CN112649539A - 一种离体气质花香气物质的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种离体气质花香气物质的检测方法，本发明的检测方法通过使用由广口瓶、试管、带有聚四氟乙烯隔垫的密封盖和磁力转子配套组合而成的萃取仪器进行香气物质的萃取，解决了离体气质花香气检测过程中难以加入液体内标的问题，实现了离体气质花边释放香气边完成绝对定量的目标，减少了香气定量中的仪器误差，且能够计算出离体气质花鲜花中各香气成分的具体含量，提高离体气质花鲜花香气物质成分含量的检测精确度。
Description
技术领域
本发明涉及离体气质花香气物质检测技术领域，更具体地，涉及一种离体气质花香气物质的检测方法。
背景技术
香气是评价鲜花品质的一个重要指标，固相微萃取-气相色谱质谱联用技术(SPME/GC-MS)是检测鲜花香气的主要方法之一。
气质花的香气成分随着鲜花的开放而逐渐形成并挥发，未成熟的花蕾或开放时间较长的花朵会因芳香油尚未完全形成或香气已经挥发而丧失其经济价值。因此，气质花的香气的检测时间十分有限。
目前，气质花的香气物质含量测定多采用SPME/GC-MS技术，固相微萃取过程中难以加入定量内标，所测定的各香气成分含量多为相对含量，即某一香气物质含量占鲜花香气成分总含量的百分比。
鉴于此，有必要设计一种香气萃取装置既能保证萃取过程中离体气质花鲜花保持生命活性持续释香又能于该装置内加入定量内标，完成各香气成分具体含量的测定。
发明内容
基于现有技术中存在的上述技术问题，本发明的目的在于提供一种离体气质花香气物质的检测方法，该检测方法通过特定的萃取仪器对香气物质进行萃取，可解决离体气质花香气检测过程中难以加入液体内标的问题，减少香气物质定量中的仪器误差，并可计算出气质花离体鲜花中各香气成分的具体含量，提高离体气质花香气成分含量的检测精确度。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种离体气质花香气物质的检测方法，包括以下步骤：
S1、离体气质花样品准备：收集离体气质花鲜花作为实验样品；
S2、空白基质制备：取所述样品冷冻干燥并粉碎，将粉碎样进行蒸发直至检测不到挥发性成分为止，然后将去除挥发性成分后的样品冷冻干燥作为空白基质；
S3、萃取仪器的准备：干净的广口瓶、带有聚四氟乙烯隔垫的密封盖、试管和磁力转子配套组合作为萃取仪器，用于香气物质萃取；可准备若干套萃取仪器分别用于不同步骤的香气物质萃取，也可重复使用一套，每完成一个步骤的萃取后，清洗干净并干燥，用于下一次的萃取；
S4、实验样品香气物质萃取及检测：
S41、随机取所述实验样品放入所述萃取仪器的广口瓶中；
S42、将溶有定量内标溶液的沸水和磁力转子加入试管中，将装有沸水的试管放入广口瓶内部，试管的底部与广口瓶的底部接触，然后在所述广口瓶的瓶口盖上密封盖，静置平衡；接着用老化后的萃取头经所述密封盖插入所述广口瓶中，搅拌加热条件下进行顶空萃取；
S43、将吸附萃取完成的所述萃取头置于气相色谱质谱联用仪进行样口解析，进行GC-MS检测；
S5、所述实验样品中香气物质成分定性分析；
S6、标准曲线绘制：
S61、将所述香气物质的标准品配成不同浓度梯度的混标溶液；
S62、取步骤S2制备的空白基质置于另一萃取仪器的广口瓶中，将溶有定量内标溶液的沸水和磁力转子放入试管中后，迅速将所述混标溶液加入试管中，然后按步骤S42的方式将试管倾斜放入广口瓶中，接着在广口瓶的瓶口盖上密封盖，静置平衡；再用老化后的萃取头穿过所述密封盖插入广口瓶中，搅拌加热进行顶空萃取；
S63、将吸附萃取完成的萃取头置于气相色谱质谱联用仪进样口解析，进行GC-MS检测；
S64、以各香气物质的标准品浓度为横坐标，标准品峰面积与内标峰面积比为纵坐标，建立标准曲线；
S7、香气物质定量分析：
S71、取所述实验样品放入新的广口瓶中；
S72、将溶有定量内标溶液的沸水和磁力转子加入试管中，然后按步骤S42的方式将试管倾斜放入广口瓶中，在广口瓶的瓶口盖上所述密封盖，静置平衡；接着用老化后的萃取头穿过所述密封盖插入广口瓶中，搅拌加热进行顶空萃取；
S73、将吸附萃取完成的萃取头置于气相色谱质谱联用仪进样口解析，进行GC-MS检测，计算各香气物质峰面积与内标峰面积比；
S74、将步骤S73中的各香气物质峰面积与内标峰面积比带入对应的标准曲线对所分析化合物进行定量。
在一些实施方式中，所述离体气质花鲜花包括不同开放形态的离体气质花鲜花；优选的，所述气质花选自茉莉花、梅花、兰花中的一种。
在一些实施方式中，步骤S2中，采用旋转蒸发仪旋蒸所述粉碎样，所述旋转蒸发仪的温度设定为40℃，且旋蒸时间应直至检测不到挥发性成分(信噪比＜3)为止。
在一些实施方式中，步骤S42中，沸水加入量为5mL；定量内标溶液为葵酸乙酯溶液，葵酸乙酯溶液中葵酸乙酯浓度为8.64mg/L，溶液加入量为20μL。
在一些实施方式中，步骤S42中，静置平衡时间为10min。
在一些实施方式中，步骤S42中，搅拌加热条件为搅拌速率600r/min，温度为40℃；顶空萃取时间为40min。
在一些实施方式中，步骤S43中，萃取头老化条件为气相色谱仪的进样口经250℃老化30min。
在一些实施方式中，步骤S43中，萃取头解析时间为5min；
气相色谱条件如下：色谱柱为HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；升温程序为：初温50℃保持3min，以3℃·min-1升到100℃，保持1min，以5℃·min-1升至180℃，再以15℃·min-1升至230℃，保持2min；载气为氦气；进样口温度为250℃；柱流速为1mL/min，分流比为5:1；优选的，氦气纯度＞99.999％；
质谱条件如下：离子源EI，离子源温度230℃，接口温度230℃，EI源能量70eV，电子倍增器电压2409V，质量扫描范围50～550u。
在一些实施方式中，步骤S5中的定性分析是依据谱库检索结果、保留指数计算结果结合标准品对照进行香气物质成分的方式进行。
在一些实施方式中，步骤S5中，定性分析包括以下步骤：
S51、谱库检索：由GC-MS分析得到各色谱峰的质谱信息与NIST17标准谱库进行检索比对，匹配指数＞80％作为物质鉴定标准；
S52、保留指数计算：在相同气相色谱质谱条件下，解析C8-C40正构烷烃，确定各正构烷烃的保留时间，然后根据待测物质的保留时间，计算保留指数RI，保留指数RI计算公式如下：
RI＝100n+100×[RTx-RTn]/(RTn+1-RTn)，
式中，RI为挥发性化合物的保留指数，n为该化合物前一碳标的原子数，RTx为该化合物的保留时间，RTn为该化合物前一碳标的保留时间，RTn+1为该化合物后一碳标的保留时间依据保留指数进行香气成分的定性；
S53、标准品定性：根据现有的标准品试剂出峰对照定性，提高鉴定准确率。
在一些实施方式中，步骤S61中，以乙醇为溶剂，将所述香气物质的标准品配置成不同浓度梯度的混标溶液；优选的，所用的乙醇为色谱级乙醇。
在一些实施方式中，步骤S62中，静置平衡10min。
在一些实施方式中，步骤S62中，搅拌加热条件为搅拌速率600r/min，温度为40℃；顶空萃取时间为40min。
在一些实施方式中，步骤S62中，沸水加入量为5mL，定量内标溶液为葵酸乙酯溶液，葵酸乙酯溶液中葵酸乙酯浓度为8.64mg/L，溶液加入量为20μL。
在一些实施方式中，步骤S62中，萃取头的老化条件为气象色谱仪的进样口经250℃老化30min。
在一些实施方式中，步骤S63中，解析时间为5min；
气相色谱条件如下：色谱柱为HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；升温程序为：初温50℃保持3min，以3℃·min-1升到100℃，保持1min，以5℃·min-1升至180℃，再以15℃·min-1升至230℃，保持2min；载气为氦气；进样口温度为250℃；柱流速为1mL·min-1，分流比为5:1；优选的，氦气纯度＞99.999％；
质谱条件如下：离子源EI，离子源温度230℃，接口温度230℃，EI源能量70eV，电子倍增器电压2409V，质量扫描范围50～550u。
在一些实施方式中，步骤S72中，沸水加入量为5mL，定量内标溶液为葵酸乙酯溶液，葵酸乙酯溶液中葵酸乙酯浓度为8.64mg/L，溶液加入量为20μL。
在一些实施方式中，所述步骤S72中，加热搅拌条件为搅拌速率600r/min，温度为40℃；顶空萃取时间为40min。
在一些实施方式中，所述步骤73中，解析时间为5min；气相色谱条件如下：色谱柱为HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；升温程序为：初温50℃保持3min，以3℃·min-1升到100℃，保持1min，以5℃·min-1升至180℃，再以15℃·min-1升至230℃，保持2min；载气为氦气(纯度>99.999％)；进样口温度为250℃；柱流速为1mL·min-1，分流比为5:1；优选的，氦气纯度＞99.999％；
质谱条件如下：离子源EI，离子源温度230℃，接口温度230℃，EI源能量70eV，电子倍增器电压2409V，质量扫描范围50～550u。
在一些实施方式中，步骤S74中，对没有标准品的化合物，其定量方式采用官能团相同、碳原子数相近的标准品进行估算。
相较于现有技术，本发明的有益效果如下：
本发明所提供的离体气质花香气物质的检测方法，通过所述香气物质萃取仪器进行香气物质的萃取，解决了离体气质花香气检测过程中难以加入液体内标的问题，实现了离体气质花边释放香气边完成绝对定量的目标，减少了香气定量中的仪器误差，且能够计算出离体气质花鲜花中各香气成分的具体含量，提高离体气质花鲜花香气物质成分含量的检测精确度。
附图说明
图1为本发明具体实施例的流程图；
图2为本发明的实施例中进行香气物质萃取时的萃取仪器状态图；
其中，1-广口瓶；2-试管；3-磁力转子；4-密封盖。
具体实施方式
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
以下实施例中，如无特别说明，所用设备和试剂均为市购。
以下实施例中所使用用于的香气物质的萃取仪器，如图2所示，包括广口瓶1、试管2、磁力转子3和密封盖4，使用时，将待测实验样品或空白基质放入广口瓶中，然后将溶有定量内标溶液的沸水和磁力转子放入试管中，试管倾斜地放入广口瓶1的内部且试管2的底部与广口瓶1的底部接触，避免试管中的液体流出，磁力转子可在试管中旋转，促使试管内的溶液混匀并且挥发；密封盖带有聚四氟乙烯隔垫，用于密封广口瓶的瓶口，使用带有聚四氟乙烯隔垫的密封盖，主要便于在广口瓶密封状态下将萃取头插入广口瓶中进行顶空萃取。
其中，所使用的广口瓶为250mL广口瓶。
以广口瓶、试管、磁力转子和密封盖配套组合形成萃取仪器，下述实施例中，每进行萃取一次后，下一次萃取使用新的萃取仪器进行新一轮的萃取。
实施例1
如图1所示，离体茉莉花鲜花香气物质的检测方法，包括以下步骤：
S1、离体茉莉鲜花样品准备：随机收取不同开放形态的离体2h的茉莉花鲜花，约400g，混合后作为鲜花样品，用于后续的检测实验；
S2、空白基质制备：
a)从步骤S1所得的鲜花样品中随机取300g放入真空冷冻干燥机冷冻干燥24h，取出粉碎；
b)将粉碎样置于1L圆底烧瓶中，加水300mL，用旋转蒸发仪在80℃的温度下不断补水旋蒸，定时取样检测，直至检测不到挥发性成分(信噪比<3)；
c)将旋转蒸发浓缩后所得样品从圆底烧瓶中取出，放入真空冷冻干燥机冷冻干燥24h，取出，作为空白基质；
S3、萃取仪器准备：干净的广口瓶、带有聚四氟乙烯隔垫的密封盖、试管和磁力转子，备用；
S4、离体茉莉花鲜花样品香气物质萃取及检测：
a)将65μm PDMS/DVB萃取头插入气相色谱仪的进样口，于250℃温度下老化30min；
b)从步骤S1所得的鲜花样品中随机取10g放于广口瓶中；
c)将磁力转子、溶有20μL浓度为8.64mg/L的定量内标癸酸乙酯溶液的5mL沸水加入试管中，搅拌均匀；
d)将试管倾斜放入装有10g鲜花样品的广口瓶中，用密封盖密封广口瓶，静置平衡10min；
e)将平衡后的广口瓶置于温度为40℃、转速为600r/min的磁力搅拌加热台上，用老化后的萃取头插入广口瓶的顶空部分，吸附鲜花香气40min；
f)设置气相色谱质谱联用仪条色谱条件：
色谱柱为HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；载气为氦气(纯度>99.999％)；进样口温度为250℃；柱流速为1mL/min，分流比为5:1；
升温程序为：初温50℃保持3min，以3℃/min升到100℃，保持1min，以5℃/min升至180℃，再以15℃/min升至230℃，保持2min；g)设置气相色谱质谱联用仪条质谱条件：
离子源EI，离子源温度230℃，接口温度230℃，EI源能量70eV，电子倍增器电压2409V，质量扫描范围50～550u；
h)GC-MS检测
将步骤e)完成吸附的萃取头置于气相色谱质谱联用仪进样口解析5min，按设定好的程序跑样；
S5、香气物质成分定性分析：
a)谱库检索：由GC-MS分析得到各色谱峰的质谱信息与NIST 17标准谱库进行检索比对，匹配指数大于80％作为物质鉴定标准，该定性方式记为MS定性；
b)保留指数计算：在相同的气相色谱质谱条件下，解析C8-C40正构烷烃，确定各正构烷烃的保留时间，然后根据待测物质的保留时间，计算保留指数(RI)，该定性方式记为RI定性；RI计算公式如下：
RI＝100n+100×[RTx-RTn]/(RTn+1-RTn)，
式中:RI为挥发性化合物的保留指数，n为该化合物前一碳标的原子数，RTx为该化合物的保留时间，RTn为该化合物前一碳标的保留时间，RTn+1为该化合物后一碳标的保留时间依据保留指数进行香气成分的定性；
c)标准品定性：根据现有的标准试剂出峰对照定性，进一步提高鉴定准确率，该定性方式记为std定性。
离体茉莉鲜花样品定性分析结果如表1所示。
表1茉莉鲜花样品定性分析结果
S6、标准曲线绘制：
a)以色谱乙醇为溶剂，将香气物质各成分的标准品分别配成10000ppm、5000ppm、2000ppm、1000ppm、100ppm、10ppm、1ppm、0.5ppm、0.1ppm、0.01ppm，10个不同浓度梯度的混标；
b)将65μm PDMS/DVB萃取头插入气相色谱仪的进样口，于250℃温度下老化30min；
c)取10g步骤S2所得的空白基质置于广口瓶中；
d)将磁力转子、溶有20μL浓度为8.64mg/L定量内标癸酸乙酯溶液的5mL沸水加入试管中后，迅速将20μL0.01ppm的混标加入试管中；
e)将试管放入装有10g空白基质的广口瓶中，用密封盖密封广口瓶，静置平衡10min后，用老化后的65μm PDMS/DVB萃取头插入广口瓶的顶空部分，在加热温度为40℃、转速为600r/min的条件下萃取吸附40min；
f)将吸附完成的萃取头置于气相色谱质谱联用仪进样口解析，进行GC-MS检测，气相色谱质谱联用仪条件与步骤S4中的相同；
g)重复以上步骤a)-f)，完成10个不同浓度的混标的GC-MS检测；h)以各香气物质标准品浓度为横坐标，标准品峰面积与内标峰面积比为纵坐标，建立标准曲线。
各香气物质标准曲线如表2所示。
表2香气物质标准曲线
S7、离体茉莉鲜花香气定量分析：
a)取步骤S1中的鲜花样品10g放于广口瓶中；
b)将磁力转子、溶有20μL浓度为8.64mg/L的定量内标癸酸乙酯溶液的5mL沸水加入试管中，搅拌均匀；
c)将试管倾斜放入装有10g鲜花样品的广口瓶中，用密封盖密封广口瓶，静置平衡10min；
d)用经250℃老化30min的65μm PDMS/DVB萃取头插入广口瓶的顶空部分，置于在温度为40℃、转速为600r/min的条件下吸附40min；
e)将完成吸附的萃取头置于气相色谱质谱联用仪进样口解析5min，进行GC-MS检测(气相色谱质谱联用仪条件与步骤S5中的相同)；
f)将各香气物质峰面积与内标峰面积比带入对应的步骤S6所得的标准曲线对解析后所得化合物进行定量。
经上述步骤后，测得离体2h的茉莉花鲜花各香气物质成分含量如表3所示。
表3离体2h的茉莉花鲜花各香气物质成分含量
注：“-”表示未检测到。
实施例2
如图1所示，离体茉莉花鲜花香气物质的检测方法，包括以下步骤：
S1、离体茉莉鲜花样品准备：随机收取不同开放形态的离体6h的茉莉花鲜花，约400g，混合后作为鲜花样品，用于后续的检测实验；
S2、空白基质制备：
a)从步骤S1所得鲜花样品中随机取300g放入真空冷冻干燥机冷冻干燥24h，取出粉碎；
b)将粉碎样置于1L圆底烧瓶中，加水300mL，用旋转蒸发仪在80℃的温度下不断补水旋蒸，定时取样检测，直至检测不到挥发性成分(信噪比<3)；
c)将旋转蒸发浓缩后所得样品从圆底烧瓶中取出，放入真空冷冻干燥机冷冻干燥24h，取出，作为空白基质；
S3、萃取仪器准备：干净的广口瓶、带有聚四氟乙烯隔垫的密封盖、试管和磁力转子，备用；
S4、离体茉莉花鲜花样品香气物质萃取及检测：
a)将65μm PDMS/DVB萃取头插入气相色谱仪的进样口，于250℃温度下老化30min；
b)从步骤S1所得鲜花样品中随机取10g鲜花放于广口瓶中；
c)将磁力转子、溶有20μL浓度为8.64mg/L的定量内标癸酸乙酯溶液的5mL沸水加入试管中，搅拌均匀；
d)将试管倾斜放入装有10g鲜花样品的广口瓶中，用密封盖密封广口瓶，静置平衡10min；
e)将平衡后的广口瓶置温度为40℃、转速为600r/min的磁力搅拌加热台上，用老化后的萃取头插入广口瓶的顶空部分，吸附鲜花香气40min；
f)设置气相色谱质谱联用仪条色谱条件：
色谱柱为HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)；载气为氦气(纯度>99.999％)；进样口温度为250℃；柱流速为1mL·min-1，分流比为5:1；
升温程序为：初温50℃保持3min，以3℃/min升到100℃，保持1min，以5℃/min升至180℃，再以15℃/min升至230℃，保持2min；
g)设置气相色谱质谱联用仪条质谱条件：
离子源EI，离子源温度230℃，接口温度230℃，EI源能量70eV，电子倍增器电压2409V，质量扫描范围50～550u。
h)GC-MS检测
将步骤e)完成吸附的萃取头置于气相色谱质谱联用仪进样口解析5min，按设定好的程序跑样；
S5、香气物质成分定性分析：
a)谱库检索：由GC-MS分析得到各色谱峰的质谱信息与NIST 17标准谱库进行检索比对，匹配指数大于80％作为物质鉴定标准，该定性方式记为MS定性；
b)保留指数计算：在相同的气相色谱质谱条件下，解析C8-C40正构烷烃，确定各正构烷烃的保留时间，然后根据待测物质的保留时间，计算保留指数(RI)，该定性方式记为RI定性；RI的计算方式如下：
RI＝100n+100×[RTx-RTn]/(RTn+1-RTn)，
式中:RI为挥发性化合物的保留指数，n为该化合物前一碳标的原子数，RTx为该化合物的保留时间，RTn为该化合物前一碳标的保留时间，RTn+1为该化合物后一碳标的保留时间依据保留指数进行香气成分的定性；
c)标准品定性：根据现有的标准试剂出峰对照定性，进一步提高鉴定准确率，该定性方式记为std定性；
离体茉莉花鲜花样品定性分析结果如表4所示：
表4茉莉花鲜花样品定性分析结果
S6、标准曲线绘制
a)以色谱乙醇为溶剂，将香气物质成分的标准品各配成10000ppm、5000ppm、2000ppm、1000ppm、100ppm、10ppm、1ppm、0.5ppm、0.1ppm、0.01ppm，10个不同浓度梯度的混标；
b)将65μm PDMS/DVB萃取头插入气相色谱仪的进样口，于250℃温度下老化30min；
c)取10g步骤S2所得的空白基质置于广口瓶中；
d)将磁力转子与溶有20μL浓度为8.64mg/L定量内标癸酸乙酯溶液的5mL沸水加入试管中后，迅速将20μL0.01ppm的混标加入试管中；
e)将试管倾斜放入装有10g空白基质的广口瓶中，用密封盖密封广口瓶，静置平衡10min后，用老化后的65μm PDMS/DVB萃取头插入广口瓶的顶空部分，在加热温度为40℃、转速为600r/min的条件下萃取吸附40min；
f)将吸附完成的萃取头置于气相色谱质谱联用仪进样口解析，进行GC-MS检测，气相色谱质谱联用仪条件与步骤S4中的相同；
g)重复以上步骤a)-f)，完成10个不同浓度的混标的GC-MS检测；h)以各香气物质标准品浓度为横坐标，标准品峰面积与内标峰面积比为纵坐标，建立标准曲线；
各香气物质标准曲线如表5所示。
表5香气物质标准曲线
S7、离体茉莉鲜花香气定量分析：
a)随机取10g步骤S1所得茉莉花鲜花样品放于广口瓶中；
b)将磁力转子、溶有20μL浓度为8.64mg/L的定量内标癸酸乙酯溶液的5mL沸水加入试管中，搅拌均匀；
c)将试管倾斜放入装有10g鲜花样品的广口瓶中，用密封盖密封广口瓶，静置平衡10min；
d)用经250℃老化30min的65μm PDMS/DVB萃取头插入广口瓶的顶空部分，置于温度为40℃、转速为600r/min的条件下吸附40min；
e)将完成吸附的萃取头置于气相色谱质谱联用仪进样口解析5min，进行GC-MS检测(气相色谱质谱联用仪条件与步骤S4中的相同)；
f)将各香气物质峰面积与内标峰面积比带入对应的标准曲线对所分析化合物进行定量；
经上述步骤后，测得离体6h的茉莉鲜花各香气物质成分含量如表6所示：
表6离体6h的茉莉鲜花各香气成分含量
注：“-”表示未检测到。
需要说明的是，本发明所提供的检测方法，不仅适用于离体茉莉花，还适用于其他离体气质花，可用于对所有离体气质花的香气物质进行定量检测。
另外，步骤S1-S3中，是分别独立的处理步骤，不分先后顺序，可同时进行，也可按本申请的次序进行，或者按其他顺序进行；而步骤S4-S7中，应按本申请的顺序进行，先进行香气物质提取后才可定性分析，确定香气物质成分，接着根据香气物质成分确定相应的标准品并绘制标准曲线，再根据标准曲线对香气物质定量分析，最终对离体鲜花的香气物质中各成分进行定量。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种离体气质花香气物质的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、离体气质花样品准备：收集离体气质花鲜花作为实验样品；
S2、空白基质制备：取所述样品冷冻干燥并粉碎，将粉碎样进行蒸发直至检测不到挥发性成分为止，然后将去除挥发性成分后的样品冷冻干燥作为空白基质；
S3、萃取仪器的准备：干净的广口瓶、带有聚四氟乙烯隔垫的密封盖、试管和磁力转子配套组合作为萃取仪器，用于香气物质萃取；
S4、实验样品香气物质萃取及检测：
S41、随机取所述实验样品放入所述萃取仪器的广口瓶中；
S42、将溶有定量内标溶液的沸水和磁力转子加入试管中，将装有沸水的试管放入广口瓶内部，试管的底部与广口瓶的底部接触，然后在所述广口瓶的瓶口盖上密封盖，静置平衡；接着用老化后的萃取头经所述密封盖插入所述广口瓶中，搅拌加热条件下进行顶空萃取；
S43、将吸附萃取完成的所述萃取头置于气相色谱质谱联用仪进行样口解析，进行GC-MS检测；
S5、所述实验样品中香气物质成分定性分析；
S6、标准曲线绘制：
S61、将所述香气物质的标准品配成不同浓度梯度的混标溶液；
S62、取步骤S2制备的空白基质置于另一萃取仪器的广口瓶中，将溶有定量内标溶液的沸水和磁力转子放入试管中后，迅速将所述混标溶液加入试管中，然后按步骤S42的方式将试管倾斜放入广口瓶中，接着在广口瓶的瓶口盖上密封盖，静置平衡；再用老化后的萃取头穿过所述密封盖插入广口瓶中，搅拌加热进行顶空萃取；
S63、将吸附萃取完成的萃取头置于气相色谱质谱联用仪进样口解析，进行GC-MS检测；
S64、以各香气物质的标准品浓度为横坐标，标准品峰面积与内标峰面积比为纵坐标，建立标准曲线；
S7、香气物质定量分析：
S71、取所述实验样品放入新的广口瓶中；
S72、将溶有定量内标溶液的沸水和磁力转子加入试管中，然后按步骤S42的方式将试管倾斜放入广口瓶中，在广口瓶的瓶口盖上所述密封盖，静置平衡；接着用老化后的萃取头穿过所述密封盖插入广口瓶中，搅拌加热进行顶空萃取；
S73、将吸附萃取完成的萃取头置于气相色谱质谱联用仪进样口解析，进行GC-MS检测，计算各香气物质峰面积与内标峰面积比；
S74、将步骤S73中的各香气物质峰面积与内标峰面积比带入对应的标准曲线对所分析化合物进行定量。
2.根据权利要求1所述的离体气质花香气物质的检测方法，其特征在于，所述离体气质花鲜花包括不同开放形态的离体气质花鲜花。
3.根据权利要求1所述的离体气质花香气物质的检测方法，其特征在于，步骤S2中，采用旋转蒸发仪旋蒸所述粉碎样，所述旋转蒸发仪的温度设定为40℃。
4.根据权利要求1所述的离体气质花香气物质的检测方法，其特征在于，步骤S42、步骤S62和步骤S72中，所述定量内标溶液为葵酸乙酯溶液，浓度为8.64mg/L；静置平衡时间为10min。
5.根据权利要求1所述的离体气质花香气物质的检测方法，其特征在于，步骤S42、步骤S62和步骤S72中，所述萃取头的老化条件为在气相色谱仪的进样口经250℃老化30min；顶空萃取时间为40min。
6.根据权利要求1所述的离体气质花香气物质的检测方法，其特征在于，步骤S42、步骤S62、步骤S72中，搅拌速率为600r/min，加热温度为40℃。
7.根据权利要求1所述的离体气质花香气物质的检测方法，其特征在于，步骤S43、步骤S63和步骤S73中，萃取头解析时间为5min；气相色谱条件如下：色谱柱为HP-5MS；升温程序为：初温50℃保持3min，以3℃/min升到100℃，保持1min，以5℃/min升至180℃，再以15℃·min-1升至230℃，保持2min；载气为氦气；进样口温度为250℃；柱流速为1mL/min，分流比为5:1；
质谱条件如下：离子源EI，离子源温度230℃，接口温度230℃，EI源能量70eV，电子倍增器电压2409V，质量扫描范围50～550u。
8.根据权利要求1所述的离体气质花香气物质的检测方法，其特征在于，步骤S5中，定性分析是依据谱库检索结果、保留指数计算结果结合标准品对照进行香气成分的方式进行。
9.根据权利要求8所述的离体气质花香气物质的检测方法，其特征在于，所述步骤S5中，定性分析包括以下步骤：
S51、谱库检索：由GC-MS分析得到各色谱峰的质谱信息与NIST17标准谱库进行检索比对，匹配指数＞80％作为物质鉴定标准；
S52、保留指数计算：在相同气相色谱质谱条件下，解析C8-C40正构烷烃，确定各正构烷烃的保留时间，然后根据待测物质的保留时间，计算保留指数RI，保留指数RI计算公式如下：
RI＝100n+100×[RTx-RTn]/(RTn+1-RTn)，
式中，RI为挥发性化合物的保留指数，n为该化合物前一碳标的原子数，RTx为该化合物的保留时间，RTn为该化合物前一碳标的保留时间，RTn+1为该化合物后一碳标的保留时间依据保留指数进行香气成分的定性；
S53、标准品定性：根据现有的标准品试剂出峰对照定性，提高鉴定准确率。
10.根据权利要求1所述的离体气质花香气物质的检测方法，其特征在于，步骤S74中，对没有标准品的化合物，其定量方式采用官能团相同、碳原子数相近的标准品进行估算。
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