CN112569155B - 一种欧蓍草提取物的提取方法及应用 - Google Patents

Abstract

本申请涉及植物提取技术领域，具体公开了一种欧蓍草提取物的提取方法及应用。一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：将欧蓍草粉碎，对欧蓍草粉末进行酶解浸提；微滤，收集滤液，即得欧蓍草粗提液；将欧蓍草粗提液进行超滤，收集超滤滤液；将超滤滤液进行浓缩、脱盐，即得欧蓍草提取物；欧蓍草提取物包括有机酸和黄酮。本申请的提取方法从欧蓍草中提取多种有效成分，且提取分离率较高，最大程度保证欧蓍草有效成分不被破坏，使欧蓍草提取物用于化妆品中具有较好的提亮肤色、抗炎、抑制色素沉着等效果。

Description

一种欧蓍草提取物的提取方法及应用

技术领域

本申请涉及植物提取技术领域，更具体地说，它涉及一种欧蓍草提取物的提取方法 及应用。

背景技术

欧蓍草(Achillea millefolium L.,又名西洋蓍草),为菊科蓍草属多年生草本植物,欧蓍草味 辛、苦、性寒,民间多用其作消炎、镇痛、解痉剂。

近年来欧蓍草中越来越多的成分被发掘出来，如欧蓍草总有机酸具有抗菌、消炎、解热镇痛的作用已经发表在期刊杂志上，再比如一些文献报道欧蓍草中的黄酮苷可以减少黑 素小体转运和黑素细胞树突增长，从而来抑制黑色素转运至角质细胞，从而达到一定提亮肤 色的效果，一些化妆品原料公司也对欧蓍草的有效部位进行提取用于改善皮肤光泽度及增加 表皮厚度，因此可以推断欧蓍草提取物对于色素沉着有一定的改善作用。

欧蓍草中含有有机酸、黄酮苷等多种有效成分，相关技术中，对欧蓍草的提取往往是针对单一成分的提取、分离，但是，欧蓍草中多种有效成分均对整体药效起到一定的作用，且有效成分之间存在协同效应，因此，欧蓍草提取物的提取方法有待改进。

发明内容

为了从欧蓍草中提取多种有效成分，同时提高欧蓍草提取物中有效成分的含量，使 欧蓍草提取物用于化妆品中具有较好的抗炎、抑制色素沉着等效果，本申请提供一种欧蓍草 提取物的提取方法及应用。

第一方面，本申请提供一种欧蓍草提取物的提取方法，采用如下的技术方案：

一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：

S1，将欧蓍草粉碎，对欧蓍草粉末进行酶解浸提；

S2，微滤，收集滤液，即得欧蓍草粗提液；

S3，将欧蓍草粗提液进行超滤，收集超滤滤液；

S4，将超滤滤液进行浓缩、脱盐，即得欧蓍草提取物；

所述欧蓍草提取物包括有机酸和总黄酮。

通过采用上述技术方案，通过采用上述技术方案，分多步得到欧蓍草提取物，可提高提取分离率，最大程度保证欧蓍草有效成分不被破坏，利用膜分离技术对欧蓍草粗提液进 行纯化除杂最终得到欧蓍草提取物。得到的提取物以水溶液的形式存在，易于在配方中使 用，同时因为过滤脱除了多糖、蛋白质、无机盐、鞣质等杂质，可以保证配方体系的稳定性。通过本申请的提取方法提取的欧蓍草提取物加入护肤品中，可提高护肤品的消炎、修复皮肤及提亮肤色等效果。

优选的，所述S1中酶解浸提使用的酶选自纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶中的一种或多种，所述酶的加入量与欧蓍草粉末干重的比值为(2.1-5.5):1000。

通过采用上述技术方案，使用复合酶低温浸提法提取欧蓍草提取物，提取含量高，且操作简单，同时，提取温度较低，减少因温度太高而对有效成分造成破坏的情况发生。

优选的，所述S1中所用溶剂为去离子水，所述溶剂的重量与欧蓍草粉末干重的比值 为(5-20):1。

通过采用上述技术方案，使用去离子水作为溶剂，在节约成本的同时，使溶剂在后续步骤中便于脱除。

优选的，所述S1中提取温度提取为30-50℃，重复提取1-3次，单次提取时间为0.5-2h。

通过采用上述技术方案，在上述范围的温度下分次提取，可以有效提高提取分离率，提高欧蓍草提取物中有效成分的含量。

优选的，所述S1内，酶解浸提的过程中还加入一定量的螯合剂。

通过采用上述技术方案，加入螯合剂螯合与有机酸结合的Ca2+使有机酸以游离的形 式存在，便于提取和分离。

优选的，所述S2中，微滤时滤膜采用陶瓷膜或聚丙烯滤膜。

通过采用上述技术方案，通过微滤除去酶解浸提后含有的欧蓍草药渣，减少欧蓍草 粗提液中固体杂质的含量，有利于提高欧蓍草提取物中有效成分的含量，减少因欧蓍草粗提 液中含有的欧蓍草药渣而使超滤膜堵塞的情况发生。

优选的，所述S3中，超滤时，超滤膜的截留分子量为1K-10K。

通过采用上述技术方案，通过超滤除去大分子物质如蛋白质、多糖、色素、鞣质及其复合物等，使黄酮、有机酸、倍半萜类等小分子物质保留，从而提高欧蓍草提取液中黄酮、有机酸等有效成分的含量。

优选的，所述S4中通过纳滤浓缩，纳滤膜的截留分子量为150-250；通过反渗透脱盐。

通过采用上述技术方案，通过纳滤对提取液进行浓缩，具有节约能耗，降低成本的好处，浓缩后通过反渗透脱盐，减少无机盐对系统稳定性的影响，方法简单，节约成本，适合大规模生产。

第二方面，本申请提供一种欧蓍草提取物的应用，采用如下的技术方案：

一种欧蓍草提取物的应用，所述欧蓍草提取物在护肤品中应用。

通过采用上述技术方案，将上述欧蓍草提取物应用于护肤品中，可以减少黑素小体 转运和黑素细胞树突增长，促表皮分化，增加皮肤厚度，加速表皮更新，改善肤色。同时，还具有抗炎、修复皮肤等作用，可缓解过敏性皮炎、刺激性或过敏性湿疹等皮肤炎症，可以有效改善受损肌肤。

综上所述，本申请具有以下有益效果：

1、本申请的欧蓍草提取物的提取方法，在提取过程中，使用酶解浸提对欧蓍草粉末进行初 次提取，通过酶破坏植物细胞壁，使有效成分最大程度溶出，使用浸提最大程度的保留有机 酸、黄酮类成分的结构不被破坏，从而提高有效成分的提取分离率；

2、本申请的欧蓍草提取物的提取方法，使用膜分离技术，除去色素、多糖、蛋白质等大分 子物质，使得到欧蓍草提取物的颜色更浅、稳定性更好，且工艺简单，适合工业化生产；

3、本申请提取的欧蓍草提取物应用于护肤品中，起到提亮肤色、改善皮肤、抵抗炎症等作 用。

附图说明

图1是本申请性能检测试验三中细胞抗炎模型测试结果图；

图2是本申请性能检测试验四中10％欧蓍草提取物的鸡胚尿囊膜试验结果图；

图3是本申请性能检测试验五中临床性能检测试验结果图；

图4是本申请性能检测试验五中临床性能检测试验结果图。

具体实施方式

以下结合附图和实施例对本申请作进一步详细说明。

本申请实施例中的欧蓍草采自云南，野生；

纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶均采自山东萍聚生物科技有限公司；

EDTA-2Na采自济南众杰化工有限公司；

陶瓷膜采自德兰梅尔；

聚丙烯滤膜采自杭州微米派科技有限公司；

纤维素滤膜采自德国赛多利斯；

反渗透膜采自深圳明盛九州实业有限公司；

阴离子交换树脂D280采自济宁佰一化工有限公司；

聚酰胺吸附树脂采自沧州华众环保科技有限公司；

丙烯酸交联聚合物采自广州博峰化工科技有限公司；

透明质酸钠采自陕西华实生物科技有限公司；

对羟基苯乙酮采自湖北玖丰隆化工有限公司；

精氨酸采自安徽中弘生物工程有限公司；

丁二醇、1,3-丙二醇、甘油、1,2-戊二醇均采自山东旭晨化工科技有限公司；

超滤系统(Labscale TFF)来自于美国密理博；

反渗透设备选自天津云杨科技；

紫外分光光度计采自北京京科瑞达科技有限公司，型号为UV2401。

实施例

实施例1：一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入2.1g纤维素酶，用5L 去离子水，在30℃的温度下水浴提取0.5h，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液4L，即得欧蓍草粗提液；

S3，在超滤系统上，使用截留分子量为1K的纤维素滤膜，在表面压力为0.5MPa的条件对 欧蓍草粗提液进行超滤，收集滤液3.5L；

S4，将超滤滤液进行纳滤浓缩，纳滤时使用截留分子量为150的陶瓷滤膜，表面压力为 0.5MPa，的滤液1L，后使用反渗透膜脱盐，得滤液0.5L，即得欧蓍草提取物。

实施例2：一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入3.8g纤维素酶，用12.5L去离子水，在40℃的温度下水浴提取1h，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液10L，即得欧蓍草粗提液；

S3，在超滤系统上，使用截留分子量为1K的纤维素滤膜，在表面压力为0.5MPa的条件对 欧蓍草粗提液进行超滤，收集滤液8L；

S4，将超滤滤液进行纳滤浓缩，纳滤时使用截留分子量为150的陶瓷滤膜，表面压力为 0.5MPa，的滤液2L，后使用反渗透膜脱盐，得滤液1L，即得欧蓍草提取物。

实施例3：一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入5.5g纤维素酶，用20L去离子水，在50℃的温度下水浴提取1h，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液16L，即得欧蓍草粗提液；

S3，在超滤系统上，使用截留分子量为1K的纤维素滤膜，在表面压力为0.5MPa的条件对 欧蓍草粗提液进行超滤，收集滤液14L；

S4，将超滤滤液进行纳滤浓缩，纳滤时使用截留分子量为150的陶瓷滤膜，表面压力为 0.5MPa，的滤液4L，后使用反渗透膜脱盐，得滤液2L，即得欧蓍草提取物。

实施例4：一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入2.1g果胶酶，用5L去 离子水，在30℃的温度下水浴提取0.5h，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液4L，即得欧蓍草粗提液；

S3，在超滤系统上，使用截留分子量为1K的纤维素滤膜，在表面压力为0.5MPa的条件对 欧蓍草粗提液进行超滤，收集滤液3.5L；

S4，将超滤滤液进行纳滤浓缩，纳滤时使用截留分子量为150的陶瓷滤膜，表面压力为 0.5MPa，的滤液1L，后使用反渗透膜脱盐，得滤液0.5L，即得欧蓍草提取物。

实施例5：一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入1.05g木瓜蛋白酶和 1.05g胃蛋白酶，用5L去离子水，在30℃的温度下水浴提取0.5h，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液4L，即得欧蓍草粗提液；

S3，在超滤系统上，使用截留分子量为1K的纤维素滤膜，在表面压力为0.5MPa的条件对 欧蓍草粗提液进行超滤，收集滤液3.5L；

S4，将超滤滤液进行纳滤浓缩，纳滤时使用截留分子量为150的陶瓷滤膜，表面压力为 0.5MPa，的滤液1L，后使用反渗透膜脱盐，得滤液0.5L，即得欧蓍草提取物。

实施例6：一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入2.1g纤维素酶，用5L 去离子水，在30℃的温度下水浴提取2次，每次提取0.5h，合并滤液，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液8L，即得欧蓍草粗提液；

S3，在超滤系统上，使用截留分子量为1K的纤维素滤膜，在表面压力为0.5MPa的条件对 欧蓍草粗提液进行超滤，收集滤液7L；

S4，将超滤滤液进行纳滤浓缩，纳滤时使用截留分子量为150的陶瓷滤膜，表面压力为 0.5MPa，的滤液2L，后使用反渗透膜脱盐，得滤液1L，即得欧蓍草提取物。

实施例7：一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入2.1g纤维素酶，用5L 去离子水，在30℃的温度下水浴提取3次，每次提取0.5h，合并滤液，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液12L，即得欧蓍草粗提液；

S3，在超滤系统上，使用截留分子量为1K的纤维素滤膜，在表面压力为0.5MPa的条件对 欧蓍草粗提液进行超滤，收集滤液10.5L；

S4，将超滤滤液进行纳滤浓缩，纳滤时使用截留分子量为150的陶瓷滤膜，表面压力为 0.5MPa，的滤液3L，后使用反渗透膜脱盐，得滤液1.5L，即得欧蓍草提取物。

实施例8：一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入2.1g纤维素酶，用5L 去离子水，在30℃的温度下水浴提取0.5h，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液4L，即得欧蓍草粗提液；

S3，在超滤系统上，使用截留分子量为5K的纤维素滤膜，在表面压力为0.5MPa的条件对 欧蓍草粗提液进行超滤，收集滤液3.5L；

S4，将超滤滤液进行纳滤浓缩，纳滤时使用截留分子量为200的陶瓷滤膜，表面压力为 0.5MPa，的滤液1L，后使用反渗透膜脱盐，得滤液0.5L，即得欧蓍草提取物。

实施例9：一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入2.1g纤维素酶，用5L 去离子水，在30℃的温度下水浴提取0.5h，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液4L，即得欧蓍草粗提液；

S3，在超滤系统上，使用截留分子量为10K的纤维素滤膜，在表面压力为0.5MPa的条件对 欧蓍草粗提液进行超滤，收集滤液3.5L；

S4，将超滤滤液进行纳滤浓缩，纳滤时使用截留分子量为250的陶瓷滤膜，表面压力为 0.5MPa，的滤液1L，后使用反渗透膜脱盐，得滤液0.5L，即得欧蓍草提取物。

实施例10：一种欧蓍草提取物的提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入2.1g纤维素酶，同时 加入2.5g EDTA-2Na，用5L去离子水，在30℃的温度下水浴提取0.5h，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液4L，即得欧蓍草粗提液；

S3，在超滤系统上，使用截留分子量为1K的纤维素滤膜，在表面压力为0.5MPa的条件对 欧蓍草粗提液进行超滤，收集滤液3.5L；

S4，将超滤滤液进行纳滤浓缩，纳滤时使用截留分子量为150的陶瓷滤膜，表面压力为 0.5MPa，的滤液1L，后使用反渗透膜脱盐，得滤液0.5L，即得欧蓍草提取物。

对比例

对比例1：一种提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入2.1g纤维素酶，用5L 去离子水，在30℃的温度下水浴提取0.5h，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液4L，即得欧蓍草粗提液；

S3，将欧蓍草粗提液减压浓缩，加入氨水调节pH至9-10，加样至阴离子交换树脂D280进 行吸附，控制色谱柱下端液体的流出速度为10mL/min，依次用2倍柱体积水、4倍柱体积 30％乙醇溶液、4倍柱体积60％乙醇溶液洗脱，收集30％乙醇洗脱液及60％乙醇洗脱液，加 入柠檬酸调节pH至5-6，减压浓缩至1.5L，即得。

对比例2：一种提取方法，包括以下步骤：

S1，将1kg欧蓍草粉碎，得粒径小于80μm的欧蓍草粉末1kg，加入2.1g纤维素酶，用5L 去离子水，在30℃的温度下水浴提取0.5h，冷却至室温，得提取液；

S2，将提取液微滤，微滤时，依次使用74μm、5μm、0.22μm的陶瓷滤膜在表面压力为0.5MPa的条件下过滤，收集滤液4L，即得欧蓍草粗提液；

S3，将欧蓍草粗提液减压浓缩，加样至聚酰胺吸附树脂进行吸附，控制色谱柱下端液体的流 出速度为10mL/min，用4倍柱体积水、4倍柱体积80％乙醇溶液依次洗脱，收集水洗脱液 及80％乙醇洗脱液，合并减压浓缩至1.5L，即得。

应用实施例

使用本申请的提取方法提取的欧蓍草提取物在护肤品中的应用，其添加量为3-5％。

性能检测试验

试验一：

针对实施例1-10和对比例1-2中的提取方法，使用电位滴定法测试提提取物中总有机酸含 量，使用紫外分光光度计测试提取物中总黄酮的含量，测试结果计入下列表1中。

由表1中测试数据可以看出：使用实施例1-10中的欧蓍草提取物的提取方法，提取的欧蓍草提取物具有较高的有机酸含量和总黄酮含量，其中有机酸的含量均高于7.2％，总黄酮的含量均高于9.6％。

结合实施例1和对比例1，并结合表1可以看出，对比例1中的提取方法相比于实施例1中的提取方法，获得的欧蓍草提取物中的有机酸含量没有较大的变化，但是总黄酮含量明显减少。说明使用对比例1中的提取方法提取欧蓍草提取物时，部分黄酮在碱性条件下结构被破坏，导致总黄酮在提取物中的含量较低，对比例1中的提取方法不能很好地提取黄酮类物质，而实施例1中的方法可以较好的提取有机酸和总黄酮，提高欧蓍草提取物中有机酸和总黄酮的含量。

结合实施例1和对比例2，并结合表1可以看出，对比例1中的提取方法相比于实施例1中的提取方法，获得的欧蓍草提取物中的有机酸和总黄酮的含量均有较明显的降低。说明对比例2中的提取方法不能较好的从欧蓍草中提取有机酸和总黄酮，导致欧蓍草提取物中 的有机酸和总黄酮含量较低，影响欧蓍草提取物的光亮皮肤、抗炎、修复皮肤等作用。

表1有效成分含量测试结果

试验二：

将实施例1和对比例1、2中提取获得的欧蓍草提取物应用于精华水中，精华水中各组分百 分比含量如下：

丙烯酸交联聚合物0.15％；

多元醇7％；

透明质酸钠0.05％；

EDTA-2Na 0.05％；

对羟基苯乙酮0.4％；

欧蓍草提取物4％；

精氨酸0.15％；

余量为去离子水。

其中，多元醇由丁二醇、1,3-丙二醇、甘油、1,2-戊二醇按重量比1:1.2:0.8:1.1混合组 成。

精华水通过如下制备过程制得：

将丙烯酸交联聚合物加入去离子水中搅拌，在75℃的温度下依次加入多元醇、EDTA-2Na、 透明质酸钠、对羟基苯乙酮，保温搅拌10min，降温至45℃，加入欧蓍草提取物，继续搅拌 10min，加入精氨酸，搅拌5min，即得精华水。

对上述制得的精华水进行稳定性试验，每组精华水均取4份测试样品，每份测试样品均为100mL，将取自同组精华水中的测试样品分别放置在25℃、45℃、4℃、光照条件下 存放30天，观察测试样品的颜色、是否有沉淀析出和粘度的变化，并计入下列表2中。

从表2的测试结果可以看出，使用本申请实施例1中的欧蓍草提取物的提取方法，提取获得的欧蓍草提取物应用于精华水中，精华水体系具有较好的稳定性，颜色较浅、无成分析出、具有较稳定的粘度。

表2稳定性测试结果

试验三：

对实施例1得到的欧蓍草提取物进行细胞抗炎模型测试：

在37℃，5％的CO₂条件下，将RAW 264.7细胞在DMEM-H完全培养基(含10％FBS,1％双抗)中培养，将处于对数生长期的RAW 264.7细胞进行细胞悬液制备，并进行细胞铺 板。在96孔板中加入100μL密度为50000个细胞/mL的细胞悬液，即5000个细胞/孔，在 空白对照中加入100μL PBS缓冲液。细胞培养24h直至形成半融合单层，在此培养期间， 细胞恢复活力、贴附和指数增长，培养结束后，分别加入浓度为0.50％、1.00％、1.50％、 2.00％、2.50％、3.00％实施例1提取的欧蓍草提取物(溶剂为去离子水)和1μg/mL LPS， 共处理24h，处理完成后，收取上清液用ELISA法测定IL-6，并以NR法检测细胞活力。

测试结果如图1所示，在RAW 264.7细胞上，实施例1中提取的欧蓍草提取物在0.50％～3.00％范围对LPS诱导的IL-6呈现剂量依赖性抑制作用，说明实施例1中制得的欧蓍草提取物有抑制炎症因子释放的作用。

试验四：

取一个10-11d胚龄的鸡胚，用照蛋器照看气室，确定气室位置，用手捻钻在气室上端开一 个小孔，用医用眼科弯尖头镊子剥去气室上层的蛋壳部分，暴露白色的壳膜，使用吸管滴加 0.4mL 0.9％NaCl溶液使壳膜湿润3min，然后将0.9％NaCl溶液缓慢倒出。用镊子取出壳 膜，去除过程中要小心细致，减少人为操作造成的尿囊膜损伤，将一个聚四氟乙烯树脂环放 置于完好的鸡胚绒毛尿囊膜上，作为受试样品的测试区域，用体视镜拍照即为0S状态。用 移液枪移取40μL的待测样品滴入聚四氟乙烯树脂环内，记录加样品的时间并用润湿的保 鲜膜覆盖在气室上，将鸡胚移至恒温恒湿箱内，在37.7℃，60％湿度的条件下培养300S 后，用体视镜拍照并观察血管损伤程度，如图2所示，当实施例1中提取的欧蓍草提取物浓 度为10％时，300S内并未出现出血、血管融解、凝血的现象。

测试样品：浓度为3％、5％、7％、10％实施例1提取的欧蓍草提取物，溶剂为去离子水。

在鸡胚尿囊膜上，0.9％NaCl表现为无刺激性。无刺激性的表现为：每种毒性效应(出血，血管融解，凝血)出现时间均大于300s。

测试结果计入下表3中。

从表3的数据中可以看出，欧蓍草提取物浓度在小于10％时，安全无刺激。

表3测试结果

试验五：

通过志愿者筛选问卷及原始值初筛，选取20名合格的志愿者作为试用者参加测试，并随机 分为2组，每组10人。其中1组使用实施例1提取的欧蓍草提取物，浓度为3％，溶剂为去 离子水，为实验组；另外1组使用去离子水，作为对照组。每天早晚各使用一次，第1天涂 抹前拍摄一组VISA照片，连续使用28天后，再拍摄一组VISA照片，拍摄结果如图3、图4所示。

参照图3，实验组中，使用3％浓度的欧蓍草提取物的志愿者在连续使用28天后，皮肤亮度有明显提升；参照图4，对照组中，使用去离子水连续涂抹28天后，皮肤亮度没有 明显改善。说明欧蓍草提取物对提亮皮肤具有较好的效果。

本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员 在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请 的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (5)

1.一种欧蓍草提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，将欧蓍草粉碎，对欧蓍草粉末进行酶解浸提；

S2，微滤，收集滤液，即得欧蓍草粗提液；

S3，将欧蓍草粗提液进行超滤，收集超滤滤液；

S4，将超滤滤液进行浓缩、脱盐，即得欧蓍草提取物；

所述欧蓍草提取物包括有机酸和总黄酮；

所述S1中酶解浸提使用的酶选自纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶中的一种或多种，所述酶的加入量与欧蓍草粉末干重的比值为（2.1-5.5）:1000；

所述S1中提取温度设定为30-50℃，重复提取1-3次，单次的提取时间为0.5-2h；

所述S2中，微滤时滤膜采用陶瓷膜或聚丙烯滤膜；

所述S3中，超滤时，超滤膜的截留分子量为1K-10K。

2.根据权利要求1所述的欧蓍草提取物的提取方法，其特征在于，所述S1中所用溶剂为去离子水，所述溶剂的重量与欧蓍草粉末干重的比值为（5-20）:1。

3.根据权利要求1所述的欧蓍草提取物的提取方法，其特征在于，所述S1内酶解浸提的过程中还加入一定量的螯合剂。

4.根据权利要求1所述的欧蓍草提取物的提取方法，其特征在于，所述S4中通过纳滤浓缩，纳滤膜的截留分子量为150-250；通过反渗透脱盐。

5.由权利要求1-4任一项所述提取方法所得的欧蓍草提取物在护肤品中应用。

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