CN112638388A - 刺激免疫反应的方法和组合物 - Google Patents

Abstract

公开了用于施用于受试者的组合物，并且该组合物包含疫苗和普那布林，不含或具有佐剂以诱导、增强或促进体液反应。公开了通过施用疫苗和普那布林的治疗方法。还公开了通过向受试者施用疫苗和普那布林而增强受试者中的疫苗的免疫反应的方法。疫苗和普那布林可以同时或分开给药。

Description

刺激免疫反应的方法和组合物

参照优先权申请合并

本申请要求于2018年8月16日提交的美国临时申请No.62/765,099的优先权权益，在此通过引用将其全部内容合并于此。

背景

领域

本公开涉及包含疫苗和微管蛋白结合剂的组合物以及使用疫苗和微管蛋白结合剂的治疗方法。

人体免疫系统包括许多具有重叠功能的不同类型的细胞，这些细胞共同起到保护人体免受疾病和疾病侵害的作用。免疫系统的细胞具有复杂的多种功能和相互联系的关系。免疫系统的主要成分是体液抗体反应，它在保护宿主免受这些生物感染方面起着至关重要的作用。

抗体，也称为免疫球蛋白，是一种蛋白质分子，对刺激其产生的外来颗粒具有特异性。免疫球蛋白(Ig)是一类结构相关的蛋白质，由两对多肽链组成。两条链均具有有助于抗原结合的区域，并且从一个Ig分子到另一个Ig分子高度可变。免疫球蛋白M(IgM)是对抗原初次暴露后出现的几种抗体形式之一。

免疫球蛋白来源于分泌抗体的细胞。抗体分泌细胞的前体是B淋巴细胞，也称为“B细胞”。B细胞带有专门用于在细胞表面表达的免疫球蛋白(Ig)分子作为细胞表面受体。新分化的B细胞最初仅表达IgM类的表面Ig。与B细胞成熟相关的是B细胞表面上其他免疫球蛋白同种型的出现。有多种激活B细胞的方法，包括通过抗原mIg交联膜(m)Ig分子(交联依赖性B细胞活化)，与T细胞直接接触(辅助T细胞或与辅助T细胞相关分子，例如CD40配体)，或与有丝分裂原接触。在这种情况下，抗原呈递表位会被B细胞的细胞表面Ig识别。

概述

一些实施方式涉及用于施用于受试者的组合物，其包含疫苗和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及用于施用于受试者的组合物，其包含疫苗和普那布林(plinabulin)。

一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括向受试者施用疫苗和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括向受试者施用疫苗和普那布林。

一些实施方式涉及在受试者中增强对疫苗的免疫反应的方法，所述方法包括向受试者施用疫苗和微管蛋白结合剂，其中，与在没有微管蛋白结合剂将疫苗单独给予受试者相比，对疫苗的免疫反应得到增强。一些实施方式涉及在受试者中增强对疫苗的免疫反应的方法，所述方法包括向受试者施用疫苗和普那布林，其中，与在没有普那布林将疫苗单独给予受试者相比，对疫苗的免疫反应得到增强。

一些实施方式涉及诱导淋巴细胞增殖的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的微管蛋白结合剂和疫苗。一些实施方式涉及诱导淋巴细胞增殖的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的普那布林和疫苗。

一些实施方式涉及诱导B细胞增殖的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的微管蛋白结合剂和疫苗。一些实施方式涉及一种诱导B细胞增殖的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的普那布林和疫苗。

一些实施方式涉及诱导一种或多种免疫球蛋白产生的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的微管蛋白结合剂和疫苗。一些实施方式涉及诱导一种或多种免疫球蛋白产生的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的普那布林和疫苗。在一些实施方式中，免疫球蛋白选自下组：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。

一些实施方式涉及用于施用于受试者的组合物，其包含与感染性疾病或癌症相关的抗原或免疫原和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及用于给予受试者的组合物，其包含与感染性疾病或癌症相关的抗原或免疫原和普那布林。

一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括向受试者施用与感染疾病或癌症相关的抗原或免疫原和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括向受试者施用与感染疾病或癌症有关的抗原或免疫原和普那布林。

一些实施方式涉及用于施用于受试者的组合物，其包含基于抗原或免疫原呈递细胞的疫苗和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及用于施用于受试者的组合物，其包含基于抗原或免疫原呈递细胞的疫苗和普那布林。

一些实施方式涉及治疗方法，该方法包括向受试者施用疫苗，该疫苗包含基于抗原或免疫原呈递细胞的疫苗和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括向受试者施用疫苗，该疫苗包含基于抗原或免疫原呈递细胞的疫苗和普那布林。

一些实施方式涉及用于施用于受试者的组合物，其包含基于树突细胞的疫苗和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及用于施用于受试者的组合物，其包含基于树突细胞的疫苗和普那布林。

一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括向受试者施用基于树突细胞的疫苗和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括向受试者施用基于树突细胞的疫苗和普那布林。

一些实施方式涉及用于施用于受试者的组合物，其包含基于B细胞的疫苗和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及施用于受试者的组合物，其包含基于B细胞的疫苗和普那布林。

一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括向受试者施用基于B细胞的疫苗和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括向受试者施用基于B细胞的疫苗和普那布林。

一些实施方式涉及增强免疫反应的方法，该方法包括施用疫苗和微管蛋白结合剂，其中在施用疫苗后施用微管蛋白结合剂。在一些实施方式中，微管蛋白结合剂是普那布林。

一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括施用疫苗和微管蛋白结合剂，其中在施用疫苗后施用微管蛋白结合剂。

附图说明

图1A至4J显示了微管蛋白结合剂(例如，普那布林)针对B细胞对卵清蛋白免疫反应的增强作用，如实施例2研究中所述。

图1A-1E显示了实施例2研究中五个亚组中小鼠平均体重的变化：亚组1(图1A)、亚组2(图1B)、亚组3(图1C)、亚组4(图1D)、亚组5(图1E)。

图2显示了实施例2研究中第1天至第62天之间小鼠平均体重的变化。误差线显示标准偏差。

图3A-3F显示了在实施例2研究中第30天(图3A、3C和3E)和第62天(图3B、3D和3F)免疫时小鼠卵清蛋白IgG1(ng/mL)的个体血清水平。如图3E-3F所示，动物3501、3502、3503、3504和3505改为接受15mg/kg。

图4A-4J显示了实施例2研究中在第30天(图4A、4C、4E、4G和4I)和第62天(图4B、4D、4F、4H和4J)的1-5亚组卵清蛋白IgG1的血清水平。免疫后的特定时间内，在一天中以每日两次BID的方式给予普那布林：免疫后1小时(图4A-4B)、第3天(图4C-4D)、第6天(图4E-4F)、第14天(图4G-4H)和第28天(图4I-4J)。与相应的溶媒组相比，符号“*”和“**”分别表示p<0.05和p<0.01。误差线显示标准偏差。

图5至图8示例性的显示了如实施例3A中所述的研究中，微管蛋白结合剂(例如，普那布林)对CD14⁺树突状细胞诱导的CD4⁺T细胞应答的增强作用。

图5显示了在研究小组#A1分化过程中用普那布林处理的树突状细胞的FACS(荧光激活细胞分选)图。图6示出了在研究小组#A2中在成熟期间用普那布林处理的树突状细胞的FACS图。图7显示了如实施例3A中所述研究中的测试物品对MLR中的IL-2分泌(混合淋巴细胞反应)的影响。图8示出了在实施例3A的研究中测试物品对MLR中IFN-γ分泌的影响。在图7-8中，将研究小组#A1-A3的数据合并并绘图。

图9至图12示例性的显示了如实施例3B中所述的研究中，微管蛋白结合剂(例如，普那布林)对CD14⁺树突状细胞诱导的CD4⁺T细胞应答的增强作用。

图9显示了在研究小组#B1的分化过程中用普那布林处理过的树突状细胞的FACS图。图10示出了在研究小组#B2中在成熟期间用普那布林处理的树突状细胞的FACS图。图11示出了在实施例3B的研究中测试物品对MLR中IL-2分泌的影响。图12说明了在实施例3B所述的研究中测试物品对研究中MLR中IFN-γ分泌的影响。在图11-12中，合并了研究小组B1、B2和B3的数据，并用平均值+/-SEM绘图。

图13和图14示例性的显示了如实施例3C中所述的研究中，微管蛋白结合剂(例如，普那布林)对CD14⁺树突状细胞诱导的CD4⁺T细胞应答的增强作用。

图13显示了测试物品对IL-2分泌的影响；图14示出了在实施例3C的研究中测试物品对MLR测定中的IFN-γ分泌的影响。图13-14中的数据用平均值+/-SEM绘图。

详细说明

免疫系统包括细胞免疫和体液免疫。细胞免疫包括细胞和事件的网络。体液免疫涉及B细胞和抗体。当B细胞转化为浆细胞时，浆细胞表达并分泌抗体。分泌的抗体随后可与感染的或肿瘤细胞表面的抗原结合。结果是感染的细胞或肿瘤细胞被抗体标记。随着抗体与感染细胞或肿瘤细胞的结合，结合的抗体介导了感染细胞或肿瘤细胞的杀伤。

普那布林，(3Z，6Z)-3-苄叉基-6-{[5-(2-甲基-2-丙基)-1H-咪唑-4-基]亚甲基}-2,5-哌嗪二酮是天然化合物苯海拉斯汀(phenylahistin)的合成类似物。可以根据美国专利号7,064,201和7,919,497中详述的方法和程序容易地制备普那布林，将其全文引入本文作为参考。

普那布林可有效激活B细胞，诱导B细胞增殖和成熟，并进一步(通过专用浆细胞)诱导免疫球蛋白(例如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE)抗体的产生和分泌，这些抗体特异性的针对所呈递的抗原。

一些实施方式涉及微管蛋白结合剂与一种或多种疫苗组合用于治疗或增强受试者的免疫反应的用途。一些实施方式涉及普那布林与一种或多种疫苗组合用于治疗或增强受试者的免疫反应的用途。

疫苗和微管蛋白结合剂(例如普那布林)的施用可以提高免疫反应的强度、速率和持续时间，和/或缩短抗体反应的发作时间。免疫反应可以是体液免疫反应。与单独接种疫苗相比，疫苗和普那布林的组合还可以增加产生抗体的B细胞的数量，提高中和抗体(例如IgG、IgM、IgA、IgD和IgE)的产生速率、延长产生抗体的持续时间，和/或缩短发病时间。因此，使用疫苗和普那布林可以刺激针对疫苗中表达抗原的病理和/或免疫原性靶标的更大保护。另外，将疫苗与普那布林一起使用可能会导致克隆扩展和记忆增强，并且在对所讨论的抗原再次发起攻击时，体液反应会更迅速/更快、更强烈和更长时间。与单独使用疫苗相比，疫苗和普林布林的组合可产生协同作用并获得更大的益处；并且该组合还允许可能使用较小剂量的疫苗以获得保护性抗体滴度。

当使用微管蛋白结合剂增强疫苗诱导的免疫反应时，给药时间可能很关键。出乎意料的是，在疫苗接种之前或同时给予微管蛋白结合剂相比，在疫苗施用后，特别是在通过接触抗原呈递细胞激活淋巴细胞(例如T细胞)时或之后不久，施用微管蛋白结合剂(如普那布林)会极大地增加淋巴细胞的扩增或增殖并促进更强的免疫反应。与在疫苗接种前添加微管蛋白结合剂相比，在激活淋巴细胞期间或之后添加微管蛋白结合剂可以更有效地增加T细胞增殖，从而提供针对疫苗中表达抗原的免疫原性靶标增强的免疫反应和更好的保护。

定义

如本文所用，“受试者”是指人类或非人类哺乳动物，例如狗、猫、小鼠、大鼠、牛、绵羊、猪、山羊、非人类灵长类动物或鸟类，例如鸡，以及任何其他脊椎动物或无脊椎动物。

术语“哺乳动物”以其通常的生物学含义使用。因此，它特别包括但不限于灵长类动物，包括猿猴(黑猩猩、猿、猴子)和人、牛、马、绵羊、山羊、猪、兔、狗、猫、啮齿动物、大鼠、小鼠、豚鼠，等等。

如本文所用，“有效量”或“治疗有效量”是指可在某种程度上有效缓解一种或多种症状、疾病或病症，或减少发病的可能性，包括治愈疾病或病症的治疗剂的量。“治愈”是指疾病或病症的症状已消除；然而，即使获得治愈，某些长期或永久的影响仍可能存在(例如广泛的组织损伤)。

如本文所用，“治疗(Treat)”，“治疗(treatmen)”或“治疗(treating)”是指为了预防和/或治疗目的而向受试者施用化合物或药物组合物。术语“预防性治疗”是指治疗尚未表现出疾病或病症的症状，但是易感于特定疾病或病症或以其他方式处于该特定疾病或病症的风险的受试者，从而该治疗降低了患者会发展所述疾病或症状的可能性。术语“治疗性治疗”是指对已经患有疾病或病症的受试者进行治疗。

术语“诱导和/或增强免疫反应”是指该方法引起和/或增强动物免疫系统的任何反应。“免疫反应”定义为免疫系统的任何反应，例如细胞介导的(即细胞毒性T淋巴细胞介导的)或体液(即抗体的介导)性质的任何反应。这些免疫反应可以通过本领域技术人员众所周知的多种体内或体外测定来评估，包括但不限于抗体测定(例如ELISA测定)、抗原特异性细胞毒性测定、细胞因子的产生(例如ELISPOT分析)等。

术语“淋巴部位”是指体内与淋巴系统有关的部位，包括淋巴器官、组织、细胞、淋巴结或腺体，如脾脏、胸腺、扁桃体、派尔集合淋巴结、骨髓、淋巴细胞、胸导管以及身体的所有淋巴结。

术语“免疫球蛋白”或“Ig”是指由浆细胞产生的蛋白质或抗体，被免疫系统用来中和抗原。人类抗体共有5类：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。一些免疫球蛋白，例如IgG、IgD和IgE，是“Y”形大分子，为由四个糖蛋白链组成的单聚体。其存在两条相同的具有高分子量的重链，其随抗体种类而变化。另外，有两个相同的轻链，属于两个变体之一：κ或γ。根据抗体的类别，抗体Fc部分的生物学活性包括激活补体通路(IgG和IgM)、与吞噬细胞结合(IgG，IgA)或与肥大细胞和嗜碱性粒细胞(IgE)结合的能力。某些类型的免疫球蛋白更为复杂：例如，IgM是五聚体，由在其Fc部分连接的5个“Y”样分子组成，而分泌型IgA是由2个“Y”样分子组成的二聚体。

此处所用的常见药学缩写定义如下：

API 活性药物成分

BCG 卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin)

BID 每日两次(“bis in die”)

CFA 完全弗氏佐剂

CTG 发光法细胞活力检测(CellTiter-Glo)

D5W 5％葡萄糖水溶液

DMSO 二甲亚砜

ELISA 酶联免疫吸附测定

FBS 胎牛血清

g 克

G 量规

hr 小时

HRP 辣根过氧化物酶

IFN-γ 干扰素-γ

IgE 免疫球蛋白E

IgG 免疫球蛋白G

IL-2 白介素2

IP 腹膜内

kDa 千道尔顿

L 升

mg 毫克

MLR 混合淋巴细胞反应

N/A 不适用

OVA 卵清蛋白

PBS 磷酸盐缓冲盐水

PG 丙二醇

RPM 每分钟旋转

SC 皮下

SOPs 标准操作程序

TMB 四甲基联苯胺

v/v 体积/体积

μL 微升

疫苗、药物组合物和施用方法

一些实施方式涉及用于施用于受试者的组合物，其包括疫苗和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及用于施用于受试者的组合物，其包含疫苗和普那布林。在一些实施方式中，所述组合物不包含佐剂。在一些实施方式中，所述组合物还包含诱导、增强或促进体液反应的佐剂。

在某些实施方式中，疫苗可以是市售疫苗。在一些实施方式中，市售疫苗可包含至少一种其他佐剂，例如明矾。

在一些实施方式中，疫苗选自针对一种或多种选自下组的疾病的疫苗：霍乱、登革热、白喉、b型流感嗜血杆菌感染、甲型肝炎、乙型肝炎、流行性感冒、日本脑炎、脑膜炎球菌性脑膜炎、百日咳、小儿麻痹症、狂犬病、破伤风、结核病、伤寒和黄热病。

在一些实施方式中，疫苗可以选自下组：嗜血杆菌b偶联疫苗(破伤风类毒素偶联)；吸附的破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳疫苗；吸附的白喉和破伤风类毒素和无细胞百日咳疫苗；吸附的白喉和破伤风类毒素；四价流感疫苗；大剂量流感疫苗；四价流感疫苗；皮内四价流感疫苗；狂犬病疫苗(人类二倍体细胞)；脊髓灰质炎灭活疫苗；脑膜炎球菌(A、C、Y和W-135群)多糖白喉类毒素偶联疫苗；吸附的白喉和破伤风类毒素及无细胞百日咳，灭活的脊髓灰质炎病毒和b型流感嗜血杆菌偶联物(破伤风类毒素偶联)疫苗；吸附的白喉和破伤风类毒素以及无细胞百日咳和灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗；吸附的破伤风和白喉类毒素；伤寒病毒多糖疫苗；黄热病疫苗；热处理的狂犬病–HT狂犬病免疫球蛋白(人类)USP；结核菌素纯化的蛋白衍生物，芒图(Mantoux)；和黄热病疫苗。

用于制备疫苗的抗原或免疫原可以来自多种来源。例如，合适的抗原或免疫原可包括传染原(例如细菌、真菌、原生动物、寄生虫或病毒)、传染原来源的产物，例如蛋白质、肽、核酸、多糖、糖蛋白、糖脂、抗原或抗原制剂、变性疾病抗原、特应性疾病抗原、自身免疫疾病抗原、同种抗原、异种抗原、代谢性疾病酶或酶产物、重组产生的蛋白质或多肽、嵌合融合蛋白和/或小分子。

合适的抗原或免疫原可以是全细胞或纯化或部分纯化的抗原或抗原制剂的形式。合适的抗原或免疫原可以不加修饰地以盖伦(galenic)形式使用，或与溶媒或载体如例如微球、脂质体、纳米球和本领域普通技术人员熟悉的其他抗原递送系统组合使用。

疫苗可以是基于从天然来源制备或衍生或通过重组技术生产的抗原。

传染病疫苗

在某些实施方式中，疫苗可以是传染病疫苗。在一些实施方式中，用于感染性疾病的疫苗包含选自微生物结构(细胞壁、荚膜、鞭毛、菌毛、病毒衣壳、包膜相关糖蛋白)的抗原或免疫原；微生物毒素(过敏原：灰尘、花粉、毛发、食物、皮屑、蜂毒、药物和其他引起过敏反应的物质；外来组织和细胞(来自移植和输血)；以及无法识别为“正常的自我”的人体自身细胞(癌细胞、受感染的细胞、参与自身免疫性疾病的细胞)。

在一个实施方式中，抗原或免疫原可以是一种传染原或传染原的产物。在一个实施方式中，抗原或免疫原包含一种灭活的传染原，例如已经被杀死或以其他方式减弱了。在另一个实施方式中，抗原或免疫原包含活的传染原。

在一个实施方式中，传染原(或传染原产物)是病毒，例如但不限于痘病毒(例如痘苗病毒)、天花病毒、马尔堡病毒、黄病毒(例如黄热病病毒、登革热病毒、蜱传的脑炎病毒、日本脑炎病毒)、流感病毒(或抗原，例如F和G蛋白或其衍生物)，例如甲型流感；或其纯化或重组蛋白，例如HA、NP、NA或M蛋白，或其组合)、副流感病毒(例如仙台病毒)、呼吸道合胞病毒、风疹病毒、人免疫缺陷病毒(或抗原，例如如tat、nef、gpl20或gpl60)、人乳头瘤病毒(或抗原，例如HPV6、11、16、18)、水痘带状疱疹病毒(或抗原，例如gpl、II和IE63)、单纯性疱疹病毒(例如单纯性疱疹病毒I、单纯性疱疹病毒II；或抗原、例如gD或其衍生物，或即刻早期蛋白质，例如来自HSV1或HSV2的ICP27)、巨细胞病毒(或抗原，例如gB或其衍生物)、爱泼斯坦-巴尔病毒(或抗原，例如gp350或其衍生物)、JC病毒、弹状病毒、轮状病毒、鼻病毒、腺病毒、乳头瘤病毒、细小病毒、皮瘤病毒、脊髓灰质炎病毒、引起腮腺炎的病毒、引起狂犬病的病毒、呼肠孤病毒、风疹病毒、披膜病毒、正粘病毒、逆转录病毒、肝炎病毒、汉坦病毒、胡宁病毒(junin virion)、线状病毒(例如埃博拉病毒)、柯萨奇病毒、马脑炎病毒、裂谷热病毒、α病毒(例如基孔肯雅病毒、辛德比斯病毒)、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒(或其抗原，例如乙型肝炎表面抗原或其衍生物)、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒或戊型肝炎病毒。

在一个实施方式中，传染原是细菌。用于本发明的疫苗和/或方法的合适细菌(或细菌衍生产物)的非限制性实例包括奈瑟氏球菌(Neisseria)种，包括淋病奈瑟氏球菌(N.gonorrhea)和脑膜炎奈瑟氏球菌(N.meningitidis)(或抗原，例如荚膜多糖和其偶联物、转铁蛋白结合蛋白、乳铁蛋白结合蛋白、PilC、粘附素)；嗜血菌(Haemophilus)种，例如流感嗜血杆菌(H.influenzae)；化脓链球菌(S.pyogenes)(或抗原，例如M蛋白或其片段、C5A蛋白酶、脂蛋白酸)，无乳链球菌(S.agalactiae)，变形链球菌(S.mutans)；杜克雷嗜血杆菌(H.ducreyi)；莫拉克斯氏菌属(Moraxella spp)，包括卡他莫拉菌(M catarrhalis)，也称为粘膜炎伯拉氏菌(Branhamella catarrhalis)(或抗原，例如高和低分子量粘附素和浸润素)；百日咳博德特氏菌(Bordetella spp)，包括百日咳(B.pertussis)(或抗原，例如百日咳杆菌粘附素、百日咳毒素或其衍生物、丝状血凝素、腺苷酸环化酶、菌毛)、副百日咳博德特氏菌(B.parapertussis)和支气管败血性博德特氏菌(B.bronchiseptica)；分枝杆菌种，包括结核分枝杆菌(M.tuberculosis)(或抗原，例如ESAT6、抗原85A、-B或-C)、牛分枝杆菌(M.bovis)、麻风分枝杆菌(M.leprae)、鸟分枝杆菌(M.avium)，副结核分枝杆菌(M.paratuberculosis)、耻垢分枝杆菌(M.smegmatis)；军团菌属(Legionella spp)，包括嗜肺乳杆菌(L.pneumophila)；大肠杆菌(Escherichia spp)，包括肠毒性大肠杆菌(或抗原，例如定居因子、不耐热毒素或其衍生物、热稳定毒素或其衍生物)，肠出血性大肠杆菌，肠致病性大肠杆菌(或抗原，例如志贺毒素样毒素或其衍生物)；霍乱弧菌(Vibrio spp)，包括霍乱弧菌(V.cholera)(或抗原，例如霍乱毒素或其衍生物)；志贺氏菌属(Shigellaspp,)，包括宋内志贺菌(S.sonnei)、痢疾志贺菌(S.dysenteriae)、福氏志贺菌(S.flexnerii)；耶尔森氏菌(Yersinia spp)，包括小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yenterocolitica)(或抗原，例如Yop蛋白)、鼠疫杆菌(Y pestis)、假结核耶尔森氏菌(Y.pseudotuberculosis)；弯曲杆菌属(Campylobacter spp)，包括空肠弯曲杆菌(C.jejuni)(或抗原，例如毒素、粘附素和侵袭素)和结肠弯曲菌(C.coli)；沙门氏菌(Salmonella spp)，包括伤寒沙门氏菌(S.typhi)、副伤寒沙门氏菌(S.paratyphi)，霍乱沙门氏菌(S.choleraesuis)、肠炎沙门氏菌(S.enteritidis)、鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)和痢疾链球菌(S.dysenteriae)；李斯特菌种，包括单核细胞增生李斯特菌(L.Monocytogenes)；幽门螺杆菌种(Helicobacter spp)，包括幽门螺杆菌(H.pylori)(例如脲酶、过氧化氢酶、空泡毒素)；假单胞菌属物种(Pseudomonas spp)，包括铜绿假单胞菌(P.Aeruginosa)；金黄色葡萄球菌种，包括金黄色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)；变形杆菌种，例如奇异假单胞菌(P.mirabilis)；肠球菌种，包括粪肠球菌(E.faecalis)、屎肠球菌(E.faecium)；梭状芽胞杆菌种，包括破伤风梭菌(C.tetani)(或抗原，例如破伤风毒素及其衍生物)、肉毒梭菌(C.botulinum)(或抗原，例如肉毒杆菌毒素及其衍生物)、艰难梭菌(C.difficile)(或抗原，例如，梭菌毒素A或B及其衍生物)和产气荚膜梭状芽胞杆菌(C.perfringens)；芽孢杆菌属种(Bacillus species)，包括炭疽芽孢杆菌(B.anthracis)(或抗原，例如肉毒杆菌毒素及其衍生物)、蜡状芽孢杆菌(B.cereus)、圆环芽孢杆菌(B.circulans)和巨大芽孢杆菌(B.megaterium)；棒杆菌种，包括白喉衣原体(C.diphtheriae)(或抗原，例如白喉毒素及其衍生物)；伯氏疏螺旋菌属物种(Borreliaspecies)，包括伯氏疏螺旋体(B.burgdorferi)(例如，OspA、OspC、DbpA、DbpB)、加里氏芽孢杆菌(B.garinii)(或抗原，例如，OspA、OspC、DbpA、DbpB)、非洲假单胞菌(B.afzelii)(例如、OspA、OspC、DbpA、DbpB)、安德森疏螺旋体(B.andersonii)(或抗原，例如，OspA、OspC、DbpA、DbpB)、赫姆疏螺旋体(B.hermsii)；埃里希氏菌(Ehrlichia)种，包括马型爱里希体(E.equi)和人类粒细胞埃里希氏菌病的病原体；立克次体属(Rickettsia spp)，包括立氏立克次体(R.rickettsii)；衣原体(Chlamydia)物种，包括沙眼衣原体(C.Trachomatis)(或抗原，例如MOMP、肝素结合蛋白)、肺炎衣原体(C.pneumoniae)(例如MOMP、肝素结合蛋白)、鹦鹉热衣原体(C.psittaci)；钩端螺旋体(Leptospira)物种，包括问号钩端螺旋体(L.interrogans)；链球菌(Streptococcus)种，例如化脓性链球菌(S.pyogenes)、无乳链球菌(S.agalactiae)、肺炎链球菌(S.pneumonia)；梅毒螺旋体(Treponema)物种包括苍白螺旋体(T.pallidum)(或抗原，例如稀有的外膜蛋白)、T齿状体(T denticola)和猪痢疾螺旋体(T.hyodysenteriae)。

在一个实施方式中，传染原是寄生虫或寄生虫衍生的产物。用于本发明的疫苗和/或方法中的合适的寄生虫(或寄生虫衍生的产物)的非限制性实例包括疟原虫种，包括恶性疟原虫；弓形虫种，包括弓形虫(T.gondii)(或抗原，例如SAG2、SAG3、Tg34)；变形虫种，包括溶组织内阿米巴(E.Histolytica)；巴贝斯虫种，包括巴贝西虫(B.microti)；锥虫种，包括克鲁氏锥虫(T cruzi)；贾第虫种，包括兰伯球菌(G.lamblia)；莱什曼原虫(Leshmania)种，包括硕大利什曼原虫(L.major)；肺囊虫种(Pneumocystis species)，包括卡氏肺孢子虫(P.carinii)；滴虫种，包括阴道毛滴虫；和裂体属(Schisostoma)种，包括曼氏迭宫绦虫(S.mansoni)。

在另一个实施方式中，传染原是真菌或真菌衍生产物。用于本发明的疫苗和/或方法的合适的真菌(或真菌衍生的产物)包括但不限于念珠菌(Candida species)，包括白色念珠菌(C.Albicans)和近平滑菌(parapsilosis)；隐球菌(Cryptococcus)物种，包括新隐梭菌(C.neoformans)；熏蒸曲霉(Aspergillus fumigates)和黑曲霉(niger)，镰刀菌属(Fusarium spp)，发癣菌属(Tryphyphyton spp)，犁头霉属物种(Absidia species)，如伞枝犁头霉(Absidia corymbifera)，阿耶罗菌属(Ajellomyces spp)，例如荚膜阿耶罗菌(Ajellomyces capsulatus)，节皮真菌(Arthroderma)种，例如苯黑末节皮真菌(Arthroderma benhamiae)，芽生菌(Blastomyces)种，例如皮炎芽生菌(Blastomycesdermatophlad)，瓶霉(Cladophialophora)属种,例如着色芽生菌病致病菌(Cladophialophora carrionii)，球孢子菌属(Coccidioides spp)，例如粗球孢子菌(Coccidioides immitis)，隐球菌属(Cryptococcus spp)，如新型隐球菌(Cryptococcusneoformans)，小克银汉霉属(Cunninghamella)种，表皮癣菌(Epidermophyton)种，例如，絮状表皮癣菌(Epidermophyton floccosum)，外瓶霉属(Exophiala spp)，例如皮炎外瓶霉(Exophiala dermatitidis)，线黑粉菌属(Filobasidiella spp)，例如新型线黑粉菌(Filobasidiella neoformans)，着色霉属(Fonsecaea spp)，例如佩德罗索氏产色芽生菌(Fonsecaea pedrosoi)，镰刀菌属(Fusarium spp)，例如茄形镰刀菌(Fusarium solani)，地霉属(Geotrichum spp)，例如白地霉(Geotrichum candidum)，组织胞菌属(Histoplasmaspp)，例如荚膜组织胞菌(Histoplasma capsulatum)，霍塔氏菌属(Hortaea spp)，例如威尼克外瓶霉(Hortaea werneckii)，伊萨酵母菌属(Issatschenkia spp)，例如东方伊萨酵母(Issatschenkia orientalis)，马杜拉分枝菌属(Madurella spp)，例如灰色马杜拉分支菌(Madurella grisae)，马拉色氏霉菌属(Malassezia spp)，糠秕马拉色氏霉菌(Malassezia furfur)，小孢子菌属(Microsporum spp)，例如犬小孢子菌(Microsporumcanis)，毛霉菌属(Mucor spp)，例如卷枝毛霉菌(Mucor circinelloides)，丛赤壳属(Nectria spp)，例如赤球丛赤壳(Nemaria haematococca)、拟青霉属(Paecilomycesspp)，例如，多变拟青霉(Paecilomyces variotii)，子菌属(Paracoccidioides spp)，例如，巴西芽生菌(Paracoccidioides brasiliensis)，青霉菌属(Penicillium spp)，例如，马尔尼菲青霉菌(Penneillium marneffei)，毕赤酵母属(Pichia spp)，例如季氏毕赤酵母(Pichia guilliermondii)，肺孢子虫属(Pneumocystis spp)，例如卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)，假性阿利什利菌属(Pseudallescheria spp)，例如波氏假阿利什霉(Pseudallescheria boydii)，根霉属(Rhizopus spp)，例如，米根霉(Rhizopusoryzae)，红酵母属(Rhodotorula spp)，例如，深红酵母(Rhodotorula rubra)，足放线病菌属(Scodosporium spp)，例如，尖端赛多孢子菌(Scedosporium apiospermum)，裂褶菌属(Schizophyllum spp)，例如，裂褶菌(Schizophyllumcommune)，孢子丝菌属(Sporothrixspp,)，例如，申克孢子丝菌(Sporothrix schenckii)，毛癣菌属(Trichophyton spp)，例如，毛癣菌(Trichophyton violaceum)和毛孢属(Trichosporon spp)，例如粘液毛癣菌(Trichosporon mucoides)。

在另一个实施方式中，传染原是原生动物或原生动物衍生的产物。用于本发明的疫苗和/或方法中的合适的原生动物(或原生动物衍生的产品)包括但不限于寄生虫(protests)(单细胞或多细胞)，例如恶性疟原虫和蠕虫，例如，线虫和吸虫。

在一个实施方式中，用于本发明的疫苗和方法的合适抗原或免疫原是同种抗原(自身抗原)，例如蛋白质或肽、脂蛋白、脂质、碳水化合物、核酸、酶、结构蛋白、分泌蛋白、细胞表面受体和细胞因子，例如TNF、IFN-γ、IL-1或IL-6。在一个实施方式中，自身抗原是胆固醇酯转移蛋白(CETP)、与阿尔茨海默氏症相关的Aβ蛋白、加工病理形式的Aβ蛋白的蛋白水解酶，例如β-分泌酶，与动脉粥样硬化相关的LDL或HIV-1的核心受体，例如CCR5。在一个实施方式中，与动脉粥样硬化有关的LDL被氧化或被最小程度地修饰。

癌症疫苗

在一些实施方式中，疫苗可以是癌症疫苗。癌症疫苗可包含能够激活免疫反应的抗原或免疫原。癌症疫苗还可以包括任何DNA破坏剂。与单独使用疫苗相比，将普那布林与癌症疫苗联合给药可以更迅速/更快，和/或更强烈和/或更长时间地刺激针对疫苗中表达抗原或免疫原的病理和/或免疫原性靶点的更大保护。微管蛋白结合剂(如普那布林)与癌症疫苗结合使用时，可导致更有效的免疫反应，从而延迟或阻止癌细胞的生长；引起肿瘤缩小；防止癌症复发；或消除尚未被其他治疗形式杀死的癌细胞。

DNA破坏剂包括可引起细胞DNA损伤或抑制细胞内源性DNA损伤修复的外源性试剂。在一些实施方式中，DNA破坏剂可以增加抗原呈递并促进对癌细胞的免疫反应。在一些实施方式中，DNA破坏剂可包括化学疗法和/或放射疗法。在一些实施方式中，DNA破坏剂可包括烷基化剂(例如，环磷酰胺和异环磷酰胺)、基于铂的化合物(例如，顺铂、卡铂和奥沙利铂)、抗代谢物(例如，吉西他滨、甲氨蝶呤和培美曲塞)、蒽环类药物(例如阿霉素和表柔比星)、拓扑异构酶I抑制剂(例如依托泊苷)、拓扑异构酶II抑制剂(例如伊立替康和托泊替康)、放射模拟物(例如博来霉素)和其他抗有丝分裂剂(例如多西他赛、紫杉醇和长春瑞滨)。本文所述的DNA损伤剂可在癌细胞中产生新的外源表位，免疫系统可识别该新的外源表位并针对其建立免疫反应，从而用作疫苗并导致抗癌免疫反应。微管蛋白结合剂(例如普那布林)与癌症疫苗(例如DNA破坏剂)结合使用时，可导致增强的抗肿瘤免疫反应和更有效地杀死癌细胞。

在某些实施例中，癌症疫苗可以由患者自己的肿瘤细胞制成(也就是说，可以对其进行定制，以便针对特定患者肿瘤独特的特征产生免疫反应)。在一些实施方式中，癌症疫苗可以由某些类型的肿瘤产生的物质(抗原或免疫原)制成(即，它们在肿瘤产生所述抗原或免疫原的任何患者中产生免疫反应)。

在一些实施方式中，癌症疫苗包含基本上被加载到树突状细胞(DC)、抗原呈递细胞(APC)或B细胞中的癌症抗原或癌症免疫原。FDA最初批准癌症治疗的疫苗西普赛尔(sipuleucel-T)的是通过从患者的血液中分离出一种称为树突状细胞，其为抗原呈递细胞(APC)的免疫系统细胞而创建的。这些细胞被送到疫苗生产商，在那里与称为PAP-GM-CSF的蛋白质一起在实验室中培养。该蛋白由与称为粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的蛋白连接的PAP组成，该蛋白刺激免疫系统并增强抗原呈递。

已使用几种策略为树突状细胞(DC)、抗原呈递细胞(APC)或B细胞加载癌抗原：1)可以将合成肽或纯化的蛋白质脉冲到DC、APC或B细胞表面。2)可以用质粒DNA、RNA或病毒对DC、APC或B细胞进行改造，以表达特定的基因产物。3)可以将肿瘤裂解液、肿瘤RNA、肿瘤细胞裂解液和自噬体与APC或未成熟的DC或B细胞混合，使APC或DC可以处理并呈递多种肽。4)DC、APC或B细胞可以通过PEG或电穿孔与整个肿瘤细胞融合。

在一些实施方式中，癌症疫苗是基于APC的疫苗。在一些实施方式中，癌症疫苗是基于DC的疫苗。在一些实施方式中，癌症疫苗是基于B细胞的疫苗。在一些实施方式中，癌症疫苗不包含检查点抑制剂。

癌症疫苗的一些示例包括但不限于西普赛尔(sipuleucel-T)、曲妥珠单抗、利妥昔单抗、奥法单抗、阿仑单抗、抗体-药物偶联物(ADC)例如阿杜曲妥珠单抗、本妥昔单抗；布莱那妥单抗、丹尼洛丁(denileukin diftitox)或塔利拉维(talimogene laherparepvec)。

在一个实施方式中，癌症疫苗可包含一种“自身”抗原，该抗原是肿瘤相关抗原。

在一些实施方式中，在没有佐剂的情况下施用癌症疫苗和微管蛋白结合剂(例如，普那布林)以诱导、增强或促进体液反应。在一些实施方式中，将癌症疫苗和和微管蛋白结合剂(例如，普那布林)与佐剂一起施用以诱导、增强或促进体液反应。

适用于本发明的疫苗和方法的抗原或免疫原可以从任何来源获得。例如，用于配制本发明疫苗的传染原可以从商业来源获得，包括但不限于美国典型培养物保藏中心(ATCC)。在一些实施方式中，在与双膦酸盐和药学上可接受的载体组合之前，使传染原在细胞培养物和/或动物中通过。在其他实施方式中，合适抗原或免疫原为未纯化(或细胞裂解物)、部分纯化(例如，细胞裂解物已被除去)或纯化的。在其他实施方式中，合适的抗原是重组制备的。

在一个实施方式中，合适的抗原或免疫原存在于可商购获得的疫苗(例如，包含明矾的可商购获得的疫苗)中。在一个实施方式中，用于本文所述的组合物和方法中的市售疫苗已经由管理机构批准，例如美国食品和药物管理局、欧洲药品管理局(EMA)、日本厚生省(MHW)、澳大利亚治疗用品管理局、国家食品药品监督管理局(SFDA)(中国)和加拿大卫生保护局。

适用于本文所述的组合物和方法的商业上合适的疫苗包括，例如，适合于人和兽医施用的疫苗。

用于本发明疫苗和方法的市售疫苗的例子包括但不限于下表A中列出的那些。

表A.商业可得疫苗的非限制性示例

适用于本发明的疫苗和方法的其他市售疫苗可在例如www.fda.gov/BiologicsBloodVaccines/default.htm上找到。

在一些实施方式中，微管蛋白结合剂起先天或体液免疫的增强作用。在一些实施方式中，普那布林起先天或体液免疫的增强作用。

在一些实施方式中，本文所述的组合物包含药学上可接受的赋形剂。

在一些实施方式中，该组合物肠胃外施用。在一些实施方式中，将组合物皮下、肌内、静脉内或鼻内施用。

在一些实施方式中，组合物为液体或固体形式。

在一些实施方式中，其中，所述受试者是人。在一些实施方式中，其中，所述所述受试者是动物。在一些实施方式中，其中，所述受试者是哺乳动物。

微管蛋白结合剂(TBA)

在一些实施方式中，微管蛋白结合剂选自下组：长春花生物碱(例如长春碱(VBL)、长春瑞滨(VRL)、长春新碱(VCR)和长春地辛(VDS))、隐藻素、海兔毒素(dolastatin)、紫杉烷类(例如多西他赛、卡巴他赛和紫杉醇)、埃博霉素、圆皮海绵内酯(discodermolides)、环链霉素(cyclostreptin)、莱利霉素(laulimalides)、根薯酮内酯(taccalonolide)、匹洛西德(peloruside)、哈米特林(hemiasterlin)、考布他汀(例如康维他汀A-4(CA-4))、秋水仙碱和2-甲氧基雌二醇(2-ME)，以及它们的可药用衍生物、盐、溶剂化物、互变异构体或立体异构体，及其任何组合。在一些实施方式中，微管蛋白结合剂是普那布林。在一些实施方式中，微管蛋白结合剂选自下组：普那布林、秋水仙碱、康维他汀A-4、多西他赛、紫杉醇、长春碱和长春新碱。

在一些实施方式中，微管蛋白结合剂的量为有效刺激或增强受试者对疫苗的免疫反应。在一些实施方式中，普那布林的量为有效刺激或增强受试者对疫苗的免疫反应。

可以将上述疫苗和微管蛋白结合剂(例如，普那布林)配制成药物组合物。使用标准的药物制剂技术，例如在雷明顿的药物科学与实践(Remington’s The Science andPractice of Pharmacy)，第21版，Lippincott Williams&Wilkins(2005)中公开的那些技术，其全部内容通过引用并入本文。因此，一些实施方式包括药物组合物，其包含：(a)安全和治疗有效量的本文所述疫苗；(b)安全和治疗有效量的微管蛋白结合剂(例如，普那布林)；(c)药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或其组合。

术语“药学上可接受的载体”或“药学上可接受的赋形剂”包括任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。这种介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域众所周知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，否则考虑将其用于治疗组合物中。另外，可以包括各种佐剂，例如本领域常用的佐剂。在药物组合物中包括各种成分的考虑描述于例如Gilman等人，(Eds.)(1990)；古德曼和吉尔曼的：《治疗学的药理基础》(Goodman and Gilman’s:The Pharmacological Basis of Therapeutics)，第8版，佩加蒙出版社(Pergamon Press)，通过引用将其全部内容并入本文。

可以用作药学上可接受的载体或成分的物质的一些例子有糖，例如乳糖、右旋糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；黄蓍胶粉；明胶；滑石；固体润滑剂，例如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，例如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，例如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，例如TWEENS；润湿剂，如十二烷基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂，稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐水；和磷酸盐缓冲液。

与主题化合物结合使用的药学上可接受的载体的选择基本上取决于化合物的给药方式。

给药

本文所述的组合物优选以单位剂型提供。如本文所用，“单位剂型”是根据良好医学实践，包含一定量化合物的组合物，所述化合物适合以单剂量向动物、优选哺乳动物受试者给药。但是，单剂或单位剂型的制备并不意味着该剂型每天给药一次或每个疗程一次。预期此类剂型每天一次、两次、三次或更多次施用，并且可以在一段时间(例如约30分钟至约2-6小时)内输注施用，或连续输注施用，尽管未明确排除单次给药，但在治疗过程中可能会多次给药。本领域技术人员将认识到，所述制剂并未具体地考虑整个治疗过程，并且这种决定留给治疗领域的技术人员而不是制剂。

上述组合物可以采用多种适合形式中的任何一种，用于多种给药途径，例如口服、鼻腔、直肠、局部(包括经皮)、眼、脑内、颅内、鞘内、动脉、静脉、肌内或其他肠胃外给药途径。本领域技术人员将理解，口服和鼻用组合物包括通过吸入施用的组合物，并使用可用的方法制备。根据所需的特定给药途径，可以使用本领域众所周知的多种药学上可接受的载体。药学上可接受的载体包括例如固体或液体填充剂、稀释剂、助水溶剂、表面活性剂和包囊物质。可以包括任选的药物活性材料，其基本上不干扰化合物的抑制活性。与该化合物结合使用的载体的量足以提供施用每单位剂量化合物所需实际量的材料。在以下参考文献中描述了在本文描述的方法中制备剂型的技术和组合物，这些文献均通过引用并入本文：《现代药学》(Modern Pharmaceutics)，第4版，第9和10章(Banker&Rhodes，编辑，2002年)；Lieberman等人，药物剂型：片剂(Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets)(1989)；和Ansel，药物剂型简介(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms)第8版(2004年)。

可以使用各种口服剂型，包括固体形式，如片剂、胶囊剂、颗粒剂和散装粉剂。片剂可以为压片、磨粉、肠溶、糖衣、薄膜衣或多次压片，其中含有合适的粘合剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、着色剂、矫味剂、流动诱导剂和熔融剂。液体口服剂型包括水溶液、乳液、悬浮液、溶液和/或由非泡腾颗粒重构的悬浮液，以及由泡腾颗粒重构的泡腾制剂，其包含合适的溶剂、防腐剂、乳化剂、悬浮剂、稀释剂、甜味剂、熔融剂、着色剂和调味剂。

适用于制备口服给药的单位剂型的药学上可接受的载体是本领域众所周知的。片剂通常包含常规的药学上相容的佐剂作为惰性稀释剂，例如碳酸钙、碳酸钠、甘露醇、乳糖和纤维素；粘合剂，例如淀粉、明胶和蔗糖；崩解剂，例如淀粉、藻酸和交联羧甲基纤维素；润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石粉。助流剂如二氧化硅可用于改善粉末混合物的流动特性。可以添加诸如FD&C染料之类的着色剂以改善外观。甜味剂和调味剂，例如阿斯巴甜、糖精、薄荷醇、薄荷和水果香料，是可咀嚼片剂的有用佐剂。胶囊通常包含一种或多种以上公开的固体稀释剂。载体组分的选择取决于次要因素，例如味道、成本和贮存稳定性，这些因素不是关键的，并且本领域技术人员可以容易地进行。

口服的组合物还包括液体溶液、乳液、悬浮液等。适用于制备此类组合物的药学上可接受的载体是本领域众所周知的。用于糖浆、酏剂、乳剂和悬浮液的载体的典型成分包括乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、液体蔗糖、山梨糖醇和水。对于悬浮液，典型的悬浮剂包括甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、AVICEL RC-591、黄蓍胶和海藻酸钠；典型的润湿剂包括卵磷脂和聚山梨酯80；典型的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯和苯甲酸钠。口服液体组合物还可包含一种或多种组分，例如以上公开的甜味剂、调味剂和着色剂。

此类组合物也可以通过常规方法进行包衣，通常使用pH或时间依赖性包衣层进行包衣，以使主题化合物在所需局部应用附近的胃肠道中释放，或在不同时间释放以延长所需作用。这种剂型通常包括但不限于：乙酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸聚乙酸乙烯酯、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、乙基纤维素、丙烯酸树脂(Eudragit)包衣、蜡和虫胶中的一种或多种。

本文所述的组合物可任选包含其他药物活性成分。

其他用于全身递送主题化合物的组合物包括舌下、口腔和鼻腔剂型。这样的组合物通常包含一种或多种可溶性填充物质，例如蔗糖、山梨糖醇和甘露糖醇；粘合剂，例如阿拉伯胶、微晶纤维素、羧甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素。也可以包括上面公开的助流剂、润滑剂、甜味剂、着色剂、抗氧化剂和调味剂。

可以在本文公开的药物组合物中使用的防腐剂包括但不限于：苯扎氯铵、PHMB、氯丁醇、硫柳汞、苯汞、乙酸盐和苯汞硝酸盐。有用的表面活性剂是例如吐温80。同样地，各种有用的溶媒可以用于本文公开的眼科制剂中。这些载体包括但不限于：聚乙烯醇、聚维酮、羟丙基甲基纤维素、泊洛沙姆、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素和纯净水。

可以根据需要或方便地添加张度(tonicity)调节剂。它们包括但不限于：盐(特别是氯化钠、氯化钾)、甘露醇和甘油，或任何其他合适的眼科可接受的张度调节剂。

可以使用各种缓冲液和调节pH的方法，只要所得制剂在眼科上是可接受的。对于许多组合物，pH值将在4到9之间。因此，缓冲剂包括乙酸盐缓冲剂、柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂和硼酸盐缓冲剂。根据需要，可以使用酸或碱来调节这些制剂的pH。

眼药水可能包含的其他赋形剂成分是螯合剂。有用的螯合剂是乙二胺四乙酸二钠，尽管其他螯合剂也可以代替或与其结合使用。

对于静脉内给药，可以将本文所述的组合物溶解或分散在药学上可接受的稀释剂中，例如盐水或右旋糖溶液。可包括合适的赋形剂以达到所需的pH，包括但不限于：NaOH、碳酸钠、乙酸钠、HCl和柠檬酸。在各种实施方式中，最终组合物的pH为2至8，或优选为4至7。抗氧化剂赋形剂可包括亚硫酸氢钠、丙酮亚硫酸氢钠、甲醛钠、亚硫酸盐、硫脲和EDTA。在最终的静脉内组合物中发现的合适的赋形剂的其他非限制性实例可以包括磷酸钠或磷酸钾、柠檬酸、酒石酸、明胶和碳水化合物，例如右旋糖、甘露醇和右旋糖酐。其他可接受的赋形剂在Powell等人，肠胃外制剂赋形剂简编，PDA药学科学与技术杂志(Compendium ofExcipients for Parenteral Formulations,PDA J Pharm Sci and Tech),1998，52238-311和Nema等人，赋形剂及其在批准的注射用产品中的作用：当前用法和未来方向(Excipients and Their Role in Approved Injectable Products:Current Usage andFuture Directions)，PDA药学科学与技术杂志，2011，65 287-332中进行了描述，二者均通过引用整体并入本文。还可以包括抗菌剂以获得抑菌或抑菌溶液，包括但不限于：硝酸苯汞、硫柳汞、苄索氯铵、苯扎氯铵、苯酚、甲酚和氯丁醇。

静脉内给药的组合物可以以一种或多种固体的形式提供给护理人员，在给药前不久，用合适的稀释剂(如无菌水、盐水或右旋糖)将其复原。在其他实施方式中，组合物以易于肠胃外给药的溶液形式提供。在其他实施方式中，组合物以溶液形式提供，该溶液在给药前进一步稀释。在包括施用本文所述的化合物和另一种药剂的组合的实施方式中，可以将混合物作为组合物提供给看护者，或者看护者可以在施用之前将两种药剂混合，或者可以将两种药剂分开施用。

在一些实施方式中，普那布林以身体表面积的约0.01-50mg/m²的剂量施用。在一些实施方式中，普那布林以身体表面积的约0.01-0.1、0.01-0.2、0.01-0.3、0.01-0.4、0.01-0.5、0.01-0.6、0.01-0.7、0.01-0.8、0.01-0.9、0.01-1、0.01-2、0.01-3、0.01-4、0.01-5、0.01-6、0.01-7、0.01-8、0.01-9、0.01-10、0.01-11、0.01-12、0.01-13、0.01-13.75、0.01-14、0.01-15、0.01-16、0.01-17、0.01-18、0.01-19、0.01-20、0.01-22.5、0.01-25、0.01-27.5、0.01-30、0.1-0.5、0.1-0.6、0.1-0.7、0.1-0.8、0.1-0.9、0.1-1、0.1-2、0.1-3、0.1-4、0.1-5、0.1-6、0.1-7、0.1-8、0.1-9、0.1-10、0.1-11、0.1-12、0.1-13、0.1-13.75、0.1-14、0.1-15、0.1-16、0.1-17、0.1-18、0.1-19、0.1-20、0.1-22.5、0.1-25、0.1-27.5、0.1-30、0.1-40、0.1-50、0.25-0.5、0.25-0.6、0.25-0.7、0.25-0.8、0.25-0.9、0.25-1、0.25-2、0.25-3、0.25-4、0.25-5、0.25-6、0.25-7、0.25-8、0.25-9、0.25-10、0.25-11、0.25-12、0.25-13、0.25-13.75、0.25-14、0.25-15、0.25-16、0.25-17、0.25-18、0.25-19、0.25-20、0.25-22.5、0.25-25、0.25-27.5、0.25-30、0.25-40、0.25-50、0.5-1、0.5-2、0.5-3、0.5-4、0.5-5、0.5-6、0.5-7、0.5-8、0.5-9、0.5-10、0.5-11、0.5-12、0.5-13、0.5-13.75、0.5-14、0.5-15、0.5-16、0.5-17、0.5-18、0.5-19、0.5-20、0.5-22.5、0.5-25、0.5-27.5、0.5-30、0.5-40、0.5-50、1.5-2、1.5-3、1.5-4、1.5-5、1.5-6、1.5-7、1.5-8、1.5-9、1.5-10、1.5-11、1.5-12、1.5-13、1.5-13.75、1.5-14、1.5-15、1.5-16、1.5-17、1.5-18、1.5-19、1.5-20、1.5-22.5、1.5-25、1.5-27.5、1.5-30、1.5-40、1.5-40、1-2、1-3、1-4、1-5、1-6、1-7、1-8、1-9、1-10、1-11、1-12、1-13、1-13.75、1-14、1-15、1-16、1-17、1-18、1-19、1-20、1-22.5、1-25、1-27.5、1-30、1-40、1-50、2.5-2、2.5-3、2.5-4、2.5-5、2.5-6、2.5-7、2.5-8、2.5-9、2.5-10、2.5-11、2.5-12、2.5-13、2.5-13.75、2.5-14、2.5-15、2.5-16、2.5-17、2.5-18、2.5-19、2.5-20、2.5-22.5、2.5-25、2.5-27.5、2.5-30、2.5-7.5、3-4、3-5、3-6、3-7、3-8、3-9、3-10、3-11、3-12、3-13、3-13.75、3-14、3-15、3-16、3-17、3-18、3-19、3-20、3-22.5、3-25、3-27.5、3-30、3.5-6.5、3.5-13.75、3.5-15、2.5-17.5、4-5、4-6、4-7、4-8、4-9、4-10、4-11、4-12、4-13、4-13.75、4-14、4-15、4-16、4-17、4-18、4-19、4-20、4-22.5、4-25、4-27.5、4-30、5-6、5-7、5-8、5-9、5-10、5-11、5-12、5-13、5-13.75、5-14、5-15、5-16、5-17、5-18、5-19、5-20、5-22.5、5-25、5-27.5、5-30、6-7、6-8、6-9、6-10、6-11、6-12、6-13、6-13.75、6-14、6-15、6-16、6-17、6-18、6-19、6-20、6-22.5、6-25、6-27.5、6-30、7-8、7-9、7-10、7-11、7-12、7-13、7-13.75、7-14、7-15、7-16、7-17、7-18、7-19、7-20、7-22.5、7-25、7-27.5、7-30、7.5-12.5、7.5-13.5、7.5-15、8-9、8-10、8-11、8-12、8-13、8-13.75、8-14、8-15、8-16、8-17、8-18、8-19、8-20、8-22.5、8-25、8-27.5、8-30、9-10、9-11、9-12、9-13、9-13.75、9-14、9-15、9-16、9-17、9-18、9-19、9-20、9-22.5、9-25、9-27.5、9-30、10-11、10-12、10-13、10-13.75、10-14、10-15、10-16、10-17、10-18、10-19、10-20、10-22.5、10-25、10-27.5、10-30、11.5-15.5、12.5-14.5、7.5-22.5、8.5-32.5、9.5-15.5、15.5-24.5、5-35、17.5-22.5、22.5-32.5、25-35、25.5-24.5、27.5-32.5、2-20、t 2.5-22.5、或9.5-21.5mg/m²的范围内的剂量施用。在一些实施方式中，普那布林以身体表面积的约0.01、0.02、0.03、0.05、0.07、0.1、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40mg/m²的剂量施用。在一些实施方式中，普那布林以低于身体表面积的约0.01、0.02、0.03、0.05、0.07、0.1、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40mg/m²的剂量施用。在一些实施方式中，普那布林以大于身体表面积的约0.01、0.02、0.03、0.05、0.07、0.1、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9、9.5、10、10.5、11、11.5、12、12.5、13、13.5、14、14.5、15、15.5、16、16.5、17、17.5、18、18.5、19、19.5、20、20.5、21、21.5、22、22.5、23、23.5、24、24.5、25、25.5、26、26.5、27、27.5、28、28.5、29、29.5、30、30.5、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50mg/m²的剂量施用。

在一些实施方式中，普那布林以约0.1mg-10mg、0.1mg-25mg、0.1mg-30mg、0.1mg-50mg、0.1mg-75mg、0.1mg-100mg、0.5mg-10mg、0.5mg-25mg、0.5mg-30mg、0.5mg-50mg、0.5mg-75mg、0.5mg-100mg、1mg-10mg、1mg-25mg、1mg-30mg、1mg-50mg、1mg-75mg、1mg-100mg、2mg-10mg、2mg-25mg、2mg-30mg、2mg-50mg、2mg-75mg、2mg-100mg、3mg-10mg、3mg-25mg、3mg-30mg、3mg-50mg、3mg-75mg、3mg-100mg、4mg-100mg、5mg-10mg、5mg-25mg、5mg-30mg、5mg-50mg、5mg-75mg、5mg-300mg、5mg-200mg、7.5mg-15mg、7.5mg-25mg、7.5mg-30mg、7.5mg-50mg、7.5mg-75mg、7.5mg-100mg、7.5mg-200mg、10mg-20mg、10mg-25mg、10mg-50mg、10mg-75mg、10mg-100mg、15mg-30mg、15mg-50mg、15mg-100mg、20mg-20mg、20mg-100mg、30mg-100mg、40mg-100mg、10mg-80mg、15mg-80mg、20mg-80mg、30mg-80mg、40mg-80mg、10mg-60mg、15mg-60mg、20mg-60mg、30mg-60mg、或约40mg-60mg的剂量施用。在一些实施方式中，普那布林以约20mg-60mg、27mg-60mg、20mg-45mg、或27mg-45mg施用。在一些实施方式中，普那布林以约1mg-5mg、1mg-7.5mg、2.5mg-5mg、2.5mg-7.5mg、5mg-7.5mg、5mg-9mg、5mg-10mg、5mg-12mg、5mg-14mg、5mg-15mg、5mg-16mg、5mg-18mg、5mg-20mg、5mg-22mg、5mg-24mg、5mg-26mg、5mg-28mg、5mg-30mg、5mg-32mg、5mg-34mg、5mg-36mg、5mg-38mg、5mg-40mg、5mg-42mg、5mg-44mg、5mg-46mg、5mg-48mg、5mg-50mg、5mg-52mg、5mg-54mg、5mg-56mg、5mg-58mg、5mg-60mg、7mg-7.7mg、7mg-9mg、7mg-10mg、7mg-12mg、7mg-14mg、7mg-15mg、7mg-16mg、7mg-18mg、7mg-20mg、7mg-22mg、7mg-24mg、7mg-26mg、7mg-28mg、7mg-30mg、7mg-32mg、7mg-34mg、7mg-36mg、7mg-38mg、7mg-40mg、7mg-42mg、7mg-44mg、7mg-46mg、7mg-48mg、7mg-50mg、7mg-52mg、7mg-54mg、7mg-56mg、7mg-58mg、7mg-60mg、9mg-10mg、9mg-12mg、9mg-14mg、9mg-15mg、9mg-16mg、9mg-18mg、9mg-20mg、9mg-22mg、9mg-24mg、9mg-26mg、9mg-28mg、9mg-30mg、9mg-32mg、9mg-34mg、9mg-36mg、9mg-38mg、9mg-40mg、9mg-42mg、9mg-44mg、9mg-46mg、9mg-48mg、9mg-50mg、9mg-52mg、9mg-54mg、9mg-56mg、9mg-58mg、9mg-60mg、10mg-12mg、10mg-14mg、10mg-15mg、10mg-16mg、10mg-18mg、10mg-20mg、10mg-22mg、10mg-24mg、10mg-26mg、10mg-28mg、10mg-30mg、10mg-32mg、10mg-34mg、10mg-36mg、10mg-38mg、10mg-40mg、10mg-42mg、10mg-44mg、10mg-46mg、10mg-48mg、10mg-50mg、10mg-52mg、10mg-54mg、10mg-56mg、10mg-58mg、10mg-60mg、12mg-14mg、12mg-15mg、12mg-16mg、12mg-18mg、12mg-20mg、12mg-22mg、12mg-24mg、12mg-26mg、12mg-28mg、12mg-30mg、12mg-32mg、12mg-34mg、12mg-36mg、12mg-38mg、12mg-40mg、12mg-42mg、12mg-44mg、12mg-46mg、12mg-48mg、12mg-50mg、12mg-52mg、12mg-54mg、12mg-56mg、12mg-58mg、12mg-60mg、15mg-16mg、15mg-18mg、15mg-20mg、15mg-22mg、15mg-24mg、15mg-26mg、15mg-28mg、15mg-30mg、15mg-32mg、15mg-34mg、15mg-36mg、15mg-38mg、15mg-40mg、15mg-42mg、15mg-44mg、15mg-46mg、15mg-48mg、15mg-50mg、15mg-52mg、15mg-54mg、15mg-56mg、15mg-58mg、15mg-60mg、17mg-18mg、17mg-20mg、17mg-22mg、17mg-24mg、17mg-26mg、17mg-28mg、17mg-30mg、17mg-32mg、17mg-34mg、17mg-36mg、17mg-38mg、17mg-40mg、17mg-42mg、17mg-44mg、17mg-46mg、17mg-48mg、17mg-50mg、17mg-52mg、17mg-54mg、17mg-56mg、17mg-58mg、17mg-60mg、20mg-22mg、20mg-24mg、20mg-26mg、20mg-28mg、20mg-30mg、20mg-32mg、20mg-34mg、20mg-36mg、20mg-38mg、20mg-40mg、20mg-42mg、20mg-44mg、20mg-46mg、20mg-48mg、20mg-50mg、20mg-52mg、20mg-54mg、20mg-56mg、20mg-58mg、20mg-60mg、22mg-24mg、22mg-26mg、22mg-28mg、22mg-30mg、22mg-32mg、22mg-34mg、22mg-36mg、22mg-38mg、22mg-40mg、22mg-42mg、22mg-44mg、22mg-46mg、22mg-48mg、22mg-50mg、22mg-52mg、22mg-54mg、22mg-56mg、22mg-58mg、22mg-60mg、25mg-26mg、25mg-28mg、25mg-30mg、25mg-32mg、25mg-34mg、25mg-36mg、25mg-38mg、25mg-40mg、25mg-42mg、25mg-44mg、25mg-46mg、25mg-48mg、25mg-50mg、25mg-52mg、25mg-54mg、25mg-56mg、25mg-58mg、25mg-60mg、27mg-28mg、27mg-30mg、27mg-32mg、27mg-34mg、27mg-36mg、27mg-38mg、27mg-40mg、27mg-42mg、27mg-44mg、27mg-46mg、27mg-48mg、27mg-50mg、27mg-52mg、27mg-54mg、27mg-56mg、27mg-58mg、27mg-60mg、30mg-32mg、30mg-34mg、30mg-36mg、30mg-38mg、30mg-40mg、30mg-42mg、30mg-44mg、30mg-46mg、30mg-48mg、30mg-50mg、30mg-52mg、30mg-54mg、30mg-56mg、30mg-58mg、30mg-60mg、33mg-34mg、33mg-36mg、33mg-38mg、33mg-40mg、33mg-42mg、33mg-44mg、33mg-46mg、33mg-48mg、33mg-50mg、33mg-52mg、33mg-54mg、33mg-56mg、33mg-58mg、33mg-60mg、36mg-38mg、36mg-40mg、36mg-42mg、36mg-44mg、36mg-46mg、36mg-48mg、36mg-50mg、36mg-52mg、36mg-54mg、36mg-56mg、36mg-58mg、36mg-60mg、40mg-42mg、40mg-44mg、40mg-46mg、40mg-48mg、40mg-50mg、40mg-52mg、40mg-54mg、40mg-56mg、40mg-58mg、40mg-60mg、43mg-46mg、43mg-48mg、43mg-50mg、43mg-52mg、43mg-54mg、43mg-56mg、43mg-58mg、42mg-60mg、45mg-48mg、45mg-50mg、45mg-52mg、45mg-54mg、45mg-56mg、45mg-58mg、45mg-60mg、48mg-50mg、48mg-52mg、48mg-54mg、48mg-56mg、48mg-58mg、48mg-60mg、50mg-52mg、50mg-54mg、50mg-56mg、50mg-58mg、50mg-60mg、52mg-54mg、52mg-56mg、52mg-58mg、或52mg-60mg施用。在一些实施方式中，普那布林以大于约0.1mg、0.3mg、0.5mg、0.75mg、1mg、1.25mg、1.5mg、1.75mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、5mg、约10mg、约12.5mg、约13.5mg、约15mg、约17.5mg、约20mg、约22.5mg、约25mg、约27mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约125mg、约150mg、或约200mg施用。在一些实施方式中，普那布林以小于约0.5mg、0.75mg、1mg、1.25mg、1.5mg、1.75mg、2mg、2.5mg、3mg、3.5mg、4mg、5mg、约10mg、约12.5mg、约13.5mg、约15mg、约17.5mg、约20mg、约22.5mg、约25mg、约27mg、约30mg、约40mg、约50mg、约60mg、约70mg、约80mg、约90mg、约100mg、约125mg、约150mg、或约200mg施用。

此处公开的组合物的给药可以通过具有类似效用的药物的任何可接受的给药方式，包括但不限于口服、皮下、静脉内、鼻内、局部、透皮、腹膜内、肌内、肺内、阴道、直肠或眼内。口服和肠胃外给药习惯于作为治疗适应症的受试者的优选实施方式。

治疗方法

一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括向受试者施用疫苗和微管蛋白结合剂。一些实施方式涉及一种治疗方法，该方法包括向受试者施用疫苗和普那布林。

在一些实施方式中，疫苗是感染性疾病疫苗。在一些实施方式中，疫苗是癌症疫苗。

一些实施方式涉及在受试者中增强对疫苗的免疫反应的方法，所述方法包括向受试者施用疫苗和微管蛋白剂(例如，普那布林)，与通过单独给受试者施用疫苗产生的免疫反应相比，对疫苗的免疫反应增强。

一些实施方式涉及诱导淋巴细胞增殖的方法，包括向有此需要的受试者施用有效量的微管蛋白剂(例如，普那布林)和疫苗。

一些实施方式涉及诱导B细胞增殖的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的微管蛋白剂(例如，普那布林)和疫苗。

一些实施方式涉及诱导产生免疫球蛋白的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的微管蛋白剂(例如，普那布林)和疫苗。在一些实施方式中，免疫球蛋白选自下组：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。

一些实施方式涉及在癌症治疗中增强免疫反应的方法，其包括向受试者施用癌症疫苗和微管蛋白剂(例如，普那布林)，其中与通过仅向受试者施用疫苗而产生免疫反应相比，对癌症疫苗的免疫反应得到增强。

疫苗和微管蛋白剂(例如，普那布林)可以单独施用(例如，疫苗可以在将普那布林施用给受试者之前或之后施用)，也可以是单一制剂(例如，疫苗可以与普那布林同时施用)。在一些实施方式中，本文描述的方法包括同时施用微管蛋白剂(例如，普那布林)和疫苗。在一些实施方式中，本文描述的方法包括在施用疫苗之前或之后施用微管蛋白剂(例如，普那布林)。

一些实施方式涉及增强免疫反应的方法，该方法包括给受试者施用疫苗和在施用疫苗后向受试者施用微管蛋白结合剂。在一些实施方式中，微管蛋白结合剂可以是普那布林。在一些实施方式中，微管蛋白结合剂可以选自下组：长春花生物碱、隐藻霉素、海兔毒素、紫杉烷类、埃博霉素、圆皮海绵内酯、环链霉素、莱利霉素、根薯酮内酯、匹洛西德、哈米特林、康普瑞汀、秋水仙碱和2-甲氧基雌二醇。

在一些实施方式中，微管蛋白结合剂(例如普那布林)在接种疫苗后至少30min、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、15h、18h、20h、24h、36h、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天给药。在一些实施方式中，接种疫苗后不迟于1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、12天、15天或20天施用微管蛋白剂(例如，普那布林)。在一些实施方式中，微管蛋白剂(例如普那布林)在接种疫苗后1h-1天、1h-2天、1h-3天、1h-4天、1h--5天、1h-6天、1h-7天、1h-8天、1h-9天、1h-10天、1天-2天、1天-3天、1天-4天、1天-5天、1天-6天、1天-7天、1天-8天、1天-9天、1天-10天、2天–3天、2天-4天、2天-5天、2天-6天、2天-7天、2天-8天、2天-9天、2天-10天、3天-4天、3天-5天、3天-6天、3天-7天、3天-8天、3天-9天、3天-10天、4天-5天、4天-6天、4天-7天、4天-8天、4天-9天、4天-10天、5天-6天、5天-8天、5天-10天给药。

一些实施方式涉及制备本文所述的组合物的方法，其包括将微管蛋白剂(例如，普那布林)与疫苗组合。

实施例

实施例1.

普那布林增强BCG治疗中的B细胞活化

进行研究以评估在膀胱内BCG(卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin))治疗高级别非肌肉浸润性膀胱尿路上皮癌的诱导期中使用普那布林，以增加植入膀胱中的BCG剂量的情况。普那布林促进BCG抗原呈递至具有免疫能力的细胞，因此增强了BCG的免疫治疗潜力。已表明，施用BCG可以诱导活化的B淋巴细胞产生抗BCG抗体(IgM和IgG)。施用普那布林后，发生的BCG特异性B淋巴细胞活化增加。服用普那布林可能会改善BCG的疗效，如果需要，可以增加BCG的剂量，同时促进更好的治疗反应。

I/II期的普那布林联合双剂量卡介苗(BCG)诱导疗法治疗高级别非肌肉侵袭性膀胱尿路上皮癌：已进行安全性和非劣效性研究。

I期研究的主要目的是确定患有高级别膀胱移行细胞癌的患者中普那布林联合双剂量BCG的最大耐受剂量。第II期研究的主要目的是通过在3个月内达到至少50％的缓解率(无可视化肿瘤及细胞学阴性)来证明最大耐受剂量的普那布林与双剂量卡介苗联用的非劣效性。

一些次要目标包括：在适当的随访时间间隔(RFS和PFS为1年)评估治疗效果，评估受试者的生活质量、膀胱刺激性和疼痛性变化以及在治疗期间及随后的1年的总体健康状况。

的一些相关/探索性目标包括确定在使用BCG滴注和普林布林静脉输注的治疗期内抗-BCG IgM和IgG水平发作的时间过程以及幅度和发作时间，并在BCG滴注和普那布林静脉输注治疗后探讨尿液细胞因子(INF-g、IL-1、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12p70和TNF-a)的产生。

这是一项开放标签的I/II期研究，其中包括剂量升高部分(I期)和1臂疗效研究(II期)，用于治疗高级别非肌肉浸润性膀胱尿路上皮癌。

I期：最大耐受的普那布林剂量(MTD)测定。符合条件的患者接受静脉内注射普那布林5mg/m²到30mg/m²的四个递增剂量组中的一个剂量，并联合滴注双剂量BCG。这个阶段确定普那布林和BCG辅助治疗的毒性和MTD。每个群组中至少有3名患者入选，以5mg/m²普那布林与双剂量BCG开始。在评估了最初研究用药后第21天的安全性数据后，在连续的患者群组中增加了普那布林的剂量。将MTD剂量确定为最高剂量群组，其中三名中的零名患者或六名中小于2名的患者有经历过剂量限制性毒性(DLT)。该MTD将成为II期试验的剂量，也称为II期的推荐剂量(RP2D)。

第II期：功效研究。从上述I期中选择的普那布林剂量转移至I I期。接受MTD剂量的I期患者被纳入II期。评估患者的肿瘤复发(主要疗效终点)，定义为在接受双剂量BCG和普那布林治疗6周后的3个月时，办公室膀胱镜检查显示肿瘤和尿液细胞学阳性。对于疗效评估，有两个评估，如果等于或小于11/18，或等于或小于26/36，患者显示有反应，则将终止试验，并且认为治疗活性不够。该研究的最低响应率目标是3个月时50％缓解率(诱导后治疗无可视化肿瘤和尿液细胞学检查阴性)，3个月时期望的响应率为70％。低于50％的响应率被认为是不可接受的。I/II期研究的总人数为54名或更少，具体取决于毒性和响应评估。

对于I期，I期的主要终点是AE/SAE的发生率和严重性以及由于AE导致的治疗中止。对于II期，主要终点是诱导治疗后3个月的RFS(无复发生存；即，无可视化肿瘤且尿液细胞学阴性)。

辅助端点包括：II期：1年时的RFS(无复发生存；即无可视化肿瘤和尿液细胞学阴性)；II期：1年时的PFS(无进展生存；即在未来的TUR上无肿瘤升级)；I和II期：使用美国泌尿外科协会症状指数(AUA IPSS)测量的生活质量变化[时间范围：从基线到开始治疗后6周以及3和12个月的变化]；I和II期：生活质量的变化[时间范围：从基线到开始治疗后的6周以及3和12个月的变化]，使用生活质量(QOL)调查表；I期和II期：使用O’Leary-Sant指数改变膀胱刺激性和疼痛[时间范围：从基线到开始治疗后的6周以及3和12个月]。I和II期：使用膀胱癌功能评估(FACT-BL)改变总体健康状况[时间范围：从基线到开始治疗后的6周以及3和12个月]。

相关/探索性端点包括：I和II期：随时间推移的抗BCG IgM和IgG水平(滴度)；I和II期：随时间推移的尿液细胞因子(INF-g、IL-1、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12p70、TNF-a)水平。

I期涉及最大耐受的普那布林剂量(MTD)测定研究。此阶段是剂量递增研究、以确定普那布林和BCG辅助治疗的毒性和MTD。

II期涉及建立疗效研究。从上述I期中选择的普那布林剂量转移至II期。来自I期接受最佳剂量的患者被纳入II期。评估患者的肿瘤复发(主要疗效终点)，定义为在接受双剂量BCG和普那布林治疗6周后的3个月时，办公室膀胱镜检查显示肿瘤和尿液细胞学阳性。

I期给药方案：给药方案遵循双剂量BCG诱导疗法的标准方案，即在初始TUR后的2周休息期(在此期间也可获得病理结果)之后，符合条件的患者开始6周疗程，每周一次双剂量的卡介苗加普那布林。然后，患者在首次膀胱内BCG治疗后3个月(或从最后一次双剂量BCG+普那布林治疗开始6周)返回以评估肿瘤复发(通过膀胱镜检查和尿液细胞学检查)。

表1.剂量递增时间表

表2.剂量递增决策规则

E＝升级到下一个剂量水平，S＝保持在当前剂量水平，D＝降级到较低1个的剂量水平，U＝降级到较低1个的剂量水平，但不返回当前剂量水平，按计划加入I期研究，将对安全性数据进行全面评估。将确定2期的推荐剂量(RP2D)，并启动2期部分。

I期剂量递增：I期可以有3个群组，共3至6个受试者，剂量从群组1开始，剂量为5mg/m²普那布林+双剂量BCG。如果3名患者中有1名出现剂量限制性毒性(副作用等级>2)，则再增加3名受试者。如果3名患者中的0名或<2/6名患者在第1组中出现剂量限制性毒性(等级>2)，则在下一个群组(第2组)中增加剂量。将MTD剂量确定为具有0/3或<2/6毒性的最高剂量群组。最低剂量的普那布林(5mg/m2)只能使BCG降级一次。例如：如果毒性阻碍了将13.5mg/m²的普那布林与双剂量BCG的组合I期进展至下一水平，则将5mg/m²的普那布林与双剂量BCG的组合进行本研究的II期，而不是继续进行检查在该试验的I期另一阶段使用单剂量BCG和13.5mg/m²的普那布林。最多需要24名患者来完成I期部分研究。II期试验使用最佳剂量(MTD或更低)，并且将接受最佳剂量的患者纳入II期试验。

在每位患者首次接受普那布林和双剂量BCG给药后的21天内评估剂量限制性毒性(DLT)。任何可疑或已确认的DLT应立即(在24小时内)报告给主要研究者。DLT定义为以下与治疗有关的AE或实验室异常，根据NCI CTCAE 5.0版进行分级：与基础疾病无关的4级贫血；具有临床重大出血的3级血小板减少症或持续超过7天和/或需要输血的4级血小板减少症；持续超过7天的4级中性粒细胞减少症；≥3级非血液学不良事件，以下所列除外；尽管进行了最佳的预防和治疗，但仍持续>48小时的3级恶心、呕吐、腹泻或电解质失衡；≥3级超敏反应(除非首次发生，并在适当的临床管理下于6小时内解决)；从研究药物相关的不良事件恢复后，治疗延迟>21天。

给药：将计算得出的剂量(mg)的普那布林(小瓶中浓度为4mg/mL)稀释在5％的葡萄糖水溶液(D5W)中，并通过外围或中央在线过滤器静脉注射。稀释剂量在稀释后的4小时内使用。在任何时候(在稀释前、稀释中和稀释后的储存)中，都应保护普那布林免受光照。注射器：推荐使用大于10mL的无PVC防光琥珀色注射器，以将普那布林产品转移到D5W袋中。如果没有不含PVC的防光琥珀色注射器，请确保将其暴露在最少的光线下。从普那布林小瓶到带有琥珀色套筒的D5W袋的转移时间应保持最短，且不得超过1分钟。药学药物制备说明可在研究药学手册中找到。应根据基线BSA计算出普林布林剂量。如果随后BSA与基线之间的差异超过±10％，则应使用较新的BSA值来计算后续剂量。普那布林的剂量可以在一定范围内，例如0.1mg/m²至100mg/m²。

BCG治疗：卡介苗的治疗符合该场所的机构标准；卡介苗将通过尿道导管输送。

剂量选择：使用双剂量BCG的基本原理是基于多项研究，这些研究表明，在NMIBC患者中以更高剂量和/或更长时间使用时，BCG疗法具有更高的疗效。但是，较高的剂量受到伴随毒性的限制，因为随着剂量的增加，BCG的毒性也会增加。普那布林的使用，可以减轻与BCG治疗相关的炎症以及相关的副作用，因此可以允许更高剂量的BCG。

将两瓶BCG悬浮在50mL无防腐剂的盐水中作为本研究的剂量。使用无菌技术制备BCG悬浮液并根据FDA批准的标签和使用信息完成。

要求患者立即向其治疗的研究者报告任何发烧或流感样症状，以及任何因反复滴注而强度增加的全身表现，或持续超过3天的局部症状(尿频、尿急、有烧灼感伴排尿)。如果患者持续发烧或经历了与BCG感染相一致的急性发热性疾病，则可以停止BCG治疗，并立即对患者进行全身感染评估和治疗。

监测BCG的系统性传播：为了确保及早发现全身性BCG感染，将监测受试者的全身性感染症状。对于BCG治疗的每个周期，将在1-6周的第2-4天(治疗为第1天)打电话给受试者，以询问他们可能遇到的任何症状。此外，将为每个患者提供体温计和日记，并要求他们在整个BCG治疗期间(第1-6周)每天早上和晚上记录口腔温度，并记录他们可能遇到的任何其他症状。

给药时间：应该在6周周期的第1天开始进行BCG治疗。第2、3、4、5和6周每7天重复一次BCG治疗。由于给药原因，BCG治疗可能在预定日期之前或之后的1天(在第7天)使用。所有试验治疗均在门诊患者中并根据机构标准进行。

治疗方案：研究治疗以6周为周期进行，每周一次，一次膀胱内双剂量BCG和静脉注射普那布林。对于体表面积(BSA)大于2.4m²的患者，普那布林应使用的最大BSA为2.4m²计算剂量。BCG剂量如下：将2瓶每瓶含5×10^8CFU的TICE菌株悬浮于50cc生理盐水中，从而获得双剂量强度(通常的全剂量BCG是1瓶5×10^8的TICE菌株悬浮在50cc生理盐水中)。

实施例2.

普那布林增强B细胞对卵清蛋白免疫的反应

进行了研究，以评估普那布林对B细胞对免疫反应的增强作用。使用完全弗氏佐剂(CFA)和外源蛋白卵清蛋白(OVA)的乳剂制备样品，每个样品具有不同浓度的普那布林(普那布林剂量范围为0.01mg至30mg)，而对照组则不添加普那布林。通过皮下注射CFA+OVA乳剂+/-普那布林，和/或腹膜内注射ALUM+OVA佐剂+/-普那布林(每支普那布林剂量组n＝5只小鼠)对正常健康小鼠进行免疫。如下文在本实施例中讨论的，在不同的时间点，给动物放血以收集血清，以评估结合OVA的IgG在血清中的浓度。与未使用普那布林的CFA+OVA或ALUM+OVA(在明矾佐剂中乳化的OVA)免疫的小鼠相比，使用普那布林免疫的小鼠显示出更高的抗OVA IgG浓度，这表明普那布林可以增强B细胞对免疫的反应。

弗氏完全佐剂中卵清蛋白乳液的剂量制备：EndoFit^TM卵清蛋白试剂盒(美国InvivoGen)，在一个玻璃瓶中含有10mg粉末，在一个玻璃瓶中包含10mL无菌无内毒素的生理水，在一个玻璃瓶中含有10mL CFA，并保存在2-8℃直到第1天。使用前，使无菌无内毒素盐水溶液达到室温。在BSL2机柜内，将5mL无菌水添加到装有10mg OVA的小瓶中，并轻轻搅拌以获得2mg/mL均一的OVA溶液。向2.5mL的CFA中加入2.5mL的OVA溶液；然后通过剧烈混合到两个相连的10mL锁定注射器中将其乳化，制备出1mg/mL OVA/CFA乳液。通过将设备放置在碎冰中5分钟，使乳化液保持冷却，然后再重复混合并冷却两次。通过向其中加入一滴水来测试乳液的稳定性，以验证乳液不会消散。将乳液转移到五个1mL注射器中进行注射，并在碎冰上保持冷却直至免疫。在动物免疫期间，用另外的2.5mL OVA溶液和2.5mL CFA重复乳化过程，以在制备后的4小时内使用。

表3.实施例2的研究中示例性的制剂

*在最初剂量为15mL/kg三只小鼠死亡后，普那布林的剂量降至10mL/kg。

溶媒对照的剂量制备：在给药的每一天制备溶媒(对照)，通过使用微量移液器将284μL吐温-80(聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯；Sigma，美国)添加到琥珀色小瓶中，并涡旋振荡1min。然后将1,020μL丙二醇添加到琥珀色小瓶中，涡旋振荡15min，然后在水浴中超声处理30min。最后，向溶液中加入2,696μL的5％葡萄糖水溶液(D5W)，涡旋振荡3min，以获得4mL的由7.1％吐温80(v/v)、25.5％丙二醇(v/v)和67.4％的D5W(v/v)组成的溶媒溶液。

剂量的测试物品制备：在给药的每一天制备0.75mg/mL的普那布林溶液(Plin-A)。在室温下，将普那布林粉(3mg)称入单独的避光琥珀色小瓶中。使用微量移液器，将284μL吐温-80加入琥珀色小瓶并涡旋振荡1分钟。将1,020μL丙二醇添加到琥珀色小瓶中，涡旋振荡15分钟，然后在水浴中超声处理30分钟。最后，将2696μL的5％葡萄糖水溶液添加到溶液中并涡旋振荡3分钟，以得到4mL的0.75mg/mL普那布林溶液。在给药的每一天制备1.0mg/mL的普那布林溶液(Plin-B)。在室温下，将普那布林粉(3mg)称入单独的避光琥珀色小瓶中。使用微量移液器，将213μL吐温-80加入琥珀色小瓶并涡旋振荡1分钟。将765μL丙二醇添加到琥珀色小瓶中并涡旋15分钟，然后在水浴中超声处理30分钟。最后，将2,022μL的5％葡萄糖水溶液添加到溶液中并涡旋振荡3分钟，以得到3mL的1.0mg/mL普那布林溶液。

下表3总结了实施例2研究中的制剂。将未使用的配制好的测试物品(溶液)存储在-80℃下，以进行普那布林浓度的潜在分析。

抗卵清蛋白测定：购买了小鼠抗OVA IgG₁ ELISA试剂盒(美国开曼化学)以进行测定。来自第30天的血清样品以1至2,000、1至6,000和1至20,000的稀释度进行测定。来自第62天的血清样品以1至2,000和1至20,000的稀释度进行测定。

测定试剂和标准品制备：使用前，将所有试剂均置于室温。通过用90mL水稀释一小瓶免疫测定缓冲液B浓缩液(10X)的内容物来制备测定缓冲液。冲洗小瓶以除去可能沉淀的任何盐。洗涤缓冲液通过向去离子水中添加5mL洗涤缓冲液浓缩液和1mL聚山梨酯20来制备2,000mL洗涤缓冲液。通过用1mL分析缓冲液复溶制备标准品，制成200ng/mL的储备液，并轻轻混合15分钟。对于标准曲线，储备液200ng/mL为最高浓度，测定缓冲液为零标准液：0ng/ml。为了进行系列稀释，将8个试管标记为1至8号，并将250μL测定缓冲液添加至2-8号试管中。将500μL储备溶液(200ng/mL)添加到1号管中。使用移液管从1号管中转移250μL溶液，然后将其添加到2号管中并轻轻混合。接下来，从2号管中取出250μL溶液并添加到3号管中。轻轻混合3号管。对于4-8号管重复该过程。

血清样品制备：从-80℃冰箱中取出血清样品，并在湿冰上融化1小时。来自第30天的血清样品以1：2,000、1：6,000和1：20,000的稀释度；来自第62天的血清样品和1∶2,000和1∶20,000稀释液用测定缓冲液测定。

典型的检测程序：根据预先确定的ELISA板图，将100μL标准、对照或稀释的样品添加到相应的样品孔中。用粘合剂条覆盖板，并在水平轨道微板振荡器上在室温下孵育2小时。孵育2小时后，将孔用400μL洗涤缓冲液洗涤四次。最后一次洗涤后，通过倾析除去剩余的洗涤缓冲液。然后将板倒置并用干净的纸巾吸干。向每个孔中添加100μL山羊抗小鼠IgG1HRP偶联物。用新的粘合剂条覆盖板，并在室温下在水平轨道微板振荡器上再孵育1小时。温育1小时后，将孔用400μL洗涤缓冲液再次洗涤四次，然后将100μLTMB底物溶液添加到每个孔中。将板在室温下孵育30分钟，同时避光。孵育30分钟后，将100μL终止溶液添加到每个孔中。使用设置为450nm的酶标仪(SpectraMax i3X，Molecular Devices)在30分钟内确定每个孔的光密度。

动物测试设置：

物种和菌株：小鼠，C57BL6。

性别和编号：雌性，每组25只，3组，5只替代品(总共80只小鼠)。

年龄：小鼠到达时大约5周大。小鼠于2018年9月4日出生(±3天)。

体重：第1天的小鼠体重范围为15.30至19.70g。

来源：小鼠购自杰克逊实验室(Jackson Laboratory)。

标识：标识出个别小鼠的耳标。每个笼子上都贴有笼子卡，标明了IACUC协议编号、供应商、物种/品系、性别、组别名称和个体动物研究编号。

退出和更换：免疫前在该研究中未使用任何退出或更换。

测试系统和动物数量的依据：选择C57BL6小鼠是根据其作为连续血液采集的低阶动物的历史使用而进行的。要求的动物数量基于科学原理、法规要求和统计考虑。用于这项研究的动物数量是产生用于决策的可解释数据所需的最小量。监管机构指出，在精心设计的研究中，通常每组3至15只动物足以检测与测试物品相关的影响。申办者已确定适当的小组个数以评估其测试物品；每组5只动物，在5个研究亚组中各有3个组。

涉及活体动物的所有动物收容和研究程序均在国际实验室动物护理评估和认可协会(AAALAC)认可的动物研究设施中进行。畜牧业和照料的标准是美国农业部(USDA)动物福利法(9CFR第1、2和3部分)，实验动物的护理和使用指南(The Guide for the Care andUse of Lab或at或y Animals)(第8版，2011年修订，美国国家科学院出版社，华盛顿特区，2011年)和研究设施的标准操作程序(SOP)。

饲养：在整个研究过程中，将小鼠配对饲养，每笼2-5只，放在带有吸收性被褥材料的聚碳酸酯笼中。笼子符合实验动物的护理和使用指南中规定的标准。

丰容：根据研究设施的SOP，向小鼠提供了丰富的物品(窝和住房材料)。

适应：到达研究设施后至少3天使小鼠适应环境。

兽医护理：在研究的活体动物阶段，主治兽医随叫随到。

温度：设置环境控制以将温度维持在18℃至29℃±3℃。

湿度：监测环境控制并尽可能紧密地保持30％至70％的湿度±5％的范围。

光照：除了标本采集和研究的要求外，光源以12hr/12hr的开/关周期点亮。

同时用药：在这项研究中没有同时用药。

饲喂：为小鼠提供了Envigo Teklad啮齿动物饮食2018C(Lot#:05212018；有效日期：2018年11月21日)。

水：随意给小鼠提供市政自来水。水是通过可再填充的水瓶提供的。定期对供水实验室(美国加利福尼亚州圣地亚哥市的圣地亚哥市水务局(San Diego City WaterDepartment,San Diego,CA,USA))的每个SOP进行污染物分析，以确保没有污染物对研究结果产生负面影响。

污染声明：饲料、水或垫料中没有已知的污染物预计会干扰本研究中的测试物品。

卫生条件：房间和设备的卫生程序是根据研究设施的适用标准操作程序以及实验动物的护理和使用指南中所述的准则进行的。工作人员穿着呼吸器和适当的个人防护设备。

临床生病、濒死动物或发现死亡的动物的处理：安乐死临床生病或濒死小鼠的决定是研究主任的责任，并可能与主治兽医和申办者的研究监测员或其指定人员合作。根据美国兽医协会的动物安乐死:2013版(J.Am.Vet.Med.Assoc.,218:669-696,2013)。根据研究主任的要求，对发现死亡或垂死的小鼠进行了严格的尸检，并按研究设施的SOP进行处理。

安乐死：在收集组织之前，通过吸入异氟烷麻醉小鼠。将小鼠暴露于2-5％的异氟烷中直至发生深度麻醉,使用反身捏法证实。作为样本收集设计的一部分，使用25G针和注射器在不解剖的情况下将小鼠放血。这种采血和颈椎脱位是确定尸体处置前死亡的辅助方法。

给药时间表：

表4.实施例2的研究中举例说明的给药时间表

*3-II、3-III、3-IV和3-V组在初始剂量给药后三只小鼠死亡后，普那布林的剂量从15mg/kg降低至10mg/kg。

^╪在每个测试组中，在第1天以每只小鼠100μL的剂量通过皮下注射100μg剂量的在CFA中乳化的OVA。

研究时期：该研究的活期部分为62天，不包括适应。

随机化：在免疫当天，根据体重将小鼠正式随机分为各治疗组。

禁食：这项研究没有给小鼠禁食。

免疫给药：在研究的第1天(2018年10月17日)，通过皮下给药，所有75只小鼠均以每只动物100μL的剂量接受了100μg在CFA中乳化的OVA。皮下给药在动物的背表面上，并用25G针头给药。在两次给药之间，将OVA/CFA乳剂保持在湿冰上，并在每次制备后的4小时内使用。

测试物品给药：如表4所示，每只动物通过26G针以10或15μL/g的剂量经腹膜内施用测试材料。相对于免疫接种日期(2018年10月17日)的给药日期也列于表4。

免疫和测试材料给药理由：皮下(SC)注射CFA中的OVA以诱导免疫。根据发起人的要求，通过IP剂量施用了测试物品(例如，普那布林)。IP途径用于递送测试材料，因为先前的研究已证明测试材料在该途径中具有良好的药代动力学。测试材料一天两次(BID)，间隔3小时，以更好地模拟患者体内的药代动力学(小鼠血浆消除半衰期为

小时，而人类为

小时)。

观察、测量和标本：

身体检查：合格的研究者应在给药前进行常规体格检查。常规检查包括但不限于评估皮肤、活动性、外部孔口、行为以及对外部刺激的反应。身体检查于2019年10月11日进行。所有动物均正常，在进行研究随机分组之前被视为健康。

死亡率/发病率：在工作日中每天两次(早晨和下午)观察所有动物的死亡率/死亡，在周末或假日每天观察一次。

详细的临床观察：没有在这项研究中进行预定的详细临床观察。在出于任何原因进行的每日死亡/发病率检查期间，由经过培训的人员标记的小鼠进行计划外的临床观察。

体重：每周测量一次体重。研究中的任何动物治疗的日子，测量了所有小鼠的体重。

食物消耗：该研究未记录食物消耗。

血液样本采集：在第1天(免疫前)、第8天和第30天，通过下颌下静脉或眼眶后以每次采集100μL将全血样品收集到凝块激活剂管中。在第62天终止时，通过心脏穿刺将最大体积的全血收集到凝块激活剂管中。将所有血液样品在室温下凝结，在3,000RPM下于室温(约20-25℃)离心10-15分钟，然后将每个血清样品的血清上清液转移至干净的冷冻管中。将血清上清液冷冻保存在-80℃(±12℃)直至准备分析。

IgG抗体抗OVA的测量：通过ELISA测量小鼠OVA特异性抗体。在第30天收集样品后使用市售ELISA试剂盒(Cat.#:500830，开曼化学定量ELISA)测量IgG1抗OVA，然后在第62天收集样品之后再次进行。

安乐死，组织收集和早期死亡/计划外牺牲：在最后一个亚组的最后一个治疗剂量后48小时内对替代动物实施安乐死。在第62天，对所有存活的动物实施安乐死以收集最终血液。记录疾病或濒死迹象。研究主任与研究监测员协商，确定濒死小鼠需要安乐死。安乐死的方法根据AVMA动物安乐死指南：2013版。应研究主任的要求，丢弃发现死亡或濒死的小鼠。

结果：

计划外的临床观察/死亡率检查：亚组I，第3组中剂量为15mg/kg的三只动物(动物#s：3501、3503、3505)的临床观察发现包括，在服用试验物品后1天内出现活动量下降、呼吸不规则、脱水和体冷感。由于在研究期间发现的三只动物的死亡可能与普那布林治疗有关，因此降低了其后续剂量。其余亚组II-V，第3组动物以10mg/kg的剂量给药(在上表3-4中以“*”表示)。以下在该实施例中描述的实验观察集中在较低剂量(10-mg/kg)的小鼠上。

体重结果：体重平均值如图1B-1F所示，评估了在CFA中的卵清蛋白第1天免疫后的三个剂量组(0mg/kg、7.5mg/kg和10mg/kg；腹膜内注射，一日两次，间隔3小时)。剂量组分为五个亚组(1-5)，第1天(免疫后1小时；图1A中没有10mg/kg的组)、3、6、14或28天分别给予测试物品。如图1A-1F所示，没有归因于测试物品施用的体重趋势。图2显示了第1-3组及其亚组在第1天和第62天之间的平均体重变化(如上所述，在表4中)。如图1-2所示，没有归因于测试物品施用的体重趋势。通常，在第1天免疫后，所有组的平均体重略有下降，在第1天至第62天之间，所有体重均增加。

血清中IGG抗体抗OVA水平的结果用在完全弗氏佐剂(CFA)中的卵清蛋白(OVA)皮下免疫小鼠后的第30和62天，评估血清卵清蛋白IgG1的浓度。用ELISA试剂盒检测小鼠血清中OVA IgG1的浓度。来自第30天的血清中OVA IgG1的浓度为1：2,000、1：6,000和1：20,000稀释度的数据取平均值得到(不包括超出标准范围的数据)。来自第62天的血清中OVA IgG1的浓度仅来自1：20,000稀释度的结果。在图3A-3F中，分别在第30天和第62天在溶媒组中发现了血清OVA IgG1水平的高度变化。在第30天和第62天的样品中，在5个亚组中有4个亚组中的7.5和10mg/Kg的普那布林对抗OVA表现出抑制作用(图4C-4J)。在免疫后1小时施用普那布林的亚组1中，普那布林在第30天剂量依赖性地增加了OVA IgG1的产生，而未达到统计学显著性(图4A)。亚组1中剂量为7.5mg/kg时，在第62天，普那布林显著增加了OVA IgG1的产生(图4B)。如图3-4所示，在卵清蛋白免疫后1小时施用普那布林时，抗OVA反应有增加的趋势，在7.5mg/kg、IP BID(间隔3小时)免疫后第62天达到显著水平；在研究中，该组的平均抗OVA IgG1浓度最高。在免疫后第3、6、14或28天以BID方式对普那布林进行BID给药时，通过普那布林治疗抗OVA IgG1浓度显著降低，或倾向于降低。

实施例3.

微管蛋白结合剂增强树突状细胞引起的T细胞反应

从人供体收集人外周CD14阳性单核细胞，随后分化并成熟为CD14⁺树突状细胞(DC)。人类CD4阳性T细胞是从另一个人类供体中单独收集的。收集的CD4⁺T细胞与CD14⁺DC在混合淋巴细胞反应(MLR)中合并。在该实施例中，通过将CD14⁺DC与CD4⁺T细胞组合，分别在单核细胞分化步骤、树突细胞成熟步骤和T细胞活化步骤中加入微管蛋白结合剂。

使用的试剂和设备：

96孔透明平底聚苯乙烯TC处理的微孔板(美国康宁公司(Corning Inc.,USA))；

96孔透明圆底TC处理微孔板(美国康宁公司)；Nunc^TMEasYFlask^TM25cm²细胞培养瓶(赛默飞科技，美国)；RPMI1640培养基(Gibco公司，美国)；FBS(Gibco公司，美国)；DMSO(西格玛奥德里奇，美国)；ACCUSPIN^TMSystem-

-1077(西格玛奥德里奇，美国)；IFN-γELISA试剂盒(R&D Systems，美国)；IL-2ELISA试剂盒(R&D Systems，美国)；LS色谱柱(美天旎生物-M iltenyi Biotec,美国)；CD4⁺T细胞分离试剂盒(美天旎生物,美国)；CD14微珠(美天旎生物,美国)；ImmunoCult^TM树突状细胞培养试剂盒(干细胞技术-STEMCELL Technologies，美国)；FACS缓冲剂：PBS+2％FBS；EnVision多标签读取器2104-0010A(珀金埃尔默-PerkinElmer，美国)；CO₂水套式培养箱(日本三洋)；崇光XDS-1B倒置显微镜(重庆广电股份有限公司)；

离心机(西格玛奥德里奇，美国)；和SpectraMax Plus 96孔酶标仪(分子设备公司，美国)。

从供体中分离人PBMC：按照下述步骤(1a)-(1d)，从人全血中分离出外周血单核细胞(PBMC)：(1a)将Histopaque-1077移入无菌的50mL离心管中；然后在不搅动血液-聚蔗糖(Ficoll)界面的情况下，将等体积的全血小心地铺在Histopaque-1077上。(1b)然后将试管以400×g离心30分钟。吸出顶部的血浆层；然后将白色半透明夹层(包含PBMC)小心地转移到新的无菌离心管中。(1c)将获得的单核细胞用无血清的RPMI1640培养基洗涤2-3次；然后将试管以250×g的速度离心10分钟。(1d)将PBMC细胞沉淀物重新悬浮在RPMI1640培养基中。

从PBMC中分离CD14⁺单核细胞：在研究的第1天，根据上述(1a)-(1d)从人类供体获得PBMC细胞。然后根据步骤下述(2a)-(2k)在同一天(第1天)从这些PBMC中分离出单核细胞：(2a)确定PBMC细胞的数量。(2b)将细胞悬液以300×g离心10分钟；并完全吸出上清液。(2C)将细胞沉淀每10⁷总细胞重悬于80μLFACS缓冲液中。(2d)每10⁷总细胞中添加20μLCD14微珠。(2e)混合均匀并在冰箱(2至8℃)中孵育15分钟。(2f)通过向每10⁷细胞添加1-2mLFACS缓冲液来洗涤细胞，并以×1500rpm离心10分钟。(2g)将细胞以最多10⁸细胞重悬于500μLFACS缓冲液中。(2h)将该柱置于合适的MACS分离器的磁场中。(2i)所述柱通过用3mLFACS缓冲液冲洗而制备。(2j)将细胞悬浮液施加到柱上。收集通过的未标记细胞，并用3mLFACS缓冲液分别洗涤柱子3次。收集总流出物，其是未标记的细胞部分。通过添加FACS缓冲液三次来进行洗涤步骤。仅当柱残留物变为空时才添加新缓冲液。(2k)然后，将然后，将柱从分离器中取出，并放在合适的收集管上。将5mL FACS缓冲液吸移到柱上。通过将柱塞用力推入色谱柱，可立即冲洗出磁性标记的细胞。该级分代表CD14阳性单核细胞。

单核细胞分化为CD14⁺树突状细胞：从(2k)获得的CD14阳性单核细胞中，按照下述步骤(2l)-(2p)对树突状细胞(DC)进行分化：(2l)将每5×10⁶个细胞用每5mLImmunoCult^TMDC分化培养基重悬，并充分混合。然后将5mL细胞悬液添加到T-25cm²瓶中，并将细胞在37℃和5％CO₂中孵育3天。(2m)同时，平行地，将单核细胞分别在6孔板的孔中分别用3、1、0.3、0.1、0.01和0μM普那布林处理，并孵育3天。(2n)在第4天，通过移液从T-25cm²瓶中除去培养基，并将其添加到14mL离心管中。将5mL新鲜的ImmunoCult^TMDC分化培养基快速添加到培养瓶中。(2o)将含有培养基和细胞(来自(2n)步骤)的14mL管以300×g离心10分钟，除去上清液并丢弃。将细胞重悬于小体积(即50μL或高至原始体积的10％)的新鲜ImmunoCult^TMDC分化培养基中，并返回到培养瓶中，以保存非粘附或松散粘附的细胞。然后将细胞在37℃下孵育2天。(2p)也是在第4天，从6孔板中除去DC的90％分化培养基，并添加90％新鲜的分化培养基。如上文(2m)(研究小组#1)所述，将细胞用3、1、0.3、0.1、0.01和0μM普那布林处理。再孵育2天后，通过FACS用于CD40、CD80、MHCII和CD86评估树突状细胞成熟。其余细胞未经处理继续进行下述的步骤(4a)-(4d)用于MLR测定。

CD14⁺树突状细胞的成熟：根据下述步骤(2q)-(2r)，使上述步骤(2p)中分化的树突状细胞成熟：(2q)在第6天，将ImmunoCult^TM树突状细胞成熟补充剂以1：100稀释度直接添加到培养瓶中，例如，将50μL成熟补充剂添加到约5mL培养基中。然后将培养瓶轻轻旋转以混合。此时培养基尚未更改。(2r)分别在6孔板的孔中分别用3、1、0.3、0.1、0.01和0μM普那布林处理来自上述步骤(2o)的一部分分化的DC(研究小组#2)。将所有树突细胞孵育2天，以进行FACS评估成熟标记物：CD40、CD80、MHCII和CD86。其余细胞继续进行下述的步骤(4a)-(4d)以进行MLR测定。

从另一位供者的PBMC分离人CD4⁺T细胞的：PBMC细胞是根据上述(1a)-(1d)从另一位人类供体获得的。然后按照以下步骤(3a)-(3k)从这些PBMC中分离出CD4⁺T细胞：(3a)确定PBMC细胞的数量。(3b)将细胞悬液以300×g离心10min。然后将上清液完全吸出。(3c)将细胞沉淀以每10⁷总细胞重悬于40μLFACS缓冲液中。(3d)每10⁷个细胞中加入10μL CD4⁺T细胞生物素-抗体混合物。(3e)将混合物充分混合并在冰箱中(2-8℃)温育5min。(3f)每10⁷个总细胞中添加30μL FACS缓冲液，每10⁷个总细胞中添加20μL CD4⁺T细胞微珠混合物。(3g)将混合物充分混合并在冰箱中(2至8℃)温育10min。(3h)在合适的MACS分离器的磁场中放置一柱。(3I)所述柱通过用3mL缓冲液冲洗而制备。(3j)将细胞悬浮液施加到柱上。收集包含未标记细胞的流通液，代表富集的CD4⁺T细胞。(3k)用3mL FACS缓冲液洗涤柱。收集经过的未标记细胞，它们代表富集的CD4⁺T细胞，并与上述步骤(3j)的流出物合并。

通过MLR分析评估T细胞的同种异体激活：按照下述步骤(4a)-(4d)进行异体混合淋巴细胞反应(MLR)测定，如下所示：(4a)分别根据表7-9之一在RPMI 1640培养基中稀释测试物品(例如，普那布林和其他微管蛋白结合剂)，然后以50μL/孔的量添加到适当的孔中。对每个条件进行重复。(4b)将从上述(3k)获得的CD4⁺T细胞的浓度调整为1×10⁶/mL；向96孔板的各个孔中，以1×10⁵/孔添加100μLCD4⁺T细胞。(4c)通过添加2mM EDTA释放从上面(2q)-(2r)获得的DC细胞，收集并以×1500rpm离心5min。将DC细胞的浓度调节为2×10⁵/mL；将50μLDC细胞添加到每个孔(1×10⁴/孔)中，以使T细胞与树突状细胞的比例为10：1。(4d)将板在37℃下孵育5天。

在第13天，(4e)收集细胞上清液，以通过ELISA检测IL-2和IFN-γ。

代表性的实验时间表如表5所示；实施例3的每个研究中的三个研究小组如表6所示。

表5.细胞制备和MLR分析的示例性时间表

表6.研究下组说明

实施例3A.

根据如上文实施例3中所述的步骤(1a)至(1d)从第一供体中分离出人PBMC。根据如上文实施例3中所述的步骤(2a)-(2k)从PBMC中分离人CD14⁺单核细胞，根据步骤(2l)-(2p)分化为人CD14⁺树突状细胞，然后根据步骤(2q)-(2r)使其成熟。根据上文实施例3中所述的步骤(1a)-(1d)从第二个供体中分离出人PBMC，根据步骤(3a)-(3k)进一步分离以获得人CD4⁺T细胞。根据上文实施例3中所述的步骤(4a)-(4d)进行MLR；表7总结了所测试的药物：普那布林、纳武单抗和IgG对照(及其浓度)。根据上文实施例3中所述的步骤(4e)收集细胞上清液用于ELISA测量IL-2和IFN-γ。

表7.在MLR分析中测试的药物

普那布林(μM)	3	1	0.3	0.1	0.01	0
							纳武单抗(ng/mL)	2,000	200	20	2	0.2	0.02
IgG对照(ng/mL)	2,000	200	20	2	0.2	0.02

三个研究小组为：#A1(在DC分化的步骤(2m)用微管蛋白结合剂处理)，#A2(在DC成熟的步骤(2r)用微管蛋白结合剂处理)和#A3(当CD4⁺T细胞与CD14⁺树突状细胞合并时，在步骤(4a)用微管蛋白结合剂处理)，如上文表6所述。

结果：

如图8所示，未观察到微管蛋白结合剂处理对IFN-γ分泌的显著影响。

当从CD14细胞分化过程中(图5，右上方)或在DC成熟过程中(图6，右上方)处理细胞时，普那布林可提高DC上CD86的表达；没有观察到MHCII、CD80和CD40表达的明显增加。

图7显示，在MLR分析中，当在DC成熟过程中(仅)用普那布林(1或3μM)处理DC时，IL2分泌增加，DC CD86表达增加。图7显示了在DC分化过程中，当使用相同浓度的普那布林处理CD14⁺单核细胞时，IL2分泌减少。图7还显示，当成熟DC与CD4 T-CD合并时开始普那布林处理(≥100nM)，MLR诱导的IL-2分泌显著增加，大于纳武单抗(2mg/ml)。

实施例3B.

根据如上文实施例3中所述的步骤(1a)至(1d)从第一供体中分离出人PBMC。根据如上文实施例3中所述的步骤(2a)-(2k)从PBMC中分离人CD14⁺单核细胞，根据步骤(2l)-(2p)分化为人CD14⁺树突状细胞，然后根据步骤(2q)-(2r)使其成熟。根据上文实施例3中所述的步骤(1a)-(1d)从第二个供体中分离出人PBMC，根据步骤(3a)-(3k)进一步分离以获得人CD4⁺T细胞。根据如以上实施例3中所述的步骤(4a)-(4d)进行MLR；表8总结了所测试的药物：普林布林、抗PD-1、IgG对照、多西他赛和秋水仙碱(及其浓度)。根据上文实施例3中所述的步骤(4e)收集细胞上清液用于ELISA测量IL-2和IFN-γ。

表8.在MLR分析中测试的药物

普那布林(μM)	3	1	0.3	0.1	0.01	0
							抗PD-1(ng/mL)	20,000	2,000	200	20	2	0.2
IgG对照(ng/mL)	20,000	2,000	200	20	2	0.2
							多西他赛(μM)	3	1	0.3	0.1	0.01	0
秋水仙碱(μM)	3	1	0.3	0.1	0.01	0

三个研究小组为：#B1(在DC分化的步骤(2m)用微管蛋白结合剂处理)，#B2(在DC成熟的步骤(2r)用微管蛋白结合剂处理)和#B3(当CD4⁺T细胞与CD14⁺树突状细胞合并时，在步骤(4a)用微管蛋白结合剂处理)，如上文表6所述。

结果：图9-10分别显示了研究小组#B1和#B2的FACS结果；图11至图12分别示出了测试物品对MLR中IL-2和IFN-γ产生的影响。

实施例3C.

根据如上文实施例3中所述的步骤(1a)至(1d)从第一供体中分离出人PBMC。根据如上文实施例3中所述的步骤(2a)-(2k)从PBMC中分离人CD14⁺单核细胞，根据步骤(2l)、(2n)和(2o)分化为人CD14⁺树突状细胞，然后根据步骤(2q)使其成熟。在实施例3C的研究中，步骤(2m)、(2p)和(2r)被跳过。根据上文实施例3中所述的步骤(1a)-(1d)从第二个供体中分离出人PBMC，根据步骤(3a)-(3k)进一步分离以获得人CD4⁺T细胞。根据如以上实施例3中所述的步骤(4a)-(4d)进行MLR；表9总结了所测试的药物：普林布林、纳武单抗、IgG对照、法舒地尔(fasudil)和秋水仙碱(及其浓度)。根据上文实施例3中所述的步骤(4e)收集细胞上清液用于ELISA测量IL-2和IFN-γ。

表9.在MLR分析中测试的药物

普那布林(nM)	300
							纳武单抗(ng/mL)	20,000	2,000	200	20	2	0.2
IgG对照(ng/mL)	20,000
							法舒地尔(μM)	30	10
秋水仙碱(μM)	3	1	0.3	0.1	0.03	0.01

结果：图13-14分别示出了测试物品对MLR中IL-2和IFN-γ产生的影响。

本公开内容的某些实施例包含在本说明书末尾提出的权利要求书中，或以后提出的其他权利要求书中。其他实施例包含在以下一组编号的实施方式中：

实施方式1.一种用于给予受试者的组合物，其包含疫苗和微管蛋白结合剂。

实施方式2.如实施方式1所述的组合物，其中，所述疫苗包括传染病疫苗、癌症疫苗，或其组合。

实施方式3.如实施方式1或2所述的组合物，其中，所述疫苗针对一种或多种选自下组的传染病：霍乱、登革热、白喉、b型流感嗜血杆菌(Hib)、甲型肝炎、乙型肝炎、流行性感冒、日本脑炎、脑膜炎球菌性脑膜炎、百日咳(aP)、脊髓灰质炎、狂犬病、破伤风、结核病(TB)、伤寒和黄热病(YF)及其组合。

实施方式4.如实施方式1至3中任一项所述的组合物，其中，所述疫苗是选自以下的传染病疫苗：

白喉和破伤风(DT)疫苗；

白喉、破伤风和百日咳(DTaP)疫苗；

破伤风和白喉(Td)疫苗；

破伤风、白喉和百日咳(Tdap)疫苗；

b型流感嗜血杆菌(Hib)偶联疫苗；

流感(flu)疫苗；

狂犬病疫苗；

脊髓灰质炎病毒疫苗，例如灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗(IPV)；

脑膜炎球菌偶联疫苗；

伤寒疫苗；

结核(TB)疫苗；和

黄热病(YF)疫苗；和

及其组合，例如DTaP-IPV组合疫苗和DTaP-IPV/Hib组合疫苗。

实施方式5.如实施方式1-4中任一项所述的组合物，其中，所述疫苗选自下组：

嗜血杆菌b偶联疫苗(破伤风类毒素偶联物)，例如

疫苗或

疫苗；

吸附的破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳疫苗，例如

疫苗；

吸附的白喉和破伤风类毒素和无细胞百日咳疫苗，例如

疫苗；

吸附的白喉和破伤风类毒素疫苗；

流感疫苗，例如

四价疫苗，

四价疫苗，

高剂量三价疫苗或

皮内四价疫苗；

人二倍体细胞狂犬病疫苗(HDCV)，例如

疫苗；

热处理过的人类狂犬病免疫球蛋白(HRIG)，例如

疫苗；

灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗(IPV)，例如

疫苗；

脑膜炎球菌多糖白喉类毒素偶联疫苗，例如带有白喉类毒素载体的四价ACYW-135

疫苗；

吸附的白喉和破伤风类毒素及无细胞百日咳，灭活的脊髓灰质炎病毒和b型流感嗜血杆菌偶联物(偶联至破伤风类毒素)疫苗，例如

疫苗；

吸附的白喉和破伤风类毒素以及无细胞百日咳和灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗，例如

疫苗；

吸附的破伤风和白喉类毒素，例如Tenivac^TM疫苗；

伤寒病毒多糖疫苗，如Typhim

疫苗；

结核菌素纯化的蛋白衍生物，例如

疫苗；和

黄热病疫苗，例如

疫苗或

疫苗。

实施方式6.如实施方式1或2所述的组合物，其中，疫苗包括癌症疫苗。

实施方式7.如实施方式6所述的组合物，其中，所述癌症疫苗包含基于抗原呈递细胞(APC)的疫苗。

实施方式8.如实施方式6或7所述的组合物，其中，所述癌症疫苗包括基于树突细胞(DC)的疫苗。

实施方式9.如实施方式6至8中任一项所述的组合物，其中，所述癌症疫苗包括基于B细胞的疫苗。

实施方式10.如实施方式6至9中任一项所述的组合物，其中，所述癌症疫苗包含DNA损伤剂。

实施方式11.如实施方式1至10中任一项所述的组合物，其中，所述微管蛋白结合剂用作先天或体液免疫的诱导剂、增强剂或促进剂。

实施方式12.如实施方式1至11中任一项所述的组合物，其中，所述微管蛋白结合剂以有效刺激或增强受试者对疫苗的免疫反应性的量存在。

实施方式13.如实施方式1至12中任一项所述的组合物，其中，所述微管蛋白结合剂是普那布林。

实施方式14.如实施方式1至13中任一项所述的组合物，其进一步包含药学上可接受的赋形剂。

实施方式15.如实施方式1至14中任一项所述的组合物，其中，所述组合物为液体或固体形式。

实施方式16.如实施方式1至15中任一项所述的组合物，其中，所述组合物为肠胃外给药。

实施方式17.如实施方式1至15中任一项所述的组合物，其中，所述组合物为肌内施用。

实施方式18.如实施方式1至17中任一项所述的组合物，其中，所述受试者是人。

实施方式19.一种对受试者的疾病、病症或病况进行治疗或免疫的方法，其包括向所述受试者施用实施方式1至18中任一项所述的组合物。

实施方式20.一种对受试者的疾病、病症或病况进行治疗或免疫所述的方法，包括：

向受试者施用疫苗；和

向受试者施用微管蛋白结合剂。

实施方式21.如实施方式19或20所述的方法，其中，所述疾病、病症或病况是感染性疾病、癌症或免疫病症，或其组合。

实施方式22.一种增强受试者对疫苗的免疫反应的方法，包括：

向受试者施用疫苗；和

与仅由疫苗诱导的免疫反应相比，以足以增强对疫苗的免疫反应的量向受试者施用微管蛋白结合剂。

实施方式23.如实施方式22所述的方法，其中，所述增强免疫反应包括诱导淋巴细胞增殖；并且其中，所述淋巴细胞是T细胞或B细胞。

实施方式24.如实施方式23所述的方法，其中，所述淋巴细胞是T细胞。

实施方式25.如实施方式23所述的方法，其中，所述淋巴细胞是CD4⁺淋巴细胞。

实施方式26.如实施方式22所述的方法，其中，所述增强免疫反应包括诱导B细胞增殖和分化。

实施方式27.如实施方式22所述的方法，其中，所述增强免疫反应包括诱导免疫球蛋白M(IgM)抗体产生，或诱导免疫球蛋白G(IgG)抗体产生，或其组合。

实施方式28.如实施方式20至27中任一项所述的方法，其中，所述疫苗是癌症疫苗或传染病疫苗。

实施方式29.如实施方式20至28中任一项所述的方法，其中，所述疫苗选自针对一种或多种选自下组的疾病的疫苗：霍乱、登革热、白喉、b型流感嗜血杆菌感染、甲型肝炎、乙型肝炎、流行性感冒、日本脑炎、脑膜炎球菌性脑膜炎、百日咳、小儿麻痹症、狂犬病、破伤风、结核病、伤寒、黄热病、狂犬病和结核病。

实施方式30.如实施方式20至29中任一项所述的方法，其包括同时施用微管蛋白结合剂和疫苗。

实施方式31.如实施方式20至30中任一项所述的方法，其包括在施用疫苗之前或之后施用微管蛋白结合剂。

实施方式32.如实施方式20至32中任一项所述的方法，其中，所述微管蛋白结合剂是普那布林。

实施方式33.如实施方式20至33中任一项所述的方法，其中，所述普那布林在施用疫苗后至少约1天施用。

实施方式34.如实施方式20至33中任一项所述的方法，其中，所述普那布林在施用疫苗后约2天至约6天之间的时间施用。

实施方式35.如实施方式20至34中任一项所述的方法，其中，所述普那布林以不大于10mg/kg体重的剂量施用。

实施方式36.如实施方式35所述的方法，其中，所述普那布林每天两次间隔约3小时施用。

Claims (35)

1.一种向受试者给药的组合物，其包含疫苗和微管蛋白结合剂。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述疫苗选自针对一种或多种选自下组的疾病的疫苗：霍乱、登革热、白喉、b型流感嗜血杆菌感染、甲型肝炎、乙型肝炎、流行性感冒、日本脑炎、脑膜炎球菌性脑膜炎、百日咳、小儿麻痹症、狂犬病、破伤风、结核病、伤寒和黄热病。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述疫苗选自下组：

嗜血杆菌b偶联疫苗(破伤风类毒素偶联疫苗)；

吸附的破伤风类毒素、减少的白喉类毒素和无细胞百日咳疫苗；

吸附的白喉和破伤风类毒素和无细胞百日咳疫苗；吸附的白喉和破伤风类毒素；

四价流感疫苗；

高剂量流感疫苗；

四价流感疫苗；

皮内四价流感疫苗；

狂犬病疫苗(人类二倍体细胞)；

脊髓灰质炎灭活疫苗；

脑膜炎球菌(A、C、Y和W-135群)多糖白喉类毒素偶联疫苗；

吸附的白喉和破伤风类毒素及无细胞百日咳，灭活的脊髓灰质炎病毒和b型流感嗜血杆菌偶联物(破伤风类毒素偶联)疫苗；

吸附的白喉和破伤风类毒素以及无细胞百日咳和灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗；TENIVAC^TM吸附的破伤风和白喉类毒素；Typhim

伤寒病毒多糖疫苗；

黄热病疫苗；

热处理的狂犬病–HT狂犬病免疫球蛋白(人类)USP；

(结核菌素纯化的蛋白衍生物，芒图)；和

(黄热病疫苗)。

4.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述微管蛋白结合剂用作先天或体液免疫的诱导剂、增强剂或促进剂。

5.根据权利要求1、2或4所述的组合物，其特征在于，所述疫苗是用于传染病的疫苗。

6.根据权利要求1、2或4所述的组合物，其特征在于，所述疫苗是癌症疫苗。

7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述癌症疫苗包括基于抗原呈递细胞的疫苗。

8.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述癌症疫苗包括基于树突状细胞的疫苗。

9.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述癌症疫苗包括基于B细胞的疫苗。

10.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述癌症疫苗包含DAN破坏剂。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的组合物，其进一步包含药学上可接受的赋形剂。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物为肠胃外给药。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物为肌内施用。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的组合物，其特征在于，所述组合物为液体或固体形式。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的组合物，其特征在于，所述受试者是人。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的组合物，其特征在于，所述微管蛋白结合剂的量为有效刺激或增强受试者对疫苗的免疫反应的量。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的组合物，其特征在于，所述微管蛋白结合剂是普那布林。

18.一种治疗方法，其包括向受试者施用疫苗和微管蛋白结合剂。

19.一种在受试者中增强对疫苗的免疫反应的方法，所述方法包括向受试者施用疫苗和微管蛋白结合剂，其中，与通过单独施用受试者疫苗产生的免疫反应相比，对疫苗的免疫反应得到增强。

20.一种诱导淋巴细胞增殖的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的微管蛋白结合剂和疫苗。

21.一种诱导B细胞增殖的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的微管蛋白结合剂和疫苗。

22.一种诱导IgM和IgG产生的方法，其包括向有此需要的受试者施用有效量的微管蛋白结合剂和疫苗。

23.一种在受试者中增强对癌症疫苗的免疫反应的方法，所述方法包括向受试者施用癌症疫苗和微管蛋白结合剂，其中，与通过单独施用受试者所述癌症疫苗产生的免疫反应相比，对疫苗的免疫反应得到增强。

24.根据权利要求18至22中任一项所述的方法，其特征在于，所述疫苗选自针对一种或多种选自下组的疾病的疫苗：霍乱、登革热、白喉、b型流感嗜血杆菌感染、甲型肝炎、乙型肝炎、流行性感冒、日本脑炎、脑膜炎球菌性脑膜炎、百日咳、小儿麻痹症、狂犬病、破伤风、结核病、伤寒、黄热病、狂犬病和结核分枝杆菌。

25.根据权利要求18至24中任一项所述的方法，其包括同时施用所述微管蛋白结合剂和所述疫苗。

26.根据权利要求18至25中任一项所述的方法，其包括在施用疫苗之前或之后施用微管蛋白结合剂。

27.一种制备权利要求1所述的组合物的方法，其包括将微管蛋白结合剂和疫苗组合。

28.一种增强受试者对疫苗的免疫反应的方法，所述方法包括：

向受试者施用疫苗，和

在施用疫苗后向受试者施用微管蛋白结合剂，其中，与通过单独施用受试者疫苗产生的免疫反应相比，对疫苗的免疫反应得到增强。

29.一种诱导淋巴细胞增殖的方法，包括：

向受试者施用疫苗，和

在施用疫苗后向受试者施用微管蛋白结合剂。

30.一种诱导T细胞增殖的方法，包括：

向受试者施用疫苗，和

在施用疫苗后向受试者施用微管蛋白结合剂。

31.一种增强受试者对癌症疫苗的免疫反应的方法，所述方法包括：

向受试者施用癌症疫苗，和

在施用疫苗之后向受试者施用微管蛋白结合剂，其中，与通过单独向受试者施用癌症疫苗产生的免疫反应相比，对疫苗的免疫反应得到增强。

32.一种免疫方法，包括：

向受试者施用疫苗，和

在施用疫苗后向受试者施用微管蛋白结合剂。

33.根据权利要求18-32中任一项所述的方法，其特征在于，所述微管蛋白结合剂是普那布林。

34.根据权利要求18-33中任一项所述的方法，其特征在于，所述普那布林在施用疫苗后至少约1天施用。

35.根据权利要求18-34中任一项所述的方法，其特征在于，所述普那布林在施用疫苗后约2天至约6天之间的时间施用。

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