CN112569250A - 三氟尿苷制备hiv-1药物中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了三氟尿苷制备HIV‑1药物中的应用，本发明提供了三氟尿苷作为HIV‑1潜伏感染激活剂的新应用，其具有很好的HIV‑1潜伏感染的激活效果。由于三氟尿苷是已经在临床上使用的药物，其毒性较低，安全性好，但目前尚未有人报道其作为HIV‑1潜伏感染激活剂的相关用途。三氟尿苷在HIV‑1潜伏感染的激活方面具有重要的研发价值和开发意义。

Description

三氟尿苷制备HIV-1药物中的应用
技术领域
本发明涉及HIV-1技术领域，更具体地，涉及三氟尿苷制备HIV-1药物中的应用。
背景技术
治疗HIV-1(human immunodifficiency virus type 1)时采用联合抗逆转录病毒疗法(combined antiretroviral therapy，cART)可以有效控制HIV-1感染者体内病毒，但是由于感染者体内病毒潜伏感染储藏库的存在，患者必须终身服用药物压制病毒，一旦停止用药，感染者体内的病毒血症将在短时间内迅速爆发，这就是到目前为止HIV-1难以彻底根治的最主要原因。
为了实现功能性治愈HIV-1，使病人在不接受联合抗逆转录病毒治疗下免疫系统恢复至正常水平，科学家们提出三种治疗策略，分别是：“激活与杀灭”策略、永久性沉默策略、部分或全部替换免疫系统策略。
其中，“激活与杀灭”被广泛研究和认可，其构想是通过潜伏感染激活剂将潜伏的HIV-1激活出来，再通过药物和机体自身的免疫系统杀灭病毒，使感染者体内的HIV-1得以彻底清除。尽管科学家们通过各种尝试发现了许多潜伏感染激活剂，根据作用机制大概可以分成六类：如组蛋白去乙酰化酶抑制剂，伏立诺他(v orinostat)、丙戊酸(VPA)、帕比司他(Panobinostat)、罗米地辛(Romidepsin)；组蛋白甲基转移酶抑制剂(HMTi)：如BIX01294，毛壳素，DZNep等；DNA甲基转移酶抑制剂(DNMTi)，如地西他滨及其类似物阿扎胞苷；Bromodomain抑制剂JQ-1；蛋白激酶C(PKC)激活剂，如PMA，prostratin，Bryostatin-1；以及细胞因子类Anti-CD3、Anti-CD28和TNF-α。这些激活剂被证实在体外潜伏模型中以及体外潜伏感染的CD4+T细胞中有极强的激活效果，但应用于临床时或者引起全细胞水平的激活从而引发剧烈的免疫反应，或者对机体有极强的毒副作用(王海鹏,et al.,HIV潜伏感染激活剂的研究进展％J病毒学报.2017.33(02):p.293-302.)，直至目前为止仍未能找到应用于临床有效且安全的激活剂，这是应用“激活与杀灭”策略最大的阻碍。为了攻克这一难题，科学家不断地在HI V-1潜伏感染的机制方面探索，以寻找更好的靶点，从而开发新的潜伏感染激活剂。
三氟尿苷(Trifluridine，Trifluorothymidine，FTD，TFD)又称曲氟尿苷，是一种氟化嘧啶核苷，它的化学名称是5-三氟甲-2-脱氧尿苷，其分子结构如式(I)所示。
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三氟尿苷最开始用于抗病毒，可局部治疗由单纯疱疹病毒引起的上皮性角膜炎、原发性角膜结膜炎和复发性上皮性角膜炎。此外，2015年美国食品和药物管理局(Food andDrug Administration，FDA)通过新药曲氟尿苷盐酸替比拉西片(Lonsurf)，又称TAS102，三氟尿苷是其主要成分，适用于既往接受过化疗和生物治疗的晚期(转移性)结直肠癌患者。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供三氟尿苷制备HIV-1药物中的应用。
本发明的第一个目的是提供三氟尿苷制备HIV-1药物中的应用。
本发明的第二个目的是提供一种HIV-1药物。
为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：
发明人研究显示，在HIV-1潜伏感染细胞系J-Lat 10.6中三氟尿苷对宿主蛋白CHAF1A有很好的降解效果，并且对HIV-1潜伏感染有很好的激活效果，在感染者临床样本中同样对潜伏感染的HIV-1具有激活效果。进一步发现，三氟尿苷在J-Lat 10.6细胞中的EC50为2.259μM。同时，由于三氟尿苷是已经在临床上使用的药物，其毒性较低，安全性好，但目前尚未有人报道其作为HIV-1潜伏感染激活剂的相关用途。本专利旨在为三氟尿苷作为HIV-1潜伏感染激活剂的进一步开发提供的强有力的理论基础和实践基础，证明其具有重要的研发价值和开发意义。
因此本发明要求保护三氟尿苷制备HIV-1药物中的应用。
优选地，所述HIV-1药物为HIV-1激活剂。
更优选地，三氟尿苷在HIV-1潜伏感染细胞系中EC50是2.259μM。
更优选地，所述HIV-1激活剂为HIV-1潜伏感染激活剂。
进一步更优选地，所述HIV-1潜伏感染激活剂为激活HIV-1潜伏感染的CD4+T细胞中潜伏的HIV-1的药物。
进一步更优选地，三氟尿苷通过降解宿主的CHAF1A蛋白以激活HIV-1潜伏感染。
本发明还要求保护一种HIV-1药物，含有三氟尿苷。
优选地，所述HIV-1药物还包括作为杀灭HIV病毒的杀灭剂、免疫治疗剂或者细胞治疗剂中的任意一种或至少两种的组合。
更优选地，还包括药学上可接受的辅料。
更优选地，制成临床可接受的剂型。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供了三氟尿苷作为HIV-1潜伏感染激活剂的新应用，其具有很好的HIV-1潜伏感染的激活效果。由于三氟尿苷是已经在临床上使用的药物，其毒性较低，安全性好，但目前尚未有人报道其作为HIV-1潜伏感染激活剂的相关用途。三氟尿苷在HIV-1潜伏感染的激活方面具有重要的研发价值和开发意义。
附图说明
图1为三氟尿苷能够显著降解经典HIV-1潜伏感染细胞系模型J-Lat 10.6的CHAF1A，降解效果呈现浓度依赖性。
图2为三氟尿苷能够有效地激活J-Lat 10.6的HIV-1并且呈现浓度依赖性。
图3为三氟尿苷能够有效地激活J-Lat 10.6的HIV-1并且呈现浓度依赖性。
图4为三氟尿苷在HIV-1潜伏感染模型细胞系J-Lat10.6中的EC50是2.259μM。
图5为三氟尿苷能够激活感染者临床样本的HIV-1。
具体实施方式
下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1三氟尿苷在J-Lat 10.6细胞系对CHAF1A的降解实验。
发明人之前的研究已经发现宿主蛋白CHAF1A是HIV-1潜伏的形成与维持的关键因子，是一个安全有效的HIV-1潜伏感染激活靶点。因此检测不同浓度的三氟尿苷对CHAF1A的降解效果，以确认最合适的药物作用浓度。
一、实验方法
取适量生长良好的J-Lat 10.6细胞铺板。使用的培养基：1640培养基，10％胎牛血清以及1％青链霉素混合液，培养条件：5％二氧化碳、37℃。
分别向培养基中加入终浓度为50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM、1.5625μM、0.78125μM、0.390625μM三氟尿苷处理细胞，PBS处理组作为对照，48小时收样进行WesternBlot检测，观察不同浓度的三氟尿苷对CHAF1A的降解效果。
二、实验结果
实验结果如图1所示。从图中可以看出，三氟尿苷可以显著降解J-Lat 10.6细胞的CHAF1A，降解效果对着药物浓度增加而增强。
实施例2三氟尿苷在J-Lat 10.6细胞系中的对潜伏感染的激活效应
一、实验方法
1)取生长良好的J-Lat 10.6细胞铺板，使用的培养基：1640培养基，10％胎牛血清以及1％青链霉素混合液，培养条件：5％二氧化碳、37℃。
每孔2孔明板5细胞；分别加入终浓度为50μM、25μM、12.5μM、6.25μM、3.125μM的三氟尿苷，阴性对照使用PBS，以TNF-α处理组和JQ-1处理组为阳性对照组。
2)培养48h,离心收取细胞，弃上清，使用PBS清洗一次，弃上清，然后用PBS重悬；
3)使用流式细胞仪检测相应细胞的GFP表达水平，并作统计图分析结果。
二、实验结果
实验结果如图2和图3所示。从图中可以看出，三氟尿苷可以有效激活J-Lat 10.6细胞潜伏感染的HIV-1。
实施例3氟尿苷激活感染者临床样本的HIV-1
一、实验方法
1)取生长良好的J-Lat细胞铺板，使用的培养基：1640培养基，10％胎牛血清以及1％青链霉素混合液，培养条件：5％二氧化碳、37℃。分别加入不同浓度的三氟尿苷，终浓度分别为：100μM，25μM，6.25μM，1.5625μM，.0390625μM，0.097656μM，0.024414μM，0.006104μM，0.001526μM，0.000381μM，0μM。
2)培养48h，离心收取细胞，弃上清，使用PBS清洗一次，弃上清，然后用PBS重悬；
3)使用流式细胞仪检测相应细胞的GFP表达水平，并作统计图分析结果。
二、实验结果
实验结果如图4所示。从实验结果可以看出，三氟尿苷的EC50是2.259μM(由prism软件计算得出)，具有较好的潜伏感染的激活效果。
实施例4三氟尿苷激活感染者临床样本的HIV-1
一、实验方法
1)从HIV-1携带者血液样本分离PBMCs，分离CD4+T淋巴细胞。HIV-1携带者血液样本由广州市第八人民医院提供，参与者都接受联合抗逆转录病毒治疗，处于潜伏感染期，近6个月血浆中无法检测到HIV-1RNA copy(＜50copy/ml)，感染者CD4+T细胞数大于350个/μl。取得了病人的书面同意，所进行的实验获中山大学伦理委员会批准，在P2实验室进行，实验过程中采用匿名编号。
2)将CD4+T淋巴细胞分成三组，一组用aCD3/aCD28抗体激活作为阳性对照，aCD3/aCD28抗体是已被证实的在体外显著激活潜伏感染的激活剂；一组细胞用100μM三氟尿苷处理作为实验组；一组用相同体积的PBS缓冲液处理作为阴性对照。
3)处理48h后，用PBS分别清洗三组细胞，分别收培养基上清液和细胞，Trizol法提取RNA，用qPCR检测HIV-1RNA的拷贝数。
二、实验结果
实验结果如图5所示。从实验结果可以看出，三氟尿苷和阳性对照组aCD3/aCD28一样能够显著激活感染者临床样本的HIV-1。

Claims (10)

1.三氟尿苷制备HIV-1药物中的应用。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述HIV-1药物为HIV-1激活剂。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，三氟尿苷在HIV-1潜伏感染细胞系中EC50是2.259μM。
4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述HIV-1激活剂为HIV-1潜伏感染激活剂。
5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，所述HIV-1潜伏感染激活剂为激活HIV-1潜伏感染的CD4+T细胞中潜伏的HIV-1的药物。
6.根据权利要求4所述应用，其特征在于，三氟尿苷通过降解宿主的CHAF1A蛋白以激活HIV-1潜伏感染。
7.一种HIV-1药物，其特征在于，含有三氟尿苷。
8.根据权利要求7所述的HIV-1药物，其特征在于，所述HIV-1药物还包括作为杀灭HIV病毒的杀灭剂、免疫治疗剂或者细胞治疗剂中的任意一种或至少两种的组合。
9.根据权利要求7或8所述的HIV-1药物，其特征在于，还包括药学上可接受的辅料。
10.根据权利要求7或8所述的HIV-1药物，其特征在于，制成临床可接受的剂型。
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US6596720B1 (en) * 1999-11-05 2003-07-22 Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. Anti-HIV compositions

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