CN112626085B - 水稻窄叶基因nal13及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物基因工程领域，具体涉及一种控制水稻窄叶基因NAL13的分离克隆、功能验证，及其在水稻育种中的应用。本发明公开了水稻窄叶基因NAL13基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；其用途为改良禾本科植物株型；使植株的叶片变窄。

Description

水稻窄叶基因NAL13及其应用
技术领域
本发明属于植物基因工程领域，具体涉及一种控制水稻窄叶基因NAL13的分离克隆、功能验证，及其在水稻育种中的应用。
背景技术
水稻是世界上三大主要粮食作物之一，其产量和质量受到全世界的广泛关注。叶片作为水稻光合作用和呼吸作用的主要器官，在高产育种中其形态，颜色和大小都和光能利用率有着密不可分的关系，将直接影响水稻的生长发育和最终产量。因此，对不同水稻叶形突变体的研究是揭示水稻叶片发育生理生化以及分子生物学机理有效途径，对于提高水稻产量有着理论指导意义。
上三叶“长、窄、直、厚、凹”是超高产水稻株型叶片形态[1]，也是袁隆平首次提出窄叶性状的指标之一，迄今为止，通过经典遗传结合现代分子生物学技术，水稻中许多窄叶相关基因被挖掘和克隆。水稻窄叶相关基因往往表现出“一因多效”，窄叶突变体的表型除叶片变窄之外，同时还伴随着叶片变卷，叶夹角增大，分蘖减少或增多，株高降低，籽粒变小等其他株型农艺性状的改变，说明窄叶相关基因以多种方式来影响水稻的生长发育。大多数窄叶基因与生长素信号传导有关，NAL1编码丝氨酸/半胱氨酸蛋白酶，NAL1在维管组织的表达量很高，该基因的突变显著降低了生长素的极性运输活性，Nal1突变体小叶脉数显著变少表现出叶片变窄[2,3]。TDD1编码邻氨基苯甲酸合成酶β亚基同源的蛋白，邻氨基苯甲酸合成酶催化色氨酸生物合成的第一步反应，在依赖于色氨酸的IAA生物合成通路的上游发挥功能，tdd1突变导致色氨酸和IAA的缺乏出现窄叶表型[4]。NAL7及其等位基因组成性地编码一个生长素生物合成酶OsYUCCA8，它们的突变体表现出叶片向上卷曲，叶片变窄等表型[5,6]。生长素应答因子OsARF19的过表达水稻株系表现为矮杆、窄叶、瘪粒和叶倾角增大；OsARF19-O1突变体叶片节处的近轴细胞分裂增加，纤维素含量减少；OsARF19-O1和OsARF19-O2叶片节中自由IAA含量减少[7]。除生长素途径外，参与其他途径的基因突变也可能产生窄叶的表型，如NAL2和NAL3，编码相同的OsWOX3A转录激活因子，是赤霉素(GA)应答基因，nal2和nal3单突叶片表型正常，nal2/3双突叶片向上卷曲，叶片大叶脉数目减少到野生型的80％，小叶脉数只有野生型的一半[8]。NAL9编码ATP依赖性Clp蛋白酶蛋白水解亚基，突变体nal9在整个生育期都表现出窄叶的表型，并且苗期叶片浅绿色、株高矮化、穗变小以及分蘖增加等表型[9]。
虽然已有的水稻叶片发育突变体和基因对叶形分子机制的揭示起到了重要的作用，但是其分子机理有待进一步研究，本发明通过图位隆技术分离并克隆到控制窄叶基因NAL13，该基因编码一个细胞色素P450，细胞学和生物化学分析表明，该基因突变表现出叶片变窄，分蘖变多，茎秆变细，株高变矮等表型，转基因功能互补实验鉴定了该基因的功能。
上文中涉及的参考文献如下：
1.袁隆平.杂交水稻超高产育种[J].科学中国人,1998(06):15-17。
2.Jiang D,Fang J,Lou L,et al.Characterization of a Null AllelicMutant of the Rice NAL1 Gene Reveals Its Role in Regulating Cell Division[J].PLOS ONE,2015,1010(2):e0118169(Jiang D,Fang J,Lou L,et al.水稻NAL1基因无效等位突变体的鉴定，揭示了它在调控细胞分裂中的作用[J].PLOS ONE,2015,1010(2):e0118169)。
3.Qi J,Qian Q,Bu Q,et al.Mutation of the Rice Narrow leaf 1 Gene,Which Encodes a Novel Protein,Affects Vein Patterning and Polar AuxinTransport[J].PLANT PHYSIOLOGY,2008,147(4):1947-1959(Qi J,Qian Q,Bu Q,et al.一个水稻新基因Narrow leaf 1的突变影响了叶脉分布和生长素极性运输[J].PLANTPHYSIOLOGY,2008,147(4):1947-1959)。
4.Sazuka T,Kamiya N,Nishimura T,et al.A rice tryptophan deficientdwarf mutant,tdd1,contains a reduced level of indole acetic acid and developsabnormal flowers and organless embryos[J].The Plant Journal,2009,60(2):227-241(Sazuka T,Kamiya N,Nishimura T,et al.水稻色氨酸缺乏矮化突变体tdd1的吲哚乙酸含量降低，形成畸形花且无胚[J].The Plant Journal,2009,60(2):227-241)。
5.Fujino K,Matsuda Y,Ozawa K,et al.NARROW LEAF 7 controls leaf shapemediated by auxin in rice[J].Molecular Genetics&Genomics,2008,279(5):499-507(Fujino K,Matsuda Y,Ozawa K,et al.水稻中NARROW LEAF 7通过生长素途径调控叶片形状[J].Molecular Genetics&Genomics,2008,279(5):499-507)。
6.Woo YM,Park HJ,Su’udi M,et al.Constitutively wilted 1,a member ofthe rice YUCCA gene family,is required for maintaining water homeostasis andan appropriate root to shoot ratio[J].Plant Molecular Biology,2007,65(1-2):125-136(Woo YM,Park HJ,Su’udi M,et al.一个水稻YUCCA基因家族成员Constitutivelywilted 1是维持水分平衡和根与地上部合适比例所必需的[J].Plant MolecularBiology,2007,65(1-2):125-136)。
7.Zhang S,Wang S,Xu Y,et al.The auxin response factor,OsARF19,controls rice leaf angles through positively regulating OsGH3-5 and OsBRI1[J].Plant,Cell&Environment,2015,38(4):638-654(Zhang S,Wang S,Xu Y,et al.生长素应答因子OsARF19通过正向调节OsGH3-5和OsBRI1控制水稻叶片角度[J].Plant,Cell&Environment,2015,38(4):638-654)。
8.Ishiwata A,Ozawa M,Nagasaki H,et al.Two WUSCHEL-related homeoboxGenes,narrow leaf2 and narrow leaf3,Control Leaf Width in Rice[J].Plant&CellPhysiology,2013,54(5):779-792(Ishiwata A,Ozawa M,Nagasaki H,et al.两个与WUSCHEL相关的同源盒基因，narrow leaf2和narrow leaf3，控制水稻的叶宽[J].Plant&Cell Physiology,2013,54(5):779-792)。
9.Li W,Wu C,Hu GC,et al.Characterization and Fine Mapping of a NovelRice Narrow Leaf Mutant nal9[J].Journal of Integrative Plant Biology,2013,55(11):1016-1025(Li W,Wu C,Hu GC,et al.水稻窄叶突变体nal9的鉴定与精细定位[J].Journal of Integrative Plant Biology,2013,55(11):1016-1025)。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种水稻窄叶基因NAL13及其在水稻育种中的应用。
为了解决上述技术问题，本发明提供一种水稻窄叶突变体基因NAL13，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1，水稻窄叶突变体对应野生型的核苷酸序列为SEQ ID NO：2。
本发明还同时提供了上述水稻窄叶基因NAL13编码的蛋白质，该蛋白质的氨基酸序列如图7所示，水稻窄叶突变体对应野生型的氨基酸序列如图8所示。
进一步地，上述氨基酸序列还添加、取代、插入或缺失一个或多个氨基酸或其他物种的同源序列而生成的氨基酸序列或衍生物。
进一步地，上述核苷酸序列还添加、取代，插入或缺失一个或多个核苷酸而生成的突变体、等位基因或衍生物。
本发明还提供了含有上述基因的质粒，以及含有所述基因或所述载体的工程菌或宿主细胞。
所述工程菌和宿主细胞可理解为本领域技术人员在转基因过程中所使用的工程菌或宿主细胞。但随着科技发展，所述工程菌和宿主细胞的选择也许会发生变化，或在非转基因目的的应用领域，也同样涉及载体和工程菌的利用，但只要含有本发明所述基因或本发明所述的载体，均在本发明的保护范围之内。
进一步地，本发明还提供了一种宿主细胞，该宿主细胞含有基因序列，该细胞为大肠杆菌细胞、农杆菌细胞或植物细胞。
本发明的另一个目的在于提供上述基因用于转基因改良作物的用途。
本发明利用已定位和克隆水稻窄叶基因，再通过转基因或分子标记辅助选择育种方法，用于禾本科植物株型和产量的改良。
转基因水稻的制备为本领域常规技术手段，本发明不另作限定，利用本发明所述基因进行水稻转基因的技术方案均在本发明的保护范围之内。
实现本发明的具体技术步骤如下：
一、水稻窄叶突变体基因NAL13的鉴定和定位
本发明的窄叶突变体nal13是从粳稻品种中花11的EMS诱变体库中筛选得到的，在分蘖期，与野生型中花11相比，突变体nal13叶片变窄，分蘖数变多，在抽穗期，突变体的分蘖持续增加，达到了突变体的2倍。为了分离NAL13基因，本发明首先构建了一个定位群体，由窄叶突变体nal13与籼稻品种TN1杂交组配成F2定位群体，再通过图位克隆的方法，利用多种分子标记对NAL13位点进行初步定位，将其初步定位在第7染色体上，并介于B7-6与B7-8标记之间。通过对这两个标记之间的序列进行分析，发展新的多态性标记将NAL13基因精确定位到标记M4与M5之间约530kb的区域内，通过对区间的预测基因测序比对分析发现与中花11相比，NAL13的LOC_Os07g23570基因的编码区313位核苷酸C替换成T，导致编码的氨基酸发生改变，发生提前终止。
二、NAL13基因的鉴定与功能分析
利用pCAMBIA1300质粒构建NAL13互补载体。构建步骤：PCR扩增ZH11中包含NAL13基因的3882bp基因组DNA片段，将该片段连接到pCAMBIA1300载体上获得互补载体。
通过转基因技术，进行功能互补的转基因研究，结果表明本发明获得了使nal13恢复正常叶宽与分蘖的转基因水稻，证明了本发明正确克隆了NAL13基因，明确了NAL13基因的功能。
综上所述，本发明分离并克隆鉴定了水稻分蘖发育相关基因NAL13，并通过互补实验进行基因功能验证。本发明为改良水稻株型，加速设计育种进程，具有十分重要的理论和实际意义。
附图说明
下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。
图1是野生型和突变体nal13表型研究；
A:分蘖始期，bar＝1cm；B:分蘖盛期，bar＝12cm；C:穗，bar＝1cm；D:灌浆期，bar＝12cm，说明：A～D中，左：野生型；右：突变体NAL13；
E:野生型与突变体的株高；F:分蘖数的动态变化折线图。
图2是野生型和突变体nal13叶片大小对比；
A:分蘖期野生型(右)与突变体(左)倒一(L1)、倒二(L2)、倒三(L3)叶片，bar＝1cm；
B:剑叶叶片局部放大图，bar＝0.5cm；
C：叶片的徒手切片，箭头指的地方为大叶脉，bar＝1mm；
D:叶片的石蜡切片，bar＝50um；
说明：B、C、D中，上：野生型；下：突变体nal13；
E-I:叶片的长度、宽度、叶面积、大叶脉、小叶脉数的统计，误差线表示标准差(n＝20)，**0.01极显著水平。
图3是野生型和突变体nal13分蘖数对比；
A:野生型中花11分蘖，bar＝1cm；B:突变体nal13分蘖，bar＝1cm；C:野生型与突变体分蘖对比，bar＝1cm；D:灌浆期，bar＝2cm。
图4是野生型和突变体nal13茎秆对比；
A:茎节的长度，左：野生型；右：突变体nal13，bar＝2cm；B:茎节的宽度，上：野生型；下：突变体nal13，bar＝1cm；C-D:茎节的长度、宽度统计；E:第一节维管束数目统计，误差线表示标准差(n＝20)，**0.01极显著水平。
图5是NAL13基因的定位图；
A：NAL13基因的初定位，利用NAL13/TN1的F2群体的701株突变单株，将NAL13基因定位在第9号染色体的定位于B7-6和B7-8标记之间；B：NAL13基因的初定位，NAL13界定在530kb区域；C：NAL13基因的结构示意图，通过对该区域的NIP和NAL13亲本基因组DNA序列测序比对分析，结果发现在基因NAL13(LOC_Os07g23570)的第二个外显子上的第313位核苷酸C替换为T，Gln变成终止密码子，翻译提前终止。
图6是功能互补实验转基因水稻cp的表型，左：nal13，右：互补植株。
图7是NAL13的氨基酸序列。
图8是中花11的氨基酸序列。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述。这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定，以下实施例中的若未特别说明，所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、突变体材料的获得
通过EMS化学诱变粳稻品种中花11，待处理的中花11种子用清水浸泡8小时，室温晾干，用浓度为1％的EMS溶液将待处理的种子完全浸泡，28℃处理10个小时，处理后的种子用自来水冲洗10-12个小时，最后进行催芽播种。从而筛选到一份窄叶突变体nal13。该突变体的性状经过多代自交已稳定遗传，在大田条件下观察和比较野生型与突变体发现，在整个生长周期突变体都表现出叶片变窄，分蘖增多，茎秆变细，株高稍矮的表型。所有水稻材料种植于浙江省金华市浙江师范大学生化学院试验田，常规管理。
实施例2、植株的表型分析
与野生型中花11相比，突变体nal13叶片变窄，分蘖增多，茎秆变细，株高稍矮(图1)；突变体和野生型叶片石蜡切片结果发现，突变体大叶脉数和小叶脉数减少且泡状细胞数目变少(图2)；通过野生型与突变体分蘖的观察，发现突变体分蘖增多主要表现为高位分蘖的增加(图3)；将突变体与野生型茎秆进行对比发现，突变体茎秆变短、变细，且维管束数目减少(图4)。
实施例3、群体构建和遗传分析
将突变体nal13和常规籼稻TN1进行杂交配组，F1植株均表现出正常野生型表型，说明nal13受隐性核基因控制。统计F2分离群体分离比(表1)，结果表明，正常表型的植株和突变体表型的植株的分离比经过卡方检验接近3:1分离，这表明nal13的窄叶表型是由一对单隐性核基因控制。
表1突变体NAL13的遗传分析
Figure BDA0002880942280000061
实施例4、NAL13基因的基因定位
利用本实验室保存的均匀分布于水稻12条染色体的262对SSR引物对突变体与TN1进行多态性筛选，筛选到134对SSR引物具有多态性。然后用21个nal13/TN1中F2具有窄叶的单株进行连锁分析，初步确认目标基因所在的染色体位置。基因组DNA采用CTAB法提取。具体步骤如下：
①、称取0.1g的水稻叶片用液氮研磨成粉状，然后加入600μl的CTAB溶液(2％(m/V)CTAB，100mmol/L Tris-Cl，20mmol/L EDTA，1.4mol/L NaCl；pH8.0)配制的DNA提取缓冲液，65℃水浴40分钟。再加600μl的氯仿:异戊醇(24:1的体积比)，并混匀。10,000rpm离心5分钟，将上清液转移到新的离心管中。
②、在上述步骤①离心后所得的上清液中加2/3～1倍体积预冷(4℃)的异丙醇，轻轻混匀至DNA沉淀。13,000rpm离心8分钟，倒出上清液。
③、再用70％(体积浓度)的已醇200μl洗涤上述步骤②所得的DNA沉淀物。
④、将上述洗涤后的DNA晾干并溶于100μl TE缓冲液或纯水中。
⑤、紫外分光光度法检测上述步骤④所得的DNA样品的浓度，0.7％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性。完整合适的DNA用于PCR扩增，不完整的DNA则重新提取，直至获得完整的DNA。
PCR反应体系采用10μL体系：DNA模板1μL，10×PCR缓冲液1μL，正反向引物(10μmol/L)各0.5μL，dNTPs 1μL，rTaq酶0.2μL，加ddH2O补足10μL。PCR扩增程序如下：94℃下预变性4min；94℃下变性30s，55℃～60℃下退火30s(温度因引物不同而异)，72℃下延伸30s，40个循环；最后72℃下延伸10min。PCR产物用4％琼脂糖凝胶电泳，电泳结束后在凝胶成像仪拍照并读胶。
利用上述筛选的134对SSR引物进行NAL13基因连锁分析发现在第9号染色体的SSR标记P1处表现出连锁现象。在连锁标记上下游设计新的Indel标记，用这21个单株将目的基因区间锁定在分子标记B7-6与B7-8之间。在此区间再次设计新的分子标记，用701个F2单株最终将该基因定位在M4和M5之间大约530kb的区间内。引物序列见表2。
表2基因定位所用分子标记
Figure BDA0002880942280000071
根据水稻基因组数据库(http://rice.plantbiology.msu.edu/)数据信息，发现共有71个开放阅读框(ORF)。其中包括了17个表达蛋白，29个反转座子蛋白，23个功能蛋白。利用PCR的方法，将突变体和野生型中基因组序列扩增出来，测序分析，基因LOC_Os07g23570的第二个外显子上的第313位核苷酸C替换为T，Gln变成终止密码子，翻译提前终止。
水稻窄叶基因NAL13的核苷酸序列为SEQ ID NO：1，水稻窄叶突变体对应野生型中花11的核苷酸序列为SEQ ID NO：2。
水稻窄叶突变体基因NAL13所编码蛋白质的氨基酸序列如图7所述。野生型中花11所编码蛋白质的氨基酸序列如图8所述。
说明：NAL13的核苷酸序列为SEQ ID No：1，该基因编码的氨基酸序列如图7所述，野生型序列为SEQ ID No：2，野生型基因编码的氨基酸序列如图8所述，NAL13发生突变所以导致翻译提前终止。
实施例5、植物转化与功能验证
扩增中花11中NAL13基因的5’-UTR至3’-UTR的基因组DNA片段(即，SEQ ID NO：2)。然后连入pEASY-Blunt Cloning Vector(TransGen Biotech公司)中，之后再连入到pCAMBIA1300载体中，得pCAMBIA1300-NAL13。
质粒通过电击的方法转入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)株系EHA105中转化水稻。利用NAL13成熟胚诱导的愈伤组织，经过诱导培养基培养2周后，挑选生长旺盛的愈伤用作转化的受体。用含有双元质粒载体(pCAMBIA1300-NAL13)的EHA105菌株侵染水稻愈伤，在黑暗、25℃条件下共培养2天后，在含有50mg/L Hygromycin的筛选培养基上光照培养14天左右(光照强度为13200LX，温度为32℃)。将预分化的愈伤转至分化培养基上在光照条件下(光照强度为13200LX，温度为32℃)培养一个月左右得到抗性转基因植株。对互补植株cp的表型进行观察与分析，发现互补植株的叶片大小恢复到正常(图6)。
备注说明：上文中提及的各项培养基(诱导培养基、筛选培养基、分化培养基)均为常规培养基。
实施例6、水稻窄叶基因NAL13在水稻育种中的应用
在生产实践中，可将上述基因转化植物细胞，再将转化后的植物细胞培育成植株。通过该转基因方法，利用植物表达载体转化植物细胞以改良水稻叶片大小。
最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的若干个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
序列表
<110> 浙江师范大学
<120> 水稻窄叶基因NAL13及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1560
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 1
atggccatgg gattgttagc gtggatggtg gcagcggccg cggcggcggt gctggcgtcg 60
tgggcgttca gcgcggtggt gcacctggtg tggaggcccc gcgccatcag caggcgcctc 120
cgggcacagg gcgtgggcgg gccgggctac aggttcttct ccggcaacct cggagagatc 180
aagaggttcc gcggcgatgg cgctggcgtc gtgctcaacg tctcctccca tgacttcctc 240
cccattgtac agccacattt ccgcaagtgg attcccctat atggaaggac attcctgtat 300
tggttcggag catagccaaa catatgcttg gctgacgtga gcatggtgtg gcaggtattg 360
tcagaccgga cggggatata ccccaagaac ctgacgaacc ctcactttgt gcgtctactt 420
ggcaaggggc ttgtgctcac tgacggcgat gagtggaagc gccaccgcaa ggtggtccac 480
ccggccttta acatggacaa gctcaagatg atgacgatga ccatgtctga ctgctctcgg 540
tccatgatgt cggagtggga atcggagttg gcggcgaagg gtggtcttgt tgagattgag 600
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agctacaagg aggggaagca ggtcttcctg gcacagaggg agctccaatt tcttgccttc 720
tccaccttcc tcactgttca aattccaggg tttagctacc ttccgaccat gaaaaacttc 780
aagacatggt cgctcgacaa gaaggtgagg ggcatgctca tggacatcat caagacccgg 840
catgccaaca aggatgtagc tgggtatggg aatgacctac ttgggttgat gctggaggca 900
tgtgcgccgg agcacgggga gagctgccca caactgagca tggatgagat cattgacgag 960
tgcaagacct tcttttttgc agggcatgac accacatcac acttgctcac ctggaccatg 1020
ttcctgctga gcacgcaccc agattggcag gagaaattaa gggaggagat tgcaatggag 1080
tgtggtgaca aggtgcccac tggtgacatg ctcaacaagc taaagatggt caacatgttc 1140
ctcctagaga ccctaaggct gtacagccct gtctcactca tacggaggaa ggttgacact 1200
gatattgagc tcggcggcat caagatgcct gagggtgcac tattgacgat cccgatcgcg 1260
acaattcacc gtgacaagga agtgtggggg gaggatgcgg atgagtttag gccggagagg 1320
ttcgagaatg gggtgacgag ggcagcgaag caccccaacg cactactctc cttctccagc 1380
ggaccgaggt catgcattgg gcagaacttt gcaatgatcg aggccaaggc tgtcattgcc 1440
atgatcctac agaggttctc cttcactttg tcccccaagt acgtccatgc acccactgat 1500
gtgatcacgc tgcgtcccaa gtacgggctc cctatgatcc tcaagagcct caagctgtag 1560
<210> 2
<211> 1560
<212> DNA
<213> 水稻(Oryza sativa)
<400> 2
atggccatgg gattgttagc gtggatggtg gcagcggccg cggcggcggt gctggcgtcg 60
tgggcgttca gcgcggtggt gcacctggtg tggaggcccc gcgccatcag caggcgcctc 120
cgggcacagg gcgtgggcgg gccgggctac aggttcttct ccggcaacct cggagagatc 180
aagaggttcc gcggcgatgg cgctggcgtc gtgctcaacg tctcctccca tgacttcctc 240
cccattgtac agccacattt ccgcaagtgg attcccctat atggaaggac attcctgtat 300
tggttcggag cacagccaaa catatgcttg gctgacgtga gcatggtgtg gcaggtattg 360
tcagaccgga cggggatata ccccaagaac ctgacgaacc ctcactttgt gcgtctactt 420
ggcaaggggc ttgtgctcac tgacggcgat gagtggaagc gccaccgcaa ggtggtccac 480
ccggccttta acatggacaa gctcaagatg atgacgatga ccatgtctga ctgctctcgg 540
tccatgatgt cggagtggga atcggagttg gcggcgaagg gtggtcttgt tgagattgag 600
ctaagcaggc ggttcgagga gctcactgcc gatgtgatct cgcacacggc gtttggtagc 660
agctacaagg aggggaagca ggtcttcctg gcacagaggg agctccaatt tcttgccttc 720
tccaccttcc tcactgttca aattccaggg tttagctacc ttccgaccat gaaaaacttc 780
aagacatggt cgctcgacaa gaaggtgagg ggcatgctca tggacatcat caagacccgg 840
catgccaaca aggatgtagc tgggtatggg aatgacctac ttgggttgat gctggaggca 900
tgtgcgccgg agcacgggga gagctgccca caactgagca tggatgagat cattgacgag 960
tgcaagacct tcttttttgc agggcatgac accacatcac acttgctcac ctggaccatg 1020
ttcctgctga gcacgcaccc agattggcag gagaaattaa gggaggagat tgcaatggag 1080
tgtggtgaca aggtgcccac tggtgacatg ctcaacaagc taaagatggt caacatgttc 1140
ctcctagaga ccctaaggct gtacagccct gtctcactca tacggaggaa ggttgacact 1200
gatattgagc tcggcggcat caagatgcct gagggtgcac tattgacgat cccgatcgcg 1260
acaattcacc gtgacaagga agtgtggggg gaggatgcgg atgagtttag gccggagagg 1320
ttcgagaatg gggtgacgag ggcagcgaag caccccaacg cactactctc cttctccagc 1380
ggaccgaggt catgcattgg gcagaacttt gcaatgatcg aggccaaggc tgtcattgcc 1440
atgatcctac agaggttctc cttcactttg tcccccaagt acgtccatgc acccactgat 1500
gtgatcacgc tgcgtcccaa gtacgggctc cctatgatcc tcaagagcct caagctgtag 1560

Claims (6)

1.水稻窄叶基因NAL13，其特征在于：所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；
水稻窄叶基因NAL13使水稻的叶片变窄。
2.一种含有权利要求1所述基因的重组载体。
3.一种含有权利要求1所述基因的转化体。
4.一种调控禾本科植物水稻叶片大小的方法，其特征在于：包括用如权利要求1所述的基因转化水稻细胞，再将转化后的水稻细胞培育成植株；所述水稻的叶片变窄。
5.如权利要求1所述基因的用途，其特征在于：改良水稻株型，使水稻的叶片变窄。
6.根据权利要求5所述基因的用途，其特征在于：使水稻的分蘖增多，茎秆变细。
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