CN112592940A - 一种n-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛的生物酶合成方法 - Google Patents

一种n-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛的生物酶合成方法 Download PDF

Info

Publication number
CN112592940A
CN112592940A CN202011482929.4A CN202011482929A CN112592940A CN 112592940 A CN112592940 A CN 112592940A CN 202011482929 A CN202011482929 A CN 202011482929A CN 112592940 A CN112592940 A CN 112592940A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ala
gly
val
leu
biological enzyme
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202011482929.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112592940B (zh
Inventor
傅荣昭
谢志军
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangxi Bontac Green Biocatalysis Ecoindustrial Park Co ltd
Original Assignee
Jiangxi Bontac Green Biocatalysis Ecoindustrial Park Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangxi Bontac Green Biocatalysis Ecoindustrial Park Co ltd filed Critical Jiangxi Bontac Green Biocatalysis Ecoindustrial Park Co ltd
Priority to CN202011482929.4A priority Critical patent/CN112592940B/zh
Publication of CN112592940A publication Critical patent/CN112592940A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112592940B publication Critical patent/CN112592940B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/001—Amines; Imines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/01—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with NAD+ or NADP+ as acceptor (1.1.1)
    • C12Y101/01037—Malate dehydrogenase (1.1.1.37)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

本发明属于有机化学合成领域，具体涉及一种N‑笏甲氧羰基‑葵烷基乙醛的生物酶合成方法，采用的生物酶为苹果酸脱氢酶突变体，具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，利用定向酶突变技术得到的苹果酸脱氢酶突变体将伯醇氧化成醛。得到N‑笏甲氧羰基‑葵烷基乙醛转化率为85.01％。与未突变野生型的硝基还原酶相比具有更高的反应效率和转化率。采用生物酶合成法替代传统的纯化学合称法有效的降低了三废的排放，符合绿色化学趋势。

Description

一种N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛的生物酶合成方法
技术领域
本发明属于有机化学合成领域，具体涉及一种N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛的生物酶合成方法。
背景技术
对于伯醇氧化成醛通常采用DMSO和草酰氯氧化(Swern Oxidation)、Jones氧化、Collins氧化、PCC氧化或者用Dess-Martin试剂氧化、活性MnO2氧化等等，以上反应类型所用到的试剂通常都是高污染、高危险和高成本的，且后处理工艺复杂，所产生的三废较多，与当前提倡的绿色环保相差较远，如何改善这些问题，成为科学家们研究的关注的重点。N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛是一种重要的万古霉素型抗生素中间体，可以用于合成多种抗生素药物，以往通常利用N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醇为原料，采用化学法，用DMSO和草酰氯作为氧化剂，二氯甲烷为溶剂，在-40～-25℃的条件下来合成，操作工艺十分苛刻，且有一定的安全隐患，而且后处理十分复杂，废水的COD非常高且难以处理，而且总收率只有50～55％。随着环保政策的日趋严格，常规化学法合成N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛已经不适用，因此寻找绿色环保，成本低廉，操作简单的合成方法成为一种必然的发展趋势。
苹果酸脱氢酶(英语：Malate dehydrogenase，EC 1.1.1.37)是一种在三羧酸循环中催化L-苹果酸转变为草酰乙酸(使用NAD+)的酶。苹果酸脱氢酶不应与苹果酸酶相混淆，后者催化苹果酸变为丙酮酸，产生的是NADP+。
酶定点突变是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法向目的DNA片段(可以是基因组，也可以是质粒)中引入所需变化(通常是表征有利方向的变化)，包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是基因研究工作中一种非常有用的手段。通过定点突变技术可以获得突变后的生物酶，突变后的生物酶可以提高反应的催化活性。
发明内容
基于背景技术中提到的问题，本发明拟公开一种N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛的生物酶合成方法,利用定向酶突变技术得到的硝基还原酶突变体，本发明是通过以下技术方案实现的：
Figure BDA0002838622970000021
一种N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛的生物酶合成方法，制备方法包括以下步骤：
(1)将N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醇溶于乙酸丁酯中，随后在加入磷酸缓冲液；
(2)搅拌均匀后加入苹果酸脱氢酶突变体，控制温度在20～25℃搅拌3h，待HPLC检测原料小于0.50％后停止反应，静置分层；
(3)收集上层有机相，分别用饱和NaHCO3水溶液洗涤至中性后，再用无水Na2SO4干燥后，过滤，蒸干溶剂得白色粗品，再用石油醚或正庚烷重结晶，干燥后得白色结晶性粉末。
所述生物酶为苹果酸脱氢酶突变体，所述酶突变体为R276A、D301Q具有SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列。
制备方法具体为：
(1)将0.10molN-笏甲氧羰基-葵烷基乙醇溶于200ml乙酸丁酯中，随后在加入300ml pH为5.20-5.50的磷酸缓冲液；
(2)搅拌均匀后加入1.20g苹果酸脱氢酶突变体，控制温度在20～25℃搅拌3h，待HPLC检测原料小于0.50％后停止反应，静置分层；
(3)收集上层有机相，分别用饱和NaHCO3水溶液洗涤至中性后，再用无水Na2SO4干燥后，过滤，蒸干溶剂得白色粗品，再用石油醚或正庚烷重结晶，干燥后得白色结晶性粉末。
所述的苹果酸脱氢酶突变体在合成N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛的应用。
本发明的有益效果
(1)采用生物酶合成法替代传统的纯化学合称法有效的降低了三废的排放，符合绿色化学趋势。
(2)与传统的化学合成方法相比有高达转化率为85.01％的转化率，传统的化学合成法在50％左右。
具体实施方式
以下实施例及其说明用于解释本发明，但并不构成对本发明的不当限定。
本申请中下述实施例中所使用的方法如无特殊说明均为常规方法，如《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克，D.W.拉塞尔著，黄培堂，汪嘉玺，朱厚础，等译。第3版，北京：科学出版社，2002)中所述的方法进行。同时，本发明中的氨基酸无特别说明外均用其缩写或代号标明。
实施例1
SEQ ID NO：1苹果酸脱氢酶突变体的制备：
(1)利用NCBI数据库和BLAST软件比对筛选，获得野生型苹果酸脱氢酶基因碱基序列，氨基酸序列SEQ ID NO：2所示。
(2)异源表达后，试验筛选功能表达基因.
(3)利用易错PCR，随机突变，获得突变文库
以重组表达载体PET-28a(+)-BS为DNA模板，通过易错PCR的方法构建一个随机突变体文库，并通过调整易错PCR反应体系中Mg2+和Mn2+浓度以及dCTP和dTTP寡核苷酸浓度，使该突变体文库的碱基错配率为千分之十，即保证一个突变体有2到6个氨基酸发生突变，构建突变体文库的具体过程如下。易错PCR反应体系和条件：
易错PCR反应体系：
Figure BDA0002838622970000041
Figure BDA0002838622970000051
易错PCR反应条件是：先93℃预变性10min；然后94℃变性60s，50℃退火1min，72℃1.5min，共30个循环；最后72℃延伸10min。
将上述得到的易错PCR产物切胶回收纯化，与原核表达载体pET28a(+)连接后转化重组基因工程菌，即得到一个库容量大的突变体文库。
A:第一轮突变
从上述突变子文库中筛选了约20000个克隆，得到10个数值变化明显的突变子。接着对这10个突变子进行摇瓶筛选。具体过程为：将这10个突变子接种于含100mlLB培养基的500ml摇瓶中进行发酵及诱导，并通过HPLC法测定活力，得到1个比对照酶活力高4倍的突变子，命名为SEQ ID NO：1，经过测序结果显示其在276位R突变为了A、301位由D突变为Q。
实施例2
将苹果酸脱氢酶突变体进行催化反应：
(1)将0.10molN-笏甲氧羰基-葵烷基乙醇溶于200ml乙酸丁酯中，随后在加入300ml pH为5.20-5.50的磷酸缓冲液；
(2)搅拌均匀后加入1.20g苹果酸脱氢酶突变体，控制温度在20～25℃搅拌3h，待HPLC检测原料小于0.50％后停止反应，静置分层；
(3)收集上层有机相，分别用饱和NaHCO3水溶液洗涤至中性后，再用无水Na2SO4干燥后，过滤，蒸干溶剂得白色粗品，再用石油醚或正庚烷重结晶，干燥后得白色结晶性粉末35.83g，HPLC检测纯度为99.12％，转化率为85.01％。
对比例1
本对比例添加未经过突变的苹果酸脱氢酶。其制备方法同实施例2。得到N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛20.31g；转化率48.2％。
对比例2
本对比例采用常规的草酰氯氧化：N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛16.83g；转化率73％。
序列表
<110> 江西邦泰绿色生物合成生态产业园发展有限公司
<120> 一种N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛的生物酶合成方法
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 312
<212> PRT
<213> 大肠杆菌(Escherichia coli)
<400> 1
Met Lys Val Ala Val Leu Gly Ala Ala Gly Gly Ile Gly Gln Ala Leu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Leu Lys Thr Gln Leu Pro Ser Gly Ser Glu Leu Ser Leu
20 25 30
Tyr Asp Ile Ala Pro Val Thr Pro Gly Val Ala Val Asp Leu Ser His
35 40 45
Ile Pro Thr Ala Val Lys Ile Lys Gly Phe Ser Gly Glu Asp Ala Thr
50 55 60
Pro Ala Leu Glu Gly Ala Asp Val Val Leu Ile Ser Ala Gly Val Ala
65 70 75 80
Arg Lys Pro Gly Met Asp Arg Ser Asp Leu Phe Asn Val Asn Ala Gly
85 90 95
Ile Val Lys Asn Leu Val Gln Gln Val Ala Lys Thr Cys Pro Lys Ala
100 105 110
Cys Ile Gly Ile Ile Thr Asn Pro Val Asn Thr Thr Val Ala Ile Ala
115 120 125
Ala Glu Val Leu Lys Lys Ala Gly Val Tyr Asp Lys Asn Lys Leu Phe
130 135 140
Gly Val Thr Thr Leu Asp Ile Ile Arg Ser Asn Thr Phe Val Ala Glu
145 150 155 160
Leu Lys Gly Lys Gln Pro Gly Glu Val Glu Val Pro Val Ile Gly Gly
165 170 175
His Ser Gly Val Thr Ile Leu Pro Leu Leu Ser Gln Val Pro Gly Val
180 185 190
Ser Phe Thr Glu Gln Glu Val Ala Asp Leu Thr Lys Arg Ile Gln Asn
195 200 205
Ala Gly Thr Glu Val Val Glu Ala Lys Ala Gly Gly Gly Ser Ala Thr
210 215 220
Leu Ser Met Gly Gln Ala Ala Ala Arg Phe Gly Leu Ser Leu Val Arg
225 230 235 240
Ala Leu Gln Gly Glu Gln Gly Val Val Glu Cys Ala Tyr Val Glu Gly
245 250 255
Asp Gly Gln Tyr Ala Arg Phe Phe Ser Gln Pro Leu Leu Leu Gly Lys
260 265 270
Asn Gly Val Glu Glu Ala Lys Ser Ile Gly Thr Leu Ser Ala Phe Glu
275 280 285
Gln Asn Ala Leu Glu Gly Met Leu Gln Thr Leu Lys Lys Asp Ile Ala
290 295 300
Leu Gly Gln Glu Phe Val Asn Lys
305 310
<210> 2
<211> 312
<212> PRT
<213> 大肠杆菌(Escherichia coli)
<400> 2
Met Lys Val Ala Val Leu Gly Ala Ala Gly Gly Ile Gly Gln Ala Leu
1 5 10 15
Ala Leu Leu Leu Lys Thr Gln Leu Pro Ser Gly Ser Glu Leu Ser Leu
20 25 30
Tyr Asp Ile Ala Pro Val Thr Pro Gly Val Ala Val Asp Leu Ser His
35 40 45
Ile Pro Thr Ala Val Lys Ile Lys Gly Phe Ser Gly Glu Asp Ala Thr
50 55 60
Pro Ala Leu Glu Gly Ala Asp Val Val Leu Ile Ser Ala Gly Val Ala
65 70 75 80
Arg Lys Pro Gly Met Asp Arg Ser Asp Leu Phe Asn Val Asn Ala Gly
85 90 95
Ile Val Lys Asn Leu Val Gln Gln Val Ala Lys Thr Cys Pro Lys Ala
100 105 110
Cys Ile Gly Ile Ile Thr Asn Pro Val Asn Thr Thr Val Ala Ile Ala
115 120 125
Ala Glu Val Leu Lys Lys Ala Gly Val Tyr Asp Lys Asn Lys Leu Phe
130 135 140
Gly Val Thr Thr Leu Asp Ile Ile Arg Ser Asn Thr Phe Val Ala Glu
145 150 155 160
Leu Lys Gly Lys Gln Pro Gly Glu Val Glu Val Pro Val Ile Gly Gly
165 170 175
His Ser Gly Val Thr Ile Leu Pro Leu Leu Ser Gln Val Pro Gly Val
180 185 190
Ser Phe Thr Glu Gln Glu Val Ala Asp Leu Thr Lys Arg Ile Gln Asn
195 200 205
Ala Gly Thr Glu Val Val Glu Ala Lys Ala Gly Gly Gly Ser Ala Thr
210 215 220
Leu Ser Met Gly Gln Ala Ala Ala Arg Phe Gly Leu Ser Leu Val Arg
225 230 235 240
Ala Leu Gln Gly Glu Gln Gly Val Val Glu Cys Ala Tyr Val Glu Gly
245 250 255
Asp Gly Gln Tyr Ala Arg Phe Phe Ser Gln Pro Leu Leu Leu Gly Lys
260 265 270
Asn Gly Val Glu Glu Arg Lys Ser Ile Gly Thr Leu Ser Ala Phe Glu
275 280 285
Gln Asn Ala Leu Glu Gly Met Leu Asp Thr Leu Lys Lys Asp Ile Ala
290 295 300
Leu Gly Gln Glu Phe Val Asn Lys
305 310

Claims (4)

1.一种N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛的生物酶合成方法，其特征在于制备方法包括以下步骤：
(1)将N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醇溶于乙酸丁酯中，随后在加入磷酸缓冲液；
(2)搅拌均匀后加入苹果酸脱氢酶突变体，控制温度在20～25℃搅拌3h，待HPLC检测原料小于0.50％后停止反应，静置分层；
(3)收集上层有机相，分别用饱和NaHCO3水溶液洗涤至中性后，再用无水Na2SO4干燥后，过滤，蒸干溶剂得白色粗品，再用石油醚或正庚烷重结晶，干燥后得白色结晶性粉末。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述生物酶为苹果酸脱氢酶突变体，所述酶突变体为R276A、D301Q具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于制备方法具体为：
(1)将0.10molN-笏甲氧羰基-葵烷基乙醇溶于200ml乙酸丁酯中，随后在加入300mlpH为5.20-5.50的磷酸缓冲液；
(2)搅拌均匀后加入1.20g苹果酸脱氢酶突变体，控制温度在20～25℃搅拌3h，待HPLC检测原料小于0.50％后停止反应，静置分层；
(3)收集上层有机相，分别用饱和NaHCO3水溶液洗涤至中性后，再用无水Na2SO4干燥后，过滤，蒸干溶剂得白色粗品，再用石油醚或正庚烷重结晶，干燥后得白色结晶性粉末。
4.权利要求2所述的苹果酸脱氢酶突变体在合成N-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛的应用。
CN202011482929.4A 2020-12-16 2020-12-16 一种n-（9-笏基甲氧羰基）-癸基氨基乙醛的生物酶合成方法 Active CN112592940B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011482929.4A CN112592940B (zh) 2020-12-16 2020-12-16 一种n-（9-笏基甲氧羰基）-癸基氨基乙醛的生物酶合成方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011482929.4A CN112592940B (zh) 2020-12-16 2020-12-16 一种n-（9-笏基甲氧羰基）-癸基氨基乙醛的生物酶合成方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112592940A true CN112592940A (zh) 2021-04-02
CN112592940B CN112592940B (zh) 2023-05-02

Family

ID=75196390

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011482929.4A Active CN112592940B (zh) 2020-12-16 2020-12-16 一种n-（9-笏基甲氧羰基）-癸基氨基乙醛的生物酶合成方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112592940B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116656637A (zh) * 2023-07-07 2023-08-29 上海逐药科技有限公司 一种苹果酸脱氢酶的变体

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH09107959A (ja) * 1995-10-17 1997-04-28 Unitika Ltd リンゴ酸脱水素酵素及びその製造方法
US20110009596A1 (en) * 2009-07-09 2011-01-13 Plus Chemicals Sa Process for the preparation of n-protected-decylaminoethanal
WO2013034675A1 (en) * 2011-09-09 2013-03-14 Sandoz Ag Process for the synthesis of telavancin and its pharmaceutically acceptable salts as well as n-protected derivatives thereof
CN104877014A (zh) * 2015-06-02 2015-09-02 宁夏泰瑞制药股份有限公司 一种纯化特拉万星粗品的方法
CN105505971A (zh) * 2016-01-19 2016-04-20 中国科学院微生物研究所 一种提高大肠杆菌生产丁醇的方法
CN110896642A (zh) * 2018-06-08 2020-03-20 韩国科学技术院 基于III型聚酮合酶的新型丙二酰-CoA生物传感器及其用途
CN111233713A (zh) * 2020-01-20 2020-06-05 福建康鸿生物科技有限公司 一种特拉万星中间体合成方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH09107959A (ja) * 1995-10-17 1997-04-28 Unitika Ltd リンゴ酸脱水素酵素及びその製造方法
US20110009596A1 (en) * 2009-07-09 2011-01-13 Plus Chemicals Sa Process for the preparation of n-protected-decylaminoethanal
WO2013034675A1 (en) * 2011-09-09 2013-03-14 Sandoz Ag Process for the synthesis of telavancin and its pharmaceutically acceptable salts as well as n-protected derivatives thereof
CN104877014A (zh) * 2015-06-02 2015-09-02 宁夏泰瑞制药股份有限公司 一种纯化特拉万星粗品的方法
CN105505971A (zh) * 2016-01-19 2016-04-20 中国科学院微生物研究所 一种提高大肠杆菌生产丁醇的方法
CN110896642A (zh) * 2018-06-08 2020-03-20 韩国科学技术院 基于III型聚酮合酶的新型丙二酰-CoA生物传感器及其用途
CN111233713A (zh) * 2020-01-20 2020-06-05 福建康鸿生物科技有限公司 一种特拉万星中间体合成方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NCBI: "malate dehydrogenase [Escherichia coli]", 《GENBANK DATABASE》 *
熊伦等: "特拉万星合成工艺研究", 《中国药科大学学报》 *
马帅等: "特拉万星的合成", 《中国新药杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116656637A (zh) * 2023-07-07 2023-08-29 上海逐药科技有限公司 一种苹果酸脱氢酶的变体
CN116656637B (zh) * 2023-07-07 2024-05-14 上海逐药科技有限公司 一种苹果酸脱氢酶的变体

Also Published As

Publication number Publication date
CN112592940B (zh) 2023-05-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107058248B (zh) 一种重组醛酮还原酶突变体、基因、载体、工程菌及其应用
CN108118035B (zh) 一种环己酮单加氧酶及其应用
CN108728421B (zh) 一种羰基还原酶突变体及其用途
WO2017143944A1 (zh) 一种青霉素g酰化酶突变体
CN112592940A (zh) 一种n-笏甲氧羰基-葵烷基乙醛的生物酶合成方法
CN114134134B (zh) L-苏氨酸醛缩酶突变体及其在合成L-syn-对甲砜基苯丝氨酸中的应用
WO2019246488A9 (en) Compositions and methods for the production of pyruvic acid and related products using dynamic metabolic control
CN110358751B (zh) 一种重组脂肪酶突变体、编码基因、重组工程菌及应用
CN105296513B (zh) 一种海洋酯酶及其编码基因e22与应用
CN110218749B (zh) 用改变NCgl1859的细菌发酵生产赖氨酸的方法
CN113735282B (zh) 一种老黄酶oye2蛋白及其在铬污染中的应用
CN111690696B (zh) 一种生物催化制备达芦那韦中间体的方法
CN105176943B (zh) 一种耐盐耐有机溶剂的低温碱性酯酶EstSL3及其基因和应用
CN111218432B (zh) 一种酪氨酸酶前体与编码基因及其制备与应用
CN112029743A (zh) 一种6-溴茚酮的生物酶催化合成方法
CN115029329B (zh) 一种羰基还原酶突变体及其在制备r-扁桃酸中的应用
CN112409493A (zh) 一种重组融合酶及其在乙醛酸甲酯合成中的应用
CN115747194B (zh) 一种L-苏氨酸醛缩酶突变体、基因及制备L-anti-对甲砜基苯丝氨酸的方法
US20220228132A1 (en) Unspecific peroxygenase enzyme variants for selective fatty acid epoxidation or hydroxylation
CN108624571B (zh) 具有催化dhap或d-g3p合成丙烯酸功能的酶及其应用
CN114574511B (zh) 极耐热木聚糖酶基因、极耐热木聚糖酶及其应用
CN115896065B (zh) 一种立体选择性羧酯酶、编码基因、载体及其应用
CN116376993B (zh) 一种异丙醇胺的制备方法
CN114807103B (zh) 一种氨基甲酰基水解酶突变体及基因和应用
CN114196659B (zh) 酰胺酶突变体、编码基因、工程菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant