CN111218457A

CN111218457A - 一种水稻mit2基因及其编码蛋白与应用

Info

Publication number: CN111218457A
Application number: CN202010302486.XA
Authority: CN
Inventors: 李学勇; 常颖; 赵金凤; 谢婷婷; 房静静; 袁守江
Original assignee: Institute of Crop Sciences of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Institute of Crop Sciences of Chinese Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2020-04-17
Filing date: 2020-04-17
Publication date: 2020-06-02
Anticipated expiration: 2040-04-17
Also published as: CN111218457B

Abstract

本发明提供一种水稻MIT2基因及其编码的蛋白，其编码区序列如SEQ ID No.2所示，其编码蛋白序列如SEQ ID No.3所示。该基因在多个组织中表达。实验证明MIT2具有抑制水稻分蘖的功能，使水稻植株变高。本发明还提供了MIT2基因的突变基因及其等位突变体mit2‑1，它们使水稻表现为株高变矮、分蘖中度增多，枝梗数变少，育性降低，籽粒变小，颖壳开口。本发明提供的水稻MIT2基因及其突变体在水稻种质资源的遗传改良育种中作用重大，有望对水稻株型的形成、分蘖数进行调控，进而对株型或分蘖数定向设计以提高水稻生产力。

Description

一种水稻MIT2基因及其编码蛋白与应用

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体地说，涉及一种水稻MIT2基因、其编码的蛋白及其在抑制水稻分枝中的应用。

背景技术

水稻(Oryza sativa)属于禾本科稻属，是最重要的粮食作物之一。水稻分蘖是一个非常重要的农艺性状，一个有效分蘖对应一个穗。分蘖是决定水稻产量的关键因素。水稻分蘖不仅是水稻产量相关的重要因素，也是在生物讨论中与植物株型相关的核心主题。与分蘖相关的一些基因和Quantitative Traits Location (QTL)已经被定位出来。因此，进一步挖掘水稻分蘖调控基因，阐明分蘖机制，对于水稻株型塑造，提高水稻产量意义重大。

水稻分蘖的形成过程分为两个步骤，即分蘖芽的形成和分蘖芽的伸长。水稻每片叶的叶腋里能形成一个分蘖芽（也称腋芽、侧芽），通常只有位于茎秆基部不伸长节间上的腋芽才可以进行伸长形成分蘖，而位于茎杆上部伸长节间上的腋芽一般不能伸长，而是处于休眠状态。因此，水稻的分蘖数量不仅取决于形成分蘖芽的数目，更取决于能够伸长的分蘖芽的数目。水稻分蘖的形成是一个复杂的生物学现象，受遗传因素、植物激素和外界环境等多种因素的共同调控。其中参与植物分枝调控的激素主要包括生长素、细胞分裂素、独脚金内酯及其衍生物，这些激素协同作用，共同调控植物的分枝发育。外界环境条件包括光照、温度、水分、栽培密度、插秧深度以及植株的营养状况也会影响水稻分蘖的分化和生长。

第一个被发现的调控水稻分蘖的关键基因是MOC1,MOC1属于GRAS家族，编码一个转录调控因子。在分蘖芽中表达，在腋生分生组织营养生长与生殖生长的不同阶段调控分蘖芽的起始和生长。水稻突变体moc1几乎完全丧失分蘖能力，只有1个主茎,没有分蘖出现,圆锥花序上的小穗也明显减少，说明MOC1在水稻分蘖和穗分枝上起到正调控的作用。水稻TB1基因是根据玉米的分支调控基因TEOSINTE BRANCHED 1 (TB1)的相似序列克隆出来的。

研究显示OsTB1处于独脚金内酯(Strigolactones)信号途径的下游，这两个基因都编码推测的转录因子，它具有一个基本的螺旋-环-螺旋状的DNA结合基序，命名为TCP结构域。OsTB1的基因位点证明与玉米TB1是同源基因。发现OsTB1的过表达使分蘖数减少，而在fc1突变体中分蘖增加，并且OsTB1功能缺失。这些结果显示OsTB1负调控水稻分枝，和玉米中TB1基因功能相似。以水稻多分蘖突变体te为材料，通过图位克隆和转基因验证，分离到一个水稻分蘖的负调控因子TE，具有保守的细胞周期调控功能。实验显示 TE和MOC1存在直接的相互作用；遗传学实验也证明TE和MOC1在同一条信号通路上。TE通过介导MOC1的降解来抑制水稻的分蘖。IPA1蛋白可以与前述的水稻分蘖负调节因子OsTB1基因的启动子区GTAC序列相结合，这种结合可以发生在茎尖和幼穗中。ostb1与ipa1的双突变体表型显示，ostb1的突变可以抑制ipa1的分蘖表型，说明ipa1突变体的分蘖表型可能是由于IPA1基因通过OsTB1直接调控的，预示OsTB1可能参与了IPA1介导的针对水稻分蘖的转录调节。

生长素(Auxin) 是第一种被发现的植物激素，合成于植物茎尖与幼嫩的叶中，在植物生长发育过程中具有重要的作用。生长素通过顶端优势抑制分蘖芽的生长；生长素由上往下主动运输，并直接输送到分蘖芽中，抑制分蘖芽的生长发育。YUC是生长素合成途径中的一个关键基因，主要在水稻分生组织、维管组织中表达。研究发现，YUC的缺失会导致生长素的合成大幅减少,从而使植物失去顶端优势，水稻分蘖芽就会打破休眠并开始正常的生长发发育，最终发育成新的分蘖。OsPIN1是编码生长素转运蛋白的基因，定位在木质部薄壁细胞中，调控生长素向根中转运。OsPIN1的功能缺失会导致生长素运输量的降低，使生长素对侧芽生长发育的抑制效果减弱，促进水稻分蘖芽的伸长。

独角金内酯是一类倍半萜烯化合物，鉴定为一种新的植物激素。在阐明水稻分蘖方面重大的突破就是发现了独脚金内酯，它主要合成于根部,由类胡萝卜素代谢产生，由下向上运输,抑制分蘖芽的生长。独角金内酯就是除生长素和细胞分裂素外一种新的能够抑制侧枝发育的植物激素。目前，独角金内酯已经从许多植物中分离得到，而涉及独角金内酯合成与信号转导的基因也陆续在高等植物如拟南芥、豌豆、矮牵牛、水稻以及低等植物苔藓中被发现。在水稻中，多个基因被证实参与独角金内酯介导的侧枝发育过程。D17/ HTD1和D10编码的胡萝卜素裂解双加氧酶7( CCD7)和 8( CCD8)是独角金内酯合成途径的两个关键酶。研究人员从腋生分枝增多的拟南芥突变体中克隆了MAX1至MAX4基因，MAX1，MAX3和MAX4都参与独脚金内酯的生物合成，MAX2参与独脚金内酯的信号传递。水稻中D3编码一个F－BOX蛋白家族成员，是拟南芥MAX2的同源蛋白，通过形成SCF(Skp1－Cull-in－F－box)蛋白复合体，参与蛋白泛素化并介导蛋白质降解，是独角金内酯信号转导途径的关键基因。水稻基因D27和D14，也被证实是独角金内酯合成与信号转导途径的成员。D27编码一个新的含铁蛋白，并影响生长素的极性运输( PAT)，参与独角金内酯的合成。D14/ D88/ HTD2编码一个水解酶/ 酯酶，是独角金内酯的信号受体。这些水稻突变体都表现为多分蘖、矮秆表型，独角金内酯控制腋芽的发育，并和生长素、细胞分裂素一起，共同决定水稻的株型。

大量的生理生化数据表明，激素之间存在着一定联系。生长素通过促进独角金内酯的合成来抑制水稻分蘖的形成。而独角金内酯信号分子也通过一条反馈途径抑制生长素信号途径和另外一种未知的反馈调节信号，这两种信号通路均可调节独角金内酯在质体内的生物合成。独角金内酯和生长素能根据环境信号相互调节对方在植物体内的含量，并形成一个动态的反馈循环，共同调节植物的分枝。尽管关于植物激素调控水稻的分蘖已有大量的研究报道，但是它们之间具体的相互关系以及它们是如何协作调控分蘖芽的生长发育还需要进一步的研究。

发明内容

本发明目的是提供水稻MIT2基因及其编码的蛋白与应用。

本发明以水稻日本晴为材料进行EMS诱变，希望筛选到能够调控水稻分蘖，影响水稻产量的关键基因。发明人致力于筛选水稻的分蘖数目中度程度增加的突变体。因为过多的分蘖对水稻高产不利，大部分营养用于水稻的营养生长，而不利于生殖生长。从突变体库中发明人筛选得到多个具有中度分蘖数目的突变体，命名为Moderately IncreasedTiller（MIT）突变体，获得突变体按照发现的顺序分别命名为MIT1，MIT2……等等。这些突变体的突变基因不同，在调控水稻分蘖过程中的作用也不尽相同。本发明针对MIT2基因及其功能进行了研究。发明人发现EMS诱变的水稻突变体中有呈现半矮，植株分蘖数目中度增多的突变体mit2，图位克隆和功能互补实验发现MIT2基因突变后引起植株变矮，分蘖数目中度程度增加。MIT2基因编码一个功能未知的蛋白。本发明将阐述MIT2在调控水稻分蘖过程中的作用。

本发明首先提供了水稻MIT2蛋白，其具有：

1）如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列；或

2）SEQ ID No.3所示的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸且具有同等活性的由1）衍生的蛋白质。

本发明提供了编码水稻MIT2蛋白的基因，其具有：

1）SEQ ID No.2所示的核苷酸序列；或

2）SEQ ID No.2所示核苷酸序列经取代、缺失和/或增加一个或几个核苷酸；或

3）在严格条件下与1）限定的DNA序列杂交的核苷酸序列。

本发明提供了含有编码水稻MIT2蛋白的基因的生物材料，所述生物材料为质粒、载体、宿主菌或转化植物细胞。

本发明提供了上述水稻MIT2蛋白或其编码基因或含有其编码基因的生物材料的以下任一种或多种应用：

（1）在制备转基因植物中的应用；

（2）在水稻种质资源改良中的应用；

（3）在保持水稻育性中的应用；

（4）在使水稻籽粒增大中的应用；

（5）是增加水稻株高中的应用

（6）抑制水稻分蘖中的应用。

第二方面，本发明提供了一种水稻MIT2基因突变基因，其为水稻MIT2基因第8个外显子上，CDS的第2413位的碱基T缺失，所述CDS的序列为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

第三方面，本发明提供了所述水稻MIT2基因突变基因的等位突变体，所述等位突变体的突变位点发生在第一个内含子的3’端拼接位点处，由原来的AG变成AA，第二个外显子的5’端的前两个碱基AG被剪切掉。

本发明提供一种生物材料，含有上述水稻MIT2基因突变基因或上述的等位突变体，所述生物材料为质粒、载体、宿主菌或转化植物细胞。

第四方面，本发明提供了所述水稻MIT2基因突变基因或所述的等位突变体或含有其的生物材料的以下任一种或多种应用，

（1）在农作物改良育种、制种中的应用；

（2）在降低农作物株高中的应用；

（3）在增加水稻分蘖数中的应用；

（4）在降低水稻育性中的应用；

（5）在培育籽粒变小的水稻中的应用；

（6）在提高水稻产量中的应用。

上述应用中，所述降低农作物株高为与野生型相比降低至50%-60%株高。本发明的实施例中，发现水稻MIT2基因突变基因或所述的等位突变体的表型为成熟期株高稍矮，为野生型的60%。

上述应用中所述增加水稻分蘖数是与野生型相比增加2-3倍的分蘖数。在本发明的实施例中，发现水稻MIT2基因突变基因或所述的等位突变体增加水稻分蘖数是野生型的2倍。

本发明的优点在于：本发明提供了水稻MIT2基因（核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，编码区核苷酸序列如SEQ ID No.2）及其编码的蛋白（氨基酸序列如SEQ ID No.3所示）。因EMS诱变获得的水稻MIT2基因突变体及该突变基因的等位突变体与野生型相比有若干基因的缺失或突变，采用实验室常用的琼脂糖电泳就能开展分子检测，即能够实现鉴别，不需要特别的检测技术和方法。将过表达MIT2基因功能互补载体和自身启动子驱动的MIT2基因组互补载体通过农杆菌介导转化mit2突变体的愈伤组织，发现互补转基因植株的表型完全恢复正常，分蘖数和株高都和野生型一致，说明MIT2基因具有抑制水稻分蘖的功能，有望对水稻株型的形成进行调控进而对株型定向设计，以提高水稻生产力，在水稻种质资源改良中筛选效果明显，经济价值巨大。

附图说明

图1为野生型日本晴与突变体的表型。（A）成熟期表现；（B）分蘖表型；（C）突变体具有高节位分蘖；（D）穗型；（E）穗部枝梗表现；（F）籽粒表型；（G）株高统计；（H）分蘖数统计。

图2为MIT2基因定位与结构图。（A）粗定位；（B）精细定位；（C）MIT2基因结构图。

图3为MIT2基因的功能互补验证。(A) 过表达MIT2能够回补突变体表型；（B）自身启动子驱动的MIT2基因组能够回补突变体表型；（C）株高统计；（D）分蘖数统计。

图4为MIT2在水稻各个组织中的表达。

图5为水稻组织GUS染色结果。（A）节间；（B）叶鞘；（C）幼穗；（D）小穗；（E）颖壳；（F）茎基部；（G）分蘖芽；（H）根。

图6为MIT2蛋白的亚细胞定位。

图7为载体pCAMBIA 1305.1AP FH-N结构示意图。

图8为pCAMBIA 1305.1-GFPC结构示意图。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段；若未特别指明，实施例中所用试剂均为市售。

实施例1 突变体的获得与表型分析

通过EMS化学诱变粳稻品种日本晴，得到一个分蘖中度增多突变体Moderately Increased Tiller-2 (mit2)及其等位突变体mit2-1。mit2突变为碱基缺失，其等位突变体mit2-1有着与其相似的矮化多分蘖表型，突变为碱基替换。

表型分析表明，突变体与野生型相比有着多方面的改变（图1）。水稻mit2突变体植株高度较野生型变矮，成熟期株高稍矮，约为野生型的60%，各节间等比例一定程度的缩短；mit2突变体分蘖中度增多，约为野生型的二倍。突变体mit2及其等位突变体枝梗数变少，育性降低，籽粒变小，颖壳开口。

实施例2 水稻MIT2基因的获得和功能互补验证

1、水稻MIT2基因的获得

本发明的MIT2基因是采用图位克隆方法通过突变体mit2克隆得到的。将纯合突变体mit2与表型正常且多态性高的籼稻品种Dular杂交，所有杂交 F₁ 中个体均表现为株高和分蘖数正常。F₂获得分离群体，进行遗传分析与基因定位。对F2代发生性状分离的株系分析表明，野生型与突变体的分离比例符合3:1遗传分离比例，由此表明该突变性状受一对隐性基因控制。

为了定位控制该分蘖中度增多突变体基因的位置，我们利用F1代自交构建的 F₂分离群体作为定位的群体，以 BSA 法选取l0株 F₂ 突变单株构建DNA混池，利用均匀分布于水稻12条染色体上的170个Indel标记，将候选基因定位于第9号染色体上（图2的A）。为了明确候选基因在第9号染色体上的位置，选用50个单株利用实验室开发的均匀分布在整个染色体上的分子标记（表1）进行了定位，结果显示候选基因定位在R9-1和R9-2标记之间。为了精细定位目的基因，将F₂定位群体扩大到6380株矮化分蘖中度增多个体，并开发了6对新的Indel标记，最终将目的基因定位在标记M3和M4之间（图2的B）。这两个标记之间的物理距离约为1.2 Mb，包含13个候选基因。并对其进行测序，发现基因LOC_Os09g06560发生突变。

LOC_Os09g06560基因组DNA全长6325 bp (如SEQ ID No.1所示序列)，包含12个外显子和11个内含子，编码区全长3378 bp (如SEQ ID No.2所示序列)，编码1125个氨基酸 (如SEQ ID No.3所示序列)。共设计13对引物进行测序，对基因测序结果分析发现，mit2突变位点位于第8个外显子上，CDS的第2413个碱基T缺失，造成翻译过程从第805个氨基酸开始移位。其等位突变体mit2-1突变位点发生在第一个内含子的3’端拼接位点处，由原来的AG变成AA，测序发现该突变导致该基因在拼接上发生错误，第二个外显子的5’端的前两个碱基AG被剪切掉（图2的C）。

2、MIT2基因的功能互补验证

本发明将MIT2基因克隆至植物表达载体pCAMBIA 1305.1AP FH-N和pCAMBIA 1305.1- GFPC（本实验室保存，载体结构如图7和图8所示），为了进行功能互补实验，分别构建了过表达MIT2基因功能互补载体（pCAMBIA 1305.1-Actinpro-FLAG-HA-MIT2CDS）和由自身启动子驱动的MIT2基因组互补载体（pCAMBIA 1305.1-MIT2pro-MIT2genomic DNA-GFP），分别带有FLAG和GFP标签，获得的转基因植株命名为B267和B270。

过表达MIT2基因功能互补载体（pCAMBIA 1305.1-Actinpro-FLAG-HA-MIT2CDS）的构建：在MIT2全长CDS的 5’端引入NcoI位点，3’ 端引入SpeI位点，片段长度为3378 bp。所用引物为09g06560S1SPF：CGAACGATAGCCATGGCCATGATATTTCAGCTAAGA AATGCG和09g06560S1SPR：GGTAGGATCCACTAGTCACTTTCACCT TCTTGCTGTTAGC。

自身启动子驱动的MIT2基因组互补载体（pCAMBIA 1305.1-MIT2pro-MIT2genomic DNA-CGFP）的构建：在MIT2基因ATG上游2460bp默认为MIT2基因的启动子，在其5’端位置引入 EcoRI 位点，MIT2基因组序列终止密码子TAA前的3’ 端引入KpnI位点。MIT2启动子序列2460bp；MIT2基因组序列5300bp，片段全长7760bp。启动子所用引物为：promF: CCATGATTACGAATTCTGCTATGCCGTTAGGTA GCAC和promR: CCCTTGCTCACCATGGTACCCTGAAATATCATTGCTAACCATCA；基因组所用引物序列为GDNAF: CAATGATATTTCAGGGTACCATGATATTTCAGCTAAGAAATGCG和GDNAR: CCCTTGCTCACC ATGGTACCCACTTTCACCTTCTTGCTGTTAGC。将两种片段一同重组到pCAMBIA1305.1-CGFP中去。

将构建好的两个表达载体用电击法转入农杆菌EHA105中，水稻mit2突变体结的种子诱导愈伤作为受体材料，用农杆菌介导的转化方法进行水稻的转化。获得的转基因植株的表型完全恢复正常，分蘖数和株高都和野生型一致（图3），突变体枝梗数，育性以及硬壳开口情况也恢复成野生型的表型，说明过表达MIT2能够回补突变体表型、自身启动子驱动的MIT2基因组能够回补突变体表型。以上结果证明了LOC_Os09g06560就是目的基因MIT2。

实施例3 水稻MIT2基因表达模式

为明确MIT2基因的组织表达模式，提取粳稻品种日本晴不同组织（种子、根、茎、叶、叶鞘、幼穗、花、分蘖芽、幼苗、幼根）的RNA，反转录为cDNA，以水稻Ubiquitin基因为内参，采用Real-time PCR的方法检测水稻各个组织中该基因表达水平，结果显示MIT2基因在水稻上述组织中都有表达，其中在幼根中表达量最高，其次在幼穗种子、幼苗中表达量较高，在叶鞘、分蘖芽中也有表达，在种子和成熟根中相对较低(图4)。

实施例4 水稻组织GUS染色结果

MIT2promoter::GUS载体构建：MIT2启动子区通过PCR扩增获得，在5’ 端引入BamHI位点，3’端引入NcoI位点, 片段长为2460 bp，重组到pCAMBIA1305.1的BamHI和NcoI位点中去。所用正向引物：CGGTACCCGGGGATCCTGCTATGCCGTTAGGTAGCAC；反向引物：CTCAGATCTACCATGGGAAATATCATTGCTAACCATCA。利用农杆菌侵染水稻愈伤的方法获得转基因植株，用于分析基因组织表达模式。

利用GUS（β-glucuronidase）基因作为报告基因检测MIT2基因表达的空间分布情况。在节间、叶鞘、茎基部和分蘖芽中均能检测到GUS活性。在成熟根、花药中GUS几乎没有活性（图5）。

实施例5 MIT2蛋白的亚细胞定位

在实施例2中构建的自身启动子驱动的MIT2基因组互补载体融合有GFP标签，获得的转基因植株B270。在转基因种子萌发时期，用激光共聚焦显微镜进行观察水稻根尖GFP的亚细胞定位，结果显示MIT2-GFP蛋白在根尖部位主要在细胞核中表达（图6）。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 中国农业科学院作物科学研究所

<120> 一种水稻MIT2基因及其编码蛋白与应用

<130> KHP201111154.6YS

<160> 31

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 6325

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

catcgccaac gcccgctcca gcctttcggc aacggagcct cctccacgcc acgtcagcct 60

cttcggtgac gacctccttg cctccaccgc tgccaaacgc gccggcctcg tcgtccgacc 120

gtcacttgca ttgtcctcgt cctccgccat cgaccatgac cgtgcttcgt catgtcgccc 180

tgtgccgccc cgctcctcca ccgggccgcc gtcaccgcga gcgccattgc tgttgaggga 240

ttcggcaccg ccggagttgc ccgctcccaa tcttgctgca ggagggctag atgcgcatcc 300

ggcgtggcca aattggccgc gccgagtact ctacccaccg gtgcatgcca ctccacctcc 360

cgtgccgaga agaagcgtca ttaacttgtt ttgcctgcca ccgccttctt ggttggccgc 420

tcggtttccg acggtggcga tgcagcaaga aagagtgagg aaggtggcgg tgttttgccg 480

ccagccgccc gcgcaagagc aatgctggga caaggaaaaa aaaatccaaa agtatataac 540

gtgctggact ttgactaaaa agcacaattt tttttattgt gatggttagc aatgatattt 600

cagctaagaa atgcgatagt taaacatata ttccttttga gtttattttt gaaaatatcc 660

ctaccttacc tccgccactg cggccgtgaa attcggtgta tttttcccgc ggtactccac 720

caaaagcttc ccgccaaacg tcctttcccg cgcgggggga cgcgccaaaa cccaccaaaa 780

tgtctgcaac caaaacccca ccccgcgtat cgtcaatctc tggaaacccc taacaaattc 840

ctgaacaccc gccgccacca tagcttcagc ctcgtgggtg aagaatctct cgtcgtcgtc 900

gtcggtgtca ccatgaaagg gcgcgcggtg aagctccgag aggcgcacaa ggccggctcg 960

ccagtcttct gctccgttgc gtggggccaa ggcgggcagc atgtcgtcac cgcatccgcc 1020

gccgacgtgg ccatcctcat ccatgacgcc gctgcggtcg ccgccgccgg tggccggagc 1080

tcgggctccg cggctgcggc ggcgctttcc acgatccggc ttcacaagga tggcgtcacg 1140

gcgctcgccg tcgcgccggg ctccggcgcg tcgctggcgt ccggctccat cgatcactcc 1200

gtcaagttct gttctttccc aggttcttag atctgactgc cccggatgca atttctccta 1260

atctccgtca tttccacggc tatatttgtg aaattttgct tcggatttcc ttccagaggg 1320

ggtgttccag agcaatatcg cccggttcac cctgccgatc cggtcactgg ccttcaacaa 1380

gaaggggact ctgctggcgg cggccggaga cgacgacggc atcaagttga ttgccaccat 1440

cgacaacacc atctccaaag tgctcaaggg ccacaaggga tcggtaaccg ggttgtcttt 1500

cgatcccaga aacgattatt tggcatcaat tgacaccttc ggcacagtca tcttctggga 1560

tctctgcacg gggactgaag cccgtagtct gaagcggatt gcgccgacat ttggttcaga 1620

ccactcaatc aacaatgccc tgtgctggag ccctgatggg cagttccttg ctgttccggg 1680

attgaggaat aatgtggtca tgtatgatag ggacaccggt gaggaggtgt tcactctgaa 1740

aggggagcat gagcaaccag tgtgtagtct ctgctggtct ccaaatggga ggtacctagt 1800

cactgctgga ttggataagc aggttctgat ctgggatgtg aagtcaaagc aggatgttga 1860

gaggcagaag ttcgatgaaa ggatatgtag cttggcttgg aaacctgaaa gtaatgctgt 1920

agcagtgatc gacgtaactg gcagatttgg catttgggaa tcggtcatcc cgtcgacttt 1980

gaaatcgccc acagagggtg cacctgacct gaactctact aaggttcctt tgtttgatga 2040

cgaggatgat gaggagaggc cgagtacctc tggtggactg gatgatgatg atgatgatga 2100

aagtcttggt gaattaggtc cattcaacca caagagattg aggaggaagt caacctatca 2160

tgatcactca aatggagata gtgaagatga ggatctgata cttcagatgg agtcacgcaa 2220

gagaatgaaa gatacacata gagataacaa ggaggttgct gataaggcaa taggtgattc 2280

agcaacttca gtaagactgg ttacagcaag aatgcaaact gcatttcagc ctgggtccac 2340

accacctcaa cctggcaagc gaaatttcct tgcctacaat atgcttggaa gtatcactac 2400

tatcgaaaat gaggggcatt cacatgtaga ggtaaaatct tctcaccctc tatcttataa 2460

gccattgtat cctctacttg tttgcagctt ggatgtgaat aaaccatccg aagttacttt 2520

gtttttcagg tagacttcca tgacaccgga agaggtccta gagttccttc gatgactgat 2580

tattttggtt tcacaatggc tgcactgaat gaatcaggaa gtgtctttgc aaatccatgc 2640

aagggtgaca agaatatgag cactcttatg taccgccctt tcagtagttg ggcaggcaac 2700

agtgaggtaa gttaactaaa tgaaattgtt gtttgccagc ttctgagata gggttgaagt 2760

ttaccacttt ggtgcttact ggactaattt gaaaattact tagtggtcaa tgaggtttga 2820

gggagaagaa gtgaaggctg tggctgttgg tgttggatgg gtcgctgcag ttacaacttt 2880

aaattttctg cgcattttca cagagggagg gttgcaggtt ttgtaacttc ctcaagcttt 2940

gtatttaagt ccttttttcc tgatgaatat acttgttagt cagtttgtga agttcatttt 3000

tttcctgaaa gaaagctgac tccttattag ttccgaaata cccaaaaaac caggttgtgc 3060

ctggtaatca gtttgtgaag ttcatttttt tcctgaaaga aaactgcctc cttattagtt 3120

ccgtaatacc caaaaaacca ggttgcttta gtttttttca gtgctatcta ctagagcttt 3180

cataaggcca aaatagctgt gaagtattaa caaaagaatt tatagtattt taaaaacaat 3240

taatgttata gaagaaaatt agattcatgc gactctcgac atgtttccaa ttaaatttat 3300

tggtcaagga aacattctat actaccaaca tttaaatgct gaaaccattt tttatttcta 3360

catccaatgt acagccgaaa ttgtcccgcc ctaaccatca gaagcacaga aattgttgta 3420

ctatgtaacc actcatgaat tataacttgt ggggcacgaa ttataacttt gactttttgc 3480

actcaagaaa ataattcagg gaatgcactt tccatgtaga tactagtaac ttttatcacc 3540

atttctcacc aagaagtggt ctacggaaca catttacatt tttagatcat taaaaatgct 3600

gttcatgaca ttggtcgtga cttacatagc aaagccaaac tacatattac taatcttgga 3660

tggtttttct tgatacatgc gagctggggg ttacataagc attcatgaat ctgatttaca 3720

tcattccctg tttgttactt gaagtgggaa aaattcaatt taatttactc attttatatt 3780

gtacttttac ctagcatgtc ttgattttca gatgcatatc ctcggtccgt ggcccaatta 3840

aaaactcttt aagttttgtc aaacacatct cttgattttc agatgcatat cctctcagtc 3900

ggtggcccag tggttactgc ggcaggccat ggagatcagc tagcgattgt gtctcatgct 3960

tcagattgtc tttcatcagg agaccaggta ttcagtatat gttcgtttga cttttggagc 4020

tttgtgtagt gatgatatat gttgtagcta gctatcactt atcagattgt cagcacctcc 4080

tagtgtacca tgattccaat cgtgtgaacc aattcacagt acatatgaac tgatggttga 4140

aatggtacta caagattctg aattgaaaca tggatttgtt catgattaac cctttcaggt 4200

gctggatgtt aaagtactga agatatctga atgtgctcaa tcattgtcca gccgacttgt 4260

tttaactcct gcctctaaat tatcttggtt tggtttcagt gagaatggtg aacttagttc 4320

ctttgattcc aaggtatgac caatgaacac tgtcaacaat tcaacatatc tttagttata 4380

tcatgggagt tttaaactga atattgttat ttctagggaa tactgagggt cttttctggt 4440

caattcggtg gaagctggat tccaatattt aggtatagta tctgcctgac aggttatgca 4500

ttttactact accaaagcac acttaataat tatatccaac tgcagttcaa tcaaggcaag 4560

aaaatccgaa gatgaaagcc actgggtggt gggcttagat gctaataata tattctgcat 4620

tctatgcaag tccccggagt cctatccaca ggtatgccta aatgcaactt ctcatgtgta 4680

caacttttga gtgttgatgt tccaacaaaa atagtacttc tatatgcaat tctcaaatat 4740

tgaaatttgt ttgtcgtttg acgtctttga ctgatcttat caggtgatgc ccaaacctgt 4800

tttgacaata cttgagctgt catttcctct tgcatcatct gaccttggtg ccaatagttt 4860

ggaaactgaa ttcatgatga ggaaactgca tctctcacag gtgcactgtg tttctttcag 4920

ttttgaaggg cagtatctgt gatattgttt ttaatcgttg ctgtttatct cagattcaaa 4980

agaaaataga agaaatggct gctttgggtc tggacacgat tgcattagat gatgaagcat 5040

tcaacatgga ggctgcactt gaccggtgca tcttgaggct catctccagc tgctgcaatg 5100

gtacaagact tgaactatgc tttttaccca taaatagtgc tttgcattaa attatttctt 5160

gttttatttc ttgatttcaa aaggtgataa gcttgtacga gctaccgagc ttgcaaaatt 5220

actaacactg gagaagtcaa tgaagggagc attgatgctt gttacacgct taaaacttcc 5280

catattgcaa gaaaggttca gtgccatact cgaggtgaaa ttcacaaccc ttatactgaa 5340

cctgcgtact tttagcactc taaaaatggc acattcaata tttaagaatt tatcatatgt 5400

tcaactgaag gttatgcaat ggcttcttgt aggagatgat gctaaacaat gcaaaaattg 5460

ccaatacatc tggtgttttc tccaatagta atacaaacta ctcaccatca ccagcgttga 5520

gcactcaagc agtcccacca gctaaggttg tgcaaaatgg aaacagcttg aagttaccta 5580

cattgcctaa actgaatcct gccgcccaac gaagcaatcc aactgaatca aacaaggcag 5640

aggtagaaca agcagacaat ttgaaagaaa tcagtacaaa ggtttcacct gcacaaactc 5700

cgttagttaa aattccaaaa aacagtgaaa tgggtgtaaa aacgaagaaa gataatgatg 5760

gagcatcaca tgcaactaca gttgatcaga acccaaaggg aggcagtggt caggttggcc 5820

ttaaaaacaa gagcgtcgat agctgcaatg gtgtacagcc tcagcggcca gttaacccct 5880

tcgcgaaatc ctcatcaagc aaagaacagc catcatccct ttttgattcc atcaagaaga 5940

tgaaggtcga aaatgagaag gttgacaaag ctaacagcaa gaaggtgaaa gtgtaactgc 6000

ttgtcattat ctcatgatct tcgggagcaa accagcagtt aggtatcctc cacctttact 6060

gacatatctg tgcttatatt tttcatttca gttgtgataa tgtaggtgaa aatcactatt 6120

tacttcttga gctacgtttt tgtgtatggc ttcagagctt aatttctagt tatgaggtgg 6180

tacacaatgt atgatagtaa acctgtttag atagtttgct tgttcctttt gttgattgct 6240

ttgatataca attacatttt cgtctgatta tatttaggat ttatgtatct cctacagata 6300

tataatggag tgcgcaggtt ggctg 6325

<210> 2

<211> 3378

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

atgatatttc agctaagaaa tgcgatagtt aaacatatat tccttttgag tttatttttg 60

aaaatatccc taccttacct ccgccactgc ggccgtgaaa ttcggtgtat ttttcccgcg 120

gtactccacc aaaagcttcc cgccaaacgt cctttcccgc gcggggggac gcgccaaaac 180

ccaccaaaat gtctgcaacc aaaaccccac cccgcgtatc gtcaatctct ggaaacccct 240

aacaaattcc tgaacacccg ccgccaccat agcttcagcc tcgtgggtga agaatctctc 300

gtcgtcgtcg tcggtgtcac catgaaaggg cgcgcggtga agctccgaga ggcgcacaag 360

gccggctcgc cagtcttctg ctccgttgcg tggggccaag gcgggcagca tgtcgtcacc 420

gcatccgccg ccgacgtggc catcctcatc catgacgccg ctgcggtcgc cgccgccggt 480

ggccggagct cgggctccgc ggctgcggcg gcgctttcca cgatccggct tcacaaggat 540

ggcgtcacgg cgctcgccgt cgcgccgggc tccggcgcgt cgctggcgtc cggctccatc 600

gatcactccg tcaagttctg ttctttccca gagggggtgt tccagagcaa tatcgcccgg 660

ttcaccctgc cgatccggtc actggccttc aacaagaagg ggactctgct ggcggcggcc 720

ggagacgacg acggcatcaa gttgattgcc accatcgaca acaccatctc caaagtgctc 780

aagggccaca agggatcggt aaccgggttg tctttcgatc ccagaaacga ttatttggca 840

tcaattgaca ccttcggcac agtcatcttc tgggatctct gcacggggac tgaagcccgt 900

agtctgaagc ggattgcgcc gacatttggt tcagaccact caatcaacaa tgccctgtgc 960

tggagccctg atgggcagtt ccttgctgtt ccgggattga ggaataatgt ggtcatgtat 1020

gatagggaca ccggtgagga ggtgttcact ctgaaagggg agcatgagca accagtgtgt 1080

agtctctgct ggtctccaaa tgggaggtac ctagtcactg ctggattgga taagcaggtt 1140

ctgatctggg atgtgaagtc aaagcaggat gttgagaggc agaagttcga tgaaaggata 1200

tgtagcttgg cttggaaacc tgaaagtaat gctgtagcag tgatcgacgt aactggcaga 1260

tttggcattt gggaatcggt catcccgtcg actttgaaat cgcccacaga gggtgcacct 1320

gacctgaact ctactaaggt tcctttgttt gatgacgagg atgatgagga gaggccgagt 1380

acctctggtg gactggatga tgatgatgat gatgaaagtc ttggtgaatt aggtccattc 1440

aaccacaaga gattgaggag gaagtcaacc tatcatgatc actcaaatgg agatagtgaa 1500

gatgaggatc tgatacttca gatggagtca cgcaagagaa tgaaagatac acatagagat 1560

aacaaggagg ttgctgataa ggcaataggt gattcagcaa cttcagtaag actggttaca 1620

gcaagaatgc aaactgcatt tcagcctggg tccacaccac ctcaacctgg caagcgaaat 1680

ttccttgcct acaatatgct tggaagtatc actactatcg aaaatgaggg gcattcacat 1740

gtagaggtag acttccatga caccggaaga ggtcctagag ttccttcgat gactgattat 1800

tttggtttca caatggctgc actgaatgaa tcaggaagtg tctttgcaaa tccatgcaag 1860

ggtgacaaga atatgagcac tcttatgtac cgccctttca gtagttgggc aggcaacagt 1920

gagtggtcaa tgaggtttga gggagaagaa gtgaaggctg tggctgttgg tgttggatgg 1980

gtcgctgcag ttacaacttt aaattttctg cgcattttca cagagggagg gttgcagatg 2040

catatcctct cagtcggtgg cccagtggtt actgcggcag gccatggaga tcagctagcg 2100

attgtgtctc atgcttcaga ttgtctttca tcaggagacc aggtgctgga tgttaaagta 2160

ctgaagatat ctgaatgtgc tcaatcattg tccagccgac ttgttttaac tcctgcctct 2220

aaattatctt ggtttggttt cagtgagaat ggtgaactta gttcctttga ttccaaggga 2280

atactgaggg tcttttctgg tcaattcggt ggaagctgga ttccaatatt tagttcaatc 2340

aaggcaagaa aatccgaaga tgaaagccac tgggtggtgg gcttagatgc taataatata 2400

ttctgcattc tatgcaagtc cccggagtcc tatccacagg tgatgcccaa acctgttttg 2460

acaatacttg agctgtcatt tcctcttgca tcatctgacc ttggtgccaa tagtttggaa 2520

actgaattca tgatgaggaa actgcatctc tcacagattc aaaagaaaat agaagaaatg 2580

gctgctttgg gtctggacac gattgcatta gatgatgaag cattcaacat ggaggctgca 2640

cttgaccggt gcatcttgag gctcatctcc agctgctgca atggtgataa gcttgtacga 2700

gctaccgagc ttgcaaaatt actaacactg gagaagtcaa tgaagggagc attgatgctt 2760

gttacacgct taaaacttcc catattgcaa gaaaggttca gtgccatact cgaggagatg 2820

atgctaaaca atgcaaaaat tgccaataca tctggtgttt tctccaatag taatacaaac 2880

tactcaccat caccagcgtt gagcactcaa gcagtcccac cagctaaggt tgtgcaaaat 2940

ggaaacagct tgaagttacc tacattgcct aaactgaatc ctgccgccca acgaagcaat 3000

ccaactgaat caaacaaggc agaggtagaa caagcagaca atttgaaaga aatcagtaca 3060

aaggtttcac ctgcacaaac tccgttagtt aaaattccaa aaaacagtga aatgggtgta 3120

aaaacgaaga aagataatga tggagcatca catgcaacta cagttgatca gaacccaaag 3180

ggaggcagtg gtcaggttgg ccttaaaaac aagagcgtcg atagctgcaa tggtgtacag 3240

cctcagcggc cagttaaccc cttcgcgaaa tcctcatcaa gcaaagaaca gccatcatcc 3300

ctttttgatt ccatcaagaa gatgaaggtc gaaaatgaga aggttgacaa agctaacagc 3360

aagaaggtga aagtgtaa 3378

<210> 3

<211> 1125

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

Met Ile Phe Gln Leu Arg Asn Ala Ile Val Lys His Ile Phe Leu Leu

1 5 10 15

Ser Leu Phe Leu Lys Ile Ser Leu Pro Tyr Leu Arg His Cys Gly Arg

20 25 30

Glu Ile Arg Cys Ile Phe Pro Ala Val Leu His Gln Lys Leu Pro Ala

35 40 45

Lys Arg Pro Phe Pro Arg Gly Gly Thr Arg Gln Asn Pro Pro Lys Cys

50 55 60

Leu Gln Pro Lys Pro His Pro Ala Tyr Arg Gln Ser Leu Glu Thr Pro

65 70 75 80

Asn Lys Phe Leu Asn Thr Arg Arg His His Ser Phe Ser Leu Val Gly

85 90 95

Glu Glu Ser Leu Val Val Val Val Gly Val Thr Met Lys Gly Arg Ala

100 105 110

Val Lys Leu Arg Glu Ala His Lys Ala Gly Ser Pro Val Phe Cys Ser

115 120 125

Val Ala Trp Gly Gln Gly Gly Gln His Val Val Thr Ala Ser Ala Ala

130 135 140

Asp Val Ala Ile Leu Ile His Asp Ala Ala Ala Val Ala Ala Ala Gly

145 150 155 160

Gly Arg Ser Ser Gly Ser Ala Ala Ala Ala Ala Leu Ser Thr Ile Arg

165 170 175

Leu His Lys Asp Gly Val Thr Ala Leu Ala Val Ala Pro Gly Ser Gly

180 185 190

Ala Ser Leu Ala Ser Gly Ser Ile Asp His Ser Val Lys Phe Cys Ser

195 200 205

Phe Pro Glu Gly Val Phe Gln Ser Asn Ile Ala Arg Phe Thr Leu Pro

210 215 220

Ile Arg Ser Leu Ala Phe Asn Lys Lys Gly Thr Leu Leu Ala Ala Ala

225 230 235 240

Gly Asp Asp Asp Gly Ile Lys Leu Ile Ala Thr Ile Asp Asn Thr Ile

245 250 255

Ser Lys Val Leu Lys Gly His Lys Gly Ser Val Thr Gly Leu Ser Phe

260 265 270

Asp Pro Arg Asn Asp Tyr Leu Ala Ser Ile Asp Thr Phe Gly Thr Val

275 280 285

Ile Phe Trp Asp Leu Cys Thr Gly Thr Glu Ala Arg Ser Leu Lys Arg

290 295 300

Ile Ala Pro Thr Phe Gly Ser Asp His Ser Ile Asn Asn Ala Leu Cys

305 310 315 320

Trp Ser Pro Asp Gly Gln Phe Leu Ala Val Pro Gly Leu Arg Asn Asn

325 330 335

Val Val Met Tyr Asp Arg Asp Thr Gly Glu Glu Val Phe Thr Leu Lys

340 345 350

Gly Glu His Glu Gln Pro Val Cys Ser Leu Cys Trp Ser Pro Asn Gly

355 360 365

Arg Tyr Leu Val Thr Ala Gly Leu Asp Lys Gln Val Leu Ile Trp Asp

370 375 380

Val Lys Ser Lys Gln Asp Val Glu Arg Gln Lys Phe Asp Glu Arg Ile

385 390 395 400

Cys Ser Leu Ala Trp Lys Pro Glu Ser Asn Ala Val Ala Val Ile Asp

405 410 415

Val Thr Gly Arg Phe Gly Ile Trp Glu Ser Val Ile Pro Ser Thr Leu

420 425 430

Lys Ser Pro Thr Glu Gly Ala Pro Asp Leu Asn Ser Thr Lys Val Pro

435 440 445

Leu Phe Asp Asp Glu Asp Asp Glu Glu Arg Pro Ser Thr Ser Gly Gly

450 455 460

Leu Asp Asp Asp Asp Asp Asp Glu Ser Leu Gly Glu Leu Gly Pro Phe

465 470 475 480

Asn His Lys Arg Leu Arg Arg Lys Ser Thr Tyr His Asp His Ser Asn

485 490 495

Gly Asp Ser Glu Asp Glu Asp Leu Ile Leu Gln Met Glu Ser Arg Lys

500 505 510

Arg Met Lys Asp Thr His Arg Asp Asn Lys Glu Val Ala Asp Lys Ala

515 520 525

Ile Gly Asp Ser Ala Thr Ser Val Arg Leu Val Thr Ala Arg Met Gln

530 535 540

Thr Ala Phe Gln Pro Gly Ser Thr Pro Pro Gln Pro Gly Lys Arg Asn

545 550 555 560

Phe Leu Ala Tyr Asn Met Leu Gly Ser Ile Thr Thr Ile Glu Asn Glu

565 570 575

Gly His Ser His Val Glu Val Asp Phe His Asp Thr Gly Arg Gly Pro

580 585 590

Arg Val Pro Ser Met Thr Asp Tyr Phe Gly Phe Thr Met Ala Ala Leu

595 600 605

Asn Glu Ser Gly Ser Val Phe Ala Asn Pro Cys Lys Gly Asp Lys Asn

610 615 620

Met Ser Thr Leu Met Tyr Arg Pro Phe Ser Ser Trp Ala Gly Asn Ser

625 630 635 640

Glu Trp Ser Met Arg Phe Glu Gly Glu Glu Val Lys Ala Val Ala Val

645 650 655

Gly Val Gly Trp Val Ala Ala Val Thr Thr Leu Asn Phe Leu Arg Ile

660 665 670

Phe Thr Glu Gly Gly Leu Gln Met His Ile Leu Ser Val Gly Gly Pro

675 680 685

Val Val Thr Ala Ala Gly His Gly Asp Gln Leu Ala Ile Val Ser His

690 695 700

Ala Ser Asp Cys Leu Ser Ser Gly Asp Gln Val Leu Asp Val Lys Val

705 710 715 720

Leu Lys Ile Ser Glu Cys Ala Gln Ser Leu Ser Ser Arg Leu Val Leu

725 730 735

Thr Pro Ala Ser Lys Leu Ser Trp Phe Gly Phe Ser Glu Asn Gly Glu

740 745 750

Leu Ser Ser Phe Asp Ser Lys Gly Ile Leu Arg Val Phe Ser Gly Gln

755 760 765

Phe Gly Gly Ser Trp Ile Pro Ile Phe Ser Ser Ile Lys Ala Arg Lys

770 775 780

Ser Glu Asp Glu Ser His Trp Val Val Gly Leu Asp Ala Asn Asn Ile

785 790 795 800

Phe Cys Ile Leu Cys Lys Ser Pro Glu Ser Tyr Pro Gln Val Met Pro

805 810 815

Lys Pro Val Leu Thr Ile Leu Glu Leu Ser Phe Pro Leu Ala Ser Ser

820 825 830

Asp Leu Gly Ala Asn Ser Leu Glu Thr Glu Phe Met Met Arg Lys Leu

835 840 845

His Leu Ser Gln Ile Gln Lys Lys Ile Glu Glu Met Ala Ala Leu Gly

850 855 860

Leu Asp Thr Ile Ala Leu Asp Asp Glu Ala Phe Asn Met Glu Ala Ala

865 870 875 880

Leu Asp Arg Cys Ile Leu Arg Leu Ile Ser Ser Cys Cys Asn Gly Asp

885 890 895

Lys Leu Val Arg Ala Thr Glu Leu Ala Lys Leu Leu Thr Leu Glu Lys

900 905 910

Ser Met Lys Gly Ala Leu Met Leu Val Thr Arg Leu Lys Leu Pro Ile

915 920 925

Leu Gln Glu Arg Phe Ser Ala Ile Leu Glu Glu Met Met Leu Asn Asn

930 935 940

Ala Lys Ile Ala Asn Thr Ser Gly Val Phe Ser Asn Ser Asn Thr Asn

945 950 955 960

Tyr Ser Pro Ser Pro Ala Leu Ser Thr Gln Ala Val Pro Pro Ala Lys

965 970 975

Val Val Gln Asn Gly Asn Ser Leu Lys Leu Pro Thr Leu Pro Lys Leu

980 985 990

Asn Pro Ala Ala Gln Arg Ser Asn Pro Thr Glu Ser Asn Lys Ala Glu

995 1000 1005

Val Glu Gln Ala Asp Asn Leu Lys Glu Ile Ser Thr Lys Val Ser Pro

1010 1015 1020

Ala Gln Thr Pro Leu Val Lys Ile Pro Lys Asn Ser Glu Met Gly Val

1025 1030 1035 1040

Lys Thr Lys Lys Asp Asn Asp Gly Ala Ser His Ala Thr Thr Val Asp

1045 1050 1055

Gln Asn Pro Lys Gly Gly Ser Gly Gln Val Gly Leu Lys Asn Lys Ser

1060 1065 1070

Val Asp Ser Cys Asn Gly Val Gln Pro Gln Arg Pro Val Asn Pro Phe

1075 1080 1085

Ala Lys Ser Ser Ser Ser Lys Glu Gln Pro Ser Ser Leu Phe Asp Ser

1090 1095 1100

Ile Lys Lys Met Lys Val Glu Asn Glu Lys Val Asp Lys Ala Asn Ser

1105 1110 1115 1120

Lys Lys Val Lys Val

1125

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gctacctagt caaattaatc g 21

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

gattaggcca agtaagtcca c 21

<210> 6

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

tgcatggtca cgttcctcat 20

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

attgcggagt gatgagagat 20

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

aaccaagcaa aagtcattgg a 21

<210> 9

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

cgagtaatat tttgggcgtc a 21

<210> 10

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gcatcattag tcctggttag cg 22

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 11

gtggaactct ccactgctcc 20

<210> 12

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 12

gtgtagctat gggtaccatc 20

<210> 13

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 13

ggtctctcac tgtttctggt 20

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 14

gcgatcgggc aagttcaaaa 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 15

gggatctctg gaaaaaggac 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 16

tgtctgggaa gcttccaaca 20

<210> 17

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 17

ccaccaaagc cgactctata 20

<210> 18

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 18

gggtgattgg agatatgaca 20

<210> 19

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 19

agcatagcaa taatggccac 20

<210> 20

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 20

tttttgggga ataccctccc 20

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 21

ggtttggcac catgtggaaa 20

<210> 22

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 22

cataccttgc agtcctagaa 20

<210> 23

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 23

cgtggctagt ccatcaattc 20

<210> 24

<211> 42

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 24

cgaacgatag ccatggccat gatatttcag ctaagaaatg cg 42

<210> 25

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 25

ggtaggatcc actagtcact ttcaccttct tgctgttagc 40

<210> 26

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 26

ccatgattac gaattctgct atgccgttag gtagcac 37

<210> 27

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 27

cccttgctca ccatggtacc ctgaaatatc attgctaacc atca 44

<210> 28

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 28

caatgatatt tcagggtacc atgatatttc agctaagaaa tgcg 44

<210> 29

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 29

cccttgctca ccatggtacc cactttcacc ttcttgctgt tagc 44

<210> 30

<211> 37

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 30

cggtacccgg ggatcctgct atgccgttag gtagcac 37

<210> 31

<211> 38

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 31

ctcagatcta ccatgggaaa tatcattgct aaccatca 38

Claims

1.水稻MIT2蛋白或其编码基因或含有其编码基因的生物材料的以下任一种或多种应用：

（1）在制备转基因植物中的应用；

（2）在水稻种质资源改良中的应用；

（3）在保持水稻育性中的应用；

（4）在使水稻籽粒增大中的应用；

（5）是增加水稻株高中的应用；

（6）抑制水稻分蘖中的应用；

所述水稻MIT2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No. 3所示。

2.一种水稻MIT2基因突变基因，其为水稻MIT2基因第8个外显子上，CDS的第2413位的碱基T缺失，所述CDS的序列为SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

3.权利要求2所述水稻MIT2基因突变基因的等位突变体，其特征在于，所述等位突变体的突变位点发生在第一个内含子的3’端拼接位点处，由原来的AG变成AA，第二个外显子的5’端的前两个碱基AG被剪切掉。

4.一种生物材料，其特征在于，含有权利要求2所述水稻MIT2基因突变基因或权利要求3所述的等位突变体，所述生物材料为质粒、载体、宿主菌、转化植物细胞。

5.权利要求2所述水稻MIT2基因突变基因或权利要求3所述的等位突变体或权利要求4所述的生物材料的以下任一种或多种应用，

（1）在农作物改良育种、制种中的应用；

（2）在降低农作物株高中的应用；

（3）在增加水稻分蘖数中的应用；

（4）在降低水稻育性中的应用；

（5）在培育籽粒变小的水稻中的应用；

（6）在提高水稻产量中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述降低农作物株高为与野生型相比降低至50%-60%株高。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述增加水稻分蘖数是与野生型相比增加2-3倍的分蘖数。