CN112546103A - 广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的应用 - Google Patents
广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的应用,属于天然药物领域,公开了广西甜茶提取物的新用途,特别涉及广西甜茶提取物在制备预防高血脂症、肥胖症、脂肪肝等脂质代谢紊乱疾病药物中的应用。制备PPARα/PPARγ激动剂,取代了西药作为PPARα/PPARγ激动剂,毒副作用小,尤其针对脂代谢紊乱相关疾病的效果明显。
Description
技术领域
本发明属于天然药物领域,涉及广西甜茶提取物的新用途,特别涉及广西甜茶提取物在制备预防高血脂症、肥胖症、脂肪肝等脂质代谢紊乱疾病药物中的应用和在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的应用。
背景技术
广西甜茶为蔷薇科甜叶悬钩子Rubus suavissimus S.Lee的叶及嫩枝,是壮、瑶族地区药食两用的植物,同时还是一种高甜度且低热量的广西特有非糖天然甜味植物。在壮医中具清热润肺的功效,用于瘴病、糖尿病、高血压和尿路感染的治疗。广西甜茶提取物的化学成分众多,主要含有萜苷类、黄酮、多酚等,具有降糖、降脂、降压、抗过敏、防龋齿等药理作用。然而脂代谢调节的潜在机制尚不明确,广西甜茶提取物的新用途有待进一步研究。
现有对甜茶素的研究中已公开,取健康雄性SD大鼠50只,体重150~200g,适应性观察1周后,采眼眶内眦静脉血测血清TC和称体重,按血清TC和体重随机分成5组:①第1组为空白对照组,即每日饲普通饲料。②第2组为高脂组,每日饲在普通饲料基础上按重量比例加入5%猪油,1%胆固醇和0.2%胆盐而成为的高脂饲料;③第3、4、5组为实验组,每日给予和高脂组同样的高脂饲料并分别用甜茶素(纯度70%)按250、500、1000mg/kg·d-1的剂量对大鼠进行灌胃。空白对照组和高脂组则灌胃同等体积蒸馏水,自由饮水和进食,每日记录饲料剩余量,每周称体重一次,实验观察共4周。大鼠喂养0周、第2周和第4周时,分别从眼眶内眦采静脉血。用日立7170生化自动分析仪,日本第一化学试剂公司药盒,用酶试剂法测定大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。结果表明:实验30d后第3组的TC和TG均较高脂组显著降低(P<0.05),分别降低31.99%和37.76%。除第5组的TC较高脂组显著增高(P<0.05)外,其余组没有显著性差异。虽然各实验组的HDL-C均较高脂组显著升高(P<0.05),但是只有低剂量的250mg/kg·d-1组的HDL-C/TC较高脂组显著升高(P<0.05)。表明只有在一定剂量范围的甜茶素在升高HDL-C的同时又降低TC。第3组的体重与高脂组相比无差异,第4、5组的体重较高脂组有显著降低(P<0.05)。在第4、5组大鼠观察到了轻微腹泻,但摄食量并未减少。
过氧化物酶体增长因子活化受体(PPARs)是核受体超家族中的配体激活转录因子,有PPARα、PPARγ、PPARβ三种亚型。PPARs的异常调控与糖尿病、心血管疾病、代谢综合征等脂代谢紊乱密切相关,因此PPARs成为了脂代谢紊乱相关疾病的新药研发中的新靶点。目前,尽管已有PPARγ激动剂和PPARα激动剂应用于糖尿病与高脂血症的临床治疗中,已上市的PPARγ激动剂主要为格列酮类药物,如罗格列酮、匹格列酮等,PPARα激动剂主要为贝特类药物,如非诺贝特、苯扎贝特等,但是长期服用药物存在肝肾毒性或心血管系统的副作用。因此,从天然药物广西甜茶中寻找高效低毒的PPARα、PPARγ激动剂是脂代谢紊乱相关疾病药物研发的主要途径之一。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明提供了广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的应用,取代了西药作为PPARα、PPARγ激动剂,毒副作用小,尤其针对脂代谢紊乱相关疾病的效果明显。
为实现上述目的提供如下技术方案:
广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的应用,广西甜茶提取物在制备用于调节脂代谢紊乱相关疾病的药物中的应用。
进一步地,所述广西甜茶提取物在制备用于防治高甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的药物中的应用。
进一步地,广西甜茶提取物中主要包含甜茶素、黄酮类、多酚类等成分,其中甜茶素含量为37.0~98.5mg/g;黄酮类含量43.1~90.4mg/g,多酚类含量25.9~81.5mg/g。所述广西甜茶提取物中还包括二萜及其苷类成分。
进一步地,黄酮类成分中主要的是芦丁、山奈酚,其中芦丁含量为0.3~1.3mg·g-1,山奈酚的含量为0.03~0.3mg·g-1;多酚类成分中主要的是没食子酸0.4~9.3mg·g-1、鞣花酸1.0~5.0mg·g-1、咖啡酸0~3mg·g-1。
进一步地,所述广西甜茶提取物的主要的活性成分为甜茶素。所述甜茶素为广西甜茶二萜。
本发明提供所述广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的药物制剂,所述药物制剂包括:片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丹剂、混悬剂、粉剂、丸剂、散剂、膏剂、溶液剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释制剂、肠溶制剂任一种。
进一步地,制备所述药物制剂时,可加入药物可接受的载体。
进一步地,所述药物可接受的载体包括但不限于:抗氧剂、鳌合剂表面活性剂、分散剂、润滑剂、填充剂崩解剂、润湿剂、溶剂、缓释材料、肠溶材料、pH调节剂、色素。
进一步地,常用的可接受的载体为:氯化钠、硅衍生物、纤维素及纤维素衍生物、甘油、吐温-80、琼脂、亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、碳酸钙、碳酸氢钙、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁任一种或任几种组合。
进一步地,所述的广西甜茶提取物通过粉碎、研磨、过筛、萃取、渗漉、水提、醇沉、醇提、水沉、酯提、过滤、层析的方法得到。
进一步地,以所述广西甜茶提取物为活性物质制成药物制剂时,所述广西甜茶提取物的形态是浸膏或粉末状形式的物质,所述浸膏为干浸膏或流浸膏。可根据制剂的不同制成不同的状态。
进一步地,所述广西甜茶提取物的制备方法为:将广西甜茶用体积浓度为90-95%的乙醇溶液回流提取后,去除乙醇,得到广西甜茶乙醇提取物,于所述广西甜茶乙醇提取物中加水溶解制成混悬液,再通过乙酸乙酯萃取,去除乙酸乙酯后即得到广西甜茶提取物。
本发明具有以下有益效果:
1.发明的广西甜茶提取物含有萜类、黄酮类、多酚类成分,这些化合物能显著逆转甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),且能够降低谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性,减轻肝组织损伤,作用效果与阳性对照血脂康胶囊效果相当;还能明显激动PPARγ/PPARα。此外还能上调C/EBPα、aP2、Glut4的mRNA表达量,具有良好的脂代谢紊乱调节作用。代了西药作为PPARα/PPARγ激动剂,毒副作用小,尤其针对脂代谢紊乱相关疾病的效果明显。
2.本发明在药效学研究的基础上深入研究其作用机制,同时还对发挥药效作用的物质基础进行研究,为开发广西甜茶作为安全、有效的脂代谢相关疾病药物提供实验基础。
3.本发明在研究过程中采用的金黄地鼠对脂质和胆固醇更敏感,代谢方式与人类较相近,且造模时间短。现有技术主要用大鼠或小鼠作为实验对象,大鼠和小鼠对胆固醇有先天耐受力,造模时间长,且大鼠血脂水平个体差异大,小鼠血量少,且现有技术的阳性对照药物均采用化学药,化学药物作用效果虽然很好,但是中草药与化学药明显占弱势,本发明采用受试药物为中草药类,以中成药血脂康作为阳性对照药物。
附图说明
图1为本发明实施例2中广西甜茶指纹图谱及主要成分图。图1中各峰分别为:1-没食子酸、2-咖啡酸、3-芦丁、4-鞣花酸、5-金丝桃苷、6-异槲皮苷、7-甜茶素、8-山奈酚。
图2为本发明广西甜茶提取物对高脂饮食金黄地鼠体重的影响图。
图3为本发明广西甜茶提取物对高脂饮食金黄地鼠肝脏脂代谢PPARαmRNA转录水平的影响图。
图4为本发明广西甜茶提取物对高脂饮食金黄地鼠肝脏脂代谢PPARγmRNA转录水平的影响图。
图5为本发明广西甜茶提取物对高脂饮食金黄地鼠肝脏脂代谢C/EBPαmRNA转录水平的影响图。
图6为本发明广西甜茶提取物对高脂饮食金黄地鼠肝脏脂代谢aP2mRNA转录水平的影响图。
图7为本发明广西甜茶提取物对高脂饮食金黄地鼠肝脏脂代谢Glut4mRNA转录水平的影响图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步说明,以使本发明的优点和特征更易于被理解,但是本发明的保护范围不局限于这些实施例。
实施例1广西甜茶提取物的制备
称取广西甜茶粉末,加入其8倍质量的95%乙醇进行回流提取1h,提取液经布氏漏斗过滤后,滤渣再用相同条件提取2次,合并3次提取物滤液。减压回收乙醇,得到广西甜茶乙醇提取物。加水溶解制成混悬液,用乙酸乙酯萃取,减压回收乙醇后,得到广西甜茶提取物。
实施例2广西甜茶提取物的化学成分分析
取实施例1所得的广西甜茶提取物,溶于二甲基亚砜中,采用HPLC-QTOF-MS的方法对其化学成分进行分析。其中,液相色谱条件为:①色谱柱:Thenmo Synconis C18(100×2.1×1.7μm);②流动相为乙腈-水(0.1%甲酸)。
经检测分析发现,广西甜茶提取物中主要有黄酮类、多酚类和萜类及其苷类成分,其中黄酮类成分主要包括芦丁、山奈酚、槲皮素,多酚类成分主要包括没食子酸、鞣花酸、咖啡酸,萜类及其苷类成分主要有甜茶素、广西甜茶苷A、野蔷薇苷。
采用UPLC法测定其中没食子酸、咖啡酸、鞣花酸、芦丁、山奈酚、甜茶素的含量分别0.4~9.3mg·g-1、0~3mg·g-1、1.0~5.0mg·g-1、0.3~1.3mg·g-1、0.03~0.3mg·g-1、和37.0~98.5mg/g。
采用紫外分光光度法对总黄酮、总多酚进行了测定,结果总黄酮的含量范围为43.1~90.4mg/g,总多酚含量为25.9~81.5mg/g。
得到的广西甜茶指纹图谱及主要成分如图1所示。由图1可见,广西甜茶的主要成分包含:没食子酸(图中标号1)、咖啡酸(图中标号2)、芦丁(图中标号3)、鞣花酸(图中标号4)、金丝桃苷(图中标号5)、异槲皮苷(图中标号6)、甜茶素(图中标号7)、山奈酚(图中标号8)。
实施例3广西甜茶提取物的药效学研究
1.准备动物:SPF级雄性叙利亚金黄地鼠70只,5周龄,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,所有动物均饲养于广西中医药大学解剖楼动物房,室内温度(22±2)℃,动物光照周期昼夜12h,自由饮水。
2.造模:普通饲料统一饲养1周后,随机分为6组,每组7只:正常组予以普通饲料,其余组别给予高脂饲料(10%猪油,10%玉米油,1%胆固醇,0.25%胆酸钠,78.75%基础饲料),同时每天对金黄地鼠进行灌胃,灌胃体积为1mL/100g,连续8周。正常组和高脂组灌以等体积的纯水,血脂康组为阳性对照组,每天给药140mg/kg,广西甜茶提取物低中高剂量组按每天1.8、3.6、7.2g/kg的生药量给药。
3.体重监测:给药前称量金黄地鼠体重,之后每周称一次体重,计算各组动物每周体重的变化。实验结果如图1所示。
4.血脂及脂代谢相关酶的检测:安乐死动物后,腹主动脉取血,采用全自动生化仪测定血清中的总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)含量。实验结果如表1和表2所示。
图2为本发明广西甜茶提取物对高脂饮食金黄地鼠体重的影响图。如图2所示,连续给予8周高脂饲料后,高脂组金黄地鼠的体重明显增加,与对照组相比,不同剂量广西甜茶的广西甜茶干预,可预防高脂饮食引起的体重增加。
表1广西甜茶对高脂饮食金黄地鼠血清TC、TG和LDL-C的影响(Mean±SD)
与正常组比较,#P<0.05,##P<0.01;与高脂组比较,*P<0.05,**P<0.01。
由表1可知,本发明的高脂饲料诱导的金黄地鼠血脂升高,表明上述实验造模成功,低、中、高剂量广西甜茶提取物干预可逆转血脂的升高趋势,高剂量组的效果较为明显,与高脂组比有显著性差异(P<0.05)。同时,实验表明,高剂量组的效果与阳性药血脂康的效果相当。
表2广西甜茶对高脂饮食金黄地鼠血清ALT和AST的影响(Mean±SD)
与正常组比较,#P<0.05,##P<0.01;与高脂组比较,*P<0.05,**P<0.01。
由表2可知,本发明高脂组金黄地鼠血清ALT和AST较正常组显著升高(P<0.05),表明长期高脂饮食可引起肝损伤。而低、中、高剂量广西甜茶提取物干预后可显著降低血清ALT和AST含量,预防高脂饮食引起的肝损伤。已上市的PPARα/PPARγ激动剂主要是贝特类和列酮类,有肝肾损伤等副作用,而广西甜茶提取物作为治疗药相较于西药副作用小。
实施例4广西甜茶提取物激活PPARα/PPARγ的实验研究
1.动物及造模:同实施例3中广西甜茶提取物的药效学研究的第1.2步骤一致。
2.肝脏PPARα、PPARγ、C/EBPα、aP2、Glut4和LPL测定:采用Trizol法,从组织样本中提取总RNA后,根据逆转录试剂盒说明书逆转录合成cDNA,使用qPCR试剂盒,根据说明书操作,实时荧光PCR仪检测。每个样本3个复孔,以β-actin为内参,用2-ΔΔCt法计算PPARα、PPARγ、C/EBPα、aP2和Glut4的相对表达量。
3.实验结果:如图3-7所示,所述广西甜茶提取物均可上调PPARα、PPARγ、C/EBPα、aP2和Glut4,且效果好于对照组血脂康,说明本发明广西甜茶提取物具有良好的调节脂代谢功能。
实施例5广西甜茶提取物的应用
以广西甜茶提取物为药物活性成分的药物组合物,根据需要加入药物可接受的载体制备成片剂,用于制备调节脂代谢紊乱疾病相关药品或保健食品,以预防或减轻相关疾病及其并发症。
实施例6
以广西甜茶提取物为药物活性成分的药物组合物,根据需要加入药物可接受的载体制备成糖衣片剂,用于制备调节脂代谢紊乱疾病相关药品或保健食品,以预防或减轻相关疾病及其并发症。
实施例7
以广西甜茶提取物为药物活性成分的药物组合物,根据需要加入药物可接受的载体制备成薄膜衣片剂,用于制备调节脂代谢紊乱疾病相关药品或保健食品,以预防或减轻相关疾病及其并发症。
实施例8
以广西甜茶提取物为药物活性成分的药物组合物,根据需要加入药物可接受的载体制备成口服液,用于制备调节脂代谢紊乱疾病相关药品或保健食品,以预防或减轻相关疾病及其并发症。
实施例9
以广西甜茶提取物为药物活性成分的药物组合物,根据需要加入药物可接受的载体制备成丸剂,用于制备调节脂代谢紊乱疾病相关药品或保健食品,以预防或减轻相关疾病及其并发症。
实施例10
以广西甜茶的原料粉末为药物活性成分的药物组合物,根据需要加入药物可接受的载体制备成口服液,用于制备调节脂代谢紊乱疾病相关药品或保健食品,以预防或减轻相关疾病及其并发症。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,上述优选实施方式不应视为对本发明的限制,本发明的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明的精神和范围内,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的应用,其特征在于,广西甜茶提取物在制备用于调节脂代谢紊乱相关疾病的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的应用,其特征在于,所述广西甜茶提取物在制备用于防治高甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的药物中的应用。
3.根据权利要求1或2所述广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的应用,其特征在于,广西甜茶提取物中主要包含甜茶素、黄酮类、多酚类成分,其中甜茶素含量为37.0~98.5mg/g,黄酮类含量43.1~90.4mg/g,多酚类含量25.9~81.5mg/g。
4.根据权利要求3所述广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的应用,其特征在于,黄酮类成分中主要的是芦丁、山奈酚,芦丁含量为0.3~1.3mg·g-1,山奈酚的含量为0.03~0.3mg·g-1;多酚类成分中主要的是没食子酸0.4~9.3mg·g-1、鞣花酸1.0~5.0mg·g-1、咖啡酸0~3mg·g-1。
5.根据权利要求1或2所述广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的应用,其特征在于,所述广西甜茶提取物的主要的活性成分为甜茶素。
6.根据权利要求1-5任一项所述广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的药物制剂,其特征在于,所述药物制剂包括:片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丹剂、混悬剂、粉剂、丸剂、散剂、膏剂、溶液剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释制剂、肠溶制剂任一种。
7.根据权利要求6所述广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的药物制剂,其特征在于,制备所述药物制剂时,可加入药物可接受的载体。
8.根据权利要求6所述广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的药物制剂,其特征在于,所述的广西甜茶提取物通过粉碎、研磨、过筛、萃取、渗漉、水提、醇沉、醇提、水沉、酯提、过滤、层析的方法得到。
9.根据权利要求6所述广西甜茶提取物在制备PPARα、PPARγ双重激动剂方面的药物制剂,其特征在于,以所述广西甜茶提取物为活性物质制成药物制剂时,所述广西甜茶提取物的形态是浸膏或粉末状形式的物质,所述浸膏为干浸膏或流浸膏。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20210326 |
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