磷、庚烯磷(heptenophos)、新烟磷(imicyafos)、异柳磷(isofenphos)、O-(甲氧基氨基硫代磷酰基)水杨酸异丙基酯、异恶唑磷(isoxathion)、马拉松(malathion)、灭蚜磷(mecarbam)、多灭磷(methamidophos)、杀扑磷(methidathion)、速灭磷 (mevinphos)、久效磷(monocrotophos)、二溴磷(naled)、氧乐果(omethoate)、甲基氧代内吸磷(oxydemeton-methyl)、甲基对硫磷(parathion-methyl)、稻丰散 (phenthoate)、甲拌磷(phorate)、伏杀磷(phosalone)、亚胺硫磷(phosmet)、磷胺(phosphamidon)、辛硫磷(phoxim)、甲基嘧啶磷(pirimiphos-methyl)、丙溴磷(profenofos)、胺丙畏(propetamphos)、丙硫磷(prothiofos)、吡唑硫磷 (pyraclofos)、哒嗪硫磷(pyridaphenthion)、喹恶磷(quinalphos)、治螟磷(sulfotep)、丁基嘧啶磷(tebupirimfos)、双硫磷(temephos)、特丁硫磷、四氯乙烯磷 (tetrachlorvinphos)、甲基乙拌磷(thiometon)、三唑磷(triazophos)、敌百虫 (triclorfon)和蚜灭多(vamidothion)。
IAN2:GABA门控的氯通道阻断剂,优选地环二烯-有机氯,其选自氯丹和硫丹或苯基吡唑(fiproles),例如乙虫清(ethiprole)和芬普尼。
IAN3:钠通道调节剂,优选地拟除虫菊酯,其选自氟丙菊酯(acrinathrin)、丙烯菊酯(allethrin)、d-顺反丙烯菊酯(d-cis-trans allethrin)、d-反丙烯菊酯(d- transallethrin)、联苯菊酯(bifenthrin)、生物丙烯菊酯(bioallethrin)、s-环戊烯基生物丙烯菊酯异构体(bioallethrin s-cyclopentenyl isomer)、生物苄呋菊脂 (bioresmethrin)、乙氰菊脂(cycloprothrin)、氟氯氰菊酯、β-氟氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯(cyhalothrin)、λ-三氟氯氰菊酯、γ-三氟氯氰菊酯、氯氰菊酯 (cypermethrin)、α-氯氰菊酯、β-氯氰菊酯、θ-氯氰菊酯、ζ-氯氰菊酯、苯醚氰菊酯(cyphenothrin)[(1R)-反异构体]、溴氰菊酯(deltamethrin)、烯炔菊酯 (empenthrin)[(EZ)-(1R)-异构体]、高氰戊菊酯(esfenvalerate)、醚菊酯 (etofenprox)、甲氰菊酯(fenpropathrin)、氰戊菊酯(fenvalerate)、氟氰戊菊酯 (flucythrinate)、氟氯苯菊酯(flumethrin)、氟胺氰菊酯(tau-fluvalinate)、苄螨醚 (halfenprox)、炔咪菊酯(imiprothrin)、噻嗯菊酯(kadethrin)、莫氟菊酯 (momfluorothrin)、苄氯菊酯(permethrin)、苯醚菊酯(phenothrin)[(1R)-反异构体]、炔丙菊酯(prallethrin)、除虫菊酯(pyrethrins)(除虫菊(pyrethrum))、苄呋菊脂(resmethrin)、氟硅菊酯(silafluofen)、七氟菊酯(tefluthrin)、胺菊酯 (tetramethrin)、胺菊酯[(1R)-异构体)]、四溴菊酯(tralomethrin)和四氟苯菊酯(transfluthrin)或DDT或甲氧氯(methoxychlor)。
IAN4:烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)竞争性调节剂,优选地新烟碱类似物,其选自啶虫脒(acetamiprid)、噻虫胺、呋虫胺(dinotefuran)、吡虫啉、烯啶虫胺(nitenpyram)、噻虫啉(thiacloprid)和噻虫嗪或烟碱(nicotine)或氟啶虫胺腈(sulfoxaflor)或氟吡呋喃酮。
IAN5:烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)别构调节剂,优选地刺糖菌素,其选自斯平托兰(spinetoram)和赐诺杀(spinosad)。
IAN6:谷氨酸门控的氯通道(GluCl)别构调节剂,优选地阿维菌素/米尔倍霉素,其选自阿维菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(emamectin benzoate)、林皮没丁(lepimectin)和密灭汀(milbemectin)。
IAN7:保幼激素模拟物,优选地保幼激素类似物,其选自烯虫乙酯 (hydroprene)、烯虫炔酯(kinoprene)和烯虫酯(methoprene)或苯氧威(fenoxycarb) 或百利普芬(pyriproxyfen)。
IAN8:杂项非特异性(多位点)抑制剂,优选地卤代烃,其选自溴甲烷和其它卤代烃或氯化苦(chloropicrine)或硫酰氟或硼砂或吐酒石(tartar emetic) 或选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂。
IAN9:弦音器官TRPV通道调节剂,其选自吡蚜酮(pymetrozine)、双丙环虫酯(afidopyropen)和毕瑞夫(pyrifluquinazone)。
IAN10:螨生长抑制剂,其选自克芬螨(clofentezine)、噻螨酮(hexythiazox)、氟螨嗪(diflovidazin)和依杀螨(etoxazole)。
IAN11:昆虫肠道膜的微生物干扰剂,其选自苏云金芽孢杆菌以色列(israelensis)亚种、球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus)、苏云金芽孢杆菌亚莎华(aizawai)亚种、苏云金芽孢杆菌库斯塔克(kurstaki)亚种、苏云金芽孢杆菌拟步行(tenebrionis)亚种;和苏云金芽孢杆菌植物蛋白,其选自Cry1Ab、Cry1Ac、 Cry1Fa、Cry1A.105、Cry2Ab、Vip3A、mCry3A、Cry3Ab、Cry3Bb和 Cry34Ab1/35Ab1。
IAN12:线粒体ATP合成酶的抑制剂,优选地ATP干扰剂,其选自丁醚脲;或有机锡化合物,其选自三唑锡(azocyclotin)、锡螨丹(cyhexatin)和苯丁锡 (fenbutatin oxide)或克螨特(propargite)或四氯杀螨砜(tetradifon)。
IAN13:通过破坏质子梯度的氧化磷酸化去偶合剂,其选自克凡派(chlorfenapyr)、DNOC和氟虫胺(sulfluramid)。
IAN14:烟碱乙酰胆碱受体通道阻断剂,其选自杀虫磺(bensultap)、培丹盐酸盐(cartap hydrochloride)、杀虫环(thiocylam)和杀虫双(thiosultap-sodium)。
IAN15:0型甲壳质生物合成抑制剂,选自双三氟虫脲(bistrifluron)、克福隆(chlorfluazuron)、除虫脲、氟环脲(flucycloxuron)、氟芬隆(flufenoxuron)、六伏隆(hexaflumuron)、禄芬隆(lufenuron)、诺伐隆(novaluron)、多氟脲 (noviflumuron)、氟苯脲(teflubenzuron)和三福隆(triflumuron)。
IAN16:1型甲壳质生物合成抑制剂,其选自布芬净(buprofezin)。
IAN17:蜕皮干扰剂(确切地说,用于双翅目(Diptera),即,双翅目昆虫(dipterans)),其选自赛灭净(cyromazine)。
IAN18:蜕皮激素受体激动剂,其选自环虫酰肼(chromafenozide)、氯虫酰肼(halofenozide)、甲氧虫酰肼(methoxyfenozide)和虫酰肼(tebufenozide)。
IAN19:章胺受体激动剂,其选自双甲脒(amitraz)。
IAN20:线粒体复合物III电子传递抑制剂,其选自伏蚁腙 (hydramethylnone)、亚醌螨(acequinocyl)和嘧螨酯(fluacrypyrim)。
IAN21:线粒体复合物I电子传递抑制剂,优选地METI杀螨剂,其选自芬杀螨(fenazaquin)、芬普螨(fenpyroximate)、嘧螨醚(pyrimidifen)、哒螨灵 (pyridaben)、吡螨胺(tebufenpyrad)和唑虫酰胺(tolfenpyrad)或鱼藤酮(rotenone) (Derris)。
IAN22:电压依赖性钠通道阻断剂,其选自因得克(indoxacarb)和氰氟虫腙(metaflumizone)。
IAN23:乙酰基CoA羧化酶抑制剂,优选地季酮酸和特特拉姆酸(tetramic acid)衍生物,其选自螺螨酯(spirodiclofen)、螺甲螨酯(spiromesifen)和螺虫乙酯(spirotetramat)。
IAN24:线粒体复合物IV电子传递抑制剂,优选地膦,其选自磷化铝、磷化钙、磷化氢和磷化锌;或氰化物,其选自氰化钙、氰化钾和氰化钠。
IAN25:线粒体复合物II电子传递抑制剂,优选地β-酮腈衍生物,其选自腈吡螨酯(cyenopyrafen)和丁氟螨酯(cyflumetofen)和羧酰苯胺(carboxanilides),其选自派氟布麦(pyflubumide)。
IAN28:利阿诺定(Ryanodine)受体调节剂,优选地二酰胺,其选自氯虫苯甲酰胺(chlorantraniliprole)、氰强尼普罗(cyantraniliprole)、四唑虫酰胺(tetranaliiprole)和氟虫双酰胺(flubendiamide)。
IAN29:弦音器官调节剂(具有不定目标位点),其选自氟尼胺(flonicamid)。
IAN30:另外活性化合物,其选自由以下组成的群组:双丙环虫酯、阿福兰纳(Afoxolaner)、印楝素、苯氯噻(Benclothiaz)、苯螨特(Benzoximate)、毕芬载(Bifenazate)、布夫兰尼(Broflanilide)、溴螨酯(Bromopropylate)、灭螨猛(Chinomethionat)、氯炔丙菊酯(Chloroprallethrin)、冰晶石(Cryolite)、环溴虫酰胺(Cyclaniliprole)、环氧虫啶(Cycloxaprid)、氯氟氰虫酰胺(Cyhalodiamide)、二氯梅佐它(Dicloromezotiaz)、三氯杀螨醇(Dicofol)、ε-甲氧苄氟菊酯(epsilon- Metofluthrin)、ε-莫氟菊酯(epsilon-Momfluthrin)、氟托奎(Flometoquin)、三氟咪啶酰胺、联氟砜、嘧虫胺(Flufenerim)、氟菌螨酯(Flufenoxystrobin)、丁虫腈(Flufiprole)、氟雷六丰(Fluhexafon)、氟吡菌酰胺(包括描述于WO2018046381 中的配制物,所述文献以引用的方式并入本文中)、氟雷拉纳(Fluralaner)、氟雷西胺(Fluxametamide)、呋喃虫酰肼(Fufenozide)、戊吡虫胍(Guadipyr)、七氟甲醚菊酯(Heptafluthrin)、氯噻啉(Imidaclothiz)、异菌脲(Iprodione)、κ-联苯菊酯、κ-七氟菊酯、洛替拉纳(Lotilaner)、氯氟醚菊酯(Meperfluthrin)、哌虫啶 (Paichongding)、啶虫丙醚(Pyridalyl)、吡氟喹腙(Pyrifluquinazon)、嘧螨胺 (Pyriminostrobin)、螺螨双酯(Spirobudiclofen)、四氟醚菊酯(Tetramethylfluthrin)、氟氰虫酰胺、四氯虫酰胺(Tetrachlorantraniliprole)、泰格拉纳(Tigolaner)、噻恶嗪芬(NemastrikeTM)、硫氟肟醚(Thiofluoximate)、三氟苯嘧啶(Triflumezopyrim)和碘甲烷(iodomethane);另外更多的基于坚强芽孢杆菌(I- 1582,BioNeem,Votivo)的制剂,以及以下化合物:1-{2-氟-4-甲基-5-[(2,2,2-三氟乙基)亚硫酰基]苯基}-3-(三氟甲基)-1H-1,2,4-三唑-5-胺(从WO2006/043635已知)(CAS 885026-50-6)、{1'-[(2E)-3-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-基]-5-氟螺[吲哚-3,4'-哌啶]-1(2H)-基}(2-氯吡啶-4-基)甲酮(从WO2003/106457已知)(CAS 637360-23- 7)、2-氯-N-[2-{1-[(2E)-3-(4-氯苯基)丙-2-烯-1-基]哌啶-4-基}-4-(三氟甲基)苯基] 异烟酰胺(从WO2006/003494已知)(CAS 872999-66-1)、3-(4-氯-2,6-二甲基苯基)-4-羟基-8-甲氧基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-2-酮(从WO 2010052161已知) (CAS 1225292-17-0)、碳酸3-(4-氯-2,6-二甲基苯基)-8-甲氧基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-4-基乙酯(从EP2647626已知)(CAS 1440516-42-6)、4-(丁-2-炔 -1-基氧基)-6-(3,5-二甲基哌啶-1-基)-5-氟嘧啶(从WO2004/099160已知)(CAS 792914-58-0)、PF1364(从JP2010/018586已知)(CAS 1204776-60-2)、N-[(2E)- 1-[(6-氯吡啶-3-基)甲基]吡啶-2(1H)-亚基]-2,2,2-三氟乙酰胺(从WO2012/029672 已知)(CAS 1363400-41-2)、(3E)-3-[1-[(6-氯-3-吡啶基)甲基]-2-吡啶亚基]-1,1,1- 三氟-丙-2-酮(从WO2013/144213已知)(CAS 1461743-15-6)、N-[3-(苯甲基氨甲酰基)-4-氯苯基]-1-甲基-3-(五氟乙基)-4-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(从WO2010/051926已知)(CAS 1226889-14-0)、5-溴-4-氯-N-[4-氯-2-甲基-6-(甲基氨甲酰基)苯基]-2-(3-氯-2-吡啶基)吡唑-3-甲酰胺(从CN103232431已知)(CAS 1449220-44-3)、4-[5-(3,5-二氯苯基)-4,5-二氢-5-(三氟甲基)-3-异恶唑基]-2-甲基- N-(顺1-氧化-3-硫杂环丁基)-苯甲酰胺、4-[5-(3,5-二氯苯基)-4,5-二氢-5-(三氟甲基)-3-异恶唑基]-2-甲基-N-(反1-氧化-3-硫杂环丁基)-苯甲酰胺和4-[(5S)-5-(3,5- 二氯苯基)-4,5-二氢-5-(三氟甲基)-3-异恶唑基]-2-甲基-N-(顺1-氧化-3-硫杂环丁基)苯甲酰胺(从WO 2013/050317 A1已知)(CAS 1332628-83-7)、N-[3-氯-1-(3- 吡啶基)-1H-吡唑-4-基]-N-乙基-3-[(3,3,3-三氟丙基)亚磺酰基]-丙酰胺、(+)-N-[3- 氯-1-(3-吡啶基)-1H-吡唑-4-基]-N-乙基-3-[(3,3,3-三氟丙基)亚磺酰基]-丙酰胺和 (-)-N-[3-氯-1-(3-吡啶基)-1H-吡唑-4-基]-N-乙基-3-[(3,3,3-三氟丙基)亚磺酰基]-丙酰胺(从WO 2013/162715 A2、WO2013/162716 A2、US 2014/0213448 A1已知) (CAS 1477923-37-7)、5-[[(2E)-3-氯-2-丙烯-1-基]氨基]-1-[2,6-二氯-4-(三氟甲基) 苯基]-4-[(三氟甲基)亚磺酰基]-1H-吡唑-3-腈(从CN 101337937 A已知)(CAS 1105672-77-2)、3-溴-N-[4-氯-2-甲基-6-[(甲基氨基)硫酮基甲基]苯基]-1-(3-氯-2- 吡啶基)-1H-吡唑-5-甲酰胺、(硫代苯甲酰胺(Liudaibenjiaxuanan),从CN 103109816 A已知)(CAS 1232543-85-9);N-[4-氯-2-[[(1,1-二甲基乙基)氨基]羰基]-6-甲基苯基]-1-(3-氯-2-吡啶基)-3-(氟甲氧基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(从WO 2012/034403 A1已知)(CAS 1268277-22-0)、N-[2-(5-氨基-1,3,4-噻二唑-2-基)-4- 氯-6-甲基苯基]-3-溴-1-(3-氯-2-吡啶基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(从WO 2011/085575 A1已知)(CAS 1233882-22-8)、4-[3-[2,6-二氯-4-[(3,3-二氯-2-丙烯-1-基)氧基]苯氧基]丙氧基]-2-甲氧基-6-(三氟甲基)-嘧啶(从CN 101337940 A已知)(CAS1108184-52-6);(2E)-和2(Z)-2-[2-(4-氰基苯基)-1-[3-(三氟甲基)苯基]亚乙基]-N-[4-(二氟甲氧基)苯基]-肼甲酰胺(从CN 101715774 A已知)(CAS 1232543-85- 9);3-(2,2-二氯乙烯基)-2,2-二甲基-4-(1H-苯并咪唑-2-基)苯基-环丙基甲酸酯(从 CN103524422 A已知)(CAS 1542271-46-4);(4aS)-7-氯-2,5-二氢-2-[[(甲氧基羰基)[4-[(三氟甲基)硫代]苯基]氨基]羰基]-茚并[1,2-e][1,3,4]恶二嗪-4a(3H)-甲酸甲基酯(从CN 102391261 A已知)(CAS 1370358-69-2);6-脱氧-3-O-乙基-2,4-二 -O-甲基-、1-[N-[4-[1-[4-(1,1,2,2,2-五氟乙氧基)苯基]-1H-1,2,4-三唑-3-基]苯基]氨基甲酸酯]-α-L-甘露吡喃糖(从US 2014/0275503 A1已知)(CAS 1181213-14-8); 8-(2-环丙基甲氧基-4-三氟甲基-苯氧基)-3-(6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-3-氮杂-双环 [3.2.1]辛烷(CAS1253850-56-4)、(8-反)-8-(2-环丙基甲氧基-4-三氟甲基-苯氧基)- 3-(6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-3-氮杂-双环[3.2.1]辛烷(CAS 933798-27-7)、(8-顺)-8- (2-环丙基甲氧基-4-三氟甲基-苯氧基)-3-(6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-3-氮杂-双环 [3.2.1]辛烷(从WO2007040280 A1、WO 2007040282 A1已知)(CAS 934001- 66-8)、N-[3-氯-1-(3-吡啶基)-1H-吡唑-4-基]-N-乙基-3-[(3,3,3-三氟丙基)硫代]-丙酰胺(从WO 2015/058021 A1、WO2015/058028 A1已知)(CAS 1477919-27-9) 和N-[4-(氨基硫酮基甲基)-2-甲基-6-[(甲基氨基)羰基]苯基]-3-溴-1-(3-氯-2-吡啶基)-1H-吡唑-5-甲酰胺(从CN 103265527 A已知)(CAS 1452877-50-7)、5-(1,3- 二恶烷-2-基)-4-[[4-(三氟甲基)苯基]甲氧基]-嘧啶(从WO 2013/115391 A1已知) (CAS 1449021-97-9)、3-(4-氯-2,6-二甲基苯基)-4-羟基-8-甲氧基-1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-2-酮(从WO 2010/066780 A1、WO 2011/151146A1已知)(CAS 1229023-34-0)、3-(4-氯-2,6-二甲基苯基)-8-甲氧基-1-甲基-1,8-二氮杂螺[4.5]癸烷 -2,4-二酮(从WO 2014/187846 A1已知)(CAS 1638765-58-8)、3-(4-氯-2,6-二甲基苯基)-8-甲氧基-1-甲基-2-氧代-1,8-二氮杂螺[4.5]癸-3-烯-4-基-碳酸乙酯(从WO 2010/066780 A1、WO 2011151146 A1已知)(CAS 1229023-00-0)、N-[1-[(6- 氯-3-吡啶基)甲基]-2(1H)-吡啶亚基]-2,2,2-三氟-乙酰胺(从DE 3639877 A1、WO 2012029672 A1已知)(CAS 1363400-41-2)、[N(E)]-N-[1-[(6-氯-3-吡啶基)甲基]- 2(1H)-吡啶亚基]-2,2,2-三氟-乙酰胺(从WO 2016005276 A1已知)(CAS 1689566- 03-7)、[N(Z)]-N-[1-[(6-氯-3-吡啶基)甲基]-2(1H)-吡啶亚基]-2,2,2-三氟-乙酰胺、 (CAS 1702305-40-5)、3-内-3-[2-丙氧基-4-(三氟甲基)苯氧基]-9-[[5-(三氟甲基)-2- 吡啶基]氧基]-9-氮杂双环[3.3.1]壬烷(从WO 2011/105506 A1、WO 2016/133011 A1已知)(CAS 1332838-17-1),描述于WO2018087036或WO2015169776中的化合物、氟派敏(flupyrimin)或其混合物(参见EP0268915、WO2012/029672、 WO2013/129688)、螺派同(Spiropidion)、本派莫杉(Benzpyrimoxan)、派氟酰胺(Pyrifluramide)、描述于美国专利9,433,218或9,701,673(以引用的方式并入本文中)中的杀线虫剂和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺(描述于WO2014/053450中)。
还包括哒嗪酰胺作为本发明中所用的杀昆虫剂/杀螨剂/杀线虫剂,包括但不限于1-异丙基-N,5-二甲基-N-哒嗪-4-基-吡唑-4-甲酰胺;1-(1,2-二甲基丙基)-N-乙基-5-甲基-N-哒嗪-4-基-吡唑-4-甲酰胺;N,5-二甲基-N-哒嗪-4-基-1-(2,2,2-三氟-1- 甲基-乙基)吡唑-4-甲酰胺;1-[1-(1-氰基环丙基)乙基]-N-乙基-5-甲基-N-哒嗪-4-基 -吡唑-4-甲酰胺;N-乙基-1-(2-氟-1-甲基-丙基)-5-甲基-N-哒嗪-4-基-吡唑-4-甲酰胺;1-(1,2-二甲基丙基)-N,5-二甲基-N-哒嗪-4-基-吡唑-4-甲酰胺;1-[1-(1-氰基环丙基)乙基]-N,5-二甲基-N-哒嗪-4-基-吡唑-4-甲酰胺;N-甲基-1-(2-氟-1-甲基-丙基]-5-甲基-N-哒嗪-4-基-吡唑-4-甲酰胺;1-(4,4-二氟环己基)-N-乙基-5-甲基-N-哒嗪-4-基-吡唑-4-甲酰胺;或1-(4,4-二氟环己基)-N,5-二甲基-N-哒嗪-4-基-吡唑-4- 甲酰胺。在一些实施例中,本发明中使用的哒嗪酰胺为1-(1,2-二甲基丙基)-N-乙基-5-甲基-N-哒嗪-4-基-吡唑-4-甲酰胺。
还包括中离子化合物(mesoionic)作为本发明中所用的杀昆虫剂/杀螨剂/杀线虫剂,包括但不限于(3R)-3-(2-氯噻唑-5-基)-8-甲基-5-氧代-6-苯基-2,3-二氢噻唑并[3,2-a]嘧啶-8-鎓-7-酸盐;(3S)-3-(6-氯-3-吡啶基)-8-甲基-5-氧代-6-苯基-2,3- 二氢噻唑并[3,2-a]嘧啶-8-鎓-7-酸盐;(3S)-8-甲基-5-氧代-6-苯基-3-嘧啶-5-基-2,3- 二氢噻唑并[3,2-a]嘧啶-8-鎓-7-酸盐;(3R)-3-(2-氯噻唑-5-基)-8-甲基-5-氧代-6-[3- (三氟甲基)苯基]-2,3-二氢噻唑并[3,2-a]嘧啶-8-鎓-7-酸盐;(3R)-3-(2-氯噻唑-5- 基)-6-(3,5-二氯苯基)-8-甲基-5-氧代-2,3-二氢噻唑并[3,2-a]嘧啶-8-鎓-7-酸盐; (3R)-3-(2-氯噻唑-5-基)-8-乙基-5-氧代-6-苯基-2,3-二氢噻唑并[3,2-a]嘧啶-8-鎓-7- 酸盐。在一些实施例中,本发明中使用的中离子化合物为(3R)-3-(2-氯噻唑-5-基)- 8-甲基-5-氧代-6-苯基-2,3-二氢噻唑并[3,2-a]嘧啶-8-鎓-7-酸盐。
本发明中所使用的其它杀线虫化合物包括三氟乙基亚砜(从Kumiai/拜耳已知);N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-(三氟甲基)苯甲酰胺(化合物(1a或 Ia;描述于WO15144683);:N-[1-(3,5-二氟吡啶-2-基)-1H-吡唑-3-基]-2-(三氟甲基)苯甲酰胺(化合物1b或Ib);N-[2-(2,6-二氟苯基)-2H-1,2,3-三唑-4-基]-2-(三氟甲基)苯甲酰胺(化合物1c或Ic)。
如本文所描述的适用于本发明的植物或种子上或与本发明的植物或种子一起使用的作物保护中的杀昆虫剂/杀昆虫试剂能够防治昆虫。如本文所用,术语“防治昆虫”或“昆虫防治”意指杀死昆虫(任何阶段,优选地至少幼虫阶段) 或阻止或阻碍其发育、其繁殖或其生长或防止或阻碍其穿透到植物组织中或其在植物组织上吸吮/进食。
如本文所描述的适用于本发明的植物或种子上或与本发明的植物或种子一起使用的作物保护中的杀线虫剂/杀线虫试剂能够防治线虫。如本文所用,术语“防治线虫”或“线虫防治”意指杀死线虫或阻止或阻碍其发育、其繁殖或其生长或防止或阻碍其穿透到植物组织中或其在植物组织上吸吮/进食。因此,如本文所用,“杀线虫剂”或“杀线虫试剂”为可杀死线虫(如植物病原性线虫)或可阻止或阻碍其发育、其繁殖或其生长或可防止或阻碍其穿透到植物组织中或其在植物组织上吸吮/进食的试剂。
杀线虫化合物或生物防治剂的功效通过以下方式确定:比较死亡数、虫瘿形成、孢囊形成、每体积土壤的线虫密度、每根部的线虫密度、每土壤体积的线虫卵数目、经处理的植物或植物部分或经处理的土壤与未经处理的植物或植物部分或未经处理的土壤之间的线虫流动性。在一个实施例中,与未经处理的植物、植物部分或未经处理的土壤相比,所实现的降低为25%到50%,在另一实施例中,与未经处理的植物、植物部分或未经处理的土壤相比,降低为51%到79%,并且在又一实施例中,以80%到100%的降低来指完全杀死或完全阻止线虫的发育和生长。如本文所述的对线虫的防治还包含对线虫的增殖(孢囊和/或虫卵的产生)的控制。杀线虫化合物和/或生物防治剂还可以用于使本发明的大豆植物保持更健康,并且其可以针对线虫的防治来治愈性地、防止性地或系统性地采用。
使用线虫防治化合物或生物防治剂可以进一步增加本发明的植物的产率。
如本文所提及的防治线虫的化合物或生物防治剂可以用于防治植物线虫,如居农野外垫刃线虫(Aglenchus agricola)、小麦粒瘿线虫(Anguina tritici)、花生滑刃线虫(Aphelenchoides arachidis)、草莓滑刃线虫(Aphelenchoides fragaria) 和茎叶内寄生虫滑刃线虫属种(stem and leaf endoparasites Aphelenchoides spp.)、细长针刺线虫(Belonolaimus gracilis)、长尾针刺线虫(Belonolaimus longicaudatus)、诺顿针刺线虫(Belonolaimus nortoni)、椰伞滑刃线虫 (Bursaphelenchus cocophilus)、荒漠伞滑刃线虫(Bursaphelenchus eremus)、松材伞滑刃线虫(Bursaphelenchus xylophilus)和伞滑刃线虫属种(Bursaphelenchus spp.)、疫病坏死线虫(Cacopaurus pestis)、弯曲小环线虫(Criconemella curvata)、刻线小环线虫(Criconemella onoensis)、装饰小环线虫(Criconemella ornata)、畸形小环线虫(Criconemella rusium)、异盘小环线虫(Criconemella xenoplax) (=异盘中环线虫(Mesocriconema xenoplax))和小环线虫属种(Criconemella spp.)、蕨轮线虫(Criconemoides ferniae)、欧诺森轮线虫(Criconemoides onoense)、饰妆轮线虫(Criconemoides ornatum)和轮线虫属种(Criconemoides spp.)、破坏茎线虫(Ditylenchus destructor)、鳞球茎线虫(Ditylenchus dipsaci)、食菌茎线虫 (Ditylenchus myceliophagus)以及茎叶内寄生虫茎线虫属种(stem and leaf endoparasites Ditylenchus spp.)、异头锥线虫(Dolichodorus heterocephalus)、苍白球异皮线虫(Globodera pallida)(=苍白异皮线虫(Heterodera pallida))、罗斯托克球异皮线虫(Globodera rostochiensis)(黄薯孢囊线虫(yellow potato cyst nematode))、茄球异皮线虫(Globodera solanacearum)、草球异皮线虫(Globodera tabacum)、弗吉尼亚球异皮线虫(Globodera virginia)和非迁移性成囊寄生虫球异皮线虫属种(non-migratory cyst-forming parasites Globoderaspp.)、双角螺旋线虫(Helicotylenchus digonicus)、双子宫螺旋线虫(Helicotylenchusdihystera)、刺桐螺旋线虫(Helicotylenchus erythrine)、多带螺旋线虫(Helicotylenchus multicinctus)、短螺旋线虫(Helicotylenchus nannus)、假强壮螺旋线虫 (Helicotylenchus pseudorobustus)和螺旋线虫属种(Helicotylenchus spp.)、半轮线虫(Hemicriconemoides)、花生半环口线虫(Hemicycliophora arenaria)、裸半环口线虫(Hemicycliophora nudata)、微半环口线虫(Hemicycliophora parvana)、燕麦异皮线虫(Heterodera avenae)、十字花异皮线虫(Heterodera cruciferae)、大豆异皮线虫(Heterodera glycines)、稻异皮线虫(Heterodera oryzae)、甜菜异皮线虫(Heteroderaschachtii)、玉米异皮线虫(Heterodera zeae)和非迁移性成囊寄生虫异皮线虫属种(non-migratory cyst-forming parasites Heterodera spp.)、细长潜根线虫(Hirschmaniellagracilis)、稻潜根线虫(Hirschmaniella oryzae)、刺尾潜根线虫(Hirschmaniellaspinicaudata)和潜根线虫属种茎叶内寄生虫(stem and leaf endoparasitesHirschmaniella spp.)、埃及纽带线虫(Hoplolaimus aegyptii)、加利福尼亚纽带线虫(Hoplolaimus californicus)、哥伦布纽带线虫(Hoplolaimus columbus)、帽状纽带线虫(Hoplolaimus galeatus)、印度纽带线虫(Hoplolaimus indicus)、大针纽带线虫(Hoplolaimus magnistylus)、拟强壮纽带线虫(Hoplolaimus pararobustus)、非洲长针线虫(Longidorus africanus)、短环长针线虫(Longidorus breviannulatus)、伸长长针线虫(Longidorus elongatus)、光头长针线虫(Longidorus laevicapitatus)、藤蔓长针线虫(Longidorus vineacola)和外寄生虫长针线虫属种 (ectoparasites Longidorus spp.)、高梁根结线虫(Meloidogyne acronea)、非洲根结线虫(Meloidogyne africana)、花生根结线虫(Meloidogyne arenaria)、泰晤士花生根结线虫(Meloidogyne arenaria thamesi)、甘兰根结线虫(Meloidogyne artiella)、奇氏根结线虫(Meloidogyne chitwoodi)、咖啡根结线虫(Meloidogyne coffeicola)、埃塞俄比亚根结线虫(Meloidogyne ethiopica)、弱小根结线虫 (Meloidogyne exigua)、伪根结线虫(Meloidogyne fallax)、拟禾本根结线虫(Meloidogyne graminicola)、禾本根结线虫(Meloidogyne graminis)、北方根结线虫(Meloidogyne hapla)、南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、最低级南方根结线虫(Meloidogyne incognita acrita)、爪哇根根结线虫(Meloidogyne javanica)、基库尤根结线虫(Meloidogyne kikuyensis)、微小根结线虫(Meloidogyne minor)、禾谷根结线虫(Meloidogyne naasi)、巴拉那根结线虫(Meloidogyne paranaensis)、泰晤士根结线虫(Meloidogyne thamesi)和非迁移性寄生虫根结线虫属种(non- migratory parasitesMeloidogyne spp.)、瓢线虫属种(Meloinema spp.)、异常珍珠线虫(Nacobbus aberrans)、维吉拟茎线虫(Neotylenchus vigissi)、假扭曲蘑菇线虫(Paraphelenchuspseudoparietinus)、葱拟毛刺线虫(Paratrichodorus allius)、分叶拟毛刺线虫(Paratrichodorus lobatus)、微小拟毛刺线虫(Paratrichodorus minor)、拟丽拟毛刺线虫(Paratrichodorus nanus)、胼胝拟毛刺线虫 (Paratrichodorus porosus)、光滑拟毛刺线虫(Paratrichodorus teres)和拟毛刺线虫属种(Paratrichodorus spp.)、钩状针线虫(Paratylenchus hamatus)、小针线虫 (Paratylenchus minutus)、突出针线虫(Paratylenchus projectus)和针线虫属种(Paratylenchus spp.)、敏捷短体线虫(Pratylenchus agilis)、艾伦短体线虫 (Pratylenchus alleni)、安第斯短体线虫(Pratylenchus andinus)、短尾短体线虫 (Pratylenchus brachyurus)、谷短体线虫(Pratylenchus cerealis)、咖啡短体线虫 (Pratylenchus coffeae)、凹口短体线虫(Pratylenchus crenatus)、德式短体线虫 (Pratylenchus delattrei)、圆尾短体线虫(Pratylenchus giibbicaudatus)、古氏短体线虫(Pratylenchus goodeyi)、钩状短体线虫(Pratylenchus hamatus)、六纹短体线虫(Pratylenchus hexincisus)、卢斯短体线虫(Pratylenchus loosi)、失落短体线虫(Pratylenchus neglectus)、穿刺短体线虫(Pratylenchus penetrans)、草地短体线虫(Pratylenchus pratensis)、斯克里布纳短体线虫(Pratylenchus scribneri)、光滑短体线虫(Pratylenchus teres)、索雷短体线虫(Pratylenchus thornei)、伤残短体线虫(Pratylenchus vulnus)、玉米短体线虫(Pratylenchus zeae)和迁移性内寄生虫短体线虫属种(migratory endoparasitesPratylenchus spp.)、小假海矛线虫 (Pseudohalenchus minutus)、大齿平滑垫刃线虫(Psilenchus magnidens)、瘤样平滑垫刃线虫(Psilenchus tumidus)、查尔科斑皮孢囊线虫(Punctodera chalcoensis)、尖锐矮化线虫(Quinisulcius acutus)、柑橘穿孔线虫(Radopholus citrophilus)、相似穿孔线虫(Radopholus similis)、穿孔线虫属种迁移性内寄生虫(migratory endoparasites Radopholus spp.)、北方肾状线虫(Rotylenchulusborealis)、小肾状线虫(Rotylenchulus parvus)、肾形肾状线虫(Rotylenchulusreniformis)和肾状线虫属种(Rotylenchulus spp.)、直沟盘旋线虫(Rotylenchuslaurentinus)、大囊盘旋线虫(Rotylenchus macrodoratus)、强壮盘旋线虫(Rotylenchusrobustus)、单形盘旋线虫(Rotylenchus uniformis)和盘旋线虫属种(Rotylenchusspp.)、短尾盾线虫(Scutellonema brachyurum)、缓慢盾线虫(Scutellonema bradys)、格尾盾线虫(Scutellonema clathricaudatum)和迁移性内寄生虫盾线虫属种(migratoryendoparasites Scutellonema spp.)、根瘿拟粒线虫(Subanguina radiciola)、烟草头线虫(Tetylenchus nicotianae)、圆柱毛刺线虫(Trichodorus cylindricus)、微小毛刺线虫(Trichodorus minor)、原始毛刺线虫(Trichodorus primitivus)、最近毛刺线虫(Trichodorus proximus)、相似毛刺线虫(Trichodorus similis)、少见毛刺线虫(Trichodorus sparsus)和外寄生虫毛刺线虫属种(ectoparasites Trichodorus spp.)、田地矮化线虫(Tylenchorhynchus agri)、甘蓝矮化线虫(Tylenchorhynchus brassicae)、光亮矮化线虫(Tylenchorhynchus clarus)、克雷顿矮化线虫 (Tylenchorhynchusclaytoni)、指形矮化线虫(Tylenchorhynchus digitatus)、扭曲矮化线虫(Tylenchorhynchus ebriensis)、最大矮化线虫(Tylenchorhynchus maximus)、裸矮化线虫(Tylenchorhynchus nudus)、普通矮化线虫 (Tylenchorhynchus vulgaris)和矮化线虫属种(Tylenchorhynchus spp.)、半穿刺线虫小垫刃线虫(Tylenchulus semipenetrans)和半寄生虫小垫刃线虫属种 (semiparasites Tylenchulus spp.)、美国剑线虫(Xiphinemaamericanum)、短颈剑线虫(Xiphinema brevicolle)、二异尾剑线虫(Xiphinemadimorphicaudatum)、食指剑线虫(Xiphinema index)和外寄生虫剑线虫属种(ectoparasites Xiphinema spp.)。
具有线虫防治活性的以上化合物尤其适合于防治大豆线虫,确切地说,选自由以下组成的群组的线虫:短尾短体线虫、草地短体线虫、穿刺短体线虫、斯克里布纳短体线虫、长尾针刺线虫、大豆异皮线虫、哥伦布纽带线虫以及咖啡短体线虫、六纹短体线虫、失落短体线虫、凹口短体线虫、艾伦短体线虫、敏捷短体线虫、玉米短体线虫、伤残短体线虫、细长针刺线虫、花生根结线虫、南方根结线虫、爪哇根根结线虫、北方根结线虫、哥伦布纽带线虫、帽状纽带线虫和肾形肾状线虫。
在一个实施例中,待用于处理本发明的种子或植物或其中正在生长或打算生长所述种子或植物的土壤的杀线虫化合物包括群组NC1中的这些化合物:棉铃威、涕灭威、虫螨威、丁硫克百威、噻唑磷、硫线磷、杀线威、硫双灭多威、乐果、灭线磷、特丁硫磷、阿维菌素、溴甲烷和其它卤代烃、选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂、三氟咪啶酰胺、联氟砜、氟吡菌酰胺、噻恶嗪芬、N-[1- (2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、顺式茉莉酮、过敏蛋白、印楝油或印楝素。在另一实施例中,本发明的植物或种子或其生长或打算生长的土壤用群组NC2的以下杀线虫剂中的任一种处理:噻唑磷、硫线磷、硫双灭多威、阿维菌素、三氟咪啶酰胺、氟吡菌酰胺、噻恶嗪芬、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、顺式茉莉酮、过敏蛋白、印楝油或印楝素,尤其本发明的种子用所述杀线虫化合物处理。
在一个实施例中,用选自由以下组成的群组NC3的组合处理包含EE-GM4 的本发明的植物、细胞、植物部分或种子:噻唑磷和硫线磷、噻唑磷和硫双灭多威、噻唑磷和阿维菌素、噻唑磷和三氟咪啶酰胺、噻唑磷和氟吡菌酰胺、噻唑磷和噻恶嗪芬、噻唑磷和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、噻唑磷和顺式茉莉酮、噻唑磷和过敏蛋白、噻唑磷和印楝油、噻唑磷和印楝素、硫线磷和噻唑磷、硫线磷和硫双灭多威、硫线磷和阿维菌素、硫线磷和三氟咪啶酰胺、硫线磷和氟吡菌酰胺、硫线磷和噻恶嗪芬、硫线磷和N-[1-(2,6-二氟苯基)- 1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、硫线磷和顺式茉莉酮、硫线磷和过敏蛋白、硫线磷和印楝油、硫线磷和印楝素、硫双灭多威和噻唑磷、硫双灭多威和硫线磷、硫双灭多威和阿维菌素、硫双灭多威和三氟咪啶酰胺、硫双灭多威和氟吡菌酰胺、硫双灭多威和噻恶嗪芬、硫双灭多威和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]- 2-三氟甲基苯甲酰胺、硫双灭多威和顺式茉莉酮、硫双灭多威和过敏蛋白、硫双灭多威和印楝油、阿维菌素和硫线磷、阿维菌素和硫双灭多威、阿维菌素和三氟咪啶酰胺、阿维菌素和氟吡菌酰胺、阿维菌素和噻恶嗪芬、阿维菌素和N-[1-(2,6- 二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、阿维菌素和顺式茉莉酮、阿维菌素和过敏蛋白、阿维菌素和印楝油、阿维菌素和印楝素、三氟咪啶酰胺和阿维菌素、三氟咪啶酰胺和氟吡菌酰胺、三氟咪啶酰胺和噻恶嗪芬、三氟咪啶酰胺和N- [1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、三氟咪啶酰胺和顺式茉莉酮、三氟咪啶酰胺和过敏蛋白、三氟咪啶酰胺和印楝油、三氟咪啶酰胺和印楝素、氟吡菌酰胺和三氟咪啶酰胺、氟吡菌酰胺和噻恶嗪芬、氟吡菌酰胺和N-[1- (2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、氟吡菌酰胺和顺式茉莉酮、氟吡菌酰胺和过敏蛋白、氟吡菌酰胺和印楝油、氟吡菌酰胺和印楝素、噻恶嗪芬和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、噻恶嗪芬和顺式茉莉酮、噻恶嗪芬和过敏蛋白、噻恶嗪芬和印楝油、噻恶嗪芬和印楝素、N-[1-(2,6- 二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺和顺式茉莉酮、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺和过敏蛋白、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺和印楝油、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺和印楝素、顺式茉莉酮和过敏蛋白、顺式茉莉酮和印楝油、顺式茉莉酮和印楝素、过敏蛋白和印楝油以及过敏蛋白和印楝素。
杀真菌剂
本文中通过其通用名称指定的活性成分是已知的并且描述于例如《农药手册》(第17版,英国作物保护委员会,更新版本见万维网地址: bcpc.org/product/bcpc-online-pesticide-manual-latest-version),或可在因特网上搜索(例如,见万维网地址:alanwood.net/pesticides)。
如果类别F1到F15的所有指定的杀真菌混合搭配物的官能团使其能够实现,那么其可以任选地与适合的碱或酸形成盐。在适用时,类别F1到F15的所有指定的混合搭配物可包括互变异构形式。
F1:麦角固醇生物合成抑制剂,例如(1.001)环唑醇(cyproconazole)、(1.002) 苯醚甲环唑(difenoconazole)、(1.003)氟环唑(epoxiconazole)、(1.004)环酰菌胺(fenhexamid)、(1.005)苯锈啶(fenpropidin)、(1.006)丁苯吗啉 (fenpropimorph)、(1.007)胺苯吡菌酮(fenpyrazamine)、(1.008)氟喹唑 (fluquinconazole)、(1.009)粉唑醇(flutriafol)、(1.010)抑霉唑(imazalil)、(1.011) 硫酸抑霉唑、(1.012)种菌唑(ipconazole)、(1.013)叶菌唑(metconazole)、(1.014) 腈菌唑(myclobutanil)、(1.015)多效唑(paclobutrazol)、(1.016)咪鲜胺 (prochloraz)、(1.017)丙环唑(propiconazole)、(1.018)丙硫菌唑(prothioconazole)、 (1.019)氯啶菌酯(Pyrisoxazole)、(1.020)螺环菌胺(spiroxamine)、(1.021) 戊唑醇(tebuconazole)、(1.022)四氟醚唑(tetraconazole)、(1.023)三唑醇 (triadimenol)、(1.024)克啉菌(tridemorph)、(1.025)灭菌唑(triticonazole)、 (1.026)(1R,2S,5S)-5-(4-氯苯甲基)-2-(氯甲基)-2-甲基-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基) 环戊醇、(1.027)(1S,2R,5R)-5-(4-氯苯甲基)-2-(氯甲基)-2-甲基-1-(1H-1,2,4-三唑 -1-基甲基)环戊醇、(1.028)(2R)-2-(1-氯环丙基)-4-[(1R)-2,2-二氯环丙基]-1-(1H- 1,2,4-三唑-1-基)丁-2-醇、(1.029)(2R)-2-(1-氯环丙基)-4-[(1S)-2,2-二氯环丙基]-1- (1H-1,2,4-三唑-1-基)丁-2-醇、(1.030)(2R)-2-[4-(4-氯苯氧基)-2-(三氟甲基)苯基]- 1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丙-2-醇、(1.031)(2S)-2-(1-氯环丙基)-4-[(1R)-2,2-二氯环丙基]-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丁-2-醇、(1.032)(2S)-2-(1-氯环丙基)-4-[(1S)-2,2-二氯环丙基]-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丁-2-醇、(1.033)(2S)-2-[4-(4-氯苯氧基)-2-(三氟甲基)苯基]-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丙-2-醇、(1.034)(R)-[3-(4-氯-2-氟苯基)-5-(2,4- 二氟苯基)-1,2-恶唑-4-基](吡啶-3-基)甲醇、(1.035)(S)-[3-(4-氯-2-氟苯基)-5-(2,4- 二氟苯基)-1,2-恶唑-4-基](吡啶-3-基)甲醇、(1.036)[3-(4-氯-2-氟苯基)-5-(2,4-二氟苯基)-1,2-恶唑-4-基](吡啶-3-基)甲醇、(1.037)1-({(2R,4S)-2-[2-氯-4-(4-氯苯氧基)苯基]-4-甲基-1,3-二氧环戊-2-基}甲基)-1H-1,2,4-三唑、(1.038)1-({(2S,4S)-2- [2-氯-4-(4-氯苯氧基)苯基]-4-甲基-1,3-二氧环戊-2-基}甲基)-1H-1,2,4-三唑、 (1.039)硫氰酸1-{[3-(2-氯苯基)-2-(2,4-二氟苯基)环氧乙-2-基]甲基}-1H-1,2,4-三唑-5-基盐、(1.040)硫氰酸1-{[rel(2R,3R)-3-(2-氯苯基)-2-(2,4-二氟苯基)环氧乙- 2-基]甲基}-1H-1,2,4-三唑-5-基盐、(1.041)硫氰酸1-{[rel(2R,3S)-3-(2-氯苯基)-2- (2,4-二氟苯基)环氧乙-2-基]甲基}-1H-1,2,4-三唑-5-基盐、(1.042)2-[(2R,4R,5R)- 1-(2,4-二氯苯基)-5-羟基-2,6,6-三甲基庚-4-基]-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-硫酮、 (1.043)2-[(2R,4R,5S)-1-(2,4-二氯苯基)-5-羟基-2,6,6-三甲基庚-4-基]-2,4-二氢- 3H-1,2,4-三唑-3-硫酮、(1.044)2-[(2R,4S,5R)-1-(2,4-二氯苯基)-5-羟基-2,6,6-三甲基庚-4-基]-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-硫酮、(1.045)2-[(2R,4S,5S)-1-(2,4-二氯苯基)-5-羟基-2,6,6-三甲基庚-4-基]-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-硫酮、(1.046)2- [(2S,4R,5R)-1-(2,4-二氯苯基)-5-羟基-2,6,6-三甲基庚-4-基]-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-硫酮、(1.047)2-[(2S,4R,5S)-1-(2,4-二氯苯基)-5-羟基-2,6,6-三甲基庚-4-基]- 2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-硫酮、(1.048)2-[(2S,4S,5R)-1-(2,4-二氯苯基)-5-羟基- 2,6,6-三甲基庚-4-基]-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-硫酮、(1.049)2-[(2S,4S,5S)-1- (2,4-二氯苯基)-5-羟基-2,6,6-三甲基庚-4-基]-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-硫酮、 (1.050)2-[1-(2,4-二氯苯基)-5-羟基-2,6,6-三甲基庚-4-基]-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑 -3-硫酮、(1.051)2-[2-氯-4-(2,4-二氯苯氧基)苯基]-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丙-2-醇、 (1.052)2-[2-氯-4-(4-氯苯氧基)苯基]-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丁-2-醇、(1.053)2- [4-(4-氯苯氧基)-2-(三氟甲基)苯基]-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丁-2-醇、(1.054)2-[4- (4-氯苯氧基)-2-(三氟甲基)苯基]-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)戊-2-醇、(1.055)2-[4-(4- 氯苯氧基)-2-(三氟甲基)苯基]-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基)丙-2-醇、(1.056)2-{[3-(2-氯苯基)-2-(2,4-二氟苯基)环氧乙-2-基]甲基}-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-硫酮、 (1.057)2-{[rel(2R,3R)-3-(2-氯苯基)-2-(2,4-二氟苯基)环氧乙-2-基]甲基}-2,4-二氢 -3H-1,2,4-三唑-3-硫酮、(1.058)2-{[rel(2R,3S)-3-(2-氯苯基)-2-(2,4-二氟苯基)环氧乙-2-基]甲基}-2,4-二氢-3H-1,2,4-三唑-3-硫酮、(1.059)5-(4-氯苯甲基)-2-(氯甲基)-2-甲基-1-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)环戊醇、(1.060)5-(烯丙基硫烷基)-1-{[3- (2-氯苯基)-2-(2,4-二氟苯基)环氧乙-2-基]甲基}-1H-1,2,4-三唑、(1.061)5-(烯丙基硫烷基)-1-{[rel(2R,3R)-3-(2-氯苯基)-2-(2,4-二氟苯基)环氧乙-2-基]甲基}-1H- 1,2,4-三唑、(1.062)5-(烯丙基硫烷基)-1-{[rel(2R,3S)-3-(2-氯苯基)-2-(2,4-二氟苯基)环氧乙-2-基]甲基}-1H-1,2,4-三唑、(1.063)N'-(2,5-二甲基-4-{[3-(1,1,2,2-四氟乙氧基)苯基]硫烷基}苯基)-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.064)N'-(2,5-二甲基-4-{[3-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]硫烷基}苯基)-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.065)N'-(2,5-二甲基-4-{[3-(2,2,3,3-四氟丙氧基)苯基]硫烷基}苯基)-N-乙基-N- 甲基酰亚胺甲酰胺、(1.066)N'-(2,5-二甲基-4-{[3-(五氟乙氧基)苯基]硫烷基}苯基)-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.067)N'-(2,5-二甲基-4-{3-[(1,1,2,2-四氟乙基)硫烷基]苯氧基}苯基)-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.068)N'-(2,5-二甲基- 4-{3-[(2,2,2-三氟乙基)硫烷基]苯氧基}苯基)-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、 (1.069)N'-(2,5-二甲基-4-{3-[(2,2,3,3-四氟丙基)硫烷基]苯氧基}苯基)-N-乙基-N- 甲基酰亚胺甲酰胺、(1.070)N'-(2,5-二甲基-4-{3-[(五氟乙基)硫烷基]苯氧基}苯基)-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.071)N'-(2,5-二甲基-4-苯氧基苯基)-N-乙基 -N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.072)N'-(4-{[3-(二氟甲氧基)苯基]硫烷基}-2,5-二甲基苯基)-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.073)N'-(4-{3-[(二氟甲基)硫烷基]苯氧基}-2,5-二甲基苯基)-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.074)N'-[5-溴-6-(2,3-二氢 -1H-茚-2-基氧基)-2-甲基吡啶-3-基]-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.075)N'-{4- [(4,5-二氯-1,3-噻唑-2-基)氧基]-2,5-二甲基苯基}-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、 (1.076)N'-{5-溴-6-[(1R)-1-(3,5-二氟苯基)乙氧基]-2-甲基吡啶-3-基}-N-乙基-N- 甲基酰亚胺甲酰胺、(1.077)N'-{5-溴-6-[(1S)-1-(3,5-二氟苯基)乙氧基]-2-甲基吡啶-3-基}-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.078)N'-{5-溴-6-[(顺4-异丙基环己基) 氧基]-2-甲基吡啶-3-基}-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.079)N'-{5-溴-6-[(反4- 异丙基环己基)氧基]-2-甲基吡啶-3-基}-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.080)N'- {5-溴-6-[1-(3,5-二氟苯基)乙氧基]-2-甲基吡啶-3-基}-N-乙基-N-甲基酰亚胺甲酰胺、(1.081)梅芬氯氟醚菌唑(Mefentrifluconazole)、(1.082)异芬氯氟醚菌唑 (Ipfentrifluconazole)、(1.083)氧环唑(Azaconazole)、(1.084)己唑醇 (Hexaconazole)、(1.085)三泰芬(Triadimefon)、(1.086)恶咪唑(Oxpoconazole)、 (1.087)平克座(Penconazole)、(1.088)咪鲜胺(Prochloraz)、(1.089)氟菌唑 (Triflumizole)、(1.090)嗪氨灵(Triforine)、(1.091)啶斑肟(Pyrifenox)、(1.092) 芬瑞莫(Fenarimol)、(1.093)尼瑞莫(Nuarimol)、(1.094)联苯三唑醇(Bitertanol)、(1.095)糠菌唑(Bromuconazole)、(1.096)烯唑醇(Diniconazole)、(1.097)氟环唑(Epoxiconazole)、(1.098)芬福可佐(Fenfuconazole)、(1.099)亚胺唑(Imibenconazole)。
F2:复合物I或II的呼吸链的抑制剂,例如(2.001)苯并烯氟菌唑(benzovindiflupyr)、(2.002)联苯吡菌胺(bixafen)、(2.003)白克列(boscalid)、(2.004)萎锈灵(carboxin)、(2.005)氟吡菌酰胺、(2.006)氟酰胺(flutolanil)、 (2.007)氟唑菌酰胺(fluxapyroxad)、(2.008)福拉比(furametpyr)、(2.009)异非塔米(Isofetamid)、(2.010)吡唑萘菌胺(isopyrazam)(反差向异构对映异构体1R,4S,9S)、(2.011)吡唑萘菌胺(反差向异构对映异构体1S,4R,9R)、(2.012) 吡唑萘菌胺(反差向异构外消旋体1RS,4SR,9SR)、(2.013)吡唑萘菌胺(顺差向异构外消旋体1RS,4SR,9RS和反差向异构外消旋体1RS,4SR,9SR的混合物)、 (2.014)吡唑萘菌胺(顺差向异构对映异构体1R,4S,9R)、(2.015)吡唑萘菌胺 (顺差向异构对映异构体1S,4R,9S)、(2.016)吡唑萘菌胺(顺差向异构外消旋体 1RS,4SR,9RS)、(2.017)氟唑菌苯胺(penflufen)、(2.018)吡噻菌胺(penthiopyrad)、 (2.019)氟唑菌酰羟胺(pydiflumetofen)、(2.020)皮兹福米(Pyraziflumid)、(2.021) 氟唑环菌胺(sedaxane)、(2.022)1,3-二甲基-N-(1,1,3-三甲基-2,3-二氢-1H-茚-4- 基)-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.023)1,3-二甲基-N-[(3R)-1,1,3-三甲基-2,3-二氢-1H-茚 -4-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.024)1,3-二甲基-N-[(3S)-1,1,3-三甲基-2,3-二氢-1H- 茚-4-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.025)1-甲基-3-(三氟甲基)-N-[2'-(三氟甲基)二苯基-2-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.026)2-氟-6-(三氟甲基)-N-(1,1,3-三甲基-2,3-二氢 -1H-茚-4-基)苯甲酰胺、(2.027)3-(二氟甲基)-1-甲基-N-(1,1,3-三甲基-2,3-二氢- 1H-茚-4-基)-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.028)3-(二氟甲基)-1-甲基-N-[(3R)-1,1,3-三甲基-2,3-二氢-1H-茚-4-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.029)3-(二氟甲基)-1-甲基-N- [(3S)-1,1,3-三甲基-2,3-二氢-1H-茚-4-基]-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.030)3-(二氟甲基)-N-(7-氟-1,1,3-三甲基-2,3-二氢-1H-茚-4-基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.031)3-(二氟甲基)-N-[(3R)-7-氟-1,1,3-三甲基-2,3-二氢-1H-茚-4-基]-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.032)3-(二氟甲基)-N-[(3S)-7-氟-1,1,3-三甲基-2,3-二氢-1H-茚-4-基]-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.033)5,8-二氟-N-[2-(2-氟-4-{[4-(三氟甲基)吡啶-2-基]氧基}苯基)乙基]喹唑啉-4-胺、(2.034)N-(2-环戊基-5-氟苯甲基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.035)N-(2-叔丁-5-甲基苯甲基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.036)N-(2-叔丁苯甲基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.037)N-(5-氯 -2-乙基苯甲基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.038) N-(5-氯-2-异丙基苯甲基)-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.039)N-[(1R,4S)-9-(二氯亚甲基)-1,2,3,4-四氢-1,4-甲烷萘-5-基]-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.040)N-[(1S,4R)-9-(二氯亚甲基)-1,2,3,4-四氢- 1,4-甲烷萘-5-基]-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.041)N-[1-(2,4-二氯苯基)-1-甲氧基丙-2-基]-3-(二氟甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.042)N-[2-氯 -6-(三氟甲基)苯甲基]-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、 (2.043)N-[3-氯-2-氟-6-(三氟甲基)苯甲基]-N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基- 1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.044)N-[5-氯-2-(三氟甲基)苯甲基]-N-环丙基-3-(二氟甲基)- 5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.045)N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-N- [5-甲基-2-(三氟甲基)苯甲基]-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.046)N-环丙基-3-(二氟甲基)- 5-氟-N-(2-氟-6-异丙基苯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.047)N-环丙基-3- (二氟甲基)-5-氟-N-(2-异丙基-5-甲基苯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.048) N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(2-异丙基苯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4-硫代碳酰胺、(2.049)N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(2-异丙基苯甲基)-1-甲基-1H-吡唑-4- 甲酰胺、(2.050)N-环丙基-3-(二氟甲基)-5-氟-N-(5-氟-2-异丙基苯甲基)-1-甲基- 1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.051)N-环丙基-3-(二氟甲基)-N-(2-乙基-4,5-二甲基苯甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.052)N-环丙基-3-(二氟甲基)-N-(2-乙基- 5-氟苯甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.053)N-环丙基-3-(二氟甲基)-N- (2-乙基-5-甲基苯甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.054)N-环丙基-N-(2- 环丙基-5-氟苯甲基)-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.055)N-环丙基-N-(2-环丙基-5-甲基苯甲基)-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.056)N-环丙基-N-(2-环丙基苯甲基)-3-(二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺、(2.057)苯并烯氟菌唑(Benzovindiflupyr)、(2.058)异氟赛普(Isoflucypram)。
F3:复合物III的呼吸链的抑制剂,例如(3.001)辛唑嘧菌胺(ametoctradin)、(3.002)吲唑磺菌胺(amisulbrom)、(3.003)嘧菌酯(azoxystrobin)、(3.004)甲香菌酯(coumethoxystrobin)、(3.005)丁香菌酯(coumoxystrobin)、(3.006)赛座灭(cyazofamid)、(3.007)二莫西史卓宾(dimoxystrobin)、(3.008)烯肟菌酯(enoxastrobin)、(3.009)凡杀同(famoxadone)、(3.010)咪唑菌酮(fenamidone)、 (3.011)氟菌螨酯(flufenoxystrobin)、(3.012)氟嘧菌酯(fluoxastrobin)、(3.013) 甲基醚菌酯(kresoxim-methyl)、(3.014)苯氧菌胺(metominostrobin)、(3.015) 肟醚菌胺(orysastrobin)、(3.016)啶氧菌酯(picoxystrobin)、(3.017)吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)、(3.018)唑胺菌酯(pyrametostrobin)、(3.019)正唑菌酯(pyraoxystrobin)、(3.020)肟菌酯(trifloxystrobin)、(3.021)(2E)-2-{2-[({[(1E)- 1-(3-{[(E)-1-氟-2-苯基乙烯基]氧基}苯基)亚乙基]氨基}氧基)甲基]苯基}-2-(甲氧基亚氨基)-N-甲基乙酰胺、(3.022)(2E,3Z)-5-{[1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-3-基]氧基}- 2-(甲氧基亚氨基)-N,3-二甲基戊-3-烯酰胺、(3.023)(2R)-2-{2-[(2,5-二甲基苯氧基)甲基]苯基}-2-甲氧基-N-甲基乙酰胺、(3.024)(2S)-2-{2-[(2,5-二甲基苯氧基) 甲基]苯基}-2-甲氧基-N-甲基乙酰胺、(3.025)(3S,6S,7R,8R)-2-甲基丙酸8-苯甲基-3-[({3-[(异丁酰基氧基)甲氧基]-4-甲氧基吡啶-2-基}羰基)氨基]-6-甲基-4,9-二氧代-1,5-二氧杂环壬烷-7-基酯、(3.026)2-{2-[(2,5-二甲基苯氧基)甲基]苯基}-2- 甲氧基-N-甲基乙酰胺、(3.027)N-(3-乙基-3,5,5-三甲基环己基)-3-甲酰氨基-2-羟基苯甲酰胺、(3.028)(2E,3Z)-5-{[1-(4-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-基]氧基}-2-(甲氧基亚氨基)-N,3-二甲基戊-3-烯酰胺、(3.029){5-[3-(2,4-二甲基苯基)-1H-吡唑-1- 基]-2-甲基苯甲基}氨基甲酸甲酯、(3.030)曼德斯宾(mandestrobin)。
F4:有丝分裂和细胞分裂抑制剂,例如(4.001)多菌灵(carbendazim)、(4.002) 乙霉威(diethofencarb)、(4.003)噻唑菌胺(ethaboxam)、(4.004)氟吡菌胺(fluopicolide)、(4.005)戊菌隆(pencycuron)、(4.006)噻苯唑(thiabendazole)、(4.007)甲基硫菌灵(thiophanate-methyl)、(4.008)苯酰菌胺(zoxamide)、(4.009) 3-氯-4-(2,6-二氟苯基)-6-甲基-5-苯基哒嗪、(4.010)3-氯-5-(4-氯苯基)-4-(2,6-二氟苯基)-6-甲基哒嗪、(4.011)3-氯-5-(6-氯吡啶-3-基)-6-甲基-4-(2,4,6-三氟苯基)哒嗪、(4.012)4-(2-溴-4-氟苯基)-N-(2,6-二氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺、 (4.013)4-(2-溴-4-氟苯基)-N-(2-溴-6-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺、(4.014) 4-(2-溴-4-氟苯基)-N-(2-溴苯基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺、(4.015)4-(2-溴-4-氟苯基)-N-(2-氯-6-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺、(4.016)4-(2-溴-4-氟苯基)-N- (2-氯苯基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺、(4.017)4-(2-溴-4-氟苯基)-N-(2-氟苯基)- 1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺、(4.018)4-(2-氯-4-氟苯基)-N-(2,6-二氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺、(4.019)4-(2-氯-4-氟苯基)-N-(2-氯-6-氟苯基)-1,3-二甲基-1H- 吡唑-5-胺、(4.020)4-(2-氯-4-氟苯基)-N-(2-氯苯基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺、 (4.021)4-(2-氯-4-氟苯基)-N-(2-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺、(4.022)4-(4- 氯苯基)-5-(2,6-二氟苯基)-3,6-二甲基哒嗪、(4.023)N-(2-溴-6-氟苯基)-4-(2-氯-4- 氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺、(4.024)N-(2-溴苯基)-4-(2-氯-4-氟苯基)-1,3- 二甲基-1H-吡唑-5-胺、(4.025)N-(4-氯-2,6-二氟苯基)-4-(2-氯-4-氟苯基)-1,3-二甲基-1H-吡唑-5-胺。
F5:能够具有多位点作用的化合物,例如(5.001)波尔多混合物(bordeauxmixture)、(5.002)敌菌丹(captafol)、(5.003)克菌丹(captan)、(5.004)百菌清(chlorothalonil)、(5.005)氢氧化铜、(5.006)环烷酸铜、(5.007)氧化铜、 (5.008)氯氧化铜、(5.009)硫酸铜(2+)、(5.010)腈硫醌(dithianon)、(5.011) 多果宁(dodine)、(5.012)灭菌丹(folpet)、(5.013)代森锰锌(mancozeb)、 (5.014)代森锰(maneb)、(5.015)代森联(metiram)、(5.016)代森联锌(metiram zinc)、(5.017)喹啉铜(oxine-copper)、(5.018)丙森锌(propineb)、(5.019)硫和包括聚硫化钙的硫制剂、(5.020)福美双(thiram)、(5.021)代森锌(zineb)、 (5.022)福美锌(ziram)、(5.023)6-乙基-5,7-二氧代-6,7-二氢-5H-吡咯并 [3',4':5,6][1,4]二噻英并[2,3-c][1,2]噻唑-3-腈。
F6:能够诱导宿主防御的化合物,例如(6.001)阿拉酸式苯-S-甲基(acibenzolar-S-methyl)、(6.002)异噻菌胺(isotianil)、(6.003)噻菌灵(probenazole)、(6.004)噻酰菌胺(tiadinil)。
F7:氨基酸和/或蛋白质生物合成抑制剂,例如(7.001)嘧菌环胺(cyprodinil)、(7.002)春日霉素(kasugamycin)、(7.003)水合春日霉素盐酸盐(kasugamycinhydrochloride hydrate)、(7.004)土霉素(oxytetracycline)、(7.005)嘧霉胺(pyrimethanil)、(7.006)3-(5-氟-3,3,4,4-四甲基-3,4-二氢异喹啉-1-基)喹啉。
F8:ATP产生抑制剂,例如(8.001)硅噻菌胺(silthiofam)。
F9:细胞壁合成抑制剂,例如(9.001)苯噻菌胺(benthiavalicarb)、(9.002) 烯酰吗啉(dimethomorph)、(9.003)氟吗啉(flumorph)、(9.004)丙森锌 (iprovalicarb)、(9.005)双炔酰菌胺(mandipropamid)、(9.006)丁吡吗啉 (pyrimorph)、(9.007)霜霉灭(valifenalate)、(9.008)(2E)-3-(4-叔丁苯基)-3-(2- 氯吡啶-4-基)-1-(吗啉-4-基)丙-2-烯-1-酮、(9.009)(2Z)-3-(4-叔丁苯基)-3-(2-氯吡啶-4-基)-1-(吗啉-4-基)丙-2-烯-1-酮。
F10:脂质和膜合成抑制剂,例如(10.001)霜霉威(propamocarb)、(10.002) 霜霉威盐酸盐、(10.003)甲基立枯磷(tolclofos-methyl)。
F11:黑色素生物合成抑制剂,例如(11.001)三赛唑(tricyclazole)、(11.002){3-甲基-1-[(4-甲基苯甲酰)氨基]丁烷-2-基}氨基甲酸2,2,2-三氟乙基酯。
F12:核酸合成抑制剂,例如(12.001)苯霜灵(benalaxyl)、(12.002)苯霜灵-M(克拉昔(kiralaxyl))、(12.003)甲霜灵(metalaxyl)、(12.004)甲霜灵-M (精甲霜灵(mefenoxam))、(12.005)呋霜灵(furalaxyl)。
F13:信号转导抑制剂,例如(13.001)氟咯菌腈(fludioxonil)、(13.002) 异菌脲(iprodione)、(13.003)腐霉利(procymidone)、(13.004)丙氧喹啉 (proquinazid)、(13.005)喹氧灵(quinoxyfen)、(13.006)农利灵(vinclozolin)。
F14:能够充当去偶合剂的化合物,例如(14.001)氟啶胺(fluazinam)、 (14.002)敌螨普(meptyldinocap)。
F15:其它化合物,例如(15.001)脱落酸(Abscisic acid)、(15.002)苯噻硫氰(benthiazole)、(15.003)贝斯氧杂嗪(bethoxazin)、(15.004)卡巴西霉素 (capsimycin)、(15.005)香芹胴(carvone)、(15.006)灭螨猛(chinomethionat)、 (15.007)硫杂灵(cufraneb)、(15.008)环氟菌胺(cyflufenamid)、(15.009)霜脲氰(cymoxanil)、(15.010)可普磺酰胺(cyprosulfamide)、(15.011)氟噻菌净 (flutianil)、(15.012)三乙膦酸铝(fosetyl-aluminium)、(15.013)三乙膦酸钙、 (15.014)三乙膦酸钠、(15.015)异硫氰酸甲酯(methyl isothiocyanate)、(15.016) 苯菌酮(metrafenone)、(15.017)灭粉霉素(mildiomycin)、(15.018)纳他霉素 (natamycin)、(15.019)二甲基二硫代氨基甲酸镍、(15.020)异丙消(nitrothal- isopropyl)、(15.021)奥沙莫卡(oxamocarb)、(15.022)氟噻唑吡乙酮 (Oxathiapiprolin)、(15.023)氧芬太尼(oxyfenthiin)、(15.024)五氯苯酚和盐、 (15.025)亚磷酸和其盐、(15.026)三乙膦酸霜霉威(propamocarb-fosetylate)、(15.027)甲氧苯唳菌(pyriofenone)(氯芬酮(chlazafenone))、(15.028)异丁乙氧喹啉(tebufloquin)、(15.029)叶枯酞(tecloftalam)、(15.030)甲磺菌胺 (tolnifanide)、(15.031)1-(4-{4-[(5R)-5-(2,6-二氟苯基)-4,5-二氢-1,2-恶唑-3-基]- 1,3-噻唑-2-基}哌啶-1-基)-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]乙酮、(15.032) 1-(4-{4-[(5S)-5-(2,6-二氟苯基)-4,5-二氢-1,2-恶唑-3-基]-1,3-噻唑-2-基}哌啶-1- 基)-2-[5-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]乙酮、(15.033)2-(6-苯甲基吡啶-2-基) 喹唑啉、(15.034)2,6-二甲基-1H,5H-[1,4]二噻英并[2,3-c:5,6-c']二吡咯- 1,3,5,7(2H,6H)-四酮、(15.035)2-[3,5-双(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-1-[4-(4-{5-[2- (丙-2-炔-1-基氧基)苯基]-4,5-二氢-1,2-恶唑-3-基}-1,3-噻唑-2-基)哌啶-1-基]乙酮、 (15.036)2-[3,5-双(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-1-[4-(4-{5-[2-氯-6-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基]-4,5-二氢-1,2-恶唑-3-基}-1,3-噻唑-2-基)哌啶-1-基]乙酮、(15.037)2-[3,5- 双(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基]-1-[4-(4-{5-[2-氟-6-(丙-2-炔-1-基氧基)苯基]-4,5-二氢-1,2-恶唑-3-基}-1,3-噻唑-2-基)哌啶-1-基]乙酮、(15.038)2-[6-(3-氟-4-甲氧基苯基)-5-甲基吡啶-2-基]喹唑啉、(15.039)甲磺酸2-{(5R)-3-[2-(1-{[3,5-双(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基]乙酰基}哌啶-4-基)-1,3-噻唑-4-基]-4,5-二氢-1,2-恶唑-5-基}-3- 氯苯基酯、(15.040)甲磺酸2-{(5S)-3-[2-(1-{[3,5-双(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基]乙酰基}哌啶-4-基)-1,3-噻唑-4-基]-4,5-二氢-1,2-恶唑-5-基}-3-氯苯基酯、(15.041) 2-{2-[(7,8-二氟-2-甲基喹啉-3-基)氧基]-6-氟苯基}丙-2-醇、(15.042)2-{2-氟-6-[(8- 氟-2-甲基喹啉-3-基)氧基]苯基}丙-2-醇、(15.043)甲磺酸2-{3-[2-(1-{[3,5-双(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基]乙酰基}哌啶-4-基)-1,3-噻唑-4-基]-4,5-二氢-1,2-恶唑-5- 基}-3-氯苯基酯、(15.044)甲磺酸2-{3-[2-(1-{[3,5-双(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基] 乙酰基}哌啶-4-基)-1,3-噻唑-4-基]-4,5-二氢-1,2-恶唑-5-基}苯基酯、(15.045)2-苯酚和盐、(15.046)3-(4,4,5-三氟-3,3-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1-基)喹啉、(15.047) 3-(4,4-二氟-3,3-二甲基-3,4-二氢异喹啉-1-基)喹啉、(15.048)4-氨基-5-氟嘧啶-2- 醇(互变异构形式:4-氨基-5-氟嘧啶-2(1H)-酮)、(15.049)4-氧代-4-[(2-苯基乙基)氨基]丁酸、(15.050)5-氨基-1,3,4-噻二唑-2-硫醇、(15.051)5-氯-N'-苯基-N'- (丙-2-炔-1-基)噻吩-2-磺酰肼、(15.052)5-氟-2-[(4-氟苯甲基)氧基]嘧啶-4-胺、 (15.053)5-氟-2-[(4-甲基苯甲基)氧基]嘧啶-4-胺、(15.054)9-氟-2,2-二甲基-5-(喹啉-3-基)-2,3-二氢-1,4-苯并杂嗪、(15.055){6-[({[(Z)-(1-甲基-1H-四唑-5-基)(苯基) 亚甲基]氨基}氧基)甲基]吡啶-2-基}氨基甲酸丁-3-炔-1-基酯、(15.056)(2Z)-3-氨基-2-氰基-3-苯基丙烯酸乙基酯、(15.057)酚嗪-1-甲酸、(15.058)3,4,5-三羟基苯甲酸丙基酯、(15.059)喹啉-8-醇、(15.060)喹啉-8-醇硫酸酯(2:1)、(15.061) {6-[({[(1-甲基-1H-四唑-5-基)(苯基)亚甲基]氨基}氧基)甲基]吡啶-2-基}氨基甲酸叔丁酯、(15.062)5-氟-4-亚氨基-3-甲基-1-[(4-甲基苯基)磺酰基]-3,4-二氢嘧啶- 2(1H)-酮;(15.063)描述于US20140221362(以引用的方式并入本文中)中的农药中的任一种,如其中的权利要求1的化合物中的任一种;(15.064)芬皮西米(fenpicoxamid)、(15.065)托珀卡(tolprocarb)、(15.066)皮卡布佐(picarbutrazox)、(15.067)皮拉福米(pyraziflumid)、(15.068)英派福姆(Inpyrfluxam) (WO2011162397)、(15.069)喹诺福林(quinofumelin)、(15.070)氟茚唑菌胺 (fluindapyr)、(15.071)皮拉珀朋(pyrapropoyne)、(15.072)5-氟嘧啶酮、(15.073) 来自以引用的方式并入本文中的公开的专利申请WO2014/201326、 WO2014/201327、WO2013/071169、WO2014/182951、WO2014/182945、 WO2014/182950的任何杀真菌化合物。
在本发明的上下文中使用的杀真菌剂的尤其优选的混合物选自由以下组成的群组F16:丙硫菌唑和氟吡菌酰胺的混合物、丙硫菌唑和戊唑醇的混合物、丙硫菌唑、联苯吡菌胺和戊唑醇的混合物、丙硫菌唑、联苯吡菌胺和肟菌酯的混合物、丙硫菌唑、联苯吡菌胺和螺环菌胺的混合物、丙硫菌唑、联苯吡菌胺和百菌清的混合物、丙硫菌唑和戊唑醇和甲霜灵的混合物、丙硫菌唑、联苯吡菌胺和氟吡菌酰胺的混合物、丙硫菌唑和氟嘧菌酯的混合物、丙硫菌唑和肟菌酯的混合物、丙硫菌唑和戊菌隆的混合物、丙硫菌唑和螺环菌胺的混合物、戊唑醇和联苯吡菌胺的混合物、戊唑醇和甲霜灵的混合物、戊唑醇和氟嘧菌酯的混合物、戊唑醇和肟菌酯的混合物、戊唑醇和环酰菌胺的混合物、戊唑醇和氟吡菌胺的混合物、戊唑醇和螺环菌胺的混合物、戊唑醇和戊菌隆的混合物、氟吡菌酰胺和戊唑醇的混合物、氟吡菌酰胺和螺环菌胺的混合物、氟吡菌酰胺和嘧霉胺的混合物、氟吡菌酰胺和肟菌酯的混合物、氟吡菌酰胺和三唑醇的混合物、氟吡菌酰胺和三乙膦酸或其盐和酯,尤其三乙膦酸铝的混合物、氟吡菌酰胺和吡虫啉的混合物、氟吡菌酰胺和螺环菌胺的混合物、氟吡菌酰胺和氟嘧菌酯的混合物、联苯吡菌胺和螺环菌胺的混合物、联苯吡菌胺和肟菌酯的混合物、联苯吡菌胺和百菌清的混合物、联苯吡菌胺和氟嘧菌酯的混合物、肟菌酯和异噻菌胺的混合物、肟菌酯和甲霜灵的混合物、肟菌酯和丙森锌的混合物、肟菌酯和嘧霉胺的混合物、肟菌酯和三乙膦酸或其盐和酯,尤其三乙膦酸铝的混合物、肟菌酯和氟吡菌胺的混合物、丙森锌和氟吡菌胺的混合物、三乙膦酸或其盐和酯,尤其三乙膦酸铝和氟吡菌胺的混合物、联苯吡菌胺和异芬氯氟醚菌唑的混合物、联苯吡菌胺和梅芬氯氟醚菌唑的混合物、甲霜灵和异芬氯氟醚菌唑的混合物、甲霜灵和梅芬氯氟醚菌唑的混合物、丙硫菌唑和异芬氯氟醚菌唑的混合物、丙硫菌唑和梅芬氯氟醚菌唑的混合物、戊唑醇和异芬氯氟醚菌唑的混合物、戊唑醇和梅芬氯氟醚菌唑的混合物、肟菌酯和异芬氯氟醚菌唑的混合物、肟菌酯和梅芬氯氟醚菌唑的混合物、氟嘧菌酯和异芬氯氟醚菌唑的混合物、氟嘧菌酯和梅芬氯氟醚菌唑的混合物、氟吡菌酰胺和异芬氯氟醚菌唑的混合物、氟吡菌酰胺和梅芬氯氟醚菌唑的混合物、螺环菌胺和异芬氯氟醚菌唑的混合物、螺环菌胺和梅芬氯氟醚菌唑的混合物、氟唑菌酰羟胺和异芬氯氟醚菌唑的混合物、氟唑菌酰羟胺和梅芬氯氟醚菌唑的混合物、吡唑醚菌酯和异芬氯氟醚菌唑的混合物、吡唑醚菌酯和梅芬氯氟醚菌唑的混合物、氟唑菌酰胺和异芬氯氟醚菌唑的混合物、氟唑菌酰胺和梅芬氯氟醚菌唑的混合物。
如本文所描述的适用于本发明的植物或种子上或与本发明的植物或种子一起使用的作物保护中的杀真菌剂/杀真菌试剂能够防除真菌或卵菌。如本文所用,术语“防除真菌/卵菌”意指杀死真菌/卵菌或阻止或阻碍其发育或其生长或防止或阻碍其穿透到植物组织中或以其为养料。
除草剂
适用于本发明的上下文的除草剂的实例公开于群组H1中:
乙草胺(Acetochlor)、三氟羧草醚(acifluorfen)、三氟羧草醚钠(acifluorfen-sodium)、苯草醚(aclonifen)、甲草胺(alachlor)、草毒死(allidochlor)、禾草灭(alloxydim)、禾草灭钠、莠灭净(ametryn)、氨唑草酮(amicarbazone)、先甲草胺(amidochlor)、酰嘧磺隆(amidosulfuron)、4-氨基-3-氯-6-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-氟吡啶-2-甲酸、氯丙嘧啶酸(aminocyclopyrachlor)、氯丙嘧啶酸钾、甲基氯丙嘧啶酸、氯氨吡啶酸(aminopyralid)、杀草强(amitrole)、氨基磺酸铵 (ammoniumsulfamate)、莎稗磷(anilofos)、黄草灵(asulam)、莠去津(atrazine)、唑啶草酮(azafenidin)、四唑嘧磺隆(azimsulfuron)、氟丁酰草胺(beflubutamid)、草除灵(benazolin)、乙基草除灵、氟草胺(benfluralin)、呋草磺(benfuresate)、苄嘧磺隆(bensulfuron)、甲基苄嘧磺隆、地散磷(bensulide)、灭草松(bentazone)、苯并双环酮(benzobicyclon)、吡草酮(benzofenap)、双环吡喃酮(bicyclopyron)、治草醚(bifenox)、双丙氨酰膦(bilanafos)、双丙氨酰膦钠、双草醚(bispyribac)、双草醚钠、除草定(bromacil)、溴丁酰草胺(bromobutide)、溴酚肟(bromofenoxim)、溴苯腈(bromoxynil)、丁酸溴苯腈、溴苯腈钾、庚酸溴苯腈和辛酸溴苯腈、羟草酮(busoxinone)、丁草胺(butachlor)、氟丙嘧草酯(butafenacil)、抑草磷(butamifos)、丁烯草胺(butenachlor)、比达宁(butralin)、丁苯草酮 (butroxydim)、丁草敌(butylate)、唑草胺(cafenstrole)、草长灭(carbetamide)、唑草酮(carfentrazone)、乙基唑草酮、豆科威(chloramben)、氯溴隆 (chlorbromuron)、伐草克(chlorfenac)、伐草克钠、燕麦酯(chlorfenprop)、氯芴素(chlorflurenol)、甲基氯芴素、氯草敏(chloridazon)、氯嘧磺隆(chlorimuron)、乙基氯嘧磺隆、氯苯并吡咯酮(chlorophthalim)、绿麦隆(chlorotoluron)、二甲基敌草索(chlorthal-dimethyl)、氯磺隆(chlorsulfuron)、吲哚酮草酯(cinidon)、乙基吲哚酮草酯、环庚草醚(cinmethylin)、醚磺隆(cinosulfuron)、氯酰草膦 (clacyfos)、烯草酮(clethodim)、炔草酸(clodinafop)、炔丙基炔草酸、异恶草酮(clomazone)、氯甲酰草胺(clomeprop)、二氯吡啶酸(clopyralid)、氯酯磺草胺(cloransulam)、甲基氯酯磺草胺、苄草隆(cumyluron)、氰胺(cyanamide)、氰草津(cyanazine)、环草敌(cycloate)、环啦嗪酸酯(cyclopyrimorate)、环磺隆(cyclosulfamuron)、环杀草(cycloxydim)、氰氟草酯(cyhalofop)、丁基氰氟草酯、环草津(cyprazine)、2,4-D、2,4-D-(2-丁氧乙基)(butotyl)、-丁基、-二甲基铵、-二乙醇胺、-乙基、-2-乙基己基、-异丁基、-异辛基、-异丙基铵、-钾、- 三异丙醇铵和-三乙醇胺、2,4-DB、2,4-DB-丁基、-二甲基铵、-异辛基、-钾和-钠、杀草隆(daimuron)(莎扑隆(dymron))、茅草枯(dalapon)、棉隆(dazomet)、正癸醇(n-decanol)、甜菜安(desmedipham)、脱磺酰吡唑特(detosyl-pyrazolate) (DTP)、麦草畏、敌草腈(dichlobenil)、2-(2,4-二氯苯甲基)-4,4-二甲基-1,2-恶唑啶-3-酮、2-(2,5-二氯苯甲基)-4,4-二甲基-1,2-恶唑啶-3-酮、2,4-滴丙酸 (dichlorprop)、2,4-滴丙酸-P、禾草灵(diclofop)、甲基禾草灵、禾草灵-P-甲基、双氯磺草胺(diclosulam)、野燕枯(difenzoquat)、吡氟草胺(diflufenican)、二氟吡隆(diflufenzopyr)、二氟吡隆钠、恶唑隆(dimefuron)、哌草丹(dimepiperate)、二甲草胺(dimethachlor)、异戊乙净(dimethametryn)、二甲噻草胺 (dimethenamid)、二甲噻草胺-P、二甲磺隆(dimetrasulfuron)、敌乐胺 (dinitramine)、特乐酚(dinoterb)、草乃敌(diphenamid)、敌草快(diquat)、二溴化敌草快、氟硫草定(dithiopyr)、敌草隆(diuron)、DNOC、草藻灭(endothal)、 EPTC、戊草丹(esprocarb)、乙丁烯氟灵(ethalfluralin)、胺苯磺隆 (ethametsulfuron)、甲基胺苯磺隆、乙嗪草酮(ethiozin)、乙呋草黄(ethofumesate)、氯氟草醚(ethoxyfen)、乙基氯氟草醚、乙氧嘧磺隆(ethoxysulfuron)、乙氧苯草胺(etobenzanid)、F-9600、F-5231(即N-{2-氯-4-氟-5-[4-(3-氟丙基)-5-氧代-4,5- 二氢-1H-四唑-1-基]苯基}乙磺酰胺)、F-7967(即3-[7-氯-5-氟-2-(三氟甲基)-1H- 苯并咪唑-4-基]-1-甲基-6-(三氟甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮)、恶唑禾草灵(fenoxaprop)、恶唑禾草灵-P、乙基恶唑禾草灵、恶唑禾草灵-P-乙基、苯磺恶唑草(fenoxasulfone)、芬坤特昂(fenquinotrione)、四唑酰草胺(fentrazamide)、麦草伏(flamprop)、麦草伏-M-异丙基、麦草伏-M-甲基、嘧啶磺隆(flazasulfuron)、双氟磺草胺(florasulam)、吡氟禾草灵(fluazifop)、吡氟禾草灵-P、丁基吡氟禾草灵、吡氟禾草灵-P-丁基、氟酮磺隆(flucarbazone)、氟酮磺隆钠、氟吡磺隆 (flucetosulfuron)、氟消草(fluchloralin)、氟噻草胺(flufenacet)、氟哒嗪草酯 (flufenpyr)、乙基氟哒嗪草酯、唑嘧磺草胺(flumetsulam)、氟胺草酯(flumiclorac)、戊基氟胺草酯、丙炔氟草胺(flumioxazin)、伏草隆(fluometuron)、抑草丁 (flurenol)、丁基抑草丁、抑草丁二甲基铵和甲基抑草丁、乙羧氟草醚 (fluoroglycofen)、乙基乙羧氟草醚、四氟丙酸(flupropanate)、氟啶嘧磺隆 (flupyrsulfuron)、甲基氟啶嘧磺隆钠、氟啶草酮(fluridone)、氟咯草酮 (flurochloridone)、氟草定(fluroxypyr)、(1-甲基庚基)氟草定(fluroxypyr-meptyl)、呋草酮(flurtamone)、氟噻草酯(fluthiacet)、甲基氟噻草酯、氟磺胺草醚 (fomesafen)、氟磺胺草醚钠、甲酰嘧磺隆(foramsulfuron)、杀木膦(fosamine)、草铵膦、草铵膦铵、草铵膦-P-钠、草铵膦-P-铵、草铵膦-P-钠、草甘膦、草甘膦铵、草甘膦异丙基铵、草甘膦二铵、草甘膦二甲基铵、草甘膦钾、草甘膦钠和草甘膦三甲基硫、H-9201(即异丙基硫代磷酸胺O-(2,4-二甲基-6-硝基苯基)O-乙基酯)、氟氯吡啶酯(halauxifen)、甲基氟氯吡啶酯、哈萨芬(halosafen)、氯吡嘧磺隆(halosulfuron)、甲基氯吡嘧磺隆、合氯氟(haloxyfop)、合氯氟-P、乙氧基乙基合氯氟、合氯氟-P-乙氧基乙基、甲基合氯氟、合氯氟-P-甲基、六嗪酮 (hexazinone)、HW-02(即乙基-(2,4-二氯苯氧基)乙酸1-(二甲氧基磷酰基)酯)、咪草酸(imazamethabenz)、甲基咪草酸、甲氧咪草烟(imazamox)、甲氧咪草烟铵、甲咪唑烟酸(imazapic)、甲咪唑烟酸铵、灭草烟(imazapyr)、灭草烟异丙基铵、灭草喹(imazaquin)、灭草喹铵、咪草烟(imazethapyr)、咪草烟亚胺鎓、唑吡嘧磺隆(imazosulfuron)、茚草酮(indanofan)、茚嗪氟草胺(indaziflam)、碘甲磺隆(iodosulfuron)、甲基碘甲磺隆钠、碘苯腈(ioxynil)、辛酸碘苯腈、碘苯腈钾和碘苯腈钠、艾分卡巴腙(ipfencarbazone)、异丙隆(isoproturon)、异恶隆(isouron)、异恶草胺(isoxaben)、异恶唑草酮、卡草灵(karbutilate)、KUH- 043(即3-({[5-(二氟甲基)-1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-4-基]甲基}磺酰基)-5,5- 二甲基-4,5-二氢-1,2-恶唑)、酮螺多克斯(ketospiradox)、乳氟禾草灵(lactofen)、环草定(lenacil)、利谷隆(linuron)、MCPA、MCPA-(2-丁氧乙基)、-二甲基铵、 -2-乙基己基、-异丙基铵、-钾和-钠、MCPB、MCPB-甲基、-乙基和-钠、甲氯丙酸(mecoprop)、甲氯丙酸钠和甲氯丙酸-(2-丁氧乙基)、甲氯丙酸-P、甲氯丙酸- P-(2-丁氧乙基)、-二甲基铵、-2-乙基己基和-钾、苯噻酰草胺(mefenacet)、氟磺酰草胺(mefluidide)、甲基二磺隆(mesosulfuron)、甲基甲基二磺隆、硝磺草酮、甲基苯噻隆(methabenzthiazuron)、威百亩、恶唑酰草胺、苯嗪草酮、吡草胺 (metazachlor)、嗪吡嘧磺隆(metazosulfuron)、甲基苯噻隆(methabenzthiazuron)、甲硫嘧磺隆(methiopyrsulfuron)、甲噻唑啉(methiozolin)、异硫氰酸甲酯、溴谷隆(metobromuron)、异丙甲草胺(metolachlor)、S-异丙甲草胺、磺草唑胺 (metosulam)、甲氧隆(metoxuron)、赛克津(metribuzin)、甲磺隆(metsulfuron)、甲基甲磺隆、禾草敌(molinat)、绿谷隆(monolinuron)、单嘧磺隆(monosulfuron)、单嘧磺隆酯、MT-5950(即N-(3-氯-4-异丙基苯基)-2-甲基戊酰胺)、NGGC-011、敌草胺(napropamide)、NC-310(即[5-(苯甲基氧基)-1-甲基-1H-吡唑-4-基](2,4- 二氯苯基)甲酮)、草不隆(neburon)、烟嘧磺隆(nicosulfuron)、壬酸(nonanoic acid)(壬酸(pelargonic acid))、达草灭(norflurazon)、油酸(脂肪酸)、坪草丹 (orbencarb)、嘧苯胺磺隆(orthosulfamuron)、氨磺乐灵(oryzalin)、丙炔恶草酮(oxadiargyl)、恶草酮(oxadiazon)、环氧嘧磺隆(oxasulfuron)、恶嗪草酮(oxaziclomefon)、乙氧氟草醚(oxyfluorfen)、百草枯(paraquat)、二氯化百草枯(paraquat dichloride)、克草猛(pebulate)、二甲戊乐灵(pendimethalin)、平速烂(penoxsulam)、五氯苯酚(pentachlorphenol)、环戊恶草酮(pentoxazone)、烯草胺(pethoxamid)、石油、甜菜宁(phenmedipham)、毒莠定(picloram)、氟吡草胺(picolinafen)、唑啉草酯(pinoxaden)、哌草磷(piperophos)、丙草胺 (pretilachlor)、氟嘧磺隆(primisulfuron)、甲基氟嘧磺隆、氨基丙氟灵(prodiamine)、环苯草酮(profoxydim)、扑灭通(prometon)、扑草净(prometryn)、毒草胺(propachlor)、敌稗(propanil)、普拔草(propaquizafop)、扑灭津(propazine)、苯胺灵(propham)、异丙草胺(propisochlor)、丙苯磺隆(propoxycarbazone)、丙苯磺隆钠、丙嘧磺隆(propyrisulfuron)、戊炔草胺(propyzamide)、苄草丹 (prosulfocarb)、氟磺隆(prosulfuron)、双唑草腈(pyraclonil)、吡草醚(pyraflufen)、乙基吡草醚、磺酰草吡唑、吡唑特(pyrazolynate)(苄草唑(pyrazolate))、吡嘧磺隆(pyrazosulfuron)、乙基吡嘧磺隆、苄草芬(pyrazoxyfen)、酯草醚 (pyribambenz)、异丙酯草醚、丙酯草醚、嘧啶肟草醚(pyribenzoxim)、稗草丹 (pyributicarb)、吡啶达醇(pyridafol)、哒草特(pyridate)、环酯草醚(pyriftalid)、嘧草醚(pyriminobac)、甲基嘧草醚、嘧磺凡(pyrimisulfan)、嘧硫草醚(pyrithiobac)、嘧硫草醚钠、吡咯磺隆(pyroxasulfone)、嘧氧磺胺(pyroxsulam)、二氯喹啉酸(quinclorac)、喹草酸(quinmerac)、灭藻醌(quinoclamine)、喹禾灵(quizalofop)、乙基喹禾灵、喹禾灵-P、喹禾灵-P-乙基、喹禾灵-P-四氢糠基 (quizalofop-P-tefuryl)、砜嘧磺隆(rimsulfuron)、索氟纳西(saflufenacil)、稀禾定(sethoxydim)、环草隆(siduron)、西玛津(simazine)、西草净(simetryn)、 SL-261、磺草酮(sulcotrione)、甲磺草胺(sulfentrazone)、甲嘧磺隆(sulfometuron)、甲基甲嘧磺隆、磺酰磺隆(sulfosulfuron)、SYN-523、SYP-249(即5-[2-氯-4-(三氟甲基)苯氧基]-2-硝基苯甲酸1-乙氧基-3-甲基-1-氧代丁-3-烯-2-基酯)、SYP-300 (即1-[7-氟-3-氧代-4-(丙-2-炔-1-基)-3,4-二氢-2H-1,4-苯并恶嗪-6-基]-3-丙基-2-硫酮基咪唑烷-4,5-二酮)、2,3,6-TBA、三氯乙酸(TCA)、三氯乙酸钠、丁噻隆 (tebuthiuron)、特呋喃隆(tefuryltrione)、环磺酮(tembotrione)、吡喃草酮 (tepraloxydim)、特草定(terbacil)、特草灵(terbucarb)、甲氧去草净(terbumeton)、特丁津(terbuthylazin)、去草净(terbutryn)、甲氧噻草胺(thenylchlor)、噻草啶 (thiazopyr)、噻酮磺隆(thiencarbazone)、甲基噻酮磺隆、噻吩磺隆 (thifensulfuron)、甲基噻吩磺隆、禾草丹(thiobencarb)、泰芬赛(tiafenacil)、拓扑雷特(tolpyralate)、苯吡唑草酮、肟草酮(tralkoxydim)、氟酮磺草胺 (triafamone)、野麦畏(tri-allate)、醚苯磺隆(triasulfuron)、三嗪氟草胺(triaziflam)、苯磺隆(tribenuron)、甲基磺隆(tribenuron-methyl)、绿草定(triclopyr)、草达津(trietazine)、三氟啶磺隆(trifloxysulfuron)、三氟啶磺隆钠、三氟草嗪(trifludimoxazin)、氟乐灵(trifluralin)、氟胺磺隆(triflusulfuron)、甲基氟胺磺隆、三氟甲磺隆(tritosulfuron)、硫酸脲、灭草猛(vernolate)、XDE-848、ZJ-0862 (即3,4-二氯-N-{2-[(4,6-二甲氧基嘧啶-2-基)氧基]苯甲基}苯胺),和以下化合物:
Figure BDA0002911161790002011
群组H2公开尤其在本发明的上下文中使用的除草剂,其选自由以下组成的群组:
乙草胺、甲草胺、麦草畏、吡氟草胺、氟噻草胺、氟草定、甲酰嘧磺隆、草铵膦、L-草铵膦、草甘膦、六嗪酮、甲氧咪草烟、咪草烟、茚嗪氟草胺、碘甲磺隆、异恶唑草酮、甲基二磺隆、硝磺草酮、异丙甲草胺、赛克津、甲磺隆、二甲戊乐灵、平速烂、毒莠定、唑啉草酯、嘧氧磺胺、喹草酸、砜嘧磺隆、噻酮磺隆、环磺酮、噻吩磺隆和/或苯磺隆,和这些除草剂的酯和/或农学上可接受的盐。
群组H3公开优选的除草剂,其选自由以下组成的群组:
乙草胺、麦草畏、吡氟草胺、氟噻草胺、甲酰嘧磺隆、草铵膦、L-草铵膦、草甘膦、碘甲磺隆、异恶唑草酮、甲基二磺隆、硝磺草酮、赛克津、唑啉草酯、环磺酮和/或噻酮磺隆,和这些除草剂的酯和/或农学上可接受的盐。
如果草甘膦盐用作除草剂,那么优选草甘膦异丙胺盐、草甘膦钾盐、草甘膦钠盐、草甘膦三甲基锍盐。
如果(L-)草铵膦盐用作除草剂,那么优选(L-)草铵膦铵盐、(L-)草铵膦钾盐和(L-)草铵膦钠盐。
如果甲酰嘧磺隆盐用作除草剂,那么优选甲酰嘧磺隆钠。
如果碘甲磺隆酯和/或其盐用作除草剂,那么优选甲基碘甲磺隆和甲基碘甲磺隆钠。
如果甲基二磺隆酯和/或其盐用作除草剂,那么优选甲基甲基二磺隆和甲基甲基二磺隆钠。
如果噻酮磺隆酯和/或其盐用作除草剂,那么优选甲基噻酮磺隆和甲基噻酮磺隆钠。
在本发明的上下文中使用的除草剂的优选混合物公开于群组H4中:乙草胺和本文提及的其它除草剂的混合物、麦草畏、其酯和/或盐和本文提及的其它除草剂的混合物、吡氟草胺和本文提及的其它除草剂的混合物、氟噻草胺和本文提及的其它除草剂的混合物、草铵膦和/或其盐(优选地草铵膦铵盐、草铵膦钾盐和草铵膦钠盐)和本文提及的其它除草剂的混合物、L-草铵膦和/或其盐(优选地L-草铵膦铵盐、L-草铵膦钾盐和L-草铵膦钠盐)和本文提及的其它除草剂的混合物、茚嗪氟草胺和本文提及的其它除草剂的混合物、异恶唑草酮和本文提及的其它除草剂的混合物、甲基二磺隆酯和/或其盐(优选地甲基甲基二磺隆(甲基二磺隆钠))和本文提及的其它除草剂的混合物、赛克津和本文提及的其它除草剂的混合物、噻酮磺隆酯和/或其盐(优选地甲基噻酮磺隆(噻酮磺隆钠))和本文提及的其它除草剂的混合物、环磺酮和本文提及的其它除草剂的混合物。
在本发明的上下文中使用的尤其优选的除草剂混合物公开于群组H5中:
乙草胺和异恶唑草酮的混合物、乙草胺和环磺酮的混合物、吡氟草胺和氟噻草胺的混合物、吡氟草胺和赛克津的混合物、草铵膦和/或其盐和茚嗪氟草胺的混合物,尤其草铵膦铵和茚嗪氟草胺的混合物、L-草铵膦和/或其盐和茚嗪氟草胺的混合物,尤其L-草铵膦铵和茚嗪氟草胺的混合物、甲基甲基二磺隆(钠) 和甲基碘甲磺隆(钠)的混合物、甲基甲基二磺隆(钠)、甲基碘甲磺隆(钠) 和氟噻草胺的混合物、环磺酮和异恶唑草酮的混合物、环磺酮、异恶唑草酮和乙草胺的混合物。
本文中所提及的除草剂和除草剂混合物可以用于出苗前施用和/或出苗后施用。
根据本发明,本文中所提及的除草剂和除草剂混合物可以随时间推移以分次施用来施用。另一可能性为施用个别活性成分或包含呈多个部分的活性成分的混合物(依序施用),例如出苗前施用,随后出苗后施用或早期出苗后施用,随后中期或后期出苗后施用。
在一个实施例中,将如在群组H1到H5中的任一个中列出的除草剂用于包含本发明的优良事件EE-GM4的种子或植物上,或用于其中待种植/播种所述种子或植物的土壤上,并且所述除草剂不是异恶唑草酮、苯吡唑草酮或硝磺草酮。在另一实施例中,将如在群组H1到H5中的任一个中列出的除草剂用于包含本发明的优良事件EE-GM4的种子或植物上,或用于其中待种植/播种所述种子或植物的土壤上,其中包含EE-GM4的所述植物或种子还含有一种或多种来自PI 88788、PI 548402、PI 209332或PI 437654的大豆SCN抗性基因,或包含选自由以下组成的群组的大豆SCN抗性基因座或基因中的一种或多种:rhg1、rhg1- b、rhg2、rhg3、Rhg4、Rhg5、qSCN11、cqSCN-003、cqSCN-005、cqSCN-006和 cqSCN-007。
在本发明的上下文中适用的植物生长调节剂实例公开于群组P1中:
阿拉酸式苯、阿拉酸式苯-S-甲基、5-氨基乙酰丙酸、环丙嘧啶醇、6-苯甲基氨基嘌呤、油菜素内酯(Brassinolid)、儿茶素(catechine)、氯化矮壮素(chlormequatchloride)、调果酸(cloprop)、环丙酸酰胺(cyclanilide)、3-(环丙-1-烯基)丙酸、丁酰肼(daminozide)、棉隆(dazomet)、正癸醇、调呋酸(dikegulac)、调呋酸钠、草藻灭(endothal)、草藻灭二钾、草藻灭二钠和草藻灭单(N,N-二甲基烷基铵)、乙烯利(ethephon)、氟节胺(flumetralin)、抑草丁(flurenol)、丁基抑草丁、呋嘧醇(flurprimidol)、福芬素(forchlorfenuron)、赤霉酸(gibberellic acid)、依纳素(inabenfide)、吲哚-3-乙酸(IAA)、4-吲哚-3-基丁酸、稻瘟灵(isoprothiolane)、噻菌灵(probenazole)、茉莉酸(jasmonic acid)、顺丁烯二酰肼(maleic hydrazide)、氯化甲哌鎓(mepiquat chloride)、1-甲基环丙烯、茉莉酸甲基酯(methyl jasmonate)、2-(1-萘基)乙酰胺、1-萘基乙酸、2-萘基氧基乙酸、硝基苯酚盐混合物、多效唑、N-(2-苯基乙基)-β-丙氨酸、N-苯基邻氨甲酰苯甲酸、调环酸 (prohexadione)、调环酸钙、莱莉酸丙醋(prohydrojasmone)、水杨酸、独脚金内酯(strigolactone)、四氯硝基苯(tecnazene)、噻苯隆(thidiazuron)、三十烷醇 (triacontanol)、抗倒酯(trinexapac)、乙基抗倒酯、茨托德夫(tsitodef)、烯效唑 (uniconazole)、烯效唑-P。
生物防治剂(BCA)群组:
生物防治剂为,确切地说,细菌、真菌或酵母、原虫、病毒、昆虫病原性线虫、包括蛋白质或二级代谢物的由微生物体产生的产物,和尤其植物性提取物的植物性药材,其确切地说,当植物或种子经历如干旱或植物病原体/害虫攻击的压力时,支持或增强植物或种子生长或发育以便保护或增加植物产率(例如,通过杀死植物病原体或植物害虫或阻止或阻碍其发育或其生长或防止或阻碍其穿透到植物组织中或其在植物组织上吸吮/进食)。因此,根据本发明的生物防治剂 (BCA)群组(1)到(7)为:
BCA群组(1):细菌
BCA群组(2):真菌或酵母
BCA群组(3):原虫
BCA群组(4):病毒
BCA群组(5):昆虫病原性线虫
BCA群组(6):包括蛋白质或二级代谢物的由微生物体产生的产物
BCA群组(7):尤其植物性提取物的植物性药材。
这些生物防治剂(“BCA”)群组BCA1到BCA7进一步如下表征:
BCA1:根据本发明,在术语“细菌”下概述的生物防治剂包括但不限于形成孢子、定殖根部的细菌或适用作生物杀昆虫剂、生物杀真菌剂或生物杀线虫剂的细菌。待根据本发明使用或采用的所述细菌包括但不限于:
(1.1)放射形土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter),尤其菌株K84(来自加利福尼亚州AgBioChem称为Galltrol-A的产品)或菌株K1026(来自美国 Becker Underwood的称为Nogall的产品),(1.2)葡萄土壤杆菌(Agrobacterium vitis),尤其非病原性菌株VAR03-1,(1.3)茎瘤固氮根瘤菌(Azorhizobium caulinodans),优选菌株ZB-SK-5,(1.4)亚马逊固氮螺菌(Azospirillum amazonense),(1.5)巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense),(1.6)喜卤固氮螺菌(Azospirillum halopraeference),(1.7)伊拉克固氮螺菌(Azospirillum irakense), (1.8)生脂固氮螺菌(Azospirillum lipoferum),(1.9)褐球固氮菌(Azotobacter chroococcum),优选菌株H 23(CECT 4435)(参看《应用土壤生态学(Applied Soil Ecology)》12(1999)51±59),(1.10)棕色固氮菌(Azotobactervinelandii),优选菌株ATCC 12837(参看《应用土壤生态学》12(1999)51±59),(1.11)芽孢杆菌属菌株AQ175(ATCC登录号55608),(1.12)芽孢杆菌属菌株AQ177(ATCC 登录号55609),(1.13)芽孢杆菌属菌株AQ178(ATCC登录号53522),(1.14) 嗜酸热芽孢杆菌(Bacillusacidocaldarius),(1.15)嗜酸土壤芽孢杆菌(Bacillus acidoterrestris),(1.16)土壤芽孢杆菌(Bacillus agri)(参看WO 2012/140207), (1.17)亚莎华芽孢杆菌(参看WO 2012/140207),(1.18)白色芽孢杆菌(Bacillus albolactis)(参看WO 2012/140207),(1.19)嗜碱芽孢杆菌(Bacillus alcalophilus), (1.20)蜂房芽孢杆菌(Bacillus alvei),(1.21)氨基糖苷芽孢杆菌(Bacillus aminoglucosidicus),(1.22)噬氨芽孢杆菌(Bacillusaminovorans),(1.23)溶淀粉芽孢杆菌(Bacillus amylolyticus)(也称为溶淀粉类芽孢杆菌(Paenibacillus amylolyticus)),(1.24)解淀粉芽孢杆菌,尤其解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a(参看WO 2012/140207)或解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42(DSM 231179)(来自德国ABiTEP称为
Figure BDA0002911161790002061
的产品)或解淀粉芽孢杆菌菌株B3或解淀粉芽孢杆菌菌株D747(来自新西兰Etec Crop Solutions称为
Figure BDA0002911161790002062
的产品或来自美国 Certis的称为Double NickelTM的产品)、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1(ATCC登录号PTA-4838,称为来自Valent的Aveo EZ)、解淀粉芽孢杆菌TJ1000(也称为解淀粉芽孢杆菌(Fukumoto)Priest等人(ATCC BAA-390)或来自 US2012/0149571的解淀粉芽孢杆菌菌株,如解淀粉芽孢杆菌AP-136(NRRL B- 50330;NRRL B-50614)、解淀粉芽孢杆菌AP-188(NRRL B-50331;NRRL B-50615)、解淀粉芽孢杆菌AP-218(NRRL B-50618)、解淀粉芽孢杆菌AP-219 (NRRL B-50332、NRRL B-50619)和解淀粉芽孢杆菌AP-295(NRRL B-50333、 NRRL B-50620)或解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600(以前的枯草芽孢杆菌菌株MBI 600)或解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600组合顺式茉莉酮或解淀粉芽孢杆菌菌株 F727,(1.25)解硫胺素芽孢杆菌(Bacillusaneurinolyticus),(1.26)萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus),(1.27)固氮芽孢杆菌(Bacillus azotoformans),(1.28) 栗褐芽孢杆菌(Bacillus badius),(1.29)蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)(同义词:恩多赛摩芽孢杆菌(Bacillus endorhythmos)、美杜莎芽孢杆菌(Bacillus medusa)),尤其蜡样芽孢杆菌菌株CNCM I-1562(参看US 6,406,690)或菌株 BP01(ATCC 55675)(来自美国Arysta称为Mepichlor的产品或Mepplus,美国 Micro-Flo有限责任公司)的孢子,(1.30)角质孢子芽孢杆菌(Bacillus chitinosporus),尤其菌株AQ746(登录号NRRL B-21618),(1.31)环芽孢杆菌 (Bacillus circulans)(1.32)凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans),尤其菌株TQ33, (1.33)苛求芽孢杆菌(Bacillusfastidiosus),(1.34)坚强芽孢杆菌,尤其菌株I- 1582(来自拜耳作物科学称为Bionem、Flocter或VOTIVO的产品,CNCM 1- 1582)、坚强芽孢杆菌菌株NRRL B-67003或坚强芽孢杆菌菌株NRRL B-67518, (1.35)库斯塔克芽孢杆菌(Bacillus kurstaki),(1.36)栖乳芽孢杆菌(Bacillus lacticola),(1.37)乳病芽孢杆菌(Bacillus lactimorbus),(1.38)乳酸芽孢杆菌 (Bacillus lactis),(1.39)侧孢芽孢杆菌(也称为侧孢短芽孢杆菌)(来自南非Agro- Organics称为Bio-Tode的产品)、侧孢芽孢杆菌ATCC PTA-3952、侧孢芽孢杆菌 ATCCPTA-3593,(1.40)灿烂芽孢杆菌(Bacillus lautus),(1.41)缓病芽孢杆菌 (Bacilluslentimorbus),(1.42)迟缓芽孢杆菌,(1.43)地衣芽孢杆菌,尤其菌株 SB3086(来自美国Novozymes Biologicals称为EcoGuard TM Biofungicide或 Green Releaf的产品)、地衣芽孢杆菌CH200或地衣芽孢杆菌RTI 184或地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合或地衣芽孢杆菌ATCC PTA-6175, (1.44)摩洛哥芽孢杆菌(Bacillus maroccanus),(1.45)美杜莎芽孢杆菌,(1.46) 巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)(来自BioArc称为
Figure BDA0002911161790002071
的产品)或巨大芽孢杆菌菌株YFM3.25,(1.47)测量芽孢杆菌(Bacillusmetiens),(1.48)莫海威芽孢杆菌(Bacillus mojavensis),尤其菌株SR11(CECT-7666)或莫海威芽孢杆菌AP-209(US 2012/0149、NRRL B-50616),(1.49)覃状芽孢杆菌(Bacillusmycoides),尤其菌株AQ726(登录号NRRL B21664)或分离物J(来自美国Certis 称为BmJ的产品),(1.50)线虫芽孢杆菌,(1.51)致黑芽孢杆菌(Bacillus nigrificans),(1.52)日本金龟子芽孢杆菌(Bacillus popilliae)(来自Bio-Cro公司称为Cronox的产品),(1.53)冷解糖芽孢杆菌(Bacillus psychrosaccharolyticus), (1.54)短小芽孢杆菌,尤其菌株GB34(登录号ATCC 700814),(来自德国拜耳作物科学的称为Yield
Figure BDA0002911161790002072
的产品)和菌株QST2808(登录号NRRL B-30087), (来自拜耳作物科学称为Sonata QST
Figure BDA0002911161790002073
的产品)或菌株BU F-33,(来自美国Becker Underwood的称为Integral F-33的产品)或菌株AQ717(登录号NRRL B21662),(1.55)暹罗芽孢杆菌(Bacillus siamensis),尤其菌株KCTC 13613T,(1.56)史氏芽孢杆菌(Bacillus smithii),(1.57)球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus),尤其血清型H5a5b菌株2362,(来自美国Valent BioSciences称为
Figure BDA0002911161790002081
的产品),(1.58)枯草芽孢杆菌,尤其菌株GB03(登录号ATCC SD- 1397),(来自德国拜耳作物科学的称为
Figure BDA0002911161790002082
的产品)和菌株QST713/AQ713 (登录号NRRL B-21661),(来自拜耳作物科学称为Serenade
Figure BDA0002911161790002083
Serenade Soil和Serenade Max的产品)和菌株AQ 153(ATCC登录号55614)和菌株 AQ743(登录号NRRL B-21665)和菌株DB 101,(来自南非Dagutat Biolab称为Shelter的产品)和菌株DB 102,(来自南非Dagutat Bio lab称为Artemis的产品)和枯草芽孢杆菌菌株MBI 600(现在的解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600),(例如来自美国Becker Underwood的称为Subtilex的产品)或枯草芽孢杆菌Y1336 (可以
Figure BDA0002911161790002084
WP自中国台湾Bion-Tech获得,以注册号4764、5454、5096和5277 在中国台湾注册为生物杀真菌剂)或枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株FZB24,(来自美国Novozymes称为
Figure BDA0002911161790002085
的产品),由农业研究服务培养物中心(Agricultural Research Service Culture Collection)指定登录号NRRL B-50349且也描述于美国专利公开第20110230345号中的FZB24突变体,解淀粉芽孢杆菌FZB42,其可作为植物强化产品RHIZOVITAL自德国ABiTEP公司获得,且描述于欧洲专利公开第EP2179652号,描述于国际申请公开第WO 2012/130221号中的FZB42 突变体,包括解淀粉芽孢杆菌ABI01,其由DSMZ-德国微生物体和细胞培养物中心(German Collectionof Microorganisms and Cell Cultures)指定登录号DSM 10-1092,或枯草芽孢杆菌纳豆(natto)亚种(以前的纳豆芽孢杆菌)或枯草芽孢杆菌分离物B246,(来自RE at UP称为Avogreen的产品)或菌株MBI600(来自Becker Underwood称为Subtilex或HiStick N/T的产品)或菌株 QST30002/AQ30002(登录号NRRL B-50421,参看WO 2012/087980)或菌株QST30004/AQ30004(登录号NRRL B-50455,参看WO 2012/087980)或枯草芽孢杆菌(包括枯草芽孢杆菌解淀粉变种)菌株和产生杀真菌脂肽组合的解淀粉芽孢杆菌菌株,包括一种或多种丰原素(fengycin)或巴斯他汀(plipastatin)类化合物,一种或多种伊枯草菌素(iturin)类化合物和/或一种或多种表面活性素类化合物(Ongena等人,《微生物学趋势(Trends in Microbiology)》,第16卷,第 3期,2008年3月,第115-125页),(1.59)特基拉芽孢杆菌(Bacillus tequilensis),尤其菌株NII-0943,(1.60)苏云金芽孢杆菌,尤其苏云金芽孢杆菌以色列亚种 (血清型H-14)、菌株AM65-52(登录号ATCC 1276),(来自美国ValentBioSciences称为
Figure BDA0002911161790002091
的产品)或以色列苏云金芽孢杆菌菌株BMP 144, (来自Becker Microbial Products IL称为Aquabac的产品)或苏云金芽孢杆菌亚莎华亚种,尤其菌株ABTS-1857(SD-1372),(来自德国拜耳作物科学的称为
Figure BDA0002911161790002092
的产品)或菌株GC-91(登录号NCTC 11821)或血清型H-7,(来自美国Valent BioSciences称为Florbac WG的产品)或苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种菌株HD-1,(来自美国Valent BioSciences称为
Figure BDA0002911161790002093
ES的产品)或来自Becker Microbial Products,IL的菌株BMP 123或菌株ABTS 351(登录号ATCC SD- 1275)或菌株PB 54(登录号CECT 7209)或菌株SA 11(登录号NRRL B-30790) 或菌株SA 12(登录号NRRL B-30791)或菌株EG 2348(登录号NRRL B-18208) 或菌株EG-7841(来自美国Certis称为Crymax的产品)或苏云金芽孢杆菌拟步行亚种菌株NB 176(SD-5428),(来自德国BioFa称为
Figure BDA0002911161790002094
FC的产品)或苏云金芽孢杆菌埃及亚种,(称为Agerin的产品)或苏云金芽孢杆菌科莫尔 (colmeri)变种(来自Changzhou JianghaiChemical Factory称为TianBaoBTc的产品)或苏云金芽孢杆菌达姆斯塔特(darmstadiensis)变种菌株24-91(称为 Baciturin的产品)或苏云金芽孢杆菌松毛虫(dendrolimus)变种(称为 Dendrobacillin的产品)或苏云金芽孢杆菌蜡螟(galleriae)亚种(来自Phyllom BioProducts称为GrubGone或BeetleGone的产品)或苏云金芽孢杆菌日本(japonensis)变种菌株Buibui或苏云金芽孢杆菌莫里森(morrisoni)亚种或苏云金芽孢杆菌圣地亚哥(san diego)变种(来自美国Mycogen公司称为
Figure BDA0002911161790002095
的产品)或苏云金芽孢杆菌苏云金亚种血清型1、菌株MPPL002或苏云金芽孢杆菌苏云金变种或苏云金芽孢杆菌变种7216(称为Amactic、Pethian的产品)或苏云金芽孢杆菌变种T36(称为Cahat的产品)或来自德国拜耳作物科学的苏云金芽孢杆菌菌株BD#32(登录号NRRL B-21530)或来自德国拜耳作物科学的苏云金芽孢杆菌菌株AQ52(登录号NRRL B-21619)或苏云金芽孢杆菌菌株CR-371(登录号ATCC 55273),(1.61)单鞭芽孢杆菌(Bacillus uniflagellatus),(1.62) 慢生大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)(来自Novozymes称为Optimize的产品),(1.63)短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)(以前的短芽孢杆菌),(称为 Brevisin的产品),尤其菌株SS86-3、SS86-4、SS86-5、2904,(1.64)侧孢短芽孢杆菌(以前的侧孢芽孢杆菌),尤其菌株ATCC 64、NRS 1111、NRS 1645、NRS 1647、BPM3、G4、NCIMB 41419,(1.65)伯克氏菌属种,尤其里诺吉伯克氏菌菌株A396(登录号NRRL B-50319),(来自Marrone BioInnovations称为MBI- 206TGAI的产品)或洋葱伯克氏菌(B.cepacia)(来自StineMicrobial Products 称为Deny的产品),(1.66)活性紫色细菌(Chromobacteriumsubtsugae),尤其菌株PRAA4-1T(MBI-203),(来自Marrone Bio Innovations称为Grandevo的产品),(1.67)微代谢棒状杆菌(Corynebacterium paurometabolum),(1.68)食酸戴尔福特菌(Delftia acidovorans),尤其菌株RAY209(来自Brett Young Seeds称为
Figure BDA0002911161790002101
的产品),(1.69)养葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacter diazotrophicus), (1.70)红苍白草螺菌(Herbaspirilum rubrisubalbicans),(1.71)织片草螺菌 (Herbaspirilumseropedicae),(1.72)乳杆菌属(Lactobacillus sp.)(来自LactoPAFI 称为Lactoplant的产品),(1.73)嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)(来自 Inagrosa-IndustriasAgrobiológicas,S.A称为Fruitsan的产品),(1.74)抗生素溶杆菌,尤其菌株13-1(参看《生物防治(Biological Control)》2008,45,288-296), (1.75)产酶溶杆菌,尤其菌株C3(参看《线虫学杂志(J Nematol.)》2006年6 月;38(2):233-239),(1.76)蜂房类芽孢杆菌(Paenibacillus alvei),尤其菌株III3DT-1A、III2E、46C3、2771(芽孢杆菌基因储备中心(Bacillus genetic stock center),2001年11月),(1.77)软化类芽孢杆菌(Paenibacillus macerans),(1.78) 多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),尤其菌株AC-1(来自Green Biotech 有限公司称为Topseed的产品),(1.79)日本金龟子类芽孢杆菌(以前的日本金龟子芽孢杆菌)来自St.Gabriel Laboratories称为Milky sporedisease的产品), (1.80)成团泛菌(Pantoea agglomerans),尤其菌株E325(登录号NRRLB-21856), (来自Northwest Agricultural Products称为Bloomtime Biological FDBiopesticide 的产品),(1.81)西沢巴斯德氏芽菌,如来自Pasteuria Bioscience的称为oyacyst LF/ST的产品或西沢巴斯德氏芽菌Pn1(来自Syngenta的Clariva),(1.82)穿刺巴斯德氏芽菌(以前的穿刺芽孢杆菌),(来自Pasteuria Bioscience的称为Pasteuriawettable powder的产品),(1.83)分支巴斯德氏芽菌,(1.84)肾状巴斯德氏芽菌, (1.85)多刺巴斯德氏芽菌,(1.86)美高协巴斯德氏芽菌(Pasteuria usgae)(来自PasteuriaBioscience的称为EconemTM的产品),(1.87)植物软腐病病原果胶杆菌(Pectobacteriumcarotovorum)(以前的胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)),(来自日本Nissan称为BioKeeper的产品),(1.88)铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa),尤其菌株WS-1或PN1,(1.89)致金色假单胞菌 (Pseudomonas aureofaciens),尤其菌株TX-1(来自加利福尼亚州Eco Soils Systems称为Spot-Less Biofungicide的产品),(1.90)洋葱假单胞菌(以前称为洋葱伯克氏菌),尤其威斯康星型菌株M54或J82,(1.91)绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis),尤其菌株MA 342(来自Bioagri,S称为Cedomon 的产品)或菌株63-28(来自美国EcoSoil Systems称为ATEze的产品),(1.92) 荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens),尤其菌株A506(来自NuFarm称为 Blightban的产品或来自Frost Technology公司称为Frostban B的产品)或菌株 1629RS(来自Frost Technology公司称为Frostban D的产品),(1.93)帕拉迪克斯假单胞菌(Pseudomonas proradix)(来自Sourcon Padena称为
Figure BDA0002911161790002111
的产品),(1.94)恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida),(1.95)食树脂假单胞菌 (Pseudomonas resinovorans)(来自南非Agricultural ResaerchCouncil称为Solanacure的产品),(1.96)丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae),尤其菌株 MA-4(来自美国EcoScience的称为Biosave的产品)或菌株742RS(来自FrostTechnology公司称为Frostban C的产品,(1.97)弗氏根瘤菌(Rhizobium fredii), (1.98)豆科根瘤菌(Rhizobium leguminosarum),尤其蚕豆根瘤菌(bv.viceae) 菌株Z25(登录号CECT 4585),(1.99)百脉根根瘤菌(Rhizobium loti),(1.100) 苜蓿根瘤菌(Rhizobiummeliloti),(1.101)三叶草根瘤菌(Rhizobium trifolii), (1.102)回归线根瘤菌(Rhizobium tropici),(1.103)来自德国拜耳作物科学的球体红球菌(Rhodococcusgloberulus)菌株AQ719(登录号NRRL B21663),(1.104) 嗜虫沙雷氏菌(Serratiaentomophila)(来自Wrightson Seeds称为
Figure BDA0002911161790002121
的产品),(1.105)粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),尤其菌株SRM(登录号MTCC 8708)或菌株R35,(1.106)来自德国拜耳作物科学的链霉菌属菌株NRRL B- 30145或菌株WYE 20(KCTC 0341BP)和WYE 324(KCTC0342BP),(1.107) 酸性链霉菌(Streptomyces acidiscabies),尤其菌株RL-110T,(来自加利福尼亚州Marrone Bioinnovations称为MBI-005EP的产品),(1.108)纯白链霉菌(Streptomyces candidus),尤其菌株Y21007-2,(来自中国台湾Biontech称为BioBac 或BioAid的产品),(1.109)哥伦比亚链霉菌(Streptomyces colombiensis)(1.110) 鲜黄链霉菌(Streptomyces galbus)(=灰绿链霉菌(Streptomyces griseoviridis)),尤其菌株K61(登录号DSM 7206)(来自Verdera称为
Figure BDA0002911161790002122
的产品,参看《作物保护(CropProtection)》2006,25,468-475)或菌株QST 6047(=菌株NRRL B-30232)(来自德国拜耳作物科学的称为Virtuoso的产品),(1.111)高氏链霉菌(Streptomyces goshikiensis),(1.112)淡紫链霉菌(Streptomyces lavendulae),(1.113)利迪链霉菌(Streptomyceslydicus),尤其菌株WYCD108US)或菌株 WYEC108(来自美国Natural Industries的称为Actinovate的产品),(1.114)细黄链霉菌(Streptomyces microflavus),尤其来自拜耳作物科学的菌株AQ6121 (=QRD 31.013、NRRL B-50550)或来自拜耳作物科学的菌株M(=AQ6121.002) (091013-02保藏于加拿大国际保藏局(Canadian InternationalDepository Authority)),(1.115)帕新诺链霉菌(Streptomyces prasinus)(参看《帕新诺A和 B:来自帕新诺链霉菌的强效杀昆虫剂(Prasinons A and B:potent insecticidesfrom Streptomyces prasinus)》,《应用微生物学(Applied microbiology)》1973年11月),(1.116)龟裂链霉菌(Streptomyces rimosus),(1.117)萨腊赛链霉菌(Streptomycessaraceticus)(来自A&A集团(Agro Chemical公司)称为Clanda的产品), (1.118)委内瑞拉链霉菌(Streptomyces venezuelae),(1.119)硫杆菌(Thiobacillus) 属(来自英国Cropaid有限公司称为Cropaid的产品),(1.120)泛酸枝芽孢菌 (Virgibacilluspantothenticus)(以前的泛酸芽孢杆菌),尤其菌株ATCC 14576/ DSM 491,(1.121)野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)(除草活性),尤其早熟禾致病变种(pv poae)(称为Camperico的产品),(1.122)发光致病杆菌 (=发光杆菌(Photorhabdus))(Xenorhabdusluminescens),(1.123)嗜线虫致病杆菌(=发光杆菌)(Xenorhabdus nematophila)和(1.124)索利萨芽孢杆菌(Bacillus solisalsi),如索利萨芽孢杆菌AP-217(US 2012/0149571、NRRL B-50617)、苏云金芽孢杆菌菌株EX297512、地衣芽孢杆菌FMCH001(含于Chr.Hansen的称为“PRESENCE”的产品中)、枯草芽孢杆菌FMCH002(含于Chr.Hansen的称为“PRESENCE”的产品中)、解淀粉芽孢杆菌MBI-600(含于TRUNEMCO中),
其中所述所提及的细菌为优选的。
BCA2:根据本发明,在术语“真菌”或“酵母”下概述的生物防治剂包括但不限于:
(2.1)白粉寄生孢(Ampelomyces quisqualis),尤其菌株AQ 10(登录号CNCM I-807)(来自意大利IntrachemBio称为AQ
Figure BDA0002911161790002131
的产品),(2.2)阿肯色州真菌 (ArkansasFungus)18(ARF18,参看WO2012/140207),(2.3)指状节丛孢(参看WO 2012/140207),(2.4)少孢节丛孢(参看WO 2012/140207),(2.5)多孢节丛孢,(参看WO 2012/140207),(2.6)粉虱座壳孢(Aschersonia aleyrodis), (参看Berger,1921.《佛罗里达州植物育种季报(Bull.State Pl.Bd.)》5:141),(2.7) 黄曲霉(Aspergillus flavus),尤其菌株NRRL21882(来自Syngenta称为
Figure BDA0002911161790002141
Figure BDA0002911161790002142
的产品)或菌株AF36(来自美国Arizona CottonResearch和Protection Council称为AF36的产品),(2.8)黑酵母菌(Aureobasidiumpullulans),尤其菌株DSM14940的芽生孢子或菌株DSM 14941的芽生孢子或其混合物(来自瑞士 bio-ferm称为
Figure BDA0002911161790002143
或Blossom
Figure BDA0002911161790002144
的产品),(2.9)球孢白僵菌(Beauveriabassiana),尤其菌株ATCC 74040(来自意大利Intrachem Bio称为
Figure BDA0002911161790002145
的产品)和菌株GHA(登录号ATCC74250)(来自Laverlam International公司称为 BotaniGuard Es或Mycontrol-O的产品)或菌株ATP02(登录号DSM 24665,参看WO/2011/117351)或菌株CG 716(来自Novozymes称为
Figure BDA0002911161790002146
的产品) 或菌株ANT-03(来自加利福尼亚州AnatisBioprotection),(2.10)布氏白僵菌 (Beauveria brongniartii)(来自AndermattBiocontrol股份公司称为Beaupro的产品),(2.11)橄榄念珠菌(Candida oleophila),尤其菌株O(来自BioNext称为
Figure BDA0002911161790002147
的产品)或分离物I-182(来自美国Ecogen称为
Figure BDA0002911161790002148
的产品),(2.12) 齐藤念珠菌(Candida saitoana),尤其菌株NRRL Y-21022,(参看专利US5591429),(2.13)角毛壳菌(Chaetomium cupreum),(2.14)球毛壳菌 (Chaetomiumglobosum),(2.15)枝状枝孢菌(Cladosporium cladosporioides),尤其菌株H39,(2.16)胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides),尤其菌株 ATCC 20358,(2.17)暗孢耳霉(Conidiobolus obscurus),(2.18)小盾壳霉 (Coniothyrium minitans),尤其菌株CON/M/91-8(登录号DSM-9660),(来自德国拜耳作物科学的称为
Figure BDA0002911161790002149
的产品),(2.19)浅白隐球酵母(Cryptococcus albidus)(来自南非Anchor Bio-Technologies称为
Figure BDA00029111617900021410
的产品),(2.20)浅黄隐球酵母(Cryptococcus flavescens),尤其菌株3C(NRRL Y-50378)和菌株4C(NRRL Y-50379)(描述于US 8,241,889),(2.21)柱孢属异丝藻(Cylindrocarponheteronema),(2.22)白指环菌(Dactylaria candida),(2.23)扭曲真菌 (Dilophosphoraalopecuri)(称为Twist
Figure BDA0002911161790002151
的产品),(2.24)毒力虫霉 (Entomophthora virulenta)(称为Vektor的产品),(2.25)甄氏外瓶霉(Exophiala jeanselmei),(2.26)嗜鱼外瓶霉(Exophilia pisciphila),(2.27)尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),尤其菌株Fo47(非病原性)(来自法国Natural Plant Protection称为Fusaclean的产品),(2.28)腐皮镰刀菌(Fusarium solani),例如菌株Fs5(非病原性),(2.29)珍珠巨孢囊霉(Gigasporamargarita),(2.30)单孢巨孢囊霉(Gigaspora monosporum),(2.31)链孢粘帚霉(Gliocladium catenulatum)(同义词:粉红螺旋聚孢霉链状专化型(Clonostachys roseaf. catenulate))尤其菌株J1446(来自AgBio公司称为
Figure BDA0002911161790002152
的产品或来自KemiraAgro Oy称为
Figure BDA0002911161790002153
的产品),(2.32)粉红粘帚霉(Gliocladium roseum),尤其菌株321U,(2.33)聚丛球囊霉(Glomus aggregatum),(2.34)巴西球囊霉 (Glomusbrasilianum),(2.35)明球囊霉(Glomus clarum),(2.36)沙漠球囊霉 (Glomusdeserticola),(2.37)幼套球囊霉(Glomus etunicatum),(2.38)根内球囊霉(Glomusintraradices),(2.39)伊朗球囊霉(Glomus iranicum),(2.40)单孢球囊霉(Glomusmonosporum),(2.41)摩西球囊霉(Glomus mosseae),(2.42) 鳗形线虫钩丝孢霉(Harposporium anguillullae),(2.43)柠檬小毛菌(Hirsutella citriformis),(2.44)明尼苏达小毛菌(Hirsutella minnesotensis),(2.45)洛斯里小毛菌(Hirsutellarhossiliensis),(2.46)汤氏小毛菌(Hirsutella thompsonii)(来自印度Agro Bio-techResearch Centre称为Mycohit或ABTEC的产品),(2.47) 双色蜡蘑(Laccaria bicolor),(2.48)漆蜡蘑(Laccaria laccata),(2.49)大链壶菌(Lagenidium giganteum)(称为
Figure BDA0002911161790002154
的产品,德国拜耳作物科学),(2.50) 蜡蚧菌属种(Lecanicillium spp.),尤其来自德国拜耳作物科学的菌株HRO LEC 12,(2.51)蜡蚧蜡蚧菌(Lecanicillium lecanii)(以前称为蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii))尤其菌株KV01(称为
Figure BDA0002911161790002161
Figure BDA0002911161790002162
Koppert/Arysta的产品) 或菌株DAOM198499或菌株DAOM216596的分生孢子,(2.52)毒蕈蜡蚧菌 (Lecanicillium muscarium)(以前的蜡蚧轮枝菌(Verticilliumlecanii)),尤其来自德国拜耳作物科学的菌株1/1或菌株VE 6/CABI(=IMI)268317/CBS102071/ ARSEF5128,(2.53)阿斯特尔氏顶裂霉(Meristacrum asterospermum)(2.54)金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae),尤其菌株F52(DSM3884/ATCC 90448) (称为BIO1020的产品,拜耳作物科学德国;或Met52,Novozymes)或金龟子绿僵菌杀蝗(acridum)变种(称为GreenGuard的产品,美国Becker Underwood) 或金龟子绿僵菌杀蝗变种分离物IMI330189(ARSEF7486),(来自Biological Control Products称为Green Muscle的产品),(2.55)黄绿绿僵菌(Metarhizium flavoviride),(2.56)果梅奇酵母(Metschnikowiafructicola),尤其菌株NRRL Y- 30752(来自德国拜耳作物科学的称为
Figure BDA0002911161790002163
的产品),(2.57)双胞微座孢 (Microdochium dimerum),尤其菌株L13(来自Agrauxine称为
Figure BDA0002911161790002164
的产品),(2.58)土黄微球壳孢(Microsphaeropsis ochracea)(来自德国拜耳作物科学的称为
Figure BDA0002911161790002165
的产品),(2.59)柱捕单顶孢(Monacrosporium cionopagum),(2.60)喜寒单顶孢(Monacrosporium psychrophilum),(2.61)掘氏单顶孢(Monacrosporium drechsleri),(2.62)格氏单顶孢(Monacrosporium gephyropagum)(2.63)冻土毛霉(Mucor haemelis)(来自Indore Biotech Inputs&Research称为BioAvard的产品),(2.64)白麝香霉(Muscodor albus),尤其菌株QST 20799(登录号NRRL30547)(来自德国拜耳作物科学的称为ArabesqueTM、GlissadeTM或 AndanteTM的产品),(2.65)粉红麝香霉(Muscodor roseus)菌株A3-5(登录号 NRRL 30548),(2.66)疣孢漆斑菌,尤其菌株AARC-0255(来自Valent Biosciences 称为DiTeraTM的产品),(2.67)地理毒虫霉,(2.68)滑孢毒虫霉,(2.69)侵管新赤壳菌(Neocosmospora vasinfecta),(2.70)莱氏野村菌(Nomuraea rileyi),尤其菌株SA86101、GU87401、SR86151、CG128和VA9101,(2.71)毛尖蛇口壳菌(Ophiostoma piliferum),尤其菌株D97(称为Sylvanex的产品),(2.72) 玫烟色拟青霉(Paecilomyces fumosoroseus)(新:玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea)),尤其菌株IFPC 200613或菌株apopka 97(来自Biobest称为
Figure BDA0002911161790002171
WG的产品)或菌株FE9901(来自美国Natural Industries公司称为
Figure BDA0002911161790002172
的产品),(2.73)淡紫拟青霉,尤其淡紫拟青霉菌株251的孢子(AGAL 89/030550),(来自德国拜耳作物科学的称为
Figure BDA0002911161790002173
的产品;参看《作物保护》 2008,27,352-361),(2.74)宛氏拟青霉,尤其菌株Q-09(来自墨西哥Quimia 称为
Figure BDA0002911161790002174
的产品),(2.75)飞虱虫疠霉(Pandora delphacis),(2.76)类球囊霉属(Paraglomus sp),尤其巴西类球囊霉,(2.77)百氏青霉(Penicillium bilaii),尤其菌株ATCC 22348(来自Novozymes称为
Figure BDA0002911161790002175
的产品,PB- 50,Provide),(2.78)蠕形青霉(Penicillium vermiculatum),(2.79)大伏革菌(或射脉菌(Phlebia)或隔孢伏革菌(Peniophora))(Phlebiopsis gigantea),尤其菌株VRA 1835(ATCC 90304)、VRA 1984(DSM16201)、VRA 1985(DSM16202)、 VRA 1986(DSM16203)、FOC PG B20/5(IMI390096)、FOCPG SP log6 (IMI390097)、FOC PG SP log5(IMI390098)、FOC PG BU3(IMI390099)、FOC PGBU4(IMI390100)、FOC PG 410.3(IMI390101)、FOC PG 97/1062/116/1.1 (IMI390102)、FOCPG B22/SP1287/3.1(IMI390103)、FOC PG SH1(IMI390104)、 FOC PG B22/SP1190/3.2(IMI390105),(来自芬兰Verdera称为
Figure BDA0002911161790002176
的产品,来自德国e-nema的
Figure BDA0002911161790002177
Figure BDA0002911161790002178
),(2.80)巨口茎点菌(Phoma macrostroma),尤其菌株94-44B(来自美国Scotts称为Phoma H或PhomaP的产品),(2.81)异常毕赤酵母(Pichia anomala),尤其菌株WRL-076(NRRL Y-30842),(2.82)彩色豆马勃(Pisolithus tinctorius),(2.83)厚垣普可尼亚菌(Pochoniachlamydosporia)(例如称为Rizotec 的产品;细菌菌株也称为厚垣黄萎菌(Vercilliumchlamydosporium)),尤其链状 (catenulata)变种(IMI SD 187)(来自古巴国家动植物卫生中心(The National Center of Animal and Plant Health,CENSA)称为KlamiC的产品)或厚垣普可尼亚菌厚垣变种(相应厚垣黄萎菌厚垣变种),(2.84)蚜虫假丝酵母(Pseudozyma aphidis)(2.85)簇毛假丝酵母(Pseudozyma flocculosa),尤其菌株PF-A22UL (来自加利福尼亚州Plant Products公司称为
Figure BDA0002911161790002181
L的产品),(2.86)寡雄腐霉(Pythium oligandrum),尤其菌株DV74或M1(ATCC 38472),(来自捷克 Bioprepraty称为Polyversum的产品),(2.87)艾氏须腹菌(Rhizopogon amylopogon),(2.88)弗氏须腹菌(Rhizopogon fulvigleba),(2.89)橙黄须腹菌 (Rhizopogon luteolus),(2.90)町氏须腹菌(Rhizopogon tinctorus),(2.91)维氏须腹菌(Rhizopogon villosullus),(2.92)酿酒酵母(Saccharomyces cerevisae),尤其菌株CNCM编号I-3936、菌株CNCM编号I-3937、菌株CNCM编号I- 3938、菌株CNCM编号I-3939(专利申请US 2011/0301030),(2.93)柑橘硬皮马勃(Scleroderma citrinum),(2.94)小核盘菌(Sclerotinia minor),尤其菌株IMI 344141(称为Sarritor的产品),(2.95)昆虫孢子丝菌(Sporothrix insectorum) (来自巴西Biocerto称为Sporothrix Es的产品),(2.96)滨藜壳多孢(Stagonospora atriplicis),(2.97)异壳多孢(Stagonospora heteroderae),(2.98)菜豆壳多孢 (Stagonosporaphaseoli),(2.99)点柄乳牛肝菌(Suillus granulatus),(2.100)斑点乳牛肝菌(Suilluspunctatapies),(2.101)黄色篮状菌(Talaromyces flavus),尤其菌株V117b(来自德国拜耳作物科学的称为
Figure BDA0002911161790002182
WG的产品),(2.102) 白色木霉(Trichoderma album)(来自埃及Organic Biotechnology称为Bio
Figure BDA0002911161790002183
的产品),(2.103)棘孢木霉,尤其菌株ICC 012(CABI CC IMI 392716)(也称为哈茨木霉ICC012)或菌株SKT-1(来自Kumiai ChemicalIndustry称为
Figure BDA0002911161790002184
Figure BDA0002911161790002185
的产品)或菌株T34(来自西班牙BioncontrolTechnologies称为T34 Biocontrol的产品或分离物SF04(URM-5911)或菌株TV1(MUCL43093)(也称为绿色木霉TV1)或菌株T11(CECT 20178)(也称为绿色木霉T25),(2.104) 深绿木霉,尤其菌株CNCM I-1237(来自法国Agrauxine称为
Figure BDA0002911161790002186
WP的产品)或菌株NMI编号V08/002387、NMI编号V08/002388、NMI编号 V08/002389、NMI编号V08/002390(专利申请US 2011/0009260)或菌株ATCC 20476(IMI 206040)或菌株T11(IMI352941/CECT20498)或菌株LC52(来自新西兰Agrimm Technologies称为
Figure BDA0002911161790002191
Figure BDA0002911161790002192
的产品)或来自德国拜耳作物科学的1或菌株SKT菌株SKT-1(FERM P-16510)、SKT-2(FERM P-16511) 和SKT-3(FERM P-17021),(2.105)盖斯木霉(Trichoderma gamsii)(以前的绿色木霉),尤其菌株ICC080(IMI CC 392151CABI)(称为Bioderma的产品), (2.106)哈姆木霉(Trichoderma harmatum),尤其菌株TH382(来自Syngenta称为Incept的产品),(2.107)哈茨木霉,尤其里法依哈茨木霉T39(来自美国 Makhteshim称为
Figure BDA0002911161790002193
的产品)或里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2(菌株T- 22、/ATCC 208479)(来自美国BioWorks称为PLANTSHIELDT-22G、
Figure BDA0002911161790002194
和TurfShield的产品)或菌株KD(来自南非Biological ControlProducts称为 Trichoplus的产品或来自斯威士兰Plant Health Products称为Eco-T的产品)或菌株ITEM 908(CBS 118749)或菌株TH 35(以前称为木素木霉(Trichodermalignorum)),(来自Mycontrol称为Root Pro的产品)或菌株DB 103(来自Dagutat Biolab称为T-Gro的产品)或菌株TSTh20(专利保藏登记号PTA-0317)或菌株1295-22,(2.108)康氏木霉(Trichoderma koningii),(2.109)木素木霉,尤其菌株TL-0601(来自西班牙FuturecoBioscience称为Mycotric的产品),(2.110) 多孢木霉(Trichoderma polysporum),尤其菌株IMI 206039/ATCC 20475,(2.111) 土孢木霉(Trichoderma saturnisporium),尤其来自德国拜耳作物科学的菌株PBP- TH-001,(2.112)子座木霉(Trichoderma stromaticum)(来自巴西Ceclap称为
Figure BDA0002911161790002195
的产品),(2.113)绿木霉(Trichoderma virens)(也称为绿黏帚霉 (Gliocladium virens)),尤其菌株GL-21(来自美国Certis的称为SoilGard的产品)或菌株G41或绿木霉(黏帚霉)菌株GI-3(或G1-3、ATCC 58678),(2.114) 绿色木霉,尤其菌株TV1,(2.115)微代谢冢村氏菌,尤其菌株C-924(称为
Figure BDA0002911161790002201
的产品),(2.116)奥德曼细基格孢(Ulocladium oudemansii),尤其菌株HRU3(来自新西兰Botry-Zen有限公司称为
Figure BDA0002911161790002202
的产品),(2.117) 黑白轮枝菌(Verticillium albo-atrum)(以前的大丽轮枝菌(V.dahliae)),尤其菌株WCS850(CBS 276.92),(2.118)厚垣轮枝菌(Verticillium chlamydosporium), (2.119)大丽花轮枝菌(Verticillium dahlia),(2.120)圆孢虫疫霉(Zoophtora radicans)和(2.121)青霉菌株,如歧皱青霉(Penicilliumsteckii)菌株IBWF104- 06(登录号DSM 27859)。
其中所述所提及的真菌或酵母是优选的。
BCA3:根据本发明,在术语“原虫”下概述的生物防治剂包括但不限于:
(3.1)蝗虫微孢子虫(Nosema locustae)(称为NoloBait的产品),(3.2)火蚁泰洛哈虫(Thelohania solenopsis)和(3.3)变形孢虫属种(Vairimorpha spp),
其中所述所提及的原虫是优选的。
BCA4:根据本发明,在术语“病毒”下概述的生物防治剂包括但不限于:
(4.1)苹果小卷叶蛾(Adoxophyes orana/summer fruit tortrix)颗粒体病毒(GV),(来自BIOFA称为
Figure BDA0002911161790002203
的产品),(4.2)黄地老虎(Agrotis segetum/turnip moth)核多角体病毒(nuclear polyhedrosis virus,NPV),(4.3)芹菜夜蛾(Anagraphafalcifera/celery looper)NPV,(4.4)大豆夜蛾(Anticarsia gemmatalis/woolly pyrolmoth)多NPV(称为Coopervirus PM的Coodetec产品),(4.5)苜蓿丫纹夜蛾 (Autographacalifornica/alfalfa looper)mNPV(来自危地马拉Agricola El Sol称为VPN80的产品),(4.6)油茶尺蛾(Biston suppressaria/tea looper)NPV,(4.7) 桑蚕(Bombyx mori/silkworm)NPV,(4.8)苹果异形小卷蛾(Cryptophlebia leucotreta/false codling moth)GV(来自瑞士Andermatt Biocontrol称为Cryptex 的产品),(4.9)苹果小卷蛾(Cydiapomonella/codling moth)颗粒体病毒(GV) (来自瑞士Andermatt Biocontrol称为MadexPlus的产品),(4.10)马尾松毛虫 (Dendrolimus punctatus/masson pine moth)CPV,(4.11)棉铃虫(Helicoverpa armigera/cotton bollworm)NPV(来自瑞士AndermattBiocontrol称为Helicovex 的产品),(4.12)玉米螟(以前的实夜蛾(Heliothis))(Helicoverpa zea/corn earworm)NPV(称为Elcar的产品),(4.13)雪毒蛾(Leucomasalicis/satin moth) NPV,(4.14)舞毒蛾(Lymantria dispar/gypsy moth)NPV(称为Gypcheck的产品,美国林业局),(4.15)香脂冷杉叶蜂(Neodiprion abietis/balsam-firsawfly) NPV(称为AbietivTM的产品),(4.16)红头松叶蜂(Neodiprion lecontei/red-headed pine sawfly)NPV(来自加拿大林业局称为Lecontvirus的产品),(4.17)松黄叶蜂(Neodiprion sertifer/pine sawfly)NPV(来自美国林业局称为Neocheck-S的产品),(4.18)花旗松毒蛾(Orgyia pseudotsugata/douglas-fir tussock moth)NPV(称为TM-BioControl-1TM的产品),(4.19)烟草潜叶蛾(Phthorimaea operculella/tobacco leafminer)GV(称为Matapol Plus的产品),(4.20)小菜粉蝶(Pieris rapae/small whitebutterfly)GV,(4.21)菱纹背蛾(Plutella xylostella/diamondback moth)GV,(4.22)灰斑夜蛾(Spodoptera albula/gray- streaked armywom moth)mNPV(称为VPN 82的产品,危地马拉Agricola El So), (4.23)莎草粘虫(Spodoptera exempta/true armyworm)mNPV,(4.24)甜菜粘虫 (Spodoptera exigua/sugarbeet armyworm)mNPV(来自AndermattBiocontrol称为 Spexit的产品),(4.25)夜蛾草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda/fallarmyworm) mNPV,(4.26)斜纹夜蛾(Spodoptera littoralis/tobacco cutworm)NPV(来自瑞士Andermatt Biocontrol称为Littovir的产品,或来自法国NPP Calliope称为Spodoptrin的产品)和(4.27)斜纹贪夜蛾(Spodoptera litura/oriental leafworm moth)NPV(称为Littovir的产品),其中所述所提及的病毒是优选的。
BCA5:根据本发明,在术语“昆虫病原性线虫”下概述的生物防治剂包括但不限于:
(5.1)高加索泡翼线虫(Abbreviata caucasica),(5.2)锐形线虫(Acuaria) 属种,(5.3)去尾多索线虫(Agamermis decaudata),(5.4)腊肠线虫(Allantonema) 属种,(5.5)两索线虫(Amphimermis)属种,(5.6)丽透体垫刃线虫(=德拉线虫(Deladenus))(Beddingia siridicola),(5.7)博温线虫(Bovienema)属种, (5.8)卡梅隆线虫(Cameronia)属种,(5.9)圆丝奇特伍德线虫(Chitwoodiella ovofilamenta),(5.10)卵巢线虫(Contortylenchus)属种,(5.11)库里克线虫 (Culicimermis)属种,(5.12)三齿线虫(Diplotriaena)属种,(5.13)恩匹多线虫(Empidomermis)属种,(5.14)莱普桑菲利普线虫(Filipjevimermis leipsandra), (5.15)腹索线虫(Gastromermis)属种,(5.16)筒线虫(Gongylonema)属种, (5.17)假维帕拉花鳉线虫(Gynopoecilia pseudovipara),(5.18)异小杆线虫 (Heterorhabditis)属种,尤其(5.19)细菌异小杆线虫(Heterorhabditisbacteriophora)(称为
Figure BDA0002911161790002221
Figure BDA0002911161790002222
Koppert或
Figure BDA0002911161790002223
G的产品,Becker Underwood)或(5.20)鲍贾迪异小杆线虫(Heterorhabditis baujardi)或 (5.21)海利斯蒂异小杆线虫(Heterorhabditis heliothidis)(称为
Figure BDA0002911161790002224
的产品,biohelp公司)或(5.22)籼异小杆线虫(Heterorhabditis indica),(5.23)马勒拉图异小杆线虫(Heterorhabditis marelatus),(5.24)梅吉蒂斯异小杆线虫 (Heterorhabditismegidis)(称为
Figure BDA0002911161790002225
M、Koppert或
Figure BDA0002911161790002226
的产品, Andermatt Biocontrol股份公司,或
Figure BDA0002911161790002227
),(5.25)新西兰异小杆线虫 (Heterorhabditis zealandica),(5.26)六索线虫(Hexamermis)属种,(5.27)水索线虫(Hydromermis)属种,(5.28)等索线虫(Isomermis)属种,(5.29)湖索线虫(Limnomermis)属种,(5.30)维西毛氏线虫(Maupasinaweissi),(5.31) 黑色索线虫(Mermis nigrescens),(5.32)中索线虫(Mesomermis)属种,(5.33) 新中索线虫(Neomesomermis)属种,(5.34)皱新寄生垫刃线虫(Neoparasitylenchus rugulosi),(5.35)八腱线虫(Octomyomermis)属种,(5.36)寄生真滑刃线虫 (Parasitaphelenchus)属种,(5.37)蛞蝓线虫(Parasitorhabditis)属种,(5.38) 寄生垫刃线虫(Parasitylenchus)属种,(5.39)库蚊镒索线虫(Perutilimermisculicis),(5.40)两性蛞蝓线虫(Phasmarhabditis hermaphrodita)(来自BASF股份公司称为Nemaslug的产品),(5.41)泡翼线虫(Physaloptera)属种,(5.42) 普罗线虫(Protrellatus)属种,(5.43)普特线虫(Pterygodermatites)属种,(5.44) 罗索线虫(Romanomermis)属种,(5.45)卡达苏氏线虫(Seuratum cadarachense), (5.46)斯派线虫(Sphaerulariopsis)属种,(5.47)盖亚旋尾线虫(Spirura guianensis),(5.48)斯氏线虫(Steinernema)属种(=新无小纹虫(Neoaplectana) 属种),尤其(5.49)毛蚊斯氏线虫(Steinernema bibionis)(称为Nematoden gegen
Figure BDA0002911161790002231
的产品)或(5.50)小卷蛾斯氏线虫(Steinernema carpocapsae) (称为Biocontrol、
Figure BDA0002911161790002232
的产品)或(5.51)夜蛾斯氏线虫(Steinernema feltiae)(=小卷蛾新无小纹虫(Neoaplectana carpocapsae)),(称为
Figure BDA0002911161790002233
的产品)或(5.52)格拉斯氏线虫(Steinernema glaseri)(称为
Figure BDA0002911161790002234
的产品)或(5.53)克劳斯斯氏线虫(Steinernema kraussei)(称为
Figure BDA0002911161790002235
Kraussei
Figure BDA0002911161790002236
Figure BDA0002911161790002237
的产品)或(5.54)里奥斯氏线虫(Steinernemariobrave)(称为
Figure BDA0002911161790002238
的产品)或(5.55)峻蛄斯氏线虫(Steinernema scapterisci)(称为
Figure BDA0002911161790002239
S的产品)或(5.56)甲虫斯氏线虫(Steinernema scarabaei)或(5.57)西姆卡耶斯氏线虫(Steinernema siamkayai),(5.58)泰国斯氏线虫(Steinernemathailandse)(称为
Figure BDA00029111617900022310
的产品),(5.59)彼得斯索线虫(Strelkovimermispeterseni),(5.60)锥尾线虫(Subulura)属种,(5.61)伸长绍氏线虫 (Sulphuretylenchuselongatus)和(5.62)四棱线虫(Tetrameres)属种,
其中所述所提及的昆虫病原性线虫为优选的。
BCA6:在术语“蛋白质或二级代谢物”下概述的生物防治剂包括但不限于:
(6.1)苏云金芽孢杆菌毒素(从苏云金芽孢杆菌的不同亚种分离),(6.2)谷氏菌素(Gougerotin)(从细黄链霉菌菌株AQ 6121分离,来自拜耳作物科学), (6.3)过敏蛋白(从梨火欧文氏菌(Erwinia amylovora)分离,称为Harp-N-TekTM
Figure BDA00029111617900022311
EmployTM、ProActTM的产品),(6.4)蜘蛛毒素GS-ω/κ-Hxtx-Hv1a,来自Vestaron称为Versitude的产品,
其中所述所提及的蛋白质或二级代谢物为优选的。
BCA7:在术语“植物提取物”下概述的生物防治剂包括但不限于:
(7.1)百里酚,例如从百里香(普通百里香(Thymus vulgaris))提取,(7.2) 印楝(Neem tree/Azadirachta indica)油和其中的印楝素,(7.3)除虫菊,从菊蒿 (Tanacetum)属的不同物种的干花头制得的提取物,和其中的除虫菊酯(提取物的活性组分),(7.4)黑色肉桂(Cassia nigricans)的提取物,(7.5)苦木(Quassia amara/bitterwood)的木提取物,(来自Andermatt Biocontrol股份公司称为Quassan 的产品),(7.6)鱼藤酮(Rotenon),来自若干热带和亚热带植物物种,尤其属于醉鱼豆(Lonchocarpus)和鱼藤(Derris)属的植物的根和茎的提取物,(7.7)大蒜(Allium sativum/garlic)的提取物,(7.8)皂树提取物,从皂皮(Quillaja Saponaria Molina)树的外形成层的浓缩纯化提取物制得,(7.9)沙巴达(Sabadilla)(沙巴达=沙巴藜芦(Schoenocaulon officinale))种子,尤其藜芦碱(Veratrin)(从种子提取),(7.10)雷雅尼雅(Ryania),从尼亚那(Ryania speciosa)的地面茎制得的提取物,尤其利阿诺定(Ryanodine)(提取物的活性组分),(7.11)槲寄生(Viscumalbum/mistletoe)的提取物,(7.12)艾菊(Tanacetum vulgare/tansy)的提取物, (7.13)苦艾(Artemisia absinthium/wormwood)的提取物,(7.14)刺荨麻(Urtica dioica/stinging nettle)的提取物,(7.15)聚合草(Symphytum officinale/common comfrey)的提取物,(7.16)旱金莲(Tropaeulum majus/monks cress)的提取物, (7.17)橡树(Quercus/oak tree)的叶和树皮(7.18)黄芥末粉,(7.19)土荆芥 (Chenopodiumanthelminticum/wormseed goosefoot)的种子油,(7.20)绵马 (Dryopteris filix-mas/male fern)的干叶,(7.21)苦皮藤(Celastrus angulatus/chinese bittersweet)的树皮,(7.22)问荆草(Equisetum arvense/field horsetail)的提取物, (7.23)甲壳质(7.24)土荆芥(Chenopodium ambrosioides/wormseed)的天然提取物或模拟共混物,(来自拜耳作物科学称为
Figure BDA0002911161790002241
的产品)其含有三种萜的混合物,即α-萜品烯(约10%)、p-伞花烃(约3.75%)和柠檬烯(约3%)作为杀虫活性成分;其公开于对应于WO 2010/144919的US 2010/0316738中), (7.25)昆诺藜(Chenopodium quinoa/quinoa goosefoot)的皂苷,(称为Heads Up 的产品),(7.26)麦芽糊精(来自Certis Europe称为Majestik的产品),(7.27)橙油(来自Oro Agri私人有限公司称为PREV-AM的产品)、芝麻油(称为Dragon- fire-CCP的产品,美国专利6,599,539),其中所述所提及的植物提取物为优选的。
还包括细菌和真菌,其作为'接种物'添加到植物或植物部分或植物器官中,并且其借助于其特定特性促进植物生长和植物健康。可提及的实例为:
土壤杆菌属种、茎瘤固氮根瘤菌、固氮螺菌属种、固氮菌属种、大豆根瘤菌属种、伯克氏菌属种,尤其洋葱伯克氏菌(以前称为洋葱假单胞菌)、巨孢囊霉属种或单孢巨孢囊霉、球囊霉属种、蜡蘑属种、布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)、类球囊霉属种、彩色豆马勃、假单胞菌属种、根瘤菌属种,尤其三叶草根瘤菌、须腹菌属种、硬皮马勃属种、乳牛肝菌属种、链霉菌属种、不规则根内球囊霉(Rhizophagus irregularis)(以前称作根内球囊霉(Glomus intraradices))。
本文还包括US2017/0188584(以引用的方式并入本文中,如来自群组A) 到O)的生物或化学防治剂中的任一种,或US2017/0188584中的第127段中列出的生物杀虫剂)中描述的生物或化学防治剂((生物)农药)中的任一种。如本文所用,生物防治剂可以获自培养物收集和保藏中心(通常由其首字母缩写指代(见万维网地址:wfcc.info/ccinfo/collection/by_acronym/)),或本文中的菌株前缀,如来自以下集合的具有以下前缀的菌株:AGAL或NMI,来自:国家计量研究院(National Measurement Institute),1/153BertieStreet,Port Melbourne, Victoria,Australia 3207;ATCC,来自:美国模式培养物收藏所(American Type Culture Collection),10801University Blvd.,Manassas,Va.20110-2209,USA;BR,来自:Embrapa农业生物学固氮微生物培养物收藏所(Embrapa AgrobiologyDiazothrophic Microbial Culture Collection),邮政信箱74.505,Seropedica,Rio deJaneiro,23.851-970,Brazil;CABI或IMI,来自:CABI欧洲-国际真菌研究所 (CABIEurope--International Mycological Institute),Bakeham Lane,Egham,Surrey, TW209TYNRRL,UK;CB,来自:西悉尼大学环境与农业学院CB根瘤菌收藏所(The CB RhizobiumCollection,School of Environment and Agriculture,University of WesternSydney),Hawkesbury,信箱1797,South Penrith Distribution Centre, NSW 1797,Australia;CBS,来自:中央真菌培养局真菌生物多样性中心 (Centraalbureau voorSchimmelcultures,Fungal Biodiversity Centre),Uppsalaan 8, 邮政信箱85167,3508AD Utrecht,Netherlands;CC,来自:澳大利亚堪培拉 (Canberra,Australia)CSIRO植物产业部(the Division of Plant Industry);CNCM,来自:巴斯德研究所国家微生物体培养物收藏所(Collection Nationale de Cultures de Microorganismes,InstitutePasteur),25rue du Docteur Roux,F-75724PARIS Cedex 15;CPAC,来自:Embrapa-Cerrados,CX.邮编08223,Planaltina,DF,73301- 970,Brazil;DSM,来自:莱布尼兹研究所DSMZ-德国微生物体和细胞培养物收藏有限公司(Leibniz-Institut DSMZ-DeutscheSammlung von Mikroorganismen and Zellkulturen GmbH),Inhoffenstra.beta.e 7B,38124Braunschweig,Germany;IDAC,来自:加拿大收藏国际保管局(InternationalDepositary Authority of Canada Collection);ICMP,来自:土地保护研究所国际植物微生物体收藏馆(Interntional Collection of Micro-organisms from Plants,LandcareResearch),私人邮箱92170, Auckland Mail Centre,Auckland 1142,New Zealand;IITA,来自:IITA,PMB 5320, Ibadan,Nigeria;INTA,来自:阿根廷嘉士德乐(Castelar,Argentina)国立农业技术研究所(Instituto Nacional de Tecnologi'a Agropecuaria,INTA)农业微生物学与动物学研究所农业采集实验室(Agriculture CollectionLaboratory of the Instituto de Microbiologia y Zoologia Agricola,IMYZA);MSDJ,来自:法国第戎(Dijon, France)INRA土壤微生物实验室(Laboratoire de Microbiologiedes Sols);MUCL,来自:鲁汶天主教大学真菌培养物收藏馆(Mycotheque de l'Universitecatholique de Louvain),Croix du Sud 2,邮箱L7.05.06,1348Louvain-la-Neuve,Belgium; NCIMB或NICB,来自:国家工业和海洋细菌收藏有限公司托里研究站(TheNational Collections of Industrial and Marine Bacteria Ltd.,Torry ResearchStation), 邮政信箱31,135Abbey Road,Aberdeen,AB9 8DG,Scotland;Nitragin,来自:美国威斯康星州密尔沃基(Milwaukee,Wisconsin,USA)Nitragin公司Nitragin菌株收藏所(Nitragin strain collection,The Nitragin Company);NRRL或ARSEF(昆虫病原性真菌集合),来自:美国农业部农业研究局国家农业利用研究中心的 ARS培养物收藏(ARSCulture Collection of the National Center for Agricultural UtilizationResearch,Agricultural Research Service,U.S.Department of Agriculture),1815North University Street,Peoria,Ill.61604,USA;NZP,来自:新西兰北帕默斯顿(Palmerston North,New Zealand)应用生物化学科科学与工业研究培养物收藏系(theDepartment of Scientific and Industrial Research Culture Collection,AppliedBiochemistry Division);PPRI,来自:ARC-植物保护研究所(ARC-Plant ProtectionResearch Institute),私人邮箱X134,Queenswood Pretoria,Gauteng,0121,SouthAfrica;SEMIA,来自:FEPAGRO-国家农业研究基金会(FEPAGRO-Fundacao Estadual dePesquisa Agropecuaria),Rua Gonsalves Dias,570,Bairro Menino Deus, PortoAlegre/RS,Brazil;SRDI,来自:南澳大利亚阿德莱德(Adelaide,South Australia)SARDI;USDA,来自:美国农业部农业研究局大豆和苜蓿研究实验室(U.S.Department ofAgriculture,Agricultural Research Service,Soybean and Alfalfa ResearchLaboratory),BARC-West,10300Baltimore Boulevard,Building 011,Beltsville,Md.20705,USA(Beltsville根瘤菌培养物目录:见万维网地址: pdf.usaid.gov/pdf_docs/PNAAW891.pdf);和WSM,来自:西澳大利亚珀斯(Perth, Western Australia)莫道克大学(Murdoch University)。
本文还包括以下生物化学农药中的任一种作为生物防治剂:柠檬醛、(E,Z)- 乙酸7,9-十二碳二烯-1-基酯、甲酸乙酯、(E,Z)-癸二烯酸2,4-乙基酯(梨酯)、(Z,Z,E)-7,11,13-十六碳四烯醛、丁酸庚酯、肉豆蔻酸异丙酯、异戊烯酸薰衣草酯 (lavanulylsenecioate)、2-甲基1-丁醇、甲基丁香酚、(E,Z)-2,13-十八碳二烯-1-醇、 (E,Z)-2,13-十八碳二烯-1-醇乙酸酯、(E,Z)-3,13-十八碳二烯-1-醇、R-1-辛烯-3-醇、白蚁信息素(pentatermanone)、硅酸钾、山梨糖醇辛酸酯(sorbitol actanoate)、 (E,Z,Z)-乙酸3,8,11-十四三烯基酯、(Z,E)-乙酸9,12-十四二烯-1-基酯、Z-7-十四烯-2-酮、Z-乙酸9-十四烯-1-基酯、Z-11-十四烯醛、Z-11-十四烯-1-醇、阿拉伯内格拉胶(Acacia negra)提取物和葡萄柚种子和果肉的提取物。
本文还包括以下提及的生物杀虫剂中的任一种作为生物防治剂:(见万维网地址:sitem.herts.ac.uk/aeru/bpdb/atoz.htm,gcm.wfcc.info/,landcareresearch.co.nz/resources.collections/icmp,epa.gov/opp00001/biopesticides/,omri.org/omri-lists,并且包括以下提及的农药中的任一种作为本文的化合物: sitem.herts.ac.uk/aeru/ppdb/en/atoz.htm。
在一个实施例中,本发明中使用的生物防治剂包括一种或多种选自群组 BCA8的生物防治剂:芽孢杆菌属菌株、短芽孢杆菌属菌株、伯克氏菌属菌株、溶杆菌属菌株、巴斯德氏芽菌属菌株、节丛孢属菌株、毒虫霉属菌株、漆斑菌属菌株、拟青霉属菌株、木霉属菌株和冢村氏菌属菌株。
在另一实施例中,本发明的植物、细胞、植物部分或种子或其生长或打算生长的土壤用选自由以下组成的群组BCA9的生物防治剂处理:解淀粉芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、线虫芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、穿刺芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、侧孢短芽孢杆菌、里诺吉伯克氏菌、抗生素溶杆菌、产酶溶杆菌、西沢巴斯德氏芽菌、穿刺巴斯德氏芽菌、分支巴斯德氏芽菌、肾状巴斯德氏芽菌、多刺巴斯德氏芽菌、美高协巴斯德氏芽菌、指状节丛孢、少孢节丛孢、多孢节丛孢、地理毒虫霉、滑孢毒虫霉、疣孢漆斑菌、淡紫拟青霉、宛氏拟青霉、棘孢木霉、哈茨木霉、绿色木霉、里法依哈茨木霉和微代谢冢村氏菌。
在一个实施例中,本发明的植物、细胞、植物部分或种子或其生长或打算生长的土壤用选自由以下组成的群组BCA10的生物防治剂处理:解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01、解淀粉芽孢杆菌菌株B3、解淀粉芽孢杆菌菌株D747、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838、解淀粉芽孢杆菌菌株F727、坚强芽孢杆菌菌株I-1582、坚强芽孢杆菌菌株NRRL B-67003、坚强芽孢杆菌菌株NRRL B-67518、坚强芽孢杆菌菌株GB126、侧孢芽孢杆菌菌株ATCC PTA-3952、侧孢芽孢杆菌菌株ATCC PTA-3593、地衣芽孢杆菌菌株ATCC PTA-6175、苏云金芽孢杆菌菌株EX297512、侧孢短芽孢杆菌菌株ATCC 64、侧孢短芽孢杆菌菌株 NRS 1111、侧孢短芽孢杆菌菌株NRS 1645、侧孢短芽孢杆菌菌株NRS1647、侧孢短芽孢杆菌菌株BPM3、G4、侧孢短芽孢杆菌菌株NCIMB 41419、里诺吉伯克氏菌菌株A396、抗生素溶杆菌菌株13-1、产酶溶杆菌菌株C3、疣孢漆斑菌菌株AARC-0255、淡紫拟青霉菌株251、宛氏拟青霉菌株Q-09、棘孢木霉菌株ICC 012、棘孢木霉菌株SKT-1、棘孢木霉菌株T34、棘孢木霉菌株T25、棘孢木霉菌株SF04、棘孢木霉菌株TV1、棘孢木霉菌株T11、哈茨木霉菌株ICC012、里法依哈茨木霉T39、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2、绿色木霉菌株TV1或菌株 TV25、深绿木霉菌株CNCM I-1237和微代谢冢村氏菌菌株C-924。
所有植物和植物部分可以用根据本发明的化合物和/或生物防治剂和/或混合物处理。本发明的植物可以是含有通过常规育种和优化方法或通过生物技术方法或这些方法的组合获得的性状的大豆植物。植物部分应理解为是指植物在地面以上和地下的所有部分和器官,如枝条,叶,花和根,给出的实例是叶,茎,花,荚和种子,以及根。植物部分还包括收获的植物或收获的植物部分以及无性和有性繁殖材料,例如幼苗,插条或种子。
根据本发明用根据本发明的化合物和/或生物防治剂和/或混合物处理本发明的植物和植物部分是直接进行,或通过允许化合物和/或生物防治剂和/或混合物对周围、环境或存储空间通过惯用处理方法(例如通过浸没、喷洒、蒸发、成雾、散射、涂刷、注射以及在繁殖材料的情况下,尤其在种子的情况下,也通过施用一个或多个涂层)起作用来进行。
可以根据本发明处理的包含本发明的优良事件的植物还包括植物,所述植物通过基因修饰或育种而得到向这些植物赋予除本发明的事件中所含有的(大豆或经工程改造的)性状以外,特定有利的有用特性(“性状”)的遗传物质。所述特性的实例为更好的植物生长、对高或低温的耐受性增加、对干旱或对水含量或土壤盐度的耐受性增加、增强的开花表现、更容易收获、加速成熟、较高产率、所收获产物的更高质量和/或更高营养价值、所收获产物的更好储存寿命和/或可加工性。所述特性的另外并且尤其强调实例是由于例如在植物中形成的毒素,确切地说,来源于苏云金芽孢杆菌的那些毒素(例如称为Cry1Aa、Cry1Ab、Cry1Ac、 Cry2Ab、Cry2Ae、Cry3Aa、Cry9c、Cry3Bb和Cry1Fa的毒素,以及其任何突变体,如Cry1A.105,或所述毒素的组合,如Cry1Ac和Cry1F或Cry1Ac、Cry1A.105 和Cry2Ab),植物针对害虫,如动物或微生物害虫,如针对昆虫、蛛形纲动物、线虫、螨虫、蛞蝓和蜗牛的抗性增加;此外,由于例如系统获得性抗性(SAR)、系统素、植物抗毒素(phytoalexin)、激发子(elicitor)以及抗性基因和相应地表达的蛋白质和毒素,植物针对植物病原性真菌、细菌和/或病毒的抗性增加;以及植物对某些除草活性化合物,例如咪唑啉酮、磺脲、草甘膦、PPO抑制剂、赛克津或草铵膦(例如“PAT”基因)的耐受性增加。赋予所讨论的所需性状的基因还可以在转基因植物中彼此组合存在。
作物保护-处理类型
用化合物和/或生物防治剂和/或混合物处理植物和植物部分是直接进行,或通过使用惯用处理方法(例如通过浸渍、喷洒、雾化、灌溉、蒸发、撒粉、成雾、传播、发泡、涂刷、铺展、注射、浇水(浸湿)、滴灌以及在繁殖材料的情况下,尤其在种子的情况下,此外作为用于干燥种子处理的粉末、用于液体种子处理的溶液、用于浆液处理的水溶性粉末、通过包被、通过涂布一个或多个涂层等),对其周围环境、生活环境(如其中种植或播种或将种植或播种本发明的植物的土壤或田地)或存储空间起作用来进行。此外,有可能通过超低体积方法,或将施用形式或化合物和/或生物防治剂和/或混合物自身注射到土壤中(例如,在犁沟中或植物前施用)施用化合物和/或生物防治剂和/或混合物。
本发明的植物的一种处理为叶面施用,即将化合物和/或生物防治剂和/或混合物施用到叶面,其中应根据所讨论的害虫的侵染水平调整处理频率和施用率。
在系统性活性化合物和/或生物试剂的情况下,化合物和/或生物防治剂和/或混合物还通过根系进入植物。植物接着通过化合物和/或生物防治剂和/或混合物对植物的生活环境起作用处理。这可以例如通过以下进行:通过浸湿,或通过混合到土壤或营养溶液中,即,植物的所在位置(例如,土壤)浸渍有液体形式的化合物和/或生物防治剂和/或其混合物,或通过土壤施用,即,根据本发明的化合物和/或生物防治剂和/或混合物以固体形式(例如,以颗粒形式)引入到植物的所在位置中,或通过滴灌施用(通常也被称作“化学灌溉”),即,将根据本发明的化合物和/或生物防治剂和/或混合物从地面或地下滴灌线在一定时间段内连同不同量的水在植物附近的所界定位置处液体施用。
种子处理
通过处理植物种子来防治害虫早已为人所知,并且是持续改良的主题。处理种子的方法还可考虑害虫抗性或耐受性植物的固有杀昆虫或杀线虫特性,以便实现种子以及萌芽植物的最优保护并且采用最少量的农药。
因此,本发明确切地说还涉及一种通过用本文所述的一种或多种化合物和/ 或一种或多种生物防治剂和/或混合物中的一种或多种处理种子来保护含有本发明的事件的种子和萌芽植物免于害虫攻击的方法。根据本发明的用于保护种子和萌芽植物免于害虫攻击的方法进一步包含一种其中种子同时在一次操作中或依序用化合物和/或生物防治剂和一种或多种混合组分处理的方法。其还包含用化合物、生物防治剂和混合组分在不同时间处理种子的方法。
本发明同样涉及如本文所述的化合物和/或生物防治剂和/或混合物的用途,其用于处理含有本发明的优良事件的种子以保护所述种子和所得植物免于害虫侵害。
此外,本发明涉及含有本发明的优良事件的种子,所述种子已经用根据本发明的化合物和/或生物防治剂和/或混合物或组合处理以提供针对害虫的保护。本发明还涉及已用化合物和/或生物防治剂和混合组分同时处理的种子。此外,本发明涉及已经用化合物和/或生物防治剂和混合组分在不同时间处理的种子。在已经用如本文所述的化合物和/或生物防治剂和/或混合物在不同时间点处理的种子的情况下,个别物质可以不同层存在于本发明的大豆种子上。此处,包含化合物和/或生物防治剂和/或混合物的层可任选地通过中间层隔开。本发明还涉及本发明的种子,其中化合物和/或生物防治剂和/或混合物已经作为涂层的组分或作为除涂层以外的另外的一个或多个层施用。
此外,本发明涉及种子,其在用如本文所描述的化合物和/或生物防治剂和/ 或混合物处理之后,经历膜包衣工艺以防止种子上的粉尘磨损。
系统性起作用的化合物所遇到的优点中的一个为以下事实:通过处理种子,不仅种子自身而且由其产生的植物在出苗之后针对害虫得到保护。以此方式,可省去在播种时或此后不久对作物的立即处理。
此外,用化合物和/或生物防治剂和/或混合物处理种子,可以增强经处理种子的如本文所述的出芽和出苗。
此外,化合物或生物防治剂或其混合物可以与信号传导技术的组合物或化合物组合使用,引起共生体(symbiont),例如根瘤菌、菌根,如
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菌根,和/或内生细菌或真菌的较好定殖和/或优化的氮固定。
在本发明的上下文中,在种子足够稳定以避免在处理期间的损坏的状态下处理种子。一般来说,可在收获与播种之间的任何时间点处理种子。通常使用的种子已从植物中分离出来,并从荚或其它植物部分中释放出来。举例来说,有可能使用已经收获、清洁和干燥到允许存储的水分含量的种子。或者,还可能使用在干燥之后已经用例如水处理且接着再次干燥的种子,如在预处理种子(primed seed)的情况下。
当处理种子时,选择施用到种子的本文所描述的化合物或生物试剂或混合物的量和/或其它添加剂的量,以使得种子的出芽不受不利影响或所得植物不受破坏以使得产率受不利影响。
一般来说,在适合的配制物中将化合物或生物试剂施用到种子。用于种子处理的适合的配制物和工艺为所属领域的技术人员已知的。
本文所述的化合物和/或生物试剂和/或其混合物可以转化成惯用拌种配制物,如溶液、乳液、悬浮液、粉末、泡沫、浆液或用于种子的其它涂布组合物,以及ULV配制物。
这些配制物以已知方式,通过将化合物和/或生物试剂和/或其混合物与惯用添加剂混合来制备,所述惯用添加剂例如惯用增量剂以及溶剂或稀释剂、着色剂、润湿剂、分散剂、乳化剂、消泡剂、防腐剂、二级增稠剂、粘合剂、赤霉素以及水。
可存在于可根据本发明使用的拌种配制物中的着色剂为出于所述目的惯用的所有着色剂。有可能使用微溶于水中的颜料或可溶于水中的染料。实例包括名称为若丹明B,C.I.颜料红112和C.I.溶剂红1的染料。
可存在于可根据本发明使用的拌种配制物中的适用润湿剂为促进润湿且常规地用于农业化学活性化合物的配制的所有物质。优选使用烷基萘磺酸盐,如二异丙基或二异丁基萘磺酸盐。
可存在于可根据本发明使用的拌种配制物中的适用分散剂和/或乳化剂为常规地用于活性农业化学成分的配制的所有非离子、阴离子和阳离子分散剂。优选使用非离子或阴离子分散剂或非离子或阴离子分散剂的混合物。适合的非离子分散剂尤其包括环氧乙烷/环氧丙烷嵌段聚合物、烷基酚聚乙二醇醚和三苯乙烯基酚聚乙二醇醚,以及其磷酸化或硫酸化衍生物。适合的阴离子分散剂尤其是木素磺酸盐、聚丙烯酸盐和芳基磺酸盐/甲醛缩合物。
可存在于可根据本发明使用的拌种配制物中的消泡剂为常规地用于活性农业化学成分的配制的所有抑制泡沫的物质。优选使用硅酮消泡剂和硬脂酸镁。
可存在于可根据本发明使用的拌种配制物中的防腐剂为可用于农业化学组合物中的所述目的的所有物质。实例包括双氯酚(dichlorophene)和苯甲醇半缩甲醛。
可存在于可根据本发明使用的拌种配制物中的二级增稠剂为可用于农业化学组合物中的所述目的的所有物质。纤维素衍生物、丙烯酸衍生物、黄原胶、改性粘土和细粉状二氧化硅为优选的。
可存在于可根据本发明使用的拌种配制物中的粘合剂为可用于拌种产物中的所有惯用粘合剂。聚乙烯吡咯烷酮、聚乙酸乙烯酯、聚乙烯醇和甲基纤维素可被提及为优选的。
可存在于可根据本发明使用的拌种配制物中的赤霉素优选地为赤霉素A1、 A3(=赤霉酸)、A4和A7;尤其优选地使用赤霉酸。
对于用可根据本发明使用的拌种配制物或通过添加水来由其制备的使用形式处理种子,惯常可用于拌种的所有混合单元都是适用的。具体来说,拌种的程序是将种子放到混合器中,分批地或连续地操作,按原样或在用水先前稀释之后添加特定所需量的拌种配制物,且混合所有事物直到配制物均匀地分布于种子上为止。如果合适,随后进行干燥操作。
可根据本发明使用的拌种配制物的施用率可在相对较宽范围内变化。其由配制物中的化合物和/或生物试剂和/或其混合物的特定含量引导。化合物的施用率一般在0.001与50g/kg种子之间,优选地在0.01与15g/kg种子之间。
用于种子处理含有本发明的事件的种子的优选杀真菌剂选自由以下组成的命名为SF1的群组:
苯并烯氟菌唑、多菌灵、萎锈灵、苯醚甲环唑、噻唑菌胺、氟咯菌腈、氟喹唑、氟唑菌酰胺、种菌唑、异芬氯氟醚菌唑、异噻菌胺、精甲霜灵、梅芬氯氟醚菌唑、甲霜灵、戊菌隆、氟唑菌苯胺、吡噻菌胺、丙硫菌唑、咪鲜胺、吡唑醚菌酯、氟唑环菌胺、硅噻菌胺、戊唑醇、肟菌酯、灭菌唑、噻唑菌胺(SCC)、吡噻菌胺(DPX流水线)、苯并烯氟菌唑(SYN流水线)、联苯吡菌胺(参见生物试剂)、烯酰吗啉、咪唑菌酮、氟吡菌胺、氟嘧菌酯、氟酰胺、甲基立枯磷、嘧菌酯、百菌清、环唑醇、嘧菌环胺、烯唑醇、氟吡菌酰胺、粉唑醇、氟唑菌酰胺、抑霉唑、吡唑萘菌胺、异噻菌胺、异菌脲、叶菌唑、腈菌唑、啶氧菌酯、嘧霉胺、四氟醚唑、噻苯唑、甲基硫菌灵、三唑醇、福美双、氟菌唑、福美锌、2,6-二甲基-1H,5H-[1,4]二噻英并[2,3-c:5,6-c']二吡咯-1,3,5,7(2H,6H)-四酮、甲磺酸2-{3-[2- (1-{[3,5-双(二氟甲基)-1H-吡唑-1-基]乙酰基}哌啶-4-基)-1,3-噻唑-4-基]-4,5-二氢- 1,2-恶唑-5-基}-3-氯苯基酯(噻唑基哌啶、N-(5-氯-2-异丙基苯甲基)-N-环丙基-3- (二氟甲基)-5-氟-1-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺环丙酰胺、皮卡布佐氟噻唑吡乙酮、啶氧菌酯、异氟赛普和氟唑菌酰羟胺。
用于种子处理种子的优选杀昆虫剂/杀螨剂/杀线虫剂选自由以下组成的命名为SIAN1的群组:
阿维菌素、双丙环虫酯、联苯菊酯、虫螨威、多菌灵、噻虫胺、溴氰虫酰胺(Cyazypyr)、氯氰菊酯、溴氰菊酯、苯醚甲环唑、乙氧嘧磺隆、咪唑菌酮 (Fenamidon)、恶唑禾草灵-P-乙基、乙虫清、芬普尼、三氟咪啶酰胺、氟吡呋喃酮(SivantoTM)、氟虫双酰胺、氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、氟喹唑、三乙膦酸铝、吡虫啉、咪鲜胺、丙森锌、λ-三氟氯氰菊酯、甲硫威、氯虫苯甲酰胺、螺虫乙酯、赐诺杀、戊唑醇、噻虫啉、噻虫嗪、硫双灭多威、噻恶嗪芬(NemastrikeTM)、三氟咪啶酰胺(nematicide)、λ-三氟氯氰菊酯、联苯菊酯、氯氰菊酯、啶虫脒、β- 氟氯氰菊酯、氟虫双酰胺、噻虫啉、毒死蜱、多灭磷、甲拌磷、氟啶虫胺腈、七氟菊酯、三福隆、氟氰虫酰胺、三福隆、布夫兰尼(MCI 8007-Mitsui/BASF)、环氧虫啶、噻唑磷、联氟砜和斯平托兰。
用于种子处理的优选生物试剂和生物活性成分选自由以下组成的命名为 SBCA1的群组:
西沢巴斯德氏芽菌,如西沢巴斯德氏芽菌Pn1(称为Clariva来自Syngenta 的产品),伯克氏菌菌株,尤其菌株A396,解淀粉芽孢杆菌,如解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838(称为Aveo EZ,来自Valent)或解淀粉芽孢杆菌TJ1000,坚强芽孢杆菌(Bacilus firmus),如坚强芽孢杆菌GB126,枯草芽孢杆菌,短小芽孢杆菌,如短小芽孢杆菌QST 2808或短小芽孢杆菌GB34,根瘤菌属种菌株,尤其回归线根瘤菌SP25,荧光假单胞菌,绿叶假单胞菌(Pseudomonas chloropsis),百氏青霉,慢生根瘤菌,普内杀瓦螨剂(PurnateVarroacide),昆诺阿藜皂苷 (Chenopodioum quinoa saponins),放射形土壤杆菌,蜡样芽孢杆菌,苏云金芽孢杆菌,球孢白僵菌,布氏白僵菌,伯克氏菌属种,活性紫色细菌,黄杆菌(Flavobacterium)属种,细菌异小杆线虫,玫烟色棒束孢,长孢蜡蚧菌 (Lecanicilliumlongisporum),毒蕈蜡蚧菌,金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliaze),金龟子绿僵菌金龟子变种,金龟子绿僵菌杀蝗变种,莱氏野村菌;淡紫拟青霉,类芽孢杆菌日本金龟子,巴斯德氏芽菌属种,西沢巴斯德氏芽菌,穿刺巴斯德氏芽菌,分支巴斯德氏芽菌,索恩巴斯德氏芽菌(Pasteuria thornea),美高协巴斯德氏芽菌,小卷蛾斯氏线虫,夜蛾斯氏线虫,克劳斯斯氏线虫,鲜黄链霉菌,细黄链霉菌,产生重组外生孢子的芽孢杆菌细胞,如芽孢杆菌属细胞,包括苏云金芽孢杆菌细胞(如苏云金芽孢杆菌BT013A),其表达包含以下的融合蛋白:
1)内切葡聚糖酶(如与WO 2016/044529的SEQ ID NO:107具有至少70%、 80%、90%或95%序列一致性的内切葡聚糖酶)、磷脂酶(如与WO 2016/044529 的SEQ ID NO.108具有至少70%、80%、90%或95%序列一致性的磷脂酶)、乙偶姻还原酶、吲哚-3-乙酰胺水解酶、色氨酸单加氧酶、乙酰乳酸合成酶、a-乙酰乳酸脱羧酶、丙酮酸脱羧酶、二乙酰还原酶、丁二醇脱氢酶、氨基转移酶、色氨酸脱羧酶、胺氧化酶、吲哚-3-丙酮酸脱羧酶、吲哚-3-乙醛脱氢酶、色氨酸侧链氧化酶、腈水解酶、腈酶、肽酶、蛋白酶、磷酸腺苷异戊烯基转移酶、磷酸酶、腺苷激酶、腺嘌呤磷酸核糖转移酶、CYP735A、5'核糖核苷酸磷酸水解酶、腺苷核苷酶、玉米素顺反异构酶、玉米素O-葡糖基转移酶、β-葡糖苷酶、顺羟化酶、 CK顺羟化酶、CKN-葡糖基转移酶、2,5-核糖核苷酸磷酸水解酶、腺苷核苷酶、嘌呤核苷磷酸化酶、玉米素还原酶、羟胺还原酶、2-酮戊二酸双加氧酶、赤霉酸 2B/3B水解酶、赤霉素3-氧化酶、赤霉素20-氧化酶、脱乙酰壳多糖酶 (chitosinase)、壳多糖酶、β-1,3-葡聚糖酶、-1,4-葡聚糖酶、β-Ι,
Figure BDA0002911161790002371
-葡聚糖酶、氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶,或涉及产生结瘤因子的酶,或降解或修饰细菌、真菌或植物营养物来源的酶,其选自由以下组成的群组:纤维素酶、脂肪酶、木质素氧化酶、糖苷水解酶、磷酸酶、固氮酶、核酸酶、酰胺酶、硝酸还原酶、亚硝酸还原酶、淀粉酶、氨氧化酶、木质酶、葡糖苷酶、磷脂酶、植酸酶、果胶酶、葡聚糖酶、硫酸酯酶、尿素酶、木聚糖酶或铁载体(siderophore),以及
2)将融合蛋白定位到芽孢杆菌细胞的外生孢子的靶向序列,如包含与WO 2016/044529的SEQ ID NO:1的氨基酸20-35具有至少约43%一致性的氨基酸序列的靶向序列,其中与氨基酸25-35的一致性为至少约54%;包含WO 2016/044529的SEQ ID NO:1的氨基酸1-35的靶向序列;包含WO 2016/044529 的SEQ ID NO:1的氨基酸20-35的靶向序列;包含WO2016/044529的SEQ ID NO:1的氨基酸22-31的靶向序列;包含WO 2016/044529的SEQ IDNO:1的氨基酸22-33的靶向序列;包含WO 2016/044529的SEQ ID NO:1的氨基酸20-31 的靶向序列;包含WO 2016/044529的SEQ ID NO:1的靶向序列;或包含与WO 2016/044529的SEQID NO:2具有至少85%一致性的氨基酸序列的外生孢子蛋白。
在一个实施例中,包含本发明的优良事件的种子的种子处理的生物试剂和生物活性成分选自由以下组成的命名为SBCA2的群组:
坚强芽孢杆菌,尤其坚强芽孢杆菌GB126,枯草芽孢杆菌,短小芽孢杆菌,如短小芽孢杆菌QST 2808或短小芽孢杆菌GB34,上述产生重组外生孢子的芽孢杆菌,如表达上述融合蛋白的苏云金芽孢杆菌细胞。
在另一更优选实施例中,包含本发明的优良事件的种子的种子处理的优选活性成分选自由以下组成的命名为SAI1的群组:
β-氟氯氰菊酯、慢生大豆根瘤菌、多菌灵、萎锈灵噻虫胺、氯氰菊酯、溴氰菊酯、苯醚甲环唑、乙氧嘧磺隆、咪唑菌酮、恶唑禾草灵-P-乙基、氟虫双酰胺、氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、氟嘧菌酯、氟喹唑、三乙膦酸铝、芬普尼、咪鲜胺、丙森锌、丙硫菌唑、荧光假单胞菌、螺虫乙酯、戊唑醇、环磺酮、噻虫啉、硫双灭多威、福美双、三唑醇、肟菌酯、三福隆、氟唑菌苯胺、吡虫啉、甲霜灵、精甲霜灵、氟咯菌腈、吡唑醚菌酯、嘧菌酯、氟唑环菌胺、种菌唑、啶氧菌酯、氰强尼普罗、氯虫苯甲酰胺、氟氰虫酰胺、吡噻菌胺、西沢巴斯德氏芽菌(如西沢巴斯德氏芽菌Pn1)、伯克氏菌属种(如菌株A396)、解淀粉芽孢杆菌(如解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838、解淀粉芽孢杆菌菌株D747或解淀粉芽孢杆菌TJ1000)、过敏蛋白蛋白、噻虫嗪、氟吡呋喃酮、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)、氟帕拉德、噻唑菌胺(Ethoboxam)、甲基硫菌灵、氟唑菌酰羟胺和噻苯唑。
在本发明的上下文中使用的用于种子处理包含本发明的优良事件的种子的化合物和/或生物试剂的尤其优选组合选自由以下组成的命名为SC1的群组:
噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、噻虫胺、苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、吡虫啉和硫双灭多威的组合、吡虫啉和丙硫菌唑的组合、噻虫胺和萎锈灵和甲霜灵和肟菌酯的组合、甲霜灵和丙硫菌唑和戊唑醇的组合、噻虫胺和β-氟氯氰菊酯的组合、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、噻虫胺和吡虫啉和丙硫菌唑和戊唑醇的组合、多菌灵和福美双的组合、吡虫啉和甲硫威的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺和丙硫菌唑的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑和吡虫啉的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑和噻虫胺的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和氟吡菌酰胺的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)、氟吡菌酰胺和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、吡虫啉和氟吡菌酰胺的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、吡虫啉、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑和噻虫胺的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌 GB126)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和氟吡菌酰胺的组合、吡虫啉和丙硫菌唑的组合、吡虫啉和七氟菊酯的组合、吡虫啉和戊菌隆的组合、吡虫啉和氟唑菌苯胺的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑和甲霜灵的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵和吡虫啉的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、吡虫啉和氟吡菌酰胺的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、吡虫啉、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、吡虫啉、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺和氟吡菌酰胺的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、甲霜灵和肟菌酯的组合、氟唑菌苯胺和肟菌酯的组合、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟嘧菌酯和丙硫菌唑和戊唑醇和咪唑嗪的组合、吡虫啉和甲硫威和福美双的组合、噻虫胺和β-氟氯氰菊酯的组合、噻虫胺和氟嘧菌酯和丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟吡菌酰胺和氟嘧菌酯和三唑醇的组合、甲霜灵和肟菌酯的组合、吡虫啉和种菌唑的组合、苯醚甲环唑和氟咯菌腈和戊唑醇的组合、吡虫啉和戊唑醇的组合、吡虫啉、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、甲霜灵、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、西沢巴斯德氏芽菌(如西沢巴斯德氏芽菌Pn1)、噻虫嗪、氟唑环菌胺、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、噻虫嗪、氟唑环菌胺、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、噻虫嗪、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺的组合、阿维菌素和噻虫嗪的组合、伯克氏菌属种菌株(如菌株A396)和吡虫啉的组合、解淀粉芽孢杆菌(如解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838)和噻虫胺的组合、噻恶嗪芬、吡虫啉、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、噻虫胺、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)、苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、吡唑醚菌酯、氟唑菌酰胺、甲霜灵和吡虫啉的组合、噻虫胺、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、噻虫胺、氟吡菌酰胺、噻恶嗪芬和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126) 的组合;噻虫胺、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、噻虫胺、氟吡菌酰胺、噻恶嗪芬、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合。
在本发明的一个实施例中,用丙硫菌唑、氟唑菌苯胺和甲霜灵的组合或丙硫菌唑、氟唑菌苯胺、甲霜灵和噻虫胺的组合处理包含本发明的EE-GM4的种子,其中所述种子或植物还含有一种或多种来自PI 548402、PI 209332或PI 437654 的大豆SCN抗性基因,或选自由以下组成的群组的大豆SCN抗性基因座或基因中的一种或多种:rhg1、rhg1-b、rhg2、rhg3、Rhg4、Rhg5、qSCN11、cqSCN- 003、cqSCN-005、cqSCN-006和cqSCN-007。
在本发明的一个实施例中,用于种子处理的活性成分的组合选自由以下组成的命名为SC2的群组:
噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、吡虫啉和硫双灭多威的组合、吡虫啉和丙硫菌唑的组合、噻虫胺、萎锈灵、甲霜灵、肟菌酯的组合、甲霜灵、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、噻虫胺和β-氟氯氰菊酯的组合、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、西沢巴斯德氏芽菌(如西沢巴斯德氏芽菌Pn1)、噻虫嗪、氟唑环菌胺、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、阿维菌素和噻虫嗪的组合、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑和甲霜灵的组合、氟唑菌苯胺和肟菌酯的组合。
用于根据本发明的种子处理的优选试剂为群组NC1、NC2或N3的杀线虫剂中的一种或多种,或群组BCA8、BCA9或BCA10的生物防治剂中的一种或多种,或所述杀线虫剂和生物防治剂中的一种或多种的组合。
配制物
本发明进一步涉及用于上文所提及的化合物和/或生物防治剂和/或混合物的配制物和使用形式,例如浸液,滴液和喷雾液,用于施用到本发明的植物或种子,或用于施用到其中种植本发明的植物或种子的土壤,或用于施用到其中待种植本发明的植物或种子的土壤(接着种植本发明的植物或播种本发明的种子)。在一些情况下,使用形式包含改良作用的其它农药和/或辅助剂,如渗透剂,例如植物油,例如菜籽油、葵花油,矿物油,例如石蜡油,植物脂肪酸的烷基酯,例如菜籽油甲酯或大豆油甲酯,或烷氧基化烷醇,和/或散布剂,例如烷基硅氧烷和/或盐,例如有机或无机铵或鏻盐,例如硫酸铵或磷酸氢二铵,和/或保持促进剂,例如磺基丁二酸二辛酯或羟丙基瓜尔胶聚合物,和/或保湿剂,例如丙三醇,和/或肥料,例如含铵、含钾或含磷肥料。
惯用配制物为例如水溶性液体(SL)、乳液浓缩物(EC)、水中的乳液(EW)、悬浮液浓缩物(SC、SE、FS、OD)、水分散性颗粒(WG)、颗粒(GR)和胶囊浓缩物(CS);这些和另外可能的配制物类型如下描述:例如全球作物保护联盟 (Crop Life International),《农药规范(Pesticide Specifications)》,《关于制定和使用粮农组织和世界卫生组织农药规范的手册(Manual on development and use of FAO and WHO specifications forpesticides)》,《粮农组织植物生产和保护文件 (FAO Plant Production and ProtectionPapers)-173》,粮农组织/世界卫生组织农药规范联合会议(FAO/WHO Joint Meeting onPesticide Specifications)编写,2004, ISBN:9251048576。除以上化合物中的一种或多种以外,配制物任选地包含其它农业化学活性化合物。
这些优选地为包含助剂的配制物或使用形式,例如增量剂、溶剂、自发性促进剂、载剂、乳化剂、分散剂、防冻剂、杀生物剂、增稠剂和/或其它助剂,例如辅助剂。在此情形下,辅助剂为增强配制物的生物作用的组分,组分自身不具有任何生物作用。辅助剂的实例为促进保持、散布、附着到叶表面或穿透的试剂。
这些配制物以已知方式制备,例如通过将化合物与助剂(例如增量剂、溶剂和/或固体载剂和/或其它助剂,例如表面活性剂)混合来制备。配制物在适合设施中或在施用之前或期间制备。
所使用的助剂可以是适合于向化合物的配制物或由这些配制物制备的使用形式(例如即用型农药,如喷雾液体或拌种产物)赋予特殊特性(如某些物理、技术和/或生物特性)的物质。
适合的增量剂为例如水、极性和非极性有机化学液体,例如来自以下的类别:芳香族和非芳香族烃(如石蜡、烷基苯、烷基萘、氯苯)、醇和多元醇(其在适当时也可以经取代、醚化和/或酯化)、酮(如丙酮、环己酮)、酯(包括脂肪和油)和(聚)醚、未被取代和被取代的胺、酰胺、内酰胺(如N-烷基吡咯烷酮) 和内酯、砜和亚砜(如二甲亚砜)、碳酸酯和腈。
如果使用的增量剂为水,那么还可能采用例如有机溶剂作为辅助溶剂。基本上,适合的液体溶剂为:芳香族物,如二甲苯、甲苯或烷基萘;氯化芳香族或氯化脂肪族烃,如氯苯、氯乙烯或二氯甲烷;脂肪族烃,如环己烷或石蜡,例如矿物油馏份、矿物油和植物油;醇,如丁醇或乙二醇和其醚和酯;酮,如丙酮、甲基乙基酮、甲基异丁基酮或环己酮;强极性溶剂,如二甲基甲酰胺或二甲亚砜;碳酸酯,如碳酸丙烯酯、碳酸丁烯酯、碳酸二乙酯或碳酸二丁酯;或腈,如乙腈或丙腈。
原则上,有可能使用所有适合的溶剂。适合溶剂的实例为:芳香族烃,如二甲苯、甲苯或烷基萘;氯化芳香族或氯化脂肪族烃,如氯苯、氯乙烯或二氯甲烷;脂肪族烃,如环己烷、石蜡、石油馏份、矿物油和植物油;醇,如甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇或乙二醇和其醚和酯;酮,如丙酮、甲基乙基酮、甲基异丁基酮或环己酮;强极性溶剂,如二甲亚砜;碳酸酯,如碳酸丙烯酯、碳酸丁烯酯、碳酸二乙酯或碳酸二丁酯;腈,如乙腈或丙腈;以及水。
原则上,有可能使用所有适合的载剂。适用的载剂尤其包括:例如铵盐和磨碎的天然矿物质,如高岭土、粘土、滑石、白垩、石英、绿坡缕石、蒙脱石或硅藻土,和磨碎的合成材料,如细粉状二氧化硅、氧化铝和天然或合成硅酸盐、树脂、蜡和/或固态肥料。可同样使用所述载剂的混合物。适用于颗粒的载剂包括:例如经粉碎和分级的天然岩石,如方解石、大理石、浮石、海泡石、白云石和无机和有机粗粉的合成颗粒,以及有机材料,如锯屑、纸、椰子壳、玉米棒和烟草茎秆的颗粒。
还可使用液化的气态增量剂或溶剂。尤其适合的增量剂或载剂为在环境温度下且在大气压下为气态的增量剂或载剂,例如气溶胶喷射剂气体,如卤代烃,以及丁烷、丙烷、氮气和二氧化碳。
具有离子或非离子特性的乳化剂和/或泡沫形成剂、分散剂或润湿剂或这些表面活性剂的混合物的实例为聚丙烯酸盐、木素磺酸盐、酚磺酸盐或萘磺酸盐、环氧乙烷与脂肪醇或脂肪酸或脂肪胺、与经取代酚的缩聚物(优选地为烷基酚或芳基酚)、磺基丁二酸酯的盐、牛磺酸衍生物(优选地为烷牛磺酸盐)、羟乙磺酸盐衍生物、聚乙氧基化醇或酚的磷酸酯、多元醇的脂肪酯和含有硫酸盐、磺酸盐和磷酸盐的化合物的衍生物(例如烷基芳基聚乙二醇醚)、烷基磺酸盐、烷基硫酸盐、芳基磺酸盐、蛋白质水解物、木素亚硫酸盐废液和甲基纤维素。如果农药中的一种和/或惰性载剂中的一种不可溶于水中且当在水中进行施用时,表面活性剂的存在是有利的。
有可能在配制物和由其衍生的使用形式中使用着色剂,如无机颜料,例如氧化铁、氧化钛和普鲁士蓝;以及有机染料,如茜素染料、偶氮染料和金属酞菁染料;以及营养素和微量营养素,如铁、锰、硼、铜、钴、钼和锌的盐作为其它助剂。
额外组分可以是稳定剂,如低温稳定剂、防腐剂、抗氧化剂、光稳定剂或改良化学和/或物理稳定性的其它试剂。还可存在泡沫形成剂或消泡剂。
增粘剂,如羧甲基纤维素,和呈粉末、颗粒或胶乳形式的天然和合成聚合物,如阿拉伯胶、聚乙烯醇和聚乙酸乙烯酯,或天然磷脂,如脑磷脂和卵磷脂,和合成磷脂也可以作为额外助剂存在于配制物和由其衍生的使用形式中。其它可能的助剂为矿物油和植物油。
任选地,其它助剂可以存在于配制物和由其衍生的使用形式中。所述添加剂的实例包括芳香剂、保护性胶体、粘结剂、粘合剂、增稠剂、触变剂、渗透剂、保持促进剂、稳定剂、螯合剂、络合剂、保湿剂、散布剂。一般来说,化合物可与通常用于配制目的的任何固体或液体添加剂组合。
适用的保持促进剂包括减小动态表面张力的所有那些物质,例如磺基丁二酸二辛酯,或增加粘弹性的所有那些物质,例如羟丙基瓜尔胶聚合物。
在本发明上下文中,适合渗透剂为通常用于改良农业化学活性化合物渗透到植物中的所有那些物质。在此上下文中,渗透剂由其从(通常水性)施用溶液和/或从喷雾涂层渗透到植物的表皮中,且进而增加表皮中活性化合物的迁移率的能力所定义。文献(Baur等人,1997,《农药科学(Pesticide Science)》51,131- 152)中描述的方法可用于确定此特性。实例包括烷氧基化醇,如乙氧基化椰子脂肪(10)或异十三烷基乙氧基化物(12);脂肪酸酯,例如菜籽油甲酯或大豆油甲酯;烷氧基化脂肪胺,例如乙氧基化牛脂胺(15);或铵盐和/或鏻盐,例如硫酸铵或磷酸氢二铵。
以配制物的重量计,配制物优选地包含0.00000001与98重量%之间的化合物或尤其优选地0.01重量%与95重量%之间的化合物,更优选地0.5重量%与 90重量%之间的化合物。
由配制物制备的使用形式(确切地说,农药)中的化合物的含量可在广泛范围内变化。使用形式中的化合物的浓度通常在按使用形式的重量计0.00000001 与95重量%化合物之间,优选地0.00001与1重量%之间。以适合于使用形式的惯用方式采用化合物。
混合物
本文中所提及的化合物还可以用作与一种或多种适合的杀真菌剂、杀细菌剂、杀螨剂、杀软体动物剂、杀线虫剂、杀昆虫剂、杀微生物剂、有益物种、除草剂、肥料、驱鸟剂、植物药(phytotonic)、杀菌剂、安全剂、信息化学物质和 /或植物生长调节剂的混合物,例如,以加宽作用范围,延长作用持续时间,增加作用速率,防止排斥作用或防止演变出抗性。另外,所述活性化合物组合可改良植物生长和/或对非生物因素(例如高温或低温、干旱或升高的水含量或土壤盐度)的耐受性。还可能改良开花和结果表现、优化萌芽能力和根部发育、有助于收获和改良产率、影响成熟度、改良所收获产物的质量和/或营养价值、延长所收获产物的储存寿命和/或改良其可加工性。
此外,所述化合物可以与其它活性化合物或信息化学物质(如吸引剂和/或驱鸟剂和/或植物活化剂和/或生长调节剂和/或肥料)的混合物形式存在。同样地,化合物可用于改良植物特性,例如所收获材料的生长、产率和质量。
在根据本发明的特定实施例中,化合物以配制物或由这些配制物制备的使用形式存在于与其它化合物(优选如本文所述的那些化合物)的混合物中。
如果本文所提及的化合物中的一种可以不同互变异构形式存在,那么也包括这些形式,即使未在每一情况下明确提及。此外,如果所有指定的混合搭配物的官能团使其能够实现,那么其可以任选地与适合的碱或酸形成盐。
在一个实施例中,选自群组H1的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组H2的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组H3的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组H4的至少一种活性成分混合物用于包含EE- GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组H5的至少一种活性成分混合物用于包含EE- GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN1的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN2的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN3的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN4的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN5的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN6的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN7的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN8的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN9的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN9的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN10的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN11的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN12的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN13的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN14的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN15的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN16的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN17的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN18的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN19的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN20的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN21的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN22的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN23的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN24的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN25的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN26的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN27的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN28的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN29的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组IAN30的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组SIAN1的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F1的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F2的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F3的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F4的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F5的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F6的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F7的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F8的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F9的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F10的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F11的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F12的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F13的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F14的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F15的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组SF1的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组F16的至少一种活性成分混合物用于包含EE- GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组P1的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组BCA1的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组BCA2的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组BCA3的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组BCA4的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组BCA5的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组BCA6的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组BCA7的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组BCA8的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组BCA9的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组BCA10的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组SBCA1的至少一种活性成分用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组SAI1的至少一种活性成分组合用于包含EE- GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组SC1的至少一种活性成分组合用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组SC2的至少一种活性成分组合用于包含EE-GM4 的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组NC1的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组NC2的至少一种活性成分用于包含EE-GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在一个实施例中,选自群组NC3的至少一种活性成分组合用于包含EE- GM4的植物或其植物部分(如种子),优选地以用于增加产率。
在本发明的上下文中,“产率增加”意指与未经处理的植物相比产率的显著增加,优选地与未经处理的植物(100%产率)相比产率显著增加至少1%,如1%到3%,即,相比于未经处理的植物的产率(100%),经处理的植物的产率为至少101%;更优选地,产率甚至更加增加至少2%,更优选地至少5%,甚至更优选地至少10%,如2到5%(产率为102到105%),2到10%(产率为102到 110%),5到20%(产率为105到120%),或10到30%(产率为110到130%)。产率增加可以通过治愈性处理(即用于处理已经侵染的植物)或通过保护性处理 (用于保护尚未侵染的植物)来实现。
在本发明的上下文中,“用……处理”意味着使植物或植物的一部分与有效量的活性成分或其组合接触或用活性成分或其组合涂布种子。
“活性成分”是指农业中所用的化合物或生物防治剂。根据本发明的活性成分不作为医疗或治疗性处理施用到人类或动物。
在本发明的上下文中,根据本发明或待根据本发明使用的活性成分可以是包含至少一种活性成分的组合物(即物理混合物)。其还可为由单一活性成分组分的单独配制物构成的活性成分的组合,所述单一活性成分组分为活性成分(槽混合物)。根据本发明的活性成分的组合的另一实例为活性成分不一起存在于相同配制物中,而是分开包装(组合包装),即,不共同预配制。因此,组合包装包括一个或多个单独容器,如小瓶、罐、瓶、囊、包或小罐,每一容器含有农用化学组合物的单独组分,此处为至少一种活性成分。一个实例为二组分组合包装。因此,本发明还涉及一种二组分组合包装,其包含第一组分和第二组分,所述第一组分又包含活性成分、液体或固体载剂,且在适当时,包含至少一种表面活性剂和/或至少一种惯用助剂,所述第二组分又包含另一活性成分、液体或固体载剂,且在适当时,包含至少一种表面活性剂和/或至少一种惯用助剂。下文描述例如关于适合的液体和固体载剂、表面活性剂和惯用助剂的更多细节。根据本发明的混合物或组合将意味着/涵盖槽混合物或组合包装。
在一个实施例中,除针对线虫的保护以外,如本文所描述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂还用于保护大豆植物、部分或种子免受以下害虫、细菌疾病或真菌影响:毛虫(hairy caterpillar)、尘污灯蛾(Spilarctia obliqua (Walker));卷叶蛾(leaf roller)、豆卷叶螟(Lamprosema indicata F);普通夜蛾 (common cutworm)、斜纹夜蛾(Spodoptera litura F);食心虫(pod borer)、粘虫 (Armyworms)(尤其甜菜粘虫和西部黄条粘虫(S.praefica))、番茄夜蛾 (Helicoverpa armigera(Hubner));秆蝇(stemfly)、菜豆蛇潜蝇(Ophiomyia phaseoli (Tryon))和白粉虱(white fly);甘薯白粉虱(Bemisia tabaci Genn.)、丁香假单胞菌、野油菜黄单胞菌、大豆壳针孢(Septoriaglycines)、菜豆壳球孢 (Macrophomina phaseolina)、黄瓜甲虫(Cucumber beetles)(尤其黄瓜条叶甲 (Acalymma vittata)或十一星黄瓜甲虫(Diabrotica undecimpunctata))、霜霉 (Downy mildew)(东北霜霉(Peronospora manshurica))、大豆灰斑病(Frogeye leafspot)(大豆抗灰斑病菌(Cercospora sojina))、墨西哥豆瓢虫(Mexican Bean beetle)(墨西哥豆瓢虫(Epilachna varivestis))、大雄疫霉(Phytophthora megasperma)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、锈病(Rust)(亚洲锈病 (Phakopsora pachyrhizi))、核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)。
以下实例描述优良事件EE-GM4的产生和识别、包含此事件的不同大豆品系的产生和用于特异性识别生物样品中的优良事件EE-GM4的工具的产生。
除非在实例中另外说明,否则所有重组技术都根据如以下中所描述的标准方案来进行:“Sambrook J和Russell DW(编)(2001)《分子克隆:实验指南 (Molecular Cloning:ALaboratory Manual)》,第3版,纽约Cold Spring Harbor Laboratory Press”和“AusubelFA、Brent R、Kingston RE、Moore DD、Seidman JG、Smith JA和Struhl K(编)(2006)《现代分子生物学实验技术(Current Protocols in Molecular Biology)》纽约John Wiley&Sons公司”。
标准材料和参考物描述于以下中:“Croy RDD(编)(1993)《植物分子生物学LabFax(Plant Molecular Biology LabFax)》,牛津BIOS Scientific Publishers有限公司,Oxford and Blackwell Scientific Publications”和“Brown TA,(1998)《分子生物学LabFax(Molecular Biology LabFax)》,第2版,圣地亚哥Academic Press”。用于聚合酶链反应(PCR)的标准材料和方法可见于“McPherson MJ和
Figure BDA0002911161790002541
SG(2000)《PCR基础(PCR(TheBasics))》,牛津BIOS Scientific Publishers 有限公司”和“《PCR应用手册(PCRApplications Manual)》,第3版(2006),曼海姆罗氏诊断公司,或可见于见万维网地址:roche-applied-science.com”。
应理解,可需要将任何实验室方案(如以下实例中的PCR方案)中的多个参数调整到特定实验室条件,且可稍微修改以获得类似结果。举例来说,PCR方法中使用不同方法制备DNA或选择其它引物可以指示PCR方案的其它最优条件。然而,这些调整对于所属领域的技术人员将是显而易见的,并且于当前PCR 应用手册中进一步详述。
在描述和实例中,参考所附序列表中的以下序列:
SEQ ID No.1:5'交接序列EE-GM4
SEQ ID No.2:3'交接序列EE-GM4
SEQ ID No.3:EE-GM4 5'交接序列
SEQ ID No.4:EE-GM4 3'交接序列
SEQ ID No.5:EE-GM4 5'区
SEQ ID No.6:EE-GM4 3'区
SEQ ID No.7:cry14Ab-1.b编码序列
SEQ ID No.8:Cry14Ab-1蛋白质氨基酸序列
SEQ ID No.9:hppdPf-4Pa编码序列
SEQ ID No.10:HPPD-4蛋白质氨基酸序列
SEQ ID No.11:转化质粒pSZ8832-T-DNA边界之间的序列
SEQ ID No.12:引物PRIM0937
SEQ ID No.13:引物PRIM0938
SEQ ID No.14:探针TM1734
SEQ ID No.15:引物SHA071
SEQ ID No.16:引物SHA072
SEQ ID No.17:探针TM1428
SEQ ID No.18:引物PRIM1652
SEQ ID No.19:探针TM2084
SEQ ID No.20:引物PRIM0939
SEQ ID No.21:引物PRIM0940
SEQ ID No.22:探针TM1735
SEQ ID No.23:大豆事件EE-GM4
SEQ ID No.24:EE-GM4 5'交接序列
SEQ ID No.25:EE-GM4 3'交接序列
SEQ ID No.26:引物GLPB173
SEQ ID No.27:引物GLPB175
SEQ ID No.28:引物GLPB167
SEQ ID No.29:引物GLPB170
SEQ ID No.30:插入前基因座序列
实例
1.具有线虫抗性和除草剂耐受性基因的大豆的转化
1.1.包含cry14Ab-1.b和hppdPf-4Pa嵌合基因的插入T-DNA的描述
使用含有hppdPf-4Pa和cry14Ab-1.b表达盒的载体pSZ8832通过农杆菌介导的转化产生EE-GM4大豆:
(i)编码HPPD-4蛋白质的突变hppdPf-4Pa基因。hppdPf-4Pa编码序列通过在来源于荧光假单胞菌菌株A32的编码HPPD蛋白质的DNA中位置335处 (Glu经Pro取代)、位置336处(Gly经Trp取代)、位置339处(Lys经Ala取代)和位置340处(Ala经Gln取代)引入点突变来产生。HPPD-4蛋白质的表达赋予对HPPD抑制剂除草剂,如异恶唑草酮或硝磺草酮的耐受性。
(ii)编码Cry14Ab-1蛋白质的cry14Ab-1.b基因。Cry14Ab-1蛋白质的表达赋予对线虫,如大豆孢囊线虫大豆异皮线虫的抗性。
质粒pSZ8832为植物转化载体,其含有位于右T-DNA边界(RB)与左T- DNA边界(LB)之间的嵌合cry14Ab-1.b基因和嵌合hppdPf-4Pa基因。在右与左T-DNA边界之间包含于T-DNA中的遗传元件的描述在以下表2中给出。此质粒的T-DNA(在T-DNA边界之间)的确认性测序产生SEQ ID No.11的序列。 cry14Ab-1.b和hppdPf-4Pa编码序列(展示编码股)的核苷酸序列分别表示于 SEQ ID No.7和9中。
表2:pSZ8832中T-DNA边界之间的遗传元件,和SEQ ID No.11中的核苷酸位置的描述.
Figure BDA0002911161790002571
1.2.事件EE-GM4
将T-DNA载体pSZ8832引入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)和经转化大豆植物(索恩变种),根据所属领域中已知的方法使用HPPD抑制剂耐受性选择。接着存活的植物自花授粉以产生T1种子。随后的世代通过自花授粉或通过杂交到其它大豆种质中来产生。
1.2.1优良事件EE-GM4的识别
基于从使用相同嵌合基因获得的广泛范围的不同转化事件的广泛选择程序 (基于包括但不限于温室和田地中的性状功效、分子特征和农学特征的参数)选择优良事件EE-GM4。发现含有EE-GM4的大豆植物在大豆植物基因组中的单一基因座处具有转基因的插入,以具有与用于转化的亲本植物类似的整体农学特征,以使得插入转化DNA不会造成产量损失(相比于不具有所述事件的相应等基因品系,如获自其中分离出转基因的经转化植物的“无效”植物品系),为了相比于不含EE-GM4的等基因无效品系,在标准SCN温室分析中显著减少成年雌体根部侵染,并且在田地中在高SCN线虫压力下具有改良的产率。另外,在田间试验中测量对HPPD抑制剂除草剂施用的耐受性,但除草剂耐受性不是优良事件选择的选择标准。
1.2.1.1事件的分子分析
DNA印迹结果展示EE-GM4含有单一转基因基因座,所述单一转基因基因座含有cry14Ab-1.b嵌合基因的单一拷贝和hppdPf-4Pa嵌合基因的单一拷贝。 EE-GM4缺失了hppdPf-4Pa嵌合基因的35S启动子的一部分(指示在转化期间,不是SEQ ID No.11的全部T-DNA插入到大豆基因组中)。在使用靶向侧接T- DNA的左和右边界的载体主链序列以及aadA序列的引物进行PCR分析后,未获得PCR片段。并且,在多代EE-GM4中存在相同EE-GM4整合片段表明事件的结构稳定性。
1.2.1.2事件的继承
通过PCR分析测试hppdPf-4Pa和cry14Ab-1.b基因的基因型,在后续世代中插入T-DNA插入序列的继承展示含于EE-GM4插入序列内的hppdPf-4Pa和 cry14Ab-1.b基因以可预测方式和对于单次插入预期的方式继承。这些数据符合孟德尔原理,并支持以下结论:EE-GM4事件由整合到大豆细胞核基因组内的单一染色体基因座中的单一插入序列组成。
此外,在EE-GM4渐渗入5个优良大豆品系后,分析后续世代中的EE-GM4 的分离模式确认了正常孟德尔分离。表3展示不同分离群体中所观察到的EE- GM4的分离。
表3.分离分析EE-GM4
Figure BDA0002911161790002591
在表3中,“HH”表示纯合植物,“半”表示半合植物,并且“无效”表示缺失EE-GM4的无效分离子,并且“ns”意味着非统计学上显著的(关于相对于正常/预期分离的任何变化)。在这些试验中,亲本1为具有Rhg1和Rhg4 SCN 抗性的MG VI品系,亲本2为对SCN敏感的MGVI品系,亲本3为对SCN敏感的MG IX品系,亲本4为具有Rhg1 SCN抗性的MG III品系,并且亲本5为对SCN敏感的MG I品系。
1.2.1.3蛋白质表达的稳定性
通过从EE-GM4大豆的不同世代(例如T4、T6和BC2F3)收集的叶、根和种子样品中的夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)来确定温室生长植物中的HPPD- 4和Cry14Ab-1蛋白质的蛋白质表达量。在所有测试的世代中,HPPD-4和 Cry14Ab-1蛋白质展现叶、根和种子中的类似平均表达量。Cry14Ab-1和HPPD- 4浓度中观察到的任何差异是归因于天然植物之间的变化性。
1.2.1.4农学性能和HPPD抑制剂除草剂耐受性
在农学等效性试验中,在不存在SCN的情况下生长时,将在原始转化背景 (索恩)中的包含EE-GM4的植物与分离无效植物(不具有EE-GM4)和野生型索恩植物进行比较。小区未使用HPPD除草剂处理,但通过使用常规除草剂和必要时进行人工除草而保持为无杂草。在不同地点进行的相当试验中生长时,在检查定性植物特征(如花色、荚色、种子色和茸毛)和定量特征(如产率、高度、倒伏数、成活数和距成熟天数)时,在含有所述事件的植物与分离无效植物(不具有EE-GM4)之间未观察到以生物学上显著的方式影响农学性能的差异。因此,包含EE-GM4的植物展示与相应非转基因植物相当的正常农学特征。
2017年,在原始索恩转化背景下对EE-GM4进行了额外试验。也于2017年在有限数目的地点确立了EE-GM4处于优良MG1和MG3遗传背景中的基本试验。在检查定性植物特征(如花色、荚色、种子色和茸毛)和定量特征(如产率、高度、倒伏数、成活数、测试重量和距成熟天数)时,发现带有EE-GM4的植物的成熟期略有延迟(0.8天),但未在三个遗传背景中的任一个中观察到含有所述事件的植物与分离无效植物(不具有EE-GM4)之间的农学上有意义的差异,确认包含EE-GM4的植物展示正常农学特征。
在2年中在田地中的不同地点处测试包含EE-GM4的植物对HPPD抑制剂除草剂的耐受性。在这些试验中,发现当出苗前施用时,具有EE-GM4的植物具有对异恶唑草酮(IFT)商业相关的耐受性,但IFT出苗后施用对作物的损害稍微更大。这些试验还展示当出苗前施用或出苗后施用时,含有事件EE-GM4的植物具有对硝磺草酮(MST)商业相关的耐受性。所有出苗后处理都在V2-V3 阶段,其中添加辅助剂作物油浓缩物和硫酸铵以增加除草剂活性。
图5展示与未转化/常规大豆植物相比,对于含有事件EE-GM4的大豆植物,在2年内的若干田间试验中记录的除草剂处理的最大植物毒性数据(植物损害) 的平均值。对照未转化的索恩植物在这些相同试验中展示约80%到90%的平均最大植物毒性值,展示(非GM)大豆不耐受这些HPPD抑制剂除草剂。如本文所用,“最大植物毒性”为在试验持续时间期间在任何观察下所记录的最高植物毒性等级(每试验3到4次观察)。在现有杂草防除应用中,在出苗前或出苗后施用中异恶唑草酮(IFT)和出苗后施用中MST的正常(1×)剂量为105gr/ha,并且出苗前施用中硝磺草酮的正常(1×)剂量为210gr/ha。因此,在图5中报告的这些试验中,图5中的出苗前使用的施用(IFT 420gr/ha,硝磺草酮840 gr/ha)为正常剂量的4倍,并且出苗后(对于IFT和硝磺草酮中的每一个,210 gr/ha)为正常剂量的2倍。
此外,在2年内的若干田间试验中,当分别以400gr ai/ha出苗前或以200 gr ai/ha出苗后施用时,具有事件EE-GM4的大豆植物对于实验HPPD抑制剂化合物2-甲基-N-(5-甲基-1,3,4-恶二唑-2-基)-3-(甲磺酰基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺 (美国专利9101141)具有良好耐受性(每一处理的平均最大植物毒性值低于 20%)。在这些试验中,当以100-150grai/ha出苗后施用时,具有事件EE-GM4 的大豆植物对实验化合物2-氯-3-(甲硫烷基)-N-(1-甲基-1H-四唑-5-基)-4-(三氟甲基)苯甲酰胺(美国专利8481749)展示出耐受性,但平均最大植物毒性为30%,比其它HPPD抑制剂要高一些。所有出苗后处理都在V2-V3阶段,其中添加辅助剂作物油浓缩物和硫酸铵以增加除草剂活性。
当相加获自第3季除草剂耐受性田间试验(出苗前或出苗后对EE-GM4以相同剂量但在另一地理位置施用异恶唑草酮除草剂)的数据时,对于IFT获得与图5中所描述的那些相同或极类似的平均最大植物毒性等级。
1.2.1.5线虫抗性
标准SCN分析展示,与索恩野生型大豆植物相比,含有EE-GM4的植物根部上的SCN孢囊显著减少。另外,测量温室雌体指数的标准SCN分析还展示,与不具有EE-GM4的SCN抗性优良大豆品系相比,含有事件EE-GM4和原生 SCN抗性的大豆植物展示根部上SCN孢囊的显著减少。当EE-GM4渐渗入具有 PI88788大豆抗性的优良大豆品系(成熟组3)或具有Peking大豆抗性的优良大豆品系(成熟组6.2)时,与只具有原生抗性的根部相比,在根部上始终发现SCN 孢囊数目减少。
在2年内在若干地点的田间试验中,自然SCN侵染田地中含有EE-GM4的大豆植物与等基因无效分离子相比,产率显著增加。图6展示如于2015年和 2016年,在SCN侵染田地(从低到高SCN侵染)中,在爱荷华州,伊利诺伊州,印第安纳州,密苏里州和田纳西州的9个不同地点测试的原始转化体背景 (索恩)中的EE-GM4的籽粒产率。2017年,在具有不同(自然)SCN压力的总共12个地点对原始转化体背景(索恩)中的EE-GM4进行了额外试验。在所有这些12个试验中,含有EE-GM4的植物产生的产率平均比不具有EE-GM4的无效分离子(p=0.02)高8%。图7展示当渐渗(BC2F3)到对SCN敏感的优良成熟组I(MG I)品系中,并于2016年在明尼苏达州的一个地点和北达科他州的一个地点(各自具有高SCN侵染水平)进行测试时EE-GM4的籽粒产率。在相同的两个地点(同样各自具有高SCN侵染)和威斯康星州的额外地点(后者具有中等SCN压力)测试相同的MG I品系,并且含有EE-GM4的植物的籽粒产率始终高于不具有EE-GM4的对应的无效分离子。最后,在2017年的晚种植试验中,在巴西具有中到高SCN压力的三个地点的基本研究展示,当与分离无效植物(不具有EE-GM4)相比较时,具有EE-GM4的植物的优良易感品系显著平均增加29%(p=0.002)。由于种植日期晚,这些基本巴西试验中的总产率倾向于较低,并且一个试验内的变化性相当高,这可能会影响产率增加的幅度,但发现对于具有EE-GM4的植物来说,产率增加明确是显著的并且视觉上可观察到。因此,事件EE-GM4赋予SCN侵染田地中的大豆植物产率的显著增加。
在评价事件EE-GM4在与原生SCN抗性组合时对产率的影响的初步研究中,一系列F3群体由EE-GM4与携带来自PI88788的rhg1抗性基因的优良MG III常规品系的单次杂交产生。在F3群体中,将对于事件EE-GM4和rhg1等位基因纯合的一个'堆积'群体与仅对于rhg1等位基因纯合的群体(不具有EE-GM4) 进行了比较。2016年在具有中到高SCN侵染的三个地点确立了这些群体的初步产率试验。在所有三个地点中,相比于仅携带rhg1等位基因的群体,'堆积'群体(对于EE-GM4事件和rhg1等位基因纯合的植物)产生8%更大的产率(p=0.05)。这些结果初步指示,在具有常规SCN抗性的品种中添加EE-GM4事件可以在中到高SCN压力下增加产率。
由于许多因素都会影响结果,因此在中至高SCN侵染下进行产率试验具有挑战性。田地内的SCN群体密度可能有很大差异,并且因此SCN对产率的总体影响也可能在一个小区与另一小区之间变化(参见例如见万维网地址: plantmanagementnetwork.org/pub/php/review/2009/sce08/)。有利的土壤类型,良好的肥力和充足的降雨可以减轻SCN侵染对大豆植物的影响,且即使在高SCN群体数下也可以使产率影响最小化。具有极高SCN群体数的许多田地往往会具有较差的土壤且因此具有较低的产率潜力,使得难以辨别对产率的统计学上显著的影响。因此,来自SCN田间试验的产率数据可能变化很大,且将不期望在具有高SCN群体数的每个试验中看到产率的显著提高。跨越试验的总体趋势为用于判断事件的性能的最相关标准。
用含有EE-GM4的植物进行的SCN田间试验在具有天然SCN侵染的田地中建立。实验单元由含有间隔为0.76m且在3.8到9.1m长范围内的2到4行的田地小区组成。每个小区的行的数目和小区长度基于田地大小和设备配置在不同地点间变化。小区以每米26粒种子播种,且因此每个实验单元含有200到 960粒种子。使用裂区或复式裂区设计在田地中将小区随机化。裂区设计非常适合于帮助最小化土壤类型或SCN群体中高变化性的影响,这在SCN侵染田地中很常见。在SCN田间试验中,将包含EE-GM4的植物种植在一个子区中,其紧邻或非常靠近一个含有分离无效植物(不具有EE-GM4)的同伴子区。两个小区紧密接近有助于最小化(SCN)田地变化性对估计的具有和不具有事件EE- GM4的植物之间差异的影响。大多数试验重复了四次,但少数重复了三次,且少数重复了五或六次。
此外,2016年,在田间测试具有EE-GM4的植物的两个地点(印第安纳州和爱荷华州)观察到了中度到重度的猝死综合征侵染(SDS)。评定这两个地点的小区SDS症状的发病率和严重程度,并使用“SIUC SDS评分方法”(见万维网地址:scnresearch.info/462.pdf)计算SDS疾病指数(DX)。与易感无效分离子(不具有EE-GM4)相比,对于事件EE-GM4纯合的植物的DX评分在印第安纳州低43%,并且在爱荷华州低33%,表明事件提供针对SDS侵染的保护。 SDS和SCN在田地中通常紧密相关,且将在植物中展示一些相互作用(参见例如见万维网地址:soybeanresearchinfo.com/pdf_docs/sdsupdate.pdf,和见万维网地址:apsnet.org/edcenter/intropp/lessons/fungi/ascomycetes/pages/suddendeath.aspx)。
2017年,在美国的一个观察到IDC症状的试验地点(具有高SCN侵染),在具有EE-GM4(和其无效分离子)的植物上收集了缺铁失绿症(IDC)评分。试验为在三个不同背景中研究事件的影响的裂区设计。IDC评级按照Cianzio等人(1979)《作物科学》19:644-646的描述进行。图10展示跨越三个基因背景(1个SCN抗性(PI88788抗性)背景、1个SCN易感背景和SCN易感索恩背景)的具有事件EE-GM4的植物和对应无效分离子(不具有EE-GM4)的平均 IDC评分。发现含有EE-GM4的植物与其无效分离子相比IDC评分较低。因此,在大豆植物受到SCN和IDC攻击的田间试验中,EE-GM4可以降低IDC的叶面严重程度。
另外,使未转化的索恩和EE-GM4种子萌芽并种植在温室中,以检查对病变线虫短尾短体线虫的防治。当2周龄时,将短尾短体线虫(1500个/植物,不同发育阶段)施用于植物。在施用后30天,从根部提取短体线虫并且计数。将在含有EE-GM4的植物的根部中发现的线虫的平均数目与在野生型索恩植物根部中发现的短体线虫的平均数目进行比较。当与索恩对照根部相比时,在含有 EE-GM4的植物根部中发现的短体线虫平均减少约80%到90%,这表明大豆事件EE-GM4对病变线虫的显著防治。
图8展示了美国的短尾短体线虫温室分析的结果,其中将5个优良大豆品系(一个SCN易感(MG 1)、一个SCN抗性(PI88788,MG 3)、一个SCN易感(MG 6.2)、一个SCN抗性(Peking,MG 6.2)和一个SCN易感(MG 9)中的具有EE-GM4的优良品系与SCN易感和SCN抗性美国大豆品系进行比较。大豆植物在小锥形盆中生长且保持在25℃到32℃之间的温度变化的温室中。从南卡罗来纳州获得并在温室中扩增的短尾短体线虫被用于接种处于V2-V3发育阶段的植物。每株植物接种了大约1500个卵+成虫,且每项有5株植物。侵染后30天,从根部提取线虫和卵并且计数。每项在两个独立实验中运行。SCN易感和SCN抗性美国大豆品系未展示对短体线虫的防治,而具有EE-GM4的植物展示对短体线虫的约85%防治。
图9展示了巴西的短尾短体线虫温室分析的结果,将具有EE-GM4的大豆植物与无抗性的巴西大豆品系和1个低Rf品系以及SCN易感和SCN抗性植物进行了比较。大豆品系在小锥形盆中生长且保持在25℃到32℃之间的温度变化的温室中。从巴西田地获得并在温室中扩增的短尾短体线虫被用于接种处于V2- V3发育阶段的植物。每株植物接种了大约1000个卵+成虫,且每项有5株植物。侵染后30天,从根部提取线虫和卵并且计数。展示的结果来自单一实验。一个巴西大豆品系(BRS 7380),标记为具有短体线虫的低生殖因素,展示短体线虫的约89%减少。具有EE-GM4的植物防治约97%短体线虫。携带原生SCN抗性 (rhg1+Rhg4)的大豆品系不防治短尾短体线虫。
图11展示了巴西的短尾短体线虫田间试验的结果,将具有EE-GM4的大豆植物与不具有转基因的大豆品系和野生型亲本(优良成熟组IX大豆品系,未知晓具有任何原生短体线虫耐受性或抗性)进行了比较。用含有EE-GM4的大豆植物,在自然地侵染有短尾短体线虫的田地中进行这些短尾短体线虫田间试验。实验单元为间隔0.5m的四个5m长的行。以每米大约20粒种子播种小区。使用裂区设计在田地中随机化小区以帮助最小化纯合和无效分离子比较处理当中的空间变化性。每个实验地点含有六次重复。在种植后大约90天,通过从每个小区收集两个子样品来评估优良事件的功效。每一子样品含有三株植物的整个根系。根系样品被带到实验室,在那里对幼年和成年的短尾短体线虫进行提取和计数。基于对于EE-GM4纯合的大豆植物与无效分离子之间的每植物的幼年和成年的短尾短体线虫的总数的差异来确定针对短尾短体线虫的功效。根据以下的方法针对短尾短体线虫处理根部样品:Coolen和D'Herde(1972年书籍,书名为:《一种用于从植物组织定量提取线虫的方法(Amethod for the quantitative extraction of nematodes from plant tissue)》。比利时:国家线虫学和昆虫学研究站 (Belgium:State Nematology and Entomology ResearchStation)(Ghent,见万维网地址:cabdirect.org/cabdirect/abstract/19722001202),和Jenkins(1964,《植物疾病报告(Plant Disease Report)》48:692)。在这些田间试验中,含有EE-GM4的大豆植物相比于不具有所述事件的无效分离子,展示大豆根部中的短尾短体(成年和幼年)线虫的总数的显著减少(参见图11)。
此外,含有EE-GM4的植物可以用于防治根结线虫(RKN),如南方根结线虫。即使南方根结线虫群体不很厉害地侵染索恩野生型大豆,与未转化的索恩植物相比,具有EE-GM4的索恩植物平均展示出更多的RKN卵数/根质量的减少。
1.2.2优良事件EE-GM4的侧接区和插入T-DNA的识别
如EE-GM4优良事件中侧接插入T-DNA的区域和与其邻接的T-DNA的序列展示于所附序列表中。
1.2.2.1 5'T-DNA侧接区
对被识别为包含EE-GM4的5'T-DNA侧接区的片段进行测序,并且其核苷酸序列表示于SEQ ID No.5核苷酸1-227中。此5'T-DNA侧接区由对应于插入前基因座序列的大豆基因组序列(SEQ ID No.5核苷酸1-227)构成。包含插入 T-DNA序列的一部分和与其邻接的T-DNA 5'侧接序列的一部分的5'交接区表示于SEQ ID No.1和3中。
1.2.2.2 3'T-DNA侧接区
对被识别为包含EE-GM4的3'T-DNA侧接区的片段进行测序,并且其核苷酸序列表示于SEQ ID No.6核苷酸254-501中。此3'T-DNA侧接区由插入前基因座序列的大豆基因组序列(SEQ ID No.6核苷酸254-501)构成。包含插入T- DNA序列的一部分和与其邻接的T-DNA 3'侧接序列的一部分的3'交接区表示于 SEQ ID No.2和4中。
1.2.2.3EE-GM4的插入T-DNA
对与以上5'T-DNA侧接序列邻接的插入T-DNA测序,并且其核苷酸序列表示于SEQID No.5核苷酸228-398中。此外,对与以上3'T-DNA侧接序列邻接的插入T-DNA测序,并且其核苷酸序列表示于SEQ ID No.6核苷酸1-253中。在转化期间,在插入前基因座序列处删除970bp基因组DNA,并且其被插入T- DNA置换。
对转化质粒pSZ8832中的T-DNA区(在T-DNA边界之间的部分)测序产生SEQ IDNo.11中报告的序列。嵌合cry14Ab-1.b基因序列(包含Ubi10启动子和35S 3'非翻译区)表示于SEQ ID No.11核苷酸131-5276(逆时针)中。SEQ ID No.5(核苷酸228-398)中在5'侧接区处的插入T-DNA序列与SEQ ID No.11 核苷酸17到核苷酸187的核苷酸序列一致,并且SEQID No.6(核苷酸1-253) 中在3'侧接区处的插入T-DNA序列与SEQ ID No.11核苷酸7369到核苷酸7621 的核苷酸序列一致。因此,插入EE-GM4中的T-DNA的5'端对应于SEQ ID No. 11的转化质粒序列中的核苷酸17,并且插入EE-GM4中的T-DNA的3'端对应于SEQ ID No.11的转化质粒序列中的核苷酸7621。在SEQ ID No.5的序列与 SEQ ID No.6的序列之间插入EE-GM4中的T-DNA含于以登录号PTA-123624 保藏于ATCC的种子中,并且具有与SEQ ID No.11核苷酸188到核苷酸7368 的序列基本上类似或一致的序列。
事件EE-GM4的插入前基因座可以通过所属领域中已知的方法基于本文所提供的5'和3'T-DNA侧接序列(SEQ ID No.5nt 1到nt 227和SEQ ID No.6nt 254到nt 501),由野生型大豆索恩变种确定。大豆基因组中的插入前基因座序列依次对应于以下序列:SEQ IDNo.5中的核苷酸位置1到核苷酸位置227、 970nt缺失和SEQ ID No.6中的核苷酸位置254到核苷酸位置501。完整的插入前基因座序列在SEQ ID No.30中给出,其中nt 1-1000是5'侧接基因组序列,nt 1001-1970是目标位点缺失,并且1971-2970是3'侧接基因组序列。
1.2.3优良事件EE-GM4的侧接区和插入T-DNA的确认
使用靶向插入T-DNA上游和下游的植物DNA和EE-GM4中的插入T-DNA 的引物的PCR扩增确认并且延伸5'和3'侧接序列。
1.2.3.1.5'交接序列EE-GM4特异性反应
两种引物GLPB173和GLPB167被设计成用于扩增跨越5'T-DNA侧接序列与事件EE-GM4的T-DNA插入片段的交接区的大约5059bp的扩增子。引物 GLPB173的序列来源于大豆Williams 82.a2.v1的大豆参考序列。
靶向EE-GM4 T-DNA 5'侧接序列的正向引物:
GLPB173 5'-CTTCATCTCCCCgTTAAAgTg-3'(SEQ ID No.26)
靶向EE-GM4插入T-DNA序列的反向引物:
GLPB167 5'-TACAACgTgCTCgCTATTCC-3'(SEQ ID No.28)
5'交接序列反应的反应混合物的组成:
Figure BDA0002911161790002681
5'交接序列反应的热循环条件:
Figure BDA0002911161790002691
所获得并且与如SEQ ID No.5中所示的插入T-DNA的一部分邻接且在其上游的经延伸T-DNA 5'侧接序列的序列在SEQ ID No.24中示出。
1.2.3.2.3'交接序列EE-GM4特异性反应
两种引物GLPB170和GLPB175被设计成用于扩增跨越事件EE-GM4的T- DNA插入片段与3'T-DNA侧接序列的交接区的大约5141bp的扩增子。引物 GLPB175的序列来源于大豆Williams 82.a2.v1的参考序列。
靶向EE-GM4插入T-DNA序列的正向引物:
GLPB170 5'-TCTCggTATCAgCgTTCTTg-3'(SEQ ID No.29)
靶向EE-GM4 T-DNA 3'侧接序列的反向引物:
GLPB175 5'-gTTgTCAACAATgACCAgAAg-3'(SEQ ID No.27)
3'交接序列反应的反应混合物的组成:
Figure BDA0002911161790002692
Figure BDA0002911161790002701
3'交接序列反应的热循环条件:
Figure BDA0002911161790002702
所获得并且与如SEQ ID No.6中所示的插入T-DNA的一部分邻接且在其下游的经延伸T-DNA 3'侧接序列的序列在SEQ ID No.25中示出。
因为上述2种反应中的所得扩增子重叠,所以这允许重构EE-GM4插入T- DNA的序列和延伸的5'和3'侧接序列,其展示于SEQ ID No.23中。SEQ ID No. 23中的5'T-DNA侧接序列为核苷酸位置1到核苷酸位置1058(对应于插入前基因座基因组序列)、插入T-DNA序列为核苷酸位置1059到核苷酸位置8663,且SEQ ID No.23中的3'T-DNA侧接序列为核苷酸位置8664到核苷酸位置9749 (对应于插入前基因座基因组序列)。
2.EE-GM4识别方案的产生
2.1.EE-GM4身份分析的终点法
此方法描述使用标准DNA提取程序分析从生物样品(如植物材料(例如叶或种子))获得的DNA样品中事件EE-GM4特异性DNA序列的存在的聚合酶链反应检测方法。
方法描述概述方法设计,包括寡核苷酸引物和探针序列、反应混合物的组成、进行反应所需的热循环条件和发现适合于扩增子检测的荧光读取器设置。其还提供关于对照样品的性质和使用的一般建议。另外,提供数据分析和解释的指南,包括考虑关于使用对照材料的建议和数据分析的指南的方法结果的实例。
2.1.1.方法设计
所述方法使用Taqman化学物质来扩增和检测两个目标序列:EE-GM4特异性反应确定事件的存在,分类单元特异性反应确认事件特异性反应的阴性结果。
2.1.1.1.EE-GM4特异性反应
两种引物PRIM0937和PRIM0938被设计成用于扩增跨越3'侧接序列与事件EE-GM4的T-DNA插入片段的交接区的126bp的扩增子。
将FAM用作荧光标记且BHQ1作为淬灭基团的探针TM1734被设计成用于检测经扩增序列。
靶向EE-GM4 T-DNA序列的正向引物:
PRIM0937 5'-gAgACTgTATCTTTgATATTTTTggAgTAgA-3'(SEQ ID No.12)
靶向EE-GM4 T-DNA 3'侧接序列的反向引物:
PRIM0938 5'-CTgAgTCgATCAAAACCAATCAAT-3'(SEQ ID No. 13)
靶向EE-GM4 T-DNA和其3'侧接序列的交接序列的探针:
TM1734 FAM 5'-AAgTgTgTCgTgCTCCACCAgTTATCACA-3' BHQ1(SEQ ID No.14)
2.1.1.2.分类单元特异性特定反应
两种引物SHA071和SHA072被设计成用于扩增大豆内源凝集素1基因序列的74bp的扩增子。
将JOE用作荧光标记且使用BHQ1的探针TM1428被设计成用于检测经扩增序列。
靶向内源凝集素1基因序列的正向引物:
SHA071 5'-CCAgCTTCgCCgCTTCCTTC-3'(SEQ ID No.15)
靶向内源凝集素1基因序列的反向引物:
SHA072 5'-gAAggCAAgCCCATCTgCAAgCC-3'(SEQ ID No. 16)
靶向内源凝集素1基因序列的探针:
TM1428 JOE 5'-CTTCACCTTCTATgCCCCTgACAC-3'BHQ1 (SEQ ID No.17)
2.1.2.反应混合物的组成
Figure BDA0002911161790002721
注释:
●2×PerfeCta qPCR FastMix II,ROX由Quanta Bioscience供应。可以使用其它酶缓冲剂,但应验证性能。
●引物和经标记探针是向Integrated DNA Technologies订购
●*每个反应模板DNA的量可以变化,但是应该经过验证
2.1.3.热循环条件
Figure BDA0002911161790002722
Figure BDA0002911161790002731
注释:
●热循环条件经验证以用于BIORAD C1000热循环仪。可以使用其它设备,但应验证性能
2.1.4.波长和带宽设置
Figure BDA0002911161790002732
注释:
●波长和带宽设置经验证以用于Tecan M1000板读取器。可以使用其它设备和设置,但应验证性能
2.1.5.对照样品
在实验中应该包括以下对照样品以验证测试样品的结果:
●阳性对照组:含有目标和内源性序列的DNA样品
●阴性对照组:仅含有内源性序列的DNA样品
●无模板对照组:水样品(无DNA)
2.1.6.数据分析
●对于所有样品,针对目标和内源性反应两者计算荧光信号与背景比率 (S/B)。
●对照样品应给出预期结果,即:
○阳性对照组应评为“检测到”
○阴性对照组应评为“未检测到”
○无模板对照组应仅展示荧光背景水平
●如下对样品评分:
○检测到:目标S/B和内源性S/B超出可接受的阈值比,例如2
○未检测到:目标S/B低于可接受阈值比,例如1.3,并且此外,内源性 S/B超出可接受阈值比,例如2
○不确定:目标和内源性S/B低于可接受阈值,例如1.3
图2展示一系列含有EE-GM4的大豆样品和常规大豆样品的方法的结果的实例。对于每一样品,展现EE-GM4特异性反应和内源性反应两者的S/B比率。
2.2.EE-GM4身份和接合性分析的终点法
此方法描述使用标准DNA提取程序分析从生物样品(如植物材料(例如叶或种子))获得的DNA样品中事件EE-GM4特异性DNA序列的存在和接合性状态的聚合酶链反应检测方法。
方法描述概述反应试剂、寡核苷酸引物和探针序列、进行反应所需的热循环条件和发现适合于扩增子检测的荧光读取器设置。其还提供关于对照样品的性质和使用的一般建议。另外,提供数据分析和解释的指南,包括考虑关于使用对照材料的建议和数据分析的指南的方法结果的实例。
应注意,由于插入前基因座序列的性质,接合性分析的方法性能可能取决于品种。因此,需要对事件渐渗的每个品种进行性能验证。对于性能不足的情况,可以使用基于拷贝数分析的替代性实时PCR方法。例如,这种拷贝数分析可以使用Taqman化学和实时PCR原理来量化EE-GM4特异性序列的相对拷贝数。替代方法通常包括EE-GM4特异性反应以量化EE-GM4拷贝数,以及分类单元特异性反应以归一化EE-GM4拷贝数。以纯合状态含有EE-GM4插入序列的样品的相对拷贝数比半合样品高两倍。杂合样品不会以这种方法扩增EE-GM4序列。
2.2.1.方法设计
所述方法使用Taqman化学物质来扩增和检测两个目标序列:EE-GM4特异性反应确定事件的存在,插入前基因座特异性反应确定事件的插入前基因座的存在。
仅检测到EE-GM4特异性序列表明处于纯合接合状态的事件EE-GM4的存在。
检测到EE-GM4特异性和插入前基因座特异性序列表明处于半合接合状态的事件EE-GM4的存在。
仅检测到插入前基因座特异性序列表明不存在事件EE-GM4。
2.2.1.1.EE-GM4特异性反应
两种引物PRIM0937和PRIM0938被设计成用于扩增跨越T-DNA 3'侧接序列与事件EE-GM4的T-DNA插入片段的交接区的126bp的扩增子。
将FAM用作荧光标记且BHQ1作为淬灭基团的探针TM1734被设计成用于检测经扩增序列。
靶向EE-GM4 T-DNA序列的正向引物:
PRIM0937 5'-gAgACTgTATCTTTgATATTTTTggAgTAgA-3'(SEQ ID No.12)
靶向EE-GM4 T-DNA 3'侧接序列的反向引物:
PRIM0938 5'-CTgAgTCgATCAAAACCAATCAAT-3'(SEQ ID No. 13)
靶向EE-GM4 T-DNA和其3'侧接序列的交接序列的探针:
TM1734 FAM 5'-AAgTgTgTCgTgCTCCACCAgTTATCACA-3'BHQ1(SEQ ID No.14)
2.2.1.2.插入前基因座特异性反应
两种引物PRIM1652和PRIM0938被设计成用于扩增跨越插入前基因座和 EE-GM4插入前基因座的3'侧接序列的交接序列的108bp的扩增子。
将VIC用作荧光标记且MGB-NFQ作为淬灭基团的MGB探针TM2084被设计成用于检测经扩增序列。
靶向EE-GM4插入前基因座序列的正向引物:
PRIM1652 5'-gAgAAgTTTCAATACTAATAgTATCAATACTCAgAAT-3' (SEQ ID No.18)
靶向EE-GM4 T-DNA 3'侧接序列的反向引物:
PRIM0938 5'-CTgAgTCgATCAAAACCAATCAAT-3'(SEQ ID No. 13)
靶向插入前基因座和3'侧接序列的交接序列的野生型探针
TM2084 VIC 5'-CgAgTATTAgCCATATTTA-3'MGB-NFQ(SEQ ID No. 19)
2.2.2.反应混合物的组成
Figure BDA0002911161790002761
注释:
●2×PerfeCta qPCR FastMix II,ROX由Quanta Bioscience供应。可以使用其它酶缓冲剂,但应验证性能。
●引物和经标记探针是向Integrated DNA Technologies订购
●*每个反应模板DNA的量可以变化,但是应该经过验证
2.2.3.热循环条件
Figure BDA0002911161790002771
注释:
●热循环条件经验证以用于BIORAD C1000热循环仪。可以使用其它设备,但应验证性能
2.2.4.波长和带宽设置
Figure BDA0002911161790002772
注释:
●波长和带宽设置经验证以用于Tecan M1000板读取器。可以使用其它设备和设置,但应验证性能
2.2.5.对照样品
在实验中应该包括以下对照样品以验证测试样品的结果:
●纯合对照组:处于纯合状态的含有目标序列的DNA样品
●半合对照组:处于半合状态的含有目标序列的DNA样品
●野生型对照组:不含有目标序列的DNA样品
●无模板对照组:水样品
2.2.6.数据分析
●对于所有样品,针对目标和插入前基因座反应两者计算荧光信号与背景比率(S/B)。
●对照样品应给出预期结果,即:
○纯合对照组应评分为“纯合”
○半合对照组应评分为“半合”
○野生型对照组应评分为“野生型”
○无模板对照组应仅展示荧光背景水平
●如下对样品评分:
○纯合:目标S/B超出可接受的阈值比,例如2,并且插入前基因座S/B 低于可接受的阈值比,例如1
○半合:目标和插入前基因座S/B都超出可接受的阈值比,例如2
○野生型:目标S/B低于可接受的阈值比,例如1,并且插入前基因座 S/B超过可接受的阈值比,例如2
○不确定:目标和插入前基因座S/B低于可接受阈值,例如1
图3展示一系列呈纯合状态的含有EE-GM4的大豆样品,呈半合状态的含有EE-GM4的大豆样品,和常规大豆样品的方法的结果的实例。
2.3.EE-GM4低含量存在分析的实时PCR方法
此方法描述使用标准DNA提取程序分析从散装植物材料(例如叶或种子) 或加工过的材料(例如含有EE-GM4 DNA的由加工过的大豆籽粒产生的食品或饲料产品)获得的事件EE-GM4 DNA序列的低含量存在的检测方法。
方法描述概述反应试剂、寡核苷酸引物和探针序列以及进行反应所需的热循环条件。其还提供关于同时使用分类单元特异性方法以支持数据分析和结果解释的一般建议。另外,提供关于对照样品的性质和使用的建议。
应注意,替代性方法可供用于预期目的,包括但不限于数字小液滴PCR方法。数字小液滴PCR方法使用终点法进行事件身份分析,如部分1.1中所描述,与在所提取DNA样品上次取样的原理组合。在这种方法中,事件的低含量存在是基于对事件序列发现为阳性和阴性的DNA子样品的比率确定的。
2.3.1方法设计
所述方法使用Taqman化学物质和实时PCR原理来检测或定量DNA样品中的低含量EE-GM4。
两种引物PRIM0939和PRIM0940被设计成用于扩增跨越T-DNA 5'侧接序列与事件EE-GM4的T-DNA插入片段的交接区的90bp的扩增子。
将FAM用作荧光标记且BHQ1作为淬灭基团的探针TM1735被设计成用于定量经扩增序列。
靶向EE-GM4 T-DNA序列的正向引物:
PRIM0939 5'-CCATTgTgCTgAATAggTTTATAgCT-3'(SEQ ID No. 20)
靶向EE-GM4 T-DNA 5'侧接序列的反向引物:
PRIM0940 5'-gACAAATACTACTTTgTTAAgTTTAgACCCC-3'(SEQ ID No.21)
靶向EE-GM4 T-DNA和其5'侧接序列的交接序列的探针:
TM1735 FAM 5'-TgATAgAgCgCCTgggCCTAACTTTCTAAA-3'BHQ-1 (SEQ ID No.22)
2.3.2反应混合物的组成
Figure BDA0002911161790002791
Figure BDA0002911161790002801
注释:
●2×PerfeCta qPCR FastMix II,低ROX由Quanta Bioscience供应。可以使用其它酶缓冲剂,但应验证性能。
●引物和经标记探针是向Integrated DNA Technologies订购
●*每个反应模板DNA的量可以变化,但是应该经过验证
2.3.3热循环条件
Figure BDA0002911161790002802
注释:
●**荧光读出在60℃下引物延伸步骤结束时,在每个循环进行
●热循环条件经验证以用于ViiA7和Quantstudio 7实时PCR设备。可以使用其它设备,但应验证性能
2.3.4分类单元特异性方法
靶向内源性序列的实时PCR检测方法应对如目标特定实时PCR方法中所使用的相同量的模板DNA同时进行。分类单元特异性方法的结果应该用于支持数据分析和解释,即,归一化输入DNA的量并且验证目标特异性反应的任何阴性结果。
2.3.5测试样品,校准样品和对照样品
●建议一式两份分析所有测试样品。
●实验中包括一组校准样品以产生目标和分类单元特异性方法两者的标准曲线。
●另外,包括以下对照样品:
○阳性对照组:以检测极限含量含有目标序列的DNA样品,
○阴性对照组:仅含有内源性序列的DNA样品(无EE-GM4)
○无模板对照组:水样品
2.3.6数据分析
●对于所有样品,确定目标和分类单元特异性方法的阈值循环值(即,Ct 值)。阈值循环被定义为给定样品的扩增曲线达到定义的信号阈值的循环数(参见下图)。
●使用Ct值和校准样品的基因组拷贝的量,针对目标和分类单元特异性方法计算标准曲线公式。
●标准曲线参数应满足斜率和线性(R2)的接受标准,例如
○-3.2<斜率<-3.6
○R2>0.98
●对于所有样品,使用线性回归分析计算目标和内源性方法的基因组拷贝数。
●通过计算目标和分类单元特异性方法的基因组拷贝数的%比率来确定相对于分类单元特异性DNA的总量的低水平存在量。
●对照样品应给出预期结果,即:
○阳性对照组应评为“检测到”
○阴性对照组应评为“未检测到”
○无模板对照组应仅展示荧光背景水平
●如下对样品评分:
○检测到:考虑到所述方法的测量不确定性,低含量存在高于所有重复的检测极限
○未检测到:考虑到所述方法的测量不确定性,低含量存在低于所有重复的检测极限
○不确定:重复样品得分不一致
图4展示对校准样品执行的方法的结果的实例。
3.EE-GM4的渐渗到优选的栽培品种中
通过重复回交将优良事件EE-GM4引入六个不同的优良大豆品系。选择品系以表示一系列成熟度:来自MG I的两个品系、来自MG III的一个品系、来自MG VI的两个品系以及来自MG IX的一个品系。MG I品系和MG III品系中的一个含有来自PI 88788的Rhg1原生抗性等位基因,且MG VI品系中的一个携带来自PI 437654的Rhg1和Rhg4原生抗性等位基因。其它三个品系对SCN 敏感。
此外,在初始测试中,在若干实验中,与针对索恩背景中所发现的情况相比较,当事件EE-GM4从索恩背景渐渗到其它大豆种质背景(不同成熟期,处于渐渗的不同阶段)时,对于在温室生长的植物的叶子中测量的Cry14Ab-1或 HPPD-4蛋白质表达量,未观察到生物学显著差异(如使用ELISA或蛋白质印迹(Western blot)所测量(仅发现正常分析变化)),并且在标准温室SCN分析结果(测量相对于索恩对照组SCN孢囊的减少%)中未发现显著差异。在初始实验中,在成熟度为9.1的BC2F3大豆植物背景中,EE-GM4事件显示Cry14Ab- 1蛋白的表达较低,而用大量具有所述成熟度的植物重复进行此实验时发现,在索恩背景中,相对于EE-GM4,Cry14Ab-1蛋白的表达没有生物学上的显著差异。
优良事件EE-GM4渐渗到其它大豆栽培品种中不会显著影响这些栽培品种的所需表型或农学特征中的任一个(无连锁累赘),而转基因的表达符合商业上可接受的水平。这确认了事件EE-GM4作为优良事件的状态。
此外,优良事件EE-GM4有利地与其它大豆优良转化事件组合。根据本发明尤其适用的植物为含有与另一大豆转化事件,或多于一种其它大豆转化事件的组合组合的EE-GM4的植物,所述事件如在各国家或地区监管机构的数据库中列出的那些,包括但不限于:事件MON87751(也称为MON-87751-7,描述于WO2014201235和USDA-APHIS申请13-337-01p中)、事件pDAB8264.42.32.1 (描述于WO2013010094)、事件DAS-81419-2(也称为ConkestaTM大豆,描述于WO2013016527和USDA-APHIS申请12-272-01p中)、事件EE-GM3(也称为FG-072、MST-FG072-3,描述于WO2011063411、USDA-APHIS申请09-328- 01p中)、事件SYHT0H2(也称为0H2、
Figure BDA0002911161790002831
描述于WO2012/082548 和12-215-01p中)、事件DAS-68416-4(也称为Enlist大豆,描述于WO2011/066384 和WO2011/066360、USDA-APHIS申请09-349-01p中)、事件DAS-81615-9(描述于WO2014004458)、事件DAS-44406-6(也称为Enlist E3、
Figure BDA0002911161790002832
描述于WO2012/075426和USDA-APHIS 11-234-01p中)、事件MON87708(Xtend 大豆,描述于WO2011/034704和USDA-APHIS申请10-188-01p中)、事件 MON89788(也称为Genuity Roundup Ready 2Yield,描述于WO2006/130436和 USDA-APHIS申请06-178-01p中)、事件DAS-14536-7(描述于WO2012/075429)、事件40-3-2(也称为RoundUp Ready、
Figure BDA0002911161790002833
描述于USDA-APHIS申请93-258-01中)、事件A2704-12(也称为LL27、
Figure BDA0002911161790002834
描述于 WO2006108674和USDA-APHIS申请96-068-01p中)、事件127(也称为BPS- CV127-9,描述于WO2010/080829中)、事件A5547-127(也称为LL55、
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Figure BDA0002911161790002836
描述于WO2006108675和USDA-APHIS申请96-068-01p中)、事件 MON87754(也称为Vistive III、MON-87754-1,描述于WO2010/024976中)、事件HOS(也称为
Figure BDA0002911161790002837
Plenish高油酸大豆,描述于WO2008054747中)、事件MON87701(也称为
Figure BDA0002911161790002838
描述于WO2009064652和USDA-APHIS 申请09-082-01p中)、事件MON87705(也称为
Figure BDA0002911161790002839
描述于 WO2010/037016和USDA-APHIS申请09-201-01p中)、事件MON87712(也称为MON-87712-4,描述于WO2012/051199、USDA-APHIS申请11-202-01p中)、事件pDAB4472-1606(也称为事件1606,描述于WO2012/033794中)、事件3560.4.3.5(也称为DP-356043-5,描述于WO2008/002872中)、事件MON87769 (也称为MON-87769-7,描述于WO2009102873和USDA-APHIS申请09-183- 01p中)、事件
Figure BDA0002911161790002841
(也称为HB4大豆,US FDA BNF编号000155、 USDA-APHIS案卷编号APHIS-2017-0075、www.aphis.usda.gov/brs/aphisdocs/ 17_22301p.pdf)、事件DP305423(也称为
Figure BDA0002911161790002842
公开的PCT专利申请 WO2008/054747、USDA-APHIS申请06-354-01p),或EE-GM4与这些其它转基因大豆事件中的若干个的任何组合,如EE-GM4与以下组合中的任一个的组合:事件MON89788×MON87708(也称为Roundup Ready 2Xtend大豆,
Figure BDA0002911161790002843
Figure BDA0002911161790002844
)、事件HOS×事件40-3-2(也称为Plenish高油酸大豆×Roundup Ready大豆)、事件EE-GM3×EE-GM2(也称为FG-072xLL55,描述于 WO2011063413中)、事件MON87701×MON 89788(也称为Intacta RR2 Pro大豆,
Figure BDA0002911161790002845
)、DAS-81419-2×DAS-44406-6(也称为 ConkestaTM Enlist E3TM大豆,
Figure BDA0002911161790002846
)、事件DAS-81419-2×事件DAS-68416-4(描述于WO2013016516)、事件DAS-68416-4×事件MON 89788(也称为EnlistTM RoundUp
Figure BDA0002911161790002847
大豆,DAS-68416-4×MON-89788-1)、 MON 87705×MON 89788(也称为Vistive Gold、
Figure BDA0002911161790002848
)、 MON 87769×MON 89788(也称为Omega-3×GenuityRoundup Ready 2Yield大豆,MON-87769-7×MON-89788-1)、事件DP305423×事件40-3-2(
Figure BDA0002911161790002849
Figure BDA00029111617900028410
)、事件DP305423×MON87708(
Figure BDA00029111617900028411
Figure BDA00029111617900028412
)、事件DP305423×MON87708×事件MON89788(
Figure BDA00029111617900028413
Figure BDA00029111617900028414
)、事件DP305423×事件MON89788(
Figure BDA00029111617900028415
Figure BDA00029111617900028416
)、事件MON87705×MON87708(
Figure BDA00029111617900028417
)、事件 MON87705×MON87708×MON89788(
Figure BDA00029111617900028418
Figure BDA0002911161790002851
)、事件MON89788×MON87708×A5547-127(
Figure BDA0002911161790002852
Figure BDA0002911161790002853
)、事件MON87751×MON87701×MON87708× MON89788(
Figure BDA0002911161790002854
)。
如在以下权利要求书中所使用,除非另外明确地指示,否则术语“植物”打算涵盖在任何成熟阶段的植物组织,以及取自或来源于任何所述植物的任何细胞、组织或器官,包括但不限于任何种子、叶、茎、花、根、单细胞、配子、细胞培养物、组织培养物或原生质体。
包含优良事件EE-GM4的参考种子以ATCC登录号PTA-123624在2016年 11月9日保藏于ATCC(10801University Blvd.,Manassas,VA 20110-2209),并确认了其生存力。EE-GM4的替代性名称是事件GMB471或BCS-GM471-2。
本发明的以上描述意图为说明性的而非限制性的。
所属领域的技术人员可以想到所描述的实施例的各种变化或修改。其可在不脱离本发明的精神或范围的情况下进行。
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Claims (25)

1.一种大豆植物、细胞、植物部分或种子,其包含以下核酸分子中的任一个:a)核酸分子,其包含与SEQ ID No.1、3或5中任一个的序列或与SEQ ID No.2、4或6中任一个的序列或所述序列的互补序列基本上类似的核苷酸序列,b)核酸分子,其包含与SEQ ID No.3、4、5、6、24或25的核苷酸序列或其互补序列具有至少99%序列一致性的核苷酸序列,c)核酸分子,其包含SEQ ID No.1或3或SEQ ID No.2或4中任一个的核苷酸序列或所述序列的互补序列,或包含SEQ ID No.1或3和SEQ ID No.2或4的核苷酸序列或其互补序列,d)核酸分子,其包含SEQ ID No.1或3或SEQ ID No.2或4中任一个的核苷酸序列或所述序列的互补序列,和SEQ ID No.7和9的核苷酸序列或其互补序列,或包含SEQ ID No.1或3和SEQ ID No.2或4的核苷酸序列或所述序列的互补序列,和SEQ ID No.7和9的核苷酸序列或其互补序列,e)核酸分子,其包含SEQ ID No.11核苷酸位置188到核苷酸位置7368的核苷酸序列,或与其具有至少98%、或至少99%、或至少99.5%或至少99.9%序列一致性的核苷酸序列,f)核酸分子,其包含SEQ ID No.11核苷酸位置188到核苷酸位置7101的核苷酸序列,其包含SEQ IDNo.5或24和SEQ ID No.6或24的核苷酸序列或其互补序列,g)核酸分子,其能够从以登录号PTA-123624保藏于ATCC的种子获得,其中所述核酸分子包含SEQ ID No.1、3或5中任一个的核苷酸序列和SEQ ID No.2、4或6中任一个的核苷酸序列,其中所述大豆植物、细胞、植物部分、种子或其后代或其生长或打算生长的土壤用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或其混合物中的一种或多种,如来自以下中的任一个的化合物和/或生物防治剂或混合物处理:H1、H2、H3、H4、H5、IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、IAN5、IAN6、IAN7、IAN8、IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、IAN25、IAN26、IAN27、IAN28、IAN29、IAN30、SIAN1、F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8、F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16、SF1、P1、BCA1、BCA2、BCA3、BCA4、BCA5、BCA6、BCA7、BCA8;BCA9、BCA10、NC1、NC2、NC3、SBCA1、SAI1、SC1和SC2。
2.一种大豆植物、细胞、植物部分或种子,其在其基因组中各自包含优良事件EE-GM4,其中所述优良事件为基因座包含含有嵌合HPPD-4蛋白质编码基因和嵌合Cry14Ab-1蛋白质编码基因的插入T-DNA,和直接环绕所述插入T-DNA的5'和3'侧接序列,如以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的参考种子,如还包含SEQ ID No.3的核苷酸序列和SEQ ID No.4的核苷酸序列的所述植物、细胞、部分或种子中所发现,其中所述大豆植物、细胞、植物部分或种子或其生长或打算生长的土壤用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或其混合物中的一种或多种处理。
3.根据权利要求1或2所述的植物、植物部分或种子,其中其生长或打算生长的土壤用所述化合物和/或生物防治剂或其混合物中的一种或多种处理,并且其中所述植物、植物部分或种子在用如本文所述的化合物和/或生物防治剂或其混合物中的一种或多种处理的土壤中种植或播种。
4.根据权利要求1到3中任一项所述的植物、细胞、植物部分或种子,其中所述植物、细胞、植物部分或种子还包含原生大豆SCN抗性基因座或基因,如来自以下抗性源的SCN抗性基因或基因座中的任一个:PI 548316、PI 567305、PI 437654、PI 90763、PI 404198B、PI88788、PI 468916、PI 567516C、PI 209332、PI 438489B、PI 89772、Peking、PI 548402、PI404198A、PI 561389B、PI 629013、PI 507471、PI 633736、PI 507354、PI 404166、PI437655、PI 467312、PI 567328、PI 22897或PI 494182,或来自表1的抗性源的SCN抗性基因或基因座中的任一个,或来自抗性源PI 88788、PI 548402、PI 209332、PI 437654或其组合的SCN抗性基因或基因座中的任一个。
5.一种杂草防除的方法,其包含在所述大豆植物出苗之前但在播种所述种子之后,用HPPD抑制剂除草剂和杀线虫剂处理播种根据权利要求1到4中任一项所述的大豆种子的田地。
6.一种方法,其用于保护根据权利要求1到4中任一项所述的出苗大豆植物以免与杂草竞争,所述方法包含在种植所述大豆植物或播种所述种子之前,用HPPD抑制剂除草剂和杀线虫剂处理待播种或种植所述大豆种子或植物的田地,随后在已处理的所述田地中种植或播种所述大豆植物或种子。
7.根据权利要求5或6所述的方法,其中所述杀线虫剂为或含有杀线虫化合物或杀线虫生物防治剂(如坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)、西沢巴斯德氏芽菌(Pasteurianishizawae)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、里诺吉伯克氏菌(Burkholderia rinojensis)或解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)),如本文所述。
8.一种方法,其用于产生对SCN具有抗性和/或对HPPD抑制剂除草剂具有耐受性的大豆植物,其包含将对SCN的抗性和/或对HPPD抑制剂除草剂的耐受性引入到大豆植物的基因组中,其通过使第一大豆植物,如不具有Cry14Ab-1编码基因并且不具有HPPD-4编码基因的大豆植物,与包含优良事件EE-GM4的第二大豆植物杂交,并且选择包含优良事件EE-GM4的后代植物的种子,所述方法包括用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或包含其的混合物中的一种或多种处理所述种子的步骤,其中所述优良事件包含根据权利要求1所述的核酸分子,或其中所述优良事件为所述基因座包含含有嵌合HPPD-4蛋白质编码基因和嵌合Cry14Ab-1蛋白质编码基因的插入T-DNA,和直接环绕所述插入T-DNA的5'和3'侧接序列,如以保藏号PTA-123624保藏于ATCC的参考种子,如还包含SEQ ID No.3的核苷酸序列和SEQ ID No.4的核苷酸序列的所述植物中所发现。
9.一种根据权利要求1到4中任一项所述的植物、种子、部分或细胞以及所述化合物和/或生物防治剂或混合物的用途,其用于产生大豆种子。
10.一种根据权利要求1到4中任一项所述的经处理的大豆植物或种子的用途,其用于生长线虫抗性和/或HPPD抑制剂除草剂耐受性植物。
11.一种增加大豆植物产率的方法,其用于当在含有、曾含有或预期含有线虫或线虫卵,如SCN、RKN、短体线虫(Pratylenchus)或肾形线虫的田地中种植时,所述方法包含以下步骤:1)获得包含优良事件EE-GM4的大豆植物或种子,和2)在所述田地中种植或播种所述植物或种子,其中包含所述优良事件的参考种子以保藏号PTA-123624保藏于ATCC,所述方法包含用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或包含其的混合物中的一种或多种处理所述植物或种子的步骤。
12.一种增加大豆植物产率的方法,其用于侵染有猝死综合征的含SCN田地中,或引起大豆的缺铁失绿症的含SCN田地中的大豆植物,所述方法包含播种包含优良事件EE-GM4的经处理的种子,其中包含所述优良事件的参考种子以保藏号PTA-123624保藏于ATCC,其中所述种子用如本文所述的一种或多种化合物和/或一种或多种生物防治剂或包含其的混合物中的一种或多种,如一种或多种杀线虫、杀昆虫或杀真菌化合物和/或一种或多种生物防治剂,或一种或多种杀线虫、杀昆虫和杀真菌化合物和/或生物防治剂的组合处理。
13.根据权利要求1到4中任一项所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,其用以下杀线虫剂中的任一种处理:棉铃威(alanycarb)、涕灭威(aldicarb)、虫螨威(carbofuran)、丁硫克百威(carbosulfan)、噻唑磷(fosthiazate)、硫线磷(cadusafos)、杀线威(oxamyl)、硫双灭多威(thiodicarb)、乐果(dimethoate)、灭线磷(ethoprophos)、特丁硫磷(terbufos)、阿维菌素(abamectin)、溴甲烷和其它卤代烃、选自棉隆(diazomet)和威百亩(metam)的异氰酸甲酯产生剂、三氟咪啶酰胺(fluazaindolizine)、联氟砜(fluensulfone)、氟吡菌酰胺(fluopyram)、噻恶嗪芬(tioxazafen)、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、顺式茉莉酮(cis-Jasmone)、过敏蛋白(harpin)、印楝油(Azadirachta indica oil)或印楝素(Azadirachtin)。
14.根据权利要求1到4中任一项所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,其用以下杀线虫剂中的任一种处理:噻唑磷、硫线磷、硫双灭多威、阿维菌素、三氟咪啶酰胺、氟吡菌酰胺、噻恶嗪芬、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、顺式茉莉酮、过敏蛋白、印楝油或印楝素。
15.根据权利要求14所述的植物、细胞、植物部分或种子,其用选自由以下组成的群组的组合处理:噻唑磷和硫线磷、噻唑磷和硫双灭多威、噻唑磷和阿维菌素、噻唑磷和三氟咪啶酰胺、噻唑磷和氟吡菌酰胺、噻唑磷和噻恶嗪芬、噻唑磷和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、噻唑磷和顺式茉莉酮、噻唑磷和过敏蛋白、噻唑磷和印楝油、噻唑磷和印楝素、硫线磷和噻唑磷、硫线磷和硫双灭多威、硫线磷和阿维菌素、硫线磷和三氟咪啶酰胺、硫线磷和氟吡菌酰胺、硫线磷和噻恶嗪芬、硫线磷和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、硫线磷和顺式茉莉酮、硫线磷和过敏蛋白、硫线磷和印楝油、硫线磷和印楝素、硫双灭多威和噻唑磷、硫双灭多威和硫线磷、硫双灭多威和阿维菌素、硫双灭多威和三氟咪啶酰胺、硫双灭多威和氟吡菌酰胺、硫双灭多威和噻恶嗪芬、硫双灭多威和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、硫双灭多威和顺式茉莉酮、硫双灭多威和过敏蛋白、硫双灭多威和印楝油、阿维菌素和硫线磷、阿维菌素和硫双灭多威、阿维菌素和三氟咪啶酰胺、阿维菌素和氟吡菌酰胺、阿维菌素和噻恶嗪芬、阿维菌素和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、阿维菌素和顺式茉莉酮、阿维菌素和过敏蛋白、阿维菌素和印楝油、阿维菌素和印楝素、三氟咪啶酰胺和阿维菌素、三氟咪啶酰胺和氟吡菌酰胺、三氟咪啶酰胺和噻恶嗪芬、三氟咪啶酰胺和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、三氟咪啶酰胺和顺式茉莉酮、三氟咪啶酰胺和过敏蛋白、三氟咪啶酰胺和印楝油、三氟咪啶酰胺和印楝素、氟吡菌酰胺和三氟咪啶酰胺、氟吡菌酰胺和噻恶嗪芬、氟吡菌酰胺和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、氟吡菌酰胺和顺式茉莉酮、氟吡菌酰胺和过敏蛋白、氟吡菌酰胺和印楝油、氟吡菌酰胺和印楝素、噻恶嗪芬和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺、噻恶嗪芬和顺式茉莉酮、噻恶嗪芬和过敏蛋白、噻恶嗪芬和印楝油、噻恶嗪芬和印楝素、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺和顺式茉莉酮、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺和过敏蛋白、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺和印楝油、N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺和印楝素、顺式茉莉酮和过敏蛋白、顺式茉莉酮和印楝油、顺式茉莉酮和印楝素、过敏蛋白和印楝油以及过敏蛋白和印楝素。
16.根据权利要求1到4或13到15中任一项所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,其用选自由以下组成的群组的生物防治剂处理:芽孢杆菌(Bacillus)属菌株、短芽孢杆菌(Brevibacillus)属菌株、伯克氏菌(Burkholderia)属菌株、溶杆菌(Lysobacter)属菌株、巴斯德氏芽菌(Pasteuria)属菌株、节丛孢(Arthrobotrys)属菌株、毒虫霉(Nematoctonus)属菌株、漆斑菌(Myrothecium)属菌株、拟青霉(Paecilomyces)属菌株、木霉(Trichoderma)属菌株和冢村氏菌(Tsukamurella)属菌株。
17.根据权利要求16所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,其用选自由以下组成的群组的生物防治剂处理:解淀粉芽孢杆菌、坚强芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌(Bacillus laterosporus)、迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)、地衣芽孢杆菌、线虫芽孢杆菌(Bacillus nematocida)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、枯草芽孢杆菌、穿刺芽孢杆菌(Bacillus penetrans)、苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)、侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)、里诺吉伯克氏菌、抗生素溶杆菌(Lysobacterantibioticus)、产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)、西沢巴斯德氏芽菌、穿刺巴斯德氏芽菌(Pasteuria penetrans)、分支巴斯德氏芽菌(Pasteuria ramosa)、肾状巴斯德氏芽菌(Pasteuria reniformis)、多刺巴斯德氏芽菌(Pasteuria thornei)、美高协巴斯德氏芽菌(Pasteuria usage)、指状节丛孢(Arthrobotrys dactyloides)、少孢节丛孢(Arthrobotrys oligospora)、多孢节丛孢(Arthrobotrys superba)、地理毒虫霉(Nematoctonus geogenius)、滑孢毒虫霉(Nematoctonus leiosporus)、疣孢漆斑菌(Myrothecium verrucaria)、淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)、宛氏拟青霉(Paecilomyces variotii)、棘孢木霉(Trichoderma asperellum)、哈茨木霉(Trichodermaharzianum)、绿色木霉(Trichoderma viride)、里法依哈茨木霉(Trichoderma harzianumrifai)和微代谢冢村氏菌(Tsukamurella paurometabola)。
18.根据权利要求17所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,其用选自由以下组成的群组的生物防治剂处理:解淀粉芽孢杆菌菌株IN937a、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB42、解淀粉芽孢杆菌菌株FZB24、解淀粉芽孢杆菌菌株NRRL B-50349、解淀粉芽孢杆菌菌株ABI01、解淀粉芽孢杆菌菌株B3、解淀粉芽孢杆菌菌株D747、解淀粉芽孢杆菌菌株APM-1、解淀粉芽孢杆菌菌株TJ1000、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-136、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-188、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-218、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-219、解淀粉芽孢杆菌菌株AP-295、解淀粉芽孢杆菌菌株MBI 600、解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838、解淀粉芽孢杆菌菌株F727、坚强芽孢杆菌菌株I-1582、坚强芽孢杆菌菌株NRRL B-67003、坚强芽孢杆菌菌株NRRL B-67518、坚强芽孢杆菌菌株GB126、侧孢芽孢杆菌菌株ATCC PTA-3952、侧孢芽孢杆菌菌株ATCC PTA-3593、地衣芽孢杆菌菌株ATCC PTA-6175、地衣芽孢杆菌SB3086、地衣芽孢杆菌CH200、地衣芽孢杆菌RTI 184、地衣芽孢杆菌CH200和地衣芽孢杆菌RTI 184的组合、枯草芽孢杆菌解淀粉变种菌株FZB24、苏云金芽孢杆菌菌株EX297512、苏云金芽孢杆菌菌株CR-371或苏云金芽孢杆菌菌株AQ52、侧孢短芽孢杆菌菌株ATCC 64、侧孢短芽孢杆菌菌株NRS1111、侧孢短芽孢杆菌菌株NRS 1645、侧孢短芽孢杆菌菌株NRS 1647、侧孢短芽孢杆菌菌株BPM3、侧孢短芽孢杆菌菌株G4、侧孢短芽孢杆菌菌株NCIMB 41419、里诺吉伯克氏菌、里诺吉伯克氏菌菌株A396、抗生素溶杆菌菌株13-1、产酶溶杆菌菌株C3、疣孢漆斑菌菌株AARC-0255、淡紫拟青霉菌株251、宛氏拟青霉菌株Q-09、西沢巴斯德氏芽菌菌株Pn1、棘孢木霉菌株ICC 012、棘孢木霉菌株SKT-1、棘孢木霉菌株T34、棘孢木霉菌株T25、棘孢木霉菌株SF04、棘孢木霉菌株TV1、棘孢木霉菌株T11、哈茨木霉菌株ICC012、里法依哈茨木霉T39、里法依哈茨木霉菌株KRL-AG2、绿色木霉菌株TV1、绿色木霉菌株TV25、深绿木霉(Trichodermaatroviride)菌株CNCM I-1237、深绿木霉菌株CNCM I-1237、深绿木霉菌株NMI编号V08/002387、深绿木霉菌株NMI编号V08/002388、深绿木霉菌株NMI编号V08/002389、深绿木霉菌株NMI编号V08/002390、深绿木霉菌株ATCC 20476、深绿木霉菌株T11、深绿木霉菌株LC52、深绿木霉菌株SC1、深绿木霉菌株SKT-1、深绿木霉菌株SKT-2、深绿木霉菌株SKT-3和微代谢冢村氏菌菌株C-92。
19.根据权利要求1到4中任一项或根据权利要求13到18中任一项所述的植物、细胞、植物部分或种子,其中所述处理为种子处理。
20.根据权利要求1到4中任一项或根据权利要求13到19中任一项所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,用选自以下的杀线虫剂和生物防治剂的组合处理:芽孢杆菌属菌株和棉铃威;芽孢杆菌属菌株和涕灭威;芽孢杆菌属菌株和虫螨威;芽孢杆菌属菌株和丁硫克百威;芽孢杆菌属菌株和噻唑磷;芽孢杆菌属菌株和硫线磷;芽孢杆菌属菌株和杀线威;芽孢杆菌属菌株和硫双灭多威;芽孢杆菌属菌株和乐果;芽孢杆菌属菌株和灭线磷;芽孢杆菌属菌株和特丁硫磷;芽孢杆菌属菌株和阿维菌素;芽孢杆菌属菌株和溴甲烷和其它卤代烃;芽孢杆菌属菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;芽孢杆菌属菌株和三氟咪啶酰胺;芽孢杆菌属菌株和联氟砜;芽孢杆菌属菌株和氟吡菌酰胺;芽孢杆菌属菌株和噻恶嗪芬;芽孢杆菌属菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;芽孢杆菌属菌株和顺式茉莉酮;芽孢杆菌属菌株和过敏蛋白;芽孢杆菌属菌株和印楝油;芽孢杆菌属菌株和印楝素;短芽孢杆菌属菌株和棉铃威;短芽孢杆菌属菌株和涕灭威;短芽孢杆菌属菌株和虫螨威;短芽孢杆菌属菌株和丁硫克百威;短芽孢杆菌属菌株和噻唑磷;短芽孢杆菌属菌株和硫线磷;短芽孢杆菌属菌株和杀线威;短芽孢杆菌属菌株和硫双灭多威;短芽孢杆菌属菌株和乐果;短芽孢杆菌属菌株和灭线磷;短芽孢杆菌属菌株和特丁硫磷;短芽孢杆菌属菌株和阿维菌素;短芽孢杆菌属菌株和溴甲烷和其它卤代烃;短芽孢杆菌属菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;短芽孢杆菌属菌株和三氟咪啶酰胺;短芽孢杆菌属菌株和联氟砜;短芽孢杆菌属菌株和氟吡菌酰胺;短芽孢杆菌属菌株和噻恶嗪芬;短芽孢杆菌属菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;短芽孢杆菌属菌株和顺式茉莉酮;短芽孢杆菌属菌株和过敏蛋白;短芽孢杆菌属菌株和印楝油;短芽孢杆菌属菌株和印楝素;伯克氏菌属菌株和棉铃威;伯克氏菌属菌株和涕灭威;伯克氏菌属菌株和虫螨威;伯克氏菌属菌株和丁硫克百威;伯克氏菌属菌株和噻唑磷;伯克氏菌属菌株和硫线磷;伯克氏菌属菌株和杀线威;伯克氏菌属菌株和硫双灭多威;伯克氏菌属菌株和乐果;伯克氏菌属菌株和灭线磷;伯克氏菌属菌株和特丁硫磷;伯克氏菌属菌株和阿维菌素;伯克氏菌属菌株和溴甲烷和其它卤代烃;伯克氏菌属菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;伯克氏菌属菌株和三氟咪啶酰胺;伯克氏菌属菌株和联氟砜;伯克氏菌属菌株和氟吡菌酰胺;伯克氏菌属菌株和噻恶嗪芬;伯克氏菌属菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;伯克氏菌属菌株和顺式茉莉酮;伯克氏菌属菌株和过敏蛋白;伯克氏菌属菌株和印楝油;伯克氏菌属菌株和印楝素;溶杆菌属菌株和棉铃威;溶杆菌属菌株和涕灭威;溶杆菌属菌株和虫螨威;溶杆菌属菌株和丁硫克百威;溶杆菌属菌株和噻唑磷;溶杆菌属菌株和硫线磷;溶杆菌属菌株和杀线威;溶杆菌属菌株和硫双灭多威;溶杆菌属菌株和乐果;溶杆菌属菌株和灭线磷;溶杆菌属菌株和特丁硫磷;溶杆菌属菌株和阿维菌素;溶杆菌属菌株和溴甲烷和其它卤代烃;溶杆菌属菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;溶杆菌属菌株和三氟咪啶酰胺;溶杆菌属菌株和联氟砜;溶杆菌属菌株和氟吡菌酰胺;溶杆菌属菌株和噻恶嗪芬;溶杆菌属菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;溶杆菌属菌株和顺式茉莉酮;溶杆菌属菌株和过敏蛋白;溶杆菌属菌株和印楝油;溶杆菌属菌株和印楝素;巴斯德氏芽菌属菌株和棉铃威;巴斯德氏芽菌属菌株和涕灭威;巴斯德氏芽菌属菌株和虫螨威;巴斯德氏芽菌属菌株和丁硫克百威;巴斯德氏芽菌属菌株和噻唑磷;巴斯德氏芽菌属菌株和硫线磷;巴斯德氏芽菌属菌株和杀线威;巴斯德氏芽菌属菌株和硫双灭多威;巴斯德氏芽菌属菌株和乐果;巴斯德氏芽菌属菌株和灭线磷;巴斯德氏芽菌属菌株和特丁硫磷;巴斯德氏芽菌属菌株和阿维菌素;巴斯德氏芽菌属菌株和溴甲烷和其它卤代烃;巴斯德氏芽菌属菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;巴斯德氏芽菌属菌株和三氟咪啶酰胺;巴斯德氏芽菌属菌株和联氟砜;巴斯德氏芽菌属菌株和氟吡菌酰胺;巴斯德氏芽菌属菌株和噻恶嗪芬;巴斯德氏芽菌属菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;巴斯德氏芽菌属菌株和顺式茉莉酮;巴斯德氏芽菌属菌株和过敏蛋白;巴斯德氏芽菌属菌株和印楝油;巴斯德氏芽菌属菌株和印楝素;节丛孢属菌株和棉铃威;节丛孢属菌株和涕灭威;节丛孢属菌株和虫螨威;节丛孢属菌株和丁硫克百威;节丛孢属菌株和噻唑磷;节丛孢属菌株和硫线磷;节丛孢属菌株和杀线威;节丛孢属菌株和硫双灭多威;节丛孢属菌株和乐果;节丛孢属菌株和灭线磷;节丛孢属菌株和特丁硫磷;节丛孢属菌株和阿维菌素;节丛孢属菌株和溴甲烷和其它卤代烃;节丛孢属菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;节丛孢属菌株和三氟咪啶酰胺;节丛孢属菌株和联氟砜;节丛孢属菌株和氟吡菌酰胺;节丛孢属菌株和噻恶嗪芬;节丛孢属菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;节丛孢属菌株和顺式茉莉酮;节丛孢属菌株和过敏蛋白;节丛孢属菌株和印楝油;节丛孢属菌株和印楝素;毒虫霉属菌株和棉铃威;毒虫霉属菌株和涕灭威;毒虫霉属菌株和虫螨威;毒虫霉属菌株和丁硫克百威;毒虫霉属菌株和噻唑磷;毒虫霉属菌株和硫线磷;毒虫霉属菌株和杀线威;毒虫霉属菌株和硫双灭多威;毒虫霉属菌株和乐果;毒虫霉属菌株和灭线磷;毒虫霉属菌株和特丁硫磷;毒虫霉属菌株和阿维菌素;毒虫霉属菌株和溴甲烷和其它卤代烃;毒虫霉属菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;毒虫霉属菌株和三氟咪啶酰胺;毒虫霉属菌株和联氟砜;毒虫霉属菌株和氟吡菌酰胺;毒虫霉属菌株和噻恶嗪芬;毒虫霉属菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;毒虫霉属菌株和顺式茉莉酮;毒虫霉属菌株和过敏蛋白;毒虫霉属菌株和印楝油;毒虫霉属菌株和印楝素;漆斑菌属菌株和棉铃威;漆斑菌属菌株和涕灭威;漆斑菌属菌株和虫螨威;漆斑菌属菌株和丁硫克百威;漆斑菌属菌株和噻唑磷;漆斑菌属菌株和硫线磷;漆斑菌属菌株和杀线威;漆斑菌属菌株和硫双灭多威;漆斑菌属菌株和乐果;漆斑菌属菌株和灭线磷;漆斑菌属菌株和特丁硫磷;漆斑菌属菌株和阿维菌素;漆斑菌属菌株和溴甲烷和其它卤代烃;漆斑菌属菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;漆斑菌属菌株和三氟咪啶酰胺;漆斑菌属菌株和联氟砜;漆斑菌属菌株和氟吡菌酰胺;漆斑菌属菌株和噻恶嗪芬;漆斑菌属菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;漆斑菌属菌株和顺式茉莉酮;漆斑菌属菌株和过敏蛋白;漆斑菌属菌株和印楝油;漆斑菌属菌株和印楝素;拟青霉属菌株和棉铃威;拟青霉属菌株和涕灭威;拟青霉属菌株和虫螨威;拟青霉属菌株和丁硫克百威;拟青霉属菌株和噻唑磷;拟青霉属菌株和硫线磷;拟青霉属菌株和杀线威;拟青霉属菌株和硫双灭多威;拟青霉属菌株和乐果;拟青霉属菌株和灭线磷;拟青霉属菌株和特丁硫磷;拟青霉属菌株和阿维菌素;拟青霉属菌株和溴甲烷和其它卤代烃;拟青霉属菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;拟青霉属菌株和三氟咪啶酰胺;拟青霉属菌株和联氟砜;拟青霉属菌株和氟吡菌酰胺;拟青霉属菌株和噻恶嗪芬;拟青霉属菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;拟青霉属菌株和顺式茉莉酮;拟青霉属菌株和过敏蛋白;拟青霉属菌株和印楝油;拟青霉属菌株和印楝素;木霉属菌株和棉铃威;木霉属菌株和涕灭威;木霉属菌株和虫螨威;木霉属菌株和丁硫克百威;木霉属菌株和噻唑磷;木霉属菌株和硫线磷;木霉属菌株和杀线威;木霉属菌株和硫双灭多威;木霉属菌株和乐果;木霉属菌株和灭线磷;木霉属菌株和特丁硫磷;木霉属菌株和阿维菌素;木霉属菌株和溴甲烷和其它卤代烃;木霉属菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;木霉属菌株和三氟咪啶酰胺;木霉属菌株和联氟砜;木霉属菌株和氟吡菌酰胺;木霉属菌株和噻恶嗪芬;木霉属菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;木霉属菌株和顺式茉莉酮;木霉属菌株和过敏蛋白;木霉属菌株和印楝油;木霉属菌株和印楝素;冢村氏菌属菌株和棉铃威;冢村氏菌属菌株和涕灭威;冢村氏菌属菌株和虫螨威;冢村氏菌属菌株和丁硫克百威;冢村氏菌属菌株和噻唑磷;冢村氏菌属菌株和硫线磷;冢村氏菌属菌株和杀线威;冢村氏菌属菌株和硫双灭多威;冢村氏菌属菌株和乐果;冢村氏菌属菌株和灭线磷;冢村氏菌属菌株和特丁硫磷;冢村氏菌属菌株和阿维菌素;冢村氏菌属菌株和溴甲烷和其它卤代烃;冢村氏菌属菌株和选自棉隆和威百亩的异氰酸甲酯产生剂;冢村氏菌属菌株和三氟咪啶酰胺;冢村氏菌属菌株和联氟砜;冢村氏菌属菌株和氟吡菌酰胺;冢村氏菌属菌株和噻恶嗪芬;冢村氏菌属菌株和N-[1-(2,6-二氟苯基)-1H-吡唑-3-基]-2-三氟甲基苯甲酰胺;冢村氏菌属菌株和顺式茉莉酮;冢村氏菌属菌株和过敏蛋白;冢村氏菌属菌株和印楝油;和冢村氏菌属菌株和印楝素。
21.根据权利要求1到4中任一项或根据权利要求13到20中任一项所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,其中所述植物、细胞、植物部分或种子进一步用选自以下的杀昆虫剂处理:IAN1、IAN2、IAN3、IAN4、IAN5、IAN6、IAN7、IAN8、IAN9、IAN10、IAN11、IAN12、IAN13、IAN14、IAN15、IAN16、IAN17、IAN18、IAN19、IAN20、IAN21、IAN22、IAN23、IAN24、IAN25、IAN26、IAN27、IAN28、IAN29、IAN30或SIAN1。
22.根据权利要求1到4中任一项或根据权利要求13到21中任一项所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,其中所述植物、细胞、植物部分或种子进一步用选自以下的杀真菌剂处理:F1、F2、F3、F4、F5、F6、F7、F8、F9、F9、F10、F11、F12、F13、F14、F15、F16或SF1。
23.根据权利要求1到4中任一项或根据权利要求13到22中任一项所述的植物、细胞、植物部分或种子,或其生长或打算生长的土壤,其用选自由以下组成的群组的组合处理:噻虫胺(Clothianidin)和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、噻虫胺、苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、吡虫啉(Imidacloprid)和硫双灭多威的组合、吡虫啉和丙硫菌唑(Prothioconazole)的组合、噻虫胺和萎锈灵(Carboxin)和甲霜灵(Metalaxyl)和肟菌酯(Trifloxystrobin)的组合、甲霜灵和丙硫菌唑和戊唑醇(Tebuconazole)的组合、噻虫胺和β-氟氯氰菊酯(beta-Cyfluthrin)的组合、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、噻虫胺和吡虫啉和丙硫菌唑和戊唑醇的组合、多菌灵(Carbendazim)和福美双(Thiram)的组合、吡虫啉和甲硫威(Methiocarb)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺(Penflufen)和丙硫菌唑的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑和吡虫啉的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、吡虫啉和氟吡菌酰胺的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、吡虫啉、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、吡虫啉、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑和噻虫胺的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和氟吡菌酰胺的组合、甲霜灵、氟唑菌苯胺、丙硫菌唑、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)、氟吡菌酰胺和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、吡虫啉和丙硫菌唑的组合、吡虫啉和七氟菊酯(Tefluthrin)的组合、吡虫啉和戊菌隆(Pencycuron)的组合、吡虫啉和氟唑菌苯胺的组合、氟嘧菌酯(Fluoxastrobin)、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑和甲霜灵的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵和吡虫啉的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、吡虫啉和氟吡菌酰胺的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、吡虫啉、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、和氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、吡虫啉、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺和氟吡菌酰胺的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、氟嘧菌酯、丙硫菌唑、甲霜灵、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、甲霜灵和肟菌酯的组合、氟唑菌苯胺和肟菌酯的组合、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟嘧菌酯和丙硫菌唑和戊唑醇和咪唑嗪(Triazoxide)的组合、吡虫啉和甲硫威和福美双的组合、噻虫胺和β-氟氯氰菊酯的组合、噻虫胺和氟嘧菌酯和丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟吡菌酰胺和氟嘧菌酯和三唑醇(Triadimenol)的组合、甲霜灵和肟菌酯的组合、吡虫啉和种菌唑(Ipconacole)的组合、苯醚甲环唑(Difenoconazol)和氟咯菌腈(Fludioxonil)和戊唑醇的组合、吡虫啉和戊唑醇的组合、吡虫啉、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、甲霜灵、丙硫菌唑和戊唑醇的组合、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、西沢巴斯德氏芽菌(如西沢巴斯德氏芽菌Pn1)、噻虫嗪(thiamethoxam)、氟唑环菌胺(sedexane)、氟咯菌腈和精甲霜灵(mefonaxam)的组合、噻虫嗪、氟唑环菌胺、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、噻虫嗪、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)和氟唑菌酰胺(fluoxayprad)的组合、阿维菌素和噻虫嗪的组合、伯克氏菌属种菌株(如菌株A396)和吡虫啉的组合、解淀粉芽孢杆菌(如解淀粉芽孢杆菌菌株PTA-4838)和噻虫胺的组合、噻恶嗪芬、吡虫啉、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、噻虫胺、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、噻虫胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)、苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、丙硫菌唑、氟嘧菌酯和甲霜灵的组合、噻恶嗪芬、吡唑醚菌酯、氟唑菌酰胺、甲霜灵和吡虫啉的组合、氟唑环菌胺、噻虫嗪、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、和西沢巴斯德氏芽菌、氟唑环菌胺、噻虫嗪、氟咯菌腈和精甲霜灵的组合、噻虫胺、氟吡菌酰胺和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合、噻虫胺、氟吡菌酰胺、噻恶嗪芬和坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)的组合;噻虫胺、氟吡菌酰胺、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合、噻虫胺、氟吡菌酰胺、噻恶嗪芬、坚强芽孢杆菌(如坚强芽孢杆菌GB126)和苏云金芽孢杆菌(如苏云金芽孢杆菌菌株EX297512)的组合。
24.根据权利要求1到4中任一项或根据权利要求13到23中任一项所述的植物、细胞、植物部分或种子,其还包含另一大豆转化事件,如提供对额外除草剂的耐受性的大豆转化事件,通过不同作用模式提供对线虫的耐受性的大豆转化事件,或提供昆虫防治的大豆转化事件,或以下大豆转化事件中的任一个:事件MON87751、事件pDAB8264.42.32.1、事件DAS-81419-2、事件FG-072、事件SYHT0H2、事件DAS-68416-4、事件DAS-81615-9、事件DAS-44406-6、事件MON87708、事件MON89788、事件DAS-14536-7、事件GTS 40-3-2、事件A2704-12、事件BPS-CV127-9、事件A5547-127、事件MON87754、事件
Figure FDA0002911161780000161
事件MON87701、事件MON87705、事件MON87712、事件pDAB4472-1606、事件DP-356043-5、事件MON87769、事件
Figure FDA0002911161780000162
事件DP305423,或以下事件组合中的任一个:MON89788×MON87708、HOS×GTS 40-3-2、FG-072×A5547-127、MON87701×MON 89788、DAS-81419-2×DAS-44406-6、DAS-81419-2×DAS-68416-4、DAS-68416-4×MON89788、MON 87705×MON 89788、MON 87769×MON 89788、
DP305423×GTS 40-3-2、DP305423×MON87708、事件DP305423×MON87708×事件MON89788、DP305423×MON89788、MON87705×MON87708、MON87705×MON87708×MON89788、MON89788×MON87708×A5547-127、MON87751×MON87701×MON87708×MON89788、SYHT0H2×MON89788、SYHT0H2×GTS 40-3-2、SYHT0H2×MON89788×MON87708。
25.根据权利要求1到4中任一项或根据权利要求13到24中任一项所述的植物、细胞、植物部分或种子,其中所述植物、植物部分或种子在用所述化合物、试剂或混合物处理的土壤中种植或播种。
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